نقش ماکروفاژ کلیه، AIM و بیان TGF-b1 در پیشرفت فیبروز کلیه در بیماران IgAN

برای اطلاعات بیشتر. مخاطبtina.xiang@wecistanche.com

هدف، واقعگرایانه: برای تجزیه و تحلیل بیان ماکروفاژها، AlM، و TGF- 1 در کلیه بیماران LgAN، و کشف نقش ماکروفاژها، AlM، و TGF- 1 در پیشرفت فیبروز کلیه در بیماران lgAN .

مواد و روش ها: نمونه های پارافینی بافت کلیه از 40 بیمار lgAN به عنوان گروه مشاهده انتخاب شدند. در همان زمان، نمونه‌های پارافینی از بافت نرمال کلیه از 11 بیمار تحت درمان نفرکتومی به عنوان گروه کنترل طبیعی انتخاب شدند. ما توزیع ماکروفاژها و بیان AlM و TGF{2}} را با رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمی و/یا ایمونوفلورسانس مشاهده کردیم.

نتیجهتعداد ماکروفاژهای MO، M1 و M2 در بیماران lgAN افزایش می یابد. ماکروفاژهای M0 عمدتاً به سمت ماکروفاژهای M2 پلاریزه می‌شوند. بیان AlM و TGF{4}} در بیماران LgAN به طور قابل توجهی بیشتر از NC بود. ماکروفاژ M2، AlM و TGF- 1 با کراتینین سرم و پروتئینوری {7}ساعتی همبستگی مثبت داشتند اما با eGFR همبستگی منفی داشتند. ماکروفاژهای M2، AlM و TGF{9}} با ناحیه فیبروتیک همبستگی مثبت داشتند.

نتیجه: ماکروفاژهای M2، AlM و TGF نقش مهمی در روند فیبروز lgAN ایفا می‌کنند و این سه بر یکدیگر تأثیر می‌گذارند.

کلید واژه ها: IgAN، فیبروز کلیه، ماکروفاژ، AlM، TGF- 1

با لینک سیستانچ از کجا بخرید و تاثیر سیستانچ را بشناسید 

مقدمه

نفروپاتی IgA (IgAN) یک گلومرولونفریت ایمنی سیستمیک شایع است که با رسوب کمپلکس های ایمنی مبتنی بر IgA یا IgA در ناحیه مزانژیال با تکثیر سلول های مزانژیال و گسترش ماتریکس مزانژیال مشخص می شود (1،2). اگرچه IgAN به کندی پیشرفت می کند، تا 50 درصد از بیماران تا مرحله پایانی پیشرفت می کنند و این نوع اصلی است که باعث ESRD (3) می شود.فیبروز کلیهمسیر رایج در پیشرفت استبیماری مزمن کلیوی(CKD) (4). در سال‌های اخیر، مشخص شده است که ماکروفاژها، مهارکننده آپوپتوز ماکروفاژها (AIM)، و فاکتور رشد تبدیل‌کننده- 1(TGF- 1) همگی نقش مهمی در فیبروز کلیه دارند.

ماکروفاژها در ایجاد بسیاری از بیماری های کلیوی نقش دارند. برخی از محققان معتقدند که رسوب ماکروفاژها در کلیه می تواند به عنوان یک شاخص مهم برای قضاوت در مورد توسعه و پیش آگهی بیماری های کلیوی استفاده شود. ماکروفاژها به انواع M0، M1 و M2 تقسیم می شوند(5). ماکروفاژهای Ml نوع پاسخ التهابی را ترویج می‌کنند و باکتری‌ها یا سلول‌های تومور را با ترشح عوامل التهابی مانند IL-1، IL-6، IL-12، TNF-، گونه‌های اکسیژن فعال (ROS)، حذف می‌کنند. و نه. با این حال، اگر التهاب ادامه یابد، بیشتر گسترش می یابد و در نهایت منجر به فیبروز بافتی می شود (6). ماکروفاژهای M2 با بیان آرژیناز 1 (Argl)، پروتئین 3 شبه کیتیناز (Yml) و فاکتور میتوژنیک ناشی از هیپوکسی (HIMF) برای مقاومت در برابر تحریک میکروارگانیسم‌های بیماری‌زا و آلرژن‌ها، ماکروفاژهای M2 پاسخ التهابی را محدود می‌کنند و سازگاری نوع I را محدود می‌کنند.مصونیتاز بین بردن باقیمانده ها، ترویج رگ زایی، ایفای نقش ضد التهابی، کاهش آپوپتوز سلولی، ترویج تکثیر سلولی و ترویج ترمیم بافت (7،8). اینکه دقیقا چه نوع ماکروفاژی در فیبروز کلیوی IgAN نقش عمده ای دارد، هنوز بحث برانگیز است. . مطالعات نشان داد که CD68 و CD80 می توانند به عنوان نشانگرهای سطحی ویژه ماکروفاژهای MO و M1 استفاده شوند (9). CD163 یک گیرنده مانوز بسیار اختصاصی است که در ماکروفاژهای M2 بیان می شود، که در ماکروفاژهای M1 بیان نمی شود. بنابراین CD68، CD80، و CD163 می توانند به عنوان نشانگر برای نشان دادن حضور انواع مختلف ماکروفاژها (10-12) استفاده شوند.

