سیستانش توبولوزا آپوپتوز سلولهای سرطانی کولون اولیه و متاستاتیک انسانی را با واسطه گونه های اکسیژن ایجاد می کند

خلاصه

سرطان روده بزرگ سومین سرطان شایع در سراسر جهان است. درمان‌های مرسوم اثربخشی متوسط ​​با عوارض جانبی شدید را نشان داده‌اند، بنابراین نیاز فوری به جایگزین‌های ایمن‌تر وجود دارد. در این مطالعه Cistanche tubulosa با نام محلی Thanoon به دلیل پتانسیل درمانی بالا در طب سنتی و فراوانی در منطقه خاورمیانه به عنوان یک استراتژی گیاه درمانی بالقوه در نظر گرفته شد. ترکیبات زیست فعال از پودر سیستانچ توبولوزا استخراج و برای خواص ضد سرطانی آنها در برابر چهار رده سلولی سرطان روده بزرگ از جمله دو رده از تومور اولیه (CaCo2 و HCT116) و دو رده از محل متاستاتیک (LoVo و SW620) مورد آزمایش قرار گرفتند.

اثر Cistanche tubulosa بر القای آپوپتوز و هموستاز ردوکس سلولی نیز مورد بررسی قرار گرفت. Cistanche tubulosa یک مهار وابسته به زمان و غلظت از تکثیر همه رده های سلولی سرطانی آزمایش شده را بیش از 60 درصد پس از 72 ساعت درمان با 1 میلی گرم در میلی لیتر عصاره خام نشان داد. مهار تکثیر با القای آپوپتوز، تولید گونه‌های اکسیژن فعال داخل سلولی و سوپراکسیدهای میتوکندری مشخص شد. این داده ها نشان می دهد که Cistanche tubulosa یک کاندید امیدوارکننده برای درمان افزودنی ضد سرطان کولون است. این اولین مطالعه ای است که فعالیت زیستی ضد سرطانی Cistanche tubulosa را در برابر سلول های سرطانی روده بزرگ نشان می دهد.

درمان دارویی محصول عصاره گیاه سیستانچ کلیک کنید

اختصارات:

7-AAD، 7-Amino-Actinomycin D; CTE، عصاره Cistanche tubulosa; EMEM، حداقل محیط ضروری Eagle. FBS، سرم جنین گاوی؛ DCF، 2،7-دی کلروفلورسئین. DCFH-DA، 2،{7}} دی کلرودی هیدروفلورسئین دی استات. DMEM، مدیوم Eagle اصلاح شده Dulbecco. DMSO، دی متیل سولفوکسید؛ MTT، 3-[4،{10}}دی متیل تیازول-2-ایل]-2،5-دی فنیل تترازولیوم؛ PE، Phycoerythrin; RFU، واحدهای فلورسانس نسبی؛ ROS، گونه های فعال اکسیژن

معرفی

سرطان کولورکتال یکی از شایع ترین سرطان ها در سراسر جهان است (برنر و همکاران، 2014) و به دلیل رژیم غذایی و سبک زندگی مدرن و کاهش فعالیت بدنی، میزان بروز آن با حدود 2.4 میلیون مورد در سال 2035 به طور مداوم در حال افزایش است. تلاش‌های کنونی برای مبارزه با همه‌گیری کنونی سرطان کولورکتال کافی نیست و بنابراین رویکردهای جدیدی برای پیشگیری و درمان مؤثر از جمله تغییر در شیوه زندگی در ترکیب با مداخلات جایگزین امن‌تر مانند فیتوتراپیتیک مورد نیاز است (Weidner et al., 2015). فیتوتراپی، استفاده از گیاهان دارویی برای درمان بیماری ها، بخشی اجتناب ناپذیر از تاریخ بشر باستان بوده است. گیاهان دارویی مدت‌هاست که به‌عنوان منابع درمانی جایگزین برای سرطان‌ها مورد استفاده قرار می‌گیرند، که بیش از شصت درصد از عوامل ضد سرطانی مورد استفاده در طب سنتی را تشکیل می‌دهند (بالوناس و کینگ‌هورن، 2005؛ سایبو و همکاران، 2015). برخی از معروف ترین نمونه ها عبارتند از عصاره هایی از Catharanthus roseus G. Don. (Apocynaceae)، Taxus baccata L. (Taxaceae)، و Camptotheca acuminate Decne (Nyssaceae) (Cragg and Newman، 2005؛ da Rocha و همکاران، 2001). چندین عصاره گیاهی و فیتوکمیکال اثرات ضد توموری را در سرطان کولورکتال اعمال می‌کنند که به تولید گونه‌های فعال اکسیژن (ROS) و آپوپتوز مرتبط با سلول‌های سرطانی نسبت داده می‌شود.

