القای ایمنی محیطی آموزش دیده در پانکراس فعالیت ضد توموری را برای کنترل پیشرفت سرطان پانکراس تحریک می کند قسمت 1

علیرغم موفقیت چشمگیر ایمونوتراپی در بسیاری از انواع سرطان، آدنوکارسینوم مجرای پانکراس هنوز سودی نبرده است. سلول‌های ایمنی ذاتی برای نظارت بر ایمنی ضد تومور حیاتی هستند و مطالعات اخیر نشان داده‌اند که این جمعیت‌ها دارای نوعی حافظه هستند که به آن ایمنی ذاتی آموزش‌دیده گفته می‌شود که از طریق برنامه‌ریزی مجدد transcriptomic، اپی ژنتیک و متابولیک رخ می‌دهد.

در اینجا نشان می‌دهیم که گلوکان ذرات مشتق شده از مخمر، یک القاکننده ایمنی آموزش‌دیده، به پانکراس می‌رود، که باعث هجوم وابسته به CCR2-منوسیت‌ها/ماکروفاژها به لوزالمعده می‌شود که ویژگی‌های ایمنی تمرین‌شده را نشان می‌دهد. این سلول ها می توانند پس از قرار گرفتن در معرض سلول های تومور و عوامل مشتق از تومور فعال شوند و سمیت سلولی افزایش یافته ای را در برابر سلول های تومور پانکراس نشان دهند. در مدل‌های ارتوتوپی آدنوکارسینوم مجرای پانکراس، موش‌های تحت درمان با گلوکان به طور قابل‌توجهی کاهش بار تومور و بقای طولانی‌مدت را نشان می‌دهند که در صورت ترکیب با ایمونوتراپی بیشتر می‌شود. این یافته‌ها مکانیسم‌های پویا و محلی‌سازی ایمنی آموزش‌دیده محیطی را مشخص می‌کنند و کاربرد ایمنی آموزش‌دیده را برای سرطان شناسایی می‌کنند.

ایمنی عملکردهای زیادی دارد، مانند پاکسازی سلول‌های قدیمی و آسیب‌دیده: سیستم ایمنی همچنین می‌تواند سلول‌های قدیمی و آسیب‌دیده از جمله سلول‌های تومور را پاک کند تا از بدن در برابر بیماری‌ها محافظت کند. همچنین می تواند تعادل بدن را حفظ کند: سیستم ایمنی همچنین می تواند محیط داخلی بدن را متعادل کند، تعادل بین سلول های ایمنی را حفظ کند و از بروز بیماری هایی مانند واکنش بیش از حد یا نقص ایمنی جلوگیری کند، بنابراین ایمنی برای بدن انسان بسیار مهم است.

در همان زمان، ما متوجه شدیم که Cistanche deserticola همچنین می تواند ایمنی را بهبود بخشد. سیستانچ سرشار از انواع مواد فعال بیولوژیکی مانند پلی ساکاریدها، فلاونوئیدها، استرول ها و غیره است. این مواد می توانند فعالیت سلول های ایمنی بدن را تحریک کرده، ایمنی سلولی و ایمنی هومورال را تقویت کرده و از رشد و تولید مثل ویروس ها و ویروس ها جلوگیری کنند. باکتری ها بهبود مقاومت و ایمنی بدن. علاوه بر این، سیستانچ همچنین دارای اثرات آنتی اکسیدانی، ضد التهابی و آرام بخش است که می تواند به رفع خستگی جسمی و از بین بردن استرس برای تقویت ایمنی کمک کند.

برای آشنایی با مکمل سیستانش دسرتیکولا کلیک کنید

تشخیص آدنوکارسینوم مجرای پانکراس (PDAC) یک تشخیص ویرانگر است و تنها 10 درصد از بیماران در 5 سال گذشته زنده مانده اند. اگرچه میزان بقا از سال 2014 از 6 به 10 درصد افزایش یافته است، سرطان پانکراس نسبت به اکثر درمان‌های موجود در حال حاضر مقاوم است.

علاوه بر این، با تغییر جمعیت شناسی ایالات متحده، پیش بینی می شود که سرطان لوزالمعده تا سال 2030 به دومین عامل اصلی مرگ و میر ناشی از سرطان تبدیل شود و بنابراین چالشی مهم در آینده برای پزشکان ایجاد می کند. سرطان پانکراس به خصوص کشنده است زیرا در مراحل اولیه به ندرت علائم بالینی وجود دارد که منجر به تشخیص بیماری پیشرفته و غیرقابل برداشت در 75 تا 80 درصد از بیماران می شود. حتی در بیمارانی که واجد شرایط رزکسیون هستند، میزان بقای سالانه 5- تنها 20 تا 25 درصد است. کارآزمایی‌های بالینی فاز I و II با استفاده از مهارکننده‌های CTLA-4 و PD-1 به تنهایی و به صورت ترکیبی، برای درمان PDAC بی‌اثر تلقی شده‌اند، که احتمالاً با ماهیت غیرایمونوژنیک PDAC10 توضیح داده می‌شود. 12.

یک چالش عمده برای کاربرد موفقیت آمیز ایمونوتراپی در PDAC، غلبه بر ریزمحیط تومور پانکراس سرکوب کننده سیستم ایمنی (TME) است. PDAC با یک استرومای دسموپلاستیک متراکم ضد تومور، فراوانی زیرمجموعه های سلولی سرکوب کننده سیستم ایمنی در این استروما مانند ماکروفاژهای مرتبط با تومور (TAMs)، سلول های T تنظیمی (T-regs) و سلول های سرکوبگر مشتق از میلوئید (MDSCs) مشخص می شود. کمبود سلول‌های ایمنی ضد تومور فعال و هیپرواسکولاریته که به یک ریزمحیط هیپوکسیک کمک می‌کند13-16. این شرایط با هم، ارائه موثر ایمونوتراپی به پانکراس و فعال کردن موفقیت آمیز پاسخ های ایمنی ضد تومور در صورت رسیدن به لوزالمعده را برای این داروها چالش برانگیز می کند. بنابراین، درمان های جدیدی به شدت مورد نیاز است که نه تنها می تواند به طور خاص پانکراس را هدف قرار دهد، بلکه می تواند استرومای دسموپلاستیک متراکم را نیز نفوذ کند، و قادر به تحریک پاسخ های ایمنی ضد تومور قوی با وجود TME سرکوب کننده سیستم ایمنی باشد.

ایمنی ذاتی تربیت شده یک برنامه باستانی تکاملی از حافظه ایمونولوژیک است که اخیراً تحت تحقیقات علمی عمیق قرار گرفته است. نشان داده شده است که سلول‌های ایمنی ذاتی آموزش‌دیده پس از قرار گرفتن در معرض محرک‌های اولیه خاص، تحت برنامه‌ریزی مجدد transcriptomic، اپی ژنتیکی و متابولیک قرار می‌گیرند، و زمانی که این سلول‌های ایمنی ذاتی دوباره در معرض یک محرک هترولوگ ثانویه قرار می‌گیرند، «آموزش داده می‌شوند» تا به آن محرک پاسخ دهند. در یک پاسخ التهابی افزایش یافته 17-19 آشکار می شود. بسیاری از بیولوژیک ها می توانند ایمنی آموزش دیده را القا کنند، از جمله واکسن باسیلوس کالمت گورین (BCG) و ترکیب طبیعی - گلوکان. اگرچه اکثر مطالعات در مورد ایمنی آموزش دیده بر پاتوژن هایی مانند باکتری ها و ویروس ها به عنوان یک محرک ثانویه تمرکز می کنند، مطالعات جدید نشان می دهد که سلول های تومور نیز ممکن است سلول های ایمنی آموزش دیده را دوباره فعال کنند. تمام تحقیقات تا به امروز از مدل‌های زیر جلدی سرطان استفاده کرده‌اند، بنابراین مشخص نیست که آیا وجود سلول‌های ایمنی ذاتی آموزش‌دیده ممکن است اثرات ضد توموری روی تومورهای درون اندام‌های جامد، مانند سرطان پانکراس، ایجاد کند یا خیر.

در این مطالعه، ما به طور غیر منتظره کشف کردیم که به صورت داخل صفاقی (IP) ذرات گلوکان مشتق از مخمر را به نسبت زیادی به پانکراس تزریق می کند. قاچاق مستقیم گلوکان به لوزالمعده مسیری را که قبلا مشخص نشده بود برای القای ایمنی آموزش دیده محیطی برجسته می کند. علاوه بر این، ما این فرضیه را آزمایش کردیم که این قاچاق ممکن است منجر به القای ایمنی ضد تومور در برابر سرطان پانکراس شود. با توجه به شکست اکثر درمان ها و ایمونوتراپی ها به تنهایی و در ترکیب برای درمان PDAC و دشواری هدف قرار دادن این داروها برای لوزالمعده، یافته های ما در مجموع یک پیشرفت بالقوه را در نه تنها هدف قرار دادن مستقیم پانکراس، بلکه در استخدام ضد تومور ارائه می دهد. سلول های ایمنی ذاتی به PDAC TME سرد ایمونولوژیک.

نتایج

ذرات گلوکان مشتق از مخمر ترجیحاً به لوزالمعده منتقل می شود.

به خوبی مستند شده است که تجویز گلوکان‌ها از باکتری‌ها و قارچ‌ها باعث افزایش تعداد و فراوانی پیش‌سازهای خونساز و پیش‌سازهای چند توانی می‌شود که به سمت دودمان میلوئیدی سوگیری می‌کنند، که در نهایت به عنوان یک گام مهم در القای ایمنی آموزش‌دیده مرکزی و محیطی عمل می‌کند. . با این حال، هنوز نشان داده نشده است که گلوکان پس از تجویز دقیقاً کجا این اثرات را دارد.

