HRM های UPLC-Q-Orbitrap همراه با اتصال مولکولی برای بررسی اساس مواد از طعم تلخ و رابطه عطر و طعم در Cistanchia Desertica

چکیده

 

بر اساس عملکرد فوق العاده کروماتوگرافی مایع-چهارگانه-الکترواستاتیک ORBITRAP با وضوح بالا طیف سنجی جرمی با وضوح بالا (UPLC-Q-Orbitrap HRMS) و docking مولکولی ، طعم تلخ حاوی مواد حاوی Cistanchis Deserticola به منظور ایجاد پایه و اساس تحقیقاتی برای ایجاد بیتر و تصحیح آنها در مورد Taste-Bittering و اصلاحات آنها ، و با توجه در مرحله اول ، از HRMS UPLC-Q-ObitRap برای توصیف ترکیبات C. eserticola استفاده شد و 69 مؤلفه شیمیایی مشخص شد. اتصال مولکولی این مؤلفه های شیمیایی با گیرنده طعم تلخ منجر به غربالگری 20 ماده تلخ و نشانگر ، از جمله 6 گلیکوزیدهای فنیل اتانول ، 5 فلاونوئیدها ، 3 اسید فنولیک ، 2 ترپن سیکلوکلنیل اتر ، 2 آلکالوئید و 2 مؤلفه دیگر. عصاره های همان منشأ از همان مکان مبدا جمع آوری شد و مواد تلخ در حال ارائه با اسکله مولکولی مورد بررسی قرار گرفت. سایر مؤلفه ها ، نه دسته از نمونه های تازه C. eserticola از ماه های مختلف با منشاء یکسان جمع آوری شد ، به ماه های مختلف و قسمت های مختلف تقسیم شد ، و مقدار کمی تلخی نمونه ها با استفاده از روش الکترونیکی به زبان الکترونیکی تعیین شد ، و محتوای شش کامپوننت در نمونه ها (پینکونوتیلازید ، تریکوتیسن گلیلاژن گلیلایکوزید ، آ یک است. Jinshihuaoside ، و jingnipinoside) توسط کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) تعیین شد ، و گلیکوزیدهای فنیل اتانول کل در نمونه ها با استفاده از روش اسپکتروفتومتری UVSIBLE تعیین شد. روش فوتومتریک برای تعیین محتویات کل گلیکوزیدهای فنیل اتانول ، کل پلی ساکاریدها ، کلکالوئیدها ، کل فلاونوئیدها و اسیدهای فنولیک کل در نمونه ها ، و بر این اساس با تجزیه و تحلیل شیمیایی ترکیب می شوند و توسط آنالیز همبستگی پیرسون ، آنالیز همبستگی خاکستری ، و orthormogona l orthermogona l تأیید می شوند. بیابانی ، که با نتایج اسکله مولکولی مطابقت داشت. و سرانجام ، با مواد تلخ ارائه به عنوان هدف مطالعه.

عصاره Cistanchis eserticola

 

سرانجام ، پیش بینی و تجزیه و تحلیل دارویی شبکه با ماده تلخ به عنوان هدف انجام شد و IP رابطه بین هدف ماده تلخ و اثر تلخ مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که اهداف اصلی ماده b itter EGFR ، PIK3CB و PTK2 است و این که ماده تلخ ممکن است اثربخشی تلخ را از طریق AC در اهداف بیماری مربوطه اعمال کند ، به این معنی که ماده تلخ C. esertica اساس مادی تداعی تلخ است. در نتیجه ، این مطالعه نشان داد که گلیکوزیدهای فنیل اتانول ، به طور عمده پینوالوزید ، موریتیانا گلیکوزید و گیبب رلین ، مبنای ماده ای از طعم تلخ C. desertica هستند ، و فناوری حوضه مولکولی نقش مهمی در غربالگری مواد تلخ در داروی سنتی چینی دارد ، و آن را از نظر بیت از مواد تلخ است. "عوارض طعم" طب سنتی چینی در آینده. مواد تلخ در C. desertica دارای طعم و اثر تلخ است که ایده ها و منابع لازم برای تحقیقات آینده در مورد IP رابطه بین طعم و اثر در طب سنتی چینی ارائه می دهد

 

 

 

کلمات کلیدی عصاره Cistanchis eserticola؛ HRMS UPLC-Q-ORBITRAP ؛ فارماکولوژی شبکه ؛ اسکله مولکولی ؛ زبان الکترونیکی ؛ مواد تلخ ؛رابطه طعم و عوارض

 

Cistanche Deserticola YC MA.یک انگل ریشه چند ساله از خانواده Orobanchaceae ، جنس Cistanche است که معمولاً به عنوان Cistanche بیابانی شناخته می شود [1]. کلاسیک گیاهی Shennong بیان می کند که Cistanche شیرین و کمی گرم است. با این حال ، در واقع پس از گرفتن ، طعم تلخ مداوم و جزئی دارد. "عطر و طعم" از پنج طعم طب سنتی چینی در ابتدا بر اساس طعم واقعی دارو هنگام مزه مزه تعیین می شد ، اما از آنجا که طعم دارو از نزدیک با تأثیر آن ارتباط دارد ، به تدریج در توضیح و جمع بندی تأثیر دارو توسط "طعم" [2] تکامل یافت. Cistanche در بسیاری از کتابهای پزشکی کلاسیک باستانی ثبت شده است. این اثرات تغذیه کلیه و پر کردن جوهر ، مرطوب کردن روده ها و تسکین یبوست است. از زمان های قدیم ، از آن برای درمان بیماری های مربوط به کمبود کلیه ، از جمله اختلال عملکرد جنسی ، ناباروری زن ، از دست دادن جوهر و خون ، درد کمر و زانوها ، روده های خشک و یبوست و غیره استفاده شده است. [3] تلخی طب سنتی چینی یکی از پنج طعم تئوری سنتی طب چینی است و مبنای نظری مهمی برای هدایت استفاده بالینی از طب سنتی چینی است. تلخی یکی از پنج طعم طب سنتی چینی است. ویژگی های آن پاک کننده ، خشک کننده و محکم است [4] و نقش مهمی در هدایت استفاده بالینی از طب سنتی چینی دارد. بیشتر داروهای سنتی چینی و آماده سازی طب سنتی چینی طعم تلخی دارند. طب سنتی چینی معتقد است که مواد طعم دهنده تلخ (از این پس از آن به عنوان مواد تلخ گفته می شود) در داروهای تلخ مواد مؤثر هستند [5]. با این حال ، رابطه بین مواد تلخ در داروهای سنتی چینی و اثربخشی تلخ آنها هنوز مشخص نیست. هنوز فقدان تحقیقات علمی مربوطه در مورد اینکه آیا مواد تلخ در داروهای تلخ سنتی چینی دارای اثربخشی تلخ هستند ، وجود ندارد. Cistanche شامل انواع اجزای شیمیایی ، عمدتا گلیکوزیدهای فنیل اتانول ، ترپن های اتر سیکلوپنتان ، لیگنین ها و گلیکوزیدهای آنها ، قندها و غیره است. علاوه بر این ، همچنین حاوی فلاونوئیدها ، اسیدهای فنولیک ، الكالوئیدها ، روغنهای بیضه ، آمینه اسید ، آمینو اسید ، آمینو اسید ، سایر آمائی ها است. در میان آنها ، ترکیبات گلیکوزید فنیل اتانول به عنوان اصلی ترین مؤلفه های مؤثر در Cistanche در نظر گرفته می شوند [7]. Cistanche Deserticola دو فصل برداشت دارد: بهار و پاییز. مطالعات نشان داده اند که محتوای پلی ساکارید بهار Cistanche Deserticola کم است ، محتوای گلیکوزید فنیل اتانول زیاد است و طعم آن تلخ است ، اما ظرفیت آنتی اکسیدانی آن قوی است [8]. مشاهده می شود که اجزای تلخ آن با اثربخشی دارو ارتباط خاصی دارند ، اما اساس مادی طعم تلخ Cistanche Deserticola هنوز نامشخص است ، که ممکن است توسعه بیشتر آن را محدود کند.

به منظور کشف اساس ماده تلخکوارتریو رابطه آن با اثربخشی تلخ (رابطه طعم-اثر) ، این مطالعه عصاره Cistanche Deserticola را به عنوان شیء تحقیق انجام داد و مواد تلخ در Cistanche Deserticola را با استفاده از کروماتوگرافی مایع فوق العاده با عملکرد فوق العاده-چهارگوش-الکترواستیک با وضوح بالا طیف سنجی جرمی با وضوح بالا (Uplec-q-orbitrap Hrbrap Hrms) به نمایش گذاشت. محتوای اصلی داروهای تلخ اصلی توسط تعیین شدکروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC)، و محتوای هر دسته اصلی مواد تلخ با استفاده از اسپکتروفتومتری UV- قابل مشاهده تعیین شد. میزان تلخی با زبان الکترونیکی مورد بررسی قرار گرفت و اجزای تلخ در ترکیب با شیمیایی یافت شد. و از فناوری فارماکولوژی شبکه برای انجام مسیر KEGG و تجزیه و تحلیل غنی سازی GO در مورد اهداف مواد تلخ در طب سنتی چینی استفاده شد و اهداف مواد تلخ با اهداف اثربخشی تلخ آنها در ارتباط بود ، بنابراین می توان رابطه بین مواد تلخ و اثربخشی تلخ را در طب سنتی چینی کشف کرد. ایده های تحقیق در شکل 1 نشان داده شده است. این مطالعه از روشهای تحقیق مدرن فناوری برای کشف اطلاعات طعم و مزه Cistanche Desericola استفاده می کند و مبنای مواد تلخ و رابطه طعم آن را نشان می دهد. It is expected to provide a reference for the scientific analysis of the material basis of taste of traditional Chinese medicine, and provide a basis for the in-depth and precise development and utilization of Cistanche deserticola resources, making the five flavors theory clearer, more objective, and standardized, scientifically explaining the scientific connotation of the bitterness theory, and providing research ideas and references for exploring the true taste and efficacy relationship of the material basis of the nature and flavor of traditional طب چینی.

 

 

شکل 1 مسیر مطالعه در مورد رابطه بین مواد تلخ و اثربخشی تلخ عصاره های Cistanche Deserticola

 

1 ماده

1.1 مواد دارویی

نمونه های تازه Cistanche Deserticola از آوریل تا دسامبر سال 2023 در Aksu ، Xinjiang جمع آوری شد. نمونه ها توسط لی مینگجی ، داروساز در بیمارستان مردم شهر شایا مشخص شد ، زیرا گوشت خشک شده با برگهای مقیاس Cistanche Desericola ، گیاهی از جنس Cistanche در خانواده یا OBANBANCEAEE. نمونه های کوپن در آزمایشگاه تحقیقات داروسازی دانشگاه پزشکی سین کیانگ ذخیره شد. نمونه ها از ناخالصی ها تمیز شده بودند ، به مدت 5 دقیقه به مدت 5 دقیقه در آب خرد شده و مطابق ادبیات ، و سپس فرآوری می شدند ، در 60 درجه خشک می شوند ، خرد می شوند و از طریق یک غربال مش {3}}} الک شده اند ، جدول 1 را ببینید.

 

نمونه اطلاعات اطلاعات Cistanche Deserticola

 

شماره	رمز	زمان جمع	پیش درمانی قبل از خشک شدن	محل تشخیص
1	M1	2023-04-10	برش های کامل - گیاه	گیاه
2	M2	2023-05-08	برش های کامل - گیاه	گیاه
3	M3	2023-06-15	برش های کامل - گیاه	گیاه
4	M4	2023-07-10	برش های کامل - گیاه	گیاه
5	M5	2023-08-11	برش های کامل - گیاه	گیاه
6	M6	2023-09-10	برش های کامل - گیاه	گیاه
7	M7	2023-10-09	برش های کامل - گیاه	گیاه
8	M8	2023-11-14	برش های کامل - گیاه	گیاه
9	M9	2023-12-10	برش های کامل - گیاه	گیاه
10	P1	2023-08-11	بخش - برش های خاص	اپیدرم فوقانی
11	P2	2023-08-11	بخش - برش های خاص	قشر فوقانی
12	P3	2023-08-11	بخش - برش های خاص	پیت فوقانی
13	P4	2023-08-11	بخش - برش های خاص	اپیدرم میانی
14	P5	2023-08-11	بخش - برش های خاص	قشر میانی
15	P6	2023-08-11	بخش - برش های خاص	پیت میانی
16	P7	2023-08-11	بخش - برش های خاص	اپیدرم پایین
17	P8	2023-08-11	بخش - برش های خاص	قشر پایین
18	P9	2023-08-11	بخش - برش های خاص	پیت پایین

 

1.2 پایگاه داده و نرم افزار

tcmsp (https://tcmspw.com/tcmsp.php) ، genecards (https://www.genecards.org) ، omim (https://www.omim.org) ، uniprot (https://www.unip.rot.rot.org) ، pdb (http: (https://string-db.org) ، pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/) ، David (https://david.ncifcrf.gov/) ، پایگاه داده پروتئین Alphafold (alphoctein protein (https://alphafafost.ebi.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk.uk/bi (https://alphafold.ebi.ac.uk/) برای اسکله مولکولی استفاده شد. IBM SPSS Statistis 25 برای تجزیه و تحلیل پیرسون استفاده شد. نرم افزار: تجزیه و تحلیل انجمن خاکستری با استفاده از وب سایت آنلاین SPSSPRO (https://www.spsspro.com) انجام شد ، تجزیه و تحلیل تبعیض آمیز حداقل مربعات متعامد (OPLS-DA) با استفاده از نرم افزار SIMCA14.1 انجام شد و تجزیه و تحلیل فارماکولوژی شبکه با استفاده از نرم افزار Cytoscape انجام شد.

 

1.3 ابزار و معرف

کروماتوگرافی مایع با عملکرد فوق العاده عالی ، Orbitrap Exploris 120 طیف سنج جرمی با وضوح بالا (Thermofisher Scientific ، USA) ؛ SA {3}} b زبان الکترونیکی (Insent ، ژاپن) ؛ LC -20 یک کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (Shimadzu ، ژاپن) ؛ طیف سنجی UV- قابل مشاهده (شرکت شانگهای Youke Instrument Co. ، Ltd.) ؛ تعادل الکترونیکی AUW2200 (کارخانه شیمادزو فیلیپین) ؛ Cleaner Ultrasonic SK250 (شركت اولتراسونیک شانگهای Kedao ، آموزشی ویبولیتین) ؛ DHG {9}} یک اجاق گاز خشک کن دمای ثابت الکتریکی (شرکت تجهیزات تجربی شانگهای جینگهونگ ، آموزشی ویبولیتین) ؛ Plusel+ابزار آب اولتراپور کر (وولیا ، فرانسه).
مواد مرجع Echinacoside (خلوص بیشتر از یا مساوی با 98 ٪ ، تعداد دسته ای از PCL-#-A003) ، Verbascoside (خلوص بیشتر از یا مساوی با 98 ٪ ، تعداد دسته ای از PCL-#-M235) ، توبولوزید A (خالص بیشتر از یا مساوی با 99 ٪ ، تعداد PCL-#-#-#-#-#-#-#-#-#-#-#-#-#-#-#-#-#-#-#-#-#-t0033) ، scutellarit ( PCL-#-D005) ، و ایزوالاسكوزید (خلوص بیشتر از 98 ٪ ، شماره دسته PCL-#-I236) از شركت فن آوری استاندارد Sichuan Puxi'ao خریداری شد ، Ltd. ؛ مواد مرجع Geniposide (خلوص بیشتر از یا مساوی 98 ٪ ، تعداد دسته ای WP23120502) ، روتین (خلوص بیشتر از یا مساوی با 98 ٪ ، تعداد دسته ای WP32110405) ، اسید گالیک (خلوص بیشتر از 98 ٪ ، تعداد دسته ای از WPP32140706) ، و Betaine toliaine ( WP33654874) از شرکت بیوتکنولوژی Sichuan Weikeqi ، Ltd. نمک RENESTEIN ، گلوکز بی آب (درجه تحلیلی) ، استونیتریل ، متانول (درجه کروماتوگرافی) و اسید فسفریک از شرکت معرف شیمیایی Sinopharm ، Ltd. خریداری شد.