مکانیسم Cistanche Deserticola تقویت عملکرد روده

یوان گائو، چوانجی زونگ، فن لیو، لی فانگ، رانلان کای، یوه شی، شی چن، یون چی

خلاصه

فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها(PhGs)، دسته ای از ترکیبات پلی فنلی، یکی از اجزای اصلی فعال زیستی در نظر گرفته می شود.سیستانچدسرتیکولاYC Ma (CD) که عصاره آن به صورت خوراکی در طب سنتی چینی استفاده می شود. اگرچه مطالعات فارماکولوژیک قبلی گزارش داده اند که PhG ها فعالیت های زیادی دارند، پروفایل های انتقال روده آنها مشخص نشده است. در این مطالعه، ما نفوذپذیری روده عصاره غنی از PhG (PRE) را بررسی کردیم.سیستانچدسرتیکولابه عنوان یک سیستم یکپارچه در مدل تک لایه سلولی Caco{0}} با استفاده از یک سیستم سنجش زیستی. نتایج نشان داد که PRE عمدتاً از طریق انتشار غیرفعال با جذب ضعیف به پایین یک گرادیان غلظت بدون جریان منتقل می‌شود، که مبنای فارماکوکینتیکی را برای کاربرد بالینی PhGs درسیستانش دسرتیکولا. ما همچنین نفوذپذیری روده سه ماژور را تعیین کردیمPhGs[اکتئوزید (AC)، ایزواکتئوزید (IS) و اکیناکوزید (EC)]توسط HLPC. علاوه بر این، ما یک روش جدید تشخیص HPLC-fluorescence برای تعیین دقیق مقدار شار AC و IS ایجاد کردیم. همانطور که انتظار می رود، ویژگی های حمل و نقل از سهPhGsمطابق با موارد PRE هستند، که نشان می دهد که سیستم سنجش زیستی موجود برای ارزیابی ویژگی های حمل و نقل گروه های ماده فعال (AIG) در PRE مناسب و قابل اعتماد است. علاوه بر این، این سیستم ممکن است برای سایر عصاره های گیاهی با توجه به زیست فعالی مناسب نیز مناسب باشد.

مخاطب:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساپ: 008618081934791

Cistanche deserticola اثرات زیادی دارد، برای اطلاعات بیشتر اینجا را کلیک کنید

مقدمه

رده سلولی Caco{0}} که از آدنوکارسینوم های کولون انسانی مشتق شده است، ویژگی های انتروسیت مانندی را نشان می دهد. در شرایط عادی، سلول‌های Caco{2}} خود به خود از سلول‌های بالغ متمایز می‌شوند و تک لایه‌های دست نخورده را تشکیل می‌دهند [1]. سلول‌های مجاور از طریق اتصالات محکمی که در سمت آپیکال تک لایه تشکیل شده‌اند، می‌چسبند، که می‌تواند داروهایی را که به طور غیرفعال و فعال در سراسر لایه اپیتلیال منتقل می‌شوند، متمایز کند [2]. به دلیل شباهت مورفولوژیکی و بیوشیمیایی به انتروسیت‌های طبیعی، تک‌لایه‌های سلولی Caco{5}} به عنوان یک مدل آزمایشگاهی پذیرفته‌شده برای مطالعه پتانسیل جذب روده‌ای و ویژگی‌های انتقال داروها عمل می‌کنند [3، 4].

برخلاف مواد شیمیایی، عصاره‌های گیاهی (PE) مخلوط‌هایی هستند که فعالیت بیولوژیکی و ترکیبات فعال آن‌ها اغلب به خوبی شناسایی نمی‌شوند [5]. علاوه بر این، خواص حمل و نقل روده ای پلی اتیلن، بر خلاف خواص اجزای تشکیل دهنده آن، ارتباط نزدیکی با استفاده بالینی دارد. اندازه‌گیری شار برای یک نمونه آزمایشی در یک لایه سلولی Caco معمولاً شامل روش‌های شیمیایی، مانند HPLC، LC/MS، و غیره است. اگرچه این روش‌ها ابزار قدرتمندی هستند، اما پیچیده، زمان‌بر، گران و گاهی اوقات نیاز به تجهیزات پیچیده مهمتر از آن، نه یک جزء واحد و نه یک جزء اقلیت نمی تواند PE را به عنوان یک کل منعکس کند. بنابراین، یک رویکرد جدید مستقل از تعیین اجزای تشکیل دهنده باید برای شناسایی و ارزیابی ویژگی های حمل و نقل PE ایجاد شود.

