Cistanches Herba افزایش وزن موش های چاق ناشی از رژیم غذایی پرچرب را احتمالاً از طریق جداسازی میتوکندری کاهش می دهد.

تماس: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ایمیل:audrey.hu@wecistanche.com

هوی شان ونگ، جیهانگ چن، پو کوان لئونگ، هوی یان لیونگ، وینگ من چان، کام مینگ کو

* بخش علوم زیستی، دانشگاه علم و فناوری هنگ کنگ، هنگ کنگ، چین.

خلاصه:

یک کسر نیمه خالص جدا شده ازسیستانچهربا(HCF1)، قبلاً مشخص شده بود که جداسازی میتوکندری را در سلول‌های H9c2 و در قلب موش‌ها ایجاد می‌کند. بنابراین، ما فرض کردیم که HCF1 یک اثر کاهش وزن در برابر چاقی ناشی از رژیم غذایی پرچرب (HFD) ایجاد می کند. برای آزمایش این فرضیه، یک مدل موش از چاقی ناشی از HFD ایجاد شد و اثرات HCF1 بر روی موش‌های تغذیه شده با رژیم غذایی طبیعی (ND) و HFD مورد بررسی قرار گرفت. در این مطالعه، درمان طولانی مدت HCF1 اثر کاهش وزن را در برابر چاقی ناشی از HFD در موش‌های نر و ماده ایجاد کرد. کاهش وزن ناشی از HCF{13} با بهبود حساسیت به انسولین در حیوانات تغذیه شده با HFD مرتبط بود. برای درک مکانیسم عمل زیربنایی اثر کاهش وزن ارائه شده توسط HCF1، اثرات آن بر جداسازی میتوکندری مورد بررسی قرار گرفت. یک مطالعه مقایسه‌ای با کلستیرامین (CT)، یک جداکننده اسید صفراوی، نیز انجام شد. یافته‌ها نشان داد که کاهش وزن ناشی از HCF احتمالاً با افزایش مصرف انرژی، احتمالاً از طریق القای جداسازی میتوکندری در عضله اسکلتی موش، واسطه شده است. بنابراین، یافته‌های ما استفاده بالقوه HCF1 را برای جلوگیری از چاقی و پیامدهای سلامت مرتبط مانند دیابت، بیماری‌های قلبی عروقی و سندرم متابولیک پیشنهاد می‌کند.

کلید واژه ها: Cistanches Herba، کنترل وزن،جداسازی میتوکندری،پروتئین جداکننده میتوکندری 3

مزایای سلامتی cistanche tubolosa

Chengdu Wecistanche عمدتاً محصولات Cistanche را برای یک زندگی سالم تولید می کند.

مقدمه

چاقی با تجمع غیرطبیعی چربی در بافت چربی و سایر اندام ها مشخص می شود که اثرات نامطلوبی بر سلامتی ایجاد می کند. یافته‌های کنونی نشان داد که سبک زندگی بی‌تحرک و تغییر در ترکیب رژیم غذایی در جوامع مرفه باعث اپیدمی چاقی شده و همزمان با افزایش بروز بیماری‌های مزمن غیرواگیر مرتبط با چاقی مانند سندرم متابولیک (Shi et al., 2012) . نظرسنجی ملی سلامت و تغذیه (NHANES) که در سال 2007 انجام شد، نشان داد که شیوع چاقی در جهان بیش از 30 درصد است و انتظار می‌رود طی دو دهه آینده 33 درصد افزایش یابد (فینکلشتاین و همکاران، 2012). شروع چاقی همچنین به جمعیت های جوان تغییر می کند، همانطور که با روند اضافه وزن و چاقی در کودکان و نوجوانان منعکس می شود (مک تیگ، گرت و پاپکین، 2002). این یافته‌ها بار بالقوه مراقبت‌های پزشکی برای چاقی و پیامدهای سلامتی مرتبط را پیش‌بینی می‌کنند که نیاز فوری به کنترل اندازه جمعیت چاق را نشان می‌دهد.

مدیریت چاقی مستلزم یک مداخله طولانی مدت و یک رویکرد چند رشته ای است. با توجه به اپیدمی چاقی، جستجو برای مداخلات غیردرمانی و/یا درمانی امکان پذیر حوزه تحقیقات فشرده بوده است. این استراتژی عمدتاً بر ایجاد تعادل انرژی از طریق افزایش مصرف انرژی یا کاهش مصرف انرژی متمرکز است. در میان رویکردهای مختلف که شامل جایگزینی رژیم غذایی، ورزش، مهار جذب روده ای و فعال شدن سیستم عصبی سمپاتیک، القای جداسازی میتوکندری، یا با استفاده از جداکننده شیمیایی یا با القای پروتئین های جداکننده میتوکندری (Cerqueira، Laurindo، و کوالتوفسکی، 2011؛ ​​کلافام و همکاران، 2000، ثابت شده است که یک وسیله موثر برای کاهش وزن است (کلافام و همکاران، 2000؛ دیهل و هوک، 1999؛ هارپر، دیکنسون، و برند، 2001؛ لی و همکاران، 2000). جداسازی میتوکندری به فرآیندی اطلاق می‌شود که باعث جدایی بین فرآیندهای انتقال الکترون تولیدکننده انرژی و فسفوریلاسیون ADP در میتوکندری می‌شود. با ارائه یک مسیر رسانایی پروتون جایگزین، جداسازی میتوکندری باعث اتلاف شیب پروتون و سرعت مصرف اکسیژن سریع‌تر می‌شود (برند و همکاران، 2005). در شرایط جداسازی، کاهش سنتز ATP با کاهش پتانسیل غشای میتوکندری همراه است و انرژی پتانسیل ذخیره شده در گرادیان پروتون به صورت گرما تلف می شود. این چرخه بیهوده انتقال پروتون نسبت بالایی از انرژی متابولیک را در بافت های مختلف مصرف می کند، به ویژه در ماهیچه های اسکلتی که حدود 20 درصد از کل انرژی تولید شده در متابولیسم را مصرف می کند (Chan, Wei, Chigurupati, & Tu, 2010؛ Korshunov, Skulachev, & Starkoc. ، 1997). مدولاسیون نشت پروتون میتوکندری باعث افزایش سرعت متابولیسم پایه می شود که به بخش قابل توجهی از انرژی مصرفی روزانه کمک می کند و به دنبال آن استفاده از مولکول های سوخت (مانند اسیدهای چرب) افزایش می یابد و بنابراین باعث کاهش وزن می شود (Ricquier & Bouillaud, 2000). ).

