afزبان
صفحه اصلی / دانش / محتوای

دانش

یک گلیکوزید فلاونول اسیله شده منحصر به فرد از Prunus Persica (L.) Var. فلوریدا پرینس: فرمولاسیون آرایشی نانوذرات لیپید جامد جدید برای مراقبت از پوست قسمت 1

Apr 14, 2023

خلاصه: پلی فنول ها آنتی اکسیدان های غذایی شناخته شده ای هستند. آنها اخیراً علاقه قابل توجهی به استفاده برای جلوگیری از پیری پوست و هایپرپیگمانتاسیون ناشی از تابش اشعه ماوراء بنفش خورشیدی به خود جلب کرده اند. برگ‌های Prunus persica (L.) به عنوان محصولات جانبی در نظر گرفته می‌شوند و به دلیل محتوای بالای پلی‌فنل‌ها، فعالیت آنتی‌اکسیدانی قابل‌توجهی گزارش شده‌اند. این مطالعه با هدف توسعه کرم ضد پیری و سفید کننده پوست آرایشی با استفاده از عصاره برگ اتانولی Prunus persica (L.) (PPEE) بارگذاری شده در نانوذرات لیپیدی جامد (SLNs) برای افزایش تحویل پوست انجام شد. بررسی شیمیایی PPEE محتوای فنول و فلاونوئید کل به طور قابل توجهی بالا با فعالیت های آنتی اکسیدانی قابل توجه (DPPH، ABTS و سنجش -کاروتن) را نشان داد. یک گلیکوزید کامفرول آسیله منحصر به فرد با ساختار کمیاب، کامپفرول 3-O- -4C1-(600 -O-3،4-دی هیدروکسی فنیل استیل گلوکوپیرانوزید) ( KDPAG) برای اولین بار جدا شد و ساختار آن به طور کامل مشخص شد. این اولین نمونه از اسیلاسیون با 3،{10}}دی هیدروکسی فنیل استیک اسید در شیمی فلفلاوونوئید است. مطالعات سمیت سلولی در شرایط آزمایشگاهی علیه یک رده سلولی کراتینوسیت انسانی غیرسمی بودن PPEE و PPEE-SLNs را نشان داد. علاوه بر این، PPEE، PPEE-SLNs، و KDPAG فعالیت ضد الاستاز خوبی را نشان دادند، که قابل مقایسه با N (Methoxysuccinyl)-Ala-Ala-Pro-Val-کلرومتیل کتون است. علاوه بر این، PPEE-SLNs و KDPAG به ترتیب (P<0.001) فعالیت ضد کلاژناز و ضد تیروزیناز بالاتری را در مقایسه با EDTA و اسید کوجیک نشان دادند. فرمول های مختلف کرم PPEE-SLNs (2 درصد و 5 درصد) برای فعالیت ضد چروک احتمالی در برابر پیری نوری ناشی از اشعه ماوراء بنفش در مدل موشی با استفاده از روش امتیازدهی چین و چروک مورد ارزیابی قرار گرفتند و نشان داده شد که اثر محافظتی بسیار قابل توجهی در برابر UV ارائه می دهند. توسط بیومارکرهای بافتی (SOD) و مطالعات هیستوپاتولوژیک. بنابراین، مطالعه حاضر نشان می دهد که محصولات جانبی برگ Prunus persica منبع جالب و ارزشمندی برای مواد آرایشی طبیعی است. این داده‌های مرتبط را برای مطالعه بیشتر در مورد استفاده ایمن بالقوه PPEE-SLN در فرمول‌های آرایشی ضد پیری موضعی با خواص نفوذپذیری پوست افزایش می‌دهد.

طبق مطالعات مربوطه،سیستانچگیاهی رایج است که به عنوان "علف معجزه آسا طولانی کننده عمر" شناخته می شود. جزء اصلی آن استسیستانوزید، که دارای اثرات مختلفی از جملهآنتی اکسیدان, ضد التهاب، وارتقاء عملکرد سیستم ایمنی. مکانیسم بین سیستانچ وسفید شدن پوستدر اثر آنتی اکسیدانی نهفته استگلیکوزیدهای سیستانش. ملانین در پوست انسان از اکسیداسیون تیروزین که توسط آن کاتالیز می شود تولید می شودتیروزینازو واکنش اکسیداسیون نیاز به مشارکت اکسیژن دارد، بنابراین رادیکال های آزاد اکسیژن در بدن به عامل مهمی در تولید ملانین تبدیل می شوند. سیستانچ حاوی سیستانوزید است که یک آنتی اکسیدان است و می تواند تولید رادیکال های آزاد را در بدن کاهش دهد.مهار تولید ملانین

how to take cistanche

روی مکمل Cistanche برای سفید کردن کلیک کنید

برای اطلاعات بیشتر:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

کلید واژه ها:کامفرول 3-O- -4C1-(600 -O-3،4-دی هیدروکسی فنیل استیل گلوکوپیرانوزید) فرعی؛ نانوذرات لیپید جامد؛ آنتی اکسیدان؛ آنزیم های مرتبط با پوست در شرایط آزمایشگاهی؛ ضد چروک in-vivo

1. معرفی

پیری پوست یک فرآیند پیشرونده چندعاملی پیچیده است که تغییرات فیزیکی در پوست و بافت همبند را کاتالیز می کند [1]. به پیری درونی و بیرونی طبقه بندی می شود.