در میان کاندیداهای گیاه درمانی، Cistanche tubulosa، یک گیاه بیابانی انگلی Orobanchaceae (جیانگ و همکاران، 2009) که به طور گسترده در مناطق خشک و نیمه خشک آفریقا، آسیا و منطقه مدیترانه پراکنده شده است، خواص دارویی ارزشمندی دارد. Cistanche tubulosa به طور گسترده در طب سنتی استفاده شده است و پیشنهاد می شود که اثرات درمانی در کمبود کلیه، لوکوره مرضی، متروراژی، ناباروری زنانه و یبوست پیری داشته باشد (جیانگ و همکاران، 2009). خواص سیستانچ توبولوزا در دهه گذشته به شدت مورد مطالعه قرار گرفته است که شامل شل کننده عروق (Yoshikawa et al., 2006)، محافظ کبد (Morikawa et al., 2010)، اثرات ضد هیپرگلیسمی و کاهش چربی خون (Xiong et al., 2013) می باشد. Cistanche Tubulosa همچنین به عنوان یک تقویت کننده قوی سیستم ایمنی، تقویت کننده استخوان سازی و یک عامل ضد پیری و ضد خستگی پیشنهاد شد (Xu et al., 2014). علاوه بر این، نشان داده شده است که عصاره Cistanche tubulosa رسوب آمیلوئید را در مدل بیماری آلزایمر مسدود می کند (Wu et al., 2015). علیرغم کاربردهای درمانی مختلف، تأثیر سیستانچ توبولوزا به عنوان یک عامل ضد سرطان بالقوه هنوز مورد مطالعه قرار نگرفته است.

در کار حاضر، ما اثر ضد سرطانی Cistanche Tubulosa را بر روی دو رده سلولی سرطان کولون اولیه و دو متاستاتیک و مکانیسم‌های بالقوه زیربنایی این اثر بررسی کرده‌ایم.

مواد و روش ها

جمع آوری و تهیه عصاره گیاهی، نمونه های Cistanche tubulosa از منطقه ای بیابانی در قطر در 2{11}}14 جمع آوری شد و اصالت گیاه توسط گیاه شناس تایید شد. نمونه‌های کوپن در بخش سم‌شناسی و چند منظوره در ADLQ بایگانی می‌شوند. نمونه‌های گیاه خشک شده با آسیاب چاقویی Retsch Grindomix GM300 به پودر ریز تبدیل شدند. 20 گرم پودر با 200 میلی لیتر آب فوق خالص به مدت یک شب در دمای 37 درجه روی شیکر چرخشی با سرعت 200 دور در دقیقه استخراج شد. عصاره‌های خام سیستانچ توبولوزا (CTE) به مدت 30 دقیقه در 8000 دور در دقیقه سانتریفیوژ شدند تا ترکیبات غیر محلول گلوله شوند، مایع رویی جمع‌آوری شد و با استفاده از Labconco Freezone 6 به اضافه خشک‌کن فریز خشک شد. عصاره خشک شده در محیط Eagle's Modified Dulbecco (DMEM, SIGMA, Germany) به غلظت 20 میلی گرم بر میلی لیتر بازسازی شد و از طریق فیلتر غشایی 0.{12}} میکرونی فیلتر شد.