علاوه بر این، AIM در ابتدا به عنوان یک پروتئین ترشح شده از ماکروفاژها کشف شد و بنابراین اسپا نام گرفت (13). بعداً به دلیل یافتن اثر ضد آپوپتوتیک آن روی گلبول‌های سفید خون (14)، یا CD5L بر اساس نام‌گذاری سازمان ژنوم انسانی، AIM نامگذاری شد. AIM طیف گسترده ای از عملکردها را دارد و نقش مهمی در تنظیم تعادل مهاجرت لکوسیت ها، متابولیسم والتهابیواکنش. بسیاری از ادبیات اشاره کرده اند که AIM در پاسخ التهابی ایمنی (15)، هموستاز چربی، غیر الکلی نقش دارد.بیماری کبد(16)، بیماری خود ایمنی، آترواسکلروز (17)، و سایر بیماری ها. در سال های اخیر، مطالعات متعددی در مورد نقش AIM در بیماری کلیوی انجام شده است. به عنوان مثال، تاداشی اورامت و همکاران. (18) در مدل موش مستعد پرفشاری خون مشاهده شد که کاهش بیان AIM و oxLDL (لیپوپروتئین با چگالی کم اکسید شده، که اثر تنظیم کردن بیان AIM را دارد) می تواند به طور موثر فیبروز بافت کلیه را کاهش دهد. به طور مشابه، مگومی اوشیما و همکاران. (19) دریافتند که سطح AIM و رسوب ماکروفاژها در بافت کلیه با شدت پروتئینوری و کاهش eGFR در بیماران مبتلا به CKD همبستگی مثبت دارد. تمام مطالعات فوق نشان می دهد که AIM همچنین نقش مهمی در روند فیبروز کلیه ایفا می کند. با این حال، نتایج معکوس در حال حاضر وجود دارد: در مدل آسیب حاد کلیه مشخص شده است که AIM می‌تواند حذف بقایای سلول آپوپتوز توسط سلول‌های اپیتلیال لوله‌ای کلیوی را ترویج کند (20).

در حال حاضر، مطالعات زیادی در مورد نقش ماکروفاژها، AIM، و TGF{0}} در بیماری کلیوی توضیح داده شده است، اما مطالعات کمی در مورد نقش این سه در پیشرفت IgAN، فرآیند فیبروز و ارتباط بین آنها وجود دارد. سه. اگر بتوان پاتوژنز پیشرفت فیبروز IgAN را روشن کرد، ممکن است دریچه جدیدی برای درمان و پیش آگهی IgAN باز شود. برای بررسی نقش ماکروفاژها، AIM و TGF{1}} در پیشرفت فیبروز IgAN، نفوذ ماکروفاژها در بافت‌های کلیوی بیماران IgAN و سطح بیان و ویژگی‌های AIM و TGF- 1 و سپس رابطه بین سه شاخص مرتبط با بالینی و ناحیه فیبروز کلیه بیماران IgAN مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.

