Cistanche Tubulosa از نورون های دوپامینرژیک از طریق تنظیم آپوپتوز و فاکتور نوروتروفیک مشتق از سلول گلیال محافظت می کند: in vivo و in vitro-Ⅱ

تست های رفتاری

تست شنا (ژو و همکاران، 2014)

هماهنگی حرکت بدن در موش ها با آزمون شنا اندازه گیری شد. موش ها به صورت جداگانه در یک مخزن آب (ارتفاع 25 سانتی متر و قطر 10 سانتی متر) حاوی 10 سانتی متر آب قرار داده شدند و در یک محیط آرام آزمایش شدند تا مدت زمان ثابت آنها در 5 دقیقه ثبت شود.

تست میدان باز (کاوای و همکاران، 1998)

فعالیت حرکتی با استفاده از آزمون میدان باز اندازه گیری شد. موش ها در محیطی آرام و کم نور مورد آزمایش قرار گرفتند و به صورت جداگانه در یک ظرف اکریلیک شفاف 30 × 30 × 15 سانتی متر با شبکه جداسازی 6 × 6 سانتی متر در پایین قرار گرفتند. به موش‌ها 10 دقیقه فرصت داده شد تا با محیط سازگار شوند و سپس تعداد شبکه و فرکانس پرورش تک تک موش‌ها پنج بار متوالی اندازه‌گیری شد تا مقادیر میانگین به دست آید.

توبولوزای طبیعی سیستانچ برای بهبود عملکرد جنسی PHGS75% ECH 30% ACT 12%

نمونه برداری از بافت مغز

قبل از نمونه برداری از بافت، موش ها به طور آزاد با دسترسی آزاد به آب تغذیه شدند و مداخله دارویی برای 14 روز متوالی دریافت کردند. چهار موش در هر گروه انتخاب و به سرعت سر از بدن جدا شدند. SN (برگما: -2.75-mm-2.92mm) از هر حیوان جدا شد و روی یخ قرار گرفت. بافت‌های مغز با محلول کلرید سدیم 9/9% یخی شسته و روی کاغذ صافی قبل از نگهداری در دمای 80- درجه سانتی‌گراد خشک شدند. چهار موش از هر گروه به صورت داخل صفاقی بیهوش شدند و قفسه سینه آنها باز شد. سپس یک سوزن تزریق به بطن چپ هر حیوان وارد شد. برای برداشتن خون در سیستم گردش خون، زائده دهلیز راست بریده شد و به حیوان با نرمال سالین 4 درجه سانتیگراد تزریق شد تا زمانی که کبد رنگ پریده شود تا از پرفیوژن متوالی اطمینان حاصل شود. پس از شفاف شدن پساب دهلیز راست، هر حیوان با تثبیت کننده پارافورمالدئید 4 درصد پرفیوژن شد. پس از پرفیوژن، بافت مغز هر حیوان با دقت تشریح شد و در پارافورمالدئید 4 درصد به مدت 24 ساعت ثابت شد. سپس بافت‌های ثابت مغز در زیر آب جاری شستشو داده شدند، در یک سری محلول‌های اتانول آب‌گیری شدند و در محلول زایلن پاک شدند. به دنبال آن غوطه وری و جاسازی پارافین انجام شد.

تغییرات مقدار DA اندازه گیری شده توسط HPLC

نانوپودر SN از هر گروه در یک حمام یخ حاوی محلول کلرید سدیم 0.9٪ (نسبت 1:9) قرار داده شد. بافت مغز با استفاده از یک مختل کننده سلول اولتراسونیک هموژنیزه شد و برای بدست آوردن مایع رویی در 1200 دور در دقیقه به مدت 20 دقیقه در دمای 4 درجه سانتیگراد سانتریفیوژ شد. برای HPLC، یک ستون Hypersil AA-ODS (2.1 میلی متر × 200 میلی متر، 5 میکرومتر) در دمای ستون 30 درجه سانتی گراد استفاده شد. تشخیص فلورسانس در 280 نانومتر λex و 340 نانومتر λem انجام شد. حجم تزریق 10 میکرولیتر بود.