خطوط سلولی و نگهداری سلولی

رده های سلولی سرطان کولون انسانی CaCo2، SW620، و LoVo از خدمات خطوط سلولی (CLS، Eppelheim، آلمان) به دست آمد در حالی که رده سلولی HCT 116 هدیه ای مهربان از گروه علوم زیستی و زیست محیطی در دانشگاه قطر بود. CaCo2 و HCT11 از محل اولیه کارسینوم کولون و SW620 و LoVo از محل متاستاتیک مشتق شدند. سلول های SW620، HCT116 و LoVo در محیط DME کشت و نگهداری شدند در حالی که سلول های CaCo2 در محیط حداقل ضروری Eagle (EMEM، SIGMA، آلمان) نگهداری شدند. سلول ها به صورت تک لایه در دمای 37 درجه در محیط مربوطه حاوی 10 درصد سرم جنین گاو (FBS، SIGMA، آلمان) و 1 درصد پنی سیلین/استرپتومایسین (SIGMA، آلمان) در یک اتمسفر مرطوب حاوی 5 درصد دی اکسید کربن رشد کردند.

سنجش بقای سلولی

سنجش {{0}}[4،5-دی متیل تیازول-2-yl]-2،5-دی فنیل تترازولیوم (MTT) برای ارزیابی فعالیت سیتوتوکسیک CTE به طور مشابه همانطور که قبلاً توضیح داده شد (Jaganjac et al., 2{16}}10). تراکم بذر سلول‌های CaCo2، HCT116، SW620 و LoVo کشت‌شده در 96-صفحه‌های چاهک، 104 سلول در هر چاهک بود. سلول ها 24 ساعت قبل از درمان در محیط مربوطه حاوی 10 درصد FBS قرار گرفتند. پس از 24 ساعت، محیط خارج شد و سلول ها با 0، 0.25، 0.5، 1 و 2 میلی گرم در میلی لیتر CTE به مدت 24، 48 و 72 ساعت در دمای 37 درجه در اتمسفر مرطوب حاوی 5 درصد CO2 تیمار شدند. پس از تیمار CTE، محیط حذف شد و 40 میکرولیتر محلول MTT (0.5 میلی گرم بر میلی لیتر) به هر چاهک اضافه شد.

پس از 3 ساعت انکوباسیون، محلول MTT برداشته شد، محصول فورمازان در دی متیل سولفوکسید (DMSO، SIGMA، آلمان) حل شد و جذب در 590 نانومتر با دستگاه میکروپلیت ریدر (Infinite 200 PRO NanoQuant، Tecan Trading AG، سوئیس) اندازه‌گیری شد. .

سنجش آپوپتوز

آپوپتوز در سلول‌های CaCo2، HCT116، SW620 و LoVo با استفاده از کیت تشخیص آپوپتوز PE Annexin V با 7-آمینو اکتینومایسین D (7-AAD) به عنوان یک رنگ حیاتی (Becton) شناسایی شد. Dickinson International، بلژیک) طبق دستورالعمل سازنده. به طور خلاصه، سلول‌ها در 24-صفحه چاهک با تراکم 5×104 سلول در چاهک در محیط مربوطه حاوی 10 درصد FBS به مدت 24 ساعت قبل از افزودن CTE (0، 0.5) کاشته شدند. یا 1 میلی گرم در میلی لیتر). پس از 24 انکوباسیون CTE، سلول ها برداشت شدند، دو بار با سالین سرد بافر فسفات شسته شدند و با Phycoerythrin (PE) Annexin V و 7-AAD به مدت 15 دقیقه در دمای اتاق در تاریکی رنگ آمیزی شدند. سلول های رنگ آمیزی شده در مدت 1 ساعت توسط فلوسیتومتری با استفاده از FACS آنالیز شدند. فلوسیتومتر Aria III و نرم افزار FACDiva (Becton Dickinson) با دبی کم با حداقل 104 سلول. تیمار سلول ها به مدت 4 ساعت با 6 میکرومولار کمپتوتسین (SIGMA) به عنوان کنترل مثبت برای سنجش مورد استفاده قرار گرفت.