مواد و روش ها

فاعل، موضوع

چهل بیمار مبتلا به IgAN تایید شده از طریق بیوپسی کلیه از بیمارستان Subei People انتخاب شدند. بیماران مبتلا به بیماری های سیستمیک مزمن (لوپوس اریتماتوز سیستمیک، دیابت شیرین، پورپورای هنوخ شونلین، سیروز کبدی و غیره) (درمان گلوکوکورتیکوئید، سرکوب سیستم ایمنی، ACEI، ARB، و غیره)، یا نارسایی پیشرفته کلیوی (میزان گلومری تخمین زده شده) eGFR) کمتر یا مساوی 15ml/min/1.73m2) حذف شد. سطوح eGFR با استفاده از معادله اصلاح رژیم غذایی در بیماری کلیوی (MDRD) محاسبه شد. اطلاعات بالینی (جنس، سن، وزن، سابقه بیماری) و داده های آزمایشگاهی ( آلبومین سرم، کراتینین سرم، گلبول قرمز ادرار، پروتئین ادراری 24 ساعته و سطح eGFR در زمان بیوپسی جمع‌آوری شد و بافت‌های کلیوی طبیعی که در مجاورت تومورهای کلیوی تشریح شده بودند به عنوان شاهد استفاده شد (n=11). از کلیه آزمودنی ها رضایت کتبی و آگاهانه اخذ شد و مطالعه مورد تایید کمیته اخلاق بیمارستان مردمی سوبی قرار گرفت.

رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس و ایمونوهیستوشیمی

مقاطع بافت کلیه انسان با رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمی و ایمونوفلورسانس مورد بررسی قرار گرفت. رنگ آمیزی ماسون بر روی تمام مقاطع بافت کلیه انسان انجام شد. برش ها پارافین زدایی و با دی اکسید هیدروژن 3 درصد تیمار شدند. پس از بازیابی آنتی ژن و مسدود کردن، بخش ها یک شبه با آنتی بادی CD68 انسانی (رقیق شده 1:600، Abcam)، آنتی بادی CD80 انسانی (رقیق شده 1:600، Abcam)، آنتی بادی CD163 انسانی (رقیق شده 1:600، Abcam)، AIM انسانی انکوبه شدند. آنتی بادی (رقیق شده 1:150، Abcam) یا آنتی بادی TGF{12}} انسانی (رقیق شده 1:500، Abcam). پس از درمان با آنتی بادی ثانویه کونژوگه با بیوتین نشاندار شده با پراکسیداز ترب کوهی (رقیق شده 1:200، بیوتکنولوژی بیوسنتز، چین) و رنگ‌آمیزی DAB (ZSGB-Bio، چین)، بخش‌ها زیر میکروسکوپ مشاهده شدند. 10 فیلد به طور تصادفی انتخاب شده (400×) در هر بخش تصویربرداری شد. بیان ماکروفاژها در گلومرول ها و لوله ها با استفاده از نرم افزار Image-Pro Plus Image Analysis (Meyer Instruments, Inc., Houston, TX, USA) اندازه گیری شد. بیان AIM و TGF{23}} در گلومرول‌ها به همین روش اندازه‌گیری شد. چگالی نوری یکپارچه (IOD) برای هر تصویر توسط دو متخصص آسیب شناسی به طور مستقل اندازه گیری شد. سپس میانگین IOD/منطقه رنگ‌آمیزی مثبت (AIOD) محاسبه شد. سطح بیان ماکروفاژها، AIM و TGF{24} در نمونه‌برداری‌های کلیوی IgAN و بیوپسی‌های کلیه طبیعی با محاسبه AIOD مقایسه شد. هسته ها با DAPI در دمای اتاق به مدت 5 دقیقه رنگ آمیزی شدند. تصاویر مقاطع نشاندار شده با فلورسنت با استفاده از میکروسکوپ فلورسنت (ZEISS، Axioimager.Z2) به دست آمد.

رنگ آمیزی ماسون برای ارزیابی فیبروز

ناحیه فیبروز سبز بود و درصد فضای سبز را در ناحیه میدان بینایی محاسبه کردیم تا درجه فیبروز را منعکس کنیم. سه میدان بزرگ‌نمایی بالا به‌طور تصادفی برای هر بخش انتخاب شد (همه نمونه‌ها تحت شرایط یکسان عکس‌برداری شدند)، و از کشتی‌های بزرگ اجتناب کردند. IPP6. برای تجزیه و تحلیل آماری نسبت مساحت ناحیه فیبروز از سیستم تجزیه و تحلیل تصویر{2}} استفاده شد (همه نمونه ها به یک روش آنالیز شدند).

