ترکیبات شیمیایی برگ سیستانچ

چکیده: سیستانچاز دیرباز برگ ها به عنوان داروی سنتی مورد استفاده قرار می گرفته استدرمانسکته مغزی ایسکمیک, آنژین، وفشار خونو به عنوان یک نوشیدنی سالم ولوازم آرایشی برایضد پیری. این مطالعه با هدف جداسازی هر چه بیشتر ترکیبات ممکن از یک عصاره اتانولی انجام شداز برگ های خرمالو برای شناسایی ترکیبات فعال بیولوژیکی. اثر آنتی اکسیدانیلایه اتیل استات از عصاره اتانولی برگ خرمالو توسط نشان داده شد2، سنجش 2-دی فنیل-1-پیکریل هیدرازیل (DPPH) و کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا-2,20 تجزیه و تحلیل -casino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (HPLC-ABTS). یک فلاونوئید جدید،کامفرول-3-O- -D-2"-coumaroylgalactoside (1و یک ترکیب طبیعی جدید، کامفرول-3-O- -D-2"-feruloylglucoside (3) از لایه اتیل استات، به همراه 25 قبلاً جداسازی شدندترکیبات شناخته شده، از جملهچهارده فلاونوئیدیک یونون، دو کومارین، هفت تری ترپنوئید،و یک استوفنون تفسیر داده های طیف سنجی و طیف سنجی ساختار آنها را مشخص کرد. همه ترکیبات جدا شده به سرعت با استفاده از یک آنلاین ارزیابی شدندHPLC-ABTSسنجشو از اینها، ترکیبات4–8, 11, 13, 15، و16 به وضوح نشان داداثرات آنتی اکسیدانی. رامقدار این ترکیبات {{0}}.3-0.65 درصد عصاره بود.

کلید واژه ها:دیوسپیروس کاکی; برگ خرمالو؛ فلاونوئید؛ آنتی اکسیدان

برای دریافت سیستانچ غنی از فلاونوئید برای آرایشی و بهداشتی ضد پیری اینجا را کلیک کنید

1. معرفی

دیوسپیروس کاکیThunb. (خرمالو) از خانواده Ebenaceae و به طور گسترده ای استدر کره، چین و ژاپن توزیع شده است. میوه آن را به صورت تازه یا خشک مصرف می کنند، در حالی که برگ ها دارندمدت طولانی به عنوان یک طب سنتی برای درمان سکته مغزی ایسکمیک، آنژین، فشار خون بالا استفاده می شود.آترواسکلروز و بیماری های عفونی [1]. علاوه بر این، از برگ های آن نیز استفاده شده استبه عنوان نوشیدنی ها و لوازم آرایشی سالم به دلیل خاصیت ضد پیری و توانایی آنها درکمک به جلوگیری از تجمع کلسترول و ملانین [1]. تحقیقات اخیر پیشنهاد کرده استکه عصاره برگ خرمالو دارای طیف وسیعی از خواص بیولوژیکی است،از جمله مهار رادیکال، محافظت عصبی، مهار ترومبوز، ضد آترواسکلروز،و ضد حساسیت [2–6]. تحقیقات قبلی فیتوشیمیایی نشان داد که موارد مختلفی وجود داردانواعفلاونوئیدهاو ترپنوئیدها اجزای اصلی هستند [7و چندین تانن،نفتوکینون‌ها، کومارین‌ها، یونون‌ها و اسیدهای چرب نیز گزارش شده‌اند.8–12]. گونه های اکسیژن فعال (ROS) مولکول های واکنشی هستند که در سیستم های بیولوژیکی تولید می شوند.و تعادل بین تولید و حذف ROS در حالت عادی به خوبی کنترل می شودفیزیولوژی سلولی [13]. با این حال، تولید بیش از حد ROS باعث آسیب اکسیداتیو می شود.و به نوبه خود، پیری و بیماری های مرتبط با افزایش سن از جمله سرطان، دیابت و پارکینسونبیماری [14]. از این رو، کشف آنتی اکسیدان هایی مانند فلاونوئیدها و ترکیبات فنلیمی تواند یک استراتژی امیدوارکننده برای درمان این بیماری ها باشد.

