پتانسیل آنتی اکسیدانی و ضد پیری پوست گیاهان منتخب تایلندی: ارزیابی در شرایط آزمایشگاهی و پیش‌بینی هدف سیلیکونی قسمت 2

3. بحث

پیری پوست یک فرآیند طبیعی در همه انسان ها است. با این حال، بسیاری از شیوه‌های زندگی و عوامل محیطی نیز می‌توانند این فرآیند را که منجر به پیری زودرس پوست می‌شود، تسریع بخشند [19]. ROS به عنوان یک عامل بیماریزای مهم در روند پیری پوست شناخته شده است. تجمع ROS می تواند بیان هر دو آنزیم الاستاز و تیروزیناز را تنظیم کند، که متعاقباً منجر به تشکیل چین و چروک، عدم خاصیت ارتجاعی و هیپرپیگمانتاسیون می شود [20-22]. همه اینها ویژگی های رایج پیری پوست هستند [4]. در اینجا، مطالعه ما خواص آنتی اکسیدانی، ضد الاستاز و ضد تیروزیناز عصاره‌های گیاهی از 16 گونه گیاهی تایلندی را بررسی کرد و ترکیبات طبیعی امیدوارکننده‌ای را برای توسعه بالقوه درمان‌های جدید علیه پیری پوست نشان داد.

گلیکوزید سیستانچ همچنین می تواند فعالیت SOD را در بافت های قلب و کبد افزایش دهد و به طور قابل توجهی محتوای لیپوفوسین و MDA را در هر بافت کاهش دهد و به طور موثر رادیکال های مختلف اکسیژن فعال (OH-، H2O2 و غیره) را از بین ببرد و از آسیب DNA ناشی از آن محافظت کند. توسط رادیکال های OH گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچ توانایی مهار قوی رادیکال های آزاد، توانایی کاهش بالاتری نسبت به ویتامین C، بهبود فعالیت SOD در سوسپانسیون اسپرم، کاهش محتوای MDA و اثر محافظتی خاصی بر عملکرد غشای اسپرم دارند. پلی ساکاریدهای سیستانچ می توانند فعالیت SOD و GSH-Px را در گلبول های قرمز و بافت ریه موش های آزمایشگاهی مسن ناشی از D-گالاکتوز افزایش دهند و همچنین محتوای MDA و کلاژن را در ریه و پلاسما کاهش دهند و محتوای الاستین را افزایش دهند. اثر پاک کنندگی خوب بر روی DPPH، طولانی شدن زمان هیپوکسی در موش های پیر، بهبود فعالیت SOD در سرم، و به تاخیر انداختن انحطاط فیزیولوژیکی ریه در موش های آزمایشگاهی پیر. و این پتانسیل را دارد که دارویی برای پیشگیری و درمان بیماری های پیری پوست باشد. در عین حال، اکیناکوزید موجود در سیستانچ توانایی قابل توجهی در از بین بردن رادیکال های آزاد DPPH دارد و می تواند گونه های فعال اکسیژن را از بین ببرد، از تخریب کلاژن ناشی از رادیکال های آزاد جلوگیری کند و همچنین اثر ترمیم خوبی بر آسیب آنیون رادیکال آزاد تیمین دارد.

روی مکمل cistanche tubulosa کلیک کنید

【برای اطلاعات بیشتر:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

الاستاز یک آنزیم پروتئاز است که در درجه اول مسئول تخریب الاستین، پروتئین مهم موجود در ECM است. الاستین به دلیل خاصیت پس‌کشی الاستیکی که دارد برای ایجاد خاصیت ارتجاعی به پوست حیاتی است [13]. بنابراین، مهار فعالیت الاستاز می تواند به جلوگیری از از دست دادن خاصیت ارتجاعی و چین و چروک پوست کمک کند [23]. نتایج ما نشان داد که A. occidentale قوی‌ترین مهارکننده الاستاز بود، به دنبال آن G. zeylanicum و S. alata، به ترتیب رتبه‌بندی مقادیر IC50. علاوه بر این، نتایج اتصال نشان داد که پنج ترکیب مشتق شده از این سه گیاه انرژی اتصال کمتری نسبت به EGCG (کنترل مثبت) و FRW (مهارکننده اصلی) دارند، که در آن ترکیباتی که انرژی اتصال پایین‌تری را نشان می‌دهند دارای مهار بهتری هستند (جدول S4). 24]. این ترکیبات فلاونوئیدها هستند که شامل تترامر پروآنتوسیانیدین [25]، آمنتوفلاون [25]، روتین [26،27]، آگاتیسفلاون [26] از A. occidentale و کامفرول 3-O-gentiobioside از S. alata است. [28] (جدول S3). نتایج نشان داد که هر پنج ترکیب مسئول فعالیت ضد الاستاز هستند و همچنین می‌توانند به عنوان کاندیدهای امیدوارکننده برای توسعه ضد پیری پوست در نظر گرفته شوند. با این حال، ما دریافتیم که هیچ یک از ترکیبات G. zeylanicum میل اتصال قوی نسبت به لیگاندهای کنترل نشان نداد، اگرچه عصاره آن دومین فعالیت را با روش آزمایشگاهی نشان داد. این ممکن است به دلیل اثر هم افزایی ترکیبات موجود در مخلوط باشد تا اثر فردی هر جزء فیتوشیمیایی.

