یک واکسن دو ظرفیتی زنده ضعیف شده ویروس آنفلوانزا در برابر جدا شده بالینی H1N2 و H3N2 در خوکی محافظت می کند.

2.5. سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم (ELISA)

برای ساخت آنتی ژن های پوششی، SD435 و SD467 در سلول های MDCK تکثیر و با استفاده از اولتراسانتریفیوژ با گرادیان ساکارز خالص سازی شدند. غیرفعال شدن ویروس ها با افزودن 97 درصد پروپیولاکتون به ویروس در غلظت 1:1000 (v/v) رخ داد (Thermo Fisher Scientific, AAB2319703). این مخلوط یک شبه در دمای 4 درجه سانتیگراد تکان داده شد، در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت دو ساعت برای تسهیل هیدرولیز پروپیولاکتون انکوبه شد، سپس تا زمان استفاده در دمای 80- درجه سانتیگراد نگهداری شد.

آنتی ژن ها و ایمنی جدایی ناپذیر هستند. آنتی ژن به هر ماده ای اطلاق می شود که بتواند توسط سیستم ایمنی تشخیص داده شود و باعث پاسخ ایمنی شود، از جمله باکتری ها، ویروس ها، سلول های تومور و غیره، در حالی که ایمنی به توانایی بدن برای پاسخ به این آنتی ژن ها اشاره دارد.

رابطه بین آنتی ژن ها و ایمنی را می توان با یک استعاره ساده نشان داد: درست همانطور که ورزش به تمرینات و مکمل های غذایی کافی نیاز دارد، بهبود ایمنی نیز به تماس مکرر با آنتی ژن ها و سلول های ایمنی مربوطه و مولکول های ایمنی بستگی دارد. تولید کردن. هنگامی که سیستم ایمنی با یک آنتی ژن مواجه می شود، با تولید آنتی بادی های خاص یا سلول های ایمنی همراه با سلول های حافظه حمله می کند تا از ما در برابر عفونت مجدد محافظت کند.

علم تأیید کرده است که ایجاد عادات خوب زندگی و خوردن می تواند به بهبود ایمنی کمک کند. به عنوان مثال، تمیز نگه داشتن، سیگار نکشیدن، ورزش متوسط ​​و عادات خواب می تواند به کاهش تهاجم آنتی ژن هایی مانند باکتری ها و ویروس ها کمک کند. در عین حال، خوردن برخی از غذاهای غنی از آنتی اکسیدان ها، ویتامین ها و مواد معدنی مانند سبزیجات و میوه ها، غلات کامل و ماهی نیز می تواند به بهبود ایمنی کمک کند.

به طور خلاصه، رابطه بین آنتی ژن و ایمنی بسیار نزدیک است. تنها از طریق تماس مکرر با آنتی ژن ها و عادات مناسب زندگی می توان به طور مداوم ایمنی را بهبود بخشید و از بیماری های مختلف پیشگیری و درمان کرد. بنابراین، ما باید نگرش مثبت داشته باشیم و عادات زندگی خوب را برای محافظت از خود در برابر بیماری ها ایجاد کنیم. می توان دید که ما باید ایمنی خود را تقویت کنیم. سیستانچ می تواند به ما در بهبود ایمنی کمک کند، زیرا سیستانچ سرشار از انواع مواد آنتی اکسیدانی مانند ویتامین C، کاروتنوئیدها و غیره است. این مواد می توانند رادیکال های آزاد را از بین ببرند و استرس اکسیداتیو را کاهش دهند و مقاومت سیستم ایمنی را بهبود بخشند.

روی مکمل cistanche deserticola کلیک کنید

برای اندازه گیری سطوح IgG اختصاصی swIAV ناشی از واکسیناسیون و چالش، سرم خوک پس از واکسیناسیون اول (روز 20) و دوم (روز 30) و قبل از کالبدگشایی (روز 36) گرفته شد.

ویروس‌های غیرفعال شده با پروپیولاکتون خالص SD435 (1 میکروگرم بر میلی‌لیتر) و SD467 (2 میکروگرم در میلی‌لیتر)، رقیق‌شده در بافر پوشش کربنات/بی کربنات، (PH 9.6) روی صفحات چاه Immulon در دمای 1 استفاده شدند. 12}}0 میکرولیتر/چاه (Thermo Labsystems, Ottawa, ON, Canada, 3655) و یک شب در دمای 4◦C انکوبه شد. پس از انکوباسیون یک شبه، صفحات پوشش داده شده چهار بار با TBST (0.1 M Tris، 0.17 M NaCl و 0.05 درصد Tween 20) شسته شدند، که رقت‌های سری چهار برابری سرم یا BALF به آن اضافه شد. بشقاب را در دو نسخه، به دنبال انکوباسیون دو ساعته در دمای اتاق. سرم با رقت اولیه 1:10 اضافه شد و BALF رقیق نشده اضافه شد. نمونه‌هایی از سرم‌های کنترل مثبت قبلاً تعریف شده و کنترل‌های منفی مناسب، سرم و BALF از خوک‌های واکسینه نشده در مطالعه قبلی روی هر صفحه اجرا شد [14].