بیان TH، GDNF، GFR 1 و Ret توسط ایمونوهیستوشیمی شناسایی شد

مقاطع پارافینی (ضخامت 5 میکرومتر) از بافت مغز منفرد از هر حیوان جدا شد و در حمام آب گرم 4{12}}◦C قرار داده شد تا صاف شود و به لام های شیشه ای بچسبد. تمام اسلایدهای بافت در یک آون با دمای 60 درجه سانتیگراد به مدت 3 تا 6 ساعت انکوبه شدند و به دنبال آن موم زدایی زایلن، آبگیری اتانول گرادیان و بازیابی آنتی ژن با انکوباسیون در بافر اسید سیتریک و حرارت دادن در مایکروویو به مدت 20 دقیقه انجام شد. سپس اسلایدهای بافت در محلول 3% H2O2 در دمای اتاق به مدت 10 دقیقه انکوبه شدند. اسلایدهای بافت پس از سه بار شستشو در PBS، با سرم معمولی در یک محفظه بسته در دمای اتاق به مدت 20 دقیقه انکوبه شدند. رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمی طبق دستورالعمل سازنده انجام شد. یک تحلیلگر تصویر Motic Med 6.0 برای محاسبه مقدار چگالی نوری یکپارچه در سلول‌های رنگ‌آمیزی مثبت استفاده شد.

تجزیه و تحلیل وسترن بلات در بافت مغز موش

این مطالعه بیان پروتئین تیروزین هیدروکسیلاز (TH)، GDNF، GFR 1، Ret، Bcl2 و Bax را ارزیابی کرد. لیزات مغزی هر گروه به مدت 3{{1{12}}}} دقیقه روی یخ همگن شد و سپس سانتریفیوژ در دمای پایین، 20، 000 دور در دقیقه، در 4 ◦C برای 5 دقیقه برای جمع آوری مایع رویی. نمونه های پروتئین تحت فشار ثابت با استفاده از ژل SDS-PAGE 1{20}}% همانطور که در بالا توضیح داده شد جدا شدند. غلظت آنتی بادی اولیه: TH 0.15 mg/ml، GDNF 0.5 mg/ml، GFR 1 0.8 mg/ml، Ret 0.63 mg/ml، Bcl{18}}.34 mg/ml و Bax 0.11 mg/ml. روال کار مانند بالا بود.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA برای ضد پیری ضد آلزایمر PHGS75% ECH 30% ACT 12%

تحلیل آماری

در این تحقیق از نرم افزار آماری SPSS 20.0 برای پردازش و تجزیه و تحلیل داده ها استفاده شد. مقادیر پارامتر به صورت میانگین ± انحراف استاندارد (¯x ± S) بیان شد. برای تجزیه و تحلیل داده های تک عاملی از ANOVA استفاده شد. برای مقایسه گروه ها از LSD یا آزمون Games-Howell استفاده شد. پ< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

نتایج

اجزای فعال نانوپودر C. tubulosa

در محدوده اسکن 200-400 نانومتر، ECH در C. tubulosa و VER در 330 نانومتر حداکثر پیک جذب را داشتند که در عرض 20 دقیقه ظاهر شد. ICA حداکثر پیک جذب را در 270 نانومتر داشت و پس از 20 دقیقه ظاهر شد (شکل 1A). نتایج نشان داد که نمونه های منفی با تشخیص تداخلی نداشتند (شکل 1B). نمونه ها و شاهد پیک کروماتوگرافی یکسانی داشتند و نمونه منفی هیچ پیک کروماتوگرافی نداشت. این نشان داد که سایر مواد موجود در نمونه با جزء در حال اندازه گیری تداخلی ندارند. علاوه بر این، سه مولفه و قله های مجاور می توانند به خط پایه جدایی برسند و درجه جدایی بیشتر از 1.5 بود.