تولید ROS داخل سلولی

تولید ROS داخل سلولی با استفاده از 2،{1}} دی کلرودی هیدروفلورسین دی استات (DCFH-DA، SIGMA، آلمان) مورد بررسی قرار گرفت. DCFH-DA یک پروب غیر فلورسنت است که با ROS داخل سلولی به ترکیب فلورسنت 2،7- دی کلروفلورسین (DCF) اکسید می شود (Poljak-Blazi et al., 2011). سنجش DCFHDA به طور مشابه همانطور که قبلاً توضیح دادیم انجام شد (Cindric و همکاران، 2013؛ Poljak-Blazi و همکاران، 2011). به طور خلاصه، تراکم بذر سلول‌های CaCo2، HCT116، SW620 و LoVo کشت‌شده در صفحات سیاه چاهی 104 سلول در هر چاهک بود. سلول ها در محیط مربوطه حاوی 10 درصد FBS به مدت 24 ساعت قرار گرفتند.

قبل از درمان، سلول ها با 10 میکرومولار DCFH-DA در دمای 37 درجه به مدت 30 دقیقه در 5 درصد CO2 / 95 درصد هوا انکوبه شدند. سلول ها سپس شسته شدند وتحت درمان با {{0}}، 0.5 و 1 میلی گرم در میلی لیتر CTE در محیط بدون فنل قرمز. تشکیل ROS درون سلولی به طور مداوم در طول 25 ساعت در دمای 37 درجه و 5 درصد CO2 با استفاده از یک میکروپلیت خوان با فلورسانس بالا و ماژول کنترل گاز (Infinite 200 PRO، Tecan Trading AG، سوئیس) پایش شد. شدت فلورسانس با طول موج تحریک 500 نانومتر و تشخیص انتشار در 529 نانومتر اندازه‌گیری شد. واحدهای دلخواه، واحدهای فلورسانس نسبی (RFU)، مستقیماً بر اساس شدت فلورسانس بودند.

تولید سوپراکسید میتوکندریایی

توانایی CTE برای القای تولید سوپراکسید توسط میتوکندری با استفاده از کاوشگر MitoSOX Red (تکنولوژی‌های حیات) و هوچست 33342 برای رنگ‌آمیزی هسته‌ای (Life Technologies) قابل نفوذ سلولی و هدف‌دار میتوکندری برآورد شد. سلول های CaCo2، HCT116، SW620 و LoVo در 96-صفحه چاهک با تراکم 104 سلول در هر چاهک در محیط مربوطه حاوی 10 درصد FBS به مدت 24 ساعت کاشته شدند. . سپس سلول ها با 4 میکرومولار MitoSOX و 2 میکرومولار Hoechst 33342 به مدت 20 دقیقه بارگذاری شدند، رنگ اضافی شسته شد و چاهک ها با 0، 0.5 و 1 میلی گرم در میلی لیتر CTE به مدت 24 ساعت در دمای 37 درجه و CO2 5 درصد تیمار شدند. شدت فلورسانس با طول موج تحریک 510 نانومتر و تشخیص انتشار در 580 نانومتر برای MitoSOX و طول موج تحریک 350 نانومتر و تشخیص گسیل در 461 نانومتر برای Hoechst 33342 با استفاده از یک میکروپلیت خوان، ریزپلاک 33342 اندازه‌گیری شد. AG، سوئیس)

تحلیل آماری

آمار توصیفی به عنوان میانگین به علاوه /- SD نشان داده شد. معنی‌داری تفاوت بین گروه‌ها با استفاده از آزمون‌های t-test و Chi-square ارزیابی شد. هنگامی که بیش از دو گروه مقایسه شدند، از آنالیز واریانس یک طرفه با آزمون تعقیبی مناسب استفاده کردیم. SPSS 11.{5}}1 برای Mircosoft Windows استفاده شد. تفاوت با P کمتر از 0.05 از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد.

نتایج

اثر CTE بر تکثیر رده های سلولی سرطان کولون انسانی در شکل 1 نشان داده شده است. تمام غلظت های CTE آزمایش شده یک اثر مهاری قوی بر روی رده سلولی CaCo2 به روشی وابسته به غلظت و زمان نشان دادند (شکل 1A). هفتاد و دو ساعت تیمار CTE رشد سلول‌های CaCo2 را بیش از 6{7}} درصد در مقایسه با شاهد مهار کرد (05/0 < 0 برای همه غلظت‌ها). تأثیر قابل توجه تیمار CTE بر رشد سلولی HCT116 نیز در تمام زمان‌ها در دو بالاترین غلظت (1 میلی‌گرم در میلی‌لیتر و 2 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر) شناسایی شد که در غلظت‌های اخیر به بیش از 70 درصد کاهش می‌رسد (شکل 1B، p. < 0.05).