در این مطالعات، از ذرات کامل گلوکان (WGP) مشتق شده از ساکارومایسس سرویزیه استفاده شد که سلول‌های مخمری توخالی 2-4 میکرونی هستند که از (1،3) -گلوکان بسیار غلیظ ساخته شده‌اند. توصیف دقیق WGP-glucan در یکی از مطالعات دیگر ما شرح داده شده است. بر خلاف سایر اشکال گلوکان مورد استفاده در ایمنی تمرین شده، این فرمولاسیون منحصر به فرد است زیرا ذره ای است و برای اعمال اثرات خود به فاگوسیتوز فعال نیاز دارد. برای ارزیابی قاچاق این ذرات - گلوکان، WGP با (5-(4،6- دی کلروتریازینیل) آمینوفلورسئین) (DTAF) برچسب‌گذاری شد و IP به موش‌های نوع وحشی (WT) C57BL/6 تزریق شد. سه روز پس از تجویز IP ({15}}روز WGP)، ریه، طحال، غدد لنفاوی اینگوینال و مزانتریک، سلول‌های حفره صفاقی و لوزالمعده برداشت شدند، با PBS سرد یخ شسته شدند تا DTAFWGP از صفاق که ممکن است پاک شود. به سطح اندام چسبیده اند و وجود DTAF-WGP در هر اندام با فلوسایتومتری ارزیابی شد. در حالی که مقداری قاچاق DTAF-WGP به طحال، غدد لنفاوی مزانتریک و باقیمانده DTAF-WGP در حفره صفاقی وجود داشت، پانکراس حضور چشمگیر و غیرمنتظره ای از DTAF-WGP را نشان داد (شکل 1a).

برای ارزیابی بیشتر این قاچاق و اطمینان از اینکه برچسب DTAF در مکانیسم قاچاق دخیل نیست، WGP با 89Zr نشاندار شد و IP تزریق شد (شکل 1b) یا با ماکروفاژهای صفاقی که سپس IP تزریق شدند انکوبه شد (شکل 1c). موش ها ابتدا با استفاده از اسکن PET/CT 48 ساعت پس از تزریق تصویربرداری شدند و از دایره های سبز رنگ برای نشان دادن تجمع ترجیحی مشاهده شده 89Zr-WGP در پانکراس استفاده شد. سپس نکروسکوپی انجام شد و امضای رادیواکتیو هر اندام اندازه‌گیری شد. با داده‌های فلوسایتومتری، 89Zr-WGP در مقادیر زیادی به پانکراس منتقل شد و در سطوح پایین‌تری در طحال، کبد و سیستم روده یافت شد. ماکروفاژهای صفاقی که با 89Zr-WGP کشت داده شدند و سپس IP تزریق شدند، قاچاق مشابه، اما کمی متنوع تر از 89Zr-WGP خالص داشتند، و همچنین به طور برجسته در پانکراس انباشته شدند (شکل 1d). قاچاق ماکروفاژهای صفاقی بارگذاری شده با WGP به لوزالمعده نشان می دهد که هم WGP برهنه و هم ماکروفاژهایی که WGP را فاگوسیتوز کرده اند، تروپیسم را به پانکراس نشان می دهند.

برای ارزیابی نقشی که گیرنده شناخته شده WGP در قاچاق WGP ایفا کرد، موش‌هایی که فاقد گیرنده لکتین نوع C، دکتین-1، (دکتین{2}}-/- موش) بودند، با IP تزریق شد. DTAF-WGP. در مقایسه با موش‌های WT، موش‌های دکتین{4}}-/- کاهش پنج برابری در مقدار WGP که به لوزالمعده منتقل می‌شد را نشان دادند، همانطور که توسط فلوسیتومتری ارزیابی شد (شکل 1d). 89ZrWGP همچنین IP را به موش‌های WT و Dectin-1-/- تزریق کرده است. در مقایسه با حیوانات WT، قاچاق کمتری از 89Zr-WGP به پانکراس موش‌های دکتین{10}-/- وجود داشت (شکل 1e). برای اطمینان از اینکه این فرآیند خاص گلوکان است، یک ذره فلورسنت لاتکس 3 میکرومتری مبتنی بر پلی استایرن، به اندازه یک ذره WGP، IP تزریق شد و یافت نشد که در پانکراس تجمع پیدا کند (شکل تکمیلی 1a). این داده‌ها با هم، یک استرویزم وابسته به دکتین{16} که قبلاً مشخص نشده بود را برجسته می‌کنند که در آن -گلوکان به پانکراس می‌رود.

شکل 1 ذرات -گلوکان به روشی وابسته به دکتین{2}}به پانکراس می رود. یک DTAF-WGP IP تزریق شد و 3 روز بعد بافت‌های مختلف (n=3) برداشت شد و از نظر وجود DTAF-WGP توسط فلوسیتومتری بررسی شد. نمودارهای نقطه ای نماینده و داده های خلاصه شده نشان داده شده است. *p=0.032، **p=0.{21}}057، ****p <0.0001. b WGP با 89Zr-WGP نشاندار شد یا ماکروفاژهای صفاقی c با 89Zr-WGP انکوبه شدند و شسته شدند و به دنبال آن تزریق IP انجام شد. تصویربرداری PET/CT، قاچاق 89Zr-WGP را پس از 48 ساعت نمایش می‌دهد. اندام ها به صورت جداگانه برای رادیواکتیویته پس از نکروسکوپی با استفاده از شمارنده گاما ارزیابی شدند. در ج، اهمیت در مقایسه با پانکراس (n=3) گزارش شده است. ****p < 0.0001. d دکتین-1-/- موش‌ها یا موش‌های WT با DTAF-WGP تزریق شدند و تجمع DTAF-WGP در پانکراس با فلوسایتومتری (WT PBS n=3، WT WGP n {{{{ 27}}، KO به علاوه PBS n=3، KO به علاوه WGP n=4). e Dectin{30}}-/- موش یا موش WT (n=4) با 89Zr-WGP تزریق شد و 48 ساعت بعد از PET/CT برای ارزیابی مقدار در پانکراس استفاده شد. سیگنال با گزارش درصد دوز تزریقی (درصد ID) در پانکراس تعیین شد. *p=0.046. ANOVA یک‌طرفه با مقایسه‌های چندگانه توکی در a-d، و آزمون t غیر زوجی و دو دنباله دانشجویی در e استفاده شد. داده ها به صورت میانگین ± SEM نشان داده شد. ns مهم نیست. هر نمونه نشان دهنده یک حیوان مستقل بیولوژیکی است که طی یک آزمایش مستقل به دست آمده است که حداقل دو بار برای تأیید نتایج تکرار شده است.

- گلوکانی که به لوزالمعده منتقل می شود، هجوم سلول های ایمنی ذاتی را تحریک می کند که فنوتیپی از ایمنی آموزش دیده را نشان می دهند.

پس از کشف اینکه -گلوکان جهت گیری به سمت پانکراس را نشان می دهد، همچنین مشاهده شد که چشم انداز ایمنی پانکراس به طور قابل توجهی پس از درمان WGP تغییر کرده است. ورود WGP به لوزالمعده با هجوم مشخصی از CD11b به علاوه سلول های میلوئیدی به پانکراس تا روز 3 همراه بود که برخی از آنها WGP را فاگوسیتوز کرده بودند (شکل 2a).

این یافته ما را بر آن داشت تا بررسی کنیم که چگونه جمعیت کلی ایمنی پانکراس پس از درمان IP WGP تحت تاثیر قرار می‌گیرد. همانطور که قبلاً مشاهده شده بود که تغییرات ایمنی مرتبط با ایمنی تمرین‌شده در BM، 1-هفته پس از قرار گرفتن در معرض -گلوکان22 برجسته‌تر است، پروفایل ایمنی لوزالمعده در موش‌هایی که با یک میکروذره پلی استایرن 3 میکرومتری درمان شده بودند، بررسی شد. WGP 7 روز پس از تجویز. اول، مشاهده شد که پس از درمان WGP، حدود هفت برابر افزایش در تعداد مطلق CD45 به علاوه سلول های ایمنی در پانکراس وجود دارد (شکل 2b). کنترل میکروذره پلی استایرن 3 میکرومتری چنین اثراتی را نداشت (شکل تکمیلی 1b)، که نشان می‌دهد این هجوم سلول‌های ایمنی مختص WGP است. علاوه بر این، افزایش مشاهده شده در درصد CD45 به علاوه سلول های ایمنی مشاهده شد (شکل تکمیلی 1c).

برای طبقه بندی بیشتر اینکه کدام نوع سلول مسئول این گسترش جمعیت CD45 به علاوه ایمنی هستند، تعداد مطلق (شکل 2b) و درصد نسبی (شکل تکمیلی 1c) سلول های میلوئیدی (CD11b پلاس)، سلول های T (CD3 به علاوه) سلول‌های B (CD19 پلاس) و سلول‌های NK (NK1.1 پلاس) مورد ارزیابی قرار گرفتند. تغییرات تجمعی در لوزالمعده با نمودارهای دایره ای نشان داده می شود که نشان می دهد گسترش محفظه میلوئیدی مسئول کاهش نسبی درصد سایر جمعیت های سلولی و افزایش کلی جمعیت CD45 به علاوه پس از درمان WGP است (شکل 2c). . ما بعداً بررسی کردیم که آیا این هجوم سلول‌های ایمنی CD11b به علاوه گذرا است، بنابراین درصد سلول‌های CD45 پلاس و CD11b پلاس در پانکراس پس از تزریق IP در روزهای 7،10، 18 و 30 اندازه‌گیری شد.