C. tubulosa نانوپودر MPP را کاهش داد+ -سمیت سلولی القا شده در سلول‌های MES23.5

زنده ماندن سلول های MES23.5 با افزایش غلظت MPP+ به طور قابل توجهی کاهش یافت. شکل 2F سمیت سلولی قابل توجه غلظت های مختلف MPP+ را نشان می دهد.

نانوپودر C. tubulosa سمیت سلولی ناشی از MPP{0}}را کاهش داد و زنده ماندن سلول‌های MES23.5 را افزایش داد. شکل 2G نشان می دهد که دوزهای نانوپودر C. tubulosa 10-250 میکروگرم بر میلی لیتر اثرات محافظتی وابسته به دوز روی سلول های MES23.5 تحت درمان با MPP اعمال می کند.

اثر سیتومورفولوژیکی نانوپودر C. tubulosa

سلول های نرمال MES23.5 چسبندگی سلولی خوبی داشتند و دوکی شکل با مرزهای سلولی و سیناپس های واضح بودند. سلول‌های MES23.5 آسیب‌دیده با MPP، چسبندگی و انقباض سلولی ضعیفی نشان دادند و بسیاری از آنها در رسانه‌ها با سیناپس‌های منقبض شده معلق شدند. این سلول‌ها با واکوئل‌هایی در داخل جمع، منقبض و گرد شدند و هسته‌ها متلاشی یا فرو ریختند. نانوپودر C. tubulosa در دوزهای مختلف باعث بهبود سیتومورفولوژی سلول‌های MES23.5 در درجات مختلف با بهبود چسبندگی سلولی و پاکسازی سیناپسی گروه حامل شد. سلول های MES23.5 در گروه درمان با دوز بالا C. tubulosa مورفولوژی شبیه به گروه کنترل طبیعی را نشان دادند (شکل 2A-E).

تأثیر نانوپودر C. tubulosa بر بیان TH و آپوپتوز در سلول ها

شکل 3 کاهش قابل توجهی را در بیان پروتئین TH در گروه وسیله نقلیه نشان می دهد. بیان پروتئین TH در گروه های تحت درمان با دوزهای مختلف C. tubulosa متفاوت افزایش یافت. با این حال، آزمایش LSD نشان داد که تفاوت معنی داری بین سه گروه تحت درمان وجود ندارد.

شکل 4 نتایج ارزیابی آپوپتوز را با استفاده از فلوسیتومتری نشان می دهد. میزان آپوپتوز در گروه حامل به طور معنی داری بیشتر از سایر گروه ها بود. سلول‌های تیمار شده با دوزهای مختلف نانوپودر C. tubulosa درجات مختلف کاهش نرخ آپوپتوز را در مقایسه با گروه حامل نشان دادند. سلول‌های گروه درمان با دوز متوسط ​​و بالا در مقایسه با سایر گروه‌های تیمار C. tubulosa بیشترین پیشرفت را در میزان آپوپتوز داشتند. تست LSD نشان داد که بین دو گروه درمان شده تفاوت معنی داری وجود ندارد اما بین گروه با دوز پایین نیز تفاوت معنی داری وجود دارد.

اثر نانوپودر C. tubulosa بر بیان پروتئین Bcl2/Bax در سلول ها

شکل 5 نشان می دهد که بیان پروتئین Bcl2 در سلول های گروه حامل در مقایسه با گروه کنترل طبیعی به طور قابل توجهی کمتر بود. در مقابل، بیان پروتئین Bax در سلول های گروه حامل به طور معنی داری بیشتر از گروه کنترل طبیعی بود. گروه های تیمار C. tubulosa افزایش بیان پروتئین Bcl2 و کاهش بیان پروتئین Bax را در سلول های MES23.5 تیمار شده با MPP نشان دادند. بین سه گروه تحت درمان، تفاوت معنی داری در آزمون LSD وجود داشت. این اثرات وابسته به دوز بودند.

