کارودیلول، یک مسدود کننده آدرنرژیک، سنتز ملانین را با مهار مسیر سیگنالینگ CAMP/CREB در ملانوسیت‌های انسان و کشت پوست انسان Ex Vivo سرکوب می‌کند.

مخاطب:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساپ: 008618081934791

Myoung Eun Choi 1,†, Hanju Yoo 1,2,†, Ha-Ri Lee 2,3, Ik Joon Moon 1, Woo Jin Lee 1, Youngsup Song 3,*,‡ و Sung Eun Chang 1

خلاصه:کاتکول آمین ها از طریق گیرنده های جفت شده با پروتئین G عمل می کنند و باعث افزایش سطح درون سلولی 30 50- آدنوزین مونوفسفات حلقوی (cAMP) در سلول های مختلف می شوند. بیوسنتز کاتکول آمین و گیرنده آدرنرژیک وجود داردملانوسیت ها; بنابراین، کاتکول آمین ها ممکن است نقش مهمی در رنگدانه پوست ایفا کنند. با این حال، عملکرد آنها و مکانیسم‌های واسطه‌کننده ملانوژنز پوست غیرانسانی هنوز مورد بررسی قرار نگرفته است. بنابراین، ما اثر ضد ملانوژنتیک بالقوه کارودیلول، یک مسدودکننده غیرانتخابی با فعالیت‌های مسدودکننده ضعیف را بررسی کردیم. کارودیلول محتوای ملانین و فعالیت تیروزیناز سلولی را بدون به خطر انداختن زنده ماندن سلولی در انسان عادی کاهش داد.ملانوسیت هاو همچنین در مل-آب ملانوسیت های موش جاودانه شد. کارودیلول فاکتور رونویسی مرتبط با میکروفتالمیا (MITF)، تیروزیناز، پروتئین مربوط به تیروزیناز (TRP){3}} و TRP{4}} را کاهش داد. درمان کارودیلول منجر به کاهش پروتئین متصل شونده به عنصر فسفر-cAMPresponse (CREB) شد. علاوه بر این، افزایش سطح cAMP پس از درمان با فورسکولین، اثر ضد ملانوژنی کارودیلول را معکوس کرد. علاوه بر این، کارودیلول به طور قابل توجهی شاخص ملانین را در کشت های پوستی انسان تحت تابش اشعه ماوراء بنفش کاهش داد. روی هم رفته، نتایج ما نشان می دهد که کارودیلول به طور موثری ملانوژنز را در انسان سرکوب می کند.ملانوسیت هاو پوست ex vivohuman با مهار سیگنالینگ cAMP/protein kinase A/CREB. اثرات ضد ملانوژنی کارودیلول برای پوست اهمیت بالقوه داردسفید کردنعوامل

کلید واژه ها:کارودیلول؛ مسدود کننده آدرنرژیک؛سنتز ملانین; سیگنالینگ cAMP/CREB

سیستانچقادر به مهار سنتز ملانین است

1. مقدمه

طیف گسترده ای از اختلالات رنگدانه ای پوست تأثیر روانی و اجتماعی قابل توجهی بر بیماران دارد. روش های درمانی مختلف، از جمله عوامل سیستمیک و موضعی و همچنین لیزر درمانی، توسعه یافته اند [1-3]. با این حال، نتایج اغلب رضایت‌بخش نیستند و واکنش‌های نامطلوب، مانند هیپرپیگمانتاسیون پس از التهابی (PIH) و هیپوپیگمانتاسیون، از درمان رایج هستند. علاوه بر این، درمان گران و زمان‌بر است [4-6].

کاتکولامین ها که شامل دوپامین، اپی نفرین و نوراپی نفرین هستند، مولکول های سیگنالی هستند که به عنوان انتقال دهنده های عصبی و هورمون های غدد درون ریز عمل می کنند. در پوست، بیوسنتز و تخریب کاتکول آمین ها در کراتینوسیت های انسانی رخ می دهد، اما سنتز کاتکول آمین ها در ملانوسیت ها تا حدودی متفاوت است [7-9]. کاتکول آمین ها از طریق گیرنده های جفت شده با پروتئین G (GPCRs) عمل می کنند. اتصال کاتکول آمین ها به GPCR باعث فعال شدن آدنیلات سیکلاز داخل سلولی می شود که 30 50-آدنوزین مونوفسفات حلقوی (cAMP) را از ATP سنتز می کند [10]. cAMP پیام رسان ثانویه فعالیت خود را با اتصال به زیرواحد R پروتئین کیناز A (PKA) انجام می دهد که منجر به فسفوریلاسیون پروتئین اتصال دهنده به عنصر پاسخ cAMP (CREB) می شود. GPCR ها با آمین ها و پپتیدهای فعال می شوند، از جمله گلوکاگون، هورمون پاراتیروئید، سکرتین و کلسی تونین [10].

آنتاگونیست های گیرنده آدرنرژیک شامل آنتاگونیست های گیرنده و گیرنده هستند. -آنتاگونیست‌های گیرنده به عوامل غیرانتخابی، 1-انتخابی، و 2-انتخابی طبقه‌بندی می‌شوند، در حالی که آنتاگونیست‌های گیرنده به عنوان غیرانتخابی، 1-انتخابی، و 2-انتخابی طبقه‌بندی می‌شوند. عوامل بر اساس فعالیت های مسدود کننده انتخابی آنها. برخلاف آنتاگونیست‌های گیرنده غیرانتخابی نسل اول، مانند پروپرانولول، تیمولول و نادولول، کارودیلول یک مسدودکننده غیرانتخابی نسل سوم است که با مسدود کردن گیرنده‌های آدرنرژیک (1-ARs) اعمال گشادکننده عروق را نشان می‌دهد. [11]. بنابراین، کارودیلول مسدودکننده غیرانتخابی با فعالیت‌های مسدودکننده ضعیف است [12]. این عمدتا به عنوان یک داروی خوراکی برای کنترل فشار خون بالا و بیماری احتقانی قلب، مشابه سایر مسدود کننده ها استفاده می شود [12]. با این حال، مسدود کننده های نسل سوم فعالیت های رگ زایی، آنتی اکسیدانی، ضد تکثیر، ضد هیپرتروفیک و ضد آپوپتوز را نشان می دهند که نیاز به توضیح بیشتر دارد [11]. در زمینه پوست، به دلیل اثرات آنتی اکسیدانی و ضد التهابی، کارودیلول اغلب در فرمولاسیون های خوراکی برای درمان روزاسه تماتوتلانگژکتاتیک استفاده می شود [13،14]. علاوه بر این، فعالیت آنتی اکسیدانی کارودیلول منجر به جلوگیری از سرطان زایی پوست ناشی از اشعه ماوراء بنفش (UV) می شود و آن را به یک عامل جذاب برای مدیریت بیماری های پوستی مرتبط با UV تبدیل می کند [15-18]. با این حال، اثرات شیمیایی پیشگیری کننده کارودیلولار مستقیماً از طریق AR ها انجام نمی شود. [19] اگرچه مکانیسم دقیق نسبتاً ناشناخته است، مسیر سیگنالینگ cAMP/PKA و PKC-δ می‌تواند با خواص کارودیلول در برابر متاستاز پوستی مرتبط باشد [20].