شکل {{0}}گلوکان هجوم سلول های میلوئیدی آموزش دیده را به پانکراس تحریک می کند. درصد سلول های CD45 به علاوه CD11b به علاوه DTAF پلاس در پانکراس 3 روز پس از دریافت IP DTAF-WGP موش های WT. b هفت روز پس از تزریق PBS یا WGP، اعداد مطلق CD45 plus (n=15)، CD11b plus (n=18)، CD3 plus (n {{1{{30} سلول‌های }}})، CD19 plus (n=10) و NK1.1 plus (n=14) نشان داده شده‌اند. ****p < 0.00{100}}1. c نمودار دایره ای نشان دهنده تغییرات فرکانس جمعیت های اصلی سلول های ایمنی پس از درمان WGP. موش‌های d WT با PBS (n=5) یا WGP (n=5) تزریق شدند و درصد سلول‌های CD45 plus و CD45 به علاوه CD11b plus 7، 10، 18 و 30 روز بعد اندازه‌گیری شدند. n=3). **p=0.0034، ****p <0.0001 (CD45)، **p=0.0023 (CD11b). e اعداد مطلق F4/80 plus (n=10)، Ly6C plus (n=10) و Ly6G plus (n=8) در جمعیت CD11b plus. **p=0.003، ****p <0.0001. f هفت روز پس از IP PBS یا WGP پانکراس با LPS دوباره تحریک شد. تولید TNF در سلول های CD11b plus (n=28)، CD11b به علاوه F4/80 plus (n=9) و CD11b به علاوه Ly6C پلاس (n=8) اندازه گیری شد. *p=0.024، ***p=0.0001، ****p <0.0001. g هفت روز پس از PBS یا WGP، جمعیت CD45 به علاوه CD11b به علاوه غنی شد (n=4). سلول ها با یا بدون LPS به مدت 24 ساعت دوباره تحریک شدند. تولید TNF و IL{67}} با استفاده از روش الایزا اندازه گیری شد. ****p < 0.0001. سلول های CD11b لوزالمعده به علاوه موش های آموزش دیده با PBS و WGP مرتب شدند. RT-qPCR برای تعیین کمیت TNF (n=4)، IL-6 (n=4)، iNOS (PBS n=4، WGP n=3) انجام شد. و سطح بیان mRNA IL{78}} (PBS n=4، WGP n=5). *p=0.028، **p=0.0018، ****p <0.0001. سلول‌های CD11b پلاس از موش‌های تزریق شده با PBS یا WGP (24 ساعت) مرتب شدند (n=4). هیستون ها جدا شده و تحت آنالیز وسترن بلات (بالا) یا الایزا (پایین) برای H3K4me3، H3K27Ac، H3K27me3 و H3 کل قرار گرفتند. ****p < 0.0001. j هفت روز پس از IP WGP یا PBS، CD45 پانکراس به علاوه CD1b به علاوه جمعیت مرتب شدند. تجزیه و تحلیل RNA-Seq انجام شد (PBS n=3، WGP n=3).

توزیع مقادیر p (-log10 (p-value)) و تغییرات برابر (log2 FC) ژن‌های بیان شده متفاوت نشان داده شده‌اند. نمودار k t-SNE از جمعیت CD11b به علاوه در موش هایی که 7 روز قبل با PBS یا WGP آموزش دیده بودند و با CyTOF تجزیه و تحلیل شدند (PBS n=3، WGP n=3). از آزمون های t-test دانشجویی بدون زوج و دو دنباله در b، e، f و h استفاده شد. ANOVA یک طرفه با مقایسه های متعدد در d، g و i استفاده شد. داده ها به صورت میانگین ± SEM نشان داده شده است. ns مهم نیست هر نمونه نشان دهنده یک حیوان مستقل بیولوژیکی است که طی یک آزمایش مستقل به دست آمده است.

در حالی که درصد سلول های CD11b پلاس در روز 7 به اوج خود رسید، درصد سلول های CD45 پلاس در روز 10 به اوج خود رسید که ممکن است نشان دهنده این باشد که پس از هجوم سلول های CD11b پلاس به پانکراس، هجوم سایر انواع سلول های ایمنی ممکن است به دنبال داشته باشد. درصد سلول های ایمنی در لوزالمعده تا روز 30 به سطوح پایه کاهش یافت که نشان می دهد این هجوم گذرا است (شکل 2d). در داخل محفظه میلوئید، مشاهده کردیم که تعداد مطلق (شکل 2e) و درصد (شکل تکمیلی 1c) ماکروفاژها (F4/80 plus)، مونوسیت ها (Ly6C پلاس)، و نوتروفیل ها (Ly6G plus) همگی افزایش یافته بودند. همچنین نشان داده شد که هجوم سلول های ایمنی به لوزالمعده وابسته به دوز WGP تزریق شده است، جایی که دوزهای بالاتر WGP با افزایش هجوم کلی CD45 به علاوه CD11b به همراه سلول های میلوئید و CD45 به علاوه CD11b به علاوه F4/80 به علاوه ماکروفاژها همراه بود. (شکل تکمیلی 1d).

از آنجایی که پانکراتیت و تخریب جزایر پانکراس با انفیلتراسیون سلولی ایمنی پانکراس همراه است، H پلاس E پانکراس برای ارزیابی یکپارچگی آسین 7 روز پس از تجویز WGP انجام شد (شکل تکمیلی 1e). آمیلاز سرم، یک نشانگر تشخیصی پانکراتیت، همچنین در موش های تحت درمان با WGP در مقابل PBS 7 روز پس از تزریق اندازه گیری شد (شکل تکمیلی 1f). نه جزایر و نه آمیلاز سرم تحت تأثیر درمان WGP و هجوم ایمنی مشاهده‌شده قرار نگرفتند، که نشان می‌دهد هجوم سلول‌های ایمنی در این مکانیسم باعث تخریب پانکراس نمی‌شود.

برای بررسی اینکه آیا سلول‌هایی که به دنبال درمان WGP به پانکراس موش نفوذ می‌کنند، فنوتیپی از ایمنی آموزش‌دیده را نشان می‌دهند، ما از یک پروتکل آموزشی استاندارد استفاده کردیم که در آن موش‌ها با WGP یا PBS درمان شدند و 7 روز بعد پانکراس برداشت شد و سپس با LPS دوباره تحریک شد. تولید TNF به عنوان یک نشانگر جایگزین برای ارزیابی پاسخ آموزش دیده استفاده شده است. به طور کلی سلول‌های میلوئید CD11b، CD11b به‌علاوه F4/80 به‌علاوه ماکروفاژها، و CD11b به‌علاوه Ly6C به‌علاوه مونوسیت‌ها، همگی به دلیل مواجهه قبلی با WGP، TNF- بیشتری تولید می‌کنند، همانطور که توسط درصد سلول‌های TNF- پلاس و MFI ارزیابی می‌شود (شکل 2f). برای ارزیابی بیشتر این یافته‌ها، سلول‌های CD11b پلاس از لوزالمعده این موش‌ها دسته‌بندی شدند و در شرایط محیطی با LPS دوباره تحریک شدند و سطوح TNF- و IL{13}} در سوپرناتانت‌ها با روش الایزا اندازه‌گیری شدند. در مقایسه با سلول‌های CD11b پلاس موش‌های PBS، سلول‌های موش‌های آموزش‌دیده با WGP که با LPS دوباره تحریک شدند، به‌طور قابل‌توجهی TNF- و IL{16}} بیشتری تولید کردند (شکل 2g)، که نشان می‌دهد سلول‌های CD11b پلاس پانکراس تحت درمان با WGP آموزش دیده بودند.

این نتایج بیشتر با استفاده از RT-PCR تأیید شد، جایی که سلول‌های CD11b لوزالمعده به‌علاوه دسته‌بندی‌شده از موش‌های PBS یا WGP آموزش دیده نشان داده شد که TNF-، IL{4}}، iNOS و IL کمتری را تولید می‌کنند. درمان WGP (شکل 2h). از آنجایی که ایمنی تمرین‌شده با برنامه‌ریزی مجدد متابولیک و اپی ژنتیک مرتبط است، ما سطوح لاکتات را اندازه‌گیری کردیم تا بررسی کنیم که آیا گلیکولیز درگیر است یا خیر. در واقع، سلول های CD11b به علاوه WGPtrained لاکتات بیشتری در مقایسه با سلول های آموزش ندیده ترشح کردند (شکل تکمیلی 1g). ما همچنین تغییرات هیستونی سلول‌های CD11b به علاوه آموزش دیده با WGP را اندازه‌گیری کردیم. همانطور که در شکل 2 نشان داده شده است، سطح بیان H3K4me3 و H3K27Ac به طور قابل توجهی در سلول های CD11b به علاوه آموزش دیده با WGP افزایش یافته است. این مورد با تجزیه و تحلیل وسترن بلات (شکل 2i، بالا) و روش کمی ELISA (شکل 2i، پایین) آشکار شد. این یافته‌ها با هم نشان می‌دهند که WGP نه تنها یک فنوتیپ آموزش‌دیده را در سلول‌هایی که به لوزالمعده می‌روند تحریک می‌کند، بلکه آنها تحت برنامه‌ریزی مجدد متابولیک و اپی ژنتیکی نیز قرار می‌گیرند.

تعیین توالی RNA (RNA-Seq) سپس بر روی سلولهای CD45 به اضافه CD11b مرتب شده با FACS 7 روز پس از تجویز PBS یا WGP انجام شد تا یک توصیف بی طرفانه و جامع از جمعیت های میلوئیدی در پانکراس به دست آید. در مجموع 1459 ژن با بیان متفاوت (DEGs) کشف شد که 661 ژن تنظیم مثبت و 798 ژن در تنظیمات WGPtrained تنطیم شدند (شکل 2j). تجزیه و تحلیل‌های غنی‌سازی مجموعه ژن (GSEA) تغییرات مثبت بررسی‌شده قبلی در مسیرهای مربوط به تولید TNF و IL{10}} را تأیید کرد (شکل تکمیلی 2a). با هجوم مشاهده شده سلول های ایمنی، DEG های مربوط به کموتاکسی لکوسیت، مهاجرت لکوسیت ها (شکل تکمیلی 2a)، کموتاکسی مونوسیت، مهاجرت ماکروفاژها، و مهاجرت لکوسیت های میلوئیدی (شکل تکمیلی 2b) در گروه WG به طور قابل توجهی افزایش یافتند. علاوه بر این، مسیرهای سیگنال دهی CLEC7A دکتین{15}} و مسیرهای گیرنده لکتین نوع C به طور قابل توجهی غنی شدند، که بیشتر دخالت دکتین{17}} را در این فرآیند تأیید می کند (شکل تکمیلی 2c).