به عنوان بخشی از پروژه مستمر ما برای یافتن ترکیبات فعال بیولوژیکی [15]،اثر آنتی اکسیدانی عصاره اتانولی (EtOH) و پارتیشن های حلال خرمالوبرگها با استفاده از روش 2،2-دی فنیل-1-پیکریل هیدرازیل (DPPH) و با کارایی بالا آنلاین ارزیابی شدند.کروماتوگرافی مایع-2،20 -casino-bis (3-اتیل بنزوتیازولین-6-سولفونیک اسید)تجزیه و تحلیل (HPLC-ABTS). مطالعه فیتوشیمیایی روی برگ خرمالو منجر به جداسازی شدیک فلاونوئید جدید (1یک ترکیب طبیعی جدید (3) و25 قبلاترکیبات شناخته شده استفاده از روش های طیف سنجی و طیف سنجی ساختارها را مشخص کرد. همه ترکیبات جدا شده به سرعت برای آنها غربالگری شدنداثرات آنتی اکسیدانی با استفاده از HPLC-ABTS آنلاین علاوه بر این، تجزیه و تحلیل کمی ازتمام ترکیبات جدا شده در مطالعه حاضر انجام شد.

2. نتایج و بحث

2.1. اثر آنتی اکسیدانی برگ خرمالو

اثر آنتی اکسیدانی عصاره اتانولی (EtOH) برگ خرمالو مورد بررسی قرار گرفتبرای غربالگری اولیه از طریق DPPH (شکل1آ). 0.125 mg/ml ازعصاره تقریباً 8 0 درصد از رادیکال DPPH را از بین برد، در حالی که 0.025 میلی گرم در میلی لیتر آسکوربیکاسید 94 درصد رادیکال را تشکیل می داد. سنجش آنلاین HPLC-ABTS به سرعت انجام شداطمینان از قابلیت اطمینان این نتایج (شکل1د). اسید گالیک و ترلوکس به عنوان داخلی استفاده شداستانداردها کروماتوگرام در 734 نانومتر (پیک منفی) نشان می دهد که تقریبا9 ماده تشکیل دهنده می توانند فعالیت آنتی اکسیدانی داشته باشند. اسید گالیک و ترلوکس (6-هیدروکسی- 2، 5،7،8-تترا متیل کرومان-2-کربوکسیلیکاسید) به عنوان استانداردهای داخلی برای اطمینان ازقابلیت اطمینان نتایج استنباط شد که بیشتر این پیک ها مشتقات فلفلاوونوئیدی بودندمانند فلاونوئید گلیکوزید و فلاوانول، بر اساس تجزیه و تحلیل dereplication انجام شدهبا مقایسه اشعه ماوراء بنفش (UV) و طیف جرمی ترکیبات با منتشر شدهداده ها. تقسیم‌بندی هدایت‌شده با سنجش زیستی نشان داد که این ترکیبات آنتی‌اکسیدانی هستنددر لایه اتیل استات (EtOAc) فراوان است، در حالی که آب (H2O) لایه ضعیف نشان دادفعالیت (شکل1B,C). 

شکل 1. اثرات مهار DPPH عصاره EtOH (A)، لایه EtOAc (B) و لایه HO (C) لایه HhO برگ خرمالو: (D) کروماتوگرافی ABTS-HPLC آنلاین عصاره EtOH.

2.2. بررسی فیتوشیمیایی

برای شناسایی این ترکیبات آنتی اکسیدانی، کروماتوگرافی و طیف سنجی مختلف انجام می شودروش‌هایی برای جداسازی و توصیف ساختاری انجام شدترکیبات. فلفلاوونوئید جدید (1و یک ترکیب طبیعی جدید (3) ازلایه اتیل استات عصاره اتانولی، همراه با 25 ترکیب گزارش شده قبلی،یعنی کامفرول-3-O- -2"-coumaroylglucoside (2) [16]، (به علاوه)-کاتچین (4) [17]، هایپروسید(5) [17]، ایزوکورسیترین (6) [18]، کوئرستین-3-O- -2"-galloylgalactoside (7) [19]، کوئرستین-3-O- -2"-galloylglucoside (8) [20]، تریفولین (9) [18]، آستراگالین (10) [18]، کامفرول-3-O- - 2"-گالویل گالاکتوزید (11) [21]، کامفرول-3-O- -آرابینوزید (12) [22]، کامفرول-3-O- - 2"-گالویل گلوکوزید (13) [23]، کوئرستین-3-O- -2"-coumaroylglucoside (14) [24]، کوئرستین(15) [15]، کامفرول (16) [25], (6S,9S)-رزئوزید (17) [26]، اسکوپولتین (18) [27]، آمبلیفرون(19) [28]، 1-(2،4-دی هیدروکسی-6-متیل فنیل) اتانون (20) [29]، اسید باربینرویک (21) [30], دیوسپیریک اسید B (22) [7]، اسید روتونگنیک (23) [31]، اسید پومولیک (24) [32]، اسید سیارینولیک(25) [33]، اسید اولئانولیک (26) [25و اسید اورسولیک (27) [25] با استفاده از طیف سنجی وداده های طیف سنجی و فیزیکی در مقایسه با داده های منتشر شده و همچنین با نازکتجزیه و تحلیل کروماتوگرافی لایه ای (TLC) (شکل2 و3). در این میان ترکیبات2, 16, 17, 19, 20، و24 ابتدا از آن جدا شدندD.kaki. 