تحلیل های آماری

تجزیه و تحلیل آماری با استفاده از SPSS 22 انجام شد.{1}}. داده ها به صورت میانگین ± انحراف معیار یا به عنوان میانه (محدوده) بیان شد. تفاوت‌های معنی‌دار با استفاده از آزمون آنالیز واریانس یک طرفه یا ANOVA ارزیابی شد. یک آزمون ناپارامتریک Mann-Whitney U برای مقایسه چگالی نوری یکپارچه بین گروه‌های آزمایشی انجام شد. یک P دو دم<0.05 was="" considered="" statistically="">

نتایج

توزیع ماکروفاژها در ایمونوفلورسانس کلیه و ایمونوهیستوشیمی (شکل های 1،2) نشان داد که ماکروفاژها در گروه IgAN عمدتاً در ناحیه بینابینی توبولار کلیوی و گاهی در شبکه مویرگی گلومرولی و لومن های توبولی کلیوی توزیع نشده بودند، در حالی که در ماکروفاژها نرمال نبودند. بافت کلیه

علاوه بر این، تعداد ماکروفاژهای M{{0}}، Ml و M2 در بینابینی کلیه IgAN متفاوت بود و قطبش M0 به سمت M2 بیشتر بود (P<0.05, figure="">

بیان AIM، TGF- 1 در بافت کلیه در گروه IgAN، AIM عمدتاً در حلقه‌های مویرگی گلومرولی و سلول‌های اپیتلیال لوله‌های کلیوی و همچنین در لومن توبولار کلیه بیان می‌شود. TGF{1}} عمدتاً در سلول‌های اپیتلیال لوله‌ای کلیه و همچنین در بینابینی کلیه بیان می‌شود. با این حال، بیان AIM و TGF{2}} در بافت‌های طبیعی کلیه نادر بود یا وجود نداشت (شکل‌های 4،5).

بیان ماکروفاژها، AlM، TGF- 1 با تظاهرات بالینی lgAN

The infiltration of MO and M1 macrophages in the renal tissue of the IgAN group was not significantly correlated with age, sex, urinary red blood cell count,24-hour proteinuria, and eGFR (P>{{0}}.05). تعداد انفیلتراسیون ماکروفاژهای M2 با کراتینین سرم و 24-پروتئینوری ساعتی همبستگی مثبت داشت (r=0.447, P{6}}.004; r=0.436, P{ {10}}.005)، و همبستگی منفی با eGFR(r=-0.332, P{14}}.004) (شکل 6).24-ساعت پروتئین ادرار، کراتینین سرم و eGFR با AIM و TGF{18}} همبستگی داشت که در بین آنها 24-ساعت پروتئین ادرار و کراتینین سرم با AIM و TGF{20}} همبستگی مثبت داشت، در حالی که eGFR با AIM و TGF-B1 همبستگی منفی داشت. (میز 1). از آنجایی که ارتباط معنی داری بین ماکروفاژهای M0 و M1 و شاخص های بالینی وجود نداشت، داده های بعدی فقط ماکروفاژهای M2 را شمارش کردند. تجزیه و تحلیل آماری بیشتر نشان داد که بیان ماکروفاژهای M2، AIM و TGF-B1 در انواع پاتولوژیک متفاوت بوده و بین ماکروفاژهای M2، AIM و TGF همبستگی وجود دارد (جدول 2).

همبستگی ماکروفاژهای M2، AlM، TGF{1}} و ناحیه فیبروتیک

تجزیه و تحلیل آماری همبستگی بین ناحیه فیبروتیک و ماکروفاژهای نوع M، AIM و TGF{1}} در بافت بیماران IgAN نشان داد که ماکروفاژهای M2 با ناحیه فیبروتیک همبستگی مثبت دارند (شکل 7، r {4}}.777، ص<0.01);aim was="" positively="" correlated="" with="" the="" fibrotic="" area(figure="" 8,r="0.768,"><0.01); tgf-β1="" was="" positively="" correlated="" with="" the="" fibrotic="" area="" (figure="" 9,="" r="0.853,"><>