پیری بیرونی پوست عمدتاً ناشی از عوامل محیطی مانند آلاینده‌ها، سیگار کشیدن و استرس زندگی یا عمدتاً از قرار گرفتن مکرر در معرض اشعه ماوراء بنفش (فتوپیری) است [2].

قرار گرفتن بیش از حد در معرض اشعه ماوراء بنفش، تولید بیش از حد گونه‌های فعال اکسیژن (ROS) را تحریک می‌کند که منجر به استرس اکسیداتیو درون‌زا در بافت‌های پوست می‌شود که منجر به تخریب اجزای ماتریکس خارج سلولی (ECM) می‌شود. تخریب ECM به طور مستقیم با پیری پوست مرتبط است و مسئول افزایش فعالیت آنزیم های خاصی مانند کلاژناز، الاستاز و تیروزیناز است که در پیری پوست نقش دارند. این فعال شدن آنزیم های پوستی باعث کاهش سطح الاستین و کلاژن می شود که منجر به از بین رفتن خاصیت ارتجاعی و استحکام پوست و ایجاد چین و چروک می شود [3]. همچنین القای تولید بیش از حد ملانین و برنزه شدن پوست منجر به هایپرپیگمانتاسیون پوست می شود.

بنابراین، پیری پوست را می توان با آنتی اکسیدان هایی با فعالیت مهار رادیکال های آزاد که ممکن است اهمیت زیادی در دفاع و درمان بیماری های مرتبط با افزایش سن شامل ROS داشته باشد، جلوگیری کرد. راه دیگر به تاخیر انداختن پیری، استفاده از مهارکننده‌های الاستاز، کلاژناز و تیروزیناز است که کاندیدای بسیار قوی برای فعالیت‌های ضد چین و چروک و سفیدکننده پوست هستند که حفظ خاصیت ارتجاعی پوست را تأیید می‌کنند و می‌توانند یک رویکرد رایج برای مقابله با اختلالات رنگدانه باشند [5].

گزارش شده است که آنتی اکسیدان های طبیعی جدا شده از گیاهان، خطر پیری ناشی از تابش اشعه ماوراء بنفش را هم در شرایط in vitro و هم in-vivo کاهش می دهند [6] و از نظر هزینه و عوارض جانبی به عنوان مواد آرایشی نسبت به آنتی اکسیدان های مصنوعی ارجحیت دارند. علاوه بر این، بسیاری از مطالعات in vitro و in-vivo نشان داده‌اند که ترکیبات فنلی مانند اسیدهای فنولیک، فلاونوئیدها و تانن‌ها می‌توانند رادیکال‌های آزاد را از بین ببرند و آنزیم‌های الاستاز، کلاژناز و تیروزیناز را مهار کنند [7].

استفاده از آنتی اکسیدان های طبیعی در آماده سازی های موضعی برای محافظت از پوست در برابر استرس اکسیداتیو ناشی از عوامل بیرونی گزارش شده است [8]. با این حال، اکثر مولکول های آنتی اکسیدان به طور ذاتی ناپایدار هستند و می توانند به راحتی اکسید شوند و قبل از رسیدن به محل اثر، ترکیبات غیرفعال تشکیل دهند که فرمولاسیون آنها را در یک محصول آرایشی مناسب و پایدار دشوار می کند. این یافته‌ها ضرورت سیستم‌های تحویل منحصربه‌فرد برای تقویت این فرمول‌های آنتی‌اکسیدانی را اثبات می‌کند [9].

عوامل متعددی بر نفوذپذیری پلی فنل های موضعی استفاده می شود. زیر کلاس فنلی، ساختار آن، اندازه مولکولی آن، و شکل گلیکوزید یا آگلیکون، و همچنین سایر اجزای فرمولاسیون. با این حال، تعامل با اجزای پوست از طریق ترکیبی از روش‌های فیزیکی و شیمیایی می‌تواند نفوذپذیری را از طریق یک اختلال برگشت‌پذیر در ساختار مانع لایه شاخی پوست بهبود بخشد. روش‌های کپسوله‌سازی یکی از روش‌های افزایش نفوذپذیری هستند که معمولاً برای تثبیت آسان پلی‌فنول‌ها در طول ذخیره‌سازی، افزایش اثرات آنتی‌اکسیدانی، جذب پوستی و نفوذ آن‌ها در درمان‌های زیبایی و موضعی استفاده می‌شود. فن‌آوری‌های کپسوله‌سازی جدید شامل نانوامولسیون‌ها، ترانسفرازها، نانوذرات لیپیدی جامد، نانوبلورها و ریبوزوم‌ها می‌شوند [10].

cistanche side effects reddit

نانوذرات لیپید جامد (SLNs) یک سیستم تحویل پایدار برای محصولات پوستی هستند. SLN ها به دلیل پایداری در نور، خواص رهش کنترل شده، انسداد، اثرات پوشاندن بو، و افزایش نفوذ ترکیبات فعال از طریق پوست با افزایش هیدراتاسیون بدون هیچ نشانه ای از تحریک پوست، علاوه بر سادگی، حامل های دارویی امیدوارکننده ای برای فرمولاسیون های موضعی هستند. تولید، سمیت کم و پایداری فیزیکی [9،11].