تست های رفتاری

نتایج آزمایش شنا نشان داد که موش‌های گروه وسیله نقلیه مدت‌های ثابت نسبتاً طولانی داشتند که با گذشت زمان افزایش یافت. در روز 14، موش‌های گروه وسیله نقلیه به طور قابل‌توجهی مدت ماندگاری طولانی‌تری نسبت به موش‌های گروه کنترل عادی داشتند. مدت زمان ساکن موش ها در

دوز پایینC. توبولوزاگروه درمان تفاوت معنی داری با موش های گروه وسیله نقلیه نداشت. با این حال، مدت زمان ثابت موش ها در گروه درمان با دوز بالا C. tubulosa به طور قابل توجهی کمتر از موش های گروه وسیله نقلیه بود.

نتایج آزمایش میدان باز نشان می‌دهد که پس از آسیب ناشی از MPTP در موش‌ها، موش‌های گروه وسیله نقلیه کاهش قابل‌توجهی در توانایی خود برای فعالیت خود به خودی نشان دادند که توسط فرکانس پرورش نشان داده شده است. پس از یک 14-روز مدیریتنانوپودر C. tubulosaموش‌های گروه‌های درمانی با دوز متوسط ​​و بالا در مقایسه با موش‌های گروه وسیله نقلیه، فرکانس پرورش قابل‌توجهی بالاتری داشتند (شکل‌های 6A، B).

اثر نانوپودر C. tubulosa بر محتوای DA در موش

تغییرات در محتوای DA SN توسط HPLC تعیین شد. مشخص شد که محتوای DA در مغز گروه وسیله نقلیه به طور قابل توجهی کاهش یافته است. محتوای DA در مغز موش‌های PD در گروه درمان با دوز کم C. tubulosa تفاوت معنی‌داری با موش‌های گروه وسیله نقلیه نداشت. با این حال،درمان C. tubulosaسطوح DA را در مغز موش های PD به روشی وابسته به دوز افزایش داد. مغز موش های PD تحت درمان با دوز بالا C. tubulosa دارای محتوای DA به طور قابل توجهی بالاتر از مغز موش های گروه وسیله نقلیه بود (شکل 6C).

تأثیر نانوپودر C. tubulosa بر بیان TH در موش

تعداد سلول‌های TH مثبت و سطح بیان پروتئین TH در SN موش‌های PD القا شده با MPTP در مقایسه با موش‌های گروه کنترل کمتر بود. پس از درمان با C. tubulosa، تعداد سلول های TH مثبت و سطح بیان پروتئین TH در SN موش های PD القا شده با MPTP افزایش یافت، با تفاوت معنی داری بین گروه درمان با دوز بالا C. tubulosa و گروه وسیله نقلیه. توسط تست LSD; و بین سه گروه درمان شده تفاوت معنی داری وجود داشت (شکل 7).

اثر نانوپودر C. tubulosa بر بیان پروتئین GDNF و گیرنده های آن، GFR 1 و Ret در موش

بیان پروتئین GDNF و گیرنده های آن، GFR 1 و Ret، در سلول های رنگ آمیزی مثبت، با استفاده از ایمونوهیستوشیمی ارزیابی شد. از آنالیز وسترن بلات برای ارزیابی سطح بیان پروتئین در SN گروه‌های مختلف موش استفاده شد. یافته‌ها برای گروه‌های مختلف با استفاده از دو روش تشخیص مشابه بود. بیان GDNF و پروتئین های گیرنده آن، GFR 1 و Ret، در سلول های رنگ آمیزی مثبت در SN موش های گروه وسیله نقلیه، به طور قابل توجهی کمتر از موش های گروه کنترل طبیعی بود. دوزهای مختلف تیمار C. tubulosa تعداد سلول‌های GDNF-، GFR 1- و Ret مثبت را افزایش داد (شکل‌های 8A-S).

بیان پروتئین GDNF، GFR 1 و Ret در SN موش های گروه وسیله نقلیه به طور قابل توجهی کمتر از موش های گروه کنترل بود. افزایش غلظت درمان ازC. tubulosa nanopowerبه طور قابل توجهی بیان این پروتئین ها را افزایش داد. بیان پروتئین GDNF، GFR 1 و Ret در SN موش های گروه درمان با دوز بالا C. tubulosa به طور قابل توجهی بیشتر از موش های گروه وسیله نقلیه بود (P< 0.01; Figures 8T, U). 