در مراحل اولیه بررسی پیگمانتاسیون، انسانملانوسیت هامشخص شد که -1-سیگنال AR را پس از القای خارج سلولی با نوراپی نفرین بیان می کند. با این حال، -ARs پس از تحریک با سیگنال دهی آدرنرژیک در یافت نشدملانوسیت ها[8]. برعکس، Cillbro و همکاران. بعداً نشان داد که یک 2-سیگنال عملکردی خاص در ملانوسیت‌های انسانی وجود دارد و 2-تحریک AR منجر به رنگدانه‌سازی از طریق مسیر 2-AR/cAMP [7] می‌شود. بنابراین، نقش کاتکول آمین ها در کنترل رنگدانه پیشنهاد شد و cAMP به عنوان محور اصلی برای کنترل کاتکول آمین های ملانوژنز در نظر گرفته می شود.

ملانوژنز یک فرآیند پیچیده است که شامل مسیرهای متعددی است. تیروزیناز، پروتئین 1 مربوط به تیروزیناز (TRP-1)، و TRP-2 که دوپاکروم توتومراز (DCT) نیز نامیده می‌شود، سه آنزیم اصلی ملانوسیتی هستند که درسنتز ملانین[21]. ملانوژنز توسط عوامل متعددی از جمله هورمون ها، سیتوکین ها، انتقال دهنده های عصبی، فاکتورهای رشد و میکرومولکول ها مهار می شود [21-23].

مهمترین تنظیم کننده مثبت گیرنده ملانوکورتین{0}} و لیگاندهای آن، ملانوکورتین و هورمون آدرنوکورتیکوتروپیک است [23]. با این حال، عوامل متفرقه دخیل در ملانوژنز عبارتند از - اندورفین، استروژن، آندروژن، ویتامین D3 و کاتکول آمین ها [23]. شواهد انباشته نشان می دهد که L-تیروزین و L-DOPA که سوبستراها و واسطه های ملانوژنز هستند، علاوه بر تنظیم کننده سایر عملکردهای سلولی، به عنوان القاء کننده و تنظیم کننده مثبت مسیر ملانوژنیک عمل می کنند [24]. علاوه بر این، جف هاو و همکاران. پیشنهاد کرد که القاء و تنظیم ملانوژنز توسط L-تیروزین با فعال شدن مستقیم گیرنده های آدرنرژیک توسط L-تیروزین انجام می شود، نه توسط محصولات متابولیکی آن مانند کاتکول آمین ها [25]. در مطالعات خود، نوراپی نفرین و اپی نفرین فعالیت تیروزیناز را تحریک کردند، اما اثر القایی آنها برسنتز ملانیننسبتاً کمتر از ال-تیروزین بود [25].

کاتکول آمین ها ممکن است نقش مهمی در سیستم رنگدانه پوست ایفا کنند. با این حال، اثرات آنها بر ملانوژنز با توجه به عملکرد مسدود کننده غیر انتخابی نسل سوم هنوز مورد بررسی قرار نگرفته است. بنابراین، در مطالعه حاضر، ما با هدف بررسی اینکه آیا کارودیلول بر ملانوژنز تأثیر می‌گذارد و مکانیسم‌های اثر آن در انسان بررسی شد.ملانوسیت هاو ex vivo پوست انسان و استفاده بالقوه آن به عنوان یکسفید کردنتولید - محصول.

مهار تشکیل ملانین باگیاه سیستانچ

2. نتایج

2.1. کارودیلول ملانوژنز را سرکوب می کند

سمیت سلولی کارودیلول در برابر انسان عادیملانوسیت ها(NHMs) و سلول‌های Mel-ab با روش تکثیر سلولی WST ارزیابی شدند. غلظت کارودیلول 10 میکرومولار شروع به نشان دادن سمیت سلولی در برابر سلول‌های NHM و Mel-ab کرد (شکل 1A, B). بنابراین، در ارزیابی‌های بیشتر، ما از 8 میکرومولار کارودیلول استفاده کردیم که برای NHMها سیتوتوکسیک نیست.

درمان با کارودیلول محتوای ملانین را به روشی وابسته به دوز کاهش داد، بدون اینکه بر زنده ماندن NHM ها تأثیر بگذارد (شکل 1C). محتوای ملانین پس از 96 هوف 8 میکرومولار کارودیلول به میزان 28.36 درصد کاهش یافت (شکل 1C). افزودن 100 میلی گرم بر میلی لیتر آربوتین، محتوای ملانین را به میزان کمتری نسبت به کارودیلول کاهش داد (شکل 1C). پس از 4 روز درمان با کارودیلول، محتوای ملان به روشی وابسته به زمان کاهش یافت (شکل 1D). با این حال، درمان با فورسکولین (FSK) به مدت 4 روز پس از پیش تیمار با کارودیلول باعث افزایش محتوای ملانین شد (شکل 1E). مسیر /PKA/CREB (شکل 1F).

2.2. کارودیلول بیان MITF و ژن های هدف آن را مهار می کند و سطح فسفو-CREB NHMs را کاهش می دهد.