بنابراین، بسیار مهم است که با استفاده از یک سیستم انتقال نانوحامل، همراه با توانایی آن در بهبود سیستم آنتی اکسیدانی بدن، به دنبال منبع مرتبط پلی فنل های گیاهی به عنوان عوامل درمانی ضد چروک و سفید کننده پوست باشید.

در سراسر جهان، حدود 2000 رقم هلو وجود دارد [12]. Prunus (Rosaceae) یک جنس گیاهی معروف است که شامل گونه های غنی از فنول است [13-15]. برخی از گونه های این جنس در مصر برای میوه های خوراکی و یا به عنوان گیاهان زینتی کشت می شوند [16].

Prunus persica (L.) Batch (PP) درختی کوچک با شاخه‌های بدون کرک و تنه کوتاه، تاجی گرد و گسترده [12] است و معمولاً در غرب آسیا، اروپا، هند و شمال آفریقا کشت می‌شود [17]. به طور سنتی از برگ های آن به عنوان مدر، ملین، ورمیفیوژ، حشره کش، آرام بخش، برای سیاه سرفه، برای درمان لوکودرما و به عنوان تب بر استفاده می شده است [17]. علاوه بر این، مطالعات فارماکولوژیک روی برگ‌ها، اثرات ضد دیابتی، اسپاسم‌زایی، ضد التهابی، ضد انعقادی، محافظت از کبد، ضد مالاریا، ضد آسم و مهار سیتوتوکسیک، ضد میکروبی و نیتریک اکسید را در شرایط آزمایشگاهی با فعالیت‌های آنتی‌اکسیدانی قابل توجه مشخص کردند. [18-22].

مطالعات زیادی برای بررسی مشخصات فنولی پیروان PP، میوه‌ها و دانه‌ها، فعالیت‌های آنتی‌اکسیدانی و ارزش‌های دارویی و تغذیه‌ای آن‌ها انجام شده است [13،14،23،24]. با این حال، داده های بسیار کمیاب روی برگ ها در دسترس بود. تا به امروز، یک گزارش واحد در دسترس است که جداسازی پنج فلاونول گلیکوزید را از عصاره برگ اتانولی توصیف می‌کند [25]. علاوه بر این، ترکیبات فنلی از جمله اسیدهای فنولیک و فلفلاوونوئیدها با استفاده از تجزیه و تحلیل HPLC-MS با فلفلاوونول ها به عنوان مواد غالب در بین تمام ترکیبات تعیین شده مشخص شده اند [20،26].

علاوه بر این، اگرچه دانه‌ها، میوه‌ها، پیروان و سایر گونه‌های PP فعالیت محافظتی درون تنی در برابر پیری نوری ناشی از اشعه ماوراء بنفش و فعالیت‌های ضد چروک و سفیدکننده پوست در شرایط آزمایشگاهی دارند [15،23،27-32]، این هرگز برای عصاره برگ PP گزارش نشده است.

مقادیر زیادی از برگ های PP محصولات جانبی حاصل از کشت درخت هلو و صنایع کنسرو میوه هستند [33]. محصولات جانبی دانه‌های PP، میوه‌ها و سایر گونه‌های برگ در لوازم آرایشی و به عنوان غذای رژیمی برای ارزش‌گذاری بالقوه مورد ارزیابی قرار گرفته‌اند [32،34،35]. با این حال، تا آنجا که ما می دانیم، برگ های فرعی PP var. شاهزاده فلوریدا هرگز مورد بررسی قرار نگرفته است و می تواند منبع جالبی از مواد شیمیایی گیاهی باشد. در مقایسه با سایر صنایع، بازار لوازم آرایشی در دسترس تر و در حال گسترش است و می تواند منبعی برای ارزش گذاری محصولات جانبی باشد [15]. محصولات مراقبت از پوست و پیری پوست برخی از مهم ترین پتانسیل های آرایشی هستند.

در ادامه تحقیقات ما بر روی پلی فنول‌های گیاهان خوراکی مصر [36] و از آنجایی که برگ‌های PP به عنوان محصولات جانبی در نظر گرفته می‌شوند و گزارش شده است که فعالیت آنتی‌اکسیدانی قابل‌توجهی عمدتاً به دلیل محتوای بالای فلاونول‌ها دارند، این مطالعه با هدف قرار دادن PPEE در معرض یک فیتوشیمیایی گسترده است. تجزیه و تحلیل مشخصات فنلی آن و ترکیب PPEE در SLN های بارگذاری شده به عنوان یک سیستم تحویل پوست منحصر به فرد. علاوه بر این، پتانسیل آرایشی ضد پیری و سفیدکننده پوست با بررسی فعالیت آنتی اکسیدانی in vitro PPEE، PPEE-SLNs، و اجزای جدا شده، همراه با ارزیابی اثرات بازدارندگی آنها در برابر آنزیم های مرتبط با پوست مورد ارزیابی قرار گرفت. علاوه بر اختلاط PPEE-SLNs در یک کرم ضد پیری موضعی آرایشی و بهداشتی و برای آزمایش ایمنی محصول و همچنین ارزیابی فعالیت ضد چروک احتمالی in-vivo فرمولاسیون کرم PPEE-SLNs در برابر پیری نور ناشی از UV در مدل ماوس این می‌تواند داده‌هایی را برای مطالعه بیشتر استفاده بالقوه برگ‌های PPEE-SLN در فرمول‌های موضعی با نفوذ بیشتر پوست فراهم کند.