سیستانچدسرتیکولاYC Ma (CD)، یک گیاه هولوپارازیت، یک طب سنتی رایج چینی است که عمدتاً برای درمان کمبود کلیه، ضعف بدن و یبوست استفاده می شود و این موارد به طور رسمی در فارماکوپه چینی ثبت شده است [6]. گلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی (PhGs)، از جمله اکیناکوزید (EC)، آکتئوزید (AC)، ایزواکتئوزید (IS) و غیره، یک کلاس از ترکیبات پلی فنلی هستند [7]. آنها یکی از اجزای اصلی زیست فعال در نظر گرفته می شوندسیستانچگونه [8]. مطالعات فارماکولوژیک نشان داده است که زیست فعالیPhGsمتنوع است و شامل اثرات آنتی اکسیداتیو [9]، ضد خستگی [10]، محافظت از کبد [11]، تعدیل کننده ایمنی [12]، ضد التهاب [7، 13] و محافظت عصبی [14] می باشد. با این حال، ویژگی های حمل و نقل روده ازPhGsمورد بررسی قرار نگرفته اند. در این مطالعه، نفوذپذیری روده عصاره غنی از PhG (PRE) از CD را به عنوان یک سیستم یکپارچه و نفوذپذیری سه PhG اصلی (AC، IS و EC) در سلول‌های Caco{1}} تمایز یافته بررسی کردیم. نتایج ما نشان داد که PRE در درجه اول از طریق انتشار غیرفعال ضعیف جذب شده به پایین گرادیان غلظت بدون جریان منتقل می‌شود، که مبنای فارماکوکینتیکی را برای کاربرد بالینی PhGs در CD فراهم می‌کند.

مواد و روش ها

مواد

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS and EC (>98 درصد) از شرکت Must Biotechnology (چنگدو، چین) خریداری شد. محیط Eagle اصلاح شده Dulbecco (DMEM)، سرم جنین گاوی (FBS) و اسیدهای آمینه غیر ضروری (NEAA) توسط Gibco BRL (Grand Island، نیویورک، ایالات متحده آمریکا) تولید شد. 6-صفحات چاه TranswellTM (درج سطح رشد غشاء 4.67 سانتی‌متر مربع) از Corning (Costar) Inc. (Tewksbury, MA, USA) تهیه شد. کلاژن دم موش از سیگما آلدریچ (سنت لوئیس، MO، ایالات متحده آمریکا) به دست آمد. تمام معرف ها و مواد شیمیایی برای تجزیه و تحلیل HPLC از درجه تحلیلی بودند.

تهیه PRE از Cistanche deserticola

مواد CD خشک شده در هوا پودر شده و با نفوذ 70 درصد اتانول استخراج شد. بخش غنی از PhG همانطور که قبلاً توضیح داده شد [10] تهیه شد و با الکل n-بوتیل اشباع از آب استخراج شد. مایع عصاره غلیظ و تحت فشار کاهش یافته خشک شد. اسپکتروفتومتری رزین-UV ماکرو متخلخل [15] محتوای PhG 78.4 درصد را اندازه گیری کرد. نمونه نهایی بازدهی 1.75 درصدی مواد خام را بر حسب وزن خشک نشان داد. نمونه به دست آمده در دمای 20- درجه تا استفاده بعدی نگهداری شد.

تعیین AC، IS و EC توسط HPLC

یک سیستم HPLC Shimadzu مجهز به نرم افزار محلول LC ​​برای سنجش محتویات AC، IS و EC در PRE استفاده شد. یک ستون Intersil C18 فاز معکوس (4.6 میلی متر × 250 میلی متر، 5 میکرومتر) استفاده شد و در دمای اتاق نگهداری شد. فازهای متحرک استونیتریل و آب حاوی 0.1 درصد اسید فسفریک (v/v) با شستشوی گرادیان (جدول 1) با سرعت جریان 1.0 میلی لیتر در دقیقه بود. آشکارساز اسپکتروفتومتر UV روی 334 نانومتر تنظیم شد. برای تعیین دقیق شار AC و IS، یک روش جدید تشخیص HPLC-fluorescence (HPLC-FLD) ایجاد کردیم. پس از تجزیه و تحلیل ساختاری و اسکن طول موج فلورسانس (داده‌ها نشان داده نشده است)، ما شرایط بهینه تشخیص فلورسانس را برای AC (مثلاً: 338 نانومتر، Em: 448 نانومتر) و IS (مثل: 320 نانومتر، Em: 434 نانومتر) به دست آوردیم.