از آنجا که کارودیلول تجمع ملانین را کاهش داد، فعالیت تیروزیناز سلولی را بررسی کردیم. درمان با کارودیلول فعالیت تیروزیناز سلولی را به صورت وابسته به دوز در NHMها کاهش داد (شکل 2A). فعالیت تیروزیناز پس از 96 ساعت درمان 8 میکرومولار کارودیلول به میزان 28.48 درصد کاهش یافت (شکل 2A). ما بعداً تعیین کردیم که آیا کارودیلول بر بیان MITF تأثیر می‌گذارد، که نقش مهمی در تنظیم ژن‌های تیروزیناز و پایین دستی ملانوژن دارد. درمان FSK سطوح cAMP داخل سلولی را افزایش داد و اثرات ضد ملانوژنی کارودیلول را معکوس کرد. کارودیلول به طور قابل توجهی سطوح پروتئین MITF، یک فاکتور رونویسی مرکزی ملانوژنز را در 72 ساعت کاهش داد (شکل 2B). علاوه بر این، بیان ژن‌های هدف آن، مانند تیروزیناز و TRP{10}}، پس از درمان کارودیلول کاهش یافت (شکل 2B). این نتایج نشان می‌دهد که کارودیلول با تنظیم سیگنال‌های MITF، ملانوژنز را مهار می‌کند.

در مرحله بعد، ما مسیرهای سیگنال دهی درون سلولی ملانوژنز را که رونویسی MITF را تنظیم می کند، با اندازه گیری سطوح بیان فسفو-CREB و فسفو-ERK بررسی کردیم. سطوح فسفو-ERK در طول زمان پس از درمان کارودیلول تغییر نکرد. با این حال، سطوح فسفو-CREB کاهش یافت (شکل 2B). مطابق با مشاهدات قبلی، نتایج ما نشان داد که کارودیلولین با مهار مسیر سیگنالینگ cAMP/PKA/CREB، ملانوژنز را مهار می‌کند. علاوه بر این، درمان FSK با افزایش سطوح cAMP، اثر ضد ملانوژنی کارودیلول را معکوس کرد.

2.3. شاخص ملانین و رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمی در کشت پوست انسان Ex Vivo

تراکم ملانوسیت اپیدرمی و شاخص ملانین در مقاطع بافتی کشت پوست انسان در شرایط in vivo به ترتیب با رنگ‌آمیزی Melan-A و Fontana-Masson شناسایی شد. کارودیلول بر تعداد Melan-A ( پلاس ) تأثیری نداشتملانوسیت هادر نمونه تیمار شده با کارودیلول به علاوه اشعه UVR (UVR) در مقایسه با نمونه تیمار شده با UVR به تنهایی (شکل 3A). ملانوسیت های HMB45(+) ممکن است نشان دهند که فعالیت ملانوسیتی با درمان UVR افزایش یافته است و به دنبال درمان کارودیلول به طور معکوس تنظیم شده است (شکل 3B). با این حال، محتوای ملانین در نمونه‌های تیمار شده با کارودیلول به علاوه UVR در مقایسه با نمونه‌های تیمار شده با UVR به‌طور قابل توجهی کاهش یافت (شکل 3C). برای محاسبه شاخص ملانین، کسری از ناحیه رنگ‌آمیزی فونتانا- ماسون در کل مساحت بین نمونه‌ای که در معرض UVR قرار گرفته و کارودیلول به اضافه UVR محاسبه و مقایسه شد (شکل 3D). لیزات سلولی هر نمونه توسط وسترن بلوتاسی آنالیز شد، که نشان داد تیروزیناز، TRP1 و DCT توسط UVR افزایش یافته و توسط تیمار کارودیلول کاهش یافته است (شکل 3E). در نتیجه، کارودیلول به طور قابل توجهی شاخص ملانین و پروتئین های مرتبط با ملانوژنز را کاهش داد و اثر ضد ملانوژنی خود را بر روی پوست انسان تحت درمان با UVR نشان داد.

3. بحث

ملانین رنگدانه ای است که مسئول رنگ پوست و مو است و توسط ملانوزوم ها سنتز می شودملانوسیت ها. اگرچه ملانین اپیدرمی نقش محافظتی مهمی در برابر اشعه ماوراء بنفش ایفا می‌کند، تولید و تجمع بیش از حد ملانین در پوست باعث اختلالات پرپیگمانتای پوستی مشکل‌ساز می‌شود، مانند PIH، بدرنگی مرتبط با پیری، ملاسما و لنتی‌ژین‌های خورشیدی [18،26]. بنابراین، مهار ملانوژنز کانون توجه درمان‌های دارویی و آرایشی برای زیبایی و سلامت پوست بوده است. تلاش های قابل توجهی برای شناسایی عوامل ضد رنگدانه جدید و موثر صورت گرفته است. با این حال، مکانیسم‌های ضد ملانوژنز عوامل خاص در حال حاضر نامشخص هستند و عموماً در سلول‌های موش ارزیابی شده‌اند، که نتایجی را به دست می‌دهد که همیشه با نتایج آزمایش‌های پوست انسان همخوانی ندارد [27،28]. علاوه بر این، از آنجایی که ملانوژنز ملانوسیت ها به شدت توسط کراتینوسیت ها و سایر سلول های همسایه تنظیم می شود، سلول های انسانی هم کشت شده یا پوست انسان در شرایط in vivo تنظیمات آزمایشی قابل اطمینان تری برای اکتشاف موثر هستند.سفید کردنعوامل [29]. اکثر عوامل سفید کننده پوست، چه به طور طبیعی یا شیمیایی مشتق شده باشند، ممکن است باعث ایجاد سمیت یا تحریک پوست شوند، که تا حدی می توان با استفاده از سنجش زنده ماندن سلولی در شرایط آزمایشگاهی با ملانوسیت ها پیش بینی کرد. در مطالعه ما، کارودیلول در صورت استفاده در دوزهای متوسط ​​سمیت سلولی نشان نداد.

cistanche bienfaits

کرم های موضعی هیدروکینون می توانند منجر به اختلالات هیپوپیگمانتاسیون ناخواسته و مسمومیت پوستی شوند [30-32]. علاوه بر این، برخی ازسفید کردنلوازم آرایشی با ایجاد هیپوپیگمانتاسیون از طریق تخریب پروتئین‌های تیروزیناز، پیامدهای فاجعه‌باری دارند [33-35]. عوامل سفید کننده را می توان در دوزهای بالاتر بسته به کاربر مورد استفاده قرار داد تا سفید شدن ضایعات هیپرپیگمانتری را به حداکثر برساند. بنابراین، تلاش ها برای کشف عوامل سفید کننده پوست ایمن و سالم به طور مداوم در دست بررسی است.