Cistanches Herba، یک گیاه کامل خشک شده از Cistanche deserticola YC Ma، یک گیاه تقویت‌کننده یانگ در طب سنتی چینی است. این گیاه همچنین صدها سال است که در چین به عنوان یک غذای سالم برای درمان کمبود کلیه استفاده می شود. یافته‌های اخیر ما نشان داد که یک بخش نیمه خالص‌شده از Cistanches Herba (HCF1) باعث جدا شدن میتوکندری در سلول‌های H9c2 و در قلب موش‌ها شد (Wong & Ko, 2013). همچنین نشان داده شد که درمان طولانی‌مدت HCF1 (در دوزهای روزانه 1.14 و 11.4 میلی‌گرم بر کیلوگرم؛ 14 روز متوالی) اثر جداکننده‌ای روی میتوکندری‌های جدا شده از کلیه و کبد در موش‌ها ایجاد کرد، همانطور که به طور غیرمستقیم با کاهش سطح ATP در این موش‌ها نشان داده شد. بافت ها (داده های منتشر نشده). با توجه به اینکه القای جداسازی میتوکندری وسیله ای موثر برای کاهش وزن است (کلافام و همکاران، 2000؛ دیهل و هوک، 1999؛ هارپر و همکاران، 2001؛ لی و همکاران، 2000)، ما فرض کردیم که HCF1 نیز تولید می کند. جداسازی میتوکندری در عضله اسکلتی، با کاهش وزن در نتیجه. برای آزمایش این فرضیه، یک مدل موش از چاقی ناشی از رژیم غذایی پرچرب (HFD) ایجاد شد و اثرات HCF1 بر روی موش‌های تغذیه شده با رژیم غذایی معمولی (ND) و HFD مورد بررسی قرار گرفت. علاوه بر این، یک مطالعه مقایسه ای بین اثرات HCF1 و کلستیرامین (CT) جداکننده اسید صفراوی (Chen et al., 2010; Yamato et al., 2012) نیز برای مشخص کردن اثر کاهش وزن ایجاد شده توسط HCF1 انجام شد.

ساقه سیستانچ

2. مواد و روشها

2.1. عصاره گیری گیاهی

Cistanches Herba، گیاه کامل خشک شده Cistanches deserticola YC Ma (Orobanchaceae)، از یک فروشنده گیاهی محلی (لی هونگ کی) خریداری شد. این گیاه توسط تامین کننده تایید شد و یک نمونه کوپن (HKUST00301) در بخش علوم زندگی، دانشگاه علم و فناوری هنگ کنگ (HKUST) سپرده شد. عصاره اتانولی Cistanches Herba با استخراج اتانولی از مواد گیاهی آسیاب شده با حرارت دادن تحت رفلاکس در دمای 78 درجه به مدت 2 ساعت، همانطور که قبلاً توضیح داده شد (Leung & Ko, 2008)، با بازده 14 درصد (وزنی/وزنی) به دست آمد. عصاره بیشتر با استفاده از کروماتوگرافی سیلیکاژل تکه تکه شد (Wong & Ko, 2013). HCF1 با بازده استخراج 14/1 درصد بدست آمد. عصاره با تبخیر حلال تحت فشار کاهش یافته در دمای 50 درجه خشک شد و عصاره خشک شده تا زمان استفاده در دمای 20- درجه نگهداری شد.

2.2. مواد شیمیایی

معرف سنجش Bio-Rad از آزمایشگاه های Bio-Rad (ریچموند، کالیفرنیا، ایالات متحده آمریکا) خریداری شد. تری گلیسیرید LabAssay™ (290-63701)، کلسترول LabAssay™ (294-65801)، و کیت آزمایش HDL-کلسترول E (431-52501) از Wako (اوزاکا، ژاپن) خریداری شد. آنتی بادی ضد UCP3 (E-18) (کاتالوگ # sc-31387) ​​از بیوتکنولوژی سانتا کروز (سانتا کروز، کالیفرنیا، ایالات متحده آمریکا) خریداری شد. تمام مواد شیمیایی دیگر از سیگما (سنت لوئیس، MO، ایالات متحده آمریکا) خریداری شد.