تأثیر نانوپودر C. tubulosa بر بیان پروتئین Bcl2/Bax در موش

بیان پروتئین Bcl2 به طور قابل توجهی کاهش یافت و بیان پروتئین Bax به طور قابل توجهی در SN موش های گروه حامل افزایش یافت (P< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

بحث

PD و آپوپتوز

PD یک اختلال عصبی است. به گفته ژانگ و همکاران. (2005)، شیوع 10.7 درصد در جمعیت چینی بالای 55 سال و 1.67 درصد در افراد بالای 65 سال است. تعداد بیماران PD سالانه با سرعت بخشیدن به پیری جهانی افزایش یافته است و بار مالی سنگینی بر خانواده های بیماران وارد می کند. و جامعه در کل در مغز، نورون‌های دوپامینرژیک عمدتاً در سنتز و ترشح DA نقش دارند. آنها به طور گسترده در سیستم عصبی مرکزی توزیع می شوند و عمدتاً در SN (80٪) قرار دارند. TH آنزیم کلیدی محدود کننده سرعت برای سنتز DA است. بنابراین، مهار فعالیت TH باعث کاهش سنتز DA می شود (Huot and Parent, 2007). تغییرات اصلی پاتولوژیک و بیوشیمیایی PD عبارتند از آپوپتوز نورون های دوپامینرژیک در SN، کاهش قابل توجه DA سیاه و سفید، و تشکیل اجسام Lewy در نورون های دوپامینرژیک (دکستر و جنر، 2013). علت PD شامل عوامل ژنتیکی مرتبط، عوامل محیطی و پیری سیستم عصبی است (Alam et al., 2005). پاتوژنز PD در پزشکی مدرن نامشخص است. از اواخر دهه 1960، درمان جایگزینی لوودوپا با موفقیت برای درمان PD مورد استفاده قرار گرفت و به عنوان نقطه عطف اصلی در درمان PD شناخته شد. با این حال، استفاده طولانی مدت از این درمان باعث عوارض جانبی می شود و درمان علل زمینه ای PD را درمان نمی کند (دل سوربو و آلبانیز، 2008). بنابراین، تحقیقات فعال برای داروهای جدید یا روش‌های درمانی که محافظت از نورون‌های دوپامینرژیک را هدف قرار می‌دهند برای درمان PD بسیار مهم است.

در مطالعات قبلی، استفاده از برچسب گذاری انتهایی dUTP با واسطه دئوکسی نوکلئوتیدیل ترانسفراز نشان داد که 0.6٪ تا 4.8٪ از نورون های دوپامینرژیک در SN بیماران PD آپوپتوز را نشان دادند (Mochizuki et al., 1996). میکروسکوپ الکترونی ویژگی‌های آپوپتوز، از جمله تراکم رنگی و اجسام آپوپتوز در سلول‌های دوپامینرژیک را نشان داد (Anglade et al., 1997). تامپکینز و همکاران (1997) یک تجزیه و تحلیل فراساختاری از کالبد شکافی بافت مغز از بیماران مبتلا به PD، AD، و بیماری منتشر بدن Lewy (DLBD) انجام داد. آنها اجسام آپوپتوز را در لایه متراکم SN در بیماران PD و DLBD یافتند که شواهد قطعی از آپوپتوز عصبی در PD و بیماری های مرتبط با آن را ارائه می دهد. بنابراین، کاهش یا سرکوب آپوپتوز در نورون های دوپامینرژیک برای درمان PD اساسی است.