با توجه به اینکه جمعیت میلوئیدی مسئول گسترش جمعیت CD45 پلاس بوده و سلول‌های میلوئیدی جمعیت متنوعی هستند، تجزیه و تحلیل CyTOF بر روی پانکراتای موش‌های تحت درمان با PBS یا WGP 7 روز قبل انجام شد. جمعیت سلولی در پانکراس شناسایی و بین گروه های درمانی مقایسه شد. نمودارهای t-SNE نشان داد که به دنبال درمان WGP کاهش نسبی در جمعیت ماکروفاژهای ساکن وجود دارد که نشانگرهای M2 مانند CD206 را به شدت بیان می‌کند. ما همچنین ظهور چندین جمعیت میلوئیدی را در پانکراس مشاهده کردیم که به عنوان Ly6C به علاوه مونوسیت های مشتق از ماکروفاژ، مونوسیت های التهابی نفوذ کننده، ماکروفاژهای فعال و CD206 به علاوه ماکروفاژهای فعال تعریف شده بودند (شکل 2k و شکل تکمیلی 2d). نمودارهای viSNE که روی جمعیت CD11b بعلاوه قرار داشتند، گسترش مشخصی از مونوسیت‌ها و ماکروفاژها را نشان دادند، همراه با افزایش بیشتر سلول‌های دندریتیک (DCs)، نوتروفیل‌ها، و جمعیت‌های NK پس از درمان WGP (شکل تکمیلی 2e).

علاوه بر این، این تجزیه و تحلیل ها نشان می دهد که به دنبال تمرین WGP و تحریک LPS، TNF عمدتا توسط ماکروفاژها و مونوسیت ها تولید می شود، IL{0}} و iNOS عمدتا توسط ماکروفاژها تولید می شوند، Granzyme-B توسط سلول های NK و ماکروفاژها تولید می شود، و IFN عمدتا توسط نوتروفیل ها تولید می شود (شکل تکمیلی 2f). این نشان می دهد که در حالی که بسیاری از جمعیت های سلولی به دلیل درمان WGP تغییر می کنند، سلول های اولیه آموزش داده شده توسط WGP، همانطور که با افزایش بیان TNF ارزیابی می شود، ماکروفاژها و مونوسیت ها هستند و هیچ نوع سلولی مسئول فنوتیپ ایمنی آموزش دیده وجود ندارد. مشاهده شد.

برای ارزیابی اینکه آیا این پدیده هجوم و فعال‌سازی سلول‌های میلوئیدی به سایر جمعیت‌های ایمنی وابسته است یا به طور کامل توسط خود سلول‌های میلوئیدی هدایت می‌شود، ما جمعیت‌های ایمنی خاص را تخلیه کردیم و فنوتیپ آموزش دیده را مشاهده کردیم. mAbs AntiCD4 و Anti-CD8 به تنهایی و به صورت ترکیبی برای تخلیه سلول های T مورد استفاده قرار گرفتند، کارایی تخلیه ارزیابی شد (تکمیلی شکل 3a)، و فنوتیپ آموزش دیده سلول های میلوئیدی مشاهده شد (شکل تکمیلی 3b, c). سلول های NK نیز با استفاده از mAb PK136 تخلیه شدند، کارایی تخلیه ارزیابی شد (شکل تکمیلی 3d) و فنوتیپ آموزش دیده مشاهده شد (تکمیلی شکل 3e، f). در غیاب سلول‌های T و سلول‌های NK، سلول‌های میلوئیدی همچنان مشاهده شد که توسط WGP آموزش داده می‌شوند. فنوتیپ آموزش دیده همچنین در موش‌های NSG که فاقد سلول‌های B، سلول‌های T و سلول‌های NK بودند، ارزیابی شد (شکل تکمیلی 3g، h). این موش ها هنوز فنوتیپ واضحی از ایمنی آموزش دیده را نشان دادند.

در نهایت، ما نوتروفیل ها را با استفاده از mAb Ly6G تخلیه کردیم. علیرغم کاهش گرانولوسیت ها، ما همچنان تمرینات ناشی از WGP را در بخش CD11b به علاوه میلوئید مشاهده کردیم (شکل تکمیلی 3i-k). در مجموع، داده‌های ما تأیید می‌کنند که سلول‌های میلوئیدی نفوذی در پانکراس بدون کمک یا تأثیر جمعیت‌های ایمنی سازگار، سلول‌های NK یا گرانولوسیت‌ها توسط -گلوکان آموزش داده می‌شوند.

توالی یابی RNA تک سلولی جمعیت خاصی از ماکروفاژها/مونوسیت های پیش التهابی را نشان می دهد که با درمان با گلوکان به پانکراس می روند.

همانطور که تجزیه و تحلیل CyTOF ما ظاهر چندین جمعیت قبلاً مشخص نشده را در پانکراس به دنبال درمان WGP نشان داده است، برای به دست آوردن درک عمیق تر از جمعیت سلولی موجود در پانکراس، یک توالی RNA تک سلولی (scRNA-Seq) انجام شد. روی سلول‌های CD45 پلاس مرتب‌شده از موش‌های تحت درمان با PBS و موش‌هایی که با WGP سه ({5}}روز WGP) و هفت روز قبل (7-روز WGP) تحت درمان قرار گرفتند. نمایش دو بعدی UMAP از 11132 سلول جمع‌آوری شده از سه نمونه با خوشه‌های حاصل از k نزدیک‌ترین همسایه‌ها و الگوریتم‌های Louvain که به 19 خوشه مجزا تقسیم شده‌اند (شکل 3a, b). فراوانی نسبی هر خوشه در هر گروه آزمایشی ارزیابی شد.

در اینجا، افزایش قابل توجهی در فراوانی خوشه های 3،4، و 10 تا روز 7 پس از درمان WGP، همراه با ناپدید شدن تقریباً خوشه 5 مشاهده شد (شکل 3c). فراوانی نسبی چندین جمعیت دیگر نیز در طول زمان کاهش می یابد. با این حال، این روند ظاهری احتمالاً به دلیل افزایش نسبی فراوانی سایر جمعیت ها است. به طور کلی، خوشه های 3،4،10، و 5 به طور قابل توجهی به دلیل درمان WGP تغییر یافته اند (شکل 3d).

جمعیت هایی که قبلا ذکر شده بود که به طور قابل توجهی در طول زمان به دلیل درمان WGP تغییر یافته اند، بخشی از بخش میلوئید بودند، همانطور که با بیان CSF1R مشخص شد (شکل 3d، e). از آنجایی که این داده‌ها همراه با یافته‌های قبلی نشان می‌دهند که جمعیت‌های میلوئیدی تغییرات ایمنی مرتبط با درمان WGP را هدایت می‌کنند، CSF1R پویا به‌علاوه خوشه‌های 3،4،10، و 5 با جزئیات بیشتری همانطور که توسط نمودارهای ویولن (شکل 3f) و نقطه نشان داده شده است، بررسی شدند. نمودارهایی که 12 ژن نشانگر برتر را با میانگین امتیاز Z برای هر خوشه نشان می دهند (شکل 3g). خوشه 5، که در موش های PBS وجود داشت اما عملاً پس از درمان WGP ناپدید شد، به عنوان ماکروفاژهای مقیم شناسایی شد24،25. این خوشه همچنین MAF و APO را که هر دو مربوط به پلاریزاسیون ماکروفاژ M226-28 هستند را بیان می‌کند. خوشه 19 تا حد زیادی در طول زمان بدون تغییر بود، بنابراین با جزئیات بیشتر توضیح داده نشد، اما نمایه بیانی شبیه به خوشه 5 را نشان داد، و بنابراین نشان دهنده زیر مجموعه ای از ماکروفاژهای ساکن بافت است. خوشه 10، جمعیت ماکروفاژ Ly6Clo، همچنین دارای مشخصات بیانی مشابه با خوشه 5 ماکروفاژی ساکن و نشانه های بیان قابل توجه ARG1 و FABP بود. با توجه به عدم بیان Ly6C، شباهت به جمعیت ماکروفاژهای ساکن، و ناپدید شدن جمعیت ساکن پس از درمان WGP، فرض می‌کنیم که این جمعیت ماکروفاژهای ساکن رپلاریزه هستند. خوشه های 3 و 4 خصوصیات فنوتیپی عمومی را به عنوان مونوسیت ها / ماکروفاژهای نفوذ کننده Ly6CHi به اشتراک گذاشتند. خوشه 4 بیان قابل توجهی از Chil3 و Plac8 داشت که با هم توسط گروه دیگری برای شناسایی ماکروفاژهای نفوذ کننده Ly6Chi شناسایی شده اند.

در نهایت، خوشه 3، که در موش‌های ساده وجود نداشت و بیشترین افزایش فراوانی نسبی را در میان همه خوشه‌ها به دنبال درمان WGP نشان داد، امضای قابل‌توجهی از TNFAIP2، IL1B، SOD2 و PRDX5 را بیان کرد که نشان‌دهنده یک فنوتیپ به شدت پیش‌التهابی است. بنابراین خوشه 3 به عنوان مونوسیت / ماکروفاژهای التهابی Ly6CHi شناسایی شد. جالب توجه است، در زیر مجموعه میلوئید، جمعیت هایی که به دلیل درمان WGP افزایش می یابند، تنها جمعیت هایی هستند که TNFAIP2 را بیان می کنند، که نشان می دهد سلول هایی که وارد پانکراس می شوند احتمالاً سلول های میلوئیدی آموزش دیده هستند.