صفحات چهار بار با TBST شسته شدند، پس از آن آنتی بادی خالص شده با میل ترکیبی نشاندار شده با فسفاتاز ضد IgG بز (H به علاوه L) (1:5000) (Sigma Aldrich, SAB3700435) یا IgA ضد خوک موش (Serotec, MCA658) 1:300) رقیق شده در TBST اضافه شد و به مدت یک ساعت در دمای اتاق انکوبه شد. ELISA های IgA با افزودن آنتی بادی های ضد موش IgG (H به علاوه L) بز بیوتینیله (CALTAG، Burlingame، CA، USA، M30015) و محلول آلکالین فسفاتاز استرپتاویدین (Jackson ImmunoResearch، West Grove، PA) هر دو به مدت یک ساعت ایجاد شدند. در دمای اتاق.

پس از انکوباسیون، هر دو صفحه IgG و IgA چهار بار با TBST شسته شدند، که به آن سوبسترای p-نیتروفنیل فسفات (PNPP) [10 میلی‌گرم در میلی‌لیتر p-نیتروفنیل فسفات دی (تریس) نمک کریستالی (سیگما-آلدریچ) شسته شد. 1 درصد دی اتانول آمین (سیگما آلدریچ)، 0.5 میلی گرم در میلی لیتر MgCl2 و pH 9.8] (1 میلی گرم در میلی لیتر) اضافه شد و به مدت دو ساعت در دمای اتاق انکوبه شد.

واکنش با افزودن 0.3 مولار اتیلن دی آمین تترا استیک اسید (EDTA) متوقف شد و صفحات در یک اسپکتروفتومتر در 405 نانومتر با مرجع 490 نانومتر خوانده شدند. تیتر نمونه به عنوان بالاترین رقت تعریف شد که در آن OD آن نمونه بالاتر از برش تعریف شده بود (میانگین OD یک نمونه منفی شناخته شده به اضافه دو برابر انحراف استاندارد).

2.6. سنجش خنثی سازی ویروس (VN).

سلول های MDCK (3.5 × 104) در صفحات {3} چاهک قرار گرفتند. سرم و BALF در دمای 56 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه با حرارت غیرفعال شدند. رقت‌های دو برابری سرم و BALF در چهار برابر به صفحه اضافه شد و 60 میکرولیتر سرم رقیق شده یا BALF با حجم مساوی SD435 یا SD456 حاوی 100 TCID50 در دمای 37 درجه سانتی‌گراد به مدت 1 ساعت انکوبه شد. سپس 100 میکرولیتر از مخلوط به سلول‌های MDCK اضافه شد و اثر سیتوپاتوژنیک (CPE) در 48 ساعت و 72 ساعت پس از عفونت (pi) ثبت شد. تیتر آنتی‌بادی خنثی‌سازی، بالاترین رقت هر نمونه سرم بود که سلول‌ها را در حداقل 2 از 4 چاهک کاملاً از CPE محافظت می‌کرد.

2.7. تعیین ویروسی

پس از جمع آوری، نمونه های ریه بلافاصله روی یخ قرار گرفتند و تا زمان پردازش در دمای 80- درجه سانتیگراد منجمد شدند. برای پردازش، هر بافت ریه وزن شد و غلظت 10 درصد (w/v) MEM همراه با 1× آنتی‌بیوتیک-ضد قارچ (Thermo Fisher Scientific, 15240-062) اضافه شد. بافت ریه در TissueLyser II (Qiagen, Hilden, Germany) در فرکانس 30 هرتز به مدت 5 دقیقه همگن شد و به دنبال آن سانتریفیوژ در 5000 × گرم به مدت 10 دقیقه در دمای 4◦C انجام شد. مایع رویی هموژنیزه شده جمع آوری و در دمای 80- درجه سانتیگراد تا تجزیه و تحلیل بیشتر نگهداری شد. سواب های بینی به مدت 15 ثانیه ورتکس شدند و در دمای 1600× گرم به مدت 25 دقیقه در دمای 4 درجه سانتیگراد سانتریفیوژ شدند. مواد رویی جمع آوری و تا تجزیه و تحلیل بیشتر در دمای 80- درجه سانتیگراد نگهداری شدند. تیترهای ویروسی با روش TCID50 برای ریه و RT-PCR کمی برای سواب بینی تعیین شد.