ترکیب 1 به عنوان یک پودر زرد به دست آمد که در آن فرمول مولکولی به عنوان C3olO3 بر اساس داده های طیف سنجی جرمی با وضوح بالا (HRMS) ایجاد شد. این طیف باندهای جذبی را در 207 و 315 نانومتر نشان داد، که نشان می‌دهد که ترکیب 1 دارای ستون فقرات فلاونول است. داده‌های تشدید مغناطیسی هسته‌ای H (NMR) (جدول 1شکل S1) یک الگوی معمولی از گلیکوزید فلاونول کومارویله‌شده را نشان می‌دهد که دو مجموعه از سیگنال‌های نوع AA'BB' را نشان می‌دهد ({{1{52}}}}.{11} }} (2H, d, J= 8.5 Hz, H-2' and H{16}} ),6.87 (2H, d, J{{20}} 0.5 HzH-3' و H-5')) در حلقه B کامپفرول و همچنین سیگنال‌ها (0 7.45 (2H, d, J=8. 5 هرتز-2 و H{{3{{1{131}}4}}}}")، 6.81 (2H, d, J=8.5 هرتز, H-3 و H{37}} درصد در حلقه آروماتیک گروه کومارویل دو سیگنال دوتایی (8H 7.65 (1H, d, J=15.5 Hz, H{-7"") و 6.35 (1Hd، J=16.0 هرتز، H-8") مشاهده شد که نشان دهنده پروتون های ترانس الفینیک گروه کشور است. علاوه بر این، یک سیگنال پروتون آنومریک (0H 5.57 (1H, d، J=8.0 هرتز، H-1) در ناحیه قند مشاهده شد، که نشان دهنده حضور گروه قند حلقوی با پیکربندی B است. افزایش 13C و افزایش بدون اعوجاج توسط داده‌های NMR انتقال قطبش (قابل امکان 1شکل S2) 30 رزونانس شامل دو کربن ترانس الفینیک، ده کربن معطر، و شش کربن نیمه گلوکوزیل، و ده کربن غیر پروتونه شامل دو کربن کربونیل را نشان داد. به ویژه، تغییرات شیمیایی در C-2، C-3 و C{68}} (8c 158.1، 134.9 و 179.2) سیگنال‌های مشخصه فلاونول3-0-گلیکوزید بودند. علاوه بر این، سیگنال کربن کربونیل در C{77}}" (8c 168.7) و دو سیگنال کربن ترانس الفینیک در C-2" و C{83}}"(6 146.9) ، 115.2) تغییرات شیمیایی معمولی گروه کومارویل بودند. سیگنال کربن آنومریک در C{88}}(6C 100.4) و سایر سیگنال‌ها برای بخش گلیکوزیل از C{92}}" به C-6" (6c74.3، 73.4، 70.5، 77.4، و 62.0) مشاهده شد. این داده‌های NMR یک بعدی (1D) قابل تطبیق با کامفرول{107}}B{108}}-کوماروئیل گلوکوزید (2) بود. (16) با این حال، مقایسه دقیق داده‌های 13C NMR بین دو ترکیب نشان داد که ترکیب 1 دارای بخش گالاکتوز است، که بیشتر توسط داده‌های NMR طیف‌سنجی هسته‌ای Overhauser (NOESY) نشان داده شد (شکل S6). در حالی که همبستگی NOES بین H{115}} و H-4 در ترکیب 2 مشاهده شد، هیچ ارتباطی بین این پروتون ها در ترکیب 1 وجود نداشت. به طور کلی، تفسیر داده های 13C NMR و NOESYNMR یک روش موثر برای تعیین نوع نیمه گلیکوزیل است. با توجه به جابجایی رو به پایین C-2و C{122}}، مکان قسمت گالاکتوز استنباط شد که در C{120}} است، همانطور که توسط همبستگی پیوند چندگانه هترونهسته ای مشهود است (HMBCبین H{120} {123}}" و C{124}} (شکل S5). نشان داده شد که موقعیت گروه کومارویل در C{126}}" بر اساس تغییر میدان پایین ({127}}.36 (1H, dd, J=10.0, 8.0 Hz, H{ {134}}")) و همبستگی HMBC بین H{135}}' و C{136}}. در نتیجه، ساختار ترکیب 1 به عنوان کامفرول-3-0-B-2"-کوماروئیل گالاکتوزید تعیین شد. اگرچه ترکیب 2 قبلاً از منابع مختلف از جمله Ouercus suber (16] و Alliumporrum (34) جدا شده بود. ترکیب 1 برای اولین بار جدا شد و از نظر ساختاری مشخص شد.