علاوه بر الاستاز، ملانین یکی دیگر از اهداف مهم برای درمان پیری پوست در نظر گرفته می شود. ملانین جزء اصلی پوست، مو و رنگ چشم است که توسط ملانوژنز در ملانوسیت سنتز می شود. با این حال، تولید بیش از حد ملانین ممکن است باعث اختلالات پوستی از جمله کک و مک، ملاسما، لکه های ناشی از افزایش سن و پرپیگمانتاسیون شود که منجر به پیری زودرس می شود [12]. در ملانوژنز، تیروزیناز آنزیم حیاتی در مرحله محدودکننده سرعت است. بنابراین، کاهش فعالیت تیروزیناز می تواند منجر به کاهش تولید ملانین شود [29]. نتایج ما نشان داد که G. zeylanicum قوی‌ترین مهارکننده تیروزیناز و پس از آن A. catechu و A. occidentale بر اساس مقادیر IC50 بود. با کمال تعجب، بیشتر ترکیبات (47 ترکیب از 48 ترکیب) در این سه گیاه نسبت به KA (کنترل مثبت) و تروپولون (مهارکننده اصلی) انرژی اتصال کمتری در برابر تیروزیناز نشان دادند (جدول S5). از بین 47 ترکیب، 16 ترکیب از G. zeylanicum، 12 ترکیب از A. catechu و 29 ترکیب از A. occidentale مشتق شده اند که 10 مورد از آنها را می توان در بیش از یک گیاه یافت (جدول S3). با این حال، بر خلاف اتصال ترکیب با الاستاز، ترکیبات بالقوه شناسایی شده در برابر تیروزیناز از انواع کلاس های فیتوشیمیایی هستند. با توجه به رتبه انرژی های اتصال به تیروزیناز، ترکیباتی که به عنوان بهترین مهارکننده ها در نظر گرفته می شوند عبارتند از o-Coumaric acid [30] (فنولیک)، یک تترامر پروآنتوسیانیدین [25] (فلاونوئید)، اسید کافئیک [30] (فنولیک)، اسید فرولیک [30] (فنولیک)، و آرکا تانن A1 [31] (تانن)، به ترتیب افزایش امتیازات (جدول S5). نتایج به‌دست‌آمده از غربالگری آزمایشگاهی و تجزیه و تحلیل داکینگ در این مطالعه، خواص ضد پیری پوست چهار گیاه دارویی تایلندی را تأیید کرده و ترکیبات مشتق شده بالقوه آنها را که می‌تواند مسئول فعالیت‌های مشاهده‌شده باشد، پیشنهاد می‌کند. مطالعات بیشتر در مورد شکنش، و همچنین شناسایی و جداسازی ترکیبات فعال زیستی در این عصاره‌های گیاهی امیدوارکننده، برای اثبات حضور مولکول‌های پیشنهادی ما که می‌توانند متعاقباً برای درمان پیری پوست توسعه یابند، به شدت مورد نیاز هستند [14].

A. catechu، A. occidentale، G. zeylanicum و S. alata گیاهانی هستند که در طب سنتی استفاده می‌شوند و در منطقه گرمسیری جنوب شرقی آسیا، از جمله تایلند یافت می‌شوند [32-36]. قابل ذکر است، این گیاهان برای چندین فعالیت مرتبط با آنتی اکسیدان نشان داده شده اند. میوه A. catechu یک ماده جویدنی محبوب با برگ فوفل است که مسموم کننده و کمی اعتیادآور است [36]. برای درمان زخم های سوختگی و زخم های پوستی استفاده می شود و به عنوان یک قابض عمل می کند [35،37]. برای اثرات آنتی اکسیدانی و ضد التهابی قوی در برابر آسیب کبدی ناشی از استرس اکسیداتیو در موش ها گزارش شده است [38]. A. occidentale و G. zeylanicum، متعلق به جنوب تایلند، به عنوان غذا و گیاهان دارویی محلی استفاده می شود [32،33]. برگ های A. occidentale برای درمان بثورات پوستی، خارش، زخم و تب استفاده می شود، در حالی که برگ G. zeylanicum برای درمان آرتریت روماتوئید، آنفولانزا، اسهال خونی و سوء هاضمه استفاده می شود [32،33،39]. عصاره برگ A. occidentale و G. zeylanicum اثرات محافظت کننده عصبی در برابر گلوتامات و H2O{15}} آسیب اکسیداتیو ناشی از آن نشان دادند [32،40]. علاوه بر این، عصاره خام برگ هر دو گیاه استرس آنتی اکسیدانی و خواص ضد پیری را در نماتد Caenorhabditis elegans اعمال کرد [33،41،42]. از برگ های S. alata برای درمان بثورات پوستی، میکوز و درماتیت استفاده می شود [34]. عصاره برگ این گیاه توانست سیستم های آنتی اکسیدانی آنزیمی و غیر آنزیمی را افزایش دهد و از آسیب بافت های کبد و کلیه ناشی از استرس اکسیداتیو در طول دیابت در مدل موش جلوگیری کند [43].

در توافق با گزارش‌های قبلی، یافته‌های ما نشان می‌دهد که A. catechu، A. occidentale، G. zeylanicum، و S. alata پتانسیل آنتی‌اکسیدانی دارند، جدا از فعالیت‌های مربوط به آنزیم‌های مرتبط با پیری پوست. ما دریافتیم که این گیاهان سرشار از کل فنل ها و فلاونوئیدها با ظرفیت آنتی اکسیدانی بالا نسبت به رادیکال های DPPH و ABTS هستند، به جز S. alata که در هر دو مقدار و فعالیت فقط سطح متوسطی را نشان داد. فنولیک ها و فلاونوئیدها دو دسته شناخته شده از متابولیت های ثانویه گیاهی هستند که عمدتاً مسئول فعالیت آنتی اکسیدانی هستند [44،45]. این با نتایج ما مطابقت داشت که محتویات کل فنول و فلاونوئید همبستگی مثبت قابل توجهی را با فعالیت های مهار رادیکال های آزاد نشان داد (شکل S1). جالب توجه است، تجزیه و تحلیل همبستگی همچنین نشان داد که محتویات کل ترکیبات فنلی و فلاونوئیدی در این عصاره گیاهی مورد مطالعه با مهار الاستاز و تیروزیناز همبستگی مثبت داشت. با این حال، قدرت همبستگی با فنل ها بیشتر از فلاونوئیدها بود. نشان داده شد که فعالیت‌های مهار رادیکال‌های آزاد همبستگی بالایی با فعالیت‌های بازدارنده آنزیم عصاره‌ها دارند. این نتایج نشان داد که محتوای فنلی بالا و فعالیت آنتی اکسیدانی ممکن است منجر به مهار قوی آنزیم های الاستاز و تیروزیناز شود. با این حال، احتمال برهمکنش پروتئین-پلی فنل نیز باید نگران کننده باشد. برخی از پلی فنل‌ها می‌توانند مستقیماً از طریق توانایی خود در اتصال با پروتئین‌های غنی از پرولین باعث رسوب آنزیمی شوند که منجر به تشکیل پیوند هیدروژنی با آنزیم و در نتیجه منجر به مهار غیرانتخابی می‌شود [46].