2.8. استخراج RNA و RT-PCR کمی (qRT-PCR)

برای تعیین سطوح RNA ویروسی SD467 و SD435 در سواب بینی پس از چالش، qRT-PCR انجام شد. یک منحنی استاندارد با استفاده از RNA استخراج شده از SD435 و SD467 از یک تیتر شناخته شده ساخته شد. به طور خلاصه، کیت کوچک RNeasy Plus (Qiagen, Toronto, ON, Canada, 74136) برای استخراج vRNA از 200 میکرولیتر شستشوی بینی استفاده شد. RNA با استفاده از پرایمر جهانی آنفلوانزا Uni12 و SuperScript III Transcriptase (Invitrogen، Burlington، ON، کانادا) به cDNA تبدیل شد [19]. qPCR در سه نسخه بر روی یک سیستم PCR Real-Time StepOnePlus (Applied Biosystems، CA، USA) با Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems)، 5 میکرولیتر cDNA و 1 میکرولیتر از پرایمرهای جلو و معکوس 10 میکرومولار انجام شد. واکنش های PCR در دمای بازپخت 58 درجه سانتیگراد به مدت 40 سیکل اجرا شد. تمام توالی پرایمرهای qPCR در صورت درخواست در دسترس هستند.

2.9. تحلیل آماری

تجزیه و تحلیل آماری با استفاده از نرم افزار GraphPad Prism 8 انجام شد. از آزمون های ناپارامتریک من ویتنی و کروسکال والیس استفاده شد. تفاوت های قابل توجه با * (p < 0.05)، ** (p < 0.{10}}1)، *** (p <0.001) نشان داده می شود. ، یا **** (p < 0.0001). ns=قابل توجه نیست.

3. نتیجه

3.1. واکسیناسیون با واکسن دو ظرفیتی محافظت در برابر ایزوله های بالینی جدید را فراهم می کند

ما پاسخ فیزیکی به ویروس های چالش برانگیز و همچنین تکثیر ویروسی در دستگاه تنفسی را اندازه گیری کردیم تا حفاظت ارائه شده توسط واکسن دو ظرفیتی در برابر این ایزوله های بالینی جدید را ارزیابی کنیم. درجه حرارت روزانه به مدت پنج روز پس از چالش ویروسی در همه گروه ها ثبت شد. خوک هایی که واکسینه شدند و با SD435 (H3N2) (MEM/SD435) یا SD467 (H1N2) (MEM/SD467) واکسینه شدند و با دمای متوسط ​​40.6 ◦C و 41.1 ◦ افزایش دمای معمولی در روز اول پس از ویروس نشان دادند. C به ترتیب. این سنبله در گروه های واکسینه شده که با SD435 (دو ظرفیتی/SD435) یا SD467 (دو ظرفیتی/SD467) که به ترتیب دارای دمای متوسط ​​39.4 درجه سانتیگراد و 39.6 درجه سانتیگراد بودند، دیده نشد. در روزهای 2 تا 5 پس از چالش، هر دو گروه واکسینه شده و واکسینه نشده دمایی در حدود ◦ 39 داشتند (شکل 2A).

پنج روز پس از چالش، همه خوک‌ها کالبد شکافی شدند، با ریه‌ها برداشته شد و برای تعیین کمیت ضایعات موجود تجزیه و تحلیل شد. گروه Bivalent/SD435 حداقل ضایعات یا بدون ضایعات را با میانگین 0.65 درصد کل ضایعات ریوی نشان داد. گروه MEM/SD435 دارای ضایعات به طور قابل توجهی بالاتر از همتای واکسینه شده خود بود، با میانگین 5.1 درصد (p=0.0025) (شکل 2B). در گروه Bivalent/SD467، از هر هفت خوک، پنج خوک دارای مقادیر کم ضایعات بودند.<2%), one had minor lesions (3.75%), and one outlier had high lesions (31%), with a group median of 1.9%. Compared with the vaccinated group, the MEM/SD467 group had a higher degree of lesions with a median of 4.55% (p = 0.0417) (Figure 1C).

در ریه‌ها، گروه‌های Bivalent/SD435 و Bivalent/SD467 هر دو تیتر پایینی از ویروس داشتند، به ترتیب میانگین PFU/mL/gr 8.6 و 3.{5}} PFU/mL/gr. برعکس، گروه‌های MEM/SD435 و MEM/SD467 مقادیر بالاتری از ویروس داشتند، به ترتیب میانگین‌های 656.1 و 9118.2 PFU/mL/gr (p=0.{27}}025 برای هر دو) (شکل 3A، ب). روندهای مشابهی در سواب بینی مشاهده شد. در گروه Bivalent/SD435، تیتر بینی در روزهای 1، 3 و 5 پس از چالش پایین بود (dpc)، در حالی که در گروه MEM/SD435 تیتر کمی افزایش یافت و با پیشرفت روز (ns) افزایش یافت (شکل 3C). در گروه Bivalent/SD467، تیتر بینی نیز پایین بود، به طور متوسط ​​کمتر از 5 PFU/ml در روزهای 1 و 5، و 10.0 PFU/mL در روز 3 پس از چالش. تیترها در گروه MEM/SD467 در هر روز بالاتر بود، به طور متوسط ​​4123.6 PFU/mL/gr در 1dpc (p=0.0278)، 77233.1 PFU/mL/gr (p=0.0009) 3dpc و 65.2 PFU/mL/gr روی 5dpc (ns) (شکل 3D).