اگرچه دو غلظت پایین تر CTE ({0}}}.25 و 0.5 میلی گرم در میلی لیتر) به طور قابل توجهی رشد HCT116 سلول ها را پس از 24 ساعت کاهش داد (p<0.05), 72="" they="" had="" no="" significant="" effect="" following="" hours="" of="" treatment="" compared="" to="" the="" control="" p="">{{0}}.{{1{13}}}}5). مهار تکثیر وابسته به زمان و غلظت با CTE بیشتر در سلول‌های LoVo با بیش از 6{15}} درصد در بالاترین غلظت تأیید شد (p < 0.05) (شکل 1C) و هر چهار غلظت CTE آزمایش‌شده رشد سلول‌های SW620 را پس از 48 ساعت کاهش داد (شکل 1D، p <{27}}.05 برای همه). پس از 72 ساعت درمان، همین اثر تنها برای دو بالاترین غلظت (05/0p<) مشاهده شد، در حالی که غلظت‌های 25/0 و 5/0 میلی‌گرم در میلی‌لیتر نسبت به شاهد اثر معنی‌داری نشان ندادند (05/0p>). تاثیر تیمار 0.5 و 1 میلی گرم بر میلی لیتر CTE بر القای آپوپتوز بیشتر در هر چهار رده سلولی مورد آزمایش قرار گرفت (شکل 2). افزایش تعداد سلول ها در آپوپتوز اولیه در HCT116 و LoVo پس از 24 ساعت درمان با 0.5 میلی گرم در میلی لیتر (p<0.05, Figure 2B and 2C) and in all cell lines at 1 mg/mL (p<0.05). A significant increase in necrotic or late apoptotic cell number was further observed in CaCo2 and SW620 cell lines (p<0.05, Figure 2A and 2D).

توانایی CTE برای القای تولید ROS داخل سلولی در شکل 3 نشان داده شده است.<0.05). The intracellular ROS production increased progressively throughout the 25 hours of treatment in a time and concentration-dependent manner. Furthermore, the staining of cells with a mitochondria-targeted probe revealed a strong impact of CTE on mitochondrial superoxide production in a concentration-dependent manner (Figure 4). The highest increase in superoxide production by mitochondria was observed in HCT116 (69%, Figure 4B) and LoVo cells (82%, Figure 4C) following 24 hours of treatment with 1 mg/mL of CTE.

عکس. 1:

تأثیر سیستانچ توبولوزا بر زنده ماندن رده های سلولی سرطان روده بزرگ. بقای سلولی اندازه گیری شده با روش MTT سلول های (A) CaCo2، (B) HCT116، (C) LoVo، و (D) SW620 به عنوان درصدی از رده سلولی سرطان کولون درمان نشده شاهد ارائه می شود. مقادیر میانگین (± انحراف معیار) برای 5 تکرار از آزمایش نماینده داده شده است: (*) معنی داری p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

شکل 2:

عصاره آبی سیستانچ توبولوزا باعث القای آپوپتوز در سلول های سرطانی روده بزرگ انسان می شود. آنالیزهای فلوسیتومتری Annexin-V-FITC سلول های (A) CaCo2، (B) HCT116، (C) LoVo و (D) SW620 به عنوان درصدی از رده سلولی سرطان کولون درمان نشده شاهد ارائه می شوند. مقادیر میانگین (±SD) برای 3 تکرار آزمایش نماینده داده شده است: (*) معنی‌داری p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

شکل 3:

عصاره آبی Cistanche tubulosa باعث تولید ROS درون سلولی در یک زمان و وابسته به دوز می شود. تولید ROS اندازه گیری شده با روش DCFH-DA در سلول های (A) CaCo2، (B) HCT116، (C) LoVo، و (D) SW620 به عنوان مقادیر میانگین RFU (± SD) برای 5-تکرارهای مربوطه ارائه می شود. یک آزمایش نماینده (*) اهمیت ص<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells.