4. مواد و روش ها

4.1. مواد شیمیایی و معرف ها

معرف فنل Folin–Ciocalteu، آلومینیوم کلرید (AlCl3)، دی متیل سولفوکسید (DMSO)، استات سدیم (NaOAc)، کورستین، 2، 2-دی فنیل-1-پیکریل هیدرازیل (DPPH)، 2،{5} } azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid) (ABTS)، اسید ال-اسکوربیک، پرسولفات پتاسیم (K2S2O8)، الاستاز از پانکراس خوک، اپی گالوکاتچین گالات (EGCG)، Nsuccinyl-Ala-Ala- Ala-p-nitroanilide (SANA)، تیروزیناز قارچ، اسید کوجیک (KA) و 3،{19}}دی هیدروکسی ال-فنیل آلانین (L-DOPA) از سیگما-آلدریچ (سنت لوئیس، MO،) خریداری شد. ایالات متحده آمریکا). کربنات سدیم (Na2CO3) از Merck (دارمشتات، آلمان) خریداری شد. اسید گالیک از TCI America (پورتلند، OR، ایالات متحده آمریکا) خریداری شد. فسفات دی پتاسیم (K2HPO4) و فسفات پتاسیم مونوبازیک (KH2PO4) از HiMedia (مومبای، هند) خریداری شدند. پایه تریس از Vivantis Technologies (شاه علم، مالزی) خریداری شد. اتانول و متانول از RCI Labscan (بانکوک، تایلند) خریداری شد. تمام مواد شیمیایی و معرف ها دارای گریدهای تحلیلی بودند.

4.2. مواد گیاهی و استخراج

گیاهان در این مطالعه به صورت محلی از باغ ها جمع آوری شده و یا در صورت لزوم از بازارهای محلی خریداری شدند. جدول 1 نام علمی، قسمت مورد استفاده و منبع هر گیاه را نشان می دهد. این گیاهان از نظر گیاه شناسی احراز هویت شدند، و نمونه های کوپن آنها در هرباریوم Kasin Suvatabhandhu، گروه گیاه شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه چولالانگکورن، بانکوک، تایلند، سپرده شد یا توسط گیاه شناس شناسایی شد. مواد گیاهی شسته و در دمای 65 درجه سانتیگراد خشک و در آسیاب مکانیکی ریز آسیاب شدند. عصاره گیری گیاه خشک شده (40 گرم) به روش استخراج یا خیساندن سوکسله با 400 میلی لیتر اتانول یا متانول انجام شد. عصاره ها صاف شده و تحت خلاء تا خشک شدن تبخیر شدند. سپس، بقایای خشک شده در DMSO به عنوان محلول ذخیره 100 میلی گرم بر میلی لیتر حل شد و برای مطالعه بیشتر در دمای 20- درجه سانتیگراد نگهداری شد.

4.3. تعیین محتوای کل فنلی

محتوای کل فنلی با استفاده از روش Folin-Ciocalteu [47] انجام شد. به طور خلاصه، 50 میکرولیتر از عصاره‌ها با غلظت 1 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر در آب دیونیزه شده با 50 میکرولیتر از معرف فنل فولین سیوکالتئو 10 درصد (وزنی/حجمی) در یک صفحه چاهی مخلوط و در تاریکی در دمای اتاق انکوبه شد. RT) به مدت 20 دقیقه. پس از انکوباسیون، 50 میکرولیتر Na2CO3 7.5 درصد (w/v) به مخلوط اضافه شد و به مدت 20 دقیقه دیگر انکوبه شد. جذب با میکروپلیت ریدر در طول موج 760 نانومتر اندازه گیری شد. محتوای فنلی کل از یک منحنی کالیبراسیون استاندارد با استفاده از اسید گالیک از 1.56 تا 100 میکروگرم در میلی لیتر محاسبه شد و نتایج به صورت میلی گرم معادل اسید گالیک (GAE) در هر گرم عصاره وزن خشک نشان داده شد.

4.4. تعیین محتوای فلاونوئید کل

محتوای فلاونوئید کل با استفاده از کلرید آلومینیوم (AlCl3) انجام شد [47]. به طور خلاصه، 50 میکرولیتر از عصاره‌ها با غلظت 1 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر در آب دیونیزه شده تا 200 میکرولیتر با اتانول 95 درصد ساخته شد و سپس 10 میکرولیتر از 10 درصد AlCl3 و 10 میکرولیتر از 1 مولار NaOAc به چاهک اضافه شد. بشقاب صفحه در تاریکی در RT به مدت 40 دقیقه انکوبه شد و جذب با دستگاه میکروپلیت خوان در 415 نانومتر اندازه‌گیری شد. محتوای فلاونوئید کل از یک منحنی کالیبراسیون استاندارد با استفاده از کوئرستین از 1.56 تا 100 میکروگرم در میلی لیتر محاسبه شد و نتایج به صورت میلی گرم کوئرستین معادل (QE) در هر گرم عصاره وزن خشک نشان داده شد.

4.5. تعیین فعالیت مهار رادیکال DPPH

سنجش فعالیت مهار رادیکال DPPH همانطور که قبلاً توضیح داده شد [47] انجام شد. معرف کار DPPH توسط DPPH حل شده در اتانول مطلق تهیه شد. به طور خلاصه، 180 میکرولیتر محلول کاری DPPH• با 20 میکرولیتر عصاره در یک صفحه چاهی مخلوط شد و در تاریکی در RT به مدت 15 دقیقه انکوبه شد و جذب با میکروپلیت خوان در طول موج 517 نانومتر اندازه‌گیری شد. اسید اسکوربیک از 1.56 تا 100 میکروگرم در میلی لیتر به عنوان استاندارد استفاده می شود. فعالیت مهار رادیکال به عنوان درصد مهار رادیکال های آزاد با استفاده از معادله زیر محاسبه شد:

درصد فعالیت مهار DPPH عصاره هر گیاه با اسید اسکوربیک مقایسه شد. نتایج به صورت میلی گرم ظرفیت آنتی اکسیدانی معادل ویتامین C (VCEAC) در هر گرم عصاره وزن خشک بیان شد. IC50 (نیمه حداکثر غلظت بازدارنده) از نمودار درصد مهار در برابر غلظت هر عصاره تعیین شد.