2.3. مراقبت از حیوانات

موش های ICR (8 هفته؛ 30-35 گرم برای نرها و 25-30 گرم برای ماده ها) تحت یک چرخه تاریکی/روشنایی 12- ساعت در یک اتاق کنترل شده با هوا/رطوبت در حدود ۲۲ درجه نگهداری شدند و اجازه غذا و آب به طور آزاد در مراکز مراقبت از حیوانات و گیاهان (APCF) در HKUST. تمام مراحل آزمایشی توسط کمیته تمرین تحقیقاتی (HKUST) تایید شد (تصویب پروتکل حیوانی شماره 2013049؛ تاریخ تایید: 25 سپتامبر 2013؛ مدت آزمایش: 3 سال).

افزایش عمر cistanche

2.4. پروتکل درمان

برای بررسی اثر HCF1 بر چاقی ناشی از HFD، موش‌های نر یا ماده ICR به‌طور تصادفی به هشت گروه با 10 تا 15 موش در هر گروه تقسیم شدند: (1) کنترل رژیم غذایی طبیعی (ND، 13 درصد انرژی حاصل از چربی). (2) ND به علاوه دوز پایین HCF1 (HCF1 L) (در دوز روزانه 1.5 میلی گرم بر کیلوگرم). (3) ND به علاوه دوز متوسط ​​HCF1 (HCF1 M) (در دوز روزانه 15 میلی گرم بر کیلوگرم). (4) ND به علاوه دوز بالای HCF1 (HCF1 H) (در دوز روزانه 45 میلی گرم بر کیلوگرم). (5) HFD (60 درصد انرژی مشتق شده از چربی؛ خریداری شده از Research Diet Inc.، محصول شماره D12492) کنترل؛ (6) HFD به علاوه HCF1 L. (7) HFD به علاوه HCF1 M; و (8) HFD به علاوه HCF1 H. از آنجا که تفاوت های جنسیتی در پاسخگویی به رژیم غذایی ناشی از تغییرات وزن بدن و مداخلات کاهش وزن در موش ها و انسان ها گزارش شد (رودریگز و پالو، 2004؛ رودریگز، کوودو کولی، روکا، و پالو، 2001)، ما علاقه مند به بررسی اثرات HCF1 بر روی موش های نر و ماده بودیم. دوزهای HCF1 از دوزهای مؤثر آن برای القای قلب های موش صحرایی جداکننده میتوکندری به دست آمد (Wong & Ko, 2013). در گروه‌های درمان همزمان HCF1، موش‌ها با HCF1 5 روز در هفته به مدت 8 هفته (یعنی 40 دوز) به صورت داخل معده تجویز شدند. موش های کنترل فقط وسیله نقلیه (روغن زیتون) دریافت کردند. وزن بدن و مصرف غذای موش ها در طول دوره آزمایش به صورت هفتگی کنترل شد. تغییرات در وزن بدن با محاسبه مساحت زیر منحنی (AUC) نمودار نمودار درصد وزن اولیه بدن در برابر زمان (هفته 1-8) اندازه‌گیری شد و در واحدهای دلخواه بیان شد. نمونه خون 24 ساعت پس از آخرین دوز HCF1 از موش های شبانه روزه دار و بیهوش با فنوباربیتال با سوراخ قلبی گرفته شد. سپس موش ها با دررفتگی دهانه رحم قربانی شدند. نمونه‌های عضله گاستروکنمیوس برای تجزیه و تحلیل بیوشیمیایی بیشتر برداشته شد. پدهای چربی (غدد جنسی، خلفی صفاقی و چربی مزانتریک) تشریح و وزن شدند. نسبت وزن یک پد چربی خاص به وزن بدن تخمین زده شد و به عنوان شاخص چربی بیان شد. برای بررسی اثر CT بر روی موش های نر چاق تغذیه شده با HFD، موش های نر به صورت داخل معده با CT (معلق در آب) با دوز روزانه 300 میلی گرم بر کیلوگرم تجویز شدند.

2.5. آماده سازی نمونه

نمونه‌های پلاسما، هموژنه‌های ماهیچه‌های اسکلتی (کسری بدون هسته)، و میتوکندری عضله اسکلتی همانطور که قبلاً توضیح داده شد به‌دست آمدند (Leong et al., 2013).

2.6. تجزیه و تحلیل بیوشیمیایی

2.6.1. محتوای گلوکز و لیپید پلاسما

سطوح گلوکز پلاسما با کیت سنجش گلوکز (هگزوکیناز) اندازه گیری شد (سیگما، سنت لوئیس، MO، ایالات متحده). مقدار گلوکز با افزودن مخلوط واکنش حاوی 1.5 میلی‌مولار NAD، 1.{3}} میلی‌مولار ATP، 1.0 واحد در میلی‌لیتر هگزوکیناز و 1.0 واحد در میلی‌لیتر ارزیابی شد. میلی لیتر گلوکز{8}فسفات دهیدروژناز. تغییرات جذب در طول موج 340 نانومتر به روش اسپکتروفتومتری توسط شمارنده چند برچسبی Victor V3 (Perkin Elmer، Santa Clara، CA، USA) بررسی شد.

