نورون های قاعده جانبی آمیگدال قدامی شامل یک حافظه ترس از راه دور Engram قسمت 1 است

معرفی:

نشانه های محیطی تهدیدآمیز اغلب باعث ایجاد خاطرات ترس پایدار می شود، اما چگونگی شکل گیری و ذخیره آن ها همچنان به طور فعال مورد بررسی قرار می گیرد.

حافظه ترس نوعی حافظه در مغز ماست. این یک شکل بسیار خاص از حافظه است که اغلب باعث می شود ما احساس ترس، ترس و عصبی کنیم. اما رابطه بین این خاطره ترس و حافظه ما بسیار پیچیده است.

اول اینکه خاطرات ترس ربطی به حافظه کوتاه مدت ما ندارند. بیشتر خاطرات ترس در بانک های حافظه بلند مدت ما ذخیره می شود. به همین دلیل است که گاهی اوقات خاطراتی از گذشته های دور در ذهن ما شناور است.

دوم، خاطرات ترس لزوماً بر حافظه ما تأثیر نمی گذارد. اگرچه ممکن است باعث تغییر در توجه و خلق و خوی ما شود، اما هیچ مدرکی دال بر از دست دادن حافظه وجود ندارد. بسیاری از افراد پس از تجربه برخی چیزهای وحشتناک هنوز هم می توانند خاطرات بسیار قوی را به نمایش بگذارند.

در نهایت، نباید اجازه دهیم خاطرات ترسناک به موضوع زندگی ما تبدیل شوند. برای پردازش این خاطرات و حرکت در جهت مثبت تری باید اقدام مثبتی انجام دهیم. این شامل درمان، فعال بودن اجتماعی، ورزش بدن و مغز و حفظ ذهنیت مثبت و سلامت روان است.

بنابراین، اگرچه خاطرات ترسناک ممکن است برای ما استرس و ناراحتی زیادی ایجاد کند، اما باید به توانایی ها و تلاش های خود ایمان داشته باشیم. ما می توانیم با این خاطرات ترسناک روبرو شویم، حافظه خود را تقویت کنیم، رشد کنیم و به افراد بهتر و با اعتماد به نفس بیشتری تبدیل شویم. مشاهده می شود که باید حافظه خود را تقویت کنیم. Cistanche deserticola می تواند به طور قابل توجهی حافظه را بهبود بخشد زیرا Cistanche deserticola یک ماده دارویی سنتی چینی با اثرات منحصر به فرد بسیاری است که یکی از آنها بهبود حافظه است. اثربخشی گوشت چرخ کرده از ترکیبات فعال مختلفی که شامل اسید، پلی ساکاریدها، فلاونوئیدها و غیره است، ناشی می شود. این مواد می توانند به طرق مختلف سلامت مغز را تقویت کنند.

روی روش های بهبود حافظه کوتاه مدت بدانید

تصور می‌شود که یادآوری یک خاطره ترس اخیر منعکس‌کننده فعال‌سازی مجدد نورون‌ها در چندین ناحیه مغز است که در طول شکل‌گیری حافظه فعال می‌شوند، که نشان می‌دهد که مجموعه‌های عصبی توزیع‌شده و بهم پیوسته از نظر آناتومیکی شامل انگرام‌های حافظه ترس هستند.

با این حال، میزان ماندگاری انگرام‌های فعال‌سازی مجدد فعال‌سازی خاص آناتومیک در طول یادآوری حافظه ترس طولانی‌مدت، تا حد زیادی ناشناخته باقی می‌ماند. ما فرض کردیم که نورون‌های اصلی در آمیگدال قاعده‌ای جانبی قدامی (BLA)، که ظرفیت منفی را رمزگذاری می‌کنند، در طول یادآوری حافظه ترس از راه دور دوباره فعال می‌شوند تا رفتار ترس را هدایت کنند.

