مطالعه برش های سیستانچ دسرتیکولا و محصول فرآوری شده با بخار شراب از سیستانچ دسرتیکولا

تفاوت اجزای شیمیایی و فعالیت های بیولوژیکی برش های محصولات خام و محصول فرآوری شده با بخار شراب از سیستانچ

مخاطب: emily.li@wecistanche.com

یینگ ژانگ، 1،2 یوئو وانگ، 3 سونگ یانگ، 1 یونفنگ شیائو، 3 هایبین گوان، 2 شین یو، 2 شیائوکین وانگ، 2 و شیانگری لی 1

خلاصه

به عنوان یک داروی گیاهی شناخته شده چینی،Cistanche deserticolaهزاران سال است که برای درمان سندرم کمبود کلیه در چین استفاده می شود. هر دو محصول خام ازبرش های سیستانچ دسرتیکولا(RCD) و آنمحصول فرآوری شده با بخار شراب(WSCD) از نظر بالینی برای اثرات مختلف استفاده می شود. در این مطالعه تأثیرات فرآیند بخارپز با شراب (SPW) ازCistanche deserticolaبر روی ترکیبات شیمیایی و اثرات بیولوژیکی مورد بررسی قرار گرفت. تجزیه و تحلیل اجزای اصلی (PCA) و تجزیه و تحلیل کمی برای مطالعه تفاوت در ترکیبات شیمیایی استفاده شد. اثرات تغذیه کلیه ها نیز برای مقایسه تفاوت بین RCD مورد بررسی قرار گرفت.برش های سیستانچ دسرتیکولا)و WSCD (محصول فرآوری شده با بخار شراب). نتایج PCA نشان داد که جداسازی آشکار در RCD به دست آمد(برش های سیستانچ دسرتیکولا)و WSCD (محصول فرآوری شده با بخار شراب). نتایج تجزیه و تحلیل کمی نشان داد که WSCD دارای مقادیر بیشتری پلی ساکارید کل، PhGs کل، ایزواکتئوزید و اسمانتوزید B نسبت به RCD است.(برش های سیستانچ دسرتیکولا)، در حالی که محتوای 2'-acetylakteoside و acteoside پس از SPW کاهش یافت. مقایسه RCD و WSCD بر روی فعالیت‌های بیولوژیکی نشان داد که هر دو می‌توانند سطح هورمون جنسی را در مدل کمبود کلیه یانگ بازگردانند و اثر آنتی‌اکسیدانی را بهبود بخشند. WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)در افزایش وزن احشایی بسیار بهتر بودکلیهو کیسه منی نتایج نشان داد که SPW اجزای شیمیایی خود را تغییر داده و فعالیت های بیولوژیکی آن را افزایش می دهد.

1. مقدمه

Cistanche deserticolaیک طب سنتی رایج چینی است و به طور کلی به عنوان یک مقوی در چین و ژاپن برای سال های زیادی استفاده می شود که معمولا به عنوان "جین سینگ صحرا" شناخته می شود.Cistanche deserticolaبرای اولین بار در حدود 100 سال قبل از میلاد به عنوان درجه برتر در "شنونگ کلاسیک گیاهی ماتریا مدیکا (شن نونگ بن کائو جینگ)" ثبت شد و برای درمان بیماری های مختلف از جمله کمبود کلیه، ناتوانی جنسی، ناباروری زنان، لکوره مرضی، متروراژی فراوان (سفیدها) استفاده شد. احساس سرما در کمر و زانو و یبوست مزمن در سالمندان [1]. تاکنون چندین ترکیب اصلی مانند پلی ساکاریدها [2، 3]، گلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی (PhGs) [1، 4]، ایریدوئیدها [1] و لیگنانوئیدها [1، 5] جدا شده اند. در میان آنها، PhGs و پلی ساکاریدها به عنوان اجزای اصلی فعال بیولوژیکی در آنها نشان داده شده استCistanche deserticola[6-9]. آزمایش‌های دارویی مدرن ثابت کرده‌اند که Cistanche deserticola می‌تواند تولید تستوسترون را افزایش دهد و از اسپرم محافظت کند، تکثیر سلولی را تحریک کند و نرخ بقای سلولی را افزایش دهد، فعالیت‌های مشخصی را برای قدرت جنسی، بهبود حافظه، ضد پیری، مهار رادیکال‌های آزاد و محافظت عصبی نشان دهد [10]. -13].

به منظور کاهش سمیت و/یا افزایش اثرات، بیشتر گیاهان سنتی چینی باید قبل از تجویز فرآوری شوند. مراحل فرآیند سنتی شامل تمیز کردن، فرآیند آب (آسیاب کردن در آب، بخار پز و برشته کردن) و فرآیند آتش (هم زدن با شراب، سرکه، نمک یا عسل) است [14]. در طول فرآیند، اجزای شیمیایی ممکن است تغییر کنند: محتویات نسبی اجزای خاص ممکن است تغییر کند یا اجزای جدیدی تشکیل شوند [15]. فرآیندCistanche deserticolaسابقه طولانی دارد وCistanche deserticolaباید با خیساندن در شراب برنج، بخارپز کردن همانطور که در فارماکوپیا چینی (نسخه 2015) توضیح داده شده است، پردازش شود [16]. بر اساس نظریه طب سنتی چینی (TCM) ثابت شده است که SPW بر اثرات آنها بر مریدین کلیه تأثیر می گذارد [17]. WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)برای اولین بار در "رساله لی گونگ در تهیه و جوشاندن ماتریا مدیکا (لی گونگ پائو ژی لون)" در سلسله های شمالی و جنوبی چین مستند شده است. WSCD بهتر است برای درمان کمبودهای کلیه و محافظت از مایع منی استفاده شود، همانطور که در "Taiping Shenghui Fang" در سلسله سونگ چین ثبت شده است. با این حال، هیچ مطالعه مقایسه ای در مورد اجزای شیمیایی بین RCD وجود نداشت(برش های سیستانچ دسرتیکولا)و WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)تا حالا.