روش تحلیلی HPLC با استفاده از ویژگی‌های عملکرد زیر تأیید شد: پایداری، خطی بودن، حساسیت، دقت (تغییرپذیری درون و بین روز)، و دقت. آنالیت های موجود در بافر انتقال در دمای 25 درجه در تاریکی به مدت 24 ساعت نگهداری شدند و پایداری آنها اندازه گیری شد. آنالیت ها در حضور ویتامین C بسیار پایدار بودند ({4}}.4 درصد) زیرا مقادیر انحراف استاندارد نسبی (RSD) در نواحی پیک کمتر از 3.5 درصد بود. معادله رگرسیون خطی، ضریب همبستگی، محدوده خطی، LOD، و LOQ برای AC، IS، و EC در جدول 2 نشان داده شده است. مقادیر نشان می‌دهند که روش‌های HPLC-FLD و HPLC-UV بسیار حساس هستند. مقادیر RSD که دقت روش را بیان می‌کنند همه کمتر از 2 درصد برای تنوع درون و بین روز بودند که نشان‌دهنده دقت خوب است. برای ارزیابی بازیابی، AC، IS و EC به بافر حمل و نقل اضافه شد تا سه سطح غلظت (بالا، متوسط ​​و پایین) بدست آید. مقادیر بازیابی روش برای آنالیت ها در جدول 3 خلاصه شده است. میانگین بازیافت ها از 90.0 درصد تا 96.4 درصد متغیر بود که نشان دهنده دقت خوب است. در نتیجه، روش‌های HPLC تثبیت‌شده با توجه به خطی بودن، حساسیت، دقت و دقت برای تعیین کمیت AC، IS و EC در بافر حمل‌ونقل رضایت‌بخش هستند.

تعیین PRE توسط سیستم سنجش زیستی

سنجش زیستی (ظرفیت آنتی اکسیدانی کل) بر اساس سنجش FRAP (قدرت کاهش دهنده/آنتی اکسیدانی آهن) بود که قبلاً توضیح دادیم [16] و از نظر خطی بودن و دقت (تغییرات درون و بین روز) اعتبارسنجی شد. خطی بودن روش زیست سنجش بر اساس منحنی های کالیبراسیون تعیین شد. محدوده غلظت خطی بودن 0 بود.0625 − 40 ug/ml (y=0.0258x به علاوه 0.0968، R{10}}.996). دقت روش سنجش زیستی تعیین شده از نظر تنوع درون و بین روز برای تجزیه و تحلیل PRE (10.0 ug/ml) تعیین شد. تکرارپذیری درون روزی روش بر اساس پنج تعیین متوالی در همان روز تعیین شد. تکرارپذیری بین روز بر اساس پنج تعیین متوالی در سه روز مختلف اندازه‌گیری شد. مقادیر RSD برای دقت روش به ترتیب 1.014 و 4.72 درصد برای تنوع درون و بین روز بود که نشان دهنده دقت خوب است. بنابراین، روش سنجش زیستی ایجاد شده با توجه به خطی بودن، دقت و دقت برای تعیین کمیت PRE در بافر حمل و نقل رضایت‌بخش است.

کشت سلولی

سلول های کاکو در دمای 37 درجه و رطوبت نسبی 95 درصد در اتمسفر حاوی 5 درصد CO2 و محیطی متشکل از DMEM، 10 درصد FBS، 1 درصد NEAA، 1 درصد ال-گلوتامین، پنی سیلین کشت داده شدند. 100 U/ml) و استرپتومایسین (100 ug/ml). محیط کشت یک روز در میان در طول رشد و تمایز سلولی تغییر می کرد. سلول ها در فلاسک های پلاستیکی 75- سانتی متر مربع رشد کردند و هر ۳ تا ۵ روز یک بار با ۰.۰۵ درصد EDTA-تریپسین برداشت شدند. برای آزمایش‌های انتقال، سلول‌ها با تراکم 105×1 سلول بر سانتی‌متر مربع روی درج‌های Transwell پوشیده شده با کلاژن کاشته شدند. تقریباً 21 روز پس از کاشت، از تک لایه ها برای آزمایش انتقال استفاده شد. یکپارچگی آنها با اندازه گیری مقاومت الکتریکی ترانس اپیتلیال (TEER) در سراسر تک لایه ها با یک EVOM مجهز به ENDOHM-SNAP (World Precision Instruments, Inc., USA) تعیین شد. مقادیر TEER تک لایه سلول Caco{24}} باید از 500 O∙cm2 فراتر رود.