4.6. تعیین فعالیت مهار رادیکال ABTS

سنجش فعالیت مهار رادیکال ABTS همانطور که قبلاً توضیح داده شد [47] انجام شد. معرف عامل ABTS• plus با مخلوط کردن 7 میلی مولار ABTS• و 2.45 میلی مولار K2S2O8 به نسبت 1:1 تهیه شد و مخلوط باید 16 تا 18 ساعت در تاریکی در RT باقی می ماند. محلول کار ABTS• plus با اتانول مطلق رقیق شد تا جذب بین 0.7 و 0.8 در 734 نانومتر برسد. به طور خلاصه، 180 میکرولیتر محلول کاری ABTS• پلاس با 20 میکرولیتر عصاره در یک صفحه چاهی مخلوط شد و در تاریکی در RT به مدت 30 دقیقه انکوبه شد و جذب با میکروپلیت خوان در 734 نانومتر اندازه‌گیری شد. اسید اسکوربیک از 1.56 تا 100 میکروگرم در میلی لیتر به عنوان استاندارد استفاده می شود. فعالیت مهار رادیکال به عنوان درصد مهار رادیکال های آزاد با استفاده از رابطه (1) محاسبه شد.

درصد فعالیت مهار ABTS عصاره هر گیاه با اسید اسکوربیک مقایسه شد. نتایج به صورت میلی گرم ظرفیت آنتی اکسیدانی معادل ویتامین C (VCEAC) در هر گرم عصاره وزن خشک بیان شد. IC50 از نمودار درصد مهار در برابر غلظت هر عصاره تعیین شد.

4.7. تعیین فعالیت آنتی الاستاز

فعالیت ضد الاستاز با استفاده از روش مهار الاستاز با استفاده از پروتکل اصلاح شده [13،48،49] ارزیابی شد. به طور خلاصه، 20 میکرولیتر عصاره، 10 میکرولیتر 0.4 واحد بر میلی لیتر الاستاز خوک پانکراس (PPE) و 140 میکرولیتر بافر 0.1 مولار Tris-HCL در pH 8.0 در یک صفحه چاه 96- اضافه شدند و در RT به مدت 20 دقیقه از قبل انکوبه شدند. پس از انکوباسیون، 30 میکرولیتر SANA 2 میلی مولار به مخلوط واکنش اضافه شد و به مدت 30 دقیقه در RT انکوبه شد. جذب با میکروپلیت ریدر در طول موج 734 نانومتر اندازه گیری شد. EGCG به عنوان یک کنترل مثبت برای مهار استفاده شد. شاهد منفی به جای عصاره حاوی 100 درصد DMSO بود. درصد مهار فعالیت الاستاز با استفاده از رابطه (1) محاسبه شد. IC50 از نمودار درصد مهار الاستاز در برابر غلظت هر عصاره تعیین شد.

4.8. تعیین فعالیت ضد تیروزیناز

فعالیت ضد تیروزیناز با استفاده از روش دوپاکروم با برخی تغییرات انجام شد [8]. به طور خلاصه، 20 میکرولیتر از عصاره، 20 میکرولیتر 200 واحد بر میلی‌لیتر قارچ تیروزیناز، و 140 میکرولیتر بافر فسفات 0.1 مولار در pH 6.8 در صفحات چاهک اضافه شد و از قبل در RT انکوبه شد. 20 دقیقه پس از انکوباسیون، 40 میکرولیتر از 2.5 میلی مولار L-DOPA به مخلوط واکنش اضافه شد و به مدت 20 دقیقه در RT انکوبه شد. جذب با میکروپلیت ریدر در 492 نانومتر خوانده شد. KA به عنوان یک کنترل مثبت برای مهار استفاده شد. شاهد منفی به جای عصاره حاوی 100 درصد DMSO بود. درصد مهار فعالیت تیروزیناز با استفاده از رابطه (1) محاسبه شد. IC50 از نمودار درصد مهار تیروزیناز در برابر غلظت هر عصاره تعیین شد.

4.9. اتصال مولکولی

4.9.1. آماده سازی لیگاند

فهرستی از ترکیبات فیتوشیمیایی از سه گیاه موثر با مهار قوی در برابر الاستاز یا تیروزیناز از مقالات منتشر شده [25-28،30-32،42،50-61] انتخاب شد (جدول S3). تمام ساختارهای شیمیایی ترکیبات از نام IUPAC با استفاده از BIOVIA Draw 2019 (BIOVIA, San Diego, CA, USA) تولید شد. سپس، ترکیبات هندسی پاکسازی شدند و فایل با استفاده از Discovery Studio Visualizer (BIOVIA، San Diego، CA، USA) برای قالب‌بندی pdb ذخیره شد. این فایل ها با استفاده از نرم افزار AutoDockTools-1.5.6 (موسسه تحقیقاتی اسکریپس، سن دیگو، کالیفرنیا، ایالات متحده آمریکا) به فرمت pdbqt تبدیل شدند.

4.9.2. آماده سازی پروتئین

ساختارهای کریستالوگرافی اشعه ایکس الاستاز (PDB ID: 3HGP) [62] و تیروزیناز (PDB ID: 2Y9X) [63] از بانک داده پروتئین RCSB به دست آمد. قبل از مطالعه اتصال، با استفاده از Discovery Studio Visualizer، مولکول‌های آب و بازدارنده اصلی از ساختار پروتئین حذف شدند، به استثنای Cu2 پلاس در ساختارهای تیروزیناز. این ساختارهای پروتئینی با استفاده از تنظیمات پروتئین آماده شده در نرم افزار AutoDockTools-1.5.6 تهیه شدند. تمام هیدروژن های از دست رفته و بارهای کولمن به ساختار پروتئین اضافه شد و در فایل ذخیره شد تا فرمت pdbqt برای مطالعه docking شود.

4.9.3. اتصال مولکولی

مطالعات Docking مولکولی با استفاده از پروتکل پیش فرض در نرم افزار AutoDockTools{{0}}.5.6 انجام شد. سایت های شبکه با فاصله 0.375 Å تنظیم شدند. ابعاد x-y-z برای الاستاز 40 × 40 × 40 امتیاز و برای تیروزیناز 60 × 60 × 60 نقطه تنظیم شد. جعبه شبکه مراکز x، y و z برای الاستاز 12.58، 9.36، و 2.251، و برای تیروزیناز -10.044، -28.706 و -43.443 بود. مطالعه Docking با استفاده از الگوریتم ژنتیک لامارکی (GA) با پارامترهای پیش‌فرض انجام شد و نتایج Docking با استفاده از نرم‌افزار AutoDockTools{23}}.5.6 و Discovery Studio Visualizer تجزیه و تحلیل شد.