مواد و روش ها:

با استفاده از فرزندان بالغ موش‌های TRAP2 و Ai14، بیان مداوم tdTomato برای نورون‌های aBLA "TRAP" مورد استفاده قرار گرفت که در طول شرطی‌سازی ترس زمینه‌ای (شوک الکتریکی) یا شرطی‌سازی فقط متنی (بدون شوک) (n=5/گروه) تحت فعال‌سازی Fos قرار گرفتند. . سه هفته بعد، موش‌ها دوباره در معرض همان نشانه‌های زمینه‌ای برای یادآوری حافظه از راه دور قرار گرفتند و سپس برای Fosimmunohistochemistry قربانی شدند.

نتایج:

گروه‌های عصبی TRAPed (tdTomato+)، Fos+، و دوباره فعال‌شده (با برچسب‌های دوگانه) از نظر ترس بزرگ‌تر از موش‌های شرطی‌شده بودند، با منطقه فرعی میانی و ربع‌های پشتی میانی/دمی aBLA که بیشترین تراکم هر سه جمعیت گروه را نشان می‌دهند.

در حالی که گروه‌های +Tomato در زمینه و گروه‌های ترس غالباً گلوتاماترژیک بودند، رفتار انجماد در طول یادآوری حافظه از راه دور با اندازه‌های مجموعه در هیچ‌یک از گروه‌ها همبستگی نداشت.

بحث:

نتیجه می‌گیریم که اگرچه یک حافظه ترس شامل aBLA شکل می‌گیرد و در یک نقطه زمانی دور باقی می‌ماند، انعطاف‌پذیری بر پاسخ‌های الکتروفیزیولوژیکی نورون‌های انگرام تأثیر می‌گذارد، نه اندازه جمعیت آن‌ها، حافظه ترس را رمزگذاری می‌کند و تظاهرات رفتاری یادآوری حافظه ترس طولانی‌مدت را هدایت می‌کند.

معرفی

محرک های ترس آور اغلب خاطرات تداعی قوی و پایداری را تشکیل می دهند که نشانه های محیطی را به رویدادهای تهدید کننده زندگی متصل می کند.

برخوردهای بعدی با تهدیدات مشابهی منجر به رفتارهای محافظتی قوی تر می شود که منعکس کننده یادآوری خاطره ترس است. خطاها در پردازش تداعی ترس می توانند پیامدهای روانپزشکی با ظرفیت منفی، از جمله اضطراب و اختلال استرس پس از سانحه (PTSD) داشته باشند (Tovote و همکاران، 2015).

درک کامل پیچیدگی مکانیسم‌های نهفته در حافظه ترس برای شناسایی ناهنجاری‌های مدار عملکردی که بیماری‌های روانپزشکی مرتبط با ترس را ترویج می‌کنند و اهداف درمانی جدیدی را برای بازگرداندن پردازش ترس عادی پیشنهاد می‌کنند، ضروری است.

در طی چند دهه گذشته، تحقیقات حافظه ترس عمدتاً بر شکل‌گیری، ذخیره و یادآوری حافظه کوتاه‌مدت متمرکز بوده است (کیمند جونگ، 2006؛ کیم و چو، 2020؛ لی و همکاران، 2021).

مطالعات، مجموعه‌های عصبی به‌هم‌پیوسته CNS را به‌عنوان مسئول شکل‌گیری و ذخیره‌سازی حافظه ترس دخیل دانسته‌اند (رامیرز و همکاران، 2013؛ لیو و همکاران، 2014؛ روی و همکاران، 2022). فعال‌سازی این مجموعه‌ها توسط تهدیدات درک‌شده منجر به انتقال سیناپسی تقویت‌شده می‌شود که نشان‌دهنده یک اثر فیزیکی پایدار است که به عنوان انگرام حافظه شناخته می‌شود (یوان و همکاران، 2011؛ ​​میاواکی و میزوسکی، 2022).

تصور می‌شود که یادآوری حافظه کوتاه‌مدت منعکس‌کننده فعال‌سازی مجدد همان مجموعه‌های عصبی است که در ابتدا در طول شکل‌گیری حافظه فعال شده بودند، با شواهدی که نشان می‌دهد حتی فعال‌سازی جزئی یک مجموعه عصبی می‌تواند رفتارهای مرتبط با ترس را برانگیزد، که نشان‌دهنده یادآوری حافظه است (روی و همکاران، 2022). ). در حالی که انگرام های مدار تقویت شده از نظر اتمی پایدار ممکن است حافظه کوتاه مدت ترس را توضیح دهند، میزان مشارکت آنها در حافظه ترس بلند مدت نامشخص است.