تحقیقات فارماکولوژیک مدرن نشان داده‌اند که WSCD می‌تواند با تحریک محور هیپوتالاموس-هیپوفیز-گناد با درجات مختلف، کلیه را برای ایمن سازی جوهر تقویت کند و برای درمان کمبود کلیه مانند کمبود کلیه یانگ استفاده می‌شود [18]. با این حال، تا به حال، تفاوت در فعالیت های بیولوژیکی بین RCD(برش های سیستانچ دسرتیکولا)و WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)مورد تحقیق قرار نگرفته اند. اخیراً، برای تسهیل تحقیقات تجربی، مدل حیوانی با کمبود کلیه یانگ با تزریق دوز بالای هیدروکورتیزون به موش‌ها تکرار شده است، که در آن موش‌ها علائمی بسیار شبیه به آنچه در کمبود کلیه یانگ TCM توضیح داده شده است نشان می‌دهند [19، 20] . موش‌های مبتلا به کمبود کلیه یانگ همیشه دارای علائمی مانند کاهش وزن، کاهش مصرف غذا، ضعف، افزایش مصرف آب و کاهش فعالیت هستند. بر اساس این مدل حیوانی، تفاوت‌های اثرات تغذیه‌کننده کلیه بین RCD و WSCD شناسایی شد و حتی ماهیت علمی فرآیند سنتی چینی را آشکار کرد.

Cistanche deserticola عملکردهای زیادی دارد

2. مواد و روشها

2.1. مواد و مواد شیمیایی

ماده استاندارد مانند اکتئوزید، ایزواکتئوزید، اکیناکوزید، سیستانوزید A، و 2'- استیلاکتئوزید از Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd (شانگهای، چین) خریداری شد. سیستانوزید F، سیستانوزید C، اسمانتوزید B، و توبولوزید B از Chengdu Pfeide Biotechnology Co. Ltd (چنگدو، چین) خریداری شدند. خلوص تمام استانداردها کمتر از 98 درصد نبود. متانول و استونیتریل درجه HPLC از شرکت علاءالدین شیمی (شانگهای، چین) خریداری شد. آب دیونیزه شده با استفاده از سیستم آب معرف MilliQ50 SP (بدفورد، MA، ایالات متحده آمریکا) برای تهیه نمونه ها و محلول های متحرک به دست آمد. تمام حلال‌های آلی دیگر مورد استفاده در این مطالعه از درجه تحلیلی بودند و از Shanghai Chemical Co. Ltd (شانگهای، چین) خریداری شدند.

2.2. مجموعه نمونه

همه خامCistanche deserticola(7 دسته نمونه) توسط دانشگاه پزشکی مغولستان داخلی از استان های مغولستان داخلی و نینگشیا جمع آوری شد. همه به عنوان شناسایی شدندcistanche deserticolaYC Ma توسط Xiao-qin Wang، استاد گروه فارماکوگنوزی در دانشگاه پزشکی مغولستان داخلی. یک نمونه کوپن در دانشکده داروسازی، دانشگاه پزشکی مغولستان داخلی سپرده شد. پس از جمع آوری، گل آذین ازCistanche deserticolaساقه ها بریده شدند و در دمای اتاق با هوا خشک شدند و سپس برش ها به طور تصادفی به دو گروه در هر دسته تقسیم شدند: یکی RCD است.(برش های سیستانچ دسرتیکولا)و دیگری برای تهیه WSCD استفاده می شود(محصول فرآوری شده با بخار شراب).

WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)در آزمایشگاه بر اساس داروسازی چینی (نسخه 2015) [16] تهیه شدند، به این معنی که RCD برش خورده(برش های سیستانچ دسرتیکولا)در شراب برنج با ظرف دربسته به مدت 6 ساعت تا زمانی که نرم شوند خیسانده شدند، 12 ساعت دیگر در حمام آب بخار داده شدند تا سطح آن سیاه شود و در دمای اتاق با هوا خشک شد.

2.3. تجزیه و تحلیل اجزای اصلی (PCA)

تجزیه و تحلیل مؤلفه اصلی (PCA) یک تکنیک پیچیده است که به طور گسترده برای کاهش ابعاد مسائل چند متغیره استفاده می شود. با توضیح همبستگی بین تعداد زیادی از متغیرها بر حسب تعداد کمتری از عوامل اساسی بدون از دست دادن اطلاعات قابل توجه، ابعاد مجموعه داده های اصلی را کاهش می دهد. در این مطالعه تفاوت بین RCD(برش های سیستانچ دسرتیکولا)و WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)توسط PCA بدون نظارت و با استفاده از نرم افزار SIMCA 13.{1}} بر اساس نواحی پیک نسبی در کروماتوگرافی HPLC انجام شد. با کمک PCA، تأثیرات اصلی مواد شیمیایی بر طبقه‌بندی در بین نمونه‌های مختلف پیدا شد.

2.4. آماده سازی نمونه

2.4.1. آماده سازی عصاره برای حیوانات

RCD(برش های سیستانچ دسرتیکولا)و WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)از نمونه‌های جمع‌آوری‌شده و مطابق شرح در بخش 2.2 انتخاب شدند.

RCD در هوا خشک و برش داده شده است(برش های سیستانچ دسرتیکولا)توسط یک پودر کننده (FW135، Tianjin Taisite Instrument Co., Ltd.) پودر شد، وزن دقیق آن 1.{2}} کیلوگرم بود و به مدت 30 دقیقه در اتانول 50 درصد خیسانده شد و نسبت گیاه به اتانول استفاده شده 1/ بود. 10 (وزن / وزن) سپس دو بار به مدت 1 ساعت تحت رفلاکس استخراج شد. دو عصاره با هم ترکیب و فیلتر شدند و اتانول تحت فشار کاهش یافته در دمای 60 درجه بازیابی شد. کل عصاره خام PhGs در خلاء در دمای 60 درجه سانتیگراد خشک و با رزین ماکرو متخلخل خالص شد. در نهایت عصاره PhGs RCD به دست آمد و به دقت وزن شد.

عصاره PhGs WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)با همان روش بالا به دست آمد.