شکل 4:

عصاره آبی Cistanche tubulosa باعث تولید سوپراکسید میتوکندری در سلول های سرطانی روده بزرگ انسان می شود. شدت فلورسانس پروب MitoSOX Red هدف‌دار میتوکندری در سلول‌های A) CaCo2، (B) HCT116، (C) LoVo و (D) SW620 به‌عنوان درصدی از رده سلولی سرطان کولون درمان‌نشده شاهد ارائه می‌شود. مقادیر میانگین (± انحراف معیار) برای 5 تکرار از آزمایش نماینده داده شده است: (*) معنی داری p<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells.

بحث

اگرچه مطالعات قبلی خواص دارویی متعددی را گزارش کرده اند، اما این اولین گزارش از اثر ضد تکثیر آن در سلول های بدخیم است. ترکیبات زیست فعال Cistanche tubulosa استخراج شده با آب، یک حلال بسیار قطبی، زیست فعالی ضد سرطانی قوی را نشان دادند. ما قبلاً کارایی Cistanche tubulosa حل شده در آب را در برابر حلال‌های دیگر مانند متانول و اتیل استات مقایسه کرده‌ایم، اما عصاره‌های آب امیدوارکننده‌ترین فعالیت‌های ضد سرطانی را نشان دادند (داده‌ها نشان داده نشده است).

ما توانایی CTE را در mg/ml 1 و mg/ml 2 برای مهار 60 درصد از رشد رده‌های سلولی سرطان کولون اولیه و متاستاتیک نشان داده‌ایم که نقش بالقوه مهم Cistanche tubulosa را به عنوان درمان سرطان روده بزرگ نشان می‌دهد. در مقایسه با سلول های طبیعی، سلول های سرطانی به طور کلی با اختلال در هموستاز ردوکس مشخص می شوند و یک استراتژی رایج درمان های ضد سرطان فعلی افزایش استرس اکسیداتیو سلولی است (یانگ و همکاران، 2013). اگرچه سطوح پایین فیزیولوژیکی ROS نقش مهمی به عنوان مولکول های سیگنالینگ دارند، تولید بیش از حد ROS می تواند به بی ثباتی و بدخیمی سرطان کمک کند (لیو و استورز، 2010). به طور متناقض، این عدم تعادل در هموستاز ردوکس سلولی سلول های سرطانی را در برابر مرگ سلولی ناشی از ROS آسیب پذیرتر می کند (Jaganjac et al., 2008; Nogueira and Hay, 2013). اثر ضد پرولیفراتیو CTE گزارش شده در این مطالعه می تواند توسط مکانیسم های مختلف خارج و داخل سلولی ترکیبات شناخته شده و ناشناخته در عصاره، با هدف قرار دادن مسیرهای متعددی که نقش اساسی در آپوپتوز دارند، واسطه شود. برای تمایز بین حالت های مختلف مرگ سلولی، مکانیسم بالقوه مسئول سمیت سلولی ناشی از CTE مشاهده شده را بررسی کردیم.

داده های ما نشان می دهد که CTE تولید ROS داخل سلولی و در نتیجه مرگ سلولی ناشی از ROS را افزایش می دهد. حالت ردوکس سلول نیز نقش مهمی در تنظیم آپوپتوز دارد و زنجیره انتقال الکترون میتوکندریایی یکی از مکان‌های اصلی تولید ROS سلولی است (Trachootham et al., 2008). علاوه بر این، ROS داخل سلولی می تواند از طریق هر دو مسیر وابسته به میتوکندری و مسیرهای مستقل باعث آپوپتوز سلولی شود (Sinha et al., 2013). در واقع، داده‌های ما همچنین نشان می‌دهند که بیرون‌سازی فسفاتیدیل سرین ناشی از CTE، یک اثر رایج در آپوپتوز، در رده‌های سلولی سرطانی اولیه و متاستاتیک است، که نشان می‌دهد مکانیسم مرگ ناشی از CTE به جای نکروز، با آپوپتوز انجام می‌شود. فعال سازی آپوپتوز در سلول های سرطانی یک استراتژی اصلاحی است و بسیاری از داروهای ضد سرطان ممکن است اثرات آپوپتوز در سلول های سرطانی داشته باشند.