اگرچه تصور می‌شود که تثبیت حافظه ترس درازمدت به تقویت تدریجی یا پراکنده حافظه کوتاه‌مدت بستگی دارد، چندین مطالعه اخیر نشان می‌دهد که مجموعه‌های عصبی حافظه ترس کوتاه‌مدت تحت سازمان‌دهی مجدد وابسته به زمان قرار می‌گیرند و منجر به مهاجرت حافظه ذخیره‌شده به یک مجموعه عصبی متفاوت می‌شود. همان منطقه مغز (دناردو و همکاران، 2019) یا مناطق مختلف مغز در مجموع (فرانکلند و بونتمپی، 2005؛ دو مونت و همکاران، 2016).

آمیگدال قاعده ای جانبی (BLA) یک ناحیه مغزی جدایی ناپذیر از حافظه ترس است و هم در یادآوری حافظه ترس اخیر و هم از راه دور دخیل بوده است (مارن و همکاران، 1996؛ گیل و همکاران، 2004؛ کیتامورا و همکاران، 2017؛ لیو و همکاران .، 2022).

به طور قابل‌توجه، گزارش‌ها یک انگرام ترس-حافظه کوتاه‌مدت را در BLA توصیف کرده‌اند که (1) در طول شکل‌گیری حافظه فعال می‌شود، (2) در طول یادآوری حافظه دوباره فعال می‌شود، و (3) می‌تواند رفتارهای ترس‌مانند را در زمینه‌های غیر ترس ایجاد کند. رویت همکاران، 2022؛ زکی و همکاران، 2022). با این حال، میزان فعال شدن مجموعه عصبی aBLA در طول تشکیل حافظه، در طول یادآوری حافظه از راه دور فعال می‌شود.

در این مطالعه، ما این فرضیه را آزمایش کردیم که فعال شدن مجدد یک مجموعه حافظه BLAfear در یک نقطه زمانی دور 3 هفته پس از شرطی سازی ترس مشاهده می شود. از اهمیت ویژه‌ای برخوردار است، مدارهای خانه‌های BLA که هم در رفتار بدخواهانه و هم به دنبال پاداش کمک می‌کنند (Hu، 2016)، با نورون‌های با ظرفیت منفی که به محرک‌های ترس پاسخ می‌دهند که به طور خاص به BLA قدامی (aBLA) محلی شده‌اند (Goosensand Maren، 2001؛ Kim et al., 2016، 2017؛ ژانگ و همکاران، 2020).

با تمرکز بر aBLA، ما نسل دوم TargetedRecombination را در موش‌های تراریخته با جمعیت فعال (TRAP2) به کار بردیم (DeNardo و همکاران، 2019)، که در آن فعالیت Cre-recombinase با عناصر تقویت‌کننده ژن اولیه اولیه c-fos از طریق یک Cre بهبود یافته مرتبط است. کمپلکس گیرنده استروژن (ER). بیان کننده عصبی این کمپلکس می تواند تحت نوترکیبی مداوم Cre قرار گیرد، یعنی می توان با تجویز آگونیستتاموکسیفن ER یا آنالوگ کوتاه اثرتر آن 4-هیدروکسی تاموکسیفن (4-OHT) "به دام افتاد"، که امکان بیان مداوم Cre را فراهم می کند. مولکول های گزارشگر موثر وابسته.

در اینجا، ما از موش‌های TRAP2 و خط گزارشگر tdTomato وابسته به Cre Ai14 (Madisen et al., 2010) عبور کردیم و میزان گیر افتادن نورون‌های aBLA (tdTomatopositive) در طول شرطی‌سازی ترس زمینه‌ای دوباره فعال می‌شوند (پروتئین immunoreactive Fos بیان می‌شوند) در طول یادآوری حافظه از راه دور. 3 هفته بعد

همانطور که در حافظه کوتاه مدت ترس، یافته های ما از حضور گروه های عصبی ترس گلوتاماترژیک طولانی مدت در aBLA حمایت می کند.