تری گلیسیرید پلاسما (TG)، کلسترول تام (TC) و لیپوپروتئین کلسترول با چگالی بالا (HDL) با استفاده از کیت های سنجش اندازه گیری شد: TG: LabAssayTM تری گلیسیرید، TC: LabAssayTM کلسترول. HDL-C: کیت تست HDL-کلسترول E. محتوای TG، TC و HDL با افزودن معرف های کروموژن ارائه شده توسط کیت های سنجش مربوطه ارزیابی شد. تغییرات جذب در طول موج 600 نانومتر بررسی شد (صدیقه، حمید، اررشید، آکتر، و چودوری، 2010). سطح لیپوپروتئین-کلسترول با چگالی کم (LDL) با فرمول فریدوالد برآورد شد:

LDL{0}} TC-( HDL به علاوه TG/5)

2.6.2. فعالیت فسفوفروکتوکیناز (PFK) در عضله اسکلتی

فعالیت PFK با مخلوط کردن یک مخلوط واکنش حاوی 1 میلی‌مولار فروکتوز-6-فسفات، 1 میلی‌مولار ATP، 0.5 میلی‌مولار NADH، 2 میلی‌مولار در میلی‌لیتر آلدولاز، 2 میلی‌مولار بر میلی‌لیتر تریوسفسفات ایزومراز، 2 میلی‌مولار ارزیابی شد. / میلی‌لیتر گلیسروفسفات دهیدروژناز در بافر سنجش (50 میلی‌مولار Tris-HCl، 5 میلی‌مولار MgCl2، 5 میلی‌مولار (NH4)2SO4، pH 7.4) با کسر بدون هسته (50 میکروگرم پروتئین در میلی‌لیتر) عضله اسکلتی در حجم نهایی 200 میکرولیتر سپس اکسیداسیون NADH با نظارت بر تغییرات جذب در 340 نانومتر اندازه‌گیری شد (Coelho, Costa, & Sola-Penna, 2007).

2.6.3. فعالیت سیترات سنتاز (CS)

یک مخلوط واکنش برای اندازه‌گیری فعالیت CS با مخلوط کردن {{0}}. 1 M بافر Tris (pH 8.{4}})، 0 تهیه شد.058 میلی‌مولار استیل -CoA و 0.1 میلی‌مولار 5،5'-دیتیوبیس-(2-نیتروبنزوئیک اسید) (DTNB). واکنش با افزودن اگزالواستات (غلظت نهایی: 0.5 میلی مولار) آغاز شد. جذب در 412 نانومتر هر 30 ثانیه در 30 درجه به مدت 3 دقیقه ثبت شد (کارتر، رنی، همیلتون، و تارنوپولسکی، 2001؛ هالووی، بونن، و اسپریت، 2009).

مزایای سلامتی cistanche tubolosa

2.6.4. فعالیت هیدروکسی آسیل کوآنزیم A دهیدروژناز (-HAD).

فعالیت -HAD با مخلوط کردن مخلوط واکنش حاوی 100 میکرومولار استواستیل-CoA و 100 میکرومولار -NADH در بافر سنجش (بافر 100 میلی‌مولار پتاسیم فسفات با 2 میلی‌مولار اتیلن دی آمین تتراستیک اسید (EDTA)، pH 7.3 اندازه‌گیری شد. تغییرات جذب در 340 نانومتر در دمای 30 درجه به مدت 2 دقیقه بررسی شد (Holloway et al., 2006).

2.6.5. فعالیت کارنیتین پالمیتویل ترانسفراز (CPT).

ارزیابی فعالیت CPT بر اساس تولید CoA-SH کاتالیز شده با CPT از پالمیتیل-CoA بود. واکنش با افزودن ال-کارنیتین (غلظت نهایی 6 میکرومولار) به مخلوط واکنش (16 میلی‌مولار Tris، 2.5 میلی‌مولار EDTA، 2 میلی‌مولار DTNB و 5{12}} میکرومولار پالمیتویل-CoA، pH 8.0) آغاز شد. جذب در 412 نانومتر در دمای 30 درجه به مدت 180 ثانیه بررسی شد. ضریب خاموشی میلی مولار 13.6 میلی مولار-1 سانتی متر-1 برای 5'-تیو{22}}نیتروبنزوات (محصول نهایی) برای تخمین فعالیت آنزیم استفاده شد. یک واحد فعالیت CPT به عنوان مقدار آنزیمی که 1 نانومول CoA-SH را در 1 دقیقه کاتالیز می کند، تعریف می شود (Karlic, Lohninger, Koeck, & Lohninger, 2002).

2.6.6. تنفس میتوکندریایی

نرخ تنفس در میتوکندری های جدا شده از عضله اسکلتی موش همانطور که توسط Wong و Ko (2{13}}13) توصیف شد، تعیین شد. به طور خلاصه، تنفس میتوکندریایی توسط یک الکترود نوع کلارک (Hansatech Instruments، Norfolk) در درجه 3 به صورت پلاروگرافی اندازه گیری شد. کسر میتوکندری (1 میلی‌گرم پروتئین در میلی‌لیتر) در بافر تنفس (30 میلی‌مولار KCl، 6 میلی‌مولار MgCl2، 75 میلی‌مولار ساکارز، 1 میلی‌مولار EDTA، 20 میلی‌مولار KH2PO4، pH 7.0) انکوبه شد. محلول بستر حاوی 15 میلی مولار پیروات سدیم و 5 میلی مولار سدیم مالات اضافه شد. پس از تعادل، تنفس حالت 3 با افزودن ADP (غلظت نهایی 0.6 میلی مولار) آغاز شد. هنگامی که تمام ADP اضافه شده برای تولید ATP مصرف شد، الیگومایسین برای القای تنفس حالت 4 اضافه شد. نسبت کنترل تنفسی (RCR) با محاسبه نسبت میزان تنفس حالت 3 به حالت 4 برآورد شد (جیانگ و همکاران، 2009).