2. مواد و روشها

2.1. عمومی

NMR spectra were acquired in DMSO-d6 on an Avance 400 NMR spectrometer (Bruker bio spin Gmbh, Rheinstetten, Germany) at 400 MHz. Standard pulse sequence and parameters were used to obtain one-dimensional 1H and 13C-APT, and two-dimensional HSQC and HMBC spectra. 1H chemical shifts (δ) were measured in ppm, relative to TMS, and 13C-NMR chemical shifts to DMSO-d6 and were converted to TMS scale by adding 39.49. ORAC measurements were performed on a FLUOstar Omega Microplate Reader (BMG LABTECH Gmbh, Ortenberg, Germany). A Shimadzu UV–Visible-1601 spectrophotometer (Shimadzu, Kyoto, Japan) was used for recording the UV spectra. Chromatographic analysis (PC) was carried out on Whatman No. 1 paper, using solvent systems: (1) H2O; (2) 6% HOAc; (3) BAW (n-BuOH–HOAc–H2O, 4:1:5, upper layer). For 2-DPC, solvent 2 was used for the first way and solvent 3 for the second way. Materials: chemicals, solvents, elastase, collagenase, tyrosinase enzymes, and reference drugs (EDTA, kojic acid, and N-(Methoxysuccinyl)-Ala-Ala-Pro-Val-chloromethyl ketone with purities >95 درصد) از سیگما آلدریچ (Sigma-Aldrich, MO, USA) به دست آمد.

cistanche for sale

2.2. مواد گیاهی

برگهای Prunus persica (L.) Batsch var. شاهزاده فلوریدا در ژوئن 2020 از مزرعه EL-حشش، ورودی الباستان، جاده صحرای قاهره-اسکندریه K. 103، 18 k. جمع آوری شد. داخل، مصر نمونه کوپن (4643) در هرباریوم بخش تحقیقات فلور و فیتوتاکسونومی (CAIM)، موسسه تحقیقات باغبانی، مرکز تحقیقات کشاورزی، جیزه، مصر قرار داده شد. پروفسور دکتر عبدالحلیم عبدالمغالی، پروفسور گیاه شناسی در مرکز تحقیقات کشاورزی، هویت آن را تایید کرده است.

2.3. تهیه عصاره گیاهی 

استخراج نمونه برگ PP (2 کیلوگرم) با استفاده از EtOH/H2O داغ (3:1، سه بار، هر 3 لیتر، به مدت 8 ساعت، تحت رفلاکس) و سپس تبخیر حلال تحت فشار کاهش یافته در دمای 50 درجه سانتیگراد انجام شد و عصاره ای آمورف به دست آمد. PPEE با رنگ تیره مایل به قهوه ای (101 گرم).

2.4. تعیین محتوای پلی فنول کل (TPC) 

معرف Folin-Ciocalteu همانطور که توسط لی و همکاران [37] شرح داده شد برای تخمین مقدار کل محتوای فنلی در PPEE استفاده شد که به صورت میلی گرم اسید گالیک معادل بر گرم عصاره خشک ارائه شده است.

2.5. تعیین محتوای فلاونوئید کل (TFC)

روش رنگ سنجی کلرید آلومینیوم توصیف شده توسط بهرومون و همکاران، [38] برای تخمین محتوای کل فلاونوئید استفاده شد. نتایج به صورت میلی گرم کوئرستین معادل در گرم عصاره خشک ارائه شده است.

2.6. تقسیم بندی PPEE و جداسازی ترکیب 1

ماده خشک حاصل (101 گرم)، حل شده در 150 میلی‌لیتر MeOH، به یک ستون ژل MCI (CHP20P، 75-150 میلی‌متر؛ شرکت شیمیایی میتسوبیشی، دوسلدورف، آلمان) اعمال شد و توسط مخلوط‌های MeOH/H2O با قطبیت‌های کاهشی شسته شد. این منجر به چهار کسر اصلی (I-IV) می شود. شستشوی کسر I با استفاده از 30 درصد MeOH/H2O، 22 گرم انجام شد. کسر II با 50 درصد MeOH آبی، 3.1 گرم شسته شد. کسر III، با 70 درصد MeOH آبی (4.6 گرم). کسر IV، با 90 درصد MeOH آبی (1.9 گرم) شسته شد. یک محلول غلیظ از کسر III یک شبه در دمای اتاق باقی ماند و یک نمونه خام از ترکیب 1 (765 میلی گرم) به دست آورد. پس از آن فیلتراسیون و حل شدن مجدد در EtOH در حال جوش انجام می شود، سپس در دمای اتاق باقی می ماند تا نمونه خالص زرد مایل به قهوه ای 1 (530 میلی گرم) بدست آید.