بنابراین، مطالعه حاضر برای انجام در سلول های طبیعی انسان و پوست ex vivohuman طراحی شده است. علاوه بر این، بر اساس مکانیسم عمل سیگنال دهی G توسط کاتکول آمین ها، که سطح cAMP سلولی را افزایش می دهد، ما معتقد بودیم که یک مسدود کننده آدرنرژیک می تواند سطوح cAMP را کاهش دهد و مسیر سیگنال دهی UVR/cAMP/CREB را مهار کند، که مکانیسم اصلی برای هیپرپیگمانتاسیون پوست ناشی از UV است. [36،37]. بنابراین، ما فرض کردیم که مسدودکننده‌های آدرنرژیک که سطح cAMP را کاهش می‌دهند، کاهش می‌یابدسنتز ملانین.

علاوه بر این، برای توسعه ایمنسفید کردنعوامل، مکانیسم های قابل اعتماد و قابل تکرار ضد ملانوژنز باید به طور موازی دنبال شوند. مهمترین محرک از نظر فیزیولوژیکی UV و در میان سیگنال دهی UVR به اپیدرم استملانوسیت ها، محور CREB ثابت ترین مسیر برای تنظیم ملانوژنز در اپیدرم انسان است [29]. قرار گرفتن در معرض اشعه ماوراء بنفش به طور متوالی تولید cAMP، PKA و فاکتور رونویسی CREB را فعال می کند، که به نوبه خود، بیان ژن های ملانوژنیک هدف MITF و پایین دستی را القا می کند [38،39]. علاوه بر فسفوریلاسیون CREB توسط PKA، مطالعات اخیر نشان داده‌اند که به‌کارگیری هم‌فعال‌کننده رونویسی تنظیم‌شده با CREB (CRTC) 3 به مجتمع رونویسی CREB برای MITF تحریک‌شده با cAMP نیز مورد نیاز است. MITF اساسی ترین نقش را در تنظیم مقررات ایفا می کندسنتز ملانینو رونویسی حاصل از آنزیم های ملانوژنیک [26،40،41]. در طی این فرآیند سیگنال دهی درون سلولی، ملانوژنز توسط یک آنزیم کلیدی، تیروزیناز، و پروتئین های آنزیمی اضافی، مانند TRP{3}} و DCT [1-4] تنظیم می شود. در مطالعه حاضر، کارودیلول به طور موثر فسفوریلاسیون CREB را کاهش داد. نشان می دهد که پروتئین های MITF و تیروزیناز را با مهار رونویسی MITF کاهش می دهد (شکل 4). با توجه به اینکه تنظیم ژن mRNA ژن MITF به طور پیچیده توسط سایر مولکول‌ها و فعال‌کننده‌های سیگنال درون سلولی کنترل و نجات می‌یابد، تنظیم سطح رونویسی MITF یک استراتژی امیدوارکننده برای بررسی مواد سفیدکننده پوست سالم است زیرا عملکرد بقای MITF حفظ شده و نجات می‌یابد [1،38،40]. در واقع، وقتی رونویسی MITF ناشی از FSK را بررسی کردیم، mRNA MITF منحنی پاسخ اوج خود را برای ملانوژنز و بقای سلولی برای هموستاز سلولی دارد. عملکردهای بیولوژیکیملانوسیت هابه نظر می‌رسد که ذاتاً توسط سیگنال‌های بازخورد دیگر در ملانوسیت‌های انسانی تنظیم می‌شود. علاوه بر این، کارودیلول دارای خطر کمتری برای عوارض جانبی هیپوپیگمانتاسیون است، زیرا فعالیت تیروزیناز سلولی را در طول زمان، به جای ناگهانی، کاهش می‌دهد.

کاتکولامین ها شامل دوپامین، اپی نفرین و نوراپی نفرین هستند و از تیروزین رژیم غذایی با عمل آنزیم ها سنتز می شوند [42]. بیوسنتز و تخریب کاتکول آمین ها در طیف وسیعی از سلول ها از جمله نورون های اعصاب سمپاتیک و مغز، سلول های آدرنومدولاری، سلول های اندوتلیال، نوتروفیل ها و سلول های تک هسته ای رخ می دهد [43-45]. در پوست انسان، کاتکول آمین سنتز در کراتینوسیت ها اتفاق می افتد. برعکس، ملانوسیت ها همچنین mRNA و آنزیم هایی را برای سنتز اتوکرین نوراپی نفرین بیان می کنند اما اپی نفرین را نه [7،42]. در انسانملانوسیت ها، -1-AR ممکن است در واکنش به نوراپی نفرین مهم باشد، اماسنتز ملانینهمچنین تحت تأثیر عملکردی 2-ARsignaling [7,8] قرار دارد. جالب توجه است که بیماران مبتلا به ویتیلیگو دارای تراکم 2-AR در کراتینوسیت‌ها [46] هستند. افزایش سطح نوراپی نفرین در ادرار و پلاسمای بیماران مبتلا به ویتیلیگو غیر سگمنتال مشاهده می‌شود که به این معنی است که متابولیسم کاتکول آمین ممکن است با ایجاد و پیشرفت ویتیلیگو مرتبط باشد. [47]. علاوه بر این، علاوه بر انتقال دهنده های عصبی استرس کلاسیک، ملانوسیت ها نوروپپتیدها و هورمون هایی مانند فاکتور آزاد کننده کورتیکوتروپین و پروپیوملانوکورتین تولید می کنند. بنابراین، عملکرد کاتکول آمین ها و عملکرد ملانوسیتی در انواع مسیرهای پیچیده ارتباط نزدیکی دارند. علاوه بر این، کارودیلول می تواند با واکنش های شیمیایی در مسیر ملانوژنیک تداخل داشته باشد و این احتمال باید بیشتر مورد مطالعه قرار گیرد. کارودیلول ممکن است دارای مزایایی باشد زیرا دارای اثرات ضد التهابی همزمان است، زیرا اغلب اختلالات هیپرپیگمانتری PIH از نظر بالینی یا تحت بالینی در بیماران دارای پوست تیره است. از آنجایی که نفوذ کارودیلول از طریق پوست هم در شرایط in vitro و هم ex vivo مورد مطالعه قرار گرفته است، کارودیلول را می توان به عنوان یک ماده موضعی توسعه داد.سفید کردنعامل در آینده [49-51].

