3.3. مطالعات درون آزمایشگاهی

3.3.1. بررسی سمیت سلولی در کراتینوسیت های انسانی

طبق مطالعات مربوطه،سیستانچگیاهی رایج است که به عنوان "علف معجزه آسا طولانی کننده عمر" شناخته می شود. جزء اصلی آن استسیستانوزید، که دارای اثرات مختلفی از جملهآنتی اکسیدان, ضد التهاب،وارتقاء عملکرد سیستم ایمنی. مکانیسم بین سیستانچ وسفید شدن پوستدر اثر آنتی اکسیدانی نهفته استگلیکوزیدهای سیستانش. ملانین در پوست انسان از اکسیداسیون تیروزین که توسط آن کاتالیز می شود تولید می شودتیروزینازو واکنش اکسیداسیون نیاز به مشارکت اکسیژن دارد، بنابراین رادیکال های آزاد اکسیژن در بدن به عامل مهمی در تولید ملانین تبدیل می شوند. سیستانچ حاوی سیستانوزید است که یک آنتی اکسیدان است و می تواند تولید رادیکال های آزاد را در بدن کاهش دهد.مهار تولید ملانین.

روی Cistanche Powder Bulk کلیک کنید

برای اطلاعات بیشتر:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

سنجش MTT برای آزمایش اینکه آیا PPEE، PPEE-SLNs، و KDPAG می‌توانند روی زنده‌مانی سلول‌ها با استفاده از کراتینوسیت‌های انسانی تأثیر بگذارند یا خیر، استفاده شد. غلظت‌های مختلف PPEE، PPEE-SLNs، SLN‌های بدون عصاره و KDPAG در 0.{{1{12}}}}625–1mg/mL طی 24 ساعت با رده سلولی کراتینوسیت انسانی انکوبه شد. (شکل 2). در طی 24 ساعت، کاهش قابل توجهی در زنده ماندن سلول‌های کراتینوسیت انسانی در محدوده غلظت 0 مشاهده نشد. با این حال، پس از درمان با 1 میلی گرم در میلی لیتر از PPEE، PPEE-SLNS، SLN های بدون عصاره و KDPAG طی 24 ساعت، کاهش قابل توجهی در زنده ماندن سلولی کراتینوسیت های انسانی مشاهده شد، 93 درصد، 90 درصد، 95 درصد و 89 درصد از سلول ها به ترتیب زنده ماندند. بنابراین، غلظت PPEE، PPEE-SLNs، و KDPAG برابر یا کمتر از 0.5 میلی گرم در میلی لیتر برای مطالعات بعدی استفاده شد.

فعالیت آنتی اکسیدانی با استفاده از سیستم‌های DPPH، ABTS و تست بلیچینگ کاروتن مورد ارزیابی قرار گرفت. در تمام نمونه های آزمایش شده، روشی وابسته به غلظت پیدا شد. در سنجش DPPH، KDPAG بالاترین فعالیت مهار را به دنبال PPEE-SLN و سپس PPEE نشان داد. مقادیر IC5{18}} به ترتیب 3.4 ± 6.35 {{3{33}}}} میکروگرم در میلی لیتر، 2.7 ± 8.790 میکروگرم بر میلی لیتر در مقایسه با ویتامین C 1.81 ± 10.5 میکروگرم بر میلی لیتر بود. به عنوان استاندارد با IC50 0.01 ± 2 میکروگرم بر میلی لیتر استفاده می شود. این روند همچنین در برابر رادیکال‌های ABTS با مقدار 1.43 ± 3.91 میکروگرم بر میلی‌لیتر، 1.12 ± 4.29 میکروگرم بر میلی‌لیتر و 6.10 ± 0.62 میکروگرم بر میلی‌لیتر در مقایسه با ویتامین استاندارد مشاهده شد. C با IC50 0.02 ± 0.96 میکروگرم بر میلی لیتر که نتایج سنجش DPPH را تأیید می کند. چنین فعالیت مهاری برای عصاره‌های برگ PP و فراکسیون‌های آنها قبلاً برای هر دو سنجش اما با مقادیر بالاتر از مقادیر به‌دست‌آمده اشاره شده است [14،49]. این یافته ها نشان می دهد که فعالیت آنتی اکسیدان ها تحت تأثیر شرایط محیطی، اجزای گیاه، مرحله بلوغ، روش برداشت و حلال های مورد استفاده برای استخراج قرار می گیرد. این نتایج با ادبیات مطابقت دارد زیرا در هر دو سنجش مشخص شد که عصاره برگ PP ظرفیت آنتی اکسیدانی بهتری نسبت به عصاره دانه، پوست، پالپ و میوه دارد [14،20،50]. همچنین، محتوای بالای فلاونوئید گزارش شده برگ های PP، به ویژه، فلاونول ها مسئول فعالیت آنتی اکسیدانی هستند [20].