با این حال، به‌طور قابل‌توجهی، اندازه مجموعه‌های عصبی aBLA، چه در طول شرطی‌سازی یا یادآوری حافظه از راه دور یا هر دو فعال شوند، با رفتار ترس مرتبط نبودند، که نشان می‌دهد ماهیت انعطاف‌پذیری مرتبط با یادگیری ترس و تأثیر نهایی آن بر حافظه ترس از راه دور، پاسخ‌های الکتروفیزیولوژیکی نورون‌های گروه را به یاد می‌آورد. ، نه به اندازه جمعیت گروه، در درجه اول رفتار حافظه ترس از راه دور را هدایت می کند.

مواد و روش ها

تایید اخلاقی

روش‌های آزمایشی توسط کمیته مراقبت و استفاده از حیوانات در دانشگاه تگزاس بهداشت SanAntonio تأیید شد و با راهنمای شورای تحقیقات ملی برای مراقبت و استفاده از حیوانات آزمایشگاهی مطابقت داشت.

حیوانات

جفت های پرورش دهنده موش های هموزیگوت Fos2A-iCreER/2A-iCreER (TRAP2, #030323) و R26Ai14/+ (Ai14, #007914) موش (آزمایشگاه جکسون) برای تولید hemizygous نر (Figii1TRAPring off1:A). پس از از شیر گرفتن، موش ها گروه بندی و در قفس های پلاستیکی (29 × 18 × 13 سانتی متر) حاوی بستر جوندگان (Sani-chips؛ Harlan Teklad، مدیسون، WI، ایالات متحده آمریکا) قرار گرفتند. :10 چرخه روشنایی تاریکی (چراغ ها در 0600 ساعت روشن می شوند). غذا و آب به طور آزاد در دسترس بود. آزمایش‌ها زمانی آغاز شد که موش‌ها به سن 3 ماهگی رسیدند.

عادت رفتاری

همانطور که در مطالعات منتشر شده قبلی (دناردو و همکاران، 2019)، موش‌ها بلافاصله قبل از شرطی‌سازی ترس زمینه‌ای، پنج روز متوالی تحت آموزش عادت‌سازی قرار گرفتند تا القای cfos را در پاسخ به شرایط تجربی که کمتر مورد بررسی قرار نگرفته‌اند (مانند دست‌کاری، کاوش بافت جدید و غیره) به حداقل برسانند. شکل 1B).

هر جلسه عادت کردن روزانه 3 دقیقه به طول انجامید و شامل قرار گرفتن در معرض محفظه تهویه (HabitestModular System، Coulbourn Instruments) بود. نشانه‌های حسی محفظه‌ای شامل (1) 70٪ اتانول (نشان بویایی)، (2) کف شبکه فلزی (نشانه هپتیک)، (3) پس‌زمینه طرح‌دار (نشانه بصری)، و (4) نور مرئی (نشانه بصری).

علاوه بر این، تمام موش ها قبل از قرار دادن در محفظه تهویه مطبوع به مدت یک دقیقه با دست نگه داشته شدند و پس از خروج از محفظه به مدت 10 ثانیه به آرامی ساییده شدند. جلسات عادت‌سازی به گونه‌ای طراحی شده‌اند که رفتاری را که موش‌ها در روز آماده‌سازی تجربه می‌کنند، شبیه‌سازی کنند، به جز اینکه هیچ تزریق داخل صفاقی (IP) انجام نشده است.

شرطی سازی ترس زمینه ای

موش‌ها بعداً به‌طور تصادفی به گروه‌های شرطی ترس (شوک) و مشروط به زمینه (بدون شوک/فقط زمینه) اختصاص داده شدند. شرطی‌سازی از روز 0 آغاز شد و شامل موش‌هایی بود که در اتاقک تهویه قرار گرفتند و اجازه یافتند تا برای 2 کاوش کنند. دقیقه در طول 4 دقیقه بعدی، موش‌های مشروط به ترس، یک سری شوک‌های پنج فوتی با مدت زمان 1 ثانیه و شدت 75/0. 0 دریافت کردند.