تجویز سیستمیک کارودیلول می تواند باعث برادی کاردی، سرگیجه، افت فشار خون، سردرد و سبکی سر شود. استفاده موضعی از کارودیلول معمولاً علائم سیستمیک ایجاد نمی کند، با این حال، هنگام استفاده از آن در بیماران دارای موانع پوستی معیوب، مانند مبتلایان به درماتیت آتوپیک، باید به این علائم توجه دقیق داشته باشیم. علاوه بر این، اگزما، خارش و فوران لیکنوئید در موارد نادر هنگام مصرف کارودیلول گزارش می شود. این عوارض جانبی پوستی و همچنین درماتیت تماسی باید در هنگام استفاده از کارودیلول به صورت موضعی در نظر گرفته شود.سفید کردنعامل.

در نتیجه، ما نشان دادیم که کارودیلول به طور موثر ملانوژنز را در انسان کاهش می دهدملانوسیت هاو پوست انسان ex vivo با مهار مسیر cAMP/CREB/MITF، که استفاده بالقوه آن را به عنوان یک عامل سفید کننده موثر نشان می دهد. تحقیقات بیشتر در مورد دخالت عملکردی گیرنده آدرنرژیک توسط کارودیلول در ملانوسیت های انسانی باید دنبال شود.

4. مواد و روش ها

4.1. مواد

کارودیلول، 3،4-دی هیدروکسی ال فنیل آلانین (L-DOPA)، توکسین وبا (CT) و 12-اوترادکانولفوربول-13-استات (TPA) از شرکت سیگما آلدریچ خریداری شد. (سنت لوئیس، MO، ایالات متحده آمریکا). محیط Eagle اصلاح شده Dulbecco (DMEM) و سالین بافر فسفات Dulbecco از WelGENE (Daegu، کره) خریداری شد. سرم جنین گاوی (FBS)، آنتی بیوتیک-ضد میکروب و تریپسین-EDTA از Gibco (Grand Island، نیویورک، ایالات متحده آمریکا) خریداری شد. Medium 254 (CascadeBiologics, Portland, OR, USA) و FSK ([3R-(3 ,4a ,5 ,6 ,6a ,10 ,10a ,10b )]-5-(acetyloxy)-3-ethenyldodecahydro{ {24}},10,10b-trihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-1H-naphtho[2,1-b]pyran-1-one از Tocris Bioscience (بریستول، انگلستان) خریداری شدند.

4.2. خطوط سلولی و کشت سلولی

NHM های اولیه به دست آمده از Invitrogen (Carlsbad، CA، USA) در محیط 254 (Thermo Fisher، Waltham، MA، USA) همراه با مکمل رشد ملانوسیت انسانی (Thermo Fisher) نگهداری شدند. سلول‌های Mel-ab، یک رده سلولی ملانوسیتی به‌طور خودبه‌خود جاودانه‌شده از موش، از بانک رده سلولی کره (KCLB، سئول، کره) به‌دست آمد و در DMEM همراه با 10 درصد FBS، پنی‌سیلین-استرپتومایسین، 100 نانومولار TPAM، و nM11NPAM نگهداری شد. سی تی. تمام سلول ها به طور معمول در دمای 37 درجه سانتیگراد در یک محیط مرطوب با 5 درصد CO2 نگهداری می شدند.

4.3. آنتی بادی ها و وسترن بلات

سلول ها یک بار با PBS سرد شسته شدند و در بافر لیز پروتئین (1 درصد SDS در 10 mMTris و 5 میلی مولار EDTA، pH 7.4) لیز شدند، و سپس در دمای 98 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه انکوباسیون شدند. نمونه‌های پروتئین توسط ژل الکتروفورز 8 درصدی SDS-پلی آکریل آمید جدا شدند، بر روی غشاهای نیتروسلولزی (GE Healthcare Life Sciences، شیکاگو، IL، ایالات متحده آمریکا)، و سپس با نمک بافر تریس حاوی 0.5 درصد Tween 20 و 5 درصد BSA مسدود شدند. تحت بلات ایمنی قرار می گیرند. آنتی‌بادی‌های تیروزیناز و TRP{14} از بیوتکنولوژی سانتا کروز (دالاس، تگزاس، ایالات متحده آمریکا) خریداری شد و MITF از Abcam (کمبریج، انگلستان) خریداری شد. توبولین (جنتکس، هلند، MI، ایالات متحده آمریکا) به عنوان کنترل بارگذاری داخلی استفاده شد.

4.4. محتوای ملانین

اثر سیتوتوکسیک کارودیلول با استفاده از کیت سنجش زنده ماندن سلول Ez-Cytox (Dogen-Bio Co., Ltd., Seoul, Korea) مطابق با دستورالعمل های سازنده ارزیابی شد. سلول های Mel-Ab و NHM ها در صفحات شش چاهی کاشته شدند. در چگالی 6 × 105 و 3 × 105 سلول / چاه، به ترتیب. سلول ها با کارودیلول، همانطور که در شکل ها نشان داده شده است، به مدت 3 یا 5 روز (d) تحت درمان قرار گرفتند. سلول ها در 550 میکرولیتر NaOH 1 N در دمای 100 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه حل شدند و به مدت 5 دقیقه با سرعت 13، {16}} دور در دقیقه سانتریفیوژ شدند. میزان جذب مواد رویی 405 نانومتر توسط دستگاه میکروپلیت خوان اندازه گیری شد. محتوای ملانین داخل سلولی به عنوان درصد نسبت به کنترل درمان نشده سلول ها ارائه شد. آربوتین (100 میلی گرم در میلی لیتر) به عنوان کنترل مثبت استفاده شد.