آزمایشات حمل و نقل

تک لایه با بافر حمل و نقل (بافر P حاوی 1{24}} میلی مولار HEPES، 1 میلی مولار پیروات سدیم، 10 میلی مولار گلوکز، 3 میلی مولار کلرید کلسیم و 145 میلی مولار نمک طعام، pH 7.4) شسته شد و سپس به مدت 20 دقیقه پیش انکوبه شد. 37 درجه. پس از حذف بافر حمل و نقل، بافر حمل و نقل تازه حاوی نمونه های آزمایشی به محفظه آپیکال (AP) (1.5 میلی لیتر) در مطالعات جهت AP به سمت قاعده جانبی (BL) یا محفظه BL (2.5 میلی لیتر) در مطالعات جهت BL به AP اضافه شد. برای سنجش AC، IS و EC با استفاده از HPLC، مقدار کمی (300 ul) از هر محفظه گیرنده در فواصل زمانی مختلف (30، 60، 90 و 120 دقیقه) برداشته شد. پس از هر نمونه برداری، محفظه گیرنده با همان حجم بافر انتقال تازه (37 درجه) از قبل گرم شده پر می شد. نمونه های جمع آوری شده برای استفاده بیشتر در دمای 20- درجه نگهداری شدند. برای تعیین PRE با استفاده از سنجش زیستی، تنها نمونه ها در 120 دقیقه برداشت شدند. به دلیل ناپایداری PRE، AC، IS و EC، 0.4 درصد (w/v) ویتامین C برای تثبیت نمونه ها به منظور تعیین محتوای AC، IS و EC توسط HPLC و نمونه ها برای PRE اضافه شد. زیست سنجی بلافاصله پس از نمونه برداری مورد سنجش قرار گرفت. مقدار ضریب نفوذپذیری ظاهری (Papp یا 'Papp) هر نمونه محاسبه شد.

تحلیل داده ها

مقادیر Papp در جهت‌های AP BL یا BLAP AC، IS و EC بر اساس معادله زیر محاسبه شد: Papp {{0}} (4Q/4t)/(AC0)، که در آن Papp ضریب نفوذپذیری ظاهری (cm/s) است که توسط HPLC تعیین می شود. (4Q/4t) میزان ظهور ترکیب آزمایشی (AC، IS، یا EC) در سمت گیرنده (μmol/s) است. A مساحت سطح درج (cm2) است. C0 غلظت اولیه ترکیب آزمایشی در سمت اهداکننده (μmol/ml) است. به طور خاص، واحد جرم "ug" به جای "μmol" در هنگام محاسبه مقادیر Papp استفاده شد. داده ها به صورت میانگین ± SD بیان می شوند.

نتایج

ترکیب اکتئوزید، ایزواکتئوزید و اکیناکوزید در PRE از سیستانش دسرتیکولا

از آنجایی که AC، IS و EC به عنوان PhGهای فعال زیستی اصلی گونه‌های سیستانچ [8] در نظر گرفته می‌شوند، ما محتوای آنها را در PRE از طریق HPLC-UV تجزیه و تحلیل کردیم. کروماتوگرام نماینده در شکل 1 نشان داده شده است. شناسایی این اجزا بر اساس مقایسه زمان ماند و طیف UV با استانداردهای معتبر در طول موج 334 نانومتر بود. محتوای AC، IS و EC در PRE به ترتیب 26.60 درصد، 1.84 درصد و 32.83 درصد بود. بنابراین، این سه ترکیب 61.27 درصد از PRE را تشکیل می دهند. علاوه بر این، نتایج فوق نشان می دهد که محتوای PhG در PRE 78.4 درصد است. بنابراین، AC، IS و EC تقریباً 80 درصد PhGs در PRE را تشکیل می دهند.