2.6.7. بیان UCP3

سطح UCP3 با استفاده از آنالیز وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی ضد UCP3 (E{3}}) پس از آنالیز SDS-PAGE بخش میتوکندریایی، با استفاده از ژل جداکننده آکریل آمید 10 درصد برآورد شد. فراکسیون های میتوکندری جدا شده از ماهیچه اسکلتی موش (100 گرم) بارگیری شدند و سیتوکروم c اکسیداز (COX) به عنوان یک نشانگر برای مرجع استفاده شد. نوارهای پروتئینی رنگ آمیزی شده با سیستم ایمنی توسط تراکم سنجی (Quantiscan، Biosoft، Cam bridge، GB، UK) آنالیز شدند و مقادیر (واحدهای دلخواه) UCP3 با توجه به سطح COX (واحدهای دلخواه) در نمونه نرمال شدند.

2.7. سنجش پروتئین

غلظت پروتئین با استفاده از کیت سنجش پروتئین Bio-Rad تعیین شد. غلظت پروتئین از یک منحنی کالیبراسیون با استفاده از آلبومین سرم گاوی (BSA) به عنوان استاندارد تعیین شد.

2.8. تحلیل آماری

همه داده ها به صورت میانگین ± خطای استاندارد میانگین (SEM) بیان شد، مگر اینکه خلاف آن مشخص شده باشد. داده ها با استفاده از آنالیز واریانس یک طرفه (ANOVA یک طرفه) تجزیه و تحلیل شد و تفاوت بین گروهی با آزمون محدوده توکی در زمانی که 05/0p < 0="" شناسایی="">

گیاه سیستانچ

3. نتایج

3.1. اثرات HCF1 بر وزن بدن در موش های تغذیه شده با ND و HFD

تغذیه رژیم غذایی ND باعث افزایش جزئی در وزن بدن (به ترتیب 13 و 10 درصد) در موش‌های نر و ماده در طول آزمایش هفته 8- شد (شکل 1a). HFD در مقایسه با حیوانات ND مربوطه، با وسعت تحریک به ترتیب 269 درصد و 320 درصد در موش‌های نر و ماده، افزایش وزن بدن را تسریع کرد (شکل 1a). تغییرات وزن بدن در طول دوره آزمایش هفته ای 8- کمیت شد و در واحدهای دلخواه بیان شد. درمان HCF1 افزایش وزن بدن را در موش های نر تغذیه شده با ND به طور کامل سرکوب کرد (شکل 1b). درمان HCF1 همچنین افزایش وزن بدن را در موش های تغذیه شده با HFD به طور وابسته به دوز سرکوب کرد، با درجه مهار به ترتیب 100 درصد و 61 درصد، در 45 میلی گرم بر کیلوگرم در موش های نر و ماده (شکل 1b). در مقایسه با موش های تغذیه نشده با ND، هیچ تغییر قابل توجهی در مصرف غذا با تغذیه HFD و/یا درمان های مشترک با HCF1 مشاهده نشد (داده ها نشان داده نشده است).

شکل 1 - اثرات HCF1 بر تغییرات وزن بدن در موش های تغذیه شده با ND و HFD. وزن بدن به صورت هفتگی در طول دوره 8- هفته آزمایش کنترل شد. (الف) دوره زمانی تغییرات وزن بدن با یک ANOVA با طرح ترکیبی تجزیه و تحلیل شد و تفاوت بین گروهی با آزمون محدوده توکی تشخیص داده شد. داده ها در درصد کنترل با توجه به وزن اولیه بدن مربوطه بیان شد. (ب) تغییرات وزن بدن همانطور که در مواد و روش‌ها توضیح داده شد اندازه‌گیری شد. داده ها در درصد کنترل با توجه به کنترل ND بیان شد [مقدار AUC کنترل (واحد دلخواه): مرد=777.6 ± 10.4. زن {{1{13}}}}.0 ± 8.0]. مقادیر داده شده میانگین ± SEM، با n=15 است. * تفاوت قابل توجهی با کنترل ND. # تفاوت قابل توجهی با کنترل HFD (p <>

3.2. اثرات HCF1 بر شاخص های پد چربی در موش های تغذیه شده با ND و HFD

اثرات HCF1 بر تجمع چربی نیز مورد بررسی قرار گرفت. HFD باعث افزایش قابل توجهی در شاخص های چربی زیر جلدی و احشایی در موش های نر (به ترتیب 346 و 325 درصد) و ماده (به ترتیب 248 و 257 درصد) شد (شکل 2). در حالی که درمان HCF1 هیچ تاثیری بر چربی زیر جلدی و احشایی در موش های تغذیه شده با ND نداشت، توانایی HCF1 برای مهار افزایش وزن بدن ناشی از HFD با کاهش توده چربی بدن همراه بود، همانطور که با کاهش در هر دو نشان داده شد. چربی زیر جلدی و احشایی در نرهای تغذیه شده با HFD (به ترتیب 42 و 49 درصد، با 45 میلی گرم بر کیلوگرم) و در چربی احشایی در موش های ماده تغذیه شده با HFD (با 53 درصد، 45 میلی گرم بر کیلوگرم) (شکل 2). .