مطالعات قبلی نشان داد که MPTP علائم شبه PD را القا می کند. MPTP از سد خونی مغزی عبور می کند و توسط مونوآمین اکسیدازهای نوع B در آستروسیت ها متابولیزه می شود. متعاقباً به MPP سمی تبدیل می شود که در میتوکندری نورون های دوپامینرژیک از طریق دریافت پروتئین ناقل DA تجمع می یابد. بنابراین رادیکال های آزاد اکسیژن اضافی تولید می کند که فعالیت پیچیده I زنجیره تنفسی میتوکندری و سنتز ATP را مهار می کند. این رویدادها تشکیل رادیکال‌های آزاد و واکنش‌های استرس اکسیداتیو را بیشتر ترویج می‌کنند و در نهایت منجر به انحطاط و مرگ نورون‌های دوپامینرژیک می‌شوند. از این رو، این مطالعه از MPP + برای ایجاد یک وسیله نقلیه آزمایشگاهی در نورون‌های دوپامینرژیک MES23.5 و MPTP برای القای یک موش وسیله نقلیه برای تأیید متقابل استفاده کرد. با توجه به نتایج سنجش MTT، MPP+ به طور قابل‌توجهی زنده‌مانی سلول‌های MES23.5 را کاهش داد، که نشان می‌دهد MPP+ برای نورون‌های دوپامینرژیک سیتوتوکسیک است. نتایج همچنین نشان داد که C. tubulosa به طور موثر بیان پروتئین های ضد آپوپتوز را افزایش داده و از افزایش آپوپتوز ناشی از MPP جلوگیری می کند.

PD و GDNF

GDNF یک عامل نوروتروفیک است که اولین بار توسط Lin و همکارانش جدا شد. (1993). لین و همکاران (1993) همچنین نشان داد که GDNF اثرات تغذیه ای خاصی بر نورون های دوپامینرژیک در مغز میانی موش ها دارد. GDNF، نورتورین (NTN)، پرسفین (PSP) و آرتمین (ART) خانواده GDNF را تشکیل می دهند. آنها از نظر ساختاری مشابه و از نظر عملکردی پروتئین های ترشحی مرتبط هستند (کوتزباوئر و همکاران، 1996؛ بالو و همکاران، 1998؛ میلبراند و همکاران، 1998؛ وودبری و همکاران، 1998).

گیرنده GDNF از دو جزء تشکیل شده است. اولین جزء، GFR، به غشای بیرونی گلیکوزیل فسفاتیدیل‌لینوزیتول (GPI) ثابت شده و به سطح کانکسین متصل می‌شود. جزء دوم پروتئین Ret است. تحقیقات نشان داده است که چهار نوع مختلف GFR وجود دارد: GFR 1، GFR 2، GFR 3 و GFR 4. GFR 1 یک گیرنده با میل ترکیبی بالا برای GDNF است (Onochie et al., 2000; Chen et al., 2001; Lindahl. و همکاران، 2001). پروتئین Ret یک گیرنده عملکردی GDNF است. مولکول همودایمر GDNF مستقیماً به GFR 1 متصل می شود تا کمپلکس تشکیل دهد و با Ret برهمکنش کند و در نتیجه دیمر شدن و فعال شدن Ret انجام شود. به دلیل اتوفسفوریلاسیون Ret، Ret چندین مسیر سیگنالینگ رایج TH را فعال می کند. در غیاب پروتئین Ret، GDNF علاوه بر بیان mRNA و فعالیت عملکردی C-fos از طریق پروتئین گیرنده آن، GFR 1، باعث فسفوریلاسیون پروتئین MAPK، PI{10}} و PLC- می شود (He et al., 2008).

مطالعات نشان داده‌اند که GDNF قوی‌ترین اثر محافظتی را بر نورون‌های دوپامینرژیک دارد (Rangasamy et al., 2010; Campos et al., 2012). در وسایل نقلیه ای که از MPTP و 6-هیدروکسی دوپامین (6-OHDA) برای ایجاد آسیب در نورون های دوپامینرژیک استفاده می کنند، GDNF از نورون های دوپامینرژیک با کاهش آپوپتوز و ترویج رشد آکسونی برای القای تمایز سلول های بنیادی محافظت می کند (Lucas et al., 2012; لیترل و همکاران، 2013). لین و همکاران (1993) نشان داد که GDNF به طور خاص زنده‌مانی، تمایز و رشد آکسونی نورون‌های دوپامینرژیک را برای ترویج جذب DA در نورون‌ها ارتقا می‌دهد. این مطالعه همچنین نشان داد که GDNF نه تنها از سمیت حاد جلوگیری می‌کند، بلکه سمیت طولانی‌مدت MPP+ یا 6-OHDA را در نورون‌های دوپامینرژیک کاهش می‌دهد، علاوه بر این از مرگ سلولی در سلول‌های تحت استرس یا آسیب‌دیده جلوگیری می‌کند (Yu et al., 2010). علاوه بر این، GDNF تکثیر و تمایز سلول های بنیادی عصبی را به سمت نورون های دوپامینرژیک در مغز میانی ارتقا داد (Lindsay، 1995) تا نورون های دوپامینرژیک را از انحطاط رتروگراد نجات دهد (Hong-Juan et al., 2011).