ظرفیت کل آنتی اکسیدان PRE، AC، IS و EC

مطالعات مربوط به فعالیت آنتی اکسیدانی PhGs از CD گزارش شده است [9]، و AC، IS و EC تقریباً 80 درصد از PhGها در PRE را تشکیل می دهند. بنابراین، کل ظرفیت های آنتی اکسیدانی PRE، AC، IS و EC مورد سنجش قرار گرفت و با استفاده از مقادیر FRAP (× 10-6 میلی مول) بیان شد. همانطور که در شکل 2 نشان داده شده است، زمانی که مقدار FRAP 8 × 10-6 میلی مول بود، غلظت نهایی PRE، AC، IS و EC 6.20 ug/ml، 3.14 ug/ml، 22.92 ug/ml و 4.89 ug/ml بود. میلی لیتر، به ترتیب، نشان می دهد که ظرفیت آنتی اکسیدانی کل این چهار نمونه به شرح زیر است: AC > EC > PRE > IS. زیست فعالی PRE به گروه های ماده فعال آن (AIG) نسبت داده می شود. تقریباً 60 درصد از PRE، AC و EC فعالیت آنتی اکسیداتیو کل قوی‌تری نسبت به PRE و IS نشان دادند. از آنجایی که IS (1.84 درصد) بخش بسیار کوچکی از PRE را تشکیل می‌دهد، اجزای دیگر، مانند IS ضعیف آنتی اکسیدانی نیز به وضوح در PRE فعال هستند. با کمال تعجب، کل فعالیت آنتی اکسیداتیو تقریباً 7- برابر بین AC و ایزومر IS آن متفاوت است، که نشان می‌دهد نه تنها تعداد گروه‌های هیدروکسیل فنلی [9]، بلکه موقعیت گروه‌های هیدروکسیل فنلی در مولکول نیز بر ضد تأثیر می‌گذارد. -اثر اکسیداتیو

اعتبارسنجی تک لایه‌های Caco-2

برای اعتبارسنجی سیستم تک لایه سلولی Caco-2، مقادیر Papp پروپرانولول (یک نشانگر با انتقال خوب) و زرد لوسیفر (نشانگر با انتقال ضعیف) از AP ​​به BL در سراسر تک لایه‌های Caco-2 به ترتیب 1.51 × 10-5 سانتی متر بر ثانیه و 2.8 × 10-7 سانتی متر بر ثانیه تعیین شد و این مقادیر با مقادیر منتشر شده در گزارش های قبلی مطابقت داشت [17، 18]. سنجش فعالیت آلکالین فسفاتاز همچنین تأیید کرد که تک لایه‌های سلولی Caco از نظر کیفی با اپیتلیوم روده کوچک قابل مقایسه هستند [19]

نفوذپذیری Acteoside، Isoacteoside و Echinacoside

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.{1}} × 10-5 سانتی متر در ثانیه)، در حالی که داروهایی که جذب ضعیفی دارند کم بود< 1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3].="" as="" shown="" in="" table="" 4,="" the="" papp="" values="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" nearly="" on="" the="" order="" of="" 10–7="" cm/s,="" indicating="" that="" these="" compounds="" were="" poorly="" permeable.="" furthermore,="" efflux="" or="" active="" transport="" were="" not="" observed="" because="" the="" ratios="" of="" papp="" bl="" to="" ap="" papp="" ap="" to="" bl="" for="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" between="" 0.90="" ~="" 1.55,="" and="" the="" criterion="" of="" net="" efflux="" proposed="" by="" the="" fda="" guidance="" is="" a="" ratio="" less="" than="" 2="" [20].="" based="" on="" the="" kinetic="" curves="" presented="" in="" fig.="" 3,="" the="" bidirectional="" transport="" percentages="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" at="" 200="" μm="" increased="" linearly="" with="" time.="" the="" transport="" rate="" (tr)="" values="" of="" the="" three="" compounds="" increased="" linearly="" in="" both="" directions="" between="" approximately="" 100="" and="" 300="" μm="" (fig.="" 4).="" these="" results="" indicate="" that="" the="" main="" transport="" mechanism="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" is="" also="" passive="">