2.7. شناسایی کامفرول 3-O- -4C1-(6"-O-3،4-دی هیدروکسی فنیل استیل گلوکوپیرانوزید) (1)

مقادیر Rf: 34 (H2O)، 39 (15 درصد HOAc)، 44 (BAW). UV در MeOH λmax nm: 268، 316، 368; NaOAc: 267, 317, 369; NaOAc به اضافه H3BO3: 268, 318, 340; NaOMe: 277, 37{186}}. هیدرولیز اسید معمولی باعث گلوکز (Co-PC)، کامفرول (Co-PC) و 3،{21} دی هیدروکسی فنیل استیک اسید (طیف UV و 1H NMR)، UV λmax (MeOH): 224، 282 نانومتر شد. λmax (MeOH به علاوه A1C13): 220، 250 (sh)، 291 نانومتر. (MeOH به اضافه NaOAc به علاوه H3BO3) 211، 234 (sh)، 288 نانومتر. 1H NMR: δ ppm: 3.40 (s، 2H، C-H2)، 6.60 (m، 3H معطر، H{44}}، H{45}}، H-6)، درمان -گلوکوزیداز 1 [آنزیم لیوفیلیزه، کروماتوگرافی خالص و بدون نمک از بادام، BDH Merck، Poole Dorset، UK (EC 3.2.1.21)] به مدت 24 ساعت، در دمای 37 درجه سانتیگراد در بافر استات، pH 5.1: ترکیب بدون تغییر بازیابی شد. 1H-NMR از 1: δppm: نصفه کامفرول: 8.0.3 (d، J=8 هرتز، H-20 و H{-60)، 6.89 (d، J=8 هرتز، H-30 و H-50، 6.45 (d، J=2 هرتز، H-6)، 6.21 (d، J=2 هرتز، H -8)؛ نصف گلوکز: 5.42 (d، J=8 هرتز، پروتون آنومریک H-100)، 4.04 (dd، J=12 هرتز و J=4}.5 هرتز، H{{{ 88}} a), 4.2 (d, J=12 Hz, H-600 b); 3،{94}}بخش دی هیدروکسی فنیل استیک اسید: 3.46 (تک تک گسترده، ∆ν1/{98}} هرتز، CH2-7)، 6.67 (m، 3H، H{103}}، H{ {104}}، H{105}}). 13C-NMR of 1: δ ppm: kaempferol moiety:156.65 (C{111}}), 133.5 (C{114}}), 178.01 (C{117}}), 161.69 (C{120}) ), 99.13 (C{123}}), 164.58 (C{126}}), 93.90 (C{129}}), 156.71 (C-9), 104.39 (C{135}} ), 121.34 (C-10 ), 133.66 (C-20 و C{142}} ), 161.63 (C-40 ), 115.20 (C-30 و C{ {149}}) glucose moiety: 99.13 (C{152}}), 73.85 (C{155}}), 76.88 (C{158}}), 70.35 (C{161}}), 76.96 (C{164} } ), 62.25 (C{167}} ); 3،{169}}بخش دی هیدروکسی فنیل استیک اسید: 127.87 (C{172}})، 116.35 (C{175}})، 145.33 (C{178}})، 148.92 (C{181} })، 121.57 (C-5000)، 117.0 (C{187}})، 176.26 (C=O)، 40.02 (C-H2).

2.8. مطالعات درون آزمایشگاهی

2.8.1. بررسی سمیت سلولی در کراتینوسیت های انسانی

رده سلولی کراتینوسیت های انسانی از شرکت VACSERA (شرکت مصری برای تولید واکسن، سرم و دارو، جیزه، مصر) به دست آمد. سنجش MTT برای PPEE و PPEE-SLN بر اساس روش مصطفی و همکاران انجام شد. [36].

2.8.2. سنجش آنتی اکسیدانی در شرایط آزمایشگاهی

سنجش DPPH با استفاده از روش Yardpiroon و همکاران انجام شد. [39] و ویتامین C به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. سنجش ABTS از روش Re et al., [40] پیروی کرد، ویتامین C به عنوان استاندارد استفاده شد. روش بلیچینگ -کاروتن از روشی استفاده کرد که توسط Soulef و همکاران [14] در حضور کنترل مثبت BHT توضیح داده شد. مقدار برای هر نمونه آزمایشی به عنوان منحنی بازداری در 50 درصد یا IC50 ارائه شد.