PPEE، PPEE-SLNs و KDPAG فعالیت ضد الاستاز، ضد کلاژناز و ضد تیروزیناز را با درصد مهاری بالا در 300 میکروگرم بر میلی لیتر و مقادیر IC50 نسبتاً پایین در مقایسه با کنترل‌های مثبت مربوطه نشان دادند (جدول 3).

3.4. ارزیابی کرم های PPEE-SLN و PPEE-SLNs

فرمول‌های آماده‌شده PPEE-SLN اندازه‌های ذرات 170 نانومتر تا ۱۷۶ نانومتر را نشان دادند. این نشان می دهد که افزودن سورفکتانت به سیستم های نانوذرات لیپیدی جامد باعث متراکم شدن و تثبیت لایه سطحی می شود. فرمول‌ها مقادیر پایینی از شاخص پراکندگی را نشان می‌دهند (0.23{{10}}-0.450) که نشان‌دهنده همگنی توزیع اندازه ذرات با ZP بین -21.8 و -22.0 است که محصولات پایداری بالا را تضمین می‌کند (شکل 3a, ب). 70 تا 77 درصد کارآیی کپسولاسیون PPEE-SLN به دلیل نوع لیپید (مونوستئارات گلیسرول) است که قادر به بستن منافذ سطحی در مهره‌ها است. میکروگراف‌های TEM و SEM تشکیل نانوذرات با توزیع اندازه ذرات باریک، نانووزیکول‌های صاف، کروی و همگن را نشان دادند (شکل 3c,d). در FTIR، PPEE پیک‌های مشخصه‌ای در 3352 سانتی‌متر-1 مربوط به کشش آمین ثانویه آروماتیک NH، 2974.23 سانتی‌متر-1 مربوط به کشش آروماتیک CH، 1735.93 سانتی‌متر-1 مربوط به کشش C{26}}O و 1259 سانتی‌متر است. 1 مربوط به کشش آمین آلیفاتیک CN همانطور که در (شکل 4) نشان داده شده است. طیف FTIR مخلوط فیزیکی PPEE و لیپیدی به دلیل کشش آمین ثانویه آروماتیک NH در 3348.42 سانتی متر-1، کشش C{36}}O در 1735.93 سانتی متر-1، و آمین آلیفاتیک CN که در 1257.59 سانتی متر کشیده شده است، پیک های مشخصه مشابهی را نشان می دهد. -1. بنابراین، بدیهی است که تمام قله‌های مشخصه‌ای که در طیف PPEE وجود داشتند تقریباً در همان منطقه در طیف مخلوط فیزیکی PPEE-SLNs تکرار می‌شوند که نشان می‌دهد هیچ تعامل معنی‌داری بین داروها و لیپیدها وجود ندارد. کرم های PPEE-SLNs (2 درصد و 5 درصد) مایل به زرد با ظاهری صاف، سطح صاف و pH مناسب در محدوده 0.15 ± 5.8-5 بودند که سازگاری فرمولاسیون ها با ترشحات پوست را تأیید می کند، بدون تحریک پوست انسان، وجود قرمزی یا ادم، به راحتی قابل شستشو با آب و ارزش پخش پذیری خوب بین 10 تا 13 گرم سانتی متر بر ثانیه، با ویسکوزیته در محدوده 6.24 ± 500 تا 7.52 ± 600 CPS در 10 دور در دقیقه، بدون شواهدی از جداسازی فاز و قوام خوب در طول دوره مطالعه مقدار کل باکتری ها و کپک ها کمتر از 100 CFU/mL و در محدوده پذیرش برای محصولات مراقبت از پوست بود. کرم 2 درصد انتشار اولیه PPEE-SLN را در حدود 1.44 ± 15.21 درصد در طول 1 ساعت اول نشان داد. پس از آن، PPEE-SLN های به دام افتاده در کرم به تدریج آزاد شدند. 54/2 ± 32/60 درصد به ترتیب پس از 12 و 44/1 ± 62 درصد تقریباً پس از 24 ساعت رها شدند. از سوی دیگر، کرم 5 درصد، انتشار اولیه PPEE-SLN را در حدود 2.70 ± 20.21 درصد در طول 1 ساعت اول نشان داد. پس از آن، PPEE-SLN های به دام افتاده در کرم به تدریج آزاد شدند، 2.88 ± 77.12 درصد پس از 12 و 80 ± 2.91 درصد تقریباً پس از 24 ساعت به ترتیب آزاد شدند. هر دو فرمول کرم رهاسازی طولانی مدت PPEE را در طی 24 ساعت نشان دادند (شکل 5). علاوه بر این، مطالعه تحقیقاتی ما نشان داد که فرمولاسیون کرم (2 درصد و 5 درصد) به مدت دو ماه پایدار است.