شکل 2 - اثرات HCF1 بر شاخص های پد چربی در موش های تغذیه شده با ND و HFD. توده چربی زیر جلدی و چربی احشایی همانطور که در مواد و روش ها توضیح داده شد اندازه گیری شد. داده ها در درصد کنترل با توجه به کنترل ND بیان شد. مقادیر داده شده میانگین ± SEM، با n=15 است. * تفاوت قابل توجهی با کنترل ND. # تفاوت قابل توجهی با کنترل HFD (p <>

3.3. اثرات HCF1 بر گلوکز و محتوای چربی پلاسما در موش های تغذیه شده با ND و HFD

تیمار HCF1 محتوای گلوکز و لیپید پلاسما را در موش‌های نر و ماده تغذیه‌شده با ND تغییر نداد (شکل 3). تغذیه HFD باعث افزایش قابل توجهی در سطح گلوکز پلاسما (به ترتیب 39 و 29 درصد) در موش های نر و ماده در مقایسه با کنترل ND مربوطه شد (شکل 3a). HCF1H افزایش سطح گلوکز پلاسما ناشی از HFD را (به ترتیب 41 و 64 درصد) در موش های نر و ماده معکوس کرد (شکل 3a). HFD همچنین سطوح TG پلاسما را (به ترتیب 38 و 53 درصد) در موش‌های نر و ماده در مقایسه با کنترل ND مربوطه افزایش داد (شکل 3b). HCF1 L و HCF1 M به طور قابل توجهی افزایش ناشی از HFD در سطوح TG پلاسما را در موش های نر تغذیه شده با HFD (به ترتیب 135 و 192) و ماده (به ترتیب 103 و 146 درصد) مهار کردند (شکل 3b). HCF1 H باعث افزایش قابل توجهی در سطح TG پلاسما (21 درصد) در موش های ماده تغذیه شده با HFD در مقایسه با کنترل HFD درمان نشده شد (شکل 3b). علاوه بر TG پلاسما، افزایش قابل توجهی در سطوح TC پلاسما نیز پس از تغذیه HFD مشاهده شد که میزان افزایش به ترتیب 73 درصد و 100 درصد در موش‌های نر و ماده بود (شکل 3c). افزایش سطح TC پلاسما با کاهش قابل توجهی در نسبت HDL/LDL پلاسما در موش های نر تغذیه شده با HFD (29 درصد) و ماده (49 درصد) همراه بود (شکل 3d). HCF1 M و HCF1 H افزایش ناشی از HFD در سطح TC پلاسما را در موش‌های نر تغذیه‌شده با HFD، با افزایش همزمان در نسبت HDL/LDL پلاسما (به ترتیب 255 و 212 درصد) در مقایسه با HFD درمان‌نشده کاهش دادند. کنترل (شکل 3c و 3d). HCF1 L و HCF1 M افزایش ناشی از HFD در سطح TC پلاسما (به ترتیب 22 درصد و 32 درصد) در موش های ماده را سرکوب کردند، بدون اینکه تغییری در نسبت HDL/LDL پلاسما مشاهده شود (شکل 3c و 3d).

شکل 3 - اثرات HCF1 بر گلوکز و محتوای لیپید پلاسما در موش های تغذیه شده با ND و HFD. گلوکز پلاسما، سطح TG و TC همانطور که در مواد و روش ها توضیح داده شد اندازه گیری شد. داده ها در درصد کنترل با توجه به کنترل ND بیان شد [سطح گلوکز پلاسما کنترل (mg/dL): مرد=91.1 ± 3.3، زن=86.0 ± 2.3; کنترل سطح TG پلاسما (mg/dL): مرد=52.0 ± 1.7، ماده=95.8 ± 4.1; کنترل سطح TC پلاسما (mg/dL): مرد {{2{29}}}}.8 ± 4.3، ماده=118.6 ± 5.4. مقادیر داده شده میانگین ± SEM، با n=15 هستند. * تفاوت قابل توجهی با کنترل ND. # تفاوت قابل توجهی با کنترل HFD (p <>

3.4. اثرات HCF1 بر محتوای چربی کبد در موش های تغذیه شده با ND و HFD

درمان HCF1 سطح TG و TC کبدی را در موش های تغذیه شده با ND تغییر نداد (شکل 4). مصرف HFD به طور قابل توجهی سطوح TG کبدی (به ترتیب 108 و 135 درصد) را در موش های نر و ماده در مقایسه با کنترل ND مربوطه افزایش داد (شکل 4a). HCF1 H، از یک طرف، افزایش ناشی از HFD در سطح TG کبدی (54 درصد) را در موش‌های نر، در مقایسه با کنترل HFD درمان‌نشده، سرکوب کرد (شکل 4a). از سوی دیگر، HCF1 H سطح TG کبدی را (14 درصد) در موش‌های ماده تغذیه‌شده با HFD در مقایسه با کنترل HFD درمان‌نشده مربوطه افزایش داد (شکل 4a). HFD همچنین باعث افزایش قابل توجهی در سطح TC کبدی (به ترتیب 48 و 26 درصد) در موش های نر و ماده شد (شکل 4b). در حالی که HCF1 L و HCF1 H به طور قابل توجهی افزایش ناشی از HFD (به ترتیب به میزان 42 و 44 درصد) در سطوح TC کبدی در موش های نر تغذیه شده با HFD را سرکوب کردند، تنها HCF1 H توانست اثر مشابهی را روی موش های ماده تغذیه شده با HFD ایجاد کند. درجه بازداری 62 درصد است (شکل 4b).