بحث

IgAN شایع ترین گلومرولونفریت اولیه است و تقریباً 40 درصد از بیماران در طی 20-30 سال به مرحله نهایی بیماری کلیوی (ESRD) مبتلا می شوند (21). فیبروز کلیه یک فرآیند ضروری برای همه CKD برای تبدیل شدن به ESRD است. تظاهرات پاتولوژیک تشکیل تعداد زیادی فیبروبلاست و میوفیبروبلاست و تجمع تعداد زیادی ماتریکس خارج سلولی است که منجر به گلومرولواسکلروز و فیبروز بینابینی توبولار کلیوی می شود. در نهایت، عملکرد کلیه به دلیل از دست دادن تعداد زیادی نفرون طبیعی از بین می رود (4). در حال حاضر فیبروز کلیه عمدتاً به چهار مرحله تقسیم می شود: 1. فعال شدن سلول های اپیتلیال لوله های کلیوی و نفوذ مونوسیت ها / ماکروفاژها به دلیل التهاب. 2. آزادسازی سیتوکین ها، فاکتورهای رشد و سایر فاکتورهای فیبروژنیک. تشکیل فیبروز عمدتاً در رسوب پروتئین های ماتریکس آشکار شده است. 4. رسوب ماتریکس خارج سلولی (ECM)، مرحله اصلی اختلال ساختاری و عملکردی کلیه است (کاهش قابل توجه نفرون های موثر و کاهش بیشتر میزان فیلتراسیون گلومرولی).

سلول های بنیادی میلوئید به مونوسیت ها تمایز می یابند و از مغز استخوان وارد گردش خون می شوند. مونوسیت های موجود در گردش خون تحت محرک های مختلف مانند التهاب و ضربه به بافت ها نفوذ می کنند و سپس به ماکروفاژها تمایز می یابند. ماکروفاژها سلول های ناهمگن در سیستم ایمنی طبیعی هستند که می توانند فنوتیپ های خود را به صورت دینامیکی تنظیم کنند تا با ریزمحیط محلی سازگار شوند. مونوسیت‌های موجود در گردش خون که توسط سیگنال‌های التهابی هدایت می‌شوند، وارد کلیه می‌شوند و به سلول‌های اندوتلیال عروقی متصل می‌شوند و همزمان باعث آزاد شدن کموکاین‌ها و عوامل التهابی مزمن می‌شوند. این منجر به تجمع موضعی گسترده مونوسیت ها در بینابینی کلیه می شود که از طریق مسیرهای مختلف به ماکروفاژهای فعال کلاسیک (M1) یا ماکروفاژهای فعال انتخابی (M2) متمایز می شوند. در ابتدا، پاتوژن‌ها و سلول‌های نکروزه گیرنده‌های Toll مانند و دیگر گیرنده‌های ایمنی ذاتی را فعال می‌کنند و پلاریزاسیون ماکروفاژهای M0 را به ماکروفاژهای M1 ارتقا می‌دهند. ماکروفاژهای M1 در مراحل اولیه آسیب کلیه از طریق غشای پایه رسوب می‌کنند و باعث ایجاد یک سری پاسخ‌های التهابی می‌شوند و منجر به آسیب بیشتر کلیه می‌شوند. با ایجاد آسیب، سلول‌های آپوپتوز و نکروز که توسط ماکروفاژها فاگوسیتوز می‌شوند، و همچنین تولید بعدی عوامل ضدالتهابی، قطبش ماکروفاژها به سمت ماکروفاژهای M2 را افزایش می‌دهند. ماکروفاژهای M2 عمدتاً نقش ضد التهابی، ترویج ترمیم کلیه و ایجاد فیبروز را ایفا می‌کنند (6،{11}}). بنابراین، تعادل دینامیکی ماکروفاژهای M1 و M2 نشان‌دهنده روند التهاب و ترمیم بافت است که پیش‌آگهی کلیه‌ها را تعیین می‌کند و تلاش‌ها را برای درمان‌هایی که ماکروفاژها را هدف قرار می‌دهند، هدایت می‌کند.