نفوذپذیری PRE

نتایج فوق نشان می دهد که ظرفیت آنتی اکسیدانی کل PRE حداقل به دلیل 61.27 درصد AIG از PRE است. بنابراین، ما TR PRE را بر اساس منحنی غلظت اثر ظرفیت آنتی اکسیدانی کل آن ارزیابی کردیم و مقادیر Papp را به منظور منعکس کردن ویژگی‌های حمل و نقل PRE محاسبه کردیم. مقادیر PRE PRE برای AP!BL و BL!AP (2.16 ± 0.26) × 10-7 سانتی‌متر بر ثانیه و (3.13 ± 0.29) × 10-7 سانتی‌متر/ بود. s به ترتیب نشان می دهد که این ترکیب نفوذپذیری ضعیفی دارد. علاوه بر این، جریان یا حمل و نقل فعال مشهود نبود زیرا نسبت "Papp BL به AP / "Papp AP به BL برای PRE 1.45 بود [20]. علاوه بر این، TR دو طرفه PRE به صورت خطی بین تقریباً 300 و 900 ug/ml افزایش یافت (شکل 5). عدم ترجیح جهت نتایج نشان می دهد که انتشار غیرفعال مکانیسم اصلی انتقال PRE است.

بحث

در مقایسه با محصولات دارویی با خالص‌سازی بالا، PE عموماً مخلوطی است که از صدها ماده تشکیل‌دهنده با ویژگی‌های فیزیکوشیمیایی بسیار متفاوت تشکیل شده است. بنابراین، PE به دلیل AIG پیچیده [21] خود، عمل هم افزایی سیستماتیک، چند هدفی و چند کاناله را اعمال می کند که مانع از تجزیه و تحلیل ویژگی های حمل و نقل PE می شود. برای ارزیابی علمی تر خواص انتقال پلی اتیلن، برخی از محققان چندین جزء را به جای یک جزء واحد، در PE شناسایی کرده اند [22-24]. با این وجود، تعداد محدودی از اجزای تشکیل دهنده نمی توانند PE را به عنوان یک کل منعکس کنند. با این حال، تعیین تمام اجزاء در PE غیرممکن است. علاوه بر این، اگر اجزای مختلف در پلی اتیلن ویژگی های حمل و نقل کاملاً متفاوتی را نشان دهند، شناسایی ویژگی های حمل و نقل کل نگر دشوار خواهد بود.

در دهه 1990، از سیستم های سنجش زیستی برای ارزیابی TR عوامل ضد میکروبی استفاده شد [25]. تا سال 2005، اگوچی و همکارانش [26] فعالیت ضد اکسیداتیو عصاره هویج را با استفاده از محیط‌های BL از سلول‌های Caco{5}} تمایز یافته ارزیابی کردند. این رویکرد برای انعکاس شرایط in vivo مناسب تر است.

بر اساس گزارش قبلی از فعالیت PhGs [9] و نتایج ما (شکل 2)، TR AIG در PRE را می توان با تعیین ظرفیت آنتی اکسیدانی کل محیط در محفظه گیرنده ارزیابی کرد. پس از آزمایش‌های حمل و نقل، متوجه شدیم که TR PRE در هر دو جهت مشابه بود، و این انتقال غیراشباع و جذب ضعیفی داشت ('Papp < ​​1.{3}}="" ×="" 10-6="" سانتی‌متر="" بر="" ثانیه)="" [3]،="" و="" این="" جریان="" را="" نشان="" نمی="" دهد،="" و="" نشان="" می="" دهد="" که="" انتشار="" غیرفعال="" در="" شیب="" غلظت="" مکانیسم="" اصلی="" انتقال="" pre="" است="" (شکل="" 5).="" علاوه="" بر="" این،="" ویژگی‌های="" انتقال="" pre="" با="" ویژگی‌های="" ac،="" is="" و="" ec،="" اجزای="" مؤثری="" که="" فعالیت="" ضد="" اکسیداتیو="" را="" در="" pre="" نشان="" می‌دهند،="" مطابقت="" دارد="" (شکل="" 4="" و="" جدول="" 4).="" این="" نتیجه="" مورد="" انتظار="" بود="" و="" نشان="" داد="" که="" سیستم="" سنجش="" زیستی="" موجود="" برای="" ارزیابی="" ویژگی‌های="" انتقال="" aig="" در="" pre="" در="" سلول‌های="" کاکو{11}}="" متمایز="" مناسب="" و="" قابل="" اعتماد="">