2.8.3. تخمین فعالیت های آنتی الاستاز، آنتی کلاژناز و آنتی تیروزیناز

فعالیت های ضد پیری و سفید کردن پوست با روش های گزارش شده توسط مصطفی و همکاران ارزیابی شد. [41]. برای سنجش آنتی الاستاز، 1 میکروگرم در میلی لیتر از لکوسیت الاستاز انسانی با بافر HEPES pH 7.5 و هر یک از عصاره های آزمایش شده یا 1.4 میلی گرم در میلی لیتر N-Methoxysuccinyl-Ala-Ala-Pro-chloromethyl keton (مهارکننده استاندارد) در انکوبه شد. یک 96-صفحه چاهی به مدت 20 دقیقه در دمای اتاق قبل از افزودن 100 میکرولیتر N-Methoxysuccinyl-Ala-Ala-Pro-Val-p-nitroanilide 1 میلی مولار به عنوان سوبسترا. پس از 40 دقیقه انکوباسیون، جذب در 405 نانومتر با چاهی عاری از عصاره / بازدارنده به عنوان یک خالی اندازه گیری شد. نمونه های آزمایش شده در محدوده غلظت 25-300 میکروگرم بر میلی لیتر استفاده شدند.

برای آنتی کلاژناز، 1 میلی گرم در میلی لیتر از کلاژناز نوع 1 از کلستریدیوم هیستولیتیکوم، بافر آن (PH 7.4) و هر یک از عصاره های آزمایش شده یا 1.4 میلی گرم در میلی لیتر EDTA (مهارکننده استاندارد) به مدت 20 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد قبل از آن انکوبه شدند. اضافه کردن 100 میکرولیتر FALGPA به عنوان یک بستر. مخلوط به مدت 1 ساعت دیگر در دمای 37 درجه سانتیگراد قبل از افزودن 200 میکرولیتر نین هیدرین 2 درصد در بافر سیترات 200 میلی مولار (pH 5) انکوبه شد و به مدت 5 دقیقه در حمام آب جوش قرار داده شد. سپس محلول اجازه داده شد تا خنک شود. سپس 200 میکرولیتر ایزوپروپانول 50 درصد اضافه شد و جذب در طول موج 540 نانومتر اندازه‌گیری شد. نمونه های آزمایش شده در محدوده غلظت 25-300 میکروگرم بر میلی لیتر استفاده شدند.
برای سنجش ضد تیروزیناز، 5600 واحد در میلی لیتر تیروزیناز قارچ با هر یک از عصاره های آزمایش شده یا 1.4 میلی گرم در میلی لیتر کوجیک اسید (مهارکننده استاندارد) به مدت 15 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد قبل از افزودن 1 میلی مولار L-DOPA به عنوان سوبسترا انکوبه شد. . جذب دوپاکروم تشکیل شده در طول موج 475 نانومتر اندازه گیری شد. نمونه های آزمایش شده در محدوده غلظت 75-500 میکروگرم بر میلی لیتر استفاده شدند.

2.9. فرمولاسیون و خصوصیات PPEE-SLNs

فرمولاسیون بر اساس روش چوبی و همکاران انجام شد. [11]. ابتدا گلیسریل مونو استئارات در مخلوط کلروفرم- متانول (1:1) حل شد و سپس عصاره اتانولی در آن محلول پراکنده شد. بعداً حلال‌های آلی با استفاده از روتوف‌اپ حذف و محلول حرارت داده شد. سپس توئین 80 اضافه شد و مخلوط به مدت 30 دقیقه با دور 3000 همزن شد و سپس به مدت 4 ساعت قبل از صاف کردن و خشک شدن همگن شد. خصوصیات PPEE-SLNs با تخمین شکل و مورفولوژی سطح، اندازه ذرات، شاخص چند پراکندگی (PDI)، تجزیه و تحلیل پتانسیل زتا، بازده درصد گیر افتادن (PEE) و مطالعات طیف‌سنجی فروسرخ تبدیل فوریه (FT-IR) مورد بررسی قرار گرفت.

2.10. تهیه فرمول های کرم موضعی PPEE

2.10.1. فرمولاسیون کرم PPEE-SLNs

دو فرمول کرم (2 درصد و 5 درصد PPEE-SLNs) مطابق جدول 1 مطابق با روش ماهاور و همکاران تهیه شد. [42].

cistanche amazon

2.10.2. ارزیابی پارامترهای کرم PPEE-SLNs

خواص ارگانولپتیکی، pH کرم، مطالعات پخش پذیری، تست ویسکوزیته، تست همگنی، تست پچ (تست Burchard)، بررسی نفوذ پوست در شرایط آزمایشگاهی، و مطالعات پایداری (راهنمای ICH) بر اساس Matangi و همکاران مورد ارزیابی قرار گرفت. [43]. یک آزمایش حد میکروبی با توجه به Sekar و همکاران انجام شد. [44].