برای توصیف بیشتر وضعیت فعال سازی هر یک از چهار خوشه میلوئید پویا، نمودارهای نقطه ای برای نشان دادن بیان نسبی ژن های مرتبط با وضعیت پیش التهابی و وضعیت ضد التهابی ساخته شد (شکل 3h). خوشه‌های 3 و 4، مونوسیت‌ها/ماکروفاژهای نفوذی، پیش‌التهابی بودند، ماکروفاژهای ساکن ضد التهاب بودند، و ماکروفاژها در خوشه 10 یک فنوتیپ متوسط ​​را نشان دادند. در توافق با داده‌های قبلی CyTOF و فلوسیتومتری، این داده‌های scRNA-Seq بیشتر این سلول‌های میلوئیدی تازه شناسایی‌شده در پانکراس را به عنوان یک جمعیت ناهمگن از ماکروفاژهای ساکن Ly6CLo تبدیل شده و رپلاریزه شده و Ly6CHi پیش التهابی که علائم ماکروفاژهای مشتق از مونوسیت را بیان می‌کنند، مشخص می‌کند. ایمنی آموزش دیده

هجوم و تمرین سلول‌های میلوئیدی در پانکراس مبتنی بر WGP وابسته به CCR2-است و در اوایل 24 ساعت پس از درمان WGP رخ می‌دهد.

ما در مرحله بعد بررسی کردیم که چه مکانیسم هایی مسئول این هجوم سلول ها به پانکراس هستند. داده‌های RNA-Seq برای مشخص کردن کموکاین‌ها و سیتوکین‌هایی که بیان آن‌ها در درمان WGP به طور قابل‌توجهی تنظیم شده بود، استفاده شد (شکل 4a). در حالی که چندین کموکاین و سیتوکین تنظیم مثبت شدند، مشاهدات ما از هجوم ماکروفاژها و مونوسیت ها به لوزالمعده به دلیل دخالت آن در جذب مونوسیت و ماکروفاژ و خروج مونوسیت از مغز استخوان 30-32، علاقه خاصی به CCR2 برانگیخت. داده‌های CyTOF همچنین افزایش قابل توجهی در سلول‌های{5}CCR مثبت پس از درمان WGP نشان داد (شکل 4b) و scRNA-Seq بیان مشخصی از CCR2 را در خوشه‌های 3 و 4 نشان داد که دو جمعیت متمایزترین را نشان دادند. فنوتیپ های ایمنی آموزش دیده (شکل 4c). علاوه بر این، 24 ساعت پس از درمان WGP، لیزات کل پانکراس افزایش {14} برابری در CCL2 را نشان داد، که لیگاند برای CCR2 است و در واسطه کموتاکسی مونوسیتی نقش دارد (شکل 4d).

داده‌های RNA-Seq نشانه‌ای واضح از جذب و قاچاق سلول‌های ایمنی را نشان می‌دهند، و این داده‌ها همچنین نشان می‌دهند که WGP تکثیر لکوسیت‌ها و سلول‌های تک هسته‌ای را افزایش می‌دهد (شکل 4e). برای بررسی اینکه آیا سلول‌های CCR2 به علاوه میلوئید پس از رسیدن به لوزالمعده تکثیر می‌شوند، درصد سلول‌های CCR2 به علاوه بیان‌کننده Ki67 در موش‌های تحت درمان با PBS و WGP ارزیابی شد. به دنبال درمان WGP، افزایشی در سلول‌های در حال تکثیر کلی وجود داشت (شکل 4f) و درصد زیادی از این سلول‌های در حال تکثیر CD11b به علاوه CCR2 پلاس بودند (شکل 4g). سپس سهم سلول‌های CCR2 به علاوه در فنوتیپ آموزش دیده را بررسی کردیم. 7 روز پس از درمان in vivo با PBS یا WGP، جمعیت های CCR2 پلاس و CCR2- برای پاسخ آموزش دیده اندازه گیری شدند (شکل 4h). این داده ها نشان داد که اکثر سلول های آموزش دیده پس از درمان WGP CCR2 پلاس بودند.

برای بررسی بیشتر نقش CCR2 در مونوسیت ها/ماکروفاژهای آموزش دیده با گلوکان، موش های CCR2-/- با WGP-glucan آموزش دیدند. موش‌های CCR2-/- تحت هجوم CD45 پلاس (شکل 4i) یا CD45 به‌علاوه CD11b به‌علاوه سلول‌های میلوئیدی (شکل 4j) به لوزالمعده قرار نگرفتند، و پاسخ آموزش‌دیده‌ای را همانطور که با تولید TNF نشان داد نشان ندادند (شکل. 4k). این داده ها نشان می دهد که CCR2 نقش مهمی در مهاجرت سلول های ایمنی ذاتی به لوزالمعده و القای ایمنی آموزش دیده محیطی در پانکراس ایفا می کند.

همانطور که قبلا ذکر شد، CCR2 برای به‌کارگیری زودهنگام مونوسیت‌ها مهم است، اما برای جذب دیرهنگام اهمیت کمتری دارد. تا کنون، ما همچنین مشاهده کرده بودیم که در 7 روز پس از تمرین WGP، CCR2 برای به‌کارگیری سلول‌های میلوئیدی آموزش دیده به پانکراس حیاتی بود. ما در مرحله بعدی بررسی کردیم که آیا این هجوم در اوایل تمرین WGP رخ داده است یا خیر و اینکه آیا سلول‌های CCR2 به علاوه سلول‌های میلوئیدی به پانکراس وارد شده‌اند یا خیر. برای این منظور، موش ها با PBS یا WGP تحت درمان قرار گرفتند و بافت های پانکراس 24 و 48 ساعت بعد آنالیز شدند. با کمال تعجب، در اوایل 24 ساعت پس از تمرین WGP، CD45 plus (شکل تکمیلی 4a)، CD11b پلاس (شکل تکمیلی 4b)، F4/80 plus (تکمیلی شکل 4c)، Ly6C پلاس (تصویر تکمیلی 4d) افزایش می‌یابد. و سلول های CD11b به علاوه CCR2 پلاس (تکمیلی شکل 4e) مشاهده شدند.

علاوه بر این، نشان داده شد که این سلول های میلوئیدی در اوایل 24 ساعت پس از درمان WGP آموزش داده شدند (شکل تکمیلی 4f). این مشاهدات تفاوت بین این نتایج و فنوتیپ های قبلاً مشاهده شده ایمنی تمرین شده را برجسته می کند که معمولاً حداقل تا 3 روز پس از تمرین شروع نمی شوند.

شکل 4 CCR2 برای قاچاق سلول های ایمنی به پانکراس مورد نیاز است. یک نقشه حرارتی از کموکاین‌ها و سیتوکین‌هایی که در سلول‌های CD11b پلاس تحت درمان با WGP بر اساس داده‌های RNA-Seq 7-روز تنظیم مثبت شدند. نمودار b viSNE از CD11b به علاوه جمعیت پانکراس در موش‌های PBS و {6}}روزه آموزش دیده با WGP، که بیان CCR2 را برجسته می‌کند. تصاویر ساخته شده با داده های CyTOF. c داده‌های scRNA-Seq که یک UMAP از خوشه‌های میلوئیدی را نشان می‌دهند که CCR2 را بیان می‌کنند. d بیان CCL2 در لیزهای کل پانکراس 24 ساعت پس از درمان WGP با RT-PCR (n=6) اندازه‌گیری شد. ****p=0.0001. GSEA نمودارهای غنی‌سازی ژن‌های مربوط به تکثیر لکوسیت‌ها در سلول‌های CD11b به علاوه پانکراس را از 7-روز آموزش WGP در مقایسه با موش‌های PBS ایجاد کرد. PBS به عنوان شاهد استفاده شد و با WGP مقایسه شد. f داده‌های خلاصه‌شده درصد سلول‌های CD45 به‌علاوه پانکراس که Ki67 plus در موش‌های PBS و 7-روزه آموزش دیده با WGP هستند (n=4). ***p=0.0007. g سلول ها ابتدا روی جمعیت CD45 به علاوه Ki67 پلاس قرار گرفتند. نمودارها درصد سلول‌های CD45 به‌علاوه Ki67 به‌علاوه تکثیر لوزالمعده را نشان می‌دهند که CD11b به‌علاوه CCR2 پلاس در موش‌های PBS و 7-روزه آموزش دیده با WGP (n=4) هستند. *p=0.0261. سلول‌های پانکراس از موش‌های PBS و 7-روزه آموزش دیده با WGP (n= 5) با LPS دوباره تحریک شدند و درصد سلول‌های CCR2 مثبت و منفی تولیدکننده TNF در هر شرایط اندازه‌گیری شد. سلول ها ابتدا در زیر مجموعه CD45 به علاوه CD11b پلاس قرار گرفتند. نمودار نقطه ای نماینده و داده های خلاصه شده نشان داده شد. *p=0.022، **p=0.0073، ***p=0.0007. موش های i-k WT و CCR2-/- با PBS یا WGP تحت درمان قرار گرفتند و درصد سلول های I CD45 پلاس در پانکراس (****p <0.0001) و j درصد سلول های CD45 پلاس که CD11b پلاس بودند ارزیابی شد. . **p=0.0013. k درصد CD45 به علاوه CD11b به علاوه سلول های تولید کننده TNF. نمودارهای جریان نماینده و داده های خلاصه شده نشان داده شده است. هر نقطه نشان دهنده داده های یک ماوس است. ***p=0.0002. (i–k: WT PBS n=9، WT WGP n=9، CCR2-/- PBS n=8، CCR2-/- WGP n=8).

از آزمون t دانش‌آموز بدون جفت و دو دنباله در d، f و g استفاده شد، در حالی که یک ANOVA یک طرفه با مقایسه‌های چندگانه در h–k استفاده شد. داده ها به صورت میانگین ± SEM نشان داده شد. ns مهم نیست در f-k، هر نمونه نشان دهنده یک حیوان مستقل از نظر بیولوژیکی است که طی یک آزمایش مستقل به دست آمده است که حداقل دو بار برای تأیید نتایج تکرار شده است.