در مجموع، این نتایج نشان می دهد که واکسن دو ظرفیتی درجه قابل توجهی از محافظت در برابر سویه های چالش برانگیز، کاهش ضایعات ریوی و تکثیر ویروسی مرتبط با عفونت با این دو ایزوله swIAV در مجرای ریه و بینی را ارائه می دهد.

3.2. واکسن دو ظرفیتی باعث ایجاد پاسخ های ایمنی در برابر سویه های چالشی می شود

ما پاسخ آنتی بادی را در سرم و ریه خاص به هر دو سویه چالش پس از واکسیناسیون اولیه تقویت کننده با واکسن دو ظرفیتی اندازه گیری کردیم. سرم از خوک ها پس از واکسن اول (روز 2{20}}) و پس از واکسن دوم (روز 30) جمع آوری شد. ویروس های چالش SD435 (H3N2) و SD467 (H1N2) به عنوان آنتی ژن های جذب برای اندازه گیری پاسخ آنتی بادی IgG اختصاصی ویروس در سرم استفاده شدند. با SD435، تفاوت معنی داری بین تیتر آنتی بادی در MEM و گروه های واکسینه شده دو ظرفیتی پس از اولین واکسیناسیون (روز 20) وجود نداشت. با این حال، تیتر آنتی بادی SD467 در گروه واکسینه شده در روز 20 به طور قابل توجهی بالاتر بود (0321.0=0). پس از واکسن دوم (روز 31)، تیتر آنتی بادی در گروه واکسینه شده علیه SD435 و SD467 به طور قابل توجهی بیشتر از گروه واکسن ساختگی MEM بود (0001/0p<) (شکل 4A، B). به طور خاص، در برابر آنتی ژن جذبی SD435، تیترهای IgG سرم در گروه واکسینه ساختگی MEM در روزهای 20 و 30 به طور متوسط ​​52 بود، در حالی که در گروه واکسن دو ظرفیتی 311 (روز 20) و 4852 (روز 30) بود (شکل 3A). در مقابل SD467، تیترهای IgG سرم در گروه MEM واکسینه شده ساختگی 39 (روز 20) و 38 (روز 30) بود، در حالی که در گروه واکسن دو ظرفیتی 219 (روز 20) و 3509 (روز 30) بود (شکل 3B).

هنگامی که تیتر آنتی بادی خنثی کننده در سرم در برابر دو سویه چالش اندازه گیری شد، روند مشابهی مشاهده شد. باز هم، تفاوت معنی داری بین تیتر آنتی بادی خنثی کننده در گروه MEM و دو ظرفیتی واکسینه شده علیه SD435 پس از یک دوز واکسن (روز 20) ​​وجود نداشت (شکل 5A, B). در برابر SD467، سطح آنتی بادی در روز 2{23}} پس از یک واکسن به طور قابل توجهی بالاتر بود (0069.0=0). در برابر هر دو ویروس، افزایش تیتر آنتی‌بادی در گروه‌های واکسن دو ظرفیتی پس از دوز دوم روز 30 وجود داشت (0001/0p<). تیترها در گروه واکسینه ساختگی MEM با SD435 به طور میانگین 1 (روز 20) و 3 (روز 30) به چالش کشیده شدند، در حالی که تیترها در گروه دو ظرفیتی به طور متوسط ​​10 (da20) و 77 (روز 30) بود (شکل 5A). تیتر در گروه واکسینه ساختگی MEM که با SD467 به چالش کشیده شد به طور متوسط ​​0 (روز 20) و 2 (روز 30) بود، در حالی که تیترها در گروه واکسن دو ظرفیتی به طور متوسط ​​10 (روز 20) و 54 (روز 30) بود (شکل 5B).

پس از کالبدگشایی (روز 36)، BALF از هر یک از خوک‌ها جمع‌آوری شد تا بتوان سطح آنتی‌بادی را در ریه‌ها اندازه‌گیری کرد. ویروس های چالش SD435 و SD467 به عنوان آنتی ژن های جذب برای اندازه گیری پاسخ IgA و IgG ویژه ویروس استفاده شدند. در برابر SD435، سطوح IgA در گروه‌های واکسن ساختگی MEM به طور متوسط ​​17 بود، در حالی که تیترها در گروه واکسن دو ظرفیتی به طور قابل‌توجهی بالاتر بود، به طور متوسط ​​95 (p=0.0014) (شکل 6A). برای SD467، سطح IgA به طور متوسط ​​18 در گروه واکسن ساختگی بود و به طور قابل توجهی در 158 در گروه واکسن دو ظرفیتی بالاتر بود (0185.0=0) (شکل 6B). از نظر IgG، تیتر در برابر SD435 در گروه واکسن ساختگی MEM به طور میانگین 3 بود، در حالی که در گروه دو ظرفیتی، آنها به طور قابل توجهی در میانگین 138 بالاتر بودند (0001/0p<) (شکل 6C). آنتی بادی های IgG علیه SD467 در گروه های واکسن ساختگی MEM به طور متوسط ​​16 بود، در حالی که در گروه واکسن دو ظرفیتی، به طور قابل توجهی بالاتر بودند، به طور متوسط ​​259 (p <0.0001) (شکل 6D).