4.10. تحلیل آماری

همه آزمایش ها حداقل در سه تکرار انجام شد و نتایج به صورت میانگین ± انحراف استاندارد (SD) نشان داده شد. مقادیر IC5{2}} با استفاده از نرم افزار SigmaPlot نسخه 12 تجزیه و تحلیل شد.{3}}. همبستگی بین متغیرهای مختلف به صورت ضرایب همبستگی پیرسون (r) بیان شد. همبستگی با استفاده از GraphPad Prism (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA) تعیین شد و نتایج زمانی که p کمتر از 0.05 بود (p <0.05) از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد.

5. نتیجه گیری ها

به طور خلاصه، یافته های ما چهار گیاه دارویی تایلندی را نشان داد که حاوی ترکیبات کاندید امیدوارکننده برای توسعه به عنوان عوامل ضد پیری پوست هستند. عصاره برگ A. occidentale و G. zeylanicum اثر مهاری قوی علیه هر دو آنزیم الاستاز و تیروزیناز نشان دادند، در حالی که عصاره برگ S. alata و میوه A. catechu فعالیت خود را به ترتیب فقط نسبت به الاستاز یا تیروزیناز به نمایش گذاشتند. چندین ترکیب مشتق شده از این گیاهان نیز به دلیل توانایی آنها برای اتصال به هر دو آنزیم از طریق مطالعه اتصال مولکولی تأیید شد. علاوه بر این، برگ G. zeylanicum، برگ A. occidentale و میوه A. catechu دارای پتانسیل آنتی اکسیدانی قابل توجهی نسبت به رادیکال های آزاد با مقادیر بالایی از فنول ها و فلاونوئیدها هستند. میوه A. catechu، برگ A. occidentale، برگ G. zeylanicum و برگ S. alata به عنوان منابع طبیعی آنتی اکسیدان، آنتی الاستاز و آنتی تیروزیناز شناخته می شوند که به طور بالقوه برای درمان پیری مفید هستند. از پوست

مشارکت نویسنده:مفهوم سازی، AP; بررسی و تحلیل رسمی، KC، SC (Sawarin Chumpolphant)، PR، و CS. اعتبار سنجی، روابط عمومی و AP. تجسم، KC و SC (Sawarin Chumpolphant)؛ نوشتن- آماده سازی پیش نویس اصلی، KC، SC (Sawarin Chumpolphant)، PR، CS، و AP. نوشتن — بررسی و ویرایش، KC، SC (Sawarin Chumpolphant)، PR، CS، SC (Siriporn Chuchawankul)، TT، و AP. نظارت، TT و AP. نرم افزار، SC (Siriporn Chuchawankul) و TT. منابع، TT و AP. کسب بودجه، AP همه نویسندگان نسخه منتشر شده نسخه خطی را خوانده و با آن موافقت کرده اند.

منابع مالی: این تحقیق توسط صندوق تحقیقات علمی و نوآوری تایلند دانشگاه چولالانگکورن (CU_FRB65_hea (91)_198_53_01) و دفتر دبیر دائمی وزارت آموزش عالی، علم، تحقیق و نوآوری (شماره گرنت RGNS 63- 003). KC همچنین از نودمین سالگرد تأسیس صندوق دانشگاه چولالانگکورن (صندوق موقوفه Ratchadaphiseksomphot) تشکر می کند.

بیانیه در دسترس بودن داده ها:قابل اجرا نیست.

قدردانینویسندگان از Maneewan Suwatronnakorn، Somchai Issaravanich و Chatrawee Duangjan برای کمک مهربانشان در تهیه عصاره گیاهی تشکر می کنند. همچنین از Nijsiri Ruangrungsi و Chanida Palanuvej برای کمک آنها در شناسایی گیاه و Dicson Sheeja Malar برای کمک آنها در ویرایش انگلیسی نسخه خطی سپاسگزاریم. AP از کمک های مالی برای توسعه کارکنان جدید دانشکده، صندوق موقوفه Ratchadaphiseksomphot، دانشگاه Chulalongkorn سپاسگزار است.

تضاد علاقه:نویسندگان هیچ تضاد منافع را اعلام نمی کنند.

منابع

1. Kligman، AM عملکرد "واقعی" پوست چیست؟ انقضا درماتول. 2002، 11، 159.

2. ژانگ، اس. Duan, E. مبارزه با پیری پوست: راه از نیمکت تا کنار تخت. پیوند سلولی 2018، 27، 729–738. [CrossRef] [PubMed]

3. Farage، MA; میلر، KW; السنر، پی. Maibach، HI ویژگی های پوست پیری. Adv. مراقبت از زخم 2013، 2، 5-10. [CrossRef] [PubMed]

4. Farage، MA; میلر، KW; Maibach، HI (Eds.) تغییرات دژنراتیو در پیری پوست. در کتاب درسی پیری پوست; Springer: برلین/هایدلبرگ، آلمان، 2017; صص 15-30.

5. Vierkötter، A. Krutmann, J. تأثیرات محیطی بر پیری پوست و تظاهرات خاص قومیتی. درماتوآندوکرینولوژی 2012، 4، 227-231. [CrossRef] [PubMed]

6. Shin, J.-W.; Kwon، S.-H. چوی، J.-Y. Na، J.-I.; هو، سی.-اچ. چوی، اچ.-ر. پارک، کی.-سی. مکانیسم های مولکولی پیری پوست و رویکردهای ضد پیری بین المللی جی. مول. علمی 2019، 20، 2126. [CrossRef]

7. Rinnerhaler، M. بیشوف، جی. استروبل، ام. تروست، آ. ریشتر، ک. استرس اکسیداتیو در پیری پوست انسان. Biomolecules 2015، 5، 545-589. [CrossRef]

8. چاتاتیکون، م. Chiabchalard، A. گیاهان تایلندی با سطوح آنتی اکسیدانی بالا، فعالیت مهار رادیکال های آزاد، فعالیت ضد تیروزیناز و ضد کلاژناز. مکمل BMC. جایگزین. پزشکی 2017, 17, 487. [CrossRef]

9. Lephart، ED پیری پوست و استرس اکسیداتیو: اثرات ضد پیری Equol از طریق مکانیسم‌های بیوشیمیایی و مولکولی. Aging Res. Rev. 2016, 31, 36-54. [CrossRef]