سلول‌های میلوئید نفوذی پانکراس که تحت آموزش WGP قرار گرفته‌اند، پاسخ‌های آموزش‌دیده‌ای به عوامل ترشح شده از سرطان‌های پانکراس و افزایش فاگوسیتوز و سمیت سلولی با واسطه ROS به سلول‌های تومور نشان می‌دهند.

همانطور که نشان دادیم استفاده از WGP به عنوان یک محرک اولیه منجر به سلول‌های ایمنی ذاتی می‌شود که برای پاسخ قوی‌تر به مواجهه ثانویه با LPS آموزش دیده‌اند و این سلول‌ها پس از درمان در لوزالمعده تجمع می‌کنند، می‌خواستیم بدانیم که آیا محرک‌های ثانویه مربوط به تومورهای پانکراس هستند یا خیر. همچنین ممکن است این پاسخ آموزش دیده را برانگیزد. برای این منظور، ما ابتدا بررسی کردیم که آیا سلول های سرطانی پانکراس خود قادر به برانگیختن پاسخ آموزش دیده ناشی از WGP هستند یا خیر. برای بررسی این سوال، ماکروفاژهای صفاقی با PBS یا WGP در شرایط آزمایشگاهی کشت داده شدند و 7 روز بعد با LPS، مایع رویی از سلول‌های کشت‌شده از پانکراس ساده موش، و مایع رویی از سلول‌های KPC کشت‌شده، که یک رده سلولی هستند، دوباره تحریک شدند. تومور پانکراس روی پس زمینه C57BL/6 مشتق شده از LSL-KrasG12D/ plus. LSL-Trp53R172H/ plus ; موش‌های Pdx1-Cre (KPC) یا سلول‌های سرطانی پانکراس پانکراس به مدت 24 ساعت. تولید TNF در مایع رویی با روش الایزا اندازه گیری شد.

در مقایسه با مایع رویی سلول‌های طبیعی پانکراس که ماکروفاژهای قبلاً آموزش دیده را فعال نمی‌کردند، مایع رویی سلول‌های سرطانی پانکراس و KPC کشت‌شده باعث تحریک بیشتر ماکروفاژهای آموزش‌دیده TNF{{1} در گلوکان شد (شکل تکمیلی 5a). علاوه بر این، برای کنترل این احتمال که فرآیند فاگوسیتوز ممکن است باعث فعال شدن سلول‌ها شود، ماکروفاژهای صفاقی با دانه‌های میکروذره پلی استایرن 3 میکرومتری کشت داده شدند و سپس با PBS یا LPS دوباره تحریک شدند (شکل 5 ب تکمیلی). نتایج نشان داد که افزایش تولید TNF مختص تمرین WGP است.

سپس در محیط ex vivo که در آن موش‌ها با PBS یا WGP تحت درمان قرار گرفتند و 7 روز بعد لوزالمعده برداشت شد، سلول‌های میلوئید پانکراس غنی شدند و سپس با مواد رویی از کشت KPC (شکل تکمیلی 5c) یا Pan02 دوباره تحریک شدند. سلول ها (شکل تکمیلی 5d). این نشان داد که WGP در داخل بدن CD11b به همراه سلول‌های میلوئیدی در پانکراس، TNF- بیشتری را در پاسخ به محیط‌های شرطی‌شده تومور تولید می‌کنند. سلول های تومور خود عوامل متعددی ترشح می کنند که ممکن است به طور خاص به عنوان محرک دوم در ایمنی تمرین شده عمل کنند. مشخص است که سلول‌های تومور پانکراس سطوح بالایی از الگوهای مولکولی مرتبط با آسیب (DAMPs) و عوامل پیش‌التهابی مانند فاکتور مهارکننده مهاجرت ماکروفاژها (MIF) را بیان می‌کنند. MIF سیتوکینی است که در غلظت‌های بالا توسط تومورهای پانکراس ترشح می‌شود که می‌تواند مستقیماً روی سلول‌های میلوئیدی تأثیر بگذارد34،35.

در واقع، MIF در مایع رویی سلول های KPC و Pan02 وجود داشت که توسط ELISA ارزیابی شد (شکل تکمیلی 5e). بنابراین ما فرض کردیم که MIF ممکن است یک عامل بالقوه ترشح تومور باشد که می تواند به عنوان سیگنال دوم در تنظیم ایمنی آموزش دیده ناشی از WGP عمل کند. برای بررسی این موضوع، سلول‌های میلوئید پانکراس از موش‌های آموزش دیده با WGP با غلظت مشابهی از MIF نوترکیب (rMIF) که در محیط‌های دارای تومور وجود دارد، مجدداً تحریک شدند. همانطور که در شکل تکمیلی 5f نشان داده شده است، سلول های میلوئید پانکراس که قبلا با WGP آموزش داده شده بودند، تولید TNF- را با تحریک مجدد rMIF نشان دادند. در مجموع، این داده‌ها این مفهوم را پیشنهاد می‌کنند که سلول‌های تومور پانکراس، از طریق فاکتورهای محلولی که آزاد می‌کنند، می‌توانند به عنوان دومین سیگنال برای فعال کردن سلول‌های میلوئیدی در پانکراس که توسط WGP آموزش دیده‌اند، عمل کنند.

ما در مرحله بعدی بررسی کردیم که آیا این سلول های ایمنی ذاتی آموزش دیده با WGP خواص ضد توموری ذاتی را افزایش داده اند یا خیر. داده‌های توالی‌یابی RNA نشان داد که مکانیسم‌های مربوط به فاگوسیتوز در تنظیمات WGP تنظیم مثبت شده‌اند (شکل 5a)، که ما فرض کردیم می‌تواند یکی از مکانیسم‌های عملکرد ضد تومور باشد. 20 مسیر غنی شده KEGG و فرآیندهای بیولوژیکی هستی شناسی ژن (GO) پس از تمرین WGP در جداول تکمیلی 1 و 2 فهرست شده اند. سلول های ایمنی پانکراس CD45 پلاس و سلول های میلوئید CD11b از پانکراس موش آموزش دیده با WGP جمع آوری و برای فاگوسیتوز بالقوه مورد سنجش قرار گرفتند. درمان WGP منجر به افزایش قابل توجهی در پتانسیل فاگوسیتی در سلول های CD45 به علاوه سلول های ایمنی کلی (شکل 5b) و در CD11b به علاوه سلول های میلوئیدی (شکل 5c) شد.

علاوه بر این، سلول های میلوئیدی آموزش دیده در داخل بدن افزایش فاگوسیتوز سلول های تومور KPC را نشان دادند (شکل 5d). ما سپس بررسی کردیم که آیا سلول‌های میلوئیدی آموزش دیده توسط WGP سمیت سلولی بیشتری را برای سلول‌های KPC نشان می‌دهند یا خیر. داده های RNA-Seq نشان داد که DEG های مربوط به فرآیندهای بیوسنتزی گونه های اکسیژن فعال (ROS) و تنظیم مثبت فرآیندهای متابولیکی ROS به طور قابل توجهی در سلول های میلوئیدی تحت درمان با WGP غنی شده اند (شکل 5e).

در نتیجه، ما فرض کردیم که افزایش تولید ROS توسط WGP منجر به افزایش سمیت سلولی سلول‌های میلوئید پانکراس به سلول‌های تومور KPC می‌شود. برای بررسی این فرضیه، سلول‌های CD11b پلاس از لوزالمعده از موش‌های آموزش‌دیده یا آموزش‌دیده با گلوکان جدا شدند و به مدت 24 ساعت با سلول‌های KPC بیانگر لوسیفراز (KPCLuc plus) قرار گرفتند. سلول های میلوئیدی آموزش دیده با WGP سمیت سلولی سه برابری نسبت به سلول های تومور KPC نشان دادند و مهار تولید ROS با استفاده از مهارکننده ROS N-استیل سیستئین (NAC) به طور کامل افزایش سمیت سلولی ناشی از WGP را لغو کرد (شکل 5f). پراکسیداسیون لیپیدی ناشی از ROS نقش مهمی در آپوپتوز، اتوفاژی و فروپتوز دارد. بنابراین ما از دو مهارکننده ROS اضافی، Trolox و deferoxamine (DFO)، برای بررسی اثر آنها بر سمیت سلولی استفاده کردیم.افزودن Trolox و DFO به طور قابل توجهی CD11b آموزش دیده با WGP را به علاوه سمیت سلولی با واسطه سلولی مهار کرد (شکل 5g)، که نشان می دهدکه پراکسیداز لیپیدی ناشی از ROS، حداقل تا حدی، در این سمیت سلولی ناشی از ROS دخیل است.