شوک‌ها در فواصل غیرقابل پیش‌بینی به موش‌ها و در عین حال بین موش‌ها ثابت بود. موش‌های با شرایط شرطی شده تحت یک پروتکل یکسان بدون شوک پا قرار گرفتند (شکل 1C). پس از پایان کار، هر موش تزریق 4-هیدروکسی تاموکسیفن (4-OHT، 100 میلی‌گرم/کیلوگرم، IP) را در یک کوکتل 4:1 از روغن آفتابگردان و روغن کرچک که همانطور که قبلاً توضیح داده شده بود، دریافت کرد (DeNardo et al., 2019).

سپس موش‌ها به قفس‌های خانه‌شان بازگردانده شدند، جایی که آنها بدون مزاحمت در اتاق مجاور مجموعه رفتار حداقل 72 ساعت قبل از از سرگیری خانه‌های عادی رها شدند.

سه هفته پس از شرطی‌سازی ترس (روز 21)، موش‌ها تحت آزمایش یادآوری حافظه از راه دور (شکل 1D) قرار گرفتند که شامل قرار گرفتن مجدد در محفظه آزمایش با نشانه‌های حسی مشابه با نشانه‌های موجود در طول شرطی‌سازی بود. به موش‌ها اجازه داده شد تا به مدت 5 دقیقه در محفظه کاوش کنند که در طی آن رفتار ترس (انجماد وضعیتی) با استفاده از نرم‌افزار ردیابی ویدیویی FreezeFrame 4 (ActiMetrics، Wilmette IL، ایالات متحده آمریکا) امتیازدهی شد.

تثبیت و بافت شناسی مغز

90 دقیقه پس از آزمایش یادآوری حافظه، موش‌ها با ایزوفلوران (5 درصد اکسیژن) بیهوش شدند و سپس تحت پرفیوژن ترانس قلبی با 3{5}} میلی‌لیتر سالین ایزوتونیک هپارینه شده (100 U/mL) و سپس 100 میلی‌لیتر پارافورمالدئید 4 درصد (PFA) قرار گرفتند. در بافر فسفات 0.1 مولار.

مغزها برداشته شدند، پس از تثبیت در 4% PFA به مدت 6 ساعت در دمای اتاق (~22◦C) و انجماد در انجماد 30% ساکارز{5}}.01 مولار بافر سالین فسفات (PBS) برای حداقل 2 روز.

سپس مغزها در بخش‌های تاجی با ضخامت 30 میکرومتر بر روی میکروتوم انجماد (Leica Microsystems، Wetzlar، آلمان) و بخش‌های حاوی aBLA (Paxinos and Franklin، 2019) برش داده شدند و در انجماد پلی‌وینیل پیرولیدون (PVP) در دمای C-2-2 ذخیره شدند.

ایمونوهیستوشیمی

رنگ آمیزی ایمنی همانطور که قبلاً توضیح داده شد انجام شد (Mitchell et al., 2018; Maruyama et al., 2019).

به طور خلاصه، بخش‌ها در PBS برای حذف انجماد PVP شسته شدند و به مدت 3{1}} دقیقه در PBS حاوی بوروهیدرید سدیم ({5}}.5%) انکوبه شدند تا آلدئیدهای فلورسنت خودکار تولید شده در طول تثبیت حذف شوند. پس از شستشوهای اضافی PBS، بخش‌ها در بافر مسدودکننده (3٪ سرم بز، 0.05٪ Triton-X{8}} در PBS) به مدت 2 ساعت در دمای ~22◦C انکوبه شدند. آنتی بادی اولیه -Fos (Ab) برای 72 ساعت (1:1500، سیستم سیناپسی #226 003) یا موش مونوکلونال CaMKIIprimaryAb به مدت 24 ساعت (1:500، Enzo Life Sciences، #ADI-KAM-CA002).

پس از شستشوی بیشتر، بخش های Fos و CaMKII به طور جداگانه به مدت 2 ساعت در دمای ~22 درجه سانتیگراد در آب ثانویه ضد خرگوش IgG بز بیوتینیله (1:25{6}} EMD Millipore #AP132B) و سپس شستشوی سریال در 0 انکوبه شدند. 05 مولار سالین تریس بافر (TBS) و 0.1 Msodium acetate سپس در معرض استرپتاویدین-Alexa Fluor 488 (1:250، Invitrogen #S11223) به مدت 1 ساعت در محلول مسدودکننده مبتنی بر TBS قرار گرفت.