10. پنگ، H.-Y.; لین، سی.-سی. وانگ، H.-Y.; شیه، ی. چو، اس.-تی. اثرات تغییر ملانوژنز اسانس بومادران و لینالیل استات: دخالت استرس اکسیداتیو و مسیرهای سیگنال دهی JNK و ERK در سلول های ملانوما. PLoS ONE 2014, 9, e95186. [CrossRef]

11. پارک، جی اچ. Ku، HJ; لی، جی اچ. پارک، J.-W. کمبود IDH2 از طریق افزایش ملانوژنز باعث تسریع رنگدانه پوست در موش ها می شود. ردوکس بیول. 2018، 17، 16-24. [CrossRef]

12. جیراتچایاماتاساکول، سی. دینگ، ی. هوانگ، او. Im, S.-T.; جانگ، ی. میونگ، S.-W. لی، جی.ام. کیم، اچ.-اس. کو، اس.-سی. لی، اس.-اچ. غربالگری در شرایط آزمایشگاهی الاستاز، کلاژناز، هیالورونیداز، و فعالیت های مهاری و آنتی اکسیدانی تیروزیناز 22 عصاره گیاهی هالوفیت برای مواد آرایشی جدید. ماهی. آکوات. علمی 2020، 23، 6. [CrossRef]

13. Thring، TS; حلی، پ. Naughton، DP فعالیت ضد کلاژناز، آنتی الاستاز و آنتی اکسیدانی عصاره های 21 گیاه. مکمل BMC. جایگزین. پزشکی 2009، 9، 27. [CrossRef] [PubMed]

14. براوو، ک. آلزات، اف. Osorio, E. میوه های منتخب گیاهان وحشی و کشت شده آند به عنوان منابع ترکیبات بالقوه با فعالیت آنتی اکسیدانی و ضد پیری. محصولات تولیدی Ind. 2016، 85، 341-352. [CrossRef]

15. کنوار، RM; Shrestha، KP; Bussmann، RW طب سنتی گیاهی در غرب دور نپال: یک ارزیابی دارویی. J. Ethnobiol. Ethnomedicine 2010, 6, 35. [CrossRef] [PubMed]

16. سینگ، جی. پاساری، ع.ک. لئو، وی وی. Mishra، VK; ساببارایان، س. سینگ، BP; کومار، بی. کومار، اس. گوپتا، VK؛ Lalhlenmawia، H. ارزیابی تنوع محتوای فنلی همراه با پتانسیل آنتی اکسیدانی، ضد میکروبی و سیتوتوکسیک گیاهان دارویی سنتی منتخب از هند. جلو. علوم گیاهی 2016, 7, 407. [CrossRef]

17. بیون، ن.-ی. هیو، م.-ر. ییم، اس.-اچ. همبستگی فعالیت های آنتی اکسیدانی ضد چروک و رادیکال های آزاد آجیل آرکا با محتوای فنولیک و فلاونوئید. علوم غذایی تکنولوژی 2021، 41، 1041-1049. [CrossRef]

18. سلار، ت. Arulrajah، AA; لانکا، وی. نقش حمایت اجتماعی در فرسودگی شغلی در شرکت پوشاک. بین المللی اتوبوس. Res. 2019، 12، 110-118. [CrossRef]

19. ویرکوتر، ا. شیکوفسکی، تی. رانفت، یو. سوگیری، د. ماتسویی، م. کرامر، یو. Krutmann, J. قرار گرفتن در معرض ذرات هوا و پیری خارجی پوست. ج. تحقیق. درماتول. 2010، 130، 2719-2726. [CrossRef]

20. لی، A.-Y. ناهنجاری های رنگدانه ای پوست و ارتباط احتمالی آنها با پیری پوست. بین المللی جی. مول. علمی 2021, 22, 3727. [CrossRef]

21. پوپولا، خوب. مارنویک، جی ال. راوتنباخ، اف. عامر، اف. Iwuoha، EI; Husein, AA مهار استرس اکسیداتیو و آنزیم های مرتبط با پیری پوست توسط چالکون های پرنیله و سایر فلاونوئیدهای Helichrysum teretifolium. Molecules 2015, 20, 7143-7155. [CrossRef]

22. تو، ی. Quan، T. استرس اکسیداتیو و پیری بافت همبند پوست انسان. لوازم آرایشی 2016، 3، 28. [CrossRef]

23. عزمی، ن. هاشم، پ. هاشم، دی.م. هالیمون، ن. مجید، NMN آنتی الاستاز، آنتی تیروزیناز و فعالیت بازدارنده ماتریکس متالوپروتئیناز-1 عصاره کرم خاکی به عنوان عامل جدید ضد پیری بالقوه. پیمان آسیایی جی تروپ. بیومد. 2014، 4، S348–S352. [CrossRef] [PubMed]

24. Rangsinth, P. سیلاپاچایپورن، سی. نیلکت، س. تنکونائو، تی. Ung، AT; چوچاوانکول، S. ترکیبات زیست فعال مشتق شده از قارچ به طور بالقوه به عنوان مهارکننده های پروتئاز اصلی SARS-CoV عمل می کنند: رویکردی در سیلیکو. جی. سنت. متمم. پزشکی 2021، 11، 158-172. [CrossRef] [PubMed]

25. کونان، NA; باکی، اثر ضد زخم EM و سمیت حاد عصاره هیدرواتانولی برگ بادام هندی (Anacardium occidentale L.). J. Ethnopharmacol. 2007، 112، 237-242. [CrossRef] [PubMed]

26. اجیلیه، ا. اوبوتور، ای. آکینکونمی، ای. Aderogba, M. جداسازی و شناسایی ترکیبات آنتی اکسیدانی و ضد میکروبی از عصاره برگ Anacardium occidentale L.(Anacardiaceae). J. King Saud Univ. علمی 2015، 27، 244-252. [CrossRef]

27. چوتفروتیپونگ، ال. بنژاکول، اس. Kijroongrojana، K. بهینه سازی استخراج ترکیبات فنلی آنتی اکسیدان از برگ بادام هندی (Anacardium occidentale L.) با استفاده از روش سطح پاسخ. جی. بیوشیمی مواد غذایی. 2017, 41, e12379. [CrossRef]

28. موریاما، ح. ایزوکا، تی. ناگای، م. میازاکی، اچ. Satoh, T. فعالیت ضد التهابی عصاره برگ Cassia alata تیمار شده با حرارت و گلیکوزید فلاونوئید آن. Yakugaku Zasshi 2003, 123, 607–611. [CrossRef]