رسوبات حاصل از استخراج PhG ها در هوا خشک شده و دو بار به مدت 1.5 ساعت هر بار با 20 بار آب جوشانده شدند. این دو عصاره با هم ترکیب شدند و به مدت 10 دقیقه با دور 4000 سانتریفیوژ شدند و مایع رویی غلیظ و با اتانول 95 درصد رسوب داده شد. پس از سانتریفیوژ، رسوب در خلاء در دمای 60 درجه خشک شد. در نهایت، عصاره پلی ساکارید RCD(برش های سیستانچ دسرتیکولا)به دست آمد و به طور دقیق وزن شد.

عصاره پلی ساکارید WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)با همان روش بالا به دست آمد.

PhG ها و عصاره های پلی ساکارید RCD(برش های سیستانچ دسرتیکولا)و WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)هنگامی که موش ها به صورت خوراکی تحت درمان قرار گرفتند، به ترتیب سوسپانسیون ها در آب مخلوط شدند.

2.4.2. آماده سازی نمونه برای تعیین PhGs

عصاره‌های PhGs در بخش 2.4.1 با دقت 0.15 گرم وزن شدند و با فراصوت با 50 میلی‌لیتر محلول متانول آبی 50 درصد به مدت 40 دقیقه استخراج شدند. پس از سرد شدن، کاهش وزن با متانول 50 درصد جبران شد. تمام نمونه ها و حلال ها قبل از تجزیه و تحلیل از طریق یک غشای 0.45 میکرومتر فیلتر شدند. محتوای چهار PhG در RCD(برش های سیستانچ دسرتیکولا)و WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)با استفاده از HPLC تعیین شد و PhGs کل با استفاده از اسپکتروفتومتری UV تعیین شد.

2.4.3. آماده سازی نمونه برای تعیین پلی ساکارید

عصاره های پلی ساکارید در بخش 2.4.1 با دقت 0.1{7}} گرم وزن شدند و با استفاده از فراصوت با 50 میلی لیتر آب داغ به مدت 40 دقیقه استخراج شدند. پس از خنک شدن، کاهش وزن با آب دوباره پر شد. تمام نمونه ها و حلال ها قبل از تجزیه و تحلیل از طریق یک غشای 0.45 میکرومتر فیلتر شدند.

2.5. شرایط کروماتوگرافی HPLC و تعیین چهار PhG

جداسازی کروماتوگرافی در یک سیستم HPLC UltiMate 300{{4{43}}} (Thermo Fisher Scientific، ایالات متحده آمریکا)، مجهز به یک پمپ گرادیان دوگانه، یک محفظه ستون انجام شد. و یک آشکارساز DAD. داده ها با استفاده از سیستم داده کروماتوگرافی ChromeLeon جمع آوری و پردازش شدند. نمونه‌ها بر روی یک Agilent Zorbax SB-C18 (25{45}}mm×4.6 میلی‌متر، 5 میکرومتر) با یک ستون محافظ C18 (4.6mm×12.5 میلی‌متر، 5 میکرومتر) جدا شدند. فاز متحرک شامل استونیتریل (A) و محلول اسید فسفریک 0.1 درصد (B) با سرعت جریان 1 میلی لیتر در دقیقه است. شستشوی گرادیان به شرح زیر است: 0-13 دقیقه اولیه، تغییر خطی از AB (5:95، v/v) تا AB (15:85، v/v)؛ 13-25 دقیقه، تغییر خطی به AB (20:80، v/v). 25-43 دقیقه، تغییر خطی به AB (25:75، v/v). طول موج آشکارساز در 330 نانومتر مانیتور شد. دمای ستون روی 30 درجه تنظیم شد و حجم نمونه تزریقی 10 میکرولیتر بود [21]. محلول استوک حاوی چهار استاندارد مرجع با حل کردن استانداردهای مرجع در متانول 50 درصد تا غلظت نهایی 0.20 میلی‌گرم در میلی‌لیتر برای 2-استیلاکتئوزید، 0.20 میلی‌گرم در میلی‌لیتر برای آکتئوزید، 0.05 میلی‌گرم در میلی‌لیتر برای اسمانتوزید B، تهیه شد. و 0.10 میلی گرم در میلی لیتر برای ایزواکتئوزید. سپس محلول به پنج غلظت مختلف با سه تکرار رقیق شد تا منحنی های کالیبراسیون ایجاد شود. محتوای نمونه بر حسب گرم بر کیلوگرم وزن خام بیان شد.

مطالعه برش‌های سیستانچ دسرتیکولا و محصول فرآوری شده با بخار شراب از سیستانچ دسرتیکولا

2.6. تعیین کل PhGs

مجموع PhGها با استفاده از روش اسپکتروفتومتری UV در طول موج 330 نانومتر در اسپکتروفتومتر UV1000 (شانگهای Tianmei Scientific Instrument Co., Ltd.) تعیین شد. محلول استوک با حل کردن استانداردهای اکیناکوزید در متانول 50 درصد تا غلظت نهایی 0.10 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر تهیه شد و سپس در پنج غلظت مختلف با سه تکرار رقیق شد تا منحنی‌های کالیبراسیون ایجاد شود.

2.7. تعیین پلی ساکاریدها

تعیین پلی ساکاریدها با استفاده از روش فنل-سولفوریک اسید انجام شد. 1 میلی لیتر از محلول نمونه در یک لوله آزمایش 20 میلی لیتری با درپوش شیشه ای قرار داده شد و 1 میلی لیتر محلول فنل 6 درصد و 5 میلی لیتر اسید سولفوریک غلیظ به آن اضافه شد و به مدت 5 دقیقه تکان داده شد. مخلوط به مدت 10 دقیقه به حمام آب در حال جوش منتقل شد و برای تشخیص اشعه ماوراء بنفش به دمای اتاق خنک شد. جذب اشعه ماوراء بنفش در طول موج 480 نانومتر در دستگاه اسپکتروفتومتر UV1000 بررسی شد. استاندارد مرجع D-گلوکز بی آب با دقت وزن شده و در آب مقطر تا غلظت نهایی 0.10 میلی گرم در میلی لیتر حل شد. سپس محلول به پنج غلظت مختلف با سه تکرار رقیق شد تا منحنی های کالیبراسیون ایجاد شود.