در نهایت، مقاطع در بافر Tris شسته و بر روی اسلایدها با Fluoromount-G (Invitrogen، #00-4958-02) نصب شدند.

تصویربرداری و تحلیل

برای گرفتن تصاویر aBLA با استفاده از یک شیئی 20× (NA 0.8) و یک سوراخ سر اسکن با اندازه سوراخ سر اسکن از یک لوله مولتی‌پلایر A{0}}بیتی که با میکروسکوپ کانفوکال اسکن لیزری زایس LSM710، مجهز به خطوط لیزری مناسب در ارتباط است، استفاده شد. 47.5 میکرومتر برای هر تصویر، از نرم‌افزار ImageJ (NIH، Bethesda، MD) برای ایجاد نقشه‌های پیکسلی مجزا از فلورسانس tdTomato (یعنی TRAPed، قرمز) و Alexa{7}}(Fos، سبز) استفاده شد.

شدت آستانه پیکسل و تشخیص همپوشانی طول موج برای برچسب‌گذاری دوگانه با مقایسه بخش‌های بافت پردازش شده با و بدون Ab اولیه Fo که قبلاً توضیح داده شده بود، تعیین شد (Mitchell et al., 2018; Maruyama et al., 2019). شمارش سلولی و داده‌های محلی سازی مشترک به دست آمد. این افزونه ImageJ خودمختار EzColocalization (Stauffer et al., 2018).

تصاویر از aBLA به سه زیرمنطقه روسترو دمی با اندازه تقریبا مساوی تقسیم شدند، که هر زیر منطقه با محدوده خاصی از مختصات استریوتاکسی منقاری-دمی نسبت به توبرگما تعریف شده است: منقاری، -0.8 تا -1.1 میلی متر. وسط، -1.2 تا -1.5 میلی متر؛ و دمی، 1.6- تا 1.9- میلی متر (Paxinos and Franklin، 2019). سپس از مدیر منطقه ای علاقه (ROI) در ImageJ برای تقسیم theaBLA در امتداد ربع پشتی-شکمی و داخلی-جانبی آن نسبت به محیط آن استفاده شد. این الگو متعاقباً برای تصاویر درون هر زیر منطقه منقاری-دمی مشخص شده اعمال شد.

مرزبندی محیطی aBLA با ImageJ EzColocalizationplug-in برای ایجاد یک نمودار فضایی 2-D از تمام شمارش های عصبی در هر تصویر استفاده شد. توطئه های فضایی در زیرمنطقه های منقاری، میانی و دمی به طور جداگانه پوشانده شدند. این منجر به 10 ترس و 10 نمودار زمینه برای زیر منطقه منقاری، 10 ترس و 13 طرح زمینه برای زیر منطقه میانی، و 12 ترس و 13 طرح زمینه برای زیر منطقه دمی شد.

برای تصحیح تعداد بیشتری از نمودارهای تصویر زیرمنطقه در گروه زمینه، عوامل تصحیح 1.0(10/10)، 0.77 (10/13) و 0.92 (12/13) به ترتیب برای نمودارهای زیرمنطقه ای منقاری، میانی و دمی گروه زمینه اعمال شد. برای جلوگیری از سوگیری توزیع توپوگرافی شمارش در داده‌های زمینه، از یک مولد اعداد تصادفی در MS Excel برای شناسایی تعداد خاصی که باید از هر زیر منطقه aBLA حذف شود، استفاده شد.

سپس، ما زیرمنطقه‌های aBLA را به ربع‌هایی تقسیم کردیم که 1-4 تعیین شده‌اند (شکل 2D را ببینید). برای انجام این کار، مختصات تقاطع (0،0) در MS-Excel به عنوان نقطه ای در صفحه2-D تعیین شد که در آن مساحت هر ربع تقریباً برابر با یک چهارم بود. از کل مساحت هر زیر منطقه منقاری-دمی. محورهای ربع و مختصات xy هر شمارش تعیین شده و 30 درجه در جهت عقربه‌های ساعت چرخانده شدند و در نتیجه آنها را با محور تشریحی aBLA تراز کردند.