در این مطالعه، بافت پاتولوژیک کلیه بیمارانی که IgAN تشخیص داده شده بودند و پلاریزاسیون ماکروفاژهای مختلف را مشاهده کردند، انتخاب کردیم. ما CD68 را برای نشان دادن M0، CD80 را برای نشان دادن M1 و CD163 را برای نشان دادن M2 انتخاب کردیم. نتایج ما نشان داد که تعداد ماکروفاژهای M0(CD68*)، ماکروفاژهای M1(CD80*) و ماکروفاژهای M2(CD163*) به ترتیب به طور قابل توجهی در مقایسه با کلیه طبیعی افزایش یافته است، که نشان می دهد نفوذ نسبتاً واضحی از ماکروفاژها در کلیه وجود دارد. بافت های کلیوی بیماران lgAN

It was not only found that the infiltration of macrophages in the renal tissue of IgAN patients increased significantly, but also found that there were differences in the number of M0, Ml, and M2 macrophages in the interstitium of lgAN patients, with more polarization of M0 towards M2. In other words, the infiltration of M2 macrophages is mainly found in the renal tissue of IgAN patients. There was a positive correlation between M2 macrophages and fibrotic area; The distribution of M0 and M1 macrophages in the lgAN group had no significant correlation with age, sex, urinary red blood cell count, 24-hour proteinuria, and eGFR(P>0.05)؛ با این حال، تعداد انفیلتراسیون ماکروفاژ M2 با کراتینین سرم و پروتئینوری ساعتی 24- همبستگی مثبت دارد. ثابت شده است که ماکروفاژهای M2 نقش مهمتری در پیشرفت فیبروز IgAN دارند.

AIM همچنین در بسیاری از بیماری ها مانند تصلب شرایین، بیماری کبد غیر الکلی (16)، مقاومت به انسولین (27)، بیماری های خود ایمنی و غیره نقش مهمی دارد. در عین حال، AIM ارتباط نزدیکی با فیبروز کلیه دارد. Megumi Oshima و همکاران (19) بافت کلیه را از 43 بیمار بیوپسی کلیه گرفتند و دریافتند که سطح رسوب AIM و ماکروفاژها با شدت پروتئینوری و کاهش eGFR در بیماران همبستگی مثبت دارد. این نشان داد که AIM ممکن است آسیب کلیوی را تشدید کند. Tadashi Uramat و همکاران (18) با استفاده از مدل تمایل به فشار خون خود به خودی (SHRsp) در موش فشار خون شدید و آسیب کلیوی را ایجاد کردند. پس از درمان فشار خون بالا با داروهای مرتبط، مشخص شد که تعداد ماکروفاژهای نفوذ کننده به گلومرول ها و بینابینی به طور قابل توجهی کاهش یافته است. در مقایسه با گروه کنترل، بیان AIM و oxLDL به طور قابل توجهی کاهش یافت. همچنین میزان فیبروز در بافت کلیه کمتر از گروه درمان نشده بود.

در مطالعه ما، تفاوت معنی‌داری در بیان AIM در هر درجه پاتولوژیک وجود داشت و بیان آن با ماکروفاژهای M2، TGF{1}} و درجه فیبروز کلیه همبستگی مثبت معنی‌داری داشت. این آزمایش و شرایط فوق همگی نشان می‌دهند که AIM با فرآیند فیبروز کلیوی CKD مرتبط است، که ممکن است به اثر ضد آپوپتوز AIM بر ماکروفاژها مرتبط باشد و سپس سیگنال‌های التهابی مداوم باعث پیشرفت بیشتر فیبروز می‌شوند. Takako Tomita و همکاران (28) سلولهای نکروزه را از موشهای مبتلا به پریتونیت ناشی از پلی ساکاریدهای مخمر در شرایط آزمایشگاهی استخراج کردند و دریافتند که AIM می تواند فاگوسیتوز ماکروفاژهای Ml و M2a را به سلولهای نکروزه ارتقا دهد. همچنین در مدل IgAN و مدل آسیب حاد کلیوی ایسکمی-پرفیوژن مجدد (IRI) مشخص شد که AIM می‌تواند پاکسازی سلول‌های IgAl و آپوپتوز را که باعث نفریت توسط ماکروفاژها می‌شوند، افزایش دهد. از مطالعات فوق، مشخص شد که AIM مانند ماکروفاژها ممکن است در مراحل مختلف بیماری نقش های متفاوتی داشته باشد، در حالی که نقش AIM در بیماری کلیوی ممکن است مشابه ماکروفاژها باشد.