شکل 4 - اثرات HCF1 بر محتوای چربی کبد در موش های تغذیه شده با ND و HFD. سطوح TG و TC کبدی همانطور که در مواد و روش ها شرح داده شد اندازه گیری شد. داده ها در درصد کنترل با توجه به کنترل ND بیان شد [سطح کنترل کبدی TG (گرم در میلی گرم پروتئین): مرد=31.7 ± 1.6، زن=38.5 ± 1.7. کنترل سطح TC کبدی (g/mg پروتئین): مرد=12.8 ± 0.4، زن=17.9 ± 1.2]. مقادیر داده شده میانگین ± SEM، با n {{20}} هستند. * تفاوت قابل توجهی با کنترل ND. # تفاوت قابل توجهی با کنترل HFD (p <>

3.5. اثرات HCF1 بر فعالیت آنزیم های متابولیک در ماهیچه های اسکلتی جدا شده از موش های تغذیه شده با ND و HFD

درمان HCF1 فعالیت PFK را در عضله اسکلتی موش های نر یا ماده تغذیه شده با ND تحریک کرد، با این اثر که روی موش های نر برجسته تر بود (55 درصد در مقابل 20 درصد افزایش در 45 میلی گرم بر کیلوگرم) (شکل 5a). مصرف HFD باعث سرکوب قابل توجهی در فعالیت PFK (به ترتیب 16 و 17 درصد) در موش‌های نر و ماده شد (شکل 5a). HCF1 H سرکوب های ناشی از HFD فعالیت PFK (به ترتیب 153 و 100 درصد) را در موش های نر و ماده تغذیه شده با HFD معکوس کرد (شکل 5a). هر دو درمان HFD و HCF1 در مقایسه با کنترل ND درمان نشده مربوطه، هیچ اثر قابل تشخیصی بر فعالیت CS در عضله اسکلتی موش‌های نر یا ماده ایجاد نکردند (شکل 5b). HCF1 هیچ تاثیری بر فعالیت -HAD عضله اسکلتی موش های نر یا ماده تغذیه شده با ND نداشت (شکل 5c). تغذیه HFD باعث تحریک فعالیت -HAD (به ترتیب 47 و 21 درصد) در موش های نر و ماده در مقایسه با کنترل ND درمان نشده شد (شکل 5c). HCF1، در تمام دوزهای آزمایش شده، به طور قابل توجهی از تحریک ناشی از HFD در فعالیت -HAD در موش‌های نر، با درجه بازداری 62 درصد، در مقایسه با کنترل HFD درمان نشده، مهار کرد (شکل 5c). درمان HCF1 هیچ تغییر قابل توجهی در فعالیت -HAD در موش های ماده تغذیه شده با ND و HFD ایجاد نکرد (شکل 5c). در حالی که HCF1 H باعث کاهش قابل توجهی در فعالیت CPT (16 درصد) عضله اسکلتی در موش های نر تغذیه شده با ND شد (شکل 5d)، HCF1 L و HCF1 M به طور قابل توجهی فعالیت CPT را 24 درصد و 22 درصد در تغذیه ND افزایش دادند. موش های ماده در مقایسه با گروه کنترل ND (شکل 5d). تغذیه HFD همچنین فعالیت CPT را (به ترتیب 13 و 18 درصد) در موش‌های نر و ماده افزایش داد. HCF1 افزایش ناشی از HFD در فعالیت CPT را معکوس کرد، با درجه سرکوب 72 درصد در موش‌های نر (در تمام دوزهای آزمایش‌شده) و 100 درصد در موش‌های ماده (HCF1 L) (شکل 5d).

شکل 5 - اثرات HCF1 بر فعالیت آنزیم های متابولیک در عضله اسکلتی جدا شده از موش های تغذیه شده با ND و HFD. فعالیت‌های PFK، CS، -HAD و CPT عضله اسکلتی همانطور که در مواد و روش‌ها توضیح داده شد اندازه‌گیری شد. داده ها در درصد کنترل با توجه به کنترل ND بیان شد [فعالیت PFK کنترل (mU/mg پروتئین): مرد=19.5 ± 1.1، زن=14.1 ± 0.7. ; کنترل فعالیت CS (mU/mg پروتئین): مرد=30.6 ± 1.3، زن=36.8 ± 3.6; کنترل فعالیت -HAD (mU/mg پروتئین): مرد=13.5 ± 0.6، زن=16.8 ± 0.6. کنترل فعالیت CPT (mU/mg پروتئین): مرد {{3{31}}}}.0 ± 0.3، زن=3.0 ± { {39}}.1]. مقادیر داده شده میانگین ± SEM، با n=15 است. * تفاوت قابل توجهی با کنترل ND. # تفاوت قابل توجهی با کنترل HFD (p <>

3.6. اثرات HCF1 بر RCR میتوکندری در عضله اسکلتی موش

HFD هیچ اثر قابل تشخیصی روی RCR میتوکندری در عضله اسکلتی موش ایجاد نکرد (شکل 6). جداسازی میتوکندری ناشی از درمان HCF1 در عضله اسکلتی موش، همانطور که با کاهش قابل توجه RCR میتوکندری در هر دو تغذیه با ND (61-69 درصد در مرد؛ 66 درصد در زن) و HFD (73-78 درصد در مرد؛ 67) مشهود است. -70 درصد در موش های ماده، در مقایسه با حیوانات مربوطه تحت درمان (شکل 6).