شکل 5 سلول های میلوئیدی نفوذگر پانکراس آموزش دیده توسط WGP فاگوسیتوز افزایش یافته و سمیت سلولی با واسطه ROS را نشان می دهند. نمودارهای غنی‌سازی (GSEA) و نقشه حرارتی ژن‌های مربوط به تنظیم مثبت فاگوسیتوز در سلول‌های CD11b به علاوه از 7-روز آموزش WGP در مقایسه با موش‌های PBS. b درصد سلول‌های CD45 به علاوه پانکراس که یک ذره pHrodo Green Staph Aureus را در موش PBS (n=10) و 7-روز WGP (n=9) همراه با MFI pHrodo فاگوسیتوز کردند. ذره سبز استاف اورئوس هر نقطه نشان دهنده داده های یک ماوس است. *p {{1{12}}}}.043، ****p <0.0001. c درصد سلول‌های CD11b به‌علاوه میلوئید پانکراس که یک ذره pHrodo Green Staph Aureus را در موش‌های PBS (n=13) و 7-روز WGP (n=13) فاگوسیتوز کردند. سلول ها ابتدا بر روی جمعیت CD45 پلاس قرار گرفتند. MFI ذره pHrodo Green Staph Aureus نشان داده شده است. **p=0.0021، ***p=0.0002. d درصد سلول‌های CD11b و میلوئید پانکراس که KPCGFP به علاوه سلول‌های تومور را در موش‌های PBS (n=5) و 7-روز WGP (n=5) فاگوسیتوز کردند. *p=0.0103. سلول ها ابتدا بر روی جمعیت CD45 پلاس قرار گرفتند. MFI خلاصه شده سیگنال GFP plus نیز نشان داده شده است. *p=0.0379. نمودارهای غنی‌سازی (GSEA) و نقشه حرارتی ژن‌های مربوط به فرآیندهای بیوسنتزی گونه‌های اکسیژن فعال و تنظیم مثبت فرآیندهای متابولیک گونه‌های اکسیژن فعال در سلول‌های CD11b به علاوه از 7-روز آموزش WGP در مقایسه با موش‌های PBS. f نتایج خلاصه‌شده از یک سنجش سمیت سلولی که در آن سلول‌های CD11b پلاس از PBS و {36}}موش‌های آموزش دیده با WGP روز مرتب شده و با نسبت 1:20 KPCLuc plus: CD11b پلاس سلول‌ها به مدت 24 ساعت انکوبه شدند. NAC برای جلوگیری از بیان ROS استفاده شد و سمیت سلولی تومور با لومینسانس (PBS n=3، WGP n=4) ارزیابی شد. g داده‌های خلاصه‌شده از سنجش‌های سمیت سلولی که در آن سلول‌های CD11b پلاس از 7-موش‌های روزه آموزش دیده با WGP مرتب شده و با نسبت 1:20 KPCLuc پلاس: سلول‌های CD11b پلاس به مدت 24 ساعت انکوبه شدند. Trolox یا DFO یا کنترل های وسیله نقلیه مربوطه اضافه شد و سمیت سلولی تومور با اندازه گیری لومینسانس (n=3) تعیین شد. *p=0.0255، **p=0.0019. در b–d از آزمون t دانش‌آموز بدون جفت و دو دنباله استفاده شد و برای f از آنالیز واریانس یک طرفه با مقایسه چندگانه استفاده شد. داده ها به صورت میانگین ± SEM نشان داده شد. ns مهم نیست در b-g، هر نمونه نشان دهنده یک حیوان مستقل بیولوژیکی است که طی یک آزمایش مستقل به دست آمده است که حداقل دو بار برای تأیید نتایج تکرار شده است.

در نهایت، این داده‌ها مشخص می‌کند که سلول‌های تومور پانکراس قادر به فعال‌سازی مجدد سلول‌های میلوئیدی نفوذگر WGP در پانکراس هستند و این سلول‌ها فاگوسیتوز افزایش یافته و سمیت سلولی با واسطه ROS را نشان می‌دهند.

ایمنی آموزش دیده ناشی از WGP رشد تومور را کاهش می دهد و بقا را در مدل های ارتوتوپی سرطان پانکراس طولانی می کند.

ما بعداً بررسی کردیم که آیا پاسخ‌های ایمنی ذاتی آموزش‌دیده با واسطه گلوکان در لوزالمعده منجر به ایجاد یک ریزمحیط ضد تومور می‌شود که ممکن است برای غلبه بر TME سرکوب‌کننده سیستم ایمنی مشخصه PDAC کافی باشد. بر این اساس، به موش‌ها 1 دوز PBS یا WGP در روز 7- داده شد، و در روز 0، 1 × 105 سلول KPC یا KPCLuc پلاس به صورت ارتوتوپی در دم پانکراس کاشته شد (شکل 6a). در روز 21 موش ها معدوم شدند و وزن تومور اندازه گیری شد (شکل 6b). در محل تزریق سلول های KPCLuc plus، به موش ها سوبسترای لوسیفراز تزریق شد و تومورها تصویربرداری شدند (شکل 6c).

هر دو مطالعه کاهش قابل توجهی در بار تومور در نتیجه درمان WGP نشان دادند، و بقا نیز در موش‌های آموزش دیده با WGP به طور قابل‌توجهی طولانی‌تر شد (شکل 6d). ایمونوفنوتایپ تومورها افزایش مداوم در CD45 به علاوه سلول های ایمنی، CD11b به علاوه سلول های میلوئیدی و F4/80 plus ماکروفاژها را در محیط آموزش دیده با WGP نشان داد (شکل 6e). CD11b به علاوه سلول های میلوئیدی (شکل 6f) و CD11b به علاوه F4/80 به علاوه ماکروفاژها (شکل 6g) در داخل تومور نیز افزایش قابل توجهی در تولید TNF- به دلیل WGP نشان دادند. هر دو افزایش تعداد CD11b به علاوه سلول های میلوئیدی (شکل 6h، سمت چپ) و افزایش درصد سلول های CD11b به علاوه تولید TNF- (شکل 6h، سمت راست) به طور قابل توجهی با کاهش بار تومور مرتبط است. نه سلول های CD4 پلاس و نه سلول های CD8 پلاس T افزایش IFN- را نشان ندادند، که بیشتر حمایت می کند که کاهش بار تومور توسط سلول های میلوئیدی آموزش دیده با WGP انجام می شود (شکل 6i). اثرات ضد توموری مشابهی نیز در موش‌هایی که تومورهای Pan02 به صورت ارتوتوپی کاشته شده بودند مشاهده شد (شکل تکمیلی 6a).

برای تأیید بیشتر اینکه سلول‌های ایمنی ذاتی مسئول پاسخ‌های ایمنی ضد توموری مشاهده‌شده هستند، تومورهای KPC ارتوتوپی در موش‌های NSG کاشته شدند. مشابه موش‌های WT، موش‌های NSG نیز کاهش قابل‌توجهی در اندازه تومور به دلیل تمرین WGP نشان دادند، که تأیید می‌کند که اثرات ضد توموری WGP توسط سلول‌های ایمنی ذاتی هدایت می‌شود و مستقل از پاسخ‌های تطبیقی ​​عمل می‌کند (شکل تکمیلی 6b). کلافتی و همکاران نشان داده بود که آموزش ایمنی ذاتی گرانولوپوز باعث ارتقای ایمنی ضد توموری می شود.

در حالی که ما سهم مهمی از گرانولوسیت ها را در فنوتیپ ایمنی آموزش دیده خود ندیده بودیم، بررسی کردیم که آیا گرانولوسیت ها در کاهش وابسته به WGP در تومورهای پانکراس با کاهش نوتروفیل ها و مشاهده رشد تومور در موش های تحت درمان با PBS و WGP نقش دارند یا خیر. کارایی کاهش نوتروفیل ها در لوزالمعده (شکل تکمیلی 6c) همراه با بار تومور پانکراس مورد ارزیابی قرار گرفت (شکل تکمیلی 6d). نتایج ما کاهش قابل توجهی در اندازه تومور در گروه WGP در غیاب نوتروفیل ها را نشان داد.

شکل 6 القای ایمنی تمرین شده در پانکراس اثرات ضد توموری دارد. یک طرح واره تجربی b موش‌های C57BL/6 یک تزریق IP واحد WGP یا PBS دریافت کردند و موش‌های 7 روزه به صورت ارتوتوپی با سلول‌های سرطان پانکراس KPC کاشته شدند. تصاویری از تومورها و تجزیه و تحلیل کمی وزن تومور نشان داده شده است. وزن تومور در روز 21 اندازه گیری شد (PBS n=10، WGP n=12). ***p=0.0004. c موش های C57BL/6 (n=4) یک تزریق داخل صفاقی WGP یا PBS دریافت کردند و 7 روز بعد به صورت ارتوتوپی با سلول های سرطان لوزالمعده KPC به علاوه Luc کاشته شدند. در روز 21 پس از کاشت تومور، به موش‌ها سوبسترای بیولومینسانس لوسیفرین IP داده شد و برای اندازه‌گیری اندازه تومور در داخل بدن در یک تصویرگر فوتون قرار گرفتند. *p=0.0403. بقای موش ها در طرح آزمایشی نشان داده شده در a، با استفاده از سلول های KPC (n=5). **p=0.0018. e فنوتیپ تومورها که درصد سلول‌های زنده را نشان می‌دهد که CD45 پلاس، درصد جمعیت CD45 پلاس CD11b پلاس، و درصد سلول‌های CD11b پلاس که F4/80 پلاس هستند (PBS n=10، WGP n=9). *p=0.0165 (CD45)، ***p=0.0001 (CD11b)، **p=0.0034 (F4/80). تولید TNF در سلول های CD11b به علاوه از PBS و {40}}روزه WGP آموزش دیده که با LPS دوباره تحریک شده بودند. درصد سلول های TNF پلاس و MFI TNF نشان داده شده است (PBS n=10، WGP n=9). **p=0.007، ***p=0.0002. g داده‌های خلاصه‌شده تولید TNF در سلول‌های CD11b به علاوه F4/80 plus از PBS و {51}}روزه WGP آموزش دیده که با LPS دوباره تحریک شده‌اند. درصد سلول های TNF به علاوه و MFI TNF نشان داده شده است (PBS n=10، WGP n=9). *p=0.0155، ***p=0.0001. h وزن تومور با درصد سلول‌های CD45 به علاوه سلول‌های ایمنی که CD11b پلاس (سمت چپ) و درصد CD45 به علاوه CD11b به‌علاوه سلول‌های TNF به علاوه (راست) بودند، همبستگی داشت. (PBS n=10، WGP n=9). i داده های خلاصه شده درصد سلول های T CD4 پلاس و CD8 پلاس بیان کننده IFN (PBS n=10، WGP n=9) داده ها به صورت میانگین ± SEM نشان داده شد. برای اندازه گیری قدرت همبستگی های خطی از ضرایب همبستگی پیرسون و در غیر این صورت از آزمون t-test دانشجویی بدون جفت و دو دنباله استفاده شد. ns مهم نیست هر نمونه نشان دهنده یک حیوان مستقل بیولوژیکی است که طی یک آزمایش مستقل به دست آمده است که حداقل دو بار برای تأیید نتایج تکرار شده است.