29. چاتاتیکون، م. یامائوچی، تی. یاماساکی، ک. آیبا، اس. Chiabchalard، A. اثر ضد ملانوژنیک برگهای Croton roxburghii و Croton در سلولهای B16F10 تحریک شده با MSH. جی. سنت. متمم. پزشکی 2019، 9، 66–72. [CrossRef]

30. وانگ، آر. پان، اف. او، ر. کوانگ، اف. وانگ، ال. Lin, X. Arecanut (Areca catechu L.) عصاره دانه استخراج شده توسط حلال های معمولی و سازگار با محیط زیست: رابطه بین ترکیبات فیتوشیمیایی و فعالیت های بیولوژیکی با تجزیه و تحلیل چند متغیره. J. Appl. Res. پزشکی معطر. Plants 2021, 25, 100336. [CrossRef]

31. نوناکا، جی. Hsu، F.-L.; Nishioka، I. ساختارهای پروسیانیدین های دیمری، تریمریک و تترامری از Areca catechu LJ Chem. Soc. شیمی. اشتراک. 1981، 15، 781-783. [CrossRef]

32. دوانگجان، سی. رنگسینث، پی. ژانگ، اس. چشمک، م. Tencomnao، T. Anacardium Occidentale، L. عصاره برگ در برابر گلوتامات/H2O محافظت می‌کند2-سمیت اکسیداتیو القاء شده و رشد نوریت را القا می‌کند: دخالت مسیر سیگنالینگ SIRT1/Nrf2 و غشای غشایی تنورین 4. جلو. فارماکول. 2021, 12, 627738. [CrossRef] [PubMed]

33. دوانگجان، سی. رنگسینث، پی. گو، ایکس. ژانگ، اس. چشمک، م. عصاره برگ Tencomnao، T. Glochidion zeylanicum از طریق مسیرهای سیگنالینگ DAF-16/FoxO و SKN-1/Nrf-2 خواص افزایش طول عمر و مقاومت به استرس اکسیداتیو را در Caenorhabditis elegans نشان می‌دهد. Phytomedicine 2019, 64, 153061. [CrossRef] [PubMed]

34. اولادجی، OS; Adelowo، FE; اولویوری، AP; بانکول، DT شرح قومی گیاه شناسی و فعالیت های بیولوژیکی سنا آلاتا. اوید. مکمل مبتنی بر. جایگزین. پزشکی 2020، 2020، 2580259. [CrossRef] [PubMed]

35. پنگ، دبلیو. لیو، ی.-جی. وو، ن. سان، تی. او، X.-Y. گائو، Y.-X. وو، سی.-جی. Areca catechu L. (Arecaceae): مروری بر کاربردهای سنتی آن، گیاه شناسی، فیتوشیمی، فارماکولوژی و سم شناسی. J. Ethnopharmacol. 2015، 164، 340-356. [CrossRef]

36. صالحی، ب. کونوالوف، دی. فرو، پ. کاپوانگولو، پ. پرون، جی. Ksenija، MS; کاردوسو، اس ام. پریرا، OR; نیگام، م. Nicola, S. Areca catechu - از مزرعه تا غذا و کاربردهای زیست پزشکی. فیتوتر. Res. 2020، 34، 2140–2158. [CrossRef]

37. Verma, DK; بهارات، م. نایاک، دی. شانبهاگ، تی. شانبهاگ، وی. Rajput، RS Areca catechu: اثر عصاره اتانولی موضعی بر بهبود زخم سوختگی در موش‌های صحرایی آلبینو. بین المللی J. Pharmacol. کلین. علمی 2012، 1، 74-78.

38. پیتایانوکول، ص. نیتیتاناکول، س. باووادا، R. پتانسیل محافظت کبدی عصاره های دانه های Areca catechu و nutgalls Quercus infectoria. Molecules 2009, 14, 4987-5000. [CrossRef]

39. صالحی، ب. Gültekin-Özgüven، M. کرکین، سی. اوزچلیک، بی. مورایس-براگا، MFB؛ کارنیرو، JNP; Bezerra، CF; سیلوا، TGd; کوتینیو، HDM; آمینه، ب. اثرات آنتی اکسیدانی، ضد میکروبی و ضد سرطانی گیاهان آناکاردیوم: دیدگاه قومی دارویی. جلو. اندوکرینول. 2020، 11، 295. [CrossRef]

40. دوانگجان، سی. رنگسینث، پی. ژانگ، اس. گو، ایکس. چشمک، م. Tencomnao، T. اثرات محافظتی عصبی عصاره برگ Glochidion zeylanicum در برابر سمیت ناشی از H2O2/گلوتامات در سلول‌های عصبی پرورش‌یافته و سمیت ناشی از A در Caenorhabditis elegans. Biology 2021, 10, 800. [CrossRef]

41. دوانگجان، سی. رنگسینث، پی. گو، ایکس. چشمک، م. Tencomnao، T. افزایش طول عمر و خواص مقاومت به استرس اکسیداتیو عصاره برگ از Anacardium occidentale L. در Caenorhabditis elegans. اکسید. پزشکی سلول. لانگف. 2019، 2019، 9012396. [CrossRef]

42. دوانگجان، سی. رنگسینث، پی. گو، ایکس. ژانگ، اس. چشمک، م. Tencomnao، T. داده ها در مورد اثرات عصاره برگ گلوکیدیون zeylanicum در Caenorhabditis elegans. داده مختصر 2019، 26، 104461. [CrossRef] [PubMed]

43. سوگومار، م. Doss، DVA; Maddisetty، PP اثرات محافظتی کبدی-کلیوی عصاره هیدرواتانولی سنا آلاتا بر سیستم های آنتی اکسیدانی آنزیمی و غیر آنزیمی در موش های صحرایی دیابتی ناشی از استرپتوزوتوسین. یکپارچه سازی پزشکی Res. 2016، 5، 276-283. [CrossRef] [PubMed]

44. آریال، س. Baniya, MK; دانخو، ک. کنوار، پ. گورونگ، آر. Koirala، N. محتوای کل فنول، محتوای فلاونوئید و پتانسیل آنتی اکسیدانی سبزیجات وحشی از نپال غربی. گیاهان 2019، 8، 96. [CrossRef] [PubMed]

45. پانچه، ع. دیوان، ع. چاندرا، اس. فلاونوئیدها: یک مرور کلی. J. Nutr. علمی 2016, 5, e47. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​تازدینووا، د. رحمان، م. حمدان، SB; متین، م.م. بن باکری، م.ک. رحمان، پیوندهای پلی فنول گیاهی MM با پروتئین: یک بررسی آینده نگر. BioResources 2022, 17, 1-25. [CrossRef]

47. پراسانسوکلب، ع. عصاره برگ Tencomnao، T. Acanthus ebracteate از سلول های عصبی در برابر آسیب استرس اکسیداتیو ناشی از گلوتامات محافظت می کند. مکمل BMC. جایگزین. پزشکی 2018, 18, 278. [CrossRef]

48. آبهیجیت، س. منجوشری، دی. آنتی هیالورونیداز، فعالیت ضد الاستاز گارسینیا ایندیکا. بین المللی جی. بات. 2010، 6، 299-303.