با توجه به آنتی بادی های خنثی کننده در BALF، روندها مشابه آنهایی بود که در ELISAهای IgA و IgG مشاهده شد. در مقابل SD435، تیترهای آنتی بادی خنثی کننده در گروه های واکسن ساختگی MEM غیرقابل تشخیص بود و میانگین آنها به طور قابل توجهی بالاتر بود و در گروه واکسن دو ظرفیتی 13.2 بود (p < 0. 0001) (شکل 7A). به طور مشابه، تیتر آنتی‌بادی اختصاصی SD467 در گروه‌های واکسن ساختگی MEM به طور متوسط ​​0.7 بود و در گروه واکسن دو ظرفیتی با میانگین تیتر 10.9 (p=0.0002) به طور قابل توجهی بالاتر بود (شکل 7B). در مجموع، این داده‌ها نشان می‌دهد که دو دوز واکسن دو ظرفیتی یک پاسخ هومورال سیستمیک قوی و همچنین یک پاسخ ایمنی موضعی در ریه در برابر این دو ایزوله بالینی غیرهمولوگ را القا می‌کند.

4. بحث

ما قبلاً نشان دادیم که ویروس‌های وابسته به الاستاز SD191-R342V و SD69.K345V در خوک‌ها کاملاً ضعیف و غیر ویروسی بودند و دو واکسیناسیون با این LAlV دو ظرفیتی پاسخ ایمنی قوی ایجاد کرد و در برابر عفونت با SD191 همولوگ محافظت کرد. سویه های H1N2) و SD69 (H3N2) [14). در این مطالعه حاضر، ما می‌خواستیم آزمایش کنیم که آیا واکسن دو ظرفیتی در داخل بدن در برابر جدایه‌های بالینی اخیری که تحت رانش آنتی ژنی قرار گرفته‌اند، مقاومت می‌کند یا خیر. SD467، مانند SD191، عضوی از گروه آنتی ژنی Ho{15}} است که در کانادا پدیدار شده است، اما جهش های متعددی در سایت های آنتی ژنی کلیدی به دست آورده است (12،15). به همین ترتیب، SD435 نشان دهنده خوشه H3N2 IV-E است. که در غرب کانادا وجود دارد و دارای چندین جایگزین اسید آمینه در سایت های آنتی ژنی H3 کلیدی از آنهایی است که در SD69 وجود دارد (17).

LAlV دو ظرفیتی هنگامی که با SD435 (H3N2) یا SD467 (H1N2) به چالش کشیده شد، به طور قابل توجهی ضایعات را در خوک‌های واکسینه‌شده کاهش داد و از افزایش دما که در گروه‌های MEM (ساختگی) واکسینه شده یک روز پس از چالش مشاهده شد، جلوگیری کرد. همچنین منجر به کاهش تکثیر ویروسی هر دو سویه در ریه و کاهش SD467 (H1N2) در سواب بینی شد. جالب توجه است که تیتر بینی SD435 (H3N2) در هر دو گروه واکسینه و واکسینه نشده، علیرغم روش‌های نمونه‌گیری یکسان، پایین بود، که نشان می‌دهد این سویه ممکن است به اندازه مسیرهای بینی حرکتی نداشته باشد. با توجه به خوک دورتر در گروهی که نمره ضایعه ریه بالایی 31 داشت، اندازه‌گیری‌های دما هیچ افزایشی در چالش نشان نداد و تیتر ویروس در ریه زیر 10 PFU/g/mL بود. سطح آنتی بادی در سرم و پاسخ ریه محلی نیز مانند سایر خوک های واکسینه شده بود. این ما را به این حدس می رساند که ضایعات مربوط به آنفولانزا نیستند. سروآنالیز نشان داد که یک پاسخ ایمنی قوی در برابر هر دو سویه پس از دو دوز واکسن ایجاد شد و همین امر در مورد تجزیه و تحلیل موضعی در ریه نیز صادق بود. گلیکوپروتئین های سطحی هدایت شده توسط آنتی بادی ها در محافظت در برابر عفونت IAV بسیار مهم هستند، بنابراین سطح بالای آنتی بادی های خنثی کننده و همچنین lgG و lgA موجود در خوک های واکسینه شده از محافظت دیده شده در داخل بدن حمایت می کند [20].