2.11. مطالعه ضد چروک In-Vivo کرم PPEE-SLNs

2.11.1. حیوانات تجربی

پنجاه موش نر بدون مو (HR{{0}}) (4-هفته‌ای)، 17 تا 24 گرم از VACSERA به دست آمد. آزمایش پس از تایید کمیته اخلاق در دانشگاه علوم و هنرهای مدرن اکتبر (MSA) انجام شد، تعداد نمونه پروتکل (PG1/EC1/2020PD) بر اساس نرم افزار (G. Power) تعیین شد. یک هفته قبل از مطالعه ضد چروک in-vivo، موش‌ها می‌توانستند به غذا و آب دسترسی داشته باشند و با اتاق دارای تهویه مطبوع (2±23◦C) سازگار شوند. موش ها (50) طبق جدول 2 به طور تصادفی به پنج گروه تقسیم شدند (n=10). درمان طی 40 روز، سه بار در هفته، با 0.5 گرم کرم PPEE-SLNs یا هر درمان دیگری انجام شد و اعمال شد. به پوست پشتی موش و متعاقبا در معرض اشعه ماوراء بنفش (365 نانومتر) قرار گرفت.

cistanche para que serve

2.11.2. اندازه گیری امتیاز چین و چروک

قبل و بعد از درمان‌های موضعی، دو بار در هفته، عکس‌های پوستی از پشت موش گرفته شد. درجه بندی چین و چروک پوست با استفاده از مقیاس بینایی چین و چروک بیست [45] ارزیابی شد. پایه های مقیاس درجه بندی بافت چین و چروک (ریز یا درشت) و کراتوز بود که به پنج درجه تقسیم شد: بدتر (2-)، کمی بدتر (-1)، بدون تغییر (0)، کمی بهبود یافته ( به علاوه 1)، و بهبود یافته است (به علاوه 2).

2.11.3. ارزیابی بافت شناسی

ارزیابی بافت شناسی بر اساس روش Elder و همکاران انجام شد. [46].

2.11.4. فعالیت سوپراکسید دیسموتاز (SOD).

فعالیت SOD بر اساس روش Ukeda و همکاران برآورد شد. [47].

2.12. تحلیل آماری

تمامی نمونه ها در سه تکرار مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. داده ها به صورت میانگین ± انحراف معیار (SD) نشان داده شد. مقادیر IC50 (غلظت مورد نیاز برای مهار 50 درصدی) با ایجاد منحنی رگرسیون خطی که غلظت نمونه و درصد بازداری را نشان می‌دهد، محاسبه شد. مقایسه آماری با استفاده از آنالیز واریانس یک طرفه (ANOVA) که توسط آزمون توکی برای مقایسه‌های چندگانه تکمیل شد، انجام شد. مقادیر مختلف فعالیت های آنتی اکسیدانی و سنجش های مهار آنزیم با استفاده از آزمون همبستگی پیرسون مقایسه شد و تفاوت ها از نظر آماری در p <0.05 معنی دار در نظر گرفته شد. برای انجام این تحلیل‌ها از GraphPad Prism 5.03 برای ویندوز (نرم‌افزار GraphPad, San Diego, CA, USA) استفاده شد.

3. نتایج

3.1. کل محتویات فنولیک و فلاونوئید

TPC به روش اسپکتروفتومتری در PPEE به عنوان 4.28 ± 387.5 میلی گرم عصاره GAE/g تعیین شد. همچنین TFC 25/3 ± 7/241 میلی گرم عصاره QE/g برآورد شد. PPEE غلظت بالایی از ترکیبات فنلی و فلفلاوونوئیدی را نشان داد. هر دو نتایج به دنبال مقادیری هستند که قبلاً برای عصاره برگ PP گزارش شده بود و تأیید می کند که فلاونوئیدها ترکیبات شیمیایی اصلی در برگ های PP هستند [20].