برخلاف مقدار متعارف Papp، که معمولاً برای منعکس کردن انتقال یک ترکیب استفاده می‌شود، مقدار Papp به‌دست‌آمده از TR بر اساس منحنی اثر غلظت نه تنها ممکن است منعکس‌کننده اجزایی باشد که در تک لایه‌ها با ساختاری دست نخورده نفوذ می‌کنند، بلکه همچنین شامل سایر عوامل مرتبط با فعالیت هدف، مانند متابولیت های اجزاء، محصولات شیمیایی تجزیه شده، و حتی برخی از سیتوکین های ترشح شده از سلول های Caco{1}} در پاسخ به تحریک است که می تواند بر زیست فعالی هدف تأثیر بگذارد. بنابراین، چند عامل ذکر شده در بالا، به جای اجزای دست نخورده منتقل شده، مقدار "Papp" را تعیین می کند. بنابراین، «Papp ممکن است در موقعیت‌های Vivo قوی‌تر از مقدار متعارف Papp [26] مرتبط باشد. در این مطالعه، ماهیت انتشار غیرفعال و جذب ضعیف PRE را بر اساس مقدار Papp آن روشن کردیم و این ماهیت ممکن است مربوط به دوز بالا و دوره درمان بالینی طولانی CD باشد [27]. با این وجود، این یافته‌ها راهنمایی سیستماتیک‌تری را برای پزشکان در کاربرد CD ارائه می‌کنند، زمانی که تنها ویژگی‌های انتقال بیشتر AIG در CD، نه تنها PhGs، شناسایی شده باشد.

با این حال، آیتم زیست فعالی انتخاب شده باید به اندازه کافی حساس باشد تا در محیط محفظه گیرنده شناسایی شود، که چالشی را برای ایجاد یک سیستم سنجش زیستی برای ارزیابی ویژگی های حمل و نقل PE ایجاد می کند. علاوه بر این، زیست فعالی نیز باید به اجزای بسیاری که ممکن است بستگی داشته باشد. در مطالعه ما، سنجش ظرفیت آنتی اکسیدانی کل مناسب تر از چندین روش دیگر بود (شکل S1). اما با این وجود، سنجش ما فقط می تواند TR PRE را در 120 دقیقه تشخیص دهد.

در مجموع، مطالعه حاضر یک سیستم زیست سنجش جدید را برای ارزیابی نفوذپذیری روده ای PRE در سلول های Caco{0}} تمایز یافته ایجاد کرد. نتایج به‌دست‌آمده نشان داد که انتشار غیرفعال با جذب ضعیف در شیب غلظت بدون جریان، مکانیسم اصلی انتقال PRE است (شکل 5)، که مبنای فارماکوکینتیک را برای کاربرد بالینی PhGs در CD فراهم می‌کند. استفاده از یک سیستم سنجش زیستی جدید برای ارزیابی TR و در نتیجه محاسبه مقادیر Papp برای ارزیابی خاصیت حمل و نقل روده ای AIG در PE به وضوح امکان پذیر است. این رویکرد همچنین ممکن است برای سایر پلی اتیلن با توجه به زیست فعالی مناسب مناسب باشد

اطلاعات پشتیبانی

S1 شکل. اثرات PRE بر (A) آنیون سوپراکسید، (B) رادیکال هیدروکسیل، (C) محصول پراکسیداسیون لیپیدی، و (D) رادیکال DPPH. روش های سنجش طبق گزارش های قبلی [1، 2] بدون استفاده از بافر حمل و نقل انجام شد. مقادیر IC50 (50 درصد غلظت مهار) و SC50 (50 درصد غلظت مهار) بر اساس منحنی‌های استاندارد غلظت-پاسخ محاسبه شدند. (DOCX)

مشارکت های نویسنده

ایده و طراحی آزمایش ها: YG XC YQ. آزمایش‌ها را انجام داد: YG CZ FL LF RC YS. تجزیه و تحلیل داده ها: CZ YG YQ. معرف ها/مواد/ابزارهای آنالیز کمکی: RC. مقاله را نوشت: YG YQ

گروه مرکز تحقیقات فارماکولوژی و سم شناسی، موسسه توسعه گیاهان دارویی، آکادمی علوم پزشکی چین و کالج پزشکی اتحادیه پکن، پکن، روابط عمومی چین،

دانشگاه پزشکی چینی هیلونگجیانگ، هاربین، هیلونگجیانگ، روابط عمومی چین