متابولومیک ادرار بهبود غیرعادی را پس از حداکثر فشار در بیماران زن ME/CFS نشان می دهد قسمت 3

چرا خسته خواهیم شد؟ چگونه می توانیم مشکلات خستگی را حل کنیم؟

【ایمیل تماس】: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501

3. بحث

این اولین باری است که متابولوم ادرار بیماران ME/CFS قبل و بعد از چالش ورزشی مشخص می شود، زمانی که بیماران ME/CFS در حال تجربه PEM هستند. بسیاری از این متابولیت ها قبلا هرگز در بیماران ME/CFS اندازه گیری نشده بودند، زیرا مطالعات قبلی متابولومیک ادرار در ME/CFS به کمتر از 50 متابولیت محدود شده بود و مطالعه فعلی 1403 را اندازه گیری کرد. سطوح فعالیت بدنی، که می تواند بر سطوح متابولیت پایه و بعد از ورزش تأثیر بگذارد، یک مزیت کلیدی طرح مطالعه فعلی است که در مطالعات قبلی مورد استفاده قرار نگرفته است. نتایج ما افزایش گسترده‌ای را در سطوح متابولیت‌ها در ادرار گروه شاهد 24 ساعت پس از ورزش نشان داد که در بیماران ME/CFS مشاهده نشد، با 110 مورد از این ترکیبات تعامل قابل‌توجهی بین وضعیت بیماری (ME/CFS یا شاهد). ) و زمان (خط پایه در مقابل بعد از تمرین) (شکل تکمیلی S2). علاوه بر آنالیزهای متعدد سطوح متابولیت ادراری، همبستگی سطوح متابولیت در ادرار و پلاسما شواهد بیشتری از اختلالات متابولیک در بیماران ME/CFS پس از ورزش به دست آورد. این تجزیه و تحلیل شواهد بیشتری از تغییرات پاتوفیزیولوژیک در مسیرهای فرعی متعدد و همچنین شواهدی مبنی بر تفاوت در مسیرهای فرعی اضافی ارائه کرد که در هنگام بررسی سطوح متابولیت ادرار به صورت مجزا، تفاوت های قابل توجهی بین بیماران ME/CFS و گروه کنترل نداشت.

سیستانچ می تواند به عنوان یک ضد خستگی و تقویت کننده استقامت عمل کند و مطالعات تجربی نشان داده اند که جوشانده سیستانچ توبولوزا می تواند به طور موثری از سلول های کبدی و سلول های اندوتلیال آسیب دیده در موش های شناگر محافظت کند، بیان NOS3 را افزایش دهد و گلیکوژن کبدی را تقویت کند. سنتز، در نتیجه اعمال اثر ضد خستگی. عصاره Cistanche tubulosa غنی از گلیکوزید فنیل اتانوئید می تواند به طور قابل توجهی سطح کراتین کیناز، لاکتات دهیدروژناز و لاکتات سرم را کاهش دهد و سطح هموگلوبین (HB) و گلوکز را در موش ICR افزایش دهد و این می تواند با کاهش آسیب عضلانی نقش ضد خستگی ایفا کند. و به تاخیر انداختن غنی سازی اسید لاکتیک برای ذخیره انرژی در موش. قرص Cistanche Tubulosa به طور قابل توجهی زمان شنای تحمل وزن را طولانی کرد، ذخیره گلیکوژن کبدی را افزایش داد و سطح اوره سرم را پس از ورزش در موش کاهش داد و اثر ضد خستگی آن را نشان داد. جوشانده سیستانچی می تواند استقامت را بهبود بخشد و خستگی را در موش های ورزشکار تسریع کند و همچنین می تواند افزایش کراتین کیناز سرم را بعد از تمرین بارگذاری کاهش دهد و فراساختار ماهیچه های اسکلتی موش ها را پس از ورزش نرمال نگه دارد که نشان دهنده تأثیر آن است. افزایش قدرت بدنی و ضد خستگی Cistanchis همچنین به طور قابل توجهی زمان بقای موش های مسموم با نیتریت را طولانی کرد و تحمل در برابر هیپوکسی و خستگی را افزایش داد.

روی احساس خستگی دائم کلیک کنید

3.1. مقایسه با مطالعات قبلی متابولومیک ادرار در بیماران ME/CFS

به طور کلی، نتایج ما با چند مطالعه قبلی که متابولیت‌های ادرار را در بیماران ME/CFS در مقایسه با افراد غیر ME/CFS اندازه‌گیری می‌کردند، سازگار نیست. برای مقایسه بهتر نتایج ما با مطالعات قبلی، که متابولیت های کمتری را اندازه گیری می کردند، نتایج را در ابتدا برای p < 0 مقایسه کردیم.05 در LMM با مطالعات قبلی. تنها ترکیبی که در مطالعه دیگری و مطالعه ما معنی دار بود آلانین بود، اگرچه مطالعه قبلی نشان داد که آلانین در بیماران زن کمتر از گروه کنترل است (BH-adjust p-value < 0.05) و در مطالعه ما میانگین غلظت نرمال شده در بیماران ME/CFS نسبت به گروه کنترل بیشتر بود [20]. با این حال، چندین مطالعه تفاوت‌هایی را در ابتدا در ترکیباتی که ما دریافتیم در بیماران ME/CFS و گروه‌های کنترل در طول ریکاوری ورزش تغییر می‌کردند، از جمله فنیل آلانین (در بیماران ME/CFS کمتر [23،24]) و والین (کمتر در بیماران مبتلا به ME/CFS) نشان دادند. بیماران ME/CFS [20]). هم فنیل آلانین و هم والین در گروه کنترل غیرفعال به دنبال ورزش در مطالعه حاضر به طور قابل توجهی افزایش یافتند، بنابراین این امکان وجود دارد که گروه های کنترل در مطالعات دیگر فعال تر بوده و قبلاً سطح فنیل آلانین ادراری بالاتری داشته باشند. هیچ مطالعه دیگری به طور خاص افراد کم تحرک غیر ME/CFS را انتخاب نکرد، اگرچه یک مطالعه به دنبال مطابقت با «سبک زندگی عمومی» [23] بود. آرمسترانگ و همکاران به همبستگی پیرسون بین متابولیت‌های ادرار و پلاسما در بیماران ME/CFS و گروه شاهد در ابتدا نگاه کرد و تفاوت‌هایی را در استات، لاکتات و فنیل آلانین با آستانه |R| > 0.4 در هر دو گروه [20]. استات بسیار کوچک است که در سنجش ما قابل تشخیص نیست و ما تفاوتی در همبستگی پلاسما و ادرار در لاکتات یا فنیل آلانین تشخیص ندادیم.

مک گرگور و همکارانش همچنین تغییراتی را در متابولوم های ادرار و پلاسما در بیماران ME/CFS که PEM را تجربه کردند، بررسی کردند [19]. آنها از یک نظرسنجی برای جدا کردن بیماران ME/CFS که در حال حاضر در هفت روز گذشته PEM را تجربه می‌کنند، استفاده کردند و کشف کردند که از هر سی متابولیت ادرار اندازه‌گیری شده، هشت مورد در گروه ME/CFS در مقایسه با گروه شاهد، غلظت‌های پایین‌تری داشتند. از این میان، تنها سرین تفاوت معنی داری در تجزیه و تحلیل ما داشت. پس از ورزش در گروه کنترل افزایش یافت (Supplementary Data File S2-LMM Results). سطوح دو متابولیت ادرار، استات و متیل هیستیدین، نیز در گروه PEM در مقایسه با گروه بدون PEM به طور قابل توجهی متفاوت بود [19]. سطوح متیل هیستیدین‌های مورد سنجش در این مطالعه در تجزیه و تحلیل LMM تفاوت معنی‌داری نداشت، اما ما تفاوت‌هایی را در ارتباط پلاسما و ادرار 1-متیل هیستیدین و N-استیل-3-متیل هیستیدین یافتیم (شکل 9). مک گرگور و همکاران همچنین ارتباطی بین نمرات PEM هفت روزه با چندین متابولیت در پلاسما و ادرار یافت شد [19].

3.2. افزایش سطح متابولیت ادراری پس از ورزش در کنترل های کم تحرک با مطالعات قبلی مطابقت دارد

متابولوم ادرار در زنان 24 ساعت پس از ورزش به خوبی مشخص نشده است. تا آنجا که ما می دانیم، هیچ مطالعه ای متابولوم ادرار را در ابتدای شروع مطالعه در مقایسه با 24 ساعت پس از ورزش در زنان اندازه گیری نکرده است. یک مطالعه 32 متابولیت در ادرار را قبل از ورزش و 24 ساعت پس از ورزش در مردان اندازه‌گیری کرد و 9 دوچرخه‌سوار رقابت‌کننده را با هشت مرد سالم اما آموزش‌دیده هم سن (50 تا 60 سال) مقایسه کرد [48]. در حالی که مطالعه آنها بر مقایسه ورزشکاران با افراد تمرین نکرده متمرکز بود، آنها شاهد افزایش زیاد تغییرات پس از ورزش (معنی‌دارتر از دو برابر) در سطوح لاکتات، استات و هیپوگزانتین در افراد کنترل بودند. استات در مطالعه ما اندازه‌گیری نشد و لاکتات و هیپوگزانتین در گروه کنترل زن ما از ابتدا تا بعد از ورزش تفاوتی نداشتند. موکرجی و همکاران تفاوت قابل توجهی بین گروه ورزشکار و کنترل در هشت متابولیت اندازه گیری شده مرتبط با انواع مسیرهای بیوشیمیایی پیدا کرد [48]. بنابراین، نقطه قوت مطالعه حاضر، انتخاب افراد سالم کم تحرک در مقایسه با افراد فعال تر است، که ممکن است متابولوم ادراری آنها به دلیل ورزش منظم تغییر کند.

در حالی که کمبود مقالات منتشر شده در مورد متابولوم ادرار 24 ساعت پس از ورزش وجود دارد، مطالعات متعددی وجود دارد که متابولیت های ادرار را در مردان و زنان در مقاطع زمانی اولیه پس از ورزش اندازه گیری می کند (در [49] بررسی شده است). یکی از یافته‌هایی که بین مطالعات مطابقت داشت این است که غلظت بیشتر لیپیدها در سیالات زیستی پس از ورزش از جمله در ادرار افزایش می‌یابد. به طور خاص، نشان داده شده است که غلظت آسیل کارنیتین در خون و ادرار در پاسخ به ورزش افزایش می یابد. این با نتایج مطالعه ما مطابقت دارد که در آن چندین ترکیب آسیل کارنیتین به طور قابل توجهی پس از تمرین در ادرار گروه کنترل افزایش یافته بود (شکل 7A).

بزرگترین مطالعه شامل زنان (255 نفر در کل، 107 زن) همچنین تغییرات متابولیک گسترده ای را در ادرار پس از ورزش نشان داد، با 37 متابولیت از 47 اندازه گیری شده به طور قابل توجهی پس از اصلاح FDR تغییر کرد، و 33 مورد از آنها پس از ورزش افزایش یافت [50] . این با یافته های ما در مورد تغییرات متابولیک در مقیاس بزرگ پس از ورزش در ادرار افراد کنترل مطابقت دارد، به طوری که اکثر ترکیباتی که تغییر یافته بودند غلظت بیشتری داشتند. این مطالعه همچنین یک تجزیه و تحلیل مقایسه ای طبقه بندی شده بر اساس جنسیت را تکمیل کرد اما فقط دو متابولیت با نسبت های قابل توجهی متفاوت پس از تمرین/پایه در زنان و مردان یافت.

در شرانر و همکاران. بررسی، یافته‌های اسیدهای آمینه به اندازه لیپیدها که عموماً پس از ورزش افزایش می‌دهند، سازگار نیستند [49]. با این حال، برخی از یافته‌ها در ادرار در حداقل دو مطالعه ثابت بود (اگرچه تمام نقاط زمانی پس از ورزش ترکیب شده‌اند)، از جمله اینکه ترکیبات زیر در ادرار پس از ورزش افزایش یافتند: آلانین، او-استیل-هوموسرین، 5- هیدروکسی اندولپیروات، زانتورنات، ال متانفرین، N-استیلوانیل آلانین و N-(کربوکسی اتیل) آرژنین. ترکیبات زیر در حداقل دو مطالعه در ادرار پس از ورزش کاهش می‌یابند: گلیسین، هیستیدین، تری متیل آمین n-اکسید. در مقایسه این نتایج با مطالعه ما، بیشتر متابولیت ها قبل و بعد از ورزش تفاوت معنی داری نداشتند یا در مطالعه ما اندازه گیری نشدند. با این حال، ما همچنین افزایش قابل توجهی در سطح آلانین در گروه کنترل پیدا کردیم که با مطالعات بررسی شده مطابقت دارد. در مطالعه ما، سطوح گلیسین نیز پس از ورزش در گروه شاهد افزایش یافت و در مقابل کاهش یافت. با این حال، کیستنر و همکاران. مطالعه ای که شامل بسیاری از زنان بود، همچنین نشان داد که سطح گلیسین به طور قابل توجهی پس از ورزش افزایش می یابد [50].

3.3. تفاوت بین کنترل های کم تحرک و بیماران ME/CFS در سوپرمسیر لیپیدی

بسیاری از زیرمسیرهای چربی در ادرار بیماران و گروه کنترل در این مطالعه، از جمله متابولیسم اسید چرب آسیل کارنیتین، به طور قابل توجهی متفاوت بودند. متابولیت های آسیل کارنیتین پس از تمرین در ادرار در افراد سالم افزایش یافت و تغییرات ناشی از ورزش بین گروه شاهد و بیماران ME/CFS تفاوت معنی داری داشت (شکل های 3، 7، و S4). علاوه بر این، اگرچه دئوکسی کارنیتین یک آسیل کارنیتین نیست، اما دئوکسی کارنیتین در زیرمسیر لیپیدی متابولیسم کارنیتین ارتباط متفاوتی بین پلاسما و ادرار در بیماران ME/CFS در مقایسه با گروه کنترل داشت (شکل 9). آسیل کارنیتین ها در متابولیسم انرژی بسیار مهم هستند، زیرا آنها برای انتقال اسیدهای چرب به داخل میتوکندری برای اکسیداسیون مورد نیاز هستند. اکسیداسیون اسیدهای چرب با زنجیره بلند، حالت اولیه متابولیسم انرژی در طی تمرینات هوازی است. متابولیسم آسیل کارنیتین مختل در طول ورزش می تواند به عدم تحمل ورزش و PEM در بیماران ME/CFS کمک کند. در مطالعه دیگری که فقط به آزمودنی‌ها در شروع مطالعه نگاه می‌کرد و به طور خاص کنترل‌های بی‌تحرک را به کار نمی‌گرفت، مشخص شد که مسیر فرعی آسیل کارنیتین در بیماران ME/CFS در مقایسه با گروه کنترل متفاوت است، به طوری که پنج ترکیب از هشت ترکیب، غلظت کمتری در بیماران دارند. [11]. هنگامی که فقط افراد پایه مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند، اندازه‌گیری‌های خاص آسیل کارنیتین در سرم نشان داد که این ترکیب در بیماران ME/CFS نسبت به گروه کنترل در یک گزارش کمتر بود [51] اما در مطالعه دیگری تفاوتی در سطح ادرار یا پلاسما مشاهده نشد [52]. در پلاسمای گروه بزرگ‌تری که افراد مورد مطالعه حاضر زیرمجموعه آن هستند، خوشه شیمیایی کارنیتین نیز به طور قابل‌توجهی در گروه کنترل زن کم‌تحرک در طول ریکاوری تغییر کرد (تعریف شده به عنوان تفاوت بین 24 ساعت پس از ورزش و 15 دقیقه پس از ورزش. ) با افزایش اکثر ترکیبات پس از تمرین [25]. خوشه شیمیایی کارنیتین به طور قابل توجهی در طول ریکاوری ورزش در بیماران ME / CFS تغییر پیدا نکرد. در حالی که این خوشه بیش از فقط آسیل کارنیتین ها را شامل می شود، آسیل کارنیتین ها عضو هستند و به اهمیت آن در تجزیه و تحلیل غنی سازی شباهت شیمیایی در مطالعه فعلی نیز کمک می کنند (شکل تکمیلی S4). همچنین در شرایط خارج از بدن نشان داده شده است که پالمیتوئیل کارنیتین، که به طور موقت پس از تمرین در عضلات افزایش می یابد، ممکن است به عنوان یک سیگنال فشار از عضله به زیر مجموعه ای از نورون ها عمل کند [53].

متابولیت های اسید چرب آسیل گلیسین تنها ترکیباتی هستند که در ادرار با غلظت های قابل توجهی متفاوت در ME/CFS در مقایسه با گروه کنترل در یک نقطه زمانی واحد (24 ساعت پس از ورزش) و یک ترکیب آسیل گلیسین متفاوت، 3-هیدروکسی بوتیرویل گلیسین یافت شدند. در بیماران ME/CFS هنگام همبستگی U3/U1 با P3/P1 همبستگی منفی معنی‌داری داشت (شکل‌های 5 و 9). علاوه بر این، سیس-3،4-متیلن هپتانوئیل گلیسین در طول ریکاوری ورزش در بیماران ME/CFS در مقایسه با گروه شاهد تغییر متفاوتی داشت (LMM، شکل تکمیلی S2). در حالی که متابولیسم آسیل گلیسین یکی از زیرمسیرهایی نیست که به تنهایی پس از ورزش به طور قابل توجهی در گروه کنترل افزایش یافته است، اما در بیماران ME/CFS در مقایسه با گروه کنترل هم در زمان 24 ساعت پس از تمرین و هم در هنگام تجزیه و تحلیل تفاوت به طور قابل توجهی متفاوت بود. در نسبت های پس از تمرین/پایه (شکل 3). دفع ادراری آسیل گلیسین های خاص نیز به دلیل اختلالات مرتبط با اکسیداسیون اسیدهای چرب در میتوکندری، از جمله کمبود آسیل کوآنزیم A (CoA) دهیدروژناز (MCAD) با زنجیره متوسط ​​تغییر می کند [54]. گروه ما مشاهده کرده است که اکسیداسیون اسیدهای چرب در سلول های ایمنی با بیماران ME/CFS در مقایسه با گروه کنترل متفاوت است [55].

3.4. تفاوت بین کنترل های کم تحرک و بیماران ME/CFS در سوپرمسیر اسید آمینه

ما همچنین تفاوت‌های زیادی در ادرار در اسیدهای آمینه در بیماران ME/CFS و کنترل‌های پس از ورزش پیدا کردیم. دو مورد از این مسیرها برجسته بودند زیرا تغییرات قابل توجهی در بیماران ME/CFS در مقابل کنترل‌ها در تمام تجزیه و تحلیل‌های ما، از جمله تجزیه و تحلیل مسیر KEGG داشتند، و در ادامه بیشتر مورد بحث قرار می‌گیرند.

چرخه اوره در کبد بخش مهمی از متابولیسم ورزش است زیرا برای حذف سطوح بالای آمونیاکی که در طول ورزش تولید می شود مورد نیاز است [56،57]. ژرمین و همکارانش همچنین دریافتند که چرخه اوره و مسیرهای SMPDB بازیافت آمونیاک به طور قابل توجهی در پلاسما بین بیماران زن ME/CFS و گروه کنترل در تجزیه و تحلیل مسیر هنگام مقایسه تفاوت بین سطوح متابولیت در 24 ساعت پس از CPET (P3) تغییر می کند. 15 دقیقه پس از CPET (P2) [25]. تجمع آمونیاک قبلاً با سمیت عصبی و خستگی ناشی از ورزش مرتبط بوده است [56،57]. اختلال در تنظیم چرخه اوره در ادرار و متابولوم‌های پلاسما پس از ورزش در بیماران ME/CFS ممکن است باعث تجمع آمونیاک شود، اما ۱۴۰۳ ترکیب اندازه‌گیری شده توسط Metabolon در ادرار شامل آمونیاک نمی‌شود، زیرا یک ترکیب فرار است و همچنین کوچک‌تر از حد تشخیص پلت فرم Metabolon®.

سیستئین، متیونین، SAM و تائورین اسیدهای آمینه مهمی هستند زیرا تنها آمینو اسیدهایی هستند که حاوی گوگرد هستند و سیستئین در توانایی خود در ایجاد پیوندهای دی سولفیدی منحصر به فرد است. سیستئین همچنین ممکن است به گلوتاتیون و تورین تبدیل شود. سیستئین و متیونین نقش های متعددی در متابولیسم سلولی ایفا می کنند، اما آنها همچنین بلوک های ساختمانی کلیدی پروتئین ها هستند [37]. سیستئین به دلیل داشتن گروه تیول در کاتالیزور بسیاری از واکنش های آنزیمی و حفظ هموستاز ردوکس نقش دارد. تغییرات در متابولیسم سیستئین در بسیاری از اختلالات نورودژنراتیو از جمله بیماری آلزایمر، بیماری هانتینگتون و بیماری پارکینسون رخ می دهد [58]. در حالی که متابولیسم سیستئین، متیونین، SAM و تورین تفاوت های زیادی را بین بیماران و گروه شاهد در تجزیه و تحلیل متابولوم ادرار ما نشان داد، همبستگی ادرار و پلاسما ترکیبات اضافی را با تفاوت های قابل توجهی بین بیماران ME/CFS و گروه کنترل نشان داد، از جمله در سیستئین، که هنگامی که دو سیستئین برای تشکیل پیوند دی سولفید اکسید می شوند و سیستاتیونین که واسطه ای در تولید سیستئین در چرخه متیونین است، تولید می شود [37].

3.5. محدودیت ها

مطالعه ما چندین محدودیت مهم دارد. اول اینکه رژیم غذایی آزمودنی ها کنترل نمی شد و دریافت متابولیت های غذایی می تواند بر دفع آنها از طریق ادرار تأثیر بگذارد. دوم، ما تصدیق می کنیم که عدم تطابق BMI ایده آل نیست و یک محدودیت برای این مطالعه است. گروه بزرگتر ما از بیماران ME/CFS و افراد سالم بی‌تحرک با BMI مطابقت دارند، و بنابراین اگر این مطالعه آزمایشی گسترش یابد، این موضوع در آینده مشکلی نخواهد داشت. سوم، نتایج ما محدود به بیماران زن ME/CFS است. در حالی که مطالعه هر دو جنس در ME/CFS بسیار مهم است و تعداد فزاینده‌ای از تفاوت‌های جنسی در پاتوفیزیولوژی در حال کشف است [25،59،60]، ما تصمیم گرفتیم مطالعه آزمایشی خود را بر روی زنان متمرکز کنیم زیرا بار بیماری ME بالاتر است. /CFS در زنان (60-65٪ زن) [2]. علاوه بر این، از آنجایی که ما متابولوم ادرار را فقط در دو نقطه زمانی، پایه و 24 ساعت پس از ورزش ثبت کردیم، نمی‌توانیم بگوییم که آیا بیماران ME/CFS سطوح دفع برخی از این متابولیت‌ها را در زمان‌های قبل یا بعد تغییر داده‌اند یا خیر. نقطه نسبت به کنترل این افزایش در محصولات دفعی ممکن است در بیماران اتفاق بیفتد، اما با تأخیر بیشتر، مشابه اینکه بیماران ME/CFS بهبودی کلی با تاخیر را نسبت به ورزش نشان می‌دهند. با این حال، همچنین ممکن است که این عدم دفع متابولیک تغییر یافته بخشی از فقدان کلی پاسخ متابولیک سالم به ورزش باشد.

4. مواد و روش ها

4.1. موضوعات مطالعه

هشت فرد سالم سالم و 10 بیمار ME/CFS در این مطالعه وارد شدند. بیماران ME/CFS با معیارهای اجماع کانادایی [3] تشخیص داده شدند. 18 آزمودنی که در این مطالعه شرکت کردند بخشی از یک گروه بزرگتر از 173 شرکت کننده بودند (شناسه ClinicalTrials.gov: NCT04026425) [61]. برای این مطالعه مقدماتی، تمام افراد مورد مطالعه زن بودند. آزمودنی ها با معیارهای زیر انتخاب شدند. تمامی شرکت کنندگان باید بین 18 تا 70 سال سن داشته باشند. افراد سیگاری، باردار یا شیرده، دیابتی، مصرف بیش از حد الکل، یا محدودیت ارتوپدی که مانع از انجام CPET می‌شد، از هر دو گروه حذف شدند. تشخیص اسکیزوفرنی، اختلال افسردگی اساسی، اختلال دوقطبی، یا اختلال اضطراب نیز معیارهای خروج از هر دو گروه بود. به‌علاوه، افراد سالم بدون تحرک در صورت تشخیص هر گونه اختلال خودایمنی از مطالعه حذف شدند. عملکرد کلیوی در همه افراد برای این مطالعه طبیعی بود، همانطور که توسط آزمایش‌های خون آزمایشگاهی استاندارد Quest Diagnostics زیر ارزیابی شد: کراتینین سرم، نیتروژن اوره خون، و نرخ فیلتراسیون گلومرولی تخمینی (eGFR).

هفده آزمودنی تست تمرین را در کالج ایتاکا در ایتاکا، نیویورک و یک آزمودنی تست تمرینی را در ID Med در تورنس، کالیفرنیا انجام دادند. از همه شرکت کنندگان خواسته شد که مکمل های غذایی شامل پروبیوتیک ها را به مدت دو هفته قبل از انجام تست ورزش قطع کنند. از شرکت کنندگان خواسته شد تا دو روز قبل از انجام تست ورزش، مصرف داروهای ضد درد و محرک را متوقف کنند. همه بیماران رضایت آگاهانه کتبی ارائه کردند و همه پروتکل‌ها توسط کالج Ithaca IRB #1017-12Dx2 تأیید شدند. همه شرکت‌کنندگان مقیاس ناتوانی بل [26]، فرم کوتاه{3}} نظرسنجی سلامت [62] و پرسش‌نامه‌های سفارشی را تکمیل کردند. بیماران ME/CFS علاوه بر این، فهرست خستگی چند بعدی را تکمیل کردند [63].

4.2. تست ورزش قلبی ریوی و جمع آوری نمونه ادرار

CPET بر روی یک ارگومتر چرخه ثابت، با پروتکل زیر انجام شد: 3 دقیقه استراحت و به دنبال آن دوچرخه سواری مداوم که در آن بار کاری افزایشی 15 وات در هر دقیقه تمرین تا خستگی ارادی (تقریباً 8 تا 10 دقیقه) افزایش می یابد. نسبت تبادل تنفسی (RER)، که نرخ تولید دی اکسید کربن تقسیم بر میزان مصرف اکسیژن است، اندازه گیری شد تا اطمینان حاصل شود که شرکت کنندگان تست را با تلاش کافی انجام می دهند (RER > 1.1 نشان دهنده حداکثر تلاش است).

تمام نمونه های ادرار در صبح جمع آوری شد: (1) 15-20 دقیقه قبل از CPET و (2) 24 ساعت بعد. ادرار در اواسط جریان در ادرار جمع‌آوری‌کننده‌های استریل جمع‌آوری شد، به صورت جزئی تقسیم شد، برای حذف بقایای سلولی به مدت ۱۰ دقیقه سانتریفیوژ شد و در دمای 80- درجه سانتی‌گراد نگهداری شد. نمونه‌های ادرار تحت یک سیکل انجماد/ذوب برای تفکیک بیشتر قرار گرفتند و نمونه‌ها یک شبه به Metabolon® روی یخ خشک فرستاده شدند.

4.3. سنجش متابولومیک

متابولیت ها با استفاده از پلتفرم متابولومیک جهانی متابولومیک کروماتوگرافی مایع-طیف سنجی جرمی پشت سر هم (LC-MS/MS) در Metabolon® اندازه گیری شدند. روشهای تفصیلی قبلاً توضیح داده شده است [64]. به طور خلاصه، نمونه ها در متانول (نمونه متانول 5:1) استخراج و سپس تبخیر شدند. متابولیت ها در هر نمونه با استفاده از چهار پلت فرم مختلف LC-MS/MS که برای ترکیبات آبدوست و آبگریز بهینه شده بودند و با استفاده از یونیزاسیون مثبت و منفی شناسایی شدند. تمام کروماتوگرافی از یک Waters Acquity با عملکرد فوق العاده بالا (UP)LC و یک حجم تزریق 5 میکرولیتری (با نمونه های بازسازی شده در حلال های مناسب برای هر پلت فرم) استفاده کردند. تمام طیف‌سنجی جرمی با طیف‌سنج‌های جرمی با وضوح بالا/دقیق ThermoScientific Q-Exactive با منابع یونیزاسیون الکترواسپری گرم شده (HESI-II) و تجزیه‌کننده‌های جرمی Orbitrap با وضوح جرمی ۳۵،{10}} با محدوده اسکن 70 تا 1000 متر بر انجام شد. z. نرم افزار اختصاصی Metabolon® برای تطبیق نمونه های تجربی با کتابخانه مرجع استانداردهای شناسایی ردیف 1 که توسط Metabolomics Standards Initiative تعریف شده است، استفاده شد و از ناحیه زیر منحنی برای تعیین مقدار پیک استفاده شد. مقادیر از نظر تعداد مساحت خام نرمال می شوند و همه نمونه ها در یک دسته اجرا شدند، بنابراین اصلاح دسته ای لازم نبود. ترکیبات ناشناخته استانداردی ندارند و مولکول هایی با مشخصات جزئی آنهایی هستند که به طور رسمی بر اساس استانداردی تأیید نشده اند یا استانداردی برای آنها در دسترس نیست، اما Metabolon® به طور منطقی به هویت خود اطمینان دارد.

4.4. پردازش داده ها

داده‌های خام با اسمولالیته برای هر نمونه نرمال‌سازی شدند و داده‌های هر متابولیت در مرکز میانه 1 قرار گرفتند (داده‌های خام از جمله اسمولالیته در فایل تکمیلی S1 موجود است). مقادیر گمشده با حداقل مقدار نسبت داده شد، به جز داروهایی که به عنوان 0 درج شدند. داده ها log10 با یک تبدیل تثبیت کننده واریانس (MetaboanalystR) تبدیل شدند [65،66]. در مجموع 1403 متابولیت در ابتدا اندازه گیری شد. متابولیت ها بر اساس قانون اصلاح شده 80 درصد فیلتر شدند: اگر ترکیبی در حداقل 80 درصد نمونه ها در هر یک از گروه های ME/CFS یا کنترل تشخیص داده شود، شامل می شود [27]. به طور کلی، 1154 متابولیت معیارها را برآورده کردند و در آنالیزهای بعدی گنجانده شدند. تنها تجزیه و تحلیل انجام شده بدون فیلتر کردن، همبستگی با متابولیت های پلاسما بود. نسبت‌های پس از تمرین/پایه برای هر متابولیت در لاگ پایه 10 به عنوان مقدار پس از تمرین منهای مقدار پایه برای هر آزمودنی محاسبه شد. برای ترسیم نمودار آتشفشان، میانگین تغییرات چین لگاریتم (بیماران ME/CFS در مقابل گروه شاهد) با استفاده از تغییر فرمول پایه به لاگ پایه 2 تبدیل شد.

4.5. تجزیه و تحلیل داده ها و آمار

تجزیه و تحلیل آماری تک متغیره برای هر متابولیت با استفاده از یک مدل ترکیبی خطی با اثرات ثابت وضعیت بیماری، نقطه زمانی، سن، و BMI و یک اثر تصادفی از آزمودنی انجام شد (باهوش‌ترین [67] و بسته‌های میانگین [68] R). روش بنجامینی-هوکبرگ (BH) برای تصحیح نرخ کشف کاذب، با q < 0.1 به عنوان آستانه برای معناداری استفاده شد. بسته EnhancedVolcano R برای نمودارهای آتشفشانی استفاده شد [69].

ChemRICH در R برای انجام آنالیز مسیر غیر همپوشانی با زیرمسیرهای تعریف شده توسط Metabolon و ترتیب مسیر استفاده شد [29]. ابزار وب ChemRICH برای انجام تجزیه و تحلیل خوشه‌بندی شباهت شیمیایی [30] استفاده شد. برای آن تجزیه و تحلیل، تنها ترکیباتی که دارای کد SMILES شناخته شده بودند، در مجموع 516 ترکیب گنجانده شدند. برای هر دو تجزیه و تحلیل ChemRICH، آمار غنی‌سازی با استفاده از آزمون کولموگروف-اسمیرنوف انجام شد که از یک برش معنی‌دار p-value استفاده نمی‌کند، بلکه توزیع احتمال را با توزیع احتمال فرضیه صفر مقایسه می‌کند [70]. برای زیرمسیرهای Metabolon®، q < 0.05 به عنوان آستانه برای معنی‌داری و q <0.15 برای خوشه‌های شیمیایی انتخاب شد (تصحیح BH FDR). برای هر دو، همه خوشه‌های زیر آستانه q انتخاب شده نیز 05/0p< داشتند.

غنی‌سازی مسیر و تجزیه و تحلیل توپولوژی با استفاده از ابزار وب Metaboanalyst 5.0 [65]، برای هر دو متابولوم مرجع انسانی KEGG و SMPDB با پارامترهای زیر انتخاب شد: یک آزمون سراسری برای آزمون آمار و مرکزیت بین نسبی به عنوان اندازه گیری اهمیت گره اگر شناسه HMDB ارائه شده توسط Metabolon® با شناسه HMDB در Metaboanalyst مطابقت داشت، ترکیبات در این تجزیه و تحلیل گنجانده شدند. برای ترکیبات تکراری برای یک شناسه HMDB، فقط اولین مورد گنجانده شد. این منجر به 453 ترکیب شامل شد.

خوشه‌بندی آزمودنی‌ها با استفاده از چهار ترکیبی که تفاوت معنی‌داری بین بیماران و گروه‌های کنترل پس از ورزش داشتند، با استفاده از خوشه‌بندی سلسله مراتبی، با فاصله اقلیدسی به عنوان متریک فاصله، و روش "Ward.D2" (بسته R نقشه حرارتی [71) انجام شد. ]).

همبستگی پیرسون بین ادرار و پلاسما برای 727 متابولیت اندازه گیری شده در هر دو بیو سیال در R (بسته Hmisc) انجام شد. مقادیر p برای هر همبستگی با استفاده از آزمون t با این فرضیه صفر که ضریب همبستگی برابر است با 0 محاسبه شد و به دنبال آن تصحیح BH FDR با q < 0.15 به عنوان آستانه معناداری محاسبه شد. برای شکل 8، ترکیبات غربالگری شدند تا با استفاده از روش z-score اصلاح شده، که یک z-score را با استفاده از انحراف مطلق میانه و میانه (بسته R outliers، آستانه z=6) محاسبه می کند، حذف شود.

مگر اینکه غیر از این مشخص شده باشد، تمام تجسم داده ها با استفاده از بسته ggplot2 R انجام شد. اصلاح BH FDR برای همه آنالیزها به جای اصلاح دقیق‌تر Benjamini و Yekutieli FDR انتخاب شد، زیرا تعداد بسیار کمی از ترکیبات خطی بودند (0.75٪ از اهداف دارای ضریب همبستگی پیرسون مقدار مطلق بودند > { {3}}.7).

5. نتیجه گیری ها

به طور کلی، تفاوت‌های قابل‌توجهی در متابولوم ادرار در گروه شاهد سالم و بیماران ME/CFS در پاسخ به چالش CPET در طیف وسیعی از مسیرهای فوق‌العاده و فرعی متابولیک، شامل آمینو اسیدها، لیپیدها، کربوهیدرات‌ها، نوکلئوتیدها، بیگانه‌بیوتیک‌ها و ناشناخته ها. این مسیرها در بسیاری از عملکردهای فیزیولوژیکی از جمله متابولیسم انرژی درگیر هستند. این نشان می‌دهد که بیماران ME/CFS دارای یک اختلال عمومی متابولیک هستند که بخشی از عدم تحمل ورزش و PEM است که در آن دفع متابولیک تغییر یافته یک عامل کمک کننده است. داده‌های ما نشان می‌دهد که متابولیسم افراد کم‌تحرکی که ME/CFS ندارند، دستخوش تغییرات عمده‌ای می‌شوند که به آن‌ها اجازه می‌دهد پس از تلاش بهبود یابند، در حالی که بیماران ME/CFS قادر به ایجاد پاسخ‌های تطبیقی ​​مشابهی نیستند. کار آینده شامل گسترش این مطالعه به یک گروه بسیار بزرگتر است که شامل هر دو جنس برای تأیید این نتایج، بررسی تفاوت های جنسی در متابولوم ادرار، و بررسی اینکه آیا تفاوت های ظریف تری در متابولیت های ادراری در بیماران ME/CFS در ابتدا وجود دارد یا خیر که به طور بالقوه می تواند وجود داشته باشد. کمک به آزمایش تشخیصی برای این بیماری در آینده.

مشارکت نویسنده:مفهوم سازی، AG، KAG و MRH. روش، AG، KAG، YVH و MRH. تجزیه و تحلیل رسمی، KAG، AG و YVH. تحقیقات، KAG، AG و YVH. نوشتن - آماده سازی پیش نویس اصلی، KAG، AG و MRH. نوشتن - بررسی و ویرایش، همه نویسندگان. تجسم، KAG و AG. مدیریت پروژه، MRH; کسب بودجه، MRH همه نویسندگان نسخه منتشر شده نسخه خطی را خوانده و با آن موافقت کرده اند.

منابع مالی:این تحقیق توسط موسسه ملی اختلالات عصبی و سکته مغزی (NINDS)، NIH (U54NS105541) و بنیاد آمار پشتیبانی شده است. مرکز ملی پیشرفت علوم ترجمه NIH بودجه ای برای مرکز علوم بالینی و ترجمه پزشکی Weill Cornell (CTSC) برای نگهداری پایگاه داده REDCap از طریق UL1 TR 002384 فراهم کرد.

بیانیه هیئت بررسی نهادی:این مطالعه بر اساس دستورالعمل‌های اعلامیه هلسینکی انجام شد و توسط هیئت بررسی نهادی کالج ایتاکا، ایتاکا، نیویورک، ایالات متحده آمریکا (پروتکل 1017-12Dx2) و هیئت بازبینی مؤسسه‌ای کالج پزشکی ویل کورنل تأیید شد. پروتکل 1708018518).

بیانیه رضایت آگاهانه:رضایت آگاهانه از همه افراد درگیر در مطالعه اخذ شد.

بیانیه در دسترس بودن داده ها:تمام داده های متابولیت برای هر موضوع در فایل های داده های تکمیلی ارائه شده موجود است.

قدردانی ها:کارل فرانکونی پایگاه داده و بانک زیستی را در دانشگاه کرنل مدیریت کرد. نمونه‌های خون توسط دیوید وانگ در تحقیقات EVMED با حمایت بنیاد Workwell و توسط ایوان فالستین، کارل فرانکونی، لودویک گیلوتو، مادلین مک‌کان، جینیت پاتل، آدام اونیل، الکساندرا ماندارانو، جسیکا مایا، شانون اپلکویست در دانشگاه کرنل تکه‌تکه شدند. از افراد زیر که در غربالگری شرکت‌کنندگان، انجام تست‌های ورزشی، و/یا جمع‌آوری خون و ادرار شرکت کردند، تشکر می‌کنیم: بتسی کلر، جان چیا، جرد استیونز، تیفانی اونگ، و ماریا راسل.

تضاد علاقه:نویسندگان هیچ تضاد منافع را اعلام نمی کنند. تامین کنندگان مالی هیچ نقشی در طراحی مطالعه نداشتند. در جمع آوری، تجزیه و تحلیل یا تفسیر داده ها؛ در نگارش نسخه خطی؛ یا در تصمیم گیری برای انتشار نتایج.

منابع

1. جیسون، لس آنجلس; Mirin، AA به روز رسانی آکادمی ملی پزشکی شیوع ME/CFS و ارقام تأثیر اقتصادی برای محاسبه رشد جمعیت و تورم. خستگی بیومد. رفتار بهداشتی 2021، 9، 9-13. [CrossRef]

2. والدز، AR; هنکاک، EE; آدبایو، اس. کیرنیکی، دی جی؛ پروسکوئر، دی. Attewell، JR; بیتمن، ال. دماریا، ا.، جونیور؛ Lapp، CW; رو، رایانه شخصی؛ و همکاران برآورد شیوع، جمعیت‌شناسی و هزینه‌های ME/CFS با استفاده از داده‌های ادعاهای پزشکی در مقیاس بزرگ و یادگیری ماشینی. جلو. اطفال 2018, 6, 412. [CrossRef] [PubMed]

3. Carruthers، BM; جین، AK; De Meirleir، KL; پترسون، دی.ال. کلیماس، NG; لرنر، AM; Bested، AC; فلور-هنری، پی. جوشی، پ. پاولز، AP; و همکاران انسفالومیلیت میالژیک/سندرم خستگی مزمن: تعریف مورد بالینی، پروتکل های تشخیصی و درمانی. J. سندرم خستگی مزمن. 2003، 11، 7-115. [CrossRef]

4. چو، ال. والنسیا، آی جی; Garvert، DW; مونتویا، JG تخریب ناخوشی پس از تمرین در آنسفالومیلیت میالژیک / سندرم خستگی مزمن: یک بررسی مقطعی بیمار محور. PLoS ONE 2018, 13, e0197811. [CrossRef]

5. استوسمن، بی. ویلیامز، ای. اسنو، جی. گاوین، ا. اسکات، آر. ناث، ا. Walitt, B. خصوصیات بی‌حالی پس از تمرین در بیماران مبتلا به آنسفالومیلیت میالژیک/سندرم خستگی مزمن. جلو. نورول. 2020، 11، 1025. [CrossRef]

6. استیونز، اس. اسنل، سی. استیونز، جی. کلر، بی. روش تست ورزش قلبی ریوی واننس، JM برای ارزیابی عدم تحمل فعالیت در آنسفالومیلیت میالژیک/سندرم خستگی مزمن. جلو. اطفال 2018, 6, 242. [CrossRef]

7. Vanness, JM; اسنل، CR; استیونز، SR ظرفیت قلبی ریوی را در طی بی‌حالی پس از تمرین کاهش داد. J. سندرم خستگی مزمن. 2007، 14، 77-85. [CrossRef]

8. کلر، کارشناسی; پرایور، جی ال. Giloteaux, L. ناتوانی بیماران مبتلا به آنسفالومیلیت میالژیک/سندرم خستگی مزمن در تولید مثل VO(2)peak نشان دهنده اختلال عملکردی است. J. Transl. پزشکی 2014، 12، 104. [CrossRef]

9. Missailidis, D.; آنسلی، اس جی; فیشر، مکانیسم‌های پاتولوژیک روابط عمومی در زمینه آنسفالومیلیت میالژیک/سندرم خستگی مزمن. Diagnostics 2019, 9, 80. [CrossRef]

10. Huth، TK; ایتون فیچ، ن. استاینز، دی. Marshall-Gradisnik، S. مروری سیستماتیک از اختلالات متابولومیک در سندرم خستگی مزمن/آنسفالومیلیت میالژیک/بیماری عدم تحمل فشار سیستمیک (CFS/ME/SEID). J. Transl. پزشکی 2020، 18، 198. [CrossRef]

11. ژرمن، آ. باروپال، DK; لوین، اس ام. هانسون، MR متابولومیک گردش خون جامع در ME/CFS متابولیسم مختل لیپیدهای آسیل و استروئیدها را نشان می دهد. متابولیت‌ها 2020، 10، 34. [CrossRef]

12. ژرمن، آ. راپرت، دی. لوین، اس ام. هانسون، MR پروفایل متابولیک یک گروه کشف آنسفالومیلیت میالژیک/سندرم خستگی مزمن، اختلالاتی را در متابولیسم اسیدهای چرب و لیپید نشان می دهد. مول. Biosyst. 2017، 13، 371-379. [CrossRef]

13. ژرمن، آ. راپرت، دی. لوین، اس ام. هانسون، MR نشانگرهای زیستی آینده نگر از متابولومیک پلاسما آنسفالومیلیت میالژیک/سندرم خستگی مزمن بر عدم تعادل ردوکس در علائم بیماری دلالت دارد. متابولیت‌ها 2018، 8، 90. [CrossRef]

14. یامانو، ای. سوگیموتو، ام. هیرایاما، ا. کومه، اس. یاماتو، م. جین، جی. تاجیما، اس. گودا، ن. ایوای، ک. فوکودا، اس. و همکاران نشانگرهای شاخص سندرم خستگی مزمن با اختلال عملکرد TCA و چرخه اوره. علمی Rep. 2016, 6, 34990. [CrossRef]

15. آرمسترانگ، CW; مک گرگور، NR; شیدی، جی آر. باتفیلد، آی. لب به لب، HL; پروفایل متابولیک Gooley، PR NMR سرم، اختلالات اسید آمینه را در سندرم خستگی مزمن شناسایی می کند. کلین چیم. Acta 2012, 413, 1525-1531. [CrossRef]

16. آرمسترانگ، CW; مک گرگور، NR; لوئیس، DP; لب به لب، HL; Gooley، PR ارتباط میکروبیوتای مدفوع و متابولیت های مدفوع، سرم خون و ادرار در آنسفالومیلیت میالژیک/سندرم خستگی مزمن. متابولومیک 2016، 13، 8. [CrossRef]

17. هول، اف. هول، ا. پترسن، IK; Rekeland، IG; ریسا، ک. آلمه، ک. سورلاند، ک. فوسا، ا. لین، ک. هردر، آی. و همکاران نقشه ای از فنوتیپ های متابولیک در بیماران مبتلا به آنسفالومیلیت میالژیک / سندرم خستگی مزمن. JCI Insight 2021, 6, e149217. [CrossRef]

18. Nagy-Szakal، D. باروپال، DK; لی، بی. چه، ایکس. ویلیامز، BL; Kahn، EJR; اوکایگو، جی. بیتمن، ال. کلیماس، NG; کوماروف، آل. و همکاران بینش در مورد فنوتیپ آنسفالومیلیت میالژیک / سندرم خستگی مزمن از طریق متابولومیک جامع. علمی Rep. 2018, 8, 10056. [CrossRef]

19. مک گرگور، NR; آرمسترانگ، سی دبلیو؛ لوئیس، DP; گولی، PR پس از ورزش با هیپرمتابولیسم، هیپواستیله شدن و تنظیم زدایی متابولیسم پورین در موارد ME/CFS مرتبط است. Diagnostics 2019, 9, 70. [CrossRef]

20. آرمسترانگ، CW; مک گرگور، NR; لوئیس، DP; لب به لب، HL; پروفایل متابولیک گولی، روابط عمومی متابولیسم انرژی و مسیرهای استرس اکسیداتیو غیرعادی را در بیماران مبتلا به سندرم خستگی مزمن نشان می دهد. متابولومیک 2015، 11، 1626-1639. [CrossRef]

21. Fluge, O.; ملا، او. برولاند، او. ریسا، ک. Dyrstad، SE; آلمه، ک. Rekeland، IG; ساپکوتا، دی. Rosland، GV; فوسا، ا. و همکاران پروفایل متابولیک نشان دهنده اختلال در عملکرد پیروات دهیدروژناز در انسفالوپاتی میالژیک / سندرم خستگی مزمن است. JCI Insight 2016, 1, e89376. [CrossRef] [PubMed]

22. Naviaux, RK; Naviaux, JC; لی، ک. روشن، AT; آلینیک، WA; وانگ، ال. باکستر، ا. ناتان، ن. اندرسون، دبلیو. گوردون، E. ویژگی های متابولیک سندرم خستگی مزمن. Proc. Natl. آکادمی علمی USA 2016, 113, E5472–E5480. [CrossRef] [PubMed]

23. جونز، ام جی; کوپر، ای. امجد، س. گودوین، CS; بارون، جی ال. چالمرز، RA اسیدهای آلی و اسیدهای آمینه ادراری و پلاسما در سندرم خستگی مزمن. کلین چیم. Acta 2005, 361, 150-158. [CrossRef] [PubMed]

24. Niblett، SH; پادشاه، KE; دانستان، RH; کلیفتون-بلیگ، پی. هاسکین، لس آنجلس؛ رابرتز، TK; Fulcher، GR; مک گرگور، NR; Dunsmore, JC; لب به لب، HL; و همکاران ناهنجاری های هماتولوژیک و دفع ادرار در بیماران مبتلا به سندرم خستگی مزمن. انقضا Biol. پزشکی 2007، 232، 1041-1049. [CrossRef] [PubMed]

25. ژرمن، آ. ژیلوتو، ال. مور، جنرال الکتریک؛ لوین، اس ام. چیا، جی.کی. کلر، کارشناسی; استیونز، جی. فرانکونی، سی جی; مائو، ایکس. Shungu، DC; و همکاران متابولومیک پلاسما نشان دهنده اختلال در پاسخ و ریکاوری پس از تمرین حداکثری در آنسفالومیلیت میالژیک/سندرم خستگی مزمن است. JCI Insight 2022, 7, e157621. [CrossRef]

26. بل، DS راهنمای پزشک برای سندرم خستگی مزمن. درک، درمان و زندگی با CFIDS؛ شرکت انتشارات آدیسون-وسلی: ریدینگ، MA، ایالات متحده آمریکا، 1994.

27. یانگ، ج. ژائو، ایکس. لو، ایکس. لین، ایکس. Xu, G. یک استراتژی پیش پردازش داده برای متابولومیک برای کاهش اثر پوشش در تجزیه و تحلیل داده ها. جلو. مول. Biosci. 2015، 2، 4. [CrossRef]

28. بنیامینی، ی. Hochberg, Y. کنترل نرخ کشف نادرست: رویکردی عملی و قدرتمند برای آزمایش چندگانه. JR Stat. Soc. سر. B 1995, 57, 289-300. [CrossRef]

29. Barupal، DK; فن، اس. Fiehn، O. یکپارچه سازی رویکردهای بیوانفورماتیک برای تفسیر جامع مجموعه داده های متابولومیک. Curr. نظر. بیوتکنول. 2018، 54، 1-9. [CrossRef]

30. Barupal، DK; Fiehn، O. تجزیه و تحلیل غنی سازی شباهت شیمیایی (ChemRICH) به عنوان جایگزینی برای نقشه برداری مسیر بیوشیمیایی برای مجموعه داده های متابولومیک. علمی Rep. 2017, 7, 14567. [CrossRef]

31. گومن، جی جی; ون د گیر، SA; د کورت، اف. van Houwelingen، HC یک آزمایش جهانی برای گروه‌های ژن: ارتباط آزمایش با یک نتیجه بالینی. بیوانفورماتیک 2004، 20، 93-99. [CrossRef]

32. روزیاتو، ا. تنوری، ال. کاسکانت، ام. د آتائوری کارولا، روابط عمومی; مارتینز دوس سانتوس، VAP; Saccenti، E. از همبستگی به علت: تجزیه و تحلیل داده های متابولومیک با استفاده از رویکردهای زیست شناسی سیستم ها. متابولومیک 2018، 14، 37. [CrossRef]

33. Cardounel، AJ; کوی، اچ. سامویلوف، آ. جانسون، دبلیو. کرنز، پی. تسای، آل. برکا، وی. Zweier، JL شواهدی برای نقش پاتوفیزیولوژیک متیل آرژینین های درون زا در تنظیم تولید NO اندوتلیال و عملکرد عروقی. جی بیول. شیمی. 2007، 282، 879-887. [CrossRef]

34. چاندراسخاران، UM; وانگ، ز. وو، ی. ویلسون تانگ، WH; هازن، اس ال. وانگ، اس. Elaine Husni, M. سطوح بالای دی متیل آرژینین متقارن پلاسما و افزایش فعالیت آرژیناز به عنوان شاخص های بالقوه بیماری قلبی عروقی در آرتریت روماتوئید. آرتریت Res. آنجا 2018, 20, 123. [CrossRef]

35. Siroen، MP; Teerlink، T. Nijveldt، RJ; پرینس، HA; ریچر، ام سی; ون لیوون، PA اهمیت بالینی دی متیل آرژینین نامتقارن. آنو. کشیش نوتر. 2006، 26، 203-228. [CrossRef]

36. برتینات، ر. ویالوبوس-لابرا، آر. هافمن، ال. Blauensteiner، J. سپولودا، ن. Westermeier، F. کاهش تولید NO در سلول های اندوتلیال در معرض پلاسما از بیماران ME / CFS. Vasc. داروسازی 2022, 143, 106953. [CrossRef]

37. برازنان، JT; برازنان، ME اسیدهای آمینه حاوی گوگرد: یک مرور کلی. J. Nutr. 2006، 136، 1636S–1640S. [CrossRef]

38. فرناندز-گارسیا، جی سی. مارتینز-سانچز، MA; برنال لوپز، MR; Muñoz-Garach، A.; مارتینز-گونزالس، MA; فیتو، ام. سالاس-سالوادو، جی. تیناهونز، اف جی. راموس-مولینا، بی. اثر یک برنامه مداخله سبک زندگی با رژیم غذایی مدیترانه ای محدود با انرژی و ورزش بر متابولوم پلی آمین سرم در افراد در معرض خطر بالای بیماری قلبی عروقی: یک کارآزمایی بالینی تصادفی شده. صبح. جی. کلین. Nutr. 2020، 111، 975–982. [CrossRef]

39. وانگ، دبلیو. ژانگ، اچ. ژو، جی. ژانگ، ال. ژانگ، دبلیو. وانگ، ال. لو، اف. لی، اچ. بای، اس. لین، ی. و همکاران تمرینات ورزشی با بازگرداندن مخزن پلی آمین میوکارد، پیش شرط ایسکمیک را در قلب موش های مسن حفظ می کند. اکسید. پزشکی سلول. لانگف. 2014، 2014، 457429. [CrossRef]

40. بلومسترند، ای. الیسون، جی. کارلسون، هنگ کنگ؛ Kohnke, R. آمینو اسیدهای شاخه دار آنزیم های کلیدی در سنتز پروتئین را پس از تمرین بدنی فعال می کنند. J. Nutr. 2006، 136، 269S–273S. [CrossRef]

41. نیوشلم، پ. استنسون، ال. سولووچی، ام. سومایو، آر. Krause, M. 1.{2}}متابولیسم اسید آمینه. در بیوتکنولوژی جامع، ویرایش دوم؛ Moo-Young، M.، Ed. مطبوعات آکادمیک: برلینگتون، ON، کانادا، 2011; صص 3-14. [CrossRef]

42. لی، اس. گائو، دی. جیانگ، Y. عملکرد، تشخیص و تغییر متابولیسم آسیل کارنیتین در سرطان کبد. متابولیت‌ها 2019، 9، 36. [CrossRef]

43. براون، تی پی; Marks, DL تنظیم توده عضلانی توسط گلوکوکورتیکوئیدهای درون زا. جلو. فیزیول. 2015، 6، 12. [CrossRef] [PubMed]

44. Furman، BL مینرالوکورتیکوئیدها. در xPharm: مرجع جامع فارماکولوژی؛ Enna, SJ, Bylund, DB, Eds. الزویر: نیویورک، نیویورک، ایالات متحده آمریکا، 2007; پ. 1. [CrossRef]

45. کاویانی، ب. لیدبری، BA; شلوفل، آر. فیشر، روابط عمومی؛ Missailidis، D.; آنسلی، اس جی; دهحقی، م. هنگ، بی. Guillemin، GJ آیا مسیر کینورنین می تواند قطعه کلیدی گم شده از پازل پیچیده آنسفالومیلیت میالژیک/سندرم خستگی مزمن (ME/CFS) باشد؟ سلول. مول. زندگی علمی. 2022, 79, 412. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Kossman، DA; ویلیامز، نیوجرسی؛ Domchek، SM; کورزر، ام اس؛ استاپفر، جی. ورزش Schmitz، KH سطوح استروژن و پروژسترون را در زنان یائسه با خطر بالای سرطان سینه کاهش می دهد. J. Appl. فیزیول. 2011، 111، 1687-1693. [CrossRef] [PubMed]

47. د سوزا، ام جی; ون هیست، جی. Demers، LM; لاسلی، BL کمبود فاز لوتئال در دوندگان تفریحی: شواهدی برای وضعیت هیپو متابولیک. جی. کلین. اندوکرینول. متاب. 2003، 88، 337-346. [CrossRef]

48. موکرجی، ک. Edgett، BA; باروز، HW; کاسترو، سی. گریفین، جی ال. Schwertani، AG; گورد، بی جی; فانک، سی دی رونوشت خون کامل و متابولومیک ادراری برای تعریف مسیرهای بیوشیمیایی تطبیقی ​​تمرینات با شدت بالا در ورزشکاران استادکار 50–{3}} ساله. PLoS ONE 2014, 9, e92031. [CrossRef]

49. شرانر، دی. کاستنمولر، جی. شونفلدر، ام. رومیش-مارگل، دبلیو. Wackerhage، H. تغییرات غلظت متابولیت در انسان پس از یک دوره ورزش: مروری سیستماتیک بر مطالعات متابولومیک ورزش. پزشکی ورزشی باز 2020، 6، 11. [CrossRef]

50. کیستنر، اس. ریست، ام جی; دورینگ، ام. دور، سی. نویمان، آر. هارتل، اس. Bub، A. یک رویکرد مبتنی بر NMR برای شناسایی متابولیت های ادراری مرتبط با ورزش حاد بدنی و آمادگی قلبی تنفسی در انسان های سالم-نتایج مطالعه KarMeN. متابولیت‌ها 2020، 10، 212. [CrossRef]

51. کوراتسونه، اچ. یاماگوتی، ک. تاکاهاشی، م. میساکی، اچ. تاگاوا، س. Kitani، T. کمبود آسیل کارنیتین در سندرم خستگی مزمن. کلین آلوده کردن دیس 1994، 18 (ضمیمه 1)، S62–S67. [CrossRef]

52. جونز، ام جی; گودوین، CS; امجد، س. چالمرز، RA پلاسما و کارنیتین ادرار و آسیل کارنیتین در سندرم خستگی مزمن. کلین چیم. Acta 2005, 360, 173-177. [CrossRef]

53. ژانگ، ج. نور، AR؛ Hoppel، CL; کمبل، سی. چندلر، سی جی; برنت، دی جی؛ سوزا، EC; Casazza، GA; هیوگن، RW; کیم، NL; و همکاران آسیل کارنیتین ها به عنوان نشانگرهای پارتیشن بندی سوخت مرتبط با ورزش، متابولیسم زنوم و سیگنال های بالقوه به نورون های آوران عضلانی. انقضا فیزیول. 2017، 102، 48-69. [CrossRef]

54. کاستا، سی جی; Guerand، WS; Struys، EA; Holwerda، U. ده برینک، اچ جی; تاوارس دی آلمیدا، آی. دوران، م. Jakobs, C. تجزیه و تحلیل کمی آسیل گلیسین های ادرار برای تشخیص نقص بتا اکسیداسیون با استفاده از GC-NCI-MS. جی فارم. Biomed. مقعدی 2000، 21، 1215-1224. [CrossRef]

55. مایا، ج. لدی، اس ام. Gottschalk، CG; پترسون، دی.ال. هانسون، MR تغییر اکسیداسیون اسیدهای چرب در جمعیت لنفوسیتی آنسفالومیلیت میالژیک/سندرم خستگی مزمن. بین المللی جی. مول. علمی 2023، 24، 2010. [CrossRef]

56. ویلکینسون، دی جی; اسمیتون، نیوجرسی؛ وات، PW متابولیسم آمونیاک، مغز و خستگی. بازدید مجدد از لینک Prog. نوروبیول. 2010، 91، 200-219. [CrossRef]

57. چن، اس. مینگیشی، ی. هاسومورا، تی. Shimotoyodome، A.; Ota, N. دخالت متابولیسم آمونیاک در بهبود عملکرد استقامتی توسط کاتچین های چای در موش. علمی 2020، 10، 6065. [CrossRef]

58. پل، بی.دی. Sbodio، JI; اسنایدر، متابولیسم SH سیستئین در هموستاز ردوکس عصبی. Trends Pharmacol. علمی 2018، 39، 513-524. [CrossRef]

59. نکیلیزا، ع. پارکس، ام. Cseresznye، A. اوبرلین، اس. ایوانز، جی. دارسی، تی. Aenlle، K. نیدوسپیال، دی. مولان، م. کرافورد، اف. و همکاران پروفایل لیپیدی پلاسما اختصاصی جنس بیماران ME/CFS و ارتباط آنها با درد، خستگی و علائم شناختی. J. Transl. پزشکی 2021، 19، 370. [CrossRef]

60. اونیل، ای جی; شیشه، KA; Emig, CJ; Vitug، AA; هنری، اس جی. Shungu، DC; مائو، ایکس. لوین، اس ام. هانسون، بررسی MR سطح آنتی بادی ضد پاتوژن در آنسفالومیلیت میالژیک/سندرم خستگی مزمن. پروتئومز 2022، 10، 21. [CrossRef]

61. تجزیه و تحلیل ضعف پس از تمرین با استفاده از CPET دو روزه در افراد مبتلا به ME/CFS.

62. Ware, JE, Jr. Sherbourne, CD The MOS 36-مورد نظرسنجی سلامت فرم کوتاه (SF-36). I. چارچوب مفهومی و انتخاب آیتم. پزشکی مراقبت 1992، 30، 473-483. [CrossRef]

63. اسمتس، EM; گارسن، بی. بونکه، بی. De Haes، JC پرسشنامه خستگی چند بعدی (MFI) کیفیت روانسنجی یک ابزار برای ارزیابی خستگی. جی روانی. Res. 1995، 39، 315-325. [CrossRef]

64. فورد، ال. کندی، AD; گودمن، KD; پاپان، کی ال. ایوانز، AM; میلر، LAD; وولف، جی. ویگز، BR; لنون، ​​جی جی؛ السی، اس. و همکاران دقت یک پلت فرم پروفایل متابولومیک بالینی برای استفاده در شناسایی خطاهای ذاتی متابولیسم. J. Appl. آزمایشگاه. پزشکی 2020، 5، 342-356. [CrossRef]

65. پانگ، ز. چونگ، جی. ژو، جی. د لیما مورایس، DA; چانگ، ال. بارت، ام. گوتیه، سی. ژاک، پی. لی، اس. Xia, J. MetaboAnalyst 5.0: کاهش شکاف بین طیف خام و بینش عملکردی. Nucleic Acids Res. 2021، 49، W388–W396. [CrossRef] [PubMed]

66. دوربین، BP; هاردین، جی اس. هاوکینز، دی.م. Rocke, DM یک تبدیل تثبیت کننده واریانس برای داده های ریزآرایه بیان ژن. بیوانفورماتیک 2002، 18 (ضمیمه 1)، S105–S110. [CrossRef] [PubMed]

67. کوزنتسووا، ا. Brockhoff، PB; بسته کریستنسن، RHB lmerTest: آزمایش‌ها در مدل‌های جلوه‌های ترکیبی خطی. J. Stat. نرم افزار 2017، 82، 1-26. [CrossRef]

68. Lenth, R. Emmeans: Estimated Marginal Means, aka Least-Squares Means, 1.8.2; پکیج R. 2022.

69. بلیغه، ک. رعنا، س. Lewis, M. EnhancedVolcano: Publication-Ready Volcano Plots with Enhanced Coloring and Labeling, Version 1.16.0; پکیج R. 2022.

70. اسمیرنوف، NV در مورد برآورد اختلاف بین منحنی های تجربی توزیع برای دو نمونه مستقل. گاو نر ریاضی. دانشگاه Moscou 1939, 2, 3-14.

71. Kolde, R. Pheatmap: Pretty Heatmaps, 1.0.12; پکیج R. 2019.

سلب مسئولیت/یادداشت ناشر:اظهارات، نظرات، و داده های موجود در همه نشریات صرفاً متعلق به نویسنده(ها) و مشارکت کننده(ها) است و نه MDPI و/یا ویرایشگر(ها). MDPI و/یا ویرایشگر(های) مسئولیت هرگونه آسیب به افراد یا دارایی ناشی از هر ایده، روش، دستورالعمل، یا محصولاتی را که در محتوا ذکر شده است، سلب می‌کنند.

【ایمیل تماس】: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501