rou cong rong benefits

3.2. جداسازی و توضیح ساختار کامفرول

3-O- - 4C1-(600 -O-3،4-دی هیدروکسی فنیل استیل گلوکوپیرانوزید)، ترکیب 1

پس از مرتب سازی تمام ساختارهای شناخته شده در آن عصاره، جستجو برای ترکیبات منحصر به فرد و بالقوه فعال بیولوژیکی کارآمدتر شد. با توجه به داده‌های تحلیلی 2-DPC دریافتی، فنولیک‌های PPEE به بهترین وجه بر روی یک ستون ژل MCI شسته شده توسط مخلوط‌های MeOH/H2O با قطبیت‌های کاهش‌یافته تکه تکه می‌شوند، فرآیندی که چهار بخش ستون اصلی را ایجاد می‌کند. یک ماده آمورف از یک کنسانتره داغ از کسر III (که از ستون توسط 70 درصد MeOH آبی جذب شده است) در یک شب ایستاده در دمای اتاق جدا شد. تبلور این ماده دو بار از جوشاندن EtOH یک پودر آمورف زرد مایل به قهوه‌ای خالص کروماتوگرافیک به دست داد. این ماده خواص کروماتوگرافی را نشان داد (نقطه بنفش تیره روی PC تحت نور UV، زرد شدن لیمویی در هنگام بخار شدن با بخار آمونیاک با مهاجرت متوسط ​​در محلول‌های آبی و آلی. ) و واکنش های رنگی (رنگ زرد لیمویی با معرف Naturstoff)، که یک مشتق کامپفرول حاوی یک گروه هیدروکسیل آزاد 40 و یک موقعیت O-جایگزین شده را پیشنهاد می کند. طیف UV 1 در MeOH (268 نانومتر، 316 نانومتر، 360 نانومتر) و پس از افزودن معرف‌های تغییر تشخیصی [48] نمونه‌ای از کامفرول 3-O-گلیکوزیله بود (تغییر مثبت با NaOAc، تغییر پایدار با NaOMe). هیدرولیز اسید معمولی 1 (2 نیتروژن هیدروکلراید آبی، 3 ساعت، 100 ◦C) گلوکز (کروماتوگرافی کاغذی مقایسه‌ای، Co-PC)، کامفرول و 3،{24}دی هیدروکسی فنیل استیک اسید (UV) به دست آورد. جذب و طیف 1H-NMR، برای نمونه های جداگانه، جدا شده توسط کروماتوگرام کاغذی آماده سازی عصاره اتیل استات هیدرولیز). در نتیجه، 1 کامفرول 3-O-(3،{31}}دی هیدروکسی فنیل استیل گلوکوزید) است. این ترکیب پس از انکوبه شدن با آنزیم گلوکوزیداز به مدت 24 ساعت بدون تغییر بازیابی می‌شود، بنابراین ثابت می‌شود که بخش گلوکوزیل آسیله شده است. فرمول مولکولی 1 به این نتیجه رسید که C29H26O14 از طیف جرمی HRESI منفی آن است که یون [MH] - را در m/z=597.5302 نشان داد (محاسبه برای C29H25O14، 597.5015). آزمایش ESI-MS (حالت یون منفی) یک پیک یون شبه مولکولی [MH] - در m/z: 597 نشان داد که وزن مولکولی 598 را برای 1 نشان می‌دهد. پیک‌های یون قطعه بیشتر در طیف ESI-MS-MS بودند. مشاهده شده در m/z: [MH]-: 447، 167، و 285 مربوط به از دست دادن دی هیدروکسی فنیل استات از ترکیب اصلی 1 در حالی که یون های قطعه در m/z 285 و m/z 167 به کامفرول نسبت داده شدند و به ترتیب قسمت های دی هیدروکسی فنیل استیک اسید. برای تعیین محل اتصال همه قسمت‌ها در مولکول 1 و اجازه دادن به تخصیص کامل همه رزونانس‌های کربن و پروتون، آنالیز طیف‌سنجی NMR 1، از جمله 1D{{- 1}H و 13C، و 2D-HSQC و HMBC ، سپس اجرا شد. از پنج سیگنال در ناحیه قند بین 62.25 و 76.9 ppm δ و از سیگنال کربن آنومریک واقع در ppm 99.13، ثابت شد که بخش قند باید به موقعیت 3 کامفرول متصل شود زیرا این سیگنال کربن C{76}} به سمت بالا منتقل شد و سیگنال های ارتو و پارا کربن مربوطه به سمت پایین منتقل شدند (تجربی را ببینید). تغییرات مشابهی از کارهای نوور و همکاران به خوبی شناخته شده است. [48]. این بیشتر توسط همبستگی‌های برد بلند 3 J شناسایی شده در طیف HMBC تأیید شد، به موجب آن، یک سیگنال متقاطع یافت شد که سیگنال پروتون گلوکز آنومریک H{82}} را در δ 5.42 به فلاونول C{85}} کربن مرتبط می‌کرد. سیگنال در δ 133.5. پیکربندی نیمه گلوکز از تغییر شیمیایی C-l00 در ppm 99.13 به دست آمد. مقادیر جابجایی شیمیایی کربن‌های قند، شکل پیرانوز این بخش را تأیید کرد [48]. طیف 1H-NMR 1 نیز با ساختار پیشنهادی بود. تغییر شیمیایی سیگنال پروتون آنومری در δ 5.42 ppm (d، J=8 هرتز) نشان داد که کربن آنومریک به قسمت کامفرول در C{100}} (δppm 133.5) و ثابت جفت تعیین‌شده متصل است. 8 هرتز، پیکربندی بخش گلوکز را ثابت کنید. ساختار بخش قند 4C1 است که توسط -پیکربندی های مورد بحث در بالا دنبال می شود.

همچنین، الصاق بخش 3،{1}}دی هیدروکسی فنیل استیک اسید به نصفه متیلن گلوکوپیرانوز C{2}} پس از تغییر میدان پایین سیگنال این کربن به δ ppm 62.25 در طیف 13C-NMR. این بیشتر توسط پیک متقاطع در طیف HMBC تأیید شد، که سیگنال‌های پروتون گلوکز متیلنیک را در δ 4.04 (H{9}} a) و δ 4.2 ppm (H-600 b) با کربن کربونیل از 3،{14}}بخش دی‌هروکسی فنیل استیک اسید در δ 176.26 ppm. اینها و داده های بالا در نهایت ساختار ترکیب 1 را به عنوان کامپفرول جدید 3-O- - 4C1-(600 -}O-3، {24}}دی هیدروکسی فنیل استیل گلوکوپیرانوزید) (KDPAG)، برای اولین بار در طبیعت گزارش شد، زیرا نشان دهنده اولین اسیلاسیون با اسید 3،{26}}هیدروکسی فنیل استیک در ارتباط با شیمی فلفلاوونوئید است (شکل 1).

cistanche tubulosa supplement

برای اطلاعات بیشتر: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

شما نیز ممکن است دوست داشته باشید