4.5. فعالیت تیروزیناز سلولی

فعالیت تیروزیناز با اندازه‌گیری سرعت تشکیل دوپاکروم L-DOPA مورد ارزیابی قرار گرفت. پس از انکوباسیون با کارودیلول، سلول‌ها در PBS سرد یخ شسته شدند و در بافر لیز تیروزیناز (بافر فسفات، pH 8/6، حاوی 1 درصد تریتون X{) لیز شدند. {5}}) با چرخه‌های انجماد/ذوب مکرر. لیزها با سانتریفیوژ در 15، {7}} دور در دقیقه در دمای 4◦C به مدت 10 دقیقه شفاف شدند. پس از تعیین کمیت سطح پروتئین لیز و تنظیم غلظت پروتئین با بافر لیز، 90 میکرولیتر مایع رویی مخلوط با 10 میکرولیتر L-DOPA 10 میلی‌مولار در بافر لیز تیروزیناز در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه شد. فعالیت تیروزیناز سلولی با خواندن اندازه‌گیری شد. 475 نانومتر با استفاده از میکروپلیتریدر هر 10 دقیقه به مدت حداقل 1 ساعت. آربوتین (100 میلی گرم در میلی لیتر) به عنوان یک عامل کنترل مثبت استفاده شد.

گیاه سیستانچ

4.6. آنالیز ایمونوهیستوشیمی

بافت‌های پوست انسان جاسازی‌شده با پارافین به بخش‌هایی با ضخامت 6- میکرومتر بریده شد و با Melan-A (نووکاسترا، نیوکاسل، انگلستان)، کیت‌های Fontana-Masson (آزمایشگاه‌های ID، لندن، ON، کانادا)، و HMB45 (سانتا کلارا) رنگ‌آمیزی شدند. ، کالیفرنیا، ایالات متحده آمریکا)، طبق دستورالعمل های سازنده. شاخص ملانین با اندازه‌گیری درصد سطح رنگ‌آمیزی به کل سطح بافت با استفاده از نرم‌افزار ImageJ 1.52 (موسسه ملی بهداشت، Bethesda، MD، ایالات متحده آمریکا) تعیین شد.

4.7. تحلیل آماری

داده ها به عنوان میانگین ± خطای استاندارد میانگین (SEM) ارائه می شوند و اهمیت آماری با استفاده از آزمون t استودنت جفت نشده با استفاده از نرم افزار GraphPad Prism5 (San Diego, CA, USA) تعیین شد. در این مطالعه، p < 0.="" به="">

منابع

1. Gillbro, JM; اولسون، ام‌جی ملانوژنز و مکانیسم‌های روشن‌کننده پوست - روش‌های موجود و جدید. بین المللی J. Cosmet. علمی 2011، 33، 210-221. [CrossRef] [PubMed]

2. لی، YJ; شین، اچ جی; نه، TK; چوی، KH; چانگ، درمان SE ملاسما و هایپرپیگمانتاسیون پس از التهاب با لیزر الکساندرایت پیکوثانیه 755- نانومتری در بیماران آسیایی. ان درماتول. 2017، 29779–781. [CrossRef] [PubMed]

3. لی، YJ; پارک، جی اچ. لی، دی. Lee, JH اکتسابی دیپیگمانتاسیون دوطرفه در صورت و گردن: رویکردهای بالینی مناسب. J. کره پزشکی. علمی 2016، 31، 2042–2050. [CrossRef] [PubMed]

4. کانگ، اچ. Na، JI; لی، جی اچ. روه، ام آر؛ کو، جی. چانگ، SE هیپرپیگمانتاسیون پس التهابی مرتبط با درمان لنتیژین های خورشیدی با استفاده از لیزر Q-Switched 532-nm Nd: YAG: یک بررسی چند مرکزی. پوست. درمان شود. 2017، 28، 447-451. [CrossRef] [PubMed]

5. کاتو، اچ. اراکی، ج. اتو، اچ. دوی، ک. هیرای، ر. کونو، اس. هیگاشینو، تی. یوشیمورا، ک. یک مطالعه کنترل شده تصادفی آینده نگر از ترانگزامیک اسید خوراکی برای جلوگیری از هیپرپیگمانتاسیون پس از التهاب پس از لیزر یاقوت کیو سوئیچ شده. درماتول. سرگ. 2011، 37، 605-610. [CrossRef] [PubMed]

6. تیلور، CR; Anderson, RR درمان ناکارآمد ملاسما مقاوم و هیپرپیگمانتاسیون پس از التهاب با لیزر یاقوت Q-switched. جی درماتول. سرگ. اونکول. 1994، 20، 592-597. [CrossRef]

7. Gillbro, JM; مارلز، LK; هیبرتس، NA; بیوسنتز Schallreuter، KU Autocrine کاتکول آمین و سیگنال گیرنده بتا آدرنرژیک باعث افزایش رنگدانه در ملانوسیت های اپیدرمی انسان می شود. ج. تحقیق. Dermatol.2004, 123, 346-353. [CrossRef]

8. Schallreuter, KU; کورنر، سی. Pittelkow، MR; سوانسون، NN; گاردنر، ML القای سیستم انتقال سیگنال گیرنده آدرنرژیک آلفا-1- در ملانوسیت های انسانی. انقضا درماتول. 1996، 5، 20-23. [CrossRef]

9. سیوامانی، ر.ک. شی، بی. گریفیتس، ای. Vu، SM; Lev-Tov، HA; داهل، اس. چیگبرو، ام. لا، تی دی; Mashburn, C.;Peavy, TR; و همکاران زخم حاد مسیرهای سیگنالینگ بتا آدرنرژیک و کاتکول آمین را در کراتینوسیت ها تغییر می دهد. ج. تحقیق. درماتول. 2014، 134، 2258-2266. [CrossRef]

10. Emery، AC Catecholamine گیرنده: نمونه های اولیه برای کشف دارو بر اساس GPCR. Adv. داروسازی 2013، 68335-356.

11. Do Vale, GT; Ceron، CS; گونزاگا، NA; Simplicio، JA; Padovan، JC سه نسل از بتا بلوکرها: تاریخچه، تفاوت طبقاتی، و کاربرد بالینی. کر. فشار خون بالا Rev. 2019, 15, 22–31. [PubMed]

12. مک تاویش، دی. کامپولی-ریچاردز، دی. Sorkin، EM Carvedilol: مروری بر خواص فارماکودینامیک و فارماکوکینتیک و اثربخشی درمانی آن. مواد مخدر 1993، 45، 232-258. [CrossRef] [PubMed]

13. Hsu, CC; لی، JY برافروختگی صورت و اریتم مداوم روزاسه به طور موثر توسط کارودیلول، یک مسدودکننده بتا آدرنرژیک غیرانتخابی درمان می‌شود. مربا. آکادمی درماتول. 2012، 67، 491-493. [CrossRef][PubMed]