بنابراین، ترکیبات یا عصاره‌های دارای فعالیت‌های پیش آپوپتوز در سلول‌های سرطانی به طور بالقوه در تحقیقات داروهای ضد سرطان مفید هستند (وونگ، 2011). برای تعیین اینکه آیا اثر پرو آپوپتوز ناشی از CTE توسط مکانیسم ROS ناشی از میتوکندری واسطه می‌شود، ما تولید سوپراکسید را با استفاده از یک پروب فلورسنت هدف‌دار میتوکندری در سلول‌های تیمار شده با CTE اندازه‌گیری کردیم. داده های ما به وضوح نشان می دهد که CTE تولید سوپراکسید میتوکندری را تحریک می کند که نشان می دهد فعالیت ضد سرطانی Cistanche tubulosa حداقل تا حدودی از طریق مکانیسم ROS ناشی از میتوکندری انجام می شود.

نتیجه گیری

در نتیجه، داده‌های ما نشان می‌دهد که عصاره آبی گیاه بیابانی Cistanche tubulosa ممکن است یک نامزد امیدوارکننده برای رویکرد ضد سرطان در ترکیب با سایر درمان‌های مرسوم برای پیشگیری و درمان سرطان روده بزرگ باشد. ما همچنین نشان می‌دهیم که سمیت عصاره گیاه در برابر سلول‌های سرطانی با افزایش تولید ROS درون سلولی و حداقل تا حدی توسط آپوپتوز وابسته به میتوکندری انجام می‌شود. مطالعات بیشتر برای جداسازی و شناسایی اجزای فعال بیولوژیکی که مسئول فعالیت ضد سرطانی هستند ادامه دارد.

تحقیقات بیشتری برای ارزیابی استفاده بالقوه این عصاره به عنوان یک عامل موثر شیمیایی و درک مکانیسم‌های اثر بر سلول‌های سرطان روده بزرگ در سطح مولکولی مورد نیاز است. مطالعات پیش بالینی و بالینی بیشتری نیز برای تایید اثرات مفید مشاهده شده بر سلامتی Cistanche tubulosa برای پیشگیری از سرطان مورد نیاز است.

سپاسگزاریها

حمایت مالی و حمایت مالی: این مطالعه توسط آزمایشگاه ضد دوپینگ قطر حمایت شد.

تضاد منافع: نویسندگان هیچ گونه تضاد منافع را اعلام نمی کنند.

منابع

Balunas MJ، Kinghorn، AD. کشف دارو از گیاهان دارویی زندگی علمی. 2005؛ 78: 431-41.

برنر اچ، کلور ام، پوکس سی پی. سرطان روده بزرگ. Lancet 2014؛ 383، 1490-502.

Cindric M، Cipak A، Zapletal E، Jaganjac M، Milkovic L، Waeg G، Stolc S، Zarkovic N، Suzana Borovic S. Stobadine اختلالات یک مدل سد روده ای ناشی از 4-هیدروکسینونال را کاهش می دهد. Toxicol In Vitro 2013؛ 27: 426-32.

Cragg GM، Newman DJ. گیاهان به عنوان منبع عوامل ضد سرطان.JEthnopharmacol. 2005؛ 100: 72-9.

da Rocha AB، Lopes RM، Schwartsmann G. محصولات طبیعی در درمان ضد سرطان. CurrOpinPharmacol. 2001؛ 1: 364-9. Jaganjac M، Matijevic T، Cindric M، Cipak A، Mrakovcic L، Gubisch W، Zarkovic N. القای پروموتر CMV-1 توسط 4-هیدروکسی-2- نامی در سلول های کلیه جنینی انسان. Acta Biochim Pol. 2010؛ 57: 179-83.