ترکیب3 به عنوان یک پودر زرد رنگ جدا شد و فرمول مولکولی ایجاد شدبه عنوان سی31H28O14 با تجزیه و تحلیل داده های HRMS. طیف UV UV را نشان دادجذب در طول موج های 210 و 327 نانومتر به دلیل همان آگلیکون با ترکیبات1 و2. را1H داده های NMR (جدول1، شکل S10) مشابه ترکیبات بودند2، اما مرکب3 به جای گروه کوماروئیل، یک گروه فرولویل داشت، همانطور که با حضور یک نشان می دهدگروه متوکسی اضافی (δH 3.91 (3H, s, 3000 -اوچ3)). علاوه بر این، یک پروتون آنومریکعلامت (δH 5.64 (1H, d, J {{0}}.0 هرتز، H-100 )) مشاهده شد که نشان می دهد پیوند گلیکوزیلیک بود-پیکربندیو سیگنال جابجا شده به سمت پایین (5.03 (1H, t,J = 8.5 هرتز، H-200 )) در منطقه قند مانند ترکیب نشان داده شد1. را13داده های C NMR (جدول1، شکلS11) 31 تشدید شامل دو مورد را نشان دادترانس-کربن های الفیفینی، ده کربن ربع،ده کربن معطر، شش کربن نیمه گلوکوزیل، و یک کربن متوکسی و ده کربن غیر پروتونهکربن ها، از جمله دو کربن کربونیل مربوط به کامفرول، فرولویل،و گروه های گلوکز به طور خاص، سیگنال های کربن از C-200 به C-600 (δC 75.8, 76.3, 71.5, 78.8 و 62.5) وجود یک نیمه گلوکز را پیشنهاد کردند. مکان های قسمت گلوکزو گروه فرولویل با همبستگی دوربرد HMBC بین H تخصیص یافتند{1}}00 وC-3 (δC 134.8) و H{2}}00 و سی-1000 (δC 168.4) (شکل S14). موقعیت یک اضافیگروه متوکسی با همبستگی کلیدی بین 3 تعیین شد000 -اوچ3 و سی-3000 (δC 149.4). نتایج فوق ساختار ترکیب را پیشنهاد می کند3 به عنوان کامفرول-3-O- - 2 "-feruloyl glucoside. به بهترین دانش ما، ترکیب3 فقط به عنوان یک گزارش شده استمحصول هیدرولیز 3-O- -(2-O-feruloyl)-glucosyl-7،40 -di-O- -گلوکوزیل کامپفرول, محدود شده از، ایزوله شده ازآلیوم توبروزوم[35]. بنابراین، ساختار3 به عنوان جدید توضیح داده شدترکیب طبیعی