14. پیتشکه، ک. شالر، ام. مدیریت طولانی مدت گرگرفتگی مشخص صورت و اریتم آفروزاسه مداوم با درمان با کارودیلول. J. درماتولوژی. درمان شود. 2018، 29، 310–313. [CrossRef] [PubMed]

15. چانگ، ا. یونگ، اس. تاکار، ا. هوانگ، KM; لیو، ام.ام. کاناساتگا، آر اس؛ پارسا، سی. اورلاندو، آر.؛ جکسون، EK; آندرسن، بی تی; و همکاران پیشگیری از سرطان زایی پوست توسط بتا بلوکر کارودیلول. CancerPrev. Res. 2015، 8، 27-36. [CrossRef] [PubMed]

16. چن، م. لیانگ، اس. شهید، ع. آندرسن، بی تی; Huang, Y. بتا بلاکر کارودیلول از آسیب سلول های اپیدرمی موش و پوست بازسازی شده انسان با واسطه اشعه ماوراء بنفش جلوگیری کرد. بین المللی J.Mol. علمی 2020، 21، 798. [CrossRef] [PubMed]

17. هوانگ، KM; لیانگ، اس. یونگ، اس. اویمهونلان، ای. کلیولند، KH; پارسا، سی. اورلاندو، آر. Meyskens, FL, Jr.;Andresen, BT; Huang, Y. کارودیلول که به صورت موضعی استفاده می شود سرطان زایی پوست ناشی از اشعه فرابنفش خورشیدی را کاهش می دهد. سرطان قبلی Res. 2017، 10، 598-606. [CrossRef]

18. برنر، م. شنوایی، VJ نقش محافظتی ملانین در برابر آسیب UV در پوست انسان. Photochem.Photobiol. 2008، 84، 539-549.

19. کلیولند، KH; لیانگ، اس. چانگ، آ. هوانگ، KM; چن، اس. گوا، ال. هوانگ، ی. Andresen، BT Carvedilolin از طریق مکانیسمی مستقل از گیرنده های آدرنرژیک با واسطه EGF تشکیل کلنی JB6 P را مهار می کند. PLoS ONE 2019, 14, e0217038. [CrossRef]

20. دزونگ، جی. ژونگ بینگ، ام. Qinye، F. Zhigang، Y. Carvedilol مهاجرت و تهاجم به سلول‌های بدخیم پستان را با غیرفعال کردن Src شامل مسیر سیگنالینگ cAMP/PKA و PKCdelta سرکوب می‌کند. J. Cancer Res. Ther.2014, 10, 998-1003.

21. رژپکا، ز. بوسمن، ای. ببروک، ا. Wrzesniok، D. از تیروزین به ملانین: مسیرهای سیگنالینگ و عوامل تنظیم کننده ملانوژنز. Postepy Hig. پزشکی Dosw. آنلاین 2016, 70, 695–708. [CrossRef]

22. کیم، ی. چو، جی. اوه، SW; کانگ، م. لی، SE; یونگ، ای. پارک، YS; لی، جی. آدیپونکتین گلوبولار به عنوان سیگنال ملانوژنیک در ملانوسیت های اپیدرمی انسان عمل می کند. برادر جی درماتول. 2018، 179، 689–701. [CrossRef][PubMed]

23. اسلومینسکی، ا. توبین، دی جی; شیبهارا، س. Wortsman، J. رنگدانه ملانین در پوست پستانداران و تنظیم هورمونی آن. فیزیول. Rev. 2004, 84, 1155-1228. [PubMed]

24. اسلومینسکی، ا. Zmijewski، MA; Pawelek، J. L-تیروزین، و L-دی هیدروکسی فنیل آلانین به عنوان تنظیم کننده های هورمون مانند عملکرد ملانوسیت. پیگمنت سل ملانوم Res. 2012، 25، 14-27. [CrossRef] [PubMed]

25. هاو، ج. کوستانتینو، آر. Slominski، A. در مورد مکانیسم احتمالی القا و تنظیم ملانوژنز توسط L-تیروزین. Acta Derm Venereol. 1991، 71، 150-152.

26. D'Mello، SA; Finlay، GJ; باگولی، ق.م. عسکریان امیری، مسیرهای سیگنالینگ ME در ملانوژنز. بین المللی J.Mol. علمی 2016، 17، 1144. [CrossRef]

27. یونگ، ج.ا. کیم، بی جی؛ کیم، ام اس؛ شما، HJ; یون، ES; دانگ، ES؛ پارک، SH; Kim, DW اثر محافظتی سم بوتولینوم در برابر رنگدانه های پوستی ناشی از اشعه ماوراء بنفش. پلاست. بازسازی مجدد سرگ. 2019، 144، 347–356.[CrossRef]

28. Jeong، YM; اوه، WK; Tran، TL; کیم، WK; سونگ، SH; بائه، ک. لی، اس. Sung، JH آگلیکون Rh4 سنتز ملانین را در سلول های ملانوما B16 مهار می کند: درگیری احتمالی مسیر پروتئین کیناز A. Biosci. بیوتکنول. بیوشیمی. 2013، 77، 119-125. [CrossRef]

29. کیم، YH; کیم، دی. هنگ، آر. کیم، جی اچ. یو، اچ. کیم، جی. کیم، آی. کانگ، SW; چانگ، SE; آهنگ، پتانسیل درمانی روتلرین برای اختلالات هیپرپیگمانتری پوست با مهار فعالیت رونویسی کواکتیواتورهای رونویسی تنظیم شده توسط CREB. ج. تحقیق. درماتول. 2019، 139، 2359–2367.e2.[CrossRef]

30. داس، ا. قوش، ع. Kumar, P. Leukoderma شیمیایی ناشی از هیدروکینون: یک پدیده غیر معمول. جی.درماتول هندی. Venereol. لپرول. 2019, 85, 567. [CrossRef]

31. جو، ت. Hantash، BM Hydroquinone depigmentation: گزارش مورد و بررسی ادبیات. درماتیت 2014، 25، e1-e5. [CrossRef]

32. کرسی، ص. استیونسون، سی‌جی ویتیلیگو و مواجهه شغلی با هیدروکینون از دستگاه‌های خودعکاسی. تماس با Dermat. 1981، 7، 285-287. [CrossRef] [PubMed]