در مدل CKD ناشی از IRI، ماکروفاژهای M2 ارتباط نزدیکی با روند فیبروز کلیه دارند که عمدتاً توسط ترشح TGF ایجاد می‌شود (29). TGF{3}} متعلق به ابرخانواده TGF است و نقش مهمی در ایجاد CKD (30) دارد. تمایز میوفیبروبلاست اپیتلیال لوله ای (TEMT) نیز مکانیسم مهم فیبروز بینابینی کلیه است و TGF{6}} یک سیتوکین مهم تنظیم کننده TEMT است (31). با استفاده از آنتی بادی‌های خنثی‌سازی TGF، مهارکننده‌ها، حذف ژن و سایر روش‌های مصرف TGF{9}}، می‌توان درجه فیبروز کلیه را به طور موثر کاهش داد (32). تاکنون، مکانیسم‌های TGF{11}} که باعث فیبروز کلیه می‌شود، عمدتاً شامل موارد زیر است: 1. القای سنتز ماتریکس خارج سلولی، مانند کلاژن I و فیبرونکتین (33). 2. متالوپروتئیناز ماتریکس (MMPs) و بازدارنده بافتی متالوپروتئیناز (TIMPs) از تعادل خارج شده اند، بنابراین تخریب ماتریکس خارج سلولی را کاهش می دهد. تقویت تکثیر سلول های مزانژیال و ترشح کلاژن و آسیب به سلول های اپیتلیال و پودوسیت، در نتیجه التهاب و فیبروز بافتی بیشتر را ترویج می کند (34). افزایش تمایز و تکثیر میوفیبروبلاست‌ها از منابع مختلف (مانند پری‌سیت‌ها، سلول‌های اپیتلیال، سلول‌های اندوتلیال، فیبروبلاست‌ها، ماکروفاژها و غیره) و در نتیجه میانجی‌گری در ایجاد فیبروز (35). مطالعات قبلی مشاهده کرده اند که بیان mRNA و پروتئین TGF-B1 در IgAN و درجه نفوذ ماکروفاژهای M2 در بافت کلیه در مقایسه با بافت طبیعی کلیه به طور قابل توجهی افزایش یافته است (31)، TGF{23}} با ماکروفاژهای M2 بیان می شود. در بافت بیوپسی کلیه فشار خون بالا ناشی از CKD. همه اینها نشان می دهد که ماکروفاژهای M2 ممکن است از طریق TGF در فیبروز کلیه نقش داشته باشند{27}}.

در این آزمایش متوجه شدیم که با افزایش درجه پاتولوژیک، نفوذ ماکروفاژ M2 و میزان بیان AIM و TGF- 1 نیز افزایش می‌یابد. بین گروه های مختلف پاتولوژیک تفاوت معنی داری وجود داشت. هر سه مورد ارتباط نزدیک با 24-پروتئین ادرار ساعتی، کراتینین سرم، eGFR و سایر شاخص‌های بالینی بیماران IgAN داشتند و همبستگی مثبت معنی‌داری بین این سه و ناحیه فیبروز کلیه وجود داشت که نشان می‌دهد M2 ماکروفاژها، AIM و TGF-B1 همگی در بروز و توسعه lgAN دخیل بودند و ارتباط نزدیکی با فرآیند فیبروز IgAN داشتند. نتایج این آزمایش با مطالعه براگا و همکارانش مطابقت داشت. (36،37)، که نشان داد ماکروفاژهای M2 در فیبروز کلیوی انسداد یک طرفه حالب (UUO) در مسیر سیگنالینگ MyD88 نقش دارند. در مقابل، مطالعات نشان داده اند که ماکروفاژها نقش ضدقهرمانی در مرحله بهبودی نفروپاتی انسدادی دارند. نیشیدا و همکاران (38) نشان داد که گیرنده آنژیوتانسین II نوع 1 (Agtr1) روی ماکروفاژهای بینابینی برای کاهش فیبروز کلیه در مرحله بعدی UUO عمل می کند. Lopez-Guisa و همکاران (39) تأیید کردند که ماکروفاژها از طریق فعال کردن مسیر گردش کلاژن لیزوزومی با بیان گیرنده مانوز 2 (Mrc2) در UUO، نقش کاهش دهنده فیبروز را نشان می دهند.

ماکروفاژهای M2، AIM و TGF نقش مهمی در روند فیبروز IgAN ایفا می‌کنند و این سه بر یکدیگر تأثیر می‌گذارند. با این حال، با توجه به حجم نمونه کوچک این آزمایش و مکانیسم تعامل و ارتباط بین این سه، تأیید بیشتر آزمایش‌های حیوانی مربوطه مورد نیاز خواهد بود.