سلول‌های CCR2 به همراه میلوئید آموزش‌دیده، سلول‌های مؤثر اولیه در مکانیسم ضد تومور هستند.

با توجه به مهار کامل قاچاق سلول های ایمنی ذاتی به لوزالمعده و آموزش سلول های میلوئید پانکراس به دنبال درمان WGP در موش های CCR2-/-، ما استدلال کردیم که موش های CCR2-/- اثرات ایمنی ضد توموری مفید تمرین WGP را نشان نمی دهند. . مطابق با این فرضیه، موش‌های CCR2-/- که WGP دریافت کردند، در مقایسه با موش‌های WT کاهش بار تومور را نشان ندادند (شکل 7a).

این نشان داد که CCR2 برای هجوم سلول‌های ایمنی ذاتی آموزش‌دیده به لوزالمعده توسط WGP لازم است و این برای اثرات ضد تومور پیامد است. اگرچه سیگنال‌دهی CCL{3}}CCR2 در جذب ماکروفاژهای مشتق از مونوسیت به پانکراس حیاتی است، ما همچنین می‌خواستیم بدانیم که آیا وجود HSC‌های آموزش‌دیده در مغز استخوان و ایجاد ایمنی آموزش‌دیده مرکزی وجود دارد یا خیر. به تنهایی برای کاهش رشد تومورهای ارتوتوپی پانکراس کافی بود.

برای تأیید بیشتر عملکرد ضد تومور مستقیم سلول‌های میلوئید CCR2 به علاوه نفوذ، جمعیت‌های میلوئیدی CCR2 پلاس و CCR{3}} از موش‌های آموزش دیده با WGP مرتب شدند، با سلول‌های تومور KPC مخلوط شدند و به صورت ارتوتوپی در موش‌ها کاشته شدند. تومورهایی که با سلول‌های CCR2 پلاس مخلوط شده‌اند، کوچک‌تر از تومورهایی بودند که با سلول‌های CCR2- مخلوط شده‌اند، و بیشتر نشان می‌دهد که سلول‌های CCR2 آموزش‌دیده به علاوه سلول‌های میلوئیدی خود یک سلول مؤثر اولیه در مکانیسم ضد تومور هستند (شکل 7b). تجزیه و تحلیل CyTOF این تومورها نشان داد که تومورهای CCR2 به علاوه سلول‌های میلوئیدی به‌علاوه CD11b کمتری داشتند و سلول‌های CD8 به علاوه T موجود در تومور را به طور قابل‌توجهی افزایش دادند (شکل 7c، d). نسبت سلول‌های CD8 به علاوه T: CD11b به علاوه سلول‌های میلوئیدی نیز در شرایط CCR2 plus admix به طور قابل‌توجهی افزایش یافت (شکل 7e).

شکل 7 مکانیسم های اثر ضد تومور درمان WGP و مدل های مرتبط بالینی. موش های WT و CCR2-/- با PBS یا WGP تحت درمان قرار گرفتند و 7 روز بعد با سلول های تومور پانکراس KPC ارتوتوپی کاشته شدند. وزن تومور در روز 21 گزارش شده است. (WT PBS n=5، WT WGP n=6، CCR2 PBS n=6، CCR2−/− WGP n=6). **p=0.0027 (WT PBS در مقابل WT WGP)، *p=0.0118 (WT WGP در مقابل CCR2−/− PBS)، **p=0.0034 (WT WGP در مقابل CCR2-/- WGP). سلول های CCR2 plus و CCR2- لوزالمعده CD11b پلاس از موش های آموزش دیده با WGP با سلول های KPC مخلوط شده و به صورت ارتوتوپی کاشته شدند. اندازه تومور 21 روز بعد ارزیابی شد (CCR2 به علاوه n=5، CCR2− n=5). *p=0.0247. نمودارهای t-SNE تولید شده توسط تجزیه و تحلیل CyTOF از تومورهای مخلوط از b. خوشه هایی که تفاوت معنی داری بین گروه ها را نشان می دهند با دایره ها نشان داده می شوند. کل داده ها (سمت چپ) و نمودارهای t-SNE نماینده هر گروه نشان داده شده است. d درصد خلاصه‌شده سلول‌های CD8 پلاس و CD11b پلاس در تومورهای مخلوط (PBS n=4، WGP n=3). *p=0.01، **p=0.007. e نسبت سلول‌های CD8 پلاس: CD11b پلاس در تومورهای مخلوط (PBS n=4، WGP n=3). *p=0.0474. f بیان PD-L1 روی سلول های تومور KPC، سلول های CD11b plus و F4/80 plus در یک تومور KPC 21 روز پس از کاشت (KPC n=5، CD11b به علاوه n=6، F4/80 به علاوه n=6). g طرح واره تجربی WGP و درمان ضد PD-L1. موش ها (n=5) با PBS یا WGP تحت درمان قرار گرفتند و 7 روز بعد تومورهای پانکراس KPC ارتوتوپی کاشته شدند. در روزهای 3، 7 و 11 پس از لانه گزینی، به موش ها ضد PD-L1 mAb یا کنترل ایزوتیپ mAb IgG2b ضد موش داده شد. بقا نظارت شد. **p=0.0018 (WGP در مقابل PBS یا PD-L1)، **p=0.0021 (WGP در مقابل WGP به علاوه PD-L1). h طرح واره تجربی WGP مورد استفاده در محیط درمانی. موش‌ها با تومورهای پانکراس KPC ارتوتوپی کاشته شدند و یک بار که موش‌ها از عمل جراحی در روز 4 و 1 هفته بعد در روز 11 بهبود یافتند، WGP داده شد. *p=0.0163. داده ها به صورت میانگین ± SEM نشان داده شد. برای a از آنالیز واریانس یک طرفه با مقایسه های چندگانه و برای b، d و e از آزمون t-test دانشجویی بدون جفت و دو دنباله استفاده شد. از آزمون لگ رتبه برای g و h استفاده شد. ns مهم نیست هر نمونه نشان دهنده یک حیوان مستقل بیولوژیکی است که طی یک آزمایش مستقل به دست آمده است که حداقل دو بار برای تأیید نتایج تکرار شده است.

WGP با درمان mAb ضد PD-L1 برای طولانی‌تر کردن بقا در مدل‌های PDAC همکاری می‌کند.

اگرچه کاهش قابل توجهی در بار تومور به دلیل آموزش WGP نشان داده شد، اما این مورد است که همه موش ها تومورهای کشنده ایجاد کردند. مطالعات ما نشان داد که درمان WGP به شدت بر فنوتیپ جمعیت‌های میلوئیدی در پانکراس تأثیر می‌گذارد.

اگرچه ما تشخیص داده بودیم که سلول موثر اصلی مسئول اثرات ضد توموری WGP CCR2 به اضافه مونوسیت/ماکروفاژهای نفوذی هستند، ما استدلال کردیم که این تغییرات ایمنی ممکن است بر TME کلی تأثیر بگذارد به گونه‌ای که سلول‌های ایمنی تطبیقی ​​را پاسخگوتر کند. درمان محاصره ایست بازرسی به طور خاص، از آنجا که ما افزایش نسبت سلول های CD8 به علاوه T موجود در CCR2 به همراه تومورهای مخلوط را مشاهده کرده بودیم (شکل 7c) و همچنین بیان PD-L1 قابل توجهی را در سلول های میلوئیدی موجود در تومورهای KPC مشاهده کرده بودیم (شکل 7f). ما فرض کردیم که درمان WGP ممکن است اثرات درمان ضد PD-L1 mAb را تقویت کند.

برای ارزیابی اینکه آیا درمان ضد PD-L1 با mAb با ایمنی آموزش‌دیده ناشی از WGP در پانکراس هم‌افزایی می‌کند، موش‌های تحت درمان با PBS یا WGP که با تومورهای KCP ارتوتوپی کاشته شده بودند، پس از آن به موش‌های ضد PD-L1 یا mAb کنترل ایزوتیپ IgG2b موش داده شد. همانطور که در چندین کارآزمایی بالینی نشان داده شده است، درمان antiPD-L1 به تنهایی نتوانست بقای خود را حتی فراتر از موش های تحت درمان با ایزوتیپ کنترل کننده IgG2b طولانی کند (شکل 7g). موش‌های WGPtrained به طور قابل‌توجهی بیشتر از موش‌های IgG2b و ضد PD-L1 زنده ماندند. با این حال، ترکیبی از WGP و anti-PD-L1 با هم بقا را طولانی‌تر کرد. این نشان می دهد که ترکیب WGP با درمان محاصره ایمونو بازرسی antiPD-L1 یک مزیت بالینی دارد.

تا کنون، استفاده از WGP در محیطی توصیف شده است که در آن WGP قبل از کاشت سلول های تومور تجویز می شود. با توجه به کاهش اندازه تومور در این مدل، ما همچنین یک مدل بالینی مرتبط‌تر را آزمایش کردیم که در آن موش‌ها با تومورهای KPC ارتوتوپی کاشته شدند و از WGP برای تحریک ایمنی آموزش دیده پس از آن در شکل 7h استفاده شد. در محیط درمانی، هجوم سلول‌های میلوئیدی آموزش‌دیده به پانکراس توسط WGP نیز بقای خود را طولانی‌تر می‌کند. با هم، این داده‌ها نشان می‌دهند که شروع ایمنی آموزش‌دیده در پانکراس با استفاده از WGP کاربردهای بالینی مرتبطی در درمان سرطان پانکراس دارد که به تحقیقات و تحقیقات ترجمه‌ای بیشتر نیاز دارد.

For more information:1950477648nn@gmail.com