واکسن‌های کامل ویروس غیرفعال (WIV) رایج‌ترین واکسن‌های موجود برای خوک‌ها هستند که به‌صورت رادیویی با کمک کمکی فرموله می‌شوند، آنها یک رویکرد ایمن در نظر گرفته می‌شوند زیرا هیچ خطری برای دسته‌بندی مجدد با سویه‌های در گردش وجود ندارد. با این حال، آنها کارایی محدودی در برابر سویه‌های ناهماهنگ ارائه می‌دهند و نشان داده شده است که در صورت استفاده در برابر سویه‌های ناهماهنگ، منجر به اختلال تنفسی تقویت‌شده مرتبط با واکسن (VAERD) می‌شوند. کارایی آنها همچنین در حضور آنتی بادی های مشتق شده از مادر (MDA) کاهش می یابد [4]. موارد تجاری موجود در آمریکای شمالی عبارتند از FluSure XP®، که به عنوان یک فرمول چهار ظرفیتی در ایالات متحده با خوشه های H1N1، H1N2 و H3N2 IV-A و IV-B در دسترس است [21]. یک فرمول قدیمی‌تر از Flusure XP® در کانادا با دو سویه H1N1 و یک سویه H1N2 موجود است که بین سال‌های 2000 و 2005 جدا شده‌اند [22]. در هر دو کشور آمریکای شمالی، FluSure® Pandemic موجود است، یک واکسن تک ظرفیتی متشکل از سویه H1N1pdm09، و همچنین Pneumostar SIV Complete (Elanco، Greensboro، کارولینای شمالی، US Inc.)، که حاوی H1N1، H1N2، و H3N2، و پنوموستار SIV، با سویه‌های زیرگروه H1N1 و H3N2 (GOC، USDA) [23،24]. این واکسن‌های تجاری موجود حدود 50 درصد از واکسن‌های آنفلوانزای خوکی در آمریکای شمالی را تشکیل می‌دهند و 50 درصد دیگر واکسن‌ها واکسن‌های خودزا هستند [4].

از نظر پلتفرم‌های واکسن جایگزین، یک واکسن ذرات رپلیکون مشتق از آلفاویروس نوترکیب در ایالات متحده مجوز گرفت [4]. این پلت فرم واکسن از یک آلفاویروس با ژنوم تغییریافته استفاده می‌کند، جایی که ژن‌های ساختاری ویروسی با ژن انتخابی جایگزین می‌شوند و همانندسازی آلفاویروس را معیوب می‌کند. این RNA خود تکثیر می شود، بنابراین پلت فرم واکسن منجر به بیان بالای ژن مورد نظر می شود و برای آنفولانزا، هم HA و هم نوکلئوپروتئین (NP) به عنوان آنتی ژن مورد آزمایش قرار گرفته اند [25]. مطالعات نشان داده است که استفاده از این پلتفرم در برابر چالش‌های آنتی‌ژنیک HA-تطابق و عدم تطابق و همچنین سویه‌های ناسازگار با NP محافظت می‌کند، اگرچه پلتفرم قادر به محافظت در برابر حضور MDAs نبود.

اولین LAIV برای آنفولانزای خوکی توسط وزارت کشاورزی ایالات متحده (USDA) در سال 2017 تایید شد. Ingelvac Provenza™ یک واکسن دو ظرفیتی H3N2 و H1N1 است، با HA و NA از دو سویه جدا شده در ایالات متحده، که بر روی ستون فقرات TX98 بیان شده است. از طریق کوتاه کردن پروتئین غیر ساختاری (NS1) ضعیف می شود [14،26]. LAIV ها عفونت طبیعی را تقلید می کنند و در هنگام تزریق داخل بینی منجر به افزایش ایمنی مخاطی در راه های هوایی فوقانی می شوند. در جایی که واکسن‌های غیرفعال عمدتاً منجر به تولید آنتی‌بادی‌های IgG سیستمیک می‌شوند، واکسن‌های ضعیف شده زنده می‌توانند IgA مخاطی را در دستگاه تنفسی القا کنند و همچنین به دلیل قرار گرفتن سیستم ایمنی در معرض پروتئین‌های داخلی آنفولانزا که حاوی T بیشتری هستند، پاسخ سلولی را افزایش دهند. اپی توپ های سلولی [27]. این منجر به محافظت بهتر در برابر سویه های ناهماهنگ می شود.