برای در نظر گرفتن تغییرات کوچک در اندازه مناطق فرعی و ربع آنها، داده های شمارش به سطح سطح (تعداد / میلی متر مربع) نرمال شد به طوری که مقادیر گزارش شده نشان دهنده تراکم تعداد در هر زیر منطقه یا ربع است.

برای ارزیابی فنوتیپ تحریک‌آمیز نورون‌های گرفته شده توسط سیستم TRAP2 ما، هم‌محلی‌سازی بیان tdTomatomatered-TRAPed با پروتئین کیناز II وابسته به کلسیم-کالمودولین (CaMKII)، یک نشانگر ثابت نورون‌های گلوتاماترژیک (مک دونالد و همکاران، 2002) تعیین شد. تصاویری از حداقل سه بخش BLA در هر ماوس با استفاده از افزونه شمارنده سلول ImageJ.

آمار

آزمون آماری با نرم‌افزار Prism 9.5.1 (GraphPad, San Diego, CA, USA) انجام شد و شامل آزمایش توزیع نرمال همه مجموعه‌های داده با استفاده از آزمون Shapiro-Wilk بود. آزمون t یا با استفاده از آنالیز واریانس دو یا سه طرفه و سپس آزمون مقایسه چندگانه Sidak و Tukey به ترتیب برای مقایسه‌های جفتی پس از برهمکنش‌های ANOVA معنی‌دار.

تجزیه و تحلیل همبستگی درون گروهی برای تعیین ضریب r پیرسون و مقدار P مربوطه انجام شد. همبستگی ها بین گروه ها با استفاده از تبدیل Fisher'sZ مقایسه شد (جدول تکمیلی 1). داده های گروه به صورت میانگین ± SEM بیان می شوند. معنی‌داری آماری در P < 0.05 تنظیم شد.

نتایج

شرطی سازی ترس باعث ایجاد یک انگرام حافظه ترس از راه دور می شود

برای تعیین میزان فعال شدن نورون‌های aBLA در حین شکل‌گیری حافظه ترس، در طول فراخوانی حافظه از راه دور، موش‌ها تحت شرایط ترس (n=5) یا زمینه (n=5) قرار گرفتند و به دنبال آن تزریق 4-OHT انجام شد. (شکل های 1A-C).

با بررسی شکل‌گیری حافظه ترس (یعنی یادگیری ترس)، اثر متقابل قابل‌توجهی از درمان (شوک در مقابل بدون شوک) و فاصله زمانی (3{17}} ثانیه بعد از هر ضربه) بر رفتار انجماد مشاهده شد [ANOVA دو طرفه، F(5، 40)=6.733، P=0.0001]. موش‌های مشروط با ترس، زمان انجماد را نسبت به خط پایه پس از شوک 3 (68 ± 275 درصد BL، P=0.0203)، 4 (76 ± 486 درصد از BL، P <0.0001) و 5 (26 ± 402) افزایش دادند. درصد BL، P <0.0001)، و نسبت به موش های شرطی شده پس از شوک 4 (38 ± 251 درصد زمینه، P <0.0001) و 5 (375 ± 25 درصد از زمینه، P <0.0001).

همانطور که انتظار می رفت، قرار گرفتن مجدد در محفظه تهویه برای یادآوری حافظه از راه دور در روز 21 پس از تهویه نشان داد که موش های مشروط به ترس زمان بیشتری را در انجماد در مقایسه با کنترل های زمینه نشان دادند [18 ± 346٪، آزمون t غیر جفت، t(8) {{7} }.16، P < 0.0001] (شکل 1D).
در مجموع، داده های شکل 1 نشان می دهد که پروتکل شرطی سازی ترس ما باعث شکل گیری حافظه ترس قوی و یادآوری حافظه ترس از راه دور می شود.