2.8. آزمایش های حیوانی

2.8.1. حیوانات و مسکن

موش‌های صحرایی نر بالغ جنسی ({0}} گرم) از مزرعه حیوانات آزمایشی Xinglong (پکن) (سن: 6 هفته) خریداری شدند و مجوز حیوان آزمایشگاهی SCXK (Jing):2016-0003 بود. تمام روش های حیوانی توسط کمیته تحقیقات حیوانات دانشگاه پزشکی مغولستان داخلی تایید شد و طبق دستورالعمل های موسسه ملی بهداشت در مورد اصول مراقبت از حیوانات (2004) انجام شد. همه حیوانات در یک سیستم مانع با دمای تنظیم شده 21-23 درجه و رطوبت نسبی 40-65 درصد و در یک چرخه تاریکی/روشنایی 12 ساعته نگهداری شدند. به موش‌ها آب و غذای آزاد داده شد و به مدت یک هفته با محیط فوق سازگار شدند.

2.8.2. دوز و نمونه برداری

موش‌ها به قفس‌های متابولیک منفرد منتقل و به‌طور تصادفی به 6 گروه ({1}} در هر گروه) تقسیم شدند. به آنها تزریق عضلانی 15 میلی گرم بر کیلوگرم هیدروکورتیزون سدیم سوکسینات (خریداری شده از شرکت دارویی تیانجین بیوشیمیایی، تیانجین، چین) به مدت 2 هفته به جز گروه 1 که با حجم مساوی از سالین فیزیولوژیکی تزریق شد، داده شد. در روز چهاردهم، وزن بدن، مصرف غذا، مصرف آب، حجم ادرار و فعالیت خود به خودی در عرض 5 دقیقه جمع‌آوری شد تا اطمینان حاصل شود که آیا مدل کمبود کلیه یانگ با موفقیت ساخته شده است یا خیر. از روز پانزدهم، 6 گروه به شرح زیر تحت درمان قرار گرفتند: گروه 1 و گروه 2 (گروه مدل، M) با حجم مساوی از آب مقطر تیمار شدند، گروه 3 (عصاره PhGs RCD).(برش های سیستانچ دسرتیکولا)گروه، PR) با 0.42 گرم بر کیلوگرم عصاره PhGs RCD تیمار شدند که برابر با 8/1 گرم بر کیلوگرم خام بود.Cistanche deserticolaو سایر گروه ها همان گروه 4 بودند (عصاره PhGs WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)گروه، PW) با دوز 0.49 گرم بر کیلوگرم عصاره PhGs WSCD تحت درمان قرار گرفتند.(محصول فرآوری شده با بخار شراب)گروه 5 (عصاره پلی ساکارید RCD(برش های سیستانچ دسرتیکولا)گروه، SR) با 0 تیمار شدند. 18 گرم بر کیلوگرم عصاره پلی ساکارید RCD، و گروه 6 (عصاره پلی ساکارید WSCD)(محصول فرآوری شده با بخار شراب)گروه، SW) با دوز 0.22 گرم بر کیلوگرم عصاره پلی ساکارید WSCD تحت درمان قرار گرفتند. همه موش‌ها روزانه با پرفیوژن معده تحت درمان قرار گرفتند. پس از درمان یک ماهه، موش‌ها به مدت 12 ساعت قبل از خونگیری از غذا محروم شدند. روز بعد، تمام موش‌ها بیهوش و قربانی شدند. در طول آزمایش، موش‌ها هفته‌ای یک‌بار برای تنظیم دوز وزن شدند و قبل از قربانی شدن دوباره وزن شدند. نمونه های خون در یک لوله اپندورف با محلول EDTA{4}}سدیم 10 درصد جمع آوری شد. سرم از طریق سانتریفیوژ با دور 2000 به مدت 15 دقیقه جدا شد و برای استفاده بیشتر در درجه -80 نگهداری شد. علاوه بر این، کلیه ها، بیضه ها، اپیدیدیم، غده پروستات و کیسه منی برداشته و به سرعت وزن شدند. پس از توزین، بیضه ها برای تعیین SOD و MDA در نیتروژن مایع منجمد شدند.

2.9. تجزیه و تحلیل اثر هورمونی و آنتی اکسیدانی

سطح تستوسترون (T) و استرادیول (E2) در مرکز بازرسی کیفیت Qingdao Kechuang با روش ایمنی رادیویی و رنگ سنجی تعیین شد. بیضه های یخ زده وزن شده و با 20 بار نمک فیزیولوژیک سرد (W/W) مخلوط شدند. هموژن بیضه به دست آمده توسط هموژن بافت در حمام یخ برای به دست آوردن مایع رویی سانتریفیوژ شد. محتویات SOD و MDA بیضه با کیت های SOD و MDA طبق دستورالعمل تعیین شد.

2.10. تحلیل آماری

معنی‌داری تفاوت‌ها بین گروه‌ها از طریق آزمون ANOVA یک‌طرفه و سپس آزمون شفه با حد معناداری 0 مقایسه شد.05 با استفاده از نرم‌افزار SPSS 25.0. تمام داده ها به صورت میانگین ± انحراف معیار (SD) (n=3) بیان شد.

3. نتایج

3.1. تجزیه و تحلیل تغییرات PhGs پس از SPW با استفاده از PCA

برای مقایسه تغییرات PhGs پس از SPW، 9 پیک کروماتوگرافی به عنوان پیک مشخصه انتخاب و شناسایی شدند. ساختار آنها در شکل 1 نشان داده شده است که نواحی اوج نسبی آن برای بیان کمی محاسبه شده است. کروماتوگرام HPLC همانطور که در شکل 2 نشان داده شده است، نشان می دهد که محتوای نسبی PhGهای اصلی در طول SPW تغییر کرده است. تجزیه و تحلیل PCA در نواحی پیک نسبی 9 جزء برای تمایز نمونه‌های مختلف به‌دست آمد. RCD(برش های سیستانچ دسرتیکولا)و WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)در نمودار نمرات از یکدیگر دور بودند (شکل 3(a))، که نشان می دهد نمونه ها به دو خوشه طبقه بندی شده اند. بنابراین اعتقاد بر این است که محتویات ترکیبات شیمیایی متفاوت بوده است. برای یافتن بیشتر نشانگرهای شیمیایی بالقوه برای تمایز، یک تجزیه و تحلیل آماری گسترده برای تولید نمودار Bi بارگذاری انجام شد (شکل 3(b)). پیک‌های 2، 3، 4، 6 و 7 پس از SPW کاهش می‌یابند در حالی که پیک‌های 5، 8 و 9 افزایش می‌یابند و همه آنها مهمترین مؤلفه‌های تشخیص RCD بودند.(برش های سیستانچ دسرتیکولا)و WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب). محتوای نسبی پیک 1 بعد از SPW تغییر چندانی ندارد.