آنها محافظت نسبی را در حضور MDA ها نشان داده اند. آنتی‌بادی‌های IgG کامل در دستگاه تنفسی تحتانی شایع‌تر هستند و آنتی‌بادی‌های پلیمری IgA در دستگاه تنفسی فوقانی خوک‌ها غالباً به صورت دایمر هستند [28]. این آنتی بادی ها به صورت محلی تولید می شوند و در سراسر لایه سلول های اپیتلیال منتقل می شوند، جایی که در مخاط باقی می مانند، به کمک یک جزء ترشحی که در برابر تخریب توسط پروتئازها مقاومت می کند [28،29]. آنتی بادی های IgA اولین خط دفاعی سیستم ایمنی تطبیقی ​​در برابر پاتوژن های ورودی هستند که برای جلوگیری از اتصال ویروسی به گیرنده های اسید سیالیک کار می کنند [30]. آنتی بادی‌های IgA پلیمری نسبت به آنتی‌بادی‌های IgG مونومر واکنش متقاطع‌تری دارند، که احتمالاً به دلیل اتصال چند ظرفیتی است [31]. مطالعات همچنین نشان داده اند که این آنتی بادی ها می توانند از آزادسازی IAV تازه تشکیل شده از سلول های آلوده بسیار موثرتر از IgG یا IgA مونومر که در سرم خوک یافت می شود جلوگیری کنند، که نشان می دهد ساختار پلیمری IgA برای پیوند متقابل نسل ویروسی مفید است. به HA بیان شده در سطح سلول آلوده [31-33]. بنابراین، پاسخ آنتی بادی IgA موضعی در محافظت در برابر عفونت با IAV ضروری است و پیشنهاد شده است که همبستگی محافظت در انسان باشد [34].

با این حال، خطر با LAIV پتانسیل برای طبقه بندی مجدد با سویه های در گردش است. یک مطالعه فیلوژنتیک در ایالات متحده، سویه‌های جدیدی را در گردش یافت که با سویه‌های واکسن موجود در Ingelvac Provenza [26] ترکیب شده بودند. پلتفرم LAIV وابسته به الاستاز این خطر را کاهش می‌دهد، زیرا پروتئین الاستاز در دستگاه تنفسی خوک بسیار کمیاب است، بنابراین تکثیر ویروس‌های واکسن بسیار محدود است، همانطور که چارچوب زمانی برای دسته‌بندی مجدد وجود دارد. مطالعات آتی شامل ارزیابی خطر دسته بندی مجدد این واکسن دو ظرفیتی و همچنین نحوه عملکرد این واکسن در حضور MDAها خواهد بود. همچنین آزمایش پاسخ سلولی این واکسن جالب خواهد بود، زیرا این یکی از مزایای اصلی LAIV است. در نتیجه، LAIV وابسته به الاستاز دو ظرفیتی، حفاظت را به ایزوله‌های بالینی جدیدی که در غرب کانادا یافت می‌شود، گسترش داد و برخی از شکاف‌ها را در بازار واکسن آنفلوانزای خوکی پر کرد.

مشارکت نویسنده:

مفهوم سازی، YZ; روش، YZ، و LA. تحلیل رسمی، LA; تحقیقات، LA و UB-C. منابع، SD; نوشتن - آماده سازی پیش نویس اصلی، LA; نوشتن- بررسی و ویرایش، YZ، UB-C.، و SD. نظارت، YZ; کسب بودجه، YZ همه نویسندگان نسخه منتشر شده نسخه خطی را خوانده و با آن موافقت کرده اند.

منابع مالی:

این تحقیق توسط صندوق توسعه کشاورزی (ADF)، وزارت کشاورزی ساسکاچوان تامین شده است. LA تا حدی توسط بورسیه واکسینولوژی و ایمونوتراپی (V&I) از دانشکده بهداشت عمومی، دانشگاه ساسکاچوان پشتیبانی می شود. VIDO بودجه عملیاتی را از دولت ساسکاچوان از طریق Innovation Saskatchewan و وزارت کشاورزی و از بنیاد کانادا برای نوآوری از طریق طرح‌های علمی اصلی برای تأسیسات CL3 خود (InterVac) دریافت می‌کند.

بیانیه هیئت بررسی نهادی:

قابل اجرا نیست.

بیانیه در دسترس بودن داده ها:

داده ها و تحلیل های این پژوهش همگی در این مقاله گزارش شده است.

قدردانی ها:

مایلیم از دامپزشکان و تکنسین های حیوانات VIDO برای انجام تمام کارهای حیوانی برای آزمایشات حیوانی ما تشکر کنیم. این اثر با مجوز مدیر VIDO به عنوان نسخه خطی شماره 1005 منتشر شده است.

تضاد علاقه:

نویسندگان هیچ تضاد منافع را اعلام نمی کنند.

منابع

وبستر، ویروس آنفلوانزا RG: انتقال بین گونه ها و ارتباط با ظهور بیماری همه گیر انسانی بعدی. قوس. ویرول. تامین 1997، 13، 105-113. [PubMed]

2. لی، ی. رابرتسون، I. اپیدمیولوژی آنفلوانزای خوکی. انیمیشن. دیس 2021، 1، 21. [CrossRef] [PubMed]

3. دونوان، تی. نقش آنفولانزا در عملکرد خوک در حال رشد. دانشگاه مینه سوتا: مینیاپولیس، MN، ایالات متحده آمریکا، 2005.

