انعقاد، گیرنده های فعال شده با پروتئاز، و بیماری کلیوی دیابتی: درس هایی از موش های دارای کمبود ENOS

رژیم غذایی پرچرب و کمبود eNOS به طور هم افزایی TF را در موش های دیابتی افزایش می دهد

بسیاری از مطالعات ارتباط بین چاقی و ترومبوز را نشان داده اند (Samad and Ruf 2013). برای امتحانple، تنظیم مثبت مسیر TLR4-NF-kB در زیربیماری متابولیکشرایط سطوح TF را افزایش می دهد (Lv و همکاران 2009؛ اوونز و همکاران 2012؛ Rogero and Calder 2018). علاوه بر این، پالمیتات اسید چرب اشباع شده باعث آزاد شدن هیستون H3 از طریق مکانیسم های وابسته به مسیر ROS و JNK و هیستون های خارج سلولی می شود که بیان TF را در مونوسیت ها افزایش می دهد (Shrestha et al. 2013). تمرکز بر رابطه بین انعقاد، eNOS ودیس لیپیدمیمطالعه قبلی ما اثرات ترکیبی کمبود eNOS و رژیم غذایی پرچرب را بر بیان TF نشان داده است (Li et al. 2010). در این مطالعه، موش‌های eNOS-null با دوز کم STZ برای ابتلا به دیابت تحت درمان قرار گرفتند و با رژیم غذایی پرچرب تغذیه شدند. عدم بیان eNOS باعث افزایش دفع آلبومین ادراری وآسیب های بافتی، که با رژیم غذایی پرچرب تشدید می شدند. بیان و فعالیت TF در کلیه های موش به دلیل کمبود بیان eNOS و رژیم غذایی پرچرب درروش هم افزایی. جالب توجه است، آزمایش‌های کولوکالیزاسیون با نشانگر مونوسیت/ماکروفاژ گلومرولی، افزایش سطح TF واکنش‌پذیر را نشان داد.

آنتی بادی های خنثی کننده علیه TF باعث بهبود التهاب در کلیه های دیابتی در موش های eNOS-Knockout می شود

افزایش انعقاد وابسته به TF با افزایش التهاب همراه است (Witkowski et al. 2016). مهار سیستم انعقاد وابسته به TF بهبود یافته استبیماری های التهابیمانند سپسیس ناشی از LPS (Pawlinski et al. 2010). برای روشن کردن رابطه علت و معلولی بین التهاب و TF در DKD، ما اثر کوتاه مدت آنتی بادی های خنثی کننده علیه TF را بر التهاب مورد بررسی قرار دادیم.کلیه های دیابتیدر موش های دارای کمبود eNOS (لی و همکاران 2010). نتایج نشان داد که تجویز آنتی‌بادی‌های ضد TF به‌طور قابل‌توجهی سطوح بیان کلیوی ژن‌های مرتبط با التهاب و فیبروز مانند Tnfa، Ccl2، Tgfb و Col4 mRNA را در کلیه‌های موش چهار روز پس از خنثی‌سازی TF کاهش داد.

برای دریافت عصاره طبیعی سیستانچ ارگانیک با 25% اکیناکوزید و 9% آکتئوزید برای عملکرد کلیه اینجا را کلیک کنید

خدمات حمایتی Wecistanche - بزرگترین صادرکننده سیستانچ در چین:

ایمیل:wallence.suen@wecistanche.com

واتساپ/تلفن:+86 15292862950

خرید برای جزئیات بیشتر مشخصات:

https://www.xjcistanche.com٪2fcistanche-shop

مهارکننده انعقاد FXa آسیب کلیه را در موش های دیابتی فاقد eNOS بهبود می بخشد

انعقاد FXa، واقع در پایین دست TF/VIIa، همچنین از طریق مسیر وابسته به PAR به التهاب کمک می کند. نقش آن در DKD در چندین مدل حیوانی نشان داده شده است. سومی و همکاران (2011) نشان داد که fondaparinux، یک مهارکننده FXa، سطوح پروتئین ادراری، هیپرتروفی گلومرولی و رسوب فیبرین را در موش‌های db/db کاهش می‌دهد. اثر درمانی مهار FXa در موش‌های DKD فاقد eNