سیستانچ برای درمان التهاب و بیماری کلیوی: علت نقش بیماریزای التهاب در درگیری کلیه در سیستینوپاتی چیست؟

مخاطب:joanna.jia@wecistanche.com

تعامل بین گالکتین-3 و سیستینوزین نقش بیماریزای التهاب را در درگیری کلیه سیستینوز آشکار می کند.

تاتیانا لوبری^1,2 و همکاران

التهابدر پاتوژنز بسیاری از اختلالات نقش دارد. با این حال، مکانیسم های اساسی اغلب ناشناخته هستند. در اینجا، ما تست می کنیم که آیاسیستینوز، پروتئینی که درسیستینوزتنظیم کننده حیاتی گالکتین است^-3، عضوی از خانواده پروتئین های اتصال دهنده ب-گالاکتوزیداز، در طولالتهاب. سیستینوزیک اختلال ذخیره لیزوزومی است و علیرغم بیان همه جا حاضر سیستینوز،کلیهارگان اصلی تحت تأثیر این بیماری است.سیستینوزمشخص شد که محلی سازی لیزوزومی و تخریب گالکتین را افزایش می دهد-3. در Ctns^–/–موش، مدل موشسیستینوز، گالکتین-3 بیش از حد بیان می شودکلیه. عدم وجود گالکتین-3 در موش‌های سیستینوز عملکرد و ساختار پاتولوژیک کلیه را بهبود می‌بخشد و نفوذ ماکروفاژ/مونوسیت را در کلیه Ctns کاهش می‌دهد.^–/–Gal3^–/–موش ها در مقایسه با Ctns^–/– موش. این داده‌ها قویاً نشان می‌دهند که گالکتین-3 واسطه استالتهابدرگیرکلیهپیشرفت بیماری در سیستینوز بعلاوه، گالکتین{0}} با سیتوکین پیش التهابی، پروتئین مونوسیت شیمی جذب کننده، که جذب مونوسیت ها/ماکروفاژها را تحریک می کند، تعامل دارد و ثابت شد که به طور قابل توجهی در سرم Ctns-/- موش افزایش یافته است. و همچنین بیماران مبتلا بهسیستینوز. بنابراین، یافته‌های ما نقش جدیدی را برای تعامل سیستینوز و گالکتین-3 در التهاب نشان می‌دهد و توضیح مکانیکی بیشتری برایکلیهبیماری سیستینوز این ممکن است منجر به شناسایی اهداف دارویی جدید شودسیستینوزپیشرفت

کلید واژه ها:بیماری مزمن کلیوی; سیستینوز; گالکتین-3;التهاب; پروتئین جذب کننده شیمیایی مونوسیت-1

سیستانچ می تواند بیماری مزمن کلیه و سیستینوز را درمان کند

علت اصلی التهاب این است که اکسید نیتریک می تواند منجر به تولید سلول های التهابی شود.سیستانچیک داروی گیاهی چینی با ارزش است. ترکیبات فعال آن می تواند ترشح نیتریک اکسید را مهار کرده و در پیشگیری و درمان التهاب و بیماری کلیوی نقش داشته باشد.

بیانیه ترجمه

علیرغم درمان، بیماران هنوز به مرحله نهایی نارسایی کلیه پیشرفت می کنند. در این مطالعه نشان دادیم که عدم وجودسیستینوزمنجر به اختلال در تجزیه لیزوزومی گالکتین-3 (Gal-3) می‌شود که منجر بهالتهابو پیشرفتبیماری مزمن کلیویکه درسیستینوز. این یافته‌ها دیدگاه‌های جدیدی را در مورد اهداف درمانی بالقوه باز می‌کند که می‌تواند انحطاط کلیه را در بیماران مبتلا به این بیماری محدود یا به تاخیر بیندازد.سیستینوز. به این ترتیب، داروهای ضد التهابی و مهارکننده‌های گال، مانند داروهای ضد التهابی غیر استروئیدی یا ایندومتاسین ممکن است پاتوژنز کلیه را در سیستینوزیس بهبود بخشند.

التهابپاسخ حاد طبیعی ارگانیسم به آسیب یا عفونت است،¹اما مزمنالتهاببا آسیب بافت همراه است. در مورد بیماری‌های مزمن مانند دیابت، بافت‌های آسیب‌دیده سیستم ایمنی را فعال می‌کنند که منجر به پاسخ التهابی مداوم و در نهایت تخریب بافت می‌شود.² سیتوکین ها تعدیل کننده های کلیدی هستندالتهابو قادر به فعال کردن یا حل کردن هستندالتهابفرآیند.3 در بیماران مبتلا بهبیماری مزمن کلیوی(CKD)، غلظت پلاسمایی سیتوکین ها (اینترلوکین [IL]{0}} و فاکتور نکروز تومور-a) والتهابنشانگرها (پروتئین واکنشی C، IL-6، هیالورونان و نئوپترین) با پیشرفت به مرحله نهایی بیماری کلیوی مرتبط هستند. .

سیستینوزیک بیماری متابولیک اتوزومال مغلوب است که به خانواده اختلالات ذخیره لیزوزومی تعلق دارد و با تجمع سیستین در تمام اندام ها مشخص می شود.⁵ ژن معیوب درسیستینوزسیستینوز، سیستینوز، سیستین/پروتون همراه لیزوزومی را کد می کند.^6,7 اگرچه CTNS در همه جا بیان می شود،کلیهاولین عضوی است که در افراد مبتلا بهسیستینوز. بیماران معمولاً در سال اول زندگی خود با سندرم فانکونی که با اختلالات شدید مایعات و الکترولیت ها، رشد ضعیف و راشیتیسم مشخص می شود، مراجعه می کنند.⁸CKD متعاقباً ایجاد می شود، که به مرحله نهایی بیماری کلیوی پیشرفت می کند و نیاز داردکلیهپیوند. تجمع سیستین در تمام بافت ها در نهایت منجر به اختلال عملکرد چند اندام می شود. بیماران فوتوفوبیا و کوری، کم کاری تیروئید، هیپوگنادیسم، دیابت، میوپاتی و زوال سیستم عصبی مرکزی را تجربه می کنند.⁹ در پس‌زمینه C57BL/6، یک مدل موش حذفی (Ctns^–/–) 10 فنوتیپ کلیه بیماران سیستینوز را تکرار می کند،¹¹ و همچنین رسوب کریستال های سیستین در قرنیه¹²و اختلال در عملکرد تیروئید¹³

در مطالعه حاضر، نقش جدیدی را برایسیستینوزکه درالتهاباز طریق تعامل با گال-3. گال{1}} عضوی از خانواده پروتئین های اتصال دهنده لکتین و ب-گالاکتوزید است ²¹ و در عملکردهای بیولوژیکی متعددی از جمله نقش داردالتهاب.²²در چارچوبکلیهنشان داده شد که مهار گال{0}} بیان نشانگرهای پیش التهابی و فیبروز کلیه را کاهش می دهد و از کاهش میزان فیلتراسیون گلومرولی در مدل های هیپرآلدوسترونیسم، فشار خون بالا یا چاقی جلوگیری می کند.^23–26در اینجا ما شواهدی ارائه می دهیم که درسیستینوز، در غیابسیستینوزمنجر به بیان بیش از حد Gal-3 درکلیه هاافزایش انفیلتراسیون ماکروفاژها و پیشرفت CKD. علاوه بر این، ما پروتئین شیمی‌جذب مونوسیتی-1 (MCP{1}}) را به‌عنوان یک واسطه بالقوه شناسایی می‌کنیم و اهداف ژنی جدیدی را برای درمان دارویی آشکار می‌کنیم. همکاران با استفاده از طیف سنجی جرمی کمی، سگ مدین داربیکلیهسلول‌های (MDCK) با یک ساختار لنتی ویروسی برای بیان پایدار پروتئین فیوژن سیستینوز-سبز پروتئین فلورسنت FL (GFP) تبدیل شدند. علاوه بر 9 زیر واحد Hþ آدنوزین تری فسفاتاز نوع واکوئولی که قبلا منتشر شده بود،¹⁹گال-3 به عنوان یکی از پروتئین هایی که با آن در تعامل است شناسایی شدسیستینوز(شکل 1a). این برهمکنش بیشتر با رسوب همزمان ایمنی و سپس وسترن بلات تایید شد (شکل 1b و c). علاوه بر این، ما نشان دادیم که تعامل بین Gal-3 وسیستینوزتوسط دامنه تشخیص کربوهیدرات Gal{0}} (CRD) که در دم C ترمینال پروتئین قرار دارد، واسطه شد. این برهمکنش توسط تیودیگالاکتوزید، یک مهارکننده قوی برهمکنش‌های گالکتین-کربوهیدرات، مهار شد (شکل 1d). مانند همه گالکتین‌ها، Gal{4}} میل ترکیبی با پروتئین‌های گلیکوزیله دارد، بنابراین این احتمال وجود دارد که تعامل با Gal{6}} از طریق قسمت گلیکوزیله سیستینوز واقع در دم N ترمینال داخل لیزوزومی پروتئین رخ دهد.²⁷

سیستینوزین محلی سازی و تخریب لیزوزومی Gal{0}} را افزایش می دهد

برای تأیید محلی‌سازی لیزوزومی بالقوه Gal-3 هنگام تعامل باسیستینوزما نشان دادیم که Gal{0}}، مانند کاتپسین D (یک پروتئاز درون لیزوزومی)، توسط پروتئیناز K از هضم محافظت می‌شود، در حالی که هر دو پروتئین زمانی که لیزوزوم‌ها با تریتون X نفوذپذیر شدند هضم شدند (شکل 2a و مکمل شکل S1). داده های مشابهی در لیزوزوم های جدا شده از کبد موش به دست آمد که محلی سازی لیزوزومی Gal{4}} را در داخل بدن تأیید می کند (شکل 2b و c). به دلیل عدم وجود آنتی بادی قابل اعتماد برای تشخیصسیستینوز، رنگ آمیزی ایمنی در انجام شدسیستینوز-GFP-خطوط سلولی MDCK را با آنتی بادی ضد گال-3 بیان می‌کنند. وجود Gal{2}} را در لومن لیزوزوم ها تأیید کرد، در حالی که سیستینوز-GFP و Lamp{4}} (یک پروتئین گذرنده لیزوزومی) فقط در غشای وزیکول ها یافت شدند (شکل 2d).

برای بررسی اگرسیستینوزیندر قاچاق Gal{0}} شرکت داشت، ما پویایی هر دو را تجزیه و تحلیل کردیمسیستینوزو Gal{0}}-وزیکول‌های مثبت با استفاده از میکروسکوپ فلورسانس FL با بازتاب داخلی سلول‌های زنده دو رنگ در فیبروبلاست‌های جنینی موش (MEFs) از نوع وحشی (WT) و Ctns^–/–موش هایی که هم CTNS-DsRed و هم Gal-3-GFP را بیان می کنند. تحلیل ما این را تایید کردسیستینوزو Gal{0}} در Ctns–/– MEFs تحت هم‌زبانی واقعی قرار می‌گیرند که توسط توزیع مکانی-زمانی مشابه این مولکول‌ها در کل منطقه میکروسکوپ فلورسانس FL بازتاب داخلی (شکل 2e) تأیید شده است. داده ها در WT MEFs مشابه بودند (داده ها نشان داده نشده است). علاوه بر این، هنگامی که MEFهای ترانسفکت شده فقط با Gal{- 3-GFP مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند، Gal-3-GFP در سیتوپلاسم یافت شد و برخلاف ترانسفکشن مشترک با CTNS-DsRed، ساختار وزیکولی مشخصی مشاهده نشد. داده ها نشان داده نشده است).

این داده‌ها در سلول‌های 293T تأیید شدند، که در آن‌ها سیگنال GFP قوی در سیتوپلاسم در سلول‌هایی مشاهده شد که فقط Gal-3–GFP را بیان می‌کردند، در حالی که در سلول‌هایی که هر دو Gal{-3–GFP وسیستینوزین-DsRed، Gal{1}}-GFP عمدتاً در لیزوزوم‌های بیانگر سیستینوز-DsRed موضعی بود (شکل 3a). علاوه بر این، کمی سازی بیان پروتئین Gal{4}} در سلول های ترانسفکت شده با Gal-3–GFP به تنهایی یا Gal- 3–GFP و CTNS-DsRed، و Gal-3–GFP و DsRed به‌عنوان شاهد، پروتئین‌های Gal{9}-GFP به‌طور قابل‌توجهی در سلول‌هایی که با CTNS-DsRed هم ترانسفکت شده بودند در مقایسه با سلول‌های ترانسفکت‌شده با Gal{-3-GFP به تنهایی یا هم‌ترانزکت‌شده با DsRed نشان داد (شکل 3b). در مجموع، این نتایج نشان می دهد کهسیستینوزینمحلی سازی لیزوزومی و تخریب Gal-3 را افزایش می دهد. نشان داده شد که سیستینوزین در CMA دخیل است. پروتئین 70 کیلو دالتون شوک حرارتی (Hsc70) با کمک به باز شدن و انتقال پروتئین های سوبسترا از طریق غشاء به لومن لیزوزومی به روشی وابسته به LAMP2A در CMA شرکت می کند. {8}} پیشنهاد شد که توسط CMA تجزیه شود، ما محل یابی Gal{10}} را نسبت به Hsc70 در MEFهای سیستینوز بررسی کردیم. تجزیه و تحلیل میکروسکوپ کانفوکال کلکالیزاسیون Gal{12}}–GFP در ساختارهای مثبت Hsc70- را در هر دو WT (داده‌ها نشان داده نشده است) و Ctns تأیید کرد.^–/–سلول‌ها (شکل 3c)، از انتقال همزمان Gal-3 با Hsc70 پشتیبانی می‌کنند و نشان می‌دهند که درونی‌سازی لیزوزومی، اما نه تشخیص Gal{-3 توسط همراهان معیوب است.سیستینوز.

Gal-3 در التهاب کلیه در Ctns نقش دارد^–/–موش

برای مطالعه نقش گال-3 درسیستینوزدر داخل بدن، ما یک مدل موش دوگانه حذفی ایجاد کردیم که در هر دو کمبود وجود داشتسیستینوزینو گال-3 (Ctns^–/–گال-3^–/–موش). WT، Ctns^–/–و گال-3^–/–از موش ها به عنوان گروه شاهد استفاده شد. در C57BL/6 Ctns^–/–در موش‌ها، ناهنجاری‌های کلیوی در حدود 10 ماهگی ظاهر می‌شوند. بنابراین، مطالعات در 8 تا 9 ماهگی انجام شد.کلیهناهنجاری ها شروع به شناسایی می کنند و در 12 تا 15 ماهگی که ناهنجاری های کلیوی پیشرفت کرده است. از آنجا که محتوای سیستین در Ctn های نر و ماده متفاوت بود^–/– کلیه ها، آنها به طور جداگانه مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. اگر محتوای سیستین با افزایش سن در هر دو ژنوتیپ افزایش یابد، تفاوت معنی‌داری در کلیه‌های نر و ماده بین Ctns–/– Gal-3–/– موش و Ctns مشاهده نشد.^–/– موش ها در 8 تا 9 ماهگی و 12 تا 15 ماهگی (شکل 4a).

عملکرد کلیه در سرم و ادرار بررسی شد و تفاوت معنی داری بین WT و Ctns مشاهده نشد^–/–موش ها در 8 تا 9 ماهگی (داده ها نشان داده نشده است)، اما در 12 تا 15 ماهگی، Ctns^–/–موش ها سطح کراتینین و اوره سرم به طور قابل توجهی بالاتری را در مقایسه با موش های WT نشان دادند. جالب اینجاست که Ctns^–/–گال-3^–/–موش ها عملکرد کلیوی بهبود یافته را در مقایسه با Ctns نشان دادند^–/–موش‌ها در 12 تا 15 ماهگی، با کراتینین سرم پایین (P <0.05) و اوره (P <0.05؛ جدول 1).

مطالعات بافت شناسی موش 8- تا 9-ماهگی و 12- تا 15-ماهگیکلیهمقاطع نشان دهنده وجود ناهنجاری های شدید در Ctns بود^–/– کلیه هااز جمله آتروفی لوله ای، گلومرول های جمع شده و ارتشاح تک هسته ای. تجزیه و تحلیل کور مقاطع کلیه، میزان آسیب قشر مغز را از 1 (ساختار بافت حفظ شده) تا 6 تغییر داد. میانگین امتیاز برای Ctns^–/–موش ها 2.64 - 0.36 در 9 ماهگی (7 ¼ n) و 4.12 0.37 در سن 12 تا 15 ماهگی (n ¼ 16) بودند. در کلیه های Ctns^–/–گال-3^–/–موش‌ها در همان سن، این ناهنجاری‌ها به طور قابل‌توجهی کمتر گسترده بودند: 1.62 - 0.11 در 9 ماهگی (n ¼ 21؛ P <0.05، mann-whitney="" t-="" تست)="" و="" 3.{10}}.22="" در="" 12="" تا="" 15="" ماه="" (n="" ¼="" 33؛="" p=""><0.05، من="" ویتنی="" t-test)="" (شکل="" 4b="" و="" شکل="" تکمیلی="" s2).="" علاوه="" بر="" این،="" درصدی="" از="" آتروفی="" لوله‌ای="" به="" هر="" بافت="" و="" میانگین="" برای="" ctns="" اختصاص="" داده="">^–/–موش و Ctns^–/–گال-3^–/–موش ها در 12 تا 15 ماهگی به ترتیب 66 درصد و 42 درصد بودند (01/0 ¼ 0). علاوه بر این، تفاوت قابل توجهی بین Ctns وجود دارد^–/–و Ctns^–/– گال-3^–/– کلیهبرش‌ها وجود چند نفوذ تک هسته‌ای در Ctns بود^–/–گال-3^–/–بخش، در حالی که نفوذ سنگین به طور مداوم در Ctns مشاهده شد^–/– کلیه(شکل 4 ب).

ما انفیلترات تک هسته ای مشاهده شده با بررسی بافت شناسی در Ctns 8- تا 9-ماهگی را مشخص کردیم.^–/– کلیه هابه عنوان ماکروفاژها/مونوسیت ها با رنگ آمیزی همزمان با CD68 و CD45 و CD68 و کلاس سازگاری بافتی اصلی II (شکل تکمیلی S3)، اما نه با CD68 و CD163، که نشان می دهد این ماکروفاژها دارای نمایه پیش التهابی مانند M{7}} هستند. 33 کمیت سلول‌های CD مثبت{10}} ماکروفاژها/مونوسیت‌های کمتری را در WT، Gal{11}} نشان داد^–/–، و Ctns^–/–گال-3^–/– کلیه هادر مقایسه با Ctns^–/– کلیه ها(شکل 4c)، تایید داده های بافت شناسی (شکل 4b).

در مجموع، این یافته‌ها نشان می‌دهند که گال-3 در استخدام ماکروفاژها/مونوسیت‌ها در سیستینوز نقش دارد.کلیه هاو عدم وجود آن بیماری کلیوی را بهبود می بخشد^–/–موش. از این رو پیشنهاد می کند کهالتهابمسئول، حداقل تا حدی، برای بدتر شدن کلیه در Ctns است^–/– موش.

کلیه های دارای کمبود Ctns بیان بیش از حد Gal-3 را نشان می دهند

با استفاده از تجزیه و تحلیل وسترن بلات، متوجه شدیم که بیان Gal-3 به طور قابل توجهی افزایش یافته استکلیه هااز 12-ماهگی Ctn^s–/–موش در مقایسه با موش WT (شکل 5a و b). برای بررسی اینکه آیا این افزایش بیان Gal{1}} مختص Ctns است یا خیر^–/– کلیه ها، ما بیان Gal-3 را در سطح رونوشت و پروتئین در اندازه گیری کردیمکلیه هااز موش‌های مبتلا به CKD ناشی از عمل جراحی نفرکتومی مرحله‌ای زیر کل استاندارد و از حیواناتی که تحت عمل ساختگی قرار گرفتند. WT و Ctns^–/–از موش ها به عنوان گروه شاهد استفاده شد. رونوشت‌های Gal{0}} به طور قابل توجهی در Ctns–/– و کلیه‌های ساختگی افزایش یافت، اما در CKD بسیار افزایش یافت.کلیه هادر مقایسه با موش های WT (شکل 5c). در مقابل، در سطح پروتئین، Gal{1}} تنها در Ctns شناسایی شد^–/–کلیه ها، قویاً نشان می دهد که فقط Ctns^–/–کلیه ها قادر به تجزیه پروتئین Gal-3 نیستند (شکل 5d). رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس Gal-3 در موشکلیهدر 8 تا 9 ماهگی نیز بیان بیش از حد Gal-3 در Ctns نشان داد^–/– کلیه هادر مقایسه با WTکلیه ها(شکل 5e). علاوه بر این، گال{1}} توسط ماکروفاژهای CD68þ و همچنین سلول های کلیوی در Ctns بیان شد.^–/– کلیه هادر 8 تا 9 ماهگی (شکل تکمیلی S4). در مجموع، این داده ها با کاهش تخریب Gal-3 در غیاب سازگاری دارندسیستینوزهمانطور که در شرایط آزمایشگاهی نشان داده شده است (شکل 3a و b)، که منجر به تجمع پروتئین Gal{1}} در Ctns می شود.^–/– کلیه ها.

فقدان سیستینوزین منجر به افزایش MCP سرم می شود-1 از طریق دخول گال-3

Gal-3 تنظیم می کندالتهاباز طریق مکانیسم های مختلف.34 بنابراین، برای به دست آوردن بینش بیشتر در مورد مکانیسم درسیستینوز، ما بیان سایتوکاین های مختلف پیش التهابی یا ضد التهابی را در سرم WT، Ctns 12- تا 15-ماهه بررسی کردیم.^–/–، گال-3^–/–، و Ctns^–/–گال- 3^–/–موش. شش سطح سیتوکین با آرایه مهره‌های سیتومتری موش، MCP{0}}، اینترفرون-g، فاکتور نکروز تومور، و IL-10، IL-6 و IL{4}}p70 اندازه‌گیری شد. تنها بیان MCP{6}} در سرم موش Ctns–/– در مقایسه با موش‌های WT و Gal-3–/– و همچنین Ctns به‌طور معنی‌داری افزایش یافت.^–/–گال-3^–/–موش‌هایی که سطوح سرمی MCP{0}} آنها با موش‌های WT قابل مقایسه بود (شکل 6a). MCP{2}} توسط انواع مختلف سلولی تولید می‌شود که منبع اصلی MCP{3}} ماکروفاژها و مونوسیت‌ها هستند، و به عنوان یک شیمی‌کشنده برای مونوسیت‌ها و ماکروفاژها عمل می‌کند و مهاجرت و نفوذ آنها را تنظیم می‌کند. در مقابل، در همان سن، بیان Gal{5}} در سرم موش Ctns–/– مشابه بود (44.33 9.81 ng/ml؛ n ¼ 5) و موش WT (40.{12} }.41 ng/ml؛ n ¼ 7).

رابطه بین Gal-3 و MCP-1 با استفاده از Gal-3–GFP و MCP-1–DsRed– یا Gal-3– بیشتر مورد بررسی قرار گرفت. GFP و CTNS-DsRed - (به عنوان یک کنترل مثبت) سلول های 293T را بیان می کنند. تعامل بین Gal-3 و MCP-1 مشاهده شد (شکل 6b)، که القای مستقیم MCP-1 توسط Gal-3 را پیشنهاد می‌کند. جوجه کشی با N-Acetyl-D-lactosamine (LacNAc)، یک مهارکننده Gal{16}} CRD، نشان داد که بر خلافسیستینوزینتعامل، CRD در تعامل بین Gal-3 و MCP-1 دخیل نیست (شکل 6c).

برای ارزیابی اینکه آیا این یافته در انسان مرتبط است، ما سطوح Gal-3 و MCP-1 را در بیماران مبتلا بهسیستینوزافرادی که تحت درمان سرکوب کننده سیستم ایمنی یا مصرف داروهای ضد التهابی نبودند. اگرچه مشخص شد که سطح Gal{1}} در سرم بیماران مبتلا به سیستینوزیس در مقایسه با اهداکنندگان سالم کمی افزایش یافته است، این تفاوت معنی دار نبود (شکل 6e)، که نتایج ما را در Ctns تأیید می کند.^–/–موش. فقط 2 بیمار سطح Gal{1}} بالایی داشتند (25.34 و 39.54 ng/ml). آنها موارد پرت در نظر گرفته شدند و بنابراین در شکل 6e گنجانده نشدند. در مقابل، با استفاده از یک سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم علیه MCP انسانی (شکل 6d)، سطوح سرمی MCP{10}} به طور قابل توجهی در بیماران مبتلا بهسیستینوز(252.1 - 18.4 pg/ml؛ n ¼ 19؛ محدوده سنی 1-23 سال) علیرغم درمان با سیستامین در مقایسه با افراد سالم (166.9 -13.5 pg/ml؛ n ¼ 1). 0؛ محدوده سنی 8-63 سال) (P <0.001). هیچ="" ارتباطی="" بین="" سن="" و="" سطح="" mcp{14}}="" در="" هر="" دو="" بیمار="" یافت="">سیستینوزو اهداکنندگان سالم (داده‌ها نشان داده نشده است).

سیستانچداردضد التهابخواص

بحث

با وجود این واقعیت که سیستین در تمام بافت های بیماران مبتلا به تجمع می یابدسیستینوز، کلیه ها اندام هایی هستند که بیشترین آسیب را در معرض آسیب قرار می دهند. بنابراین ما معتقدیم که تجمع سیستین تنها مسئول انحطاط کلیه نیست. در اینجا، ما یک نقش جدید را برایسیستینوزیندر مقرراتالتهابدر پیشرفت بیماری مزمن کلیوی درسیستینوز. این مطالعه ممکن است توضیح دهد که چرا بیماران علیرغم اینکه تحت درمان با سیستامین قرار می گیرند، به نارسایی کلیه در مرحله نهایی تکامل می یابند.

مطالعه شرکای مولکولی سیستینوز یک برهمکنش مستقیم با Gal-3 را نشان داد که می‌تواند توسط مهارکننده‌های Gal-3 CRD مهار شود. مطالعات اخیر نشان داد که گال{2}} می‌تواند با گلیکان‌های واقع در لومن لیزوزومی پس از آسیب لیزوزومی مانند تجمع کریستال تعامل داشته باشد.سیستینوزیندر سلول های سالم بیان کننده مورد مطالعه قرار گرفتسیستینوزینو بنابراین، سیستئین یا کریستال های سیستین را انباشته نمی کند. علاوه بر این، بیان بیش از حد گال{-3 و سیستینوزین در سلول‌های سالم، محلی‌سازی درون سلولی Gal-3 را تغییر داد، که سپس در لیزوزوم‌ها در مقایسه با بیان بیش از حد گال-3، که تنها گال-3 بود، محلی‌سازی شد. در سیتوپلاسم قرار داشت. این نتایج قویاً نشان می دهد که تعامل بین Gal{3}} و سیستینوزین مستقل از آسیب لیزوزومی رخ می دهد و سیستینوزین به طور فعال مسئول محلی سازی لیزوزومی Gal-3 است. قبلا نشان داده شده بود که Gal{5}} از طریق پروتئولیز وابسته به لیزوزومی در غیاب Abl و Arg، 2 تیروزین کیناز تجزیه می شود.³¹

علاوه بر این، ما این را نشان دادیمسیستینوزو Gal{0}} در ساختارهای وزیکولی پویا با هم محلی سازی می شوند و با هم به صورت فضایی-زمانی بسیج می شوند.سیستینوزینقبلاً با مکانیسم های قاچاق LAMP2A لیزوزومی، تنها گیرنده CMA شناخته شده، که به اشتباه در آن جاسازی شده است، مرتبط بوده است.سیستینوز.²⁸نشان داده شده است که تخریب Gal-3 قبلاً توسط CMA انجام می‌شود.³¹تجزیه و تحلیل میکروسکوپ کانفوکال کلکالیزاسیون Gal-3 در ساختارهای Hsc70- مثبت در هر دو Ctns را تأیید کرد.^–/– و سلول‌های WT، از انتقال همزمان Gal با Hsc70 برای نمایش در لیزوزوم و تخریب توسط CMA به عنوان Hsc70 به انتقال پروتئین‌های سوبسترا در سراسر غشاء به لومن لیزوزومی کمک می‌کند.^29,30یک تفسیر احتمالی از نتایج ما این استسیستینوزینقاچاق و تحویل Gal{0}} به لیزوزوم های فعال CMA را برای تخریب تنظیم می کند.

این مسیر رمان ازسیستینوزینمحلی‌سازی و تخریب لیزوزومی وابسته به Gal{1}} در داخل بدن پشتیبانی می‌شود.کلیه. علاوه بر این، در حالی که mRNA Gal{0}} افزایش یافته در Ctns محدود بود^–/–کلیه‌ها در مقایسه با مدل دیگری از CKD، مقدار زیادی پروتئین Gal-3 فقط در Ctns شناسایی شد.^–/– کلیه ها. این داده ها به شدت از این نتیجه گیری حمایت می کنند کهسیستینوزیندر تخریب پروتئین Gal، که می تواند بیان بیش از حد mRNA Gal-3 را در شرایط استرس مانند CKD کنترل کند، نقش دارد.

گال{0}} چندین نقش بیولوژیکی دارد، از جمله نقش‌های حاد و مزمنالتهاببا جذب مونوسیت ها و ماکروفاژها.^37,38در Ctns^–/– موش، ما نفوذ تک هسته ای سنگین به طور عمده در مشاهده شدکلیههمانطور که قبلا توضیح داده شد،^11,39که به عنوان مونوسیت/ ماکروفاژ مشخص شدند. در مقابل، کلیه ها از Ctns دو حذفی^–/–گال-3^–/–موش‌ها مونوسیت‌ها/ماکروفاژهای بسیار کمی از خود نشان دادند که قویاً نشان می‌دهد که گال-3 درالتهابدر کلیه های Ctns^–/–موش. در زمینه آسیب بافتی مکرر، Gal-3 ممکن است باعث انتقال به مزمن شودالتهابو فیبروز³⁴مطابق با این یافته‌ها، داده‌های ما دخالت گال-3 را در پیشرفت CKD درسیستینوز. در واقع، Ctns دو ناک اوت^–/– گال-3^–/–موش ها بهتر نشان دادندکلیهعملکرد و ساختار در مقایسه با Ctns^–/–موش. به طور مشابه، موش‌های دارای کمبود Gal{0}} فیبروز کلیوی کمتری را نشان می‌دهندکلیهدر مقایسه با موش های WT پس از انسداد یک طرفه حالب،⁴⁰ و موش‌های ناک اوت Gal{0}} که در معرض آسیب ایسکمی-پرفیوژن مجدد قرار گرفتند، عملکرد کلیوی بهتری در مقایسه با موش‌های WT در معرض آسیب ایسکمی-پرفیوژن مجدد داشتند.⁴¹

اگرچه ارتباطی بین سطوح Gal{0}} در پلاسما و ایجاد CKD یافت شد، اما هیچ تفاوتی در بیان Gal-3 در سرم موش‌ها و انسان‌ها مشاهده نشد.سیستینوزو افراد کنترل سالم. با اندازه گیری سطوح مختلف سیتوکین در سرم، افزایش قابل توجهی از MCP{0}} در Ctns پیدا کردیم.^–/–موش، در حالی که Ctns^–/–گال-3^–/–سطح موش‌ها با موش‌های WT قابل مقایسه بود. MCP{0}} یک سیتوکین است که می‌تواند در سرم آزاد شود و یک گرادیان برای جذب مونوسیت‌ها و ماکروفاژها به محل آسیب ایجاد می‌کند.^–/–موش ها در مقایسه با Ctns^–/–گال-3^–/–موش مستقل از تجمع سیستین بود زیراکلیهمحتوای سیستین در هر دو ژنوتیپ مشابه بود. علاوه بر این، با وجود درمان با سیستامین که امکان خروج سیستین از لیزوزوم ها را فراهم می کرد، MCP{0}} به طور قابل توجهی در سرم بیماران مبتلا بهسیستینوزدر مقایسه با اهداکنندگان سالم این داده ها به شدت نشان می دهد که عدم وجودسیستینوزینبه جای تجمع سیستین، مسئول افزایش MCP{0}} در سرم است. علاوه بر این، ما یک تعامل مستقیم بین Gal-3 و MCP-1 را نشان دادیم که اخیراً توسط گوردون-آلونسو و همکاران 43 پیشنهاد شده بود اما بیشتر مورد مطالعه قرار نگرفت. مکانیسم فعال‌سازی MCP با واسطه Gal-3 در اینجا مورد مطالعه قرار نگرفت. یک فرضیه وجود یک پپتید سیگنال در MCP انسان است-1 که می‌توان آن را برای افزایش ترشح آن شکاف داد. قدرت.سیستینوز، داده های ما به شدت نشان می دهد که عدم وجودسیستینوزینمنجر به افزایش Gal-3 می‌شود که حرکت خونی MCP{1}} را فعال می‌کند و کلیوی را تقویت می‌کند.التهابو پیشرفتبیماری مزمن کلیوی.

این یافته‌ها دیدگاه‌های جدیدی را در مورد اهداف درمانی بالقوه باز می‌کند که می‌تواند انحطاط کلیه را در بیماران مبتلا به این بیماری محدود یا به تاخیر بیندازد.سیستینوز. در واقع، داروهای ضدالتهابی غیراستروئیدی مانند آسپرین و ایندومتاسین با مهار رونویسی آن، بیان گال{1} را مهار می کنند.48 ایندومتاسین در واقع برای تنظیم پلی اوری و پلی دیپسی درسیستینوز49 و یک مطالعه اخیر روی 307 بیمار اروپایی مبتلا به سیستینوزیس نشان داد که در بیماران تحت درمان با ایندومتاسین، نتیجه کلیوی بهبود یافته است.سیستینوزبیماران ممکن است تجدید نظر شوند.

مواد و روش ها

آزمایشات روی حیوانات

C57BL/6 Ctns^–/–موش ها توسط دکتر Antignac (Inserm U1163، پاریس، فرانسه) ارائه شد. C57BL/6 galectin-3 null (Gal-3^–/–) موش ها توسط دکتر فو تونگ لیو (دانشگاه کالیفرنیا، دیویس) و دکتر جرولد ام. اولفسکی (دانشگاه کالیفرنیا، سن دیگو) ارائه شدند. استراتژی پرورش برای تولید WT، Ctns^–/–، گال-3^–/–، Ctns–/– و Gal- 3^–/–موش در روش های تکمیلی توضیح داده شده است.

خطوط سلولی

آشفتگی از بیوپسی پوست نوزاد WT و Ctns ایجاد شد^–/–موش. رده های سلولی MEF، 293T و MDCK نوع II (ATCC، Manassas، VA) در محیط Eagle اصلاح شده Dulbecco حاوی 1{3}} درصد سرم جنین گوساله یا سرم جنین گاو، 100 واحد در میلی لیتر پنی سیلین، 0.1 میلی گرم در میلی لیتر استرپتومایسین رشد کردند. و 2 میلی مولار ال-گلوتامین.

رسوب همزمان و تجزیه و تحلیل طیف سنجی جرمی

برای مطالعه برهمکنش‌های پروتئین-پروتئین، سلول‌های MDCK با استفاده از ستون فقرات ناقل pRRL.SIN.cPPT.PGK/WPRE لنتی‌ویروسی برای بیان پایدار انتقال داده شدند.سیستینوزین-GFP.⁵¹رسوب همزمان ایمنی همانطور که در روش‌های تکمیلی توضیح داده شد انجام شد. پروتئین‌های هم‌رسوب‌شده با الکتروفورز ژل دودسیل سولفات-پلی آکریل آمید سدیم (SDS-PAGE) حل و فصل شدند و با طیف‌سنجی جرمی، LTQ Orbitrap همانطور که قبلاً توضیح داده شد، تجزیه و تحلیل شدند.¹⁹

سلول‌های 293T که Gal-3–GFP و MCP-1–DsRed یا Gal{3}}–GFP و CTNS-DsRed را بیان می‌کنند، همانطور که در روش‌های تکمیلی توضیح داده شده است، برای رسوب ایمنی همزمان استفاده شدند. پروتئین‌های هم‌رسوب‌شده توسط SDS-PAGE حل شد و Gal{8}-MCP{9}} با استفاده از آنتی‌بادی ضد DsRed (Clontech Laboratories, Mountain View, CA) شناسایی شد.

شکنش درون سلولی

هشت کبد از موش‌های C57BL/6 به‌دست آمد و همانطور که قبلاً توضیح داده شد آماده شد. 52 شرایط گرادیان اساساً همان چیزی بود که در نشریه اصلی توضیح داده شد، با این تفاوت که Nycodenz به جای متریزامید استفاده شد.

گال-3-بازدارنده و درمان پروتئیناز K

لیزات ازسیستینوزینسلول‌های -GFP MDCK و 293T بیان‌کننده Gal-3–GFP و CTNS-DsRed یا Gal{4}}–GFP و MCP-1–DsRed با یا بدون 5 میلی‌مولار تیودیگالاکتوزید یا 5 میلی‌مولار N انکوبه شدند. -Acetyl-D-Lactosamine، به ترتیب، 2 مهارکننده Gal{12}} CRD. پس از 30 دقیقه انکوباسیون در دمای {14}} درجه سانتیگراد با تکان دادن مداوم، لیزها با 50 میلی لیتر میکروبیدهای ضد GFP انکوبه شدند و رسوب ایمنی همانطور که قبلاً ذکر شد انجام شد. پروتئین‌های رسوب‌شده توسط SDS-PAGE روی ژل 10 درصد تجزیه شدند.

لیزات ازسیستینوزینسلول‌های GFP MDCK و بخش‌های غنی‌شده با لیزوزوم کبد موش با یا بدون 2 درصد Triton X{3}} به مدت 10 دقیقه در دمای {5}} درجه سانتی‌گراد انکوبه شدند و سپس 30 دقیقه با یا بدون mg/ml 2.5 و 25 میلی‌گرم انکوبه شدند. /ml پروتئیناز K، به ترتیب. پس از غیرفعال سازی آنزیم با 1 میلی مولار فنیل متیل سولفونیل فلوراید به مدت 5 دقیقه در دمای {12}} C، پروتئین ها با SDS-PAGE روی ژل 10 درصد تجزیه شدند.

تجزیه و تحلیل ایمونوفلورسانس

سلول‌های MDCK ثابت با آنتی‌بادی ضد لامپ-2 (OriGeneTechnologies، Rockville، MD) و آنتی‌بادی ضد گال-3 (CedarlaneLaboratories، برلینگتون، انتاریو، کانادا) 2 ساعت در دمای اتاق و به دنبال آن الکسا فلور انکوبه شدند. آنتی بادی ثانویه 555 (Invitrogen, Carlsbad, CA) به مدت 1 ساعت در دمای اتاق. تصاویر هم کانونی با استفاده از میکروسکوپ Zeiss LSM 700 (Carl ZeissMicroscopy، Jena، آلمان) گرفته شد.

سلول های 293T به طور موقت Gal-3–GFP به تنهایی، Gal-3–GFP، و DsRed یا Gal-3–GFP وسیستینوزین-DsRed قبل از نصب روی یک لام روی یک ورقه پوششی کشت داده شد. سلول ها با استفاده از ابزار Keyence BZ-X700 (Keyence Corp.، اوزاکا، ژاپن) تصویربرداری شدند.

درست شدکلیهبخش‌ها یک شبه در دمای {0}} C با آنتی‌بادی ضد CD68 (BioLegend، San Diego، CA) یا آنتی‌گال-3 (BioLegend)، و سپس آنتی‌بادی ثانویه Alexa Fluor 488 (Invitrogen)، 1 ساعت انکوبه شدند. در دمای اتاق. تصاویر با استفاده از ابزار Keyence BZ-X700 به دست آمد. کمی سازی بیان CD68 در روش های تکمیلی توضیح داده شده است.

MEF های بیان کننده Gal-3-GFP با استفاده از آنتی بادی ضد Hsc70 (Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY) رنگ آمیزی شدند و همانطور که قبلاً توضیح داده شد تصویربرداری شدند.⁵³

میکروسکوپ فلورسانس FL بازتاب داخلی کل

WT و Ctns^–/–MEF بیان‌کننده Gal-3–GFP، و CTNS-DsRed بر روی یک ظرف پایینی 4- محفظه 35- میلی‌متری بوروسیلیکات (Cellvis، Mountain View، CA) کاشته شدند. پس از 2 روز در کشت، MEFs با میکروسکوپ فلورسانس FL بازتاب داخلی کل همانطور که قبلا توضیح داده شد آنالیز شدند.⁵⁴و در روشهای تکمیلی. تصاویر با استفاده از نرم افزار ImageJ تجزیه و تحلیل شدند.

تجزیه و تحلیل بیان گال-3

سلول‌های 293T بیانگر Gal-3–GFP، Gal-3–GFP، و DsRed، یا Gal-3–GFP و CTNS-DsRed و کاشته شدهکلیه هادر بافر سنجش radioimmunoprecipitation حاوی کوکتل مهارکننده پروتئیناز لیز شدند. پروتئین ها روی ژل 4 تا 15 درصد جدا شدند و با استفاده از آنتی بادی ضد گال (Abcam، کمبریج، انگلستان) یا آنتی گلیسرآلدئید{3}}فسفات دهیدروژناز (تکنولوژی سیگنال رسانی سلولی، Danvers، MA) آشکار شدند. .

کلیه هادر بافر RLT حاوی b-mercaptoethanol با استفاده از Precellys 24 (Bertin Instruments، Montigny-le-Bretonneux، فرانسه) همگن شدند. RNA جدا شد و واکنش زنجیره‌ای پلیمراز دیجیتال قطره‌ای خاص Gal{4}} همانطور که در روش‌های تکمیلی توضیح داده شد انجام شد. بیان رونوشت Gal{5}} به عنوان یک نسبت در مقایسه با کنترل درون زا 18S بیان شد. طبق دستورالعمل سازنده، از یک سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم (Abcam) برای تشخیص سطح Gal-3 در موش‌ها و سرم‌های انسان استفاده شد.

عملکرد کلیه

سطوح فسفات سرم و ادرار، کراتینین سرم و اوره با استفاده از کیت سنجش فسفات کوانتی کروم، کیت کراتینین کوانتی کروم و کیت سنجش اوره کوانتی کروم (BioassaySystems، هایوارد، کالیفرنیا) برآورد شد. سطح پروتئین در ادرار با استفاده از کیت سنجش پروتئین Pierce BCA (راکفورد، IL) اندازه گیری شد.

بافت شناسی

در زمان کشته شدن موش ها،کلیه هاجمع آوری، در فرمالین تثبیت و در پارافین جاسازی شدند. بخش‌های رنگ‌آمیزی شده با هماتوکسیلین و ائوزین توسط دکتر ماری کلر گابلر به‌صورت کور، همانطور که در روش‌های تکمیلی توضیح داده شد، بررسی شدند.

اندازه گیری محتوای سیستین

اندازه گیری سیستین بافت توسط طیف سنجی جرمی (LC-ESI-MS/MS) همانطور که قبلاً توضیح داده شد انجام شد.³⁹

نفرکتومی استاندارد و عمل شم

CKD موش‌ها با عمل جراحی نفرکتومی مرحله‌ای زیر کل استاندارد، همانطور که قبلاً توضیح داده شد، القا شد.^55,56گروه ساختگی موش‌ها نیز تحت همین روش قرار گرفتند اما بدون بریدنکلیهبافت.

سطح سیتوکین در سرم

برای اندازه گیری سطح سیتوکین در سرم موش، یک موشالتهابکیت آرایه مهره های سیتومتری (BD Biosciences, San Jose, CA) طبق دستورالعمل سازنده انجام شد. غلظت MCP{0}} در سرم انسانی با استفاده از روش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم که علیه MCP{2}} (Abcam، کمبریج، انگلستان) مطابق دستورالعمل سازنده تعیین شد، تعیین شد.

تحلیل آماری

مقادیر به صورت میانگین بیان می شوند - SEM. معنی‌داری نتیجه با استفاده از آزمون t دنباله‌دار بدون جفت یا t‌تست دنباله‌دار بدون جفت با تصحیح ولش ارزیابی شد. مقایسه گروهی از 3 شرایط یا بیشتر با تجزیه و تحلیل پارامتری واریانس، و به دنبال آن آزمون مقایسه های چندگانه توکی برای مقایسه های زوجی انجام شد. نمرات بافت شناسی با استفاده از آزمون من ویتنی مقایسه شد. آنالیزها با استفاده از نرم افزار Prism 6 (GraphPad, San Diego, CA) انجام شد. مقدار P کمتر از 0.05 معنی دار در نظر گرفته شد.

تایید مطالعه

آزمایش‌های موش‌ها مطابق با پروتکل‌های کمیته استفاده نهادی از حیوانات انجام شد. استفاده از بافت انسانی در این مطالعه توسط دانشگاه کالیفرنیا، سن دیگو، برنامه حفاظت از تحقیقات انسانی تایید شده است.

افشای

SC یکی از اعضای هیئت علمی و عضو هیئت امنای آن استسیستینوزبنیاد تحقیقات. SC یکی از بنیانگذاران، سهامداران و اعضای هیئت علمی و هیئت مدیره GenStem TherapeuticsInc است. شرایط این ترتیب توسط دانشگاه کالیفرنیا-سن دیگو مطابق با سیاست‌های تضاد منافع آن بررسی و تأیید شده است. همه نویسندگان دیگر هیچ علاقه رقیبی را اعلام نکردند.

ارائه گال-3^–/–موش. ما از Lou Devanneaux و Nichole Flerchinger برای کمک فنی و Elizabeth Souter برای بررسی نسخه خطی تشکر می کنیم. ما از کریستوفر آلفونسو از BDBioscience برای تهیه این ماوس قدردانی می کنیمالتهابآرایه مهره سیتومتریک و برای کمک به تفسیر نتایج. این کار توسط مؤسسه ملی سلامت RO1-DK090058 و R01-DK110162،سیستینوزبنیاد تحقیقات، و موسسه پزشکی احیا کننده کالیفرنیا (CIRM، CLIN{0}}). TL توسط یک کمک هزینه تحصیلی فارغ التحصیل از Vaincre Les MaladiesLysosomales پشتیبانی می شود. AB و JZ توسط یک کمک هزینه تحصیلی از طرفسیستینوزبنیاد تحقیقات. UCSD Neuroscience MicroscopyShared Facility توسط مؤسسه ملی اختلالات عصبی و سکته مغزی (NINDS) کمک مالی P{0}}NS047101 تأمین مالی شد.

منابع

1. Medzhitov R. منشاء و نقش های فیزیولوژیکیالتهاب. طبیعت. 2008؛ 454:428-435.

2. Donath MY. هدف گذاریالتهابدر درمان دیابت نوع 2 دیابت چاقی متاب. 2013؛ 15 (ضمیمه 3): 193-196.

3. Jaffer U، Wade RG، Gourlay T. سیتوکین ها در سندرم پاسخ التهابی سیستمیک: یک بررسی. بیهوشی قلبی عروقی HSR Proc Intensive Care. 2010؛ 2:161-175.

4. Pecoits-Filho R، Heimburger O، Barany P، و همکاران. ارتباط بین نشانگرهای التهابی در گردش و عملکرد باقیمانده کلیه در بیماران CRF من جیکلیهدیس 2003؛ 41: 1212-1218.

5.Gahl WA، Thoene JG، Schneider JA.سیستینوز. N Engl J Med. 2002؛ 347: 111-121.

6. Cherqui S، Kalatzis V، Trugnan G، Antignac C. هدف قرار دادنسیستینوزینبه غشای لیزوزومی نیاز به یک سیگنال مبتنی بر تیروزین و یک موتیف مرتب‌سازی جدید دارد. جی بیول شیمی. 2001؛ 276:13314-13321.

7. Kalatzis V، Cherqui S، Antignac C، Gasnier B.سیستینوزین، پروتئین معیوب درسیستینوز، یک ناقل سیستین لیزوزومی مبتنی بر H() است. EMBO J. 2001؛ 20:5940-5949.

8. Cherqui S، Courtoy PJ. سندرم فانکونی کلیوی درسیستینوز: بینش های بیماری زا و دیدگاه های درمانی. نات ریو نفرول. 2017؛ 13:115-131.

9. Nesterova G، Gahl W. نفروپاتیسیستینوز: عوارض دیررس یک بیماری چند سیستمی. نفرول اطفال. 2008؛ 23: 863-878.

10. Cherqui S, Sevin C, Hamard G, et al. عدم تجمع سیستین داخل لیزوزومی در موشسیستینوزین، پروتئین معیوب درسیستینوز. Mol Cell Biol. 2002؛ 22: 7622-7632.

11. Nevo N، Chol M، Bailleux A، و همکاران. فنوتیپ کلیوی ازسیستینوزمدل موش به زمینه ژنتیکی بستگی دارد. پیوند نفرول دیال. 2010؛ 25:1059-1066.

12. Kalatzis V، Serratrice N، Hippert C، و همکاران. ناهنجاری های چشمی در aسیستینوزمدل حیوانی پاتوژنز بیماری را تقلید می کند. Pediatr Res. 2007؛ 62: 156-162.

13. راهنمای Chevronnay HP، Janssens V، Van Der Smissen P، و همکاران. یک مدل موش دو مکانیسم را برای تغییرات تیروئید در نوزادان پیشنهاد می کندسیستینوزکاهش سنتز تیروگلوبولین به دلیل استرس شبکه آندوپلاسمی / پاسخ پروتئین باز شده و اختلال در پردازش لیزوزومی. غدد درون ریز. 2015؛ 156:2349-2362.

14. Brodin-Sartorius A, Tete MJ, Niaudet P, et al. سیستامین درمانی پیشرفت نفروپاتی را به تاخیر می اندازدسیستینوزدر اواخر نوجوانی و بزرگسالان.کلیهبین المللی 2012؛ 81:179-189.

15. Cherqui S. Cysteamine therapy: درمانی برایسیستینوز، نه یک درمانکلیهبین المللی 2012؛ 81:127-129.

16. Gahl WA، Balog JZ، Kleta R. نفروپاتیکسیستینوزدر بزرگسالان: تاریخچه طبیعی و اثرات درمان خوراکی سیستامین Ann Intern Med. 2007؛ 147:242-250.

17. چرکی اس، کورتوی پی جی. سندرم فانکونی کلیوی درسیستینوز: بینش های بیماری زا و دیدگاه های درمانی. نات ریو نفرول. 2017؛ 13:115-131.

18. Napolitano G, Johnson JL, He J, et al. اختلال اتوفاژی با واسطه چاپرون منجر به نقص های تخریب انتخابی لیزوزومی در بیماری ذخیره لیزوزومی می شود.سیستینوز. EMBO Mol Med. 2015؛ 7:158-174.

19. Andrzejewska Z, Nevo N, Thomas L, et al.سیستینوزینیکی از اجزای کمپلکس واکولی H-ATPase-تنظیم کننده-راگ است که هدف پستانداران سیگنالینگ راپامایسین کمپلکس 1 را کنترل می کند. جی ام سوک نفرول. 2016؛ 27: 1678-1688.

20. Rega LR، Polishchuk E، Montefusco S، و همکاران. فعال سازی فاکتور رونویسی EB ناهنجاری های لیزوزومی در سیستینوز را نجات می دهد.کلیهسلول ها.کلیهبین المللی 2016؛ 89: 862–873.

21. Dumic J, Dabelic S, Flogel M. Galectin-3: داستانی با پایان باز. Biochim Biophys Acta. 2006؛ 1760: 616-635.

22. Sciacchitano S، Lavra L، Morgante A، و همکاران. Galectin-3: یک مولکول برای الفبای بیماری ها، از A تا Z. Int J Mol Sci. 2018؛ 19 (2).

23. Calvier L, Martinez-Martinez E, Miana M, et al. تاثیر مهار گالکتین-3 بر آسیب های قلبی و کلیوی ناشی از آلدوسترون. نارسایی قلبی JACC. 2015؛ 3:59-67.

24. Frenay AR، Yu L، van der Velde AR، و همکاران. مهار دارویی گالکتین-3 در برابر نفروپاتی فشار خون بالا محافظت می کند. Am J Physiol Renal Physiol. 2015؛ 308: F500–F509.

25. Kolatsi-Joannou M, Price KL, Winyard PJ, Long DA. پکتین اصلاح شده مرکبات بیان گالکتین و شدت بیماری را در حاد تجربی کاهش می دهد.کلیهصدمه. PloS One. 2011؛ ​​6: e18683.

26. Martinez-Martinez E, Ibarrola J, Clavier L, et al. انسداد گالکتین فیبروز کلیه را در دو مدل آزمایشی با فشار خون طبیعی آسیب کلیوی کاهش می دهد. PloS One. 2016؛ 11:e0166272.

27. Nevo N، Thomas L، Chhuon C، و همکاران. تاثیرسیستینوزگلیکوزیلاسیون بر پایداری پروتئین با برچسب گذاری ایزوتوپ پایدار دینامیک افتراقی توسط اسیدهای آمینه در کشت سلولی (SILAC). پروتئومیکس سلول مول. 2017؛ 16:457-468.

28. Napolitano G, Johnson JL, He J, et al. اختلال اتوفاژی با واسطه چاپرون منجر به نقص های تخریب انتخابی لیزوزومی در بیماری ذخیره لیزوزومی می شود.سیستینوز. EMBO Mol Med. 2015؛ 7:158-174.

29. Majeski AE، تاس JF. مکانیسم های اتوفاژی با واسطه چاپرون Int J Biochem Cell Biol. 2004؛ 36: 2435-2444.

30. Xie W، Zhang L، Jiao H، و همکاران. اتوفاژی با واسطه چاپرون با تخریب BBC3/PUMA از آپوپتوز جلوگیری می کند. خویشتن خواری. 2015؛ 11:1623-1635.

31. لی ایکس، ما کیو، وانگ جی، و همکاران. c-Abl و Arg تیروزین کینازها تخریب لیزوزومی انکوپروتئین گالکتین را تنظیم می کنند{2}}. مرگ سلولی متفاوت است. 2010؛ 17:1277-1287.

32. Takeuchi H، Tanaka M، Tanaka A، و همکاران. غلبه ماکروفاژهای پلاریزه M{{1} در سرطان مثانه بر رگزایی، درجه تومور و تهاجم تأثیر می گذارد. اونکول لت. 2016؛ 11:3403-3408.

33.Chavez-Galan L، Olleros ML، Vesin D، Garcia I. بسیار بیشتر از ماکروفاژهای M1 و M2، ماکروفاژهای CD169( ) و TCR( ) نیز وجود دارند. جلو ایمونول. 2015؛ 6:263.

34. هندرسون NC، Sethi T. مقرراتالتهابتوسط galectin-3. Immunologic Rev. 2009؛ 230:160-171.

35. Deshmane SL, Kremlev S, Amini S, Sawaya BE. پروتئین جذب کننده شیمیایی مونوسیت-1 (MCP-1): یک مرور کلی. J Interferon Cytokine Res. 2009؛ 29:313-326.

36. Skowyra ML، Schlesinger PH، Naismith TV، Hanson PI. استخدام ماشین آلات ESCRT باعث ترمیم اندولیزوزوم می شود. علوم پایه. 2018;360(6384).

37. MacKinnon AC، Farnworth SL، Hodkinson PS، و همکاران. تنظیم فعال سازی جایگزین ماکروفاژ توسط گالکتین-3. جی ایمونول. 2008؛ 180: 2650-2658.

38. Sano H، Hsu DK، Yu L، و همکاران. گالکتین انسانی-3 یک ماده شیمیایی جدید برای مونوسیت ها و ماکروفاژها است. جی ایمونول. 2000؛ 165:2156-2164.