4. Gracia, JCM; پیرس، دی.اس. ماسیچ، ع. بالاش، M. آنفلوانزا ویروس A در خوکی: اپیدمیولوژی، چالش ها و استراتژی های واکسیناسیون. جلو. دامپزشکی-علمی 2020, 7, 647. [CrossRef] [PubMed]

5. Ma, W. ویروس آنفلوانزای خوکی: وضعیت فعلی و چالش. ویروس Res. 2020, 288, 198118. [CrossRef]

6. سوزوکی، ی. ایتو، تی. سوزوکی، تی. هلند، RE; چمبرز، TM; کیسو، م. ایشیدا، اچ. کاوائوکا، Y. گونه های اسید سیالیک به عنوان تعیین کننده محدوده میزبان ویروس های آنفلوانزا A. جی. ویرول. 2000، 74، 11825-11831. [CrossRef]

7. سان، ح. شیائو، ی. لیو، جی. وانگ، دی. لی، اف. وانگ، سی. لی، سی. ژو، جی. آهنگ، جی. سان، اچ. و همکاران ویروس آنفلوانزای خوکی H1N1 شبیه پرندگان اوراسیا با ژن های ویروسی همه گیر سال 2009 که عفونت انسان را تسهیل می کند. Proc. Natl. آکادمی علمی ایالات متحده آمریکا 2020، 117، 17204–17210. [CrossRef]

8. هنریتزی، دی. پتریک، PP; لوئیس، NS; گراف، ا. پسیا، ا. استاریک، ای. Breithaupt، A. استربلو، جی. لوترمن، سی. پارکر، LMK؛ و همکاران نظارت بر جمعیت خوک های خانگی اروپایی، یک مخزن نوظهور از ویروس های آنفولانزای خوکی بالقوه زئونوز A را شناسایی می کند. سلول میزبان میکروب 2020، 28، 614–627.e6. [CrossRef]

9. وینسنت، آل. ما، دبلیو. Lager، KM; Janke، BH; ویروس های آنفولانزای خوکی ریچت، JA: دیدگاه آمریکای شمالی. Adv. ویروس Res. 2008، 72، 127-154.

10. راجائو، دی اس; اندرسون، TK; کیتیکون، پ. استراتن، جی. لوئیس، NS; وینسنت، AL تکامل آنتی ژنی و ژنتیکی ویروس های آنفلوانزای H1 خوکی معاصر در ایالات متحده. ویروس شناسی 2018، 518، 45-54. [CrossRef]

11. منا، ط. من نلسون، ام. Quezada-Monroy، F. دوتا، جی. کورتس-فرناندز، آر. لارا-پوئنته، جی اچ. کاسترو پرالتا، اف. Cunha، LF; Trovão، NS; لوزانو-دوبرنارد، بی. و همکاران خاستگاه همه‌گیری آنفلوانزای H1N1 2009 در خوکی در مکزیک. Elife 2016, 5, e16777. [CrossRef]

12. نلسون، MI; کولهن، ام آر. Trovão، NS; Patnayak، DP; هالپین، RA; لین، ایکس. Shilts، MH; داس، اس آر. Detmer، SE ظهور و تکامل ویروس های آنفولانزای A (H1) در خوکی در کانادا و ایالات متحده. جی ژنرال ویرول. 2017، 98، 2663-2675. [CrossRef] [PubMed]

13. Chauhan، RP; گوردون، ML مروری سیستماتیک در تجزیه و تحلیل شیوع و گردش ویروس های آنفولانزا در جمعیت خوکی در سراسر جهان. Pathogens 2020, 9, 355. [CrossRef]

14. لندرث، اس. دتمر، اس. گردتس، وی. Zhou، Y. یک واکسن دو ظرفیتی زنده ضعیف شده ویروس آنفلوانزا از عفونت ویروسی H1N2 و H3N2 در خوکی محافظت می کند. دامپزشک میکروبیول. 2020, 253, 108968. [CrossRef] [PubMed]

15. مک کورمیک، ک. جیانگ، ز. زو، ال. لاوسون، اس آر. لانگنهورست، آر. رانسبورگ، آر. برونیک، سی. تریسی، ام سی; Hurtig، HR; Mabee، LM; و همکاران ساخت و ارزیابی ایمنی زایی ویروس های نوترکیب آنفلوانزای A حاوی ژن های هماگلوتینین کایمریک مشتق شده از ویروس های فرعی آنفلوانزای A H1N1 از نظر ژنتیکی واگرا. PLoS ONE 2015, 10, e0127649. [CrossRef] [PubMed]

For more information:1950477648nn@gmail.com