ترکیب11 به صورت پودر زرد رنگ جدا شد. را1داده های H NMR (شکل S19)مجموعه ای از AA را نمایش می دهد0 BB0 سیگنال های نوع (δH 8.06 (2H, d, J {{0}}.0 هرتز، H-20 , H-60 ), 6.87 (2H, d, J {{0}}.0 هرتز, H-30, H-50 )) در حلقه B کامفرول و یک سیگنال واحد درδH 7.02 (2H, s, H-3000 , H-7000 ) یک قسمت گالوئیل در ناحیه معطر، که یک سیگنال مشخصه استفلاونول اختصاص داده شده یک سیگنال پروتون آنومریک (δH 5.78 (1H, d, J {{0}}.0 هرتز، H-100 )) نشان داد که پیوند گلیکوزیل a است-پیکربندی. علاوه بر این، یک downfieldسیگنال پروتون جابجا شده (5.27 (1H, t,J = 9.5 هرتز، H-200 )) پیشنهاد کرد که گروه گالویلبه گروه هیدروکسیل C-2 متصل شد00 زیرا این تغییر را می توان به آن نسبت دادتاثیر ناهمسانگرد ازOنیمه گالوئیل [21]. را13داده های C NMR (شکل S20)به نمایش گذاشته 26 رزونانس، نشان دهنده فلاونول گلیکوزید اختصاص داده شده است. سیگنال های کربناز C-200 به C-600 (δC 71.1، 72.7، 68.2، 76.{7}} و 60.1) وجود یک گالاکتوز را پیشنهاد کردند.نصفه بنابراین، ساختار ترکیب11 به عنوان کامفرول تأیید شد-3-O- -200 - گالویل گالاکتوزید اگرچه مرکب11 قبلا از منابع مختلف جدا شده بود،شاملD.kaki[21,36]، فقط1داده های H NMR و MS قبلا گزارش شده بود. بدین ترتیب،را13داده های C NMR برای اولین بار در این مطالعه گزارش شد

2.3. فعالیت های آنتی اکسیدانی ترکیبات جدا شده

تمامی ترکیبات جدا شده از نظر اثرات آنتی اکسیدانی با استفاده از روش سریع بررسی شدندآنالیز خطی HPLC-ABTS برای تعیین اینکه کدام ترکیبات به آنتی اکسیدان کمک می کنندتاثیر برگ خرمالو ترکیبات4–8, 11, 13, 15، و16 آنتی اکسید قوی را نشان دادفعالیت های تداعی کننده (شکل4). بیشتر این ترکیبات کامفرول و کوئرستین بودندمشتقات، اما برخی از مشتقات (1–3, 9, 10, 12، و14) فعالیتی را نشان نداد. رارابطه ساختار-فعالیت به طور کامل مشخص نشد اما تا حدی آشکار شد. که دربه ویژه، کورستین و کامفرول با بخش های گالوئیل (7, 8, 11، و13) پیدا شدند تافعالیت‌های قوی دارند، اما آنهایی که قسمت‌های کوماروئیل یا فرولویل دارند (1–3 و16) کار را نکردهر گونه فعالیتی را نشان دهد

شکل 4.فعالیت های مهار رادیکال ترکیبات جدا شده (4–8, 11, 13, 15، و16) توسط آنلاین ارزیابی شدندسنجش HPLC-ABTS.

2.4. تجزیه و تحلیل کمی ترکیبات جدا شده

تجزیه و تحلیل کمی تمام ترکیبات جدا شده در عصاره محلول EtOAcبرای تایید اینکه اثرات آنتی اکسیدانی برگ خرمالو می تواند باشد انجام شدناشی از این ترکیبات فعال است. یک روش خاص HPLC با تشخیص آرایه دیود وآشکارساز پراکندگی نور تبخیری برای تعیین همزمان توسعه داده شداز 27 ترکیب محتوای تمام تری ترپنوئیدهای جدا شده تقریباً 9/5 درصد بودعصاره، و از اینها، عصاره سیارزینولیک اسید (25اسید اولئانولیک (26و ursolicاسید (27همانطور که در مطالعات قبلی گزارش شده است، بخش قابل توجهی را به خود اختصاص داده است.7]. رامحتویات فلاونوئیدها تقریباً 4/5 درصد و از این میان، ترکیبات فعال بود3.2 درصد بود (جدول2). به ویژه، محتویات کامفرول-3-O- -200 -گالویل گالاکتوزید(9) کامفرول-3-O- -2"-galloylglucoside (10ایزوکورسیترین (13)، و کوئرستین-3-O- -2"- گالویل گلوکوزید (15) بیش از 0.3 درصد بودند. روش تحلیلی با استفاده از aروش اعتبارسنجی ساده برای اطمینان از ارتباط روش، که کافی نشان دادویژگی، خطی بودن، دقت و دقت.

بیشتر بخواهید:

ایمیل:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950