شکل 1 ساختارهای شیمیایی PhGs درCistanche deserticolaYC Ma.

شکل 2 کروماتوگرام HPLC ماده استاندارد (a)، RCD(برش های سیستانچ دسرتیکولا)(ب) و WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)(ج). قله ها: (1) سیستانوزید F، (2) اکیناکوزید، (3) سیستانوزید A، (4) اکتئوزید، (5) ایزواکتئوزید، (6) سیستانوزید C، (7) 2'-استیلاکتئوزید، (8) اسمانتوزید B، و (9) توبولوزید B.

شکل 3 نمودار امتیاز PCA (الف) و بارگذاری نمودار Bi (b) RCD(برش های سیستانچ دسرتیکولا)(دایره سبز) و WSCD (دایره قرمز). RCD و WSCD به دو خوشه طبقه بندی شدند. قله های 2، 3، 4، 6 و 7 مهمترین اجزای تشخیص RCD و WSCD هستند که در طول SPW کاهش می یابد. پیک های 5، 8 و 9 نیز مهمترین اجزای تفاوت بین RCD و WSCD هستند.(محصول فرآوری شده با بخار شراب)، که در طول SPW افزایش خواهد یافت.

3.2. محتوای پلی ساکاریدهای کل و PhGs پس از SPW تغییر کرد

همانطور که در شکل 3 (ب) نشان داده شده است، 8 مولفه (5، 8، و 9 افزایش و 2، 3، 4، 6 و 7 کاهش یافته است) به طور قابل توجهی تغییر کرده و تأثیر عمده ای بر خوشه بندی نمونه داشته است. در این میان، ایزواکتئوزید و Osmanthuside B بیشترین افزایش را داشتند در حالی که 2'-acetylakteoside و acteoside بیشترین کاهش را داشتند. بنابراین، محتویات ایزواکتئوزید، Osmanthuside B، 2'-acetylakteoside، و اکتئوزید توسط HPLC تعیین شد. همانطور که در شکل 1 نشان داده شده است، پیک 4 اکتئوزید، پیک 5 ایزواکتئوزید، پیک 7 2'-استیلاکتئوزید و پیک 8 اوسمانتوزید B بود. کل PhG در RCD بود.(برش های سیستانچ دسرتیکولا)و WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)با استفاده از روش UV تعیین شد و پلی ساکاریدهای کل با استفاده از روش فنل-سولفوریک اسید انجام شد، نتایج در جدول 1 نشان داده شده است، ایزواکتئوزید، Osmanthuside B، پلی ساکارید کل و PhGs در WSCD نسبت به RCD به طور قابل توجهی افزایش یافته است. 2'-acetylakteoside و acteoside به طور قابل توجهی کاهش یافته بود.

جدول 1 محتویات پلی ساکاریدها و PhGs در RCD(برش های سیستانچ دسرتیکولا)و WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)(mg/g) (n=3).

توجه داشته باشید. تفاوت های قابل توجه با RCD(برش های سیستانچ دسرتیکولا)به عنوان *p < 0.05 تعیین شدند.

3.3. مدل کمبود کلیه یانگ ناشی از هیدروکورتیزون ساخته شد

در مقایسه با گروه نرمال، پس از تزریق عضلانی 2 هفته ای 15 میلی گرم بر کیلوگرم هیدروکورتیزون سوکسینات سدیم، وزن بدن، مصرف غذا و فعالیت خودبه خودی به طور معنی داری کاهش یافت (P<0.05) and="" the="" water="" intake="" and="" urine="" volume="" were="" increased;="" the="" results="" were="" shown="" in="" table="" 2.="" the="" t="" and="" e2="" levels="" in="" the="" serum="" of="" the="" model="" group="" were="" lower="" than="" the="" normal="" group="" as="" shown="" in="" figure="" 4.="" from="" the="" above,="" the="" kidney-yang="" deficiency="" model="" was="" successfully="">

جدول 2 شاخص ها پس از تزریق عضلانی هیدروکورتیزون سدیم سوکسینات تغییر کردند، (n=10).

توجه داشته باشید. تفاوت معنی داری با گروه N به عنوان تعیین شد^# p<>

شکل 4 سطوح T و E2: (الف) سطح T و (ب) سطح E2. تفاوت معنی داری با گروه M به عنوان تعیین شد^∗p < 0.05.="" تفاوت="" معنی="" داری="" با="" گروه="" n="" به="" عنوان="" تعیین="">^#p < 0.05.

3.4. تأثیر عصاره ها بر میانگین وزن و شاخص احشاء

تمام موش ها و احشاء آنها وزن و سپس میانگین شاخص احشایی محاسبه شد.

در مقایسه با گروه N، گروه M وزن احشاء کلیه، وزیکول منی، اپیدیدیم و بیضه را به طور قابل توجهی کاهش داده بود، که همچنین نشان داد که مدل کمبود کلیه یانگ ناشی از هیدروکورتیزون با موفقیت ساخته شده است. در مقایسه با گروه M، وزن تمام احشاء مشاهده شده در گروه PW و SR افزایش یافته بود، گروه PR وزن بیضه، اپیدیدیم، وزیکول منی و غده پروستات را افزایش داد و گروه SW وزن کلیه، بیضه، اپیدیدیم را افزایش داد. و کیسه منی در مقایسه با گروه‌های PR، گروه PW در کلیه، وزیکول منی و غده پروستات بهتر بود. تفاوت معنی داری بین گروه SR و SW در وزن بیضه، اپیدیدیم، وزیکول منی و غده پروستات وجود نداشت. نتایج در جدول 3 نشان داده شده است.