مطالعات نشان داده اند که بیان GDNF در SN به طور قابل توجهی در وسایل نقلیه حیوانی کاهش یافته است (Yang et al., 2010). این نشان می دهد که ممکن است یکی از مکانیسم های پاتوژنز در موش های صحرایی PD باشد. تزریق 5 تا 15 میکروگرم در روز GDNF به بطن جانبی یا جسم مخطط یک حیوان وسیله نقلیه ناشی از MPTP برای سه ماه متوالی باعث ترمیم نیگروستریاتال سیستم دوپامینرژیک در حیوان وسیله نقلیه شد (Grondin et al., 2002). مطالعات درمان GDNF برای PD در وسایل نقلیه حیوانی نشان داده است که تزریق داخل مغزی GDNF به نواحی مختلف مغز، مانند SN، هسته دمی، و بطن جانبی، اختلالات حرکتی مرتبط با مدل های حیوانی PD، از جمله کاهش فعالیت حرکتی، سفتی عضلانی و لرزش (گروندین و همکاران، 2002). با این حال، GDNF نمی تواند مستقیماً از سد خونی مغزی عبور کند. بنابراین، تزریق موضعی مغزی GDNF خطر و مشکلات قابل توجهی در کاربرد بالینی دارد. کاربردهای معرفی GDNF اگزوژن از طریق میکروسفرهای با رهش کنترل‌شده، کپسول‌های رهش پایدار و ژن‌های ویروسی هنوز در حال مطالعه هستند (لیانگ و همکاران، 2010؛ یانگ و همکاران، 2010؛ کیائو و همکاران، 2012). با توجه به محدودیت های تکنیک های مختلف برای معرفی GDNF اگزوژن به مغز، عوامل محافظت کننده عصبی که باعث آزادسازی GDNF درون زا می شوند برای کاربرد بالینی قابل توجه هستند.

PD وC. tubulosaنانو پودر

PD در میانسالان و افراد مسن شایع تر است. تئوری TCM معتقد است که PD در درجه اول در مغز قرار دارد و عمدتاً به دلیل کمبود کبد و کلیه، علاوه بر انرژی حیاتی و نارسایی خون است. بر اساس این نظریه، درمان PD باید بر تقویت کلیه و مغز استخوان تمرکز کند.یانگ و همکاران (2010)از کارآزمایی‌های بالینی تصادفی، دوسوکور و کنترل‌شده با دارونما استفاده کرد و دریافت که درمان ترکیبی با استفاده از مادوپار و دستور العمل‌های تقویت‌کننده کلیه، اختلالات حرکتی بیماران PD را کاهش می‌دهد. نتیجه درمان بهتر از یک درمان منفرد با استفاده از Madopar بود. اثربخشی درمانی تک درمانی TCM یا تجویز ترکیبی در PD در مدل های حیوانی PD و کاربردهای بالینی تایید شده است. کاربردهای TCM برای تقویت کلیه ها و بهبود گردش خون، دوز تک درمانی برای PD با استفاده از Madopar را کاهش داد. برخی از مطالعات نشان داده‌اند که TCM علائم PD را بهبود می‌بخشد و از نورون‌های دوپامینرژیک محافظت می‌کند، که ممکن است ارتباط نزدیکی با ارتقای بیان درون‌زای GDNF داشته باشد.Hong-Juan et al., 2011; کیائو و همکاران، 2012).