شکل 6 - اثرات HCF1 بر RCR میتوکندری در عضله اسکلتی موش های نر و ماده تغذیه شده با ND و HFD. RCR میتوکندری همانطور که در مواد و روش ها توضیح داده شد اندازه گیری شد. داده ها در درصد کنترل با توجه به کنترل ND بیان شد. مقادیر داده شده میانگین ± SEM، با n=15 است. * تفاوت قابل توجهی با کنترل ND. # تفاوت قابل توجهی با کنترل HFD (p <>

3.7. اثرات HCF1 بر بیان UCP3 در میتوکندری های جدا شده از عضله اسکلتی موش

اثرات HCF1 بر بیان UCP3 نیز مورد بررسی قرار گرفت تا دخالت احتمالی جداسازی میتوکندری در کاهش وزن ناشی از HCF{2}} بررسی شود. یک 2-درمان هفته‌ای HCF1 H سطح UCP3 را در میتوکندری‌های جدا شده از عضله اسکلتی موش در موش‌های نر به طور قابل‌توجهی افزایش داد، با میزان تحریک 67 درصد در مقایسه با گروه شاهد درمان‌نشده (شکل 7).

شکل 7 - اثرات HCF1 بر بیان UCP3 در میتوکندری های جدا شده از عضله اسکلتی موش. موش های نر به مدت 14 روز متوالی با HCF1 H به صورت داخل معده تجویز شدند. میتوکندری همانطور که در مواد و روش ها توضیح داده شد جدا شد و بیان UCP3 با آنالیز وسترن بلات اندازه گیری شد. داده ها کمی سازی شدند و در درصد شاهد با توجه به شاهد درمان نشده بیان شدند. مقادیر داده شده میانگین ± SEM، با n=4 هستند. * به طور قابل توجهی با کنترل درمان نشده متفاوت است.

3.8. مقایسه بین HCF1 و CT بر روی اثرات آنها بر موش های تغذیه شده با ND و HFD

برای درک بهتر مکانیسم زیربنایی اثر کاهش وزن ارائه شده توسط HCF1، اثرات CT، یک جداکننده اسیدهای صفراوی، بر روی موش های نر تغذیه شده با ND و HFD نیز مورد مطالعه قرار گرفت. هر دو CT و HCF1 افزایش وزن ناشی از ND را در طول 8-دوره هفته آزمایش کاملاً مهار کردند. هر دو درمان همچنین اثرات سرکوب‌کننده‌ای بر افزایش وزن بدن، شاخص چربی احشایی، گلوکز پلاسما/TG/TC و همچنین سطح TG/TC کبدی ناشی از HFD ایجاد کردند که تأثیر CT برجسته‌تر است (جدول 1). برخلاف HCF1 که نسبت HDL/LDL پلاسما را فقط در موش‌های تغذیه شده با HFD افزایش داد، CT نسبت HDL/LDL پلاسما را در موش‌های تغذیه شده با ND و HFD به طور قابل توجهی افزایش داد (به ترتیب 58 و 17 درصد) در مقایسه با کنترل ND درمان نشده مربوطه (جدول 1). علاوه بر این، در حالی که HCF1 فعالیت PFK را در عضله اسکلتی موش‌های نر تغذیه‌شده با ND (54 درصد) و HFD (14 درصد) در مقایسه با کنترل ND درمان‌نشده افزایش داد، CT هیچ اثر قابل تشخیصی در موش‌های تغذیه‌شده با ND ایجاد نکرد و فقط می تواند کاهش فعالیت PFK ناشی از HFD را به مقدار کنترل موش های تغذیه شده با ND بازگرداند (جدول 1). هر دو تیمار CT و HCF1 افزایش های ناشی از HFD را در فعالیت های -HAD (به ترتیب 61 و 60 درصد) و CPT (به ترتیب 122 درصد و 72 درصد) در موش های نر معکوس کردند (جدول 1). در حالی که HCF1 جداسازی میتوکندریایی را القا می‌کند، همانطور که با کاهش قابل‌توجه در مقدار RCR میتوکندری در موش‌های نر تغذیه شده با ND و HFD مشهود است، CT هیچ اثر قابل تشخیصی بر جداسازی میتوکندری ایجاد نکرد (جدول 1).

برای اطلاعات بیشتر، برای دریافت قسمت دوم اینجا را کلیک کنید

از: Cistanches Herba افزایش وزن موش های چاق ناشی از رژیم غذایی پرچرب را احتمالاً از طریق جداسازی میتوکندری کاهش می دهد.هوی شان ونگ و همکاران

---مجله غذاهای کاربردی 10 (2014) 292-304