جدول 3 وزن احشاء (g) (n=10).

توجه داشته باشید. تفاوت معنی داری با گروه M به عنوان تعیین شد^∗p < 0.05.="" تفاوت="" معنی="" داری="" با="" گروه="" n="" به="" عنوان="" تعیین="">^#p < 0.05.

در مقایسه با گروه N، شاخص احشایی کلیه، بیضه، اپیدیدیم و وزیکول منی در گروه M کاهش یافت. در مقایسه با گروه M، گروه PW و SR شاخص کلیه، بیضه، غده پروستات و وزیکول منی را افزایش داده بودند، گروه‌های PR شاخص بیضه، غده پروستات و کیسه منی را افزایش دادند و گروه SW افزایش شاخص کلیه، بیضه و کیسه منی. در مقایسه با گروه‌های PR، گروه PW در کلیه، وزیکول منی و غده پروستات بهتر بود. گروه SW و SR شاخص مشابهی از کلیه، بیضه، وزیکول منی و اپیدیدیم داشتند. نتایج در جدول 4 نشان داده شده است.

جدول 4 میانگین شاخص احشایی (g/100g) (n=10).

توجه داشته باشید. تفاوت معنی داری با گروه M به عنوان تعیین شد^∗p < 0.05.="" تفاوت="" معنی="" داری="" با="" گروه="" n="" به="" عنوان="" تعیین="">^#p < 0.05.

3.5. تاثیر عصاره بر سطح هورمون (T و )

همانطور که در شکل 4 نشان داده شده است، در مقایسه با گروه M، سطوح T و E2 در تمام گروه های درمان (گروه PW، PR، SW و SR) به طور قابل توجهی افزایش یافته بود (P<0.05). however,="" the="" pw="" group="" was="" better="" than="" the="" pr="" group="" at="" levels="" t="" and="" e2.="" the="" sr="" and="" sw="" groups="" had="" no="" significant="">

3.6. تاثیر عصاره ها بر اثر آنتی اکسیدانی

SOD یک آنزیم آنتی اکسیدانی مهم است. MDA محصول پراکسیداسیون لیپیدی است که نشانگر میزان آسیب اکسیدان است. محتویات SOD و MDA نشان دهنده میزان توانایی اکسیدانی و آنتی اکسیدانی است. همانطور که در شکل 5 نشان داده شده است، در مقایسه با گروه M، اثر آنتی اکسیدانی در تمام گروه های تیمار (PW، PR، SW و SR) افزایش یافته است. گروه SW بزرگترین را داشتآنتی اکسیداناثر

شکل 5 محتویات MDA و SOD: (الف) محتوای MDA و (ب) محتوای SOD. تفاوت معنی داری با گروه M به عنوان تعیین شد^∗p< 0.05.="" significant="" differences="" with="" the="" n="" group="" were="" designated="" as=""><>

4. بحث

قبل از کاربرد بالینی، مواد خام باید تحت تکنیک های فرآیند سنتی چینی قرار گیرند. بخارپز کردن یکی از روش‌های فرآوری سنتی برای برخی گیاهان دارویی چینی است که باعث ایجاد رنگ سیاه ناشی از واکنش میلارد [22] می‌شود و مقدار برخی از اجزای فعال زیستی [23] و فعالیت‌های دارویی را افزایش می‌دهد. WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)به عنوان یکی از محصولات فرآیندی در مقایسه با RCD از نظر تغذیه کلیه بهتر است(برش های سیستانچ دسرتیکولا)همانطور که در نسخه 2015 فارماکوپیا چینی مستند شده است. در این مطالعه، نتایج PCA نشان داد که SPW مشخصات شیمیایی RCD را تغییر داده است(برش های سیستانچ دسرتیکولا). علاوه بر این، 8 جزء در PhGs به طور قابل توجهی تغییر کرده است. کل PhGs، پلی ساکارید کل، ایزواکتئوزید، و Osmanthuside B بیشتر افزایش یافته بود، در حالی که 2'-acetylakteoside و اکتئوزید پس از SPW کاهش یافته است. نتایج نشان داد که SPW می تواند ترکیبات شیمیایی RCD را تغییر دهد(برش های سیستانچ دسرتیکولا). محتویات PhGs با 1،3،{2}}و نیمه‌های گلوکوپیرانوزیل سه‌جانشین شده (مانند اکتئوزید، 2'-استیلاکتئوزید و سیستانوزید C) در WSCD کاهش یافت.(محصول فرآوری شده با بخار شراب)با این حال، غلظت ایزومرهای آنها با 1،3،{2}}نیمره گلوکوپیرانوزیل سه‌جانشین (مانند ایزواکتئوزید و توبولوزید B) افزایش یافت، که نشان می‌دهد ممکن است تغییر ترکیبات شیمیایی در طول SPW رخ دهد و واکنش هیدرولیز یک خواهد بود. از دلایل مسیرهای تبدیل پیشنهادی در شکل 6 نشان داده شده است. افزایش پلی ساکاریدها پس از SPW نیز در جینسنگ گزارش شده است [24].

شکل 6 مسیرهای تبدیل پیشنهادی PhGs در Cistanche deserticola YC Ma در طول SPW.