3.5. مطالعات درون تنی

پس از بیست روز درمان با کرم، نمرات ضد چروک ارزیابی شد. اثر ضد چروک کرم PPEE-SLNs وابسته به دوز بود و اثر مشاهده شده در گروه کرم PPEE-SLNs 5 درصد (G5) با نتیجه در گروه کنترل مثبت (G3) قابل مقایسه بود که با یک محصول بازار (شکل 6) و نمرات ضد چروک بهتری را در مقایسه با کرم ضد چروک استاندارد نشان داد. عکس ها در شکل 7 ارائه شده اند. گروه ها (G3-G5) سطوح پوستی بسیار صاف و بهبود یافته را نشان دادند. هیچ تغییر پوستی در حیوانات G1 وجود نداشت. در مقابل، G2 چین و چروک های ضخیم و عمیق را نشان داد.

الیاف الاستیک با تابش اشعه ماوراء بنفش در مقایسه با گروه نرمال به طور قابل توجهی کاهش یافت. تصاویر پوست برای موش های درمان نشده و تحت درمان با میکروسکوپ مشاهده شد (شکل 8). G1 دارای ضخامت پوست نرمال در هر دو درم و اپیدرم بود و حاوی فیبروبلاست، علاوه بر ضخامت الیاف الاستیک نرمال بدون تکه تکه شدن بود. در مقایسه با G1، پوست موش های تحت تابش اشعه ماوراء بنفش (G2) افزایش قابل توجهی در ضخیم شدن اپیدرم و درم و همچنین کاهش تشکیل فیبروبلاست و الیاف الاستیک توسط تابش UV نشان داد. کاربرد موضعی کرم PPEE SLNs 5 درصد (G5) و 2 درصد (G4) با G3 که محصول تجاری دریافت کرده بود، قابل مقایسه بود. همه G4 و G5 به طور قابل توجهی ضخامت درم و اپیدرم را کاهش دادند و محتوای فیبروبلاست ها را افزایش دادند زیرا تعداد آنها محتوای فیبرهای کلاژن را تعیین می کند، بنابراین به ترمیم پوست آسیب دیده و کاهش اثر پیری روی پوست کمک می کند (شکل 9a,b). . همچنین، هر دو گروه اثرات پیشگیرانه در برابر تخریب الیاف الاستیک توسط تابش UV نشان دادند، بنابراین می‌توان نتیجه گرفت که تیمار با هر دوز کرم PPEE-SLNs اثر محافظتی در برابر تابش UV نشان داد.

برای اطلاعات بیشتر: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501