33. ساساکی، م. کوندو، م. ساتو، ک. امدا، م. کاواباتا، ک. تاکاهاشی، ی. سوزوکی، تی. Matsunaga، K.;Inoue، S. Rhododendron، یک ترکیب فنلی القا کننده رنگدانه، سمیت سلولی ملانوسیت را از طریق مکانیسم وابسته به تیروزیناز اعمال می کند. پیگمنت سل ملانوم Res. 2014، 27، 754-763. [CrossRef] [PubMed]

34. یوشیکاوا، م. سومیکاوا، ی. هیدا، تی. کامیا، ت. کاس، ک. ایشی اوسای، ی. کاتو، جی. کان، ی. کامیا، س.؛ ساتو، ی. و همکاران تجزیه و تحلیل بالینی و اپیدمیولوژیک در 149 مورد لوکودرمی ناشی از رودودندرون. درماتول. 2017، 44، 582-587. [CrossRef] [PubMed]

35. هریس، JE ویتیلیگو ناشی از مواد شیمیایی. درماتول. کلین 2017، 35، 151-161. [CrossRef] [PubMed]

36. لی شا، جی. یی-هه، سی. نا-دان، ز. تنگ، ز. Yue-Chun, L. اثرات درمان کارودیلول بر بیان پروتئین متصل شونده به عنصر cAMPresponse قلبی و فسفوریلاسیون در میوکاردیت حاد ویروس کوکساکی B3-. BMC قلب و عروق. بی نظمی 2013، 13، 100. [CrossRef] [PubMed]

37. ژانگ، اف. پلی‌مورفیسم‌های Steinberg، SF S49G و R389G گیرنده بتا-آدرنرژیک که از طریق مسیرهای cAMP-PKA و ERK پیام‌رسانی می‌کنند. فیزیول. ژنوم 2013، 45، 1186-1192. [CrossRef]

38. لی، AY; Noh, M. تنظیم ملانوژنز اپیدرمی از طریق مسیرهای سیگنالینگ cAMP و/یا PKC: بینش برای توسعه عوامل هیپوپیگمانته. قوس. فارم. Res. 2013، 36، 792-801. [CrossRef]

39. گارسیا-بورون، جی سی. عبدالملک، ز. Jimenez-Cervantes، C. MC1R، مسیر cAMP، و پاسخ به UV خورشیدی: گسترش افق فراتر از رنگدانه. پیگمنت سل ملانوم Res. 2014، 27، 699-720.[CrossRef]

40. لین، سی بی; بابیارز، ل. لیبل، اف. رویدون پرایس، ای. کیزولیس، م. Gendimenico، GJ; فیشر، دی. Seiberg, M. Modulation of microphthalmia-associated رونویسی بیان ژن فاکتور رونویسی تغییر رنگدانه پوست. تحقیق کنید. درماتول. 2002، 119، 1330-1340. [CrossRef]

41. کیم، جی اچ. هنگ، آر. کیم، YH; یو، اچ. کانگ، SW; چانگ، SE; آهنگ، Y. JNK با تداخل با بیان وابسته به MITF 3-رونویسی تنظیم‌شده توسط CREB، ملانوژنز را سرکوب می‌کند. Theranostics2020، 10، 4017-4029. [CrossRef] [PubMed]

42. ریوس، م. هابکر، بی. ساسائوکا، تی. آیزنهوفر، جی. تیان، اچ. لندیس، اس. چیکارایشی، دی. Roffler-Tarlov، S.Catecholamine سنتز توسط تیروزیناز در غیاب تیروزین هیدروکسیلاز واسطه. J. Neurosci. 1999،19، 3519-3526. [CrossRef] [PubMed]

43. کوسنتینو، م. مارینو، اف. بومبلی، آر. فراری، م. لچینی، اس. فریگو، G. کاتکول آمین سنتز درون زا، متابولیسم، ذخیره و جذب در نوتروفیل های انسانی. زندگی علمی. 1999، 64، 975-981. [CrossRef]

44. مارینو، اف. کوسنتینو، ام. بومبلی، آر. فراری، م. لچینی، اس. Frigo، G. کاتکول آمین سنتز درون زا، ذخیره سازی متابولیسم و ​​جذب در سلول های تک هسته ای خون محیطی انسان. انقضا Hematol.1999, 27, 489-495. [CrossRef]

45. سورنتو، دی. سانتولی، جی. دل جودیس، سی. آناستازیو، آ. تریمارکو، بی. سلول های اندوتلیال Iaccarino، G. قادر به سنتز و انتشار کاتکول آمین ها در شرایط آزمایشگاهی و درون تنی هستند. Hypertension 2012, 60, 129-136. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​کوچی، ML; فراتینی، پ. سانتاگوستینو، جی. پردا، اس. Orecchia، G. Catecholamines در ادرار ویتیلیگو غیرسگمنتال به ویژه در مرحله فعال آن افزایش می یابد. پیگمنت سل Res. 2003، 16، 111-116. [CrossRef][PubMed]

47. سالزر، کارشناسی; Schallreuter, KU بررسی ساختار شخصیت در بیماران مبتلا به ویتیلیگو و ارتباط احتمالی با اختلال متابولیسم کاتکول آمین. پوست 1995، 190، 109-115. [CrossRef][PubMed]

48. Slominski، A. فعالیت نورواندوکرین ملانوسیت. انقضا درماتول. 2009، 18، 760-763. [CrossRef]

49. گانو، ر. ویشنو، YV; کیشان، وی. Rao، YM نفوذ آزمایشگاهی کارودیلول از طریق پوست خوک: اثر وسایل نقلیه و تقویت کننده های نفوذ. PDA J. Pharm. علمی تکنولوژی 2008، 62، 256-263.

50. کشیرساگر، س.ج. Bhalekar، MR; موهاپاترا، SK توسعه و ارزیابی سیستم دارورسانی ترانسدرمال بارگذاری شده با کارودیلول: مطالعه خصوصیات in-vitro و in-vivo. Drug Dev. Ind. Pharm. 2012،38، 1530-1537. [CrossRef]

51. تنور، یس; Chauhan، CS; Sharma, A. توسعه و ارزیابی لکه های پوستی کارودیلول. Acta Pharm. 2007، 57، 151-159. [CrossRef] [PubMed]