ترکیب تقویت کننده کلیه مورد استفاده در این مطالعه،C. tubulosaنانوپودر، حاویسیستانچاپیمدیوم، وریزوم چندگوناتی. تحقیقات مدرن نشان می دهد که ترکیب شیمیایی ازسیستانچECH است که از نورون های دوپامینرژیک در SN در موش های PD القا شده با MPTP محافظت می کند و از کاهش DA و ناقل DA جلوگیری می کند.ژائو و همکاران، 2010). علاوه بر این، از کاهش 6-OHDA ناشی از DA جلوگیری می‌کند و از نورون‌های دوپامینرژیک مخطط محافظت می‌کند.چن و همکاران، 2007). اپیمدیوم فعال شدن کاسپاز{0}} را مهار می کند و نقش محافظت کننده عصبی را ایفا می کند.لیو و همکاران، 2011). فلاونوئیدهای اپیمدیوم به طور موثری تکثیر و تمایز سلول های بنیادی عصبی را تقویت می کنند.یائو و همکاران، 2010).

در این مطالعه،C. tubulosaنانوپودر با افزایش MPP مخالفت کرد+القا آپوپتوز به روشی وابسته به دوز. این به طور قابل توجهی بیان TH در را بهبود بخشیددرونکشتگاهیوسیله نقلیه و اثرات ضد آپوپتوزی قابل توجهی در نورون های دوپامینرژیک داشت. موش های وسیله نقلیه ناشی از MPTP اختلالات رفتاری را نشان دادند و به طور قابل توجهی بیان TH را در بافت های مغز میانی و سطوح DA کاهش دادند، که ویژگی های پاتولوژیک معمولی PD هستند. دوزهای مختلف ازC. tubulosaنانوپودر مدت زمان ثابت را کوتاه کرد، فعالیت های خودمختار را افزایش داد، اختلالات رفتاری را بهبود بخشید، سطح DA را در مغز افزایش داد و بیان TH را در وسایل نقلیه افزایش داد. این نتایج نشان داد کهC. tubulosaنانوپودر اثرات محافظتی در نورون‌های دوپامینرژیک اعمال می‌کند و در نتیجه اختلالات رفتاری وسایل نقلیه را بهبود می‌بخشد. دوزهای مختلف ازC. tubulosaنانوپودر بیان پروتئین GDNF و پروتئین های گیرنده آن را در مغز موش های وسیله نقلیه افزایش داد. با دوز بالاC. tubulosaدرمان به طور قابل توجهی بیان Bcl2 را افزایش داد و بیان Bax را کاهش داد، که نشان می دهدC. tubulosaنانو پودرممکن است بیان و ترشح GDNF را در مغز موش آسیب دیده با MPTP تقویت کند. علاوه بر این، ممکن است اثرات محافظتی عصبی در نورون‌های دوپامینرژیک داشته باشد و آپوپتوز عصبی را از طریق نقش‌های حمایتی نوروتروفیک GDNF به حداقل برساند.

این مطالعه نشان داد کهC. tubulosaنانوپودر اثرات محافظتی در نورون های دوپامینرژیک در هر دو اعمال کرددرونکشتگاهیوin vivoو بیان TH را برای بهبود محتوای DA افزایش داد. همچنین اختلالات رفتاری را در موش‌های وسیله نقلیه ناشی از MPTP بهبود بخشید، بیان پروتئین GDNF و پروتئین‌های گیرنده آن را در SN تنظیم کرد، و اثرات ضد آپوپتوتیک در موش‌های PD داشت. مکانیسم زیربنایی اثرات بالینیC. tubulosaنانوپودر در PD ممکن است شامل افزایش محتوای GDNF درون‌زا در مغز و در نتیجه کاهش آسیب به نورون‌های دوپامینرژیک باشد.

توبولوزای طبیعی سیستانچی برای بهبود عملکرد جنسی PHGS75% ECH 30% ACT 12