49. ویدواتی، دبلیو. رانی، AP; حمزه، ر. آرومواردانا، اس. عفیفه، ا. کوسوما، HSW; ریحیبیها، د.د. نوفوس، اچ. Amalia, A. سنجش آنتی اکسیدانی و ضد پیری عصاره هیبیسکوس سابداریفا و ترکیبات آن. نات تولید علمی 2017، 23، 192-200. [CrossRef]

50. فرناند، وی. دین، دی.تی. واشنگتن، اس جی; Fakayode، SO; Losso، JN; ون راونسوای، RO; Warner, IM تعیین ترکیبات فعال دارویی در عصاره ریشه Cassia alata L. با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا. Talanta 2008, 74, 896-902. [CrossRef]

51. جین، وی. گارگ، ا. پارااسکاندولا، م. چاتورودی، پ. خریوالا، اس.اس. استپانوف، I. تجزیه و تحلیل آلکالوئیدها در محصولات حاوی گردو با استفاده از کروماتوگرافی مایع - طیف سنجی جرمی پشت سر هم. جی. آگریک. مواد شیمیایی مواد غذایی 2017، 65، 1977-1983. [CrossRef]

52. لیو، ا. خو، ال. زو، ز. Yang, S. مطالعات بر روی ترکیبات شیمیایی برگهای Cassia alata. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 2009، 34، 861–863. [PubMed]

53. مینگ یو، دبلیو. جین هوی، ال. Jian-Guo، L. تعیین پلی فنول ها در Areca catechu توسط HPLC. نات تولید Res. توسعه دهنده 2011، 23، 101.

54. محمد، ع. علی، ع. ابوالعین، س. محمد، ف. ابو، ای. مجدی، م. محمد، الف. بررسی فیتوشیمیایی، سمیت سلولی و آنتی اکسیدانی برگهای کاشیا آلاتا در حال رشد در مصر. J. Innov. فارم. Biol. Sci 2017, 4, 97-105.

55. اوکپوزور، ج. اوگبونوگافور، اچ. کریم، جی. Igwo-Ezikpe، M. بررسی آزمایشگاهی ترکیبات فنلی آنتی اکسیدانی در عصاره سنا آلاتا. Res. J. Phytochem. 2009، 3، 68-76. [CrossRef]

56. پونگنیمیت پراسرت، ن. وادخین، ک. چین پیسال، سی. ساتیرافان، م. Wetwitayaklung، P. اثرات ضد التهابی راین و عصاره خام از Cassia alata L. در سلول های HaCaT. علمی مهندس مطالعه سلامت. 2018، 12، 19-32.

57. پرومگول، ت. پانچارون، او. Deachathai, S. ترکیبات ضد باکتری و آنتی اکسیدانی از Cassia alata Linn. Songklanakarin J. Sci. تکنولوژی 2014، 36، 459-463.

58. سینگ، بی. نادکارنی، جی آر; ویشواکارما، RA; Bharate، SB; نیوسارکار، م. Anandjiwala, S. عصاره هیدروالکلی برگ های Cassia alata (Linn.) و ترکیب اصلی آن راین فعالیت ضد حساسیتی را از طریق تثبیت ماست سل و مهار لیپوکسیژناز نشان می دهد. J. Ethnopharmacol. 2012، 141، 469-473. [CrossRef]

59. وو، کیو. یانگ، ی. Simon، JE تعیین HPLC/MS کمی و کیفی پروآنتوسیانیدین ها در آجیل آرکا (Areca catechu). شیمی. تنوع زیستی 2007، 4، 2817-2826. [CrossRef]

60. Zhang، W.-M.; هوانگ، W.-Y. چن، W.-X. هان، ال. ژانگ، اچ.-دی. بهینه سازی شرایط استخراج پلی فنول های دانه آرکا و ارزیابی فعالیت آنتی اکسیدانی آنها. Molecules 2014, 19, 16416-16427. [CrossRef]

61. ژانگ، ایکس. می، دبلیو. زنگ، ی. Liu, J. ترکیبات فنولی از میوه های Areca catechu و فعالیت های ضد باکتریایی آنها. جی تروپ. Subtrop. ربات 2009، 17، 74-76.

62. تمادا، ت. کینوشیتا، تی. کوریهارا، ک. آداچی، م. اوهارا، تی. ایمای، ک. کوروکی، آر. Tada، T. تجزیه و تحلیل ترکیبی نوترون با وضوح بالا و اشعه ایکس از الاستاز مهار شده، حفره اکسانیونی محل فعال را تایید می‌کند، اما بر خلاف یک پیوند هیدروژنی با مانع کم حکم می‌کند. مربا. شیمی. Soc. 2009، 131، 11033-11040. [CrossRef] [PubMed]

63. اسمیه، دبلیو تی; Rozeboom, HJ; ویجن، ا. مس، جی جی. فوستتی، اف. ویچرز، اچ جی. Dijkstra، BW ساختار کریستالی تیروزیناز قارچ Agaricus bisporus: هویت زیر واحدهای تترامر و تعامل با تروپولون. بیوشیمی 2011، 50، 5477-5486. [CrossRef] [PubMed]

سلب مسئولیت/یادداشت ناشر:اظهارات، نظرات و داده‌های موجود در همه نشریات صرفاً متعلق به نویسنده (ها) و مشارکت‌کننده (ها) است و نه MDPI و/یا ویرایشگر. MDPI و/یا ویراستار(های) مسئولیت هرگونه آسیب به افراد یا دارایی ناشی از هر ایده، روش، دستورالعمل یا محصولاتی را که در محتوا ذکر شده است، سلب می‌کنند.

【برای اطلاعات بیشتر:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】