یادگیری ترس یک aBLA ویژه زیر منطقه ای قوی را برای گروه القا می کند

تجزیه و تحلیل تعداد TRAPed (tdTomato +) جمعیت aBLA فعال‌شده با فوس به‌طور معنی‌داری بزرگ‌تر را در موش‌های دارای ترس (6.2 ± 110) نسبت به موش‌های مشروط (77 ± 3.1) نشان داد [آزمون t غیر جفت، t(8) {12}} 0.782, P=0.0014] (جدول 1). همانطور که انتظار می‌رفت، 70% از بافت‌ها و 80% از نورون‌های به دام افتاده ترس (n=6 aBLAsections/group) CaMKII + بودند (شکل‌های تکمیلی 1A، B)، که نشان می‌دهد آنها عمدتاً نورون‌های برون‌تابی گلوتاماترژیک بودند.

مشابه گزارش های قبلی (کیم و همکاران، 2016)، ما theaBLA را به سه منطقه فرعی rostrocaudal تقسیم کردیم: منقاری، میانی، و دمی (شکل 2A-C) و تراکم شمارش TRAPed (تعداد / میلی متر مربع) را در بین مناطق فرعی درون و مقایسه کردیم. بین گروه های درمانی (شکل 2D). آنالیز واریانس دوطرفه یک تعامل معنادار بین زیر منطقه و درمان نشان داد [F(2,24)=7.7099,P=0.0038].

تجزیه و تحلیل درون گروهی نشان داد که تعداد TRAPed در زیر منطقه aBLA میانی در گروه‌های ترس (9 ± 239) و زمینه (12 ± 144) نسبت به منقاری (ترس: 6 ± 86)، P < { بیشتر بود {8}}.0001؛ زمینه: 9 ± 81، P=0.0035) و دمی (ترس: 15 ± 123، P <0.0001؛ زمینه: 12 ± 90، P {20 }}.0132) مناطق فرعی.

تجزیه و تحلیل بین گروهی نشان داد که تراکم شمارش TRAPed به طور قابل‌توجهی در زیر منطقه میانی موش‌های وابسته به ترس بیشتر بود (0001/0 < 0).

برای مشخص کردن بیشتر مکان نورون‌های TRAPed، زیر ناحیه‌های aBLA منقاری، میانی و دمی را به چهار ربع تقسیم کردیم (شکل 2E). در زیر منطقه میانی، اثر تیمار اصلی بر تراکم شمارش مشاهده شد [ANOVA سه طرفه، F(1،32)=17.44، P=0.0002] با تراکم TRAPedcount بیشتر در گروه ترس نسبت به گروه زمینه در ربع 3 (29 ± 218 در مقابل 17 ± 107، P=0.0031)، و 4 (16 ± 240 در مقابل 12 ± 101، P <0.0001).

ما تراکم شمارش TRAPed درون گروهی و درون ربعی را در سراسر مناطق فرعی aBLA ارزیابی کردیم (شکل 2E و جدول تکمیلی 2). قابل‌توجه، در مقایسه با زیرمنطقه منقاری (8 ± 59)، ربع 2 گروه ترس دارای تراکم بیشتری در وسط (21 ± 245، P < 0.0001) و دمی (23 ± 172) بود. P=0.0040) زیر منطقه.

ما بعداً رابطه بین رفتار انجماد و اندازه مجموعه عصبی TRAPed را در کل aBLA، در زیر منطقه میانی آن، و در ربع‌های زیرمنطقه‌های میانی و دمی که در آن تراکم تعداد گروه بین گروه‌های زمینه و ترس مشروط متفاوت بود، ارزیابی کردیم. هیچ همبستگی قابل توجهی در هر دو گروه ترس یا زمینه مشاهده نشد (شکل 2F)، نشان می دهد که رفتار ترس اندازه گروه ترسناک یادگیری در مناطق فرعی aBLA را منعکس نمی کند.

در مجموع، یافته‌های شکل 2 نشان می‌دهد که شرطی‌سازی ترس در aBLA به یک گروه بزرگ‌تر از زمینه‌سازی منجر می‌شود. نورون‌های گروهی به‌طور متراکم در زیر منطقه aBLA وسط قرار گرفتند، اما رفتار ترس با اندازه‌های جمعیت مجموعه ارتباطی نداشت.

For more information:1950477648nn@gmail.com