Jaganjac M، Poljak-Blazi M، Zarkovic K، Schaur RJ، Zarkovic N. دخالت گرانولوسیت ها در رگرسیون خود به خودی سرطان واکر 256. سرطان لت. 2008; 260:180-6

جیانگ یو، تو پی اف. تجزیه و تحلیل ترکیبات شیمیایی در گونه Cistanche. J Chromatogr A. 2009;1216:1970-9.

Liou GY، Storz P. گونه های فعال اکسیژن در سرطان. Free Radic Res. 2010؛ 44: 479-96.

Morikawa T، Pan Y، Ninomiya K، Imura K، Matsuda H، Yoshikawa M، Yuan D، Muraoka O. آمینوگلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی اسیله شده با فعالیت محافظ کبد از گیاه بیابانی Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem. 2010؛ 18: 1882-90.

Nogueira V، Hay N. مسیرهای مولکولی: هموستاز گونه‌های اکسیژن فعال در سلول‌های سرطانی و پیامدهای آن برای درمان سرطان. Clin Cancer Res. 2013؛ 19: 4309-14.

Poljak-Blazi M، Jaganjac M، Sabol I، Mihaljevic B، Matovina M، Grce M. اثر یون‌های آهن بر تشکیل گونه‌های فعال اکسیژن، رشد رده‌های سلولی سرطان دهانه رحم و بیان انکوژن E6/E7. Toxicol Vitro. 2011؛ ​​25: 160-6.

Saibu GM، Katerere DR، Rees DJG، Meyer M. اثرات سیتوتوکسیک و پیش آپوپتوز در شرایط آزمایشگاهی عصاره آبی برگها و پیازهای Tulbaghia violacea. جی اتنوفارماکول. 2015؛ 164: 203-9.

Sinha K، Das J، Pal PB، Sil PC. استرس اکسیداتیو: مسیرهای آپوپتوز وابسته به میتوکندری و مستقل از میتوکندری. Arch Toxicol.2013; 87:{4}}. Trachootham D، Lu W، Ogasawara MA، Nilsa RD، Huang P. تنظیم ردوکس بقای سلولی. سیگنال ردوکس آنتی اکسیدان 2008؛ 10: 1343- 74.

عصاره Weidner C، Rousseau M، Plauth A، Wowro SJ، Fischer C، Abdel-Aziz H، Sauer S. Melissa officinalis باعث القای آپوپتوز و مهار تکثیر در سلول های سرطانی کولون از طریق تشکیل گونه های اکسیژن فعال می شود. گیاه پزشکی. 2015؛ 22: 262-70.

وانگ آر اس. آپوپتوز در سرطان: از پاتوژنز تا درمان J ExpClin Cancer Res. 2011؛ ​​30:87.

Wu SH، Chou FP، Chyau CC، Chen JH، Tu SF، Lin HH. اثرات ضد سرطانی عصاره Wasabia japonica در سلول های سرطانی کبد Hep3B از طریق تجمع ROS، آسیب DNA و آپوپتوز با واسطه p{8}. جی فانکت فودز. 2015؛ 14:{11}}.

Xiong WT، Gu L، Wang C، Sun HX، Liu X. اثرات ضد هیپرگلیسمی و هیپولیپیدمیک Cistanche tubulosa در موش‌های دیابتی نوع 2 db/db. جی اتنوفارماکول. 2013؛ 150:935-45.

Xu R، Sun S، Zhu W، Xu C، Liu Y، Shen L، Shi Y، Chen J. ویژگی‌های اثرانگشت ماکرو مادون قرمز چند مرحله‌ای عصاره‌های اتانولی از گونه‌های مختلف سیستانچی در چین همراه با اثر انگشت HPLC. جی مول استراکت. 2014؛ 1069: 236-244.

یانگ یی، کاراخانوا اس، ورنر جی، باژین ای وی. گونه های فعال اکسیژن در بیولوژی سرطان و درمان ضد سرطان Curr Med Chem. 2013؛ 20: 3677-92.

Yoshikawa M، Matsuda H، Morikawa T، Xie H، Nakamura S، Muraoka O. آمینوگلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی و قندهای الیگو اسیله شده با فعالیت شل کننده عروق از Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem. 2006؛ 14: 7468-75.

For more information:1950477648nn@gmail.com