Cistanche deserticolaبرای تقویت کلیه و معکوس کردن کاهش سطح تستوسترون و داشتن اثر آنتی اکسیدانی و اثر ضد التهابی ثبت شده است [25]، و PhGs و پلی ساکاریدها دو جزء اصلی فعال بیولوژیکی در Cistanche deserticola بودند. به عنوان PhG، ایزواکتئوزید و Osmanthusid B دارای اثرات آنتی اکسیدانی و ضد التهابی بودند [26، 27]. بنابراین، مقایسه اثرات فارماکولوژیک در سطح تستوسترون و اثر آنتی اکسیدانی RCD و WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)مورد مطالعه قرار گرفت. در مدل کمبود کلیه یانگ ناشی از هیدروکورتیزون، غدد درون ریز مختل شد و سطح هورمون جنسی در خون به شدت کاهش یافت. در این مطالعه، نتایج آنالیز هورمون های جنسی نشان داد که هر دو RCD(برش های سیستانچ دسرتیکولا)و WSCD می توانند به طور قابل توجهی سطح T و E2 را افزایش دهند و هر دو PhGs و پلی ساکاریدها بهبود هورمون های جنسی را نشان دادند. WSCD بهتر از RCD بود(برش های سیستانچ دسرتیکولا)به خصوص در گروه های عصاره PhGs. نتایج شاخص‌های احشایی نشان داد که هم PhGs و هم پلی‌ساکاریدها می‌توانند وزن احشاء و شاخص‌های وزنی آنها را بهبود بخشند. در گروه های استخراج PhGs، WSCD(محصول فرآوری شده با بخار شراب)در افزایش وزن و شاخص کلیه و کیسه منی بهتر از RCD است. علاوه بر این،Cistanche deserticolaدارای اثر آنتی اکسیدانی قابل توجهی است، به ویژه گروه های عصاره پلی ساکارید با WSCD. همانطور که در بالا بحث شد، هر دو RCD(برش های سیستانچ دسرتیکولا)و WSCD می تواند سندرم کمبود کلیه یانگ را بهبود بخشد. اما WSCD در افزایش سطح T، E2، وزن و شاخص های اپیدیدیم و بیضه بهتر از RCD است. نتایج بررسی اثرات فارماکولوژیک نشان داد که SPW باعث تغییر اجزای شیمیایی PhGs و افزایش محتوای پلی ساکاریدها شده است که به نوبه خود باعث افزایش سطح هورمون جنسی و افزایشآنتی اکسیداناثر

5. نتیجه گیری

این مطالعه برای کشف تغییر PhG ها، پلی ساکاریدهای کل و اثر فارماکولوژیک در RCD بود.(برش های سیستانچ دسرتیکولا)و WSCD بر روی موش های صحرایی با کمبود کلیه یانگ، به ویژه در سطح هورمون و اثر آنتی اکسیدانی. این مطالعه نشان داده است که فرآیند گیاهان سنتی چینی ممکن است ترکیبات شیمیایی آنها را تغییر دهد و بر فعالیت زیستی آنها تأثیر بگذارد. همچنین پشتیبانی می شود که محصولات خام و محصولات فرآوری شده به طور متفاوتی در کلینیک تجویز می شدند.

در دسترس بودن داده ها

داده های مورد استفاده برای حمایت از یافته های این مطالعه در صورت درخواست از نویسنده مسئول در دسترس است.

تضاد علاقه

نویسندگان اعلام می کنند که هیچ تضاد منافعی ندارند.

مشارکت نویسندگان

یینگ ژانگ و سونگ یانگ این آزمایش ها را طراحی کردند. Ying Zhang، Yuewu Wang و Yunfeng Xiao جمع آوری و آماده سازی نمونه ها را انجام دادند. یینگ ژانگ داده ها را تجزیه و تحلیل کرد و پیش نویس مقاله را تهیه کرد. Xiangri Li و Xiaoqin Wang مسئول نظارت بر مطالعه بودند. همه نویسندگان در نوشتن و ارائه بازخورد در مورد مقاله شرکت کردند. همه نویسندگان مقاله نهایی را خوانده و تایید کرده اند.

قدردانی

این کار توسط کمک های مالی از رویه های پردازش برای برش های آماده شده از داروهای خام چینی (شماره YP-PZ-2014) پشتیبانی شد. تشکر ویژه از Wenjia Qu و Tianying Jia برای کمک بزرگ آنها در مجموعهCistanche deserticola.

منابع

1. Y. Jiang و P.-F. تو، "تجزیه و تحلیل ترکیبات شیمیایی در گونه های سیستانش"، مجله کروماتوگرافی A، جلد. 1216، شماره 11، صفحات 1970-1979، 2009.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

2. W. Zhao، H. Yan، Z.-Y. لیانگ، ی.-جی. ژانگ و X.-Q. جیائو، "تحلیل ساختاری پلی ساکارید SPA محلول در آب جدا شده از ساقهCistanche deserticolaما، مجله شیمی دانشگاه های چین، جلد 26، شماره 3، صفحات 461-463، 2005.

مشاهده در: Google Scholar

3. Q. Dong، J. Yao، J.-N. Fang و K. Ding، "مشخصات ساختاری و فعالیت ایمونولوژیکی دو پلی ساکارید قابل استخراج در آب سرد ازCistanche deserticolaYC Ma" تحقیقات کربوهیدرات، جلد 342، شماره 10، صفحات 1343-1349، 2007.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

4. X.-M. Wu و P.-F. Tu، "جداسازی و خصوصیات -(1→6) -گلوکان ازCistanche deserticolaمجله تحقیقات محصولات طبیعی آسیایی، جلد 7، شماره 6، صفحات 823-828، 2005.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

5. B. Košíková، A. Ebringerová، و R. Naran، "ویژگی بخش های لیگنین-کربوهیدرات جدا شده از انگل چوب".Cistanche deserticolaYC Ma." Holzforschung, vol. 53, no. 1, pp. 33-38, 1999.

مشاهده در: Google Scholar

6. G. Sheng، X. Pu، L. Lei، P. Tu، و C. Li، "Tubuloside B از Cistanche salsa سلول های عصبی PC12 را از 1-متیل-4-فنیل پیریدینیم ناشی از یون نجات می دهد. آپوپتوز و استرس اکسیداتیو" Planta Medica، جلد. 68، شماره 11، صفحات 966-970، 2002.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

7. ام دنگ، جی.-ای. ژائو، X.-D. جو، پی.-ف. Tu، Y. Jiang، و Z.-B. لی، "اثر محافظتی توبولوزید B بر آپوپتوز ناشی از آلفا TNF در سلول های عصبی"، Acta Pharmacologica Sinica، جلد. 25، شماره 10، صفحات 1276-1284، 2004.

مشاهده در: Google Scholar

8. X. Geng، L. Song، X. Pu، و P. Tu، "اثرات محافظتی عصبی گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید از Cistanches salsa در برابر 1-متیل-4-فنیل{3}}،2،3 سمیت دوپامینرژیک ناشی از6-تتراهیدروپیریدین (MPTP) در موش‌های C57," Biological & Pharmaceutical Bulletin, vol. 27، شماره 6، صفحات 797-801، 2004.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

9. H. Chen، FC Jing، CL Li، PF Tu، QS Zheng، و ZH Wang، "اکیناکوزید از کاهش سطوح خارج سلولی مخطط انتقال‌دهنده‌های عصبی مونوآمین در 6-موش‌های ضایعه هیدروکسی دوپامین جلوگیری می‌کند،" Journal of Ethnopharmacology، جلد . 114، شماره 3، صفحات 285-289، 2007.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

10 J. Pan, C. Yuan, C. Lin, Z. Jia, and R. Zheng, "فعالیت های دارویی و مکانیسم های گلیکوزیدهای فنیل پروپانوئید طبیعی" Die Pharmazie, vol. 58، شماره 11، صفحات 767-775، 2003.

مشاهده در: Google Scholar

11. G. Fu، H. Pang و YH Wong، "گلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی طبیعی: سرنخ های بالقوه برای درمان های جدید"، Current Medicinal Chemistry، جلد. 15، نه 25، صفحات 2592-2613، 2008.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

12. X.-W. وانگ، X.-F. وانگ و L.-Y. وو، "بهبود حافظه موش از گلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدیCistanche deserticola"بولتن دارویی چینی، شماره 19، ص. 41-42، 2002.

مشاهده در: Google Scholar

13. J.-X. Xie و C.-F. وو، "اثر عصاره اتانولی ازCistanche deserticolaدر مورد محتویات انتقال دهنده های عصبی مونوآمین در مغز موش، داروهای سنتی و گیاهی چینی، شماره 24، صفحات 417-419، 1993.

مشاهده در: Google Scholar

14. H. Wu و C.-J. هو، نظم و انضباط فرآیند طب چینی، انتشارات پزشکی مردم، پکن، چین، 2012.

15. ZZ Zhao، ZT Liang، K. Chan و همکاران، "یک مسئله منحصر به فرد در استانداردسازی مواد پزشکی چینی: پردازش" Planta Medica، vol. 76، شماره 17، صفحات 1975-1986، 2010.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

16. کمیسیون داروسازی چینی، فارماکوپه جمهوری خلق چین 2015، جلد. IV، فارماکوپه جمهوری خلق چین، پکن، چین، 2015.

17. ج.-م. چن، آغازگر روشنگر ماتریا پزشکی، چاپ کتابهای باستانی طب سنتی چینی، پکن، چین، 2009.

18. ب.-ر. لی و Y.-C. او، "اثرات داروهای تقویت کننده کلیه بر محور هیپوتالاموس-هیپوفیز-گناد (HPG)، مجله طب سنتی چینی، شماره. 7، صفحات 63-65، 1984.

مشاهده در: Google Scholar

19. M. Chen، L. Zhao و W. Jia، "مطالعه متابونومیک روی پروفایل های بیوشیمیایی یک مدل حیوانی ناشی از هیدروکورتیزون"، مجله تحقیقات پروتئوم، جلد. 4، نه 6، صص 2391-2396، 2005.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

20. Q. Chen و N.-Y. یی، "مدل های حیوانی و داروها برای کمبود یین و کمبود یانگ"، در روش تجربی تحقیقات دارویی در طب سنتی چینی، انتشارات سلامت مردم، پکن، چین، 1993.

مشاهده در: Google Scholar

21. ز.-گ. Ma، Z.-L. یانگ، پی لی و سی.-اچ. لی، "تعیین همزمان هشت گلیکوزید فنیل اتانوئیدی در گونه های مختلف از جنس Cistanche توسط کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا"، Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies، جلد. 31، شماره 18، صفحات 2838-2850، 2008.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

22. Z. Liu, Z. Chao, Y. Liu, Z. Song, and A. Lu, "واکنش میلارد درگیر در فرآیند بخار دهی ریشه Polygonum multiflorum" Planta Medica, vol. 75، شماره 1، صفحات 84-88، 2009.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

23. W.-T. Chang، YH Choi، R. Van Der Heijden، و همکاران، "فرآوری سنتی به شدت بر ترکیب متابولیت‌ها با هیدرولیز در ریشه‌های Rehmannia glutinosa تأثیر می‌گذارد، Chemical & Pharmaceutical Bulletin, vol. 59، شماره 5، صفحات 546-552، 2011.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

24. Y. Jin, Y.-J. کیم، جی.-ن. جئون و همکاران، "اثر جینسنگ سفید، قرمز و سیاه بر خواص فیزیکوشیمیایی و جین سنوزیدها"، مواد غذایی گیاهی برای تغذیه انسان، جلد. 70، شماره 2، صفحات 141-145، 2015.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

25. تی وانگ، X.-Y. ژانگ و W.-Y. زی، "Cistanche deserticolaYC Ma، 'Desert Ginseng': A Review"، مجله آمریکایی طب چینی، جلد 40، شماره 6، صفحات 1123-1141، 2012.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

26. S.-Y. نام، H.-Y. کیم، ام.-اس. یو و همکاران، "اثرات ضد التهابی ایزواکتئوزید از Abeliophyllum distichum"، Immunopharmacology and Immunotoxicology، جلد. 37، شماره 3، صص 258-264، 2015.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

27. S. Chae، JS Kim، KA Kang، و همکاران، "فعالیت آنتی اکسیدانی ایزواکتئوزید از Clerodendron trichotomum"، مجله سم شناسی و بهداشت محیط، قسمت A. مسائل جاری، جلد. 68، شماره 5، صص 389-400، 2005.

مشاهده در: سایت ناشر|Google Scholar

از: طب مکمل و جایگزین مبتنی بر شواهد / 2019 / مقاله

جلد 2019|شناسه مقاله 2167947|https://doi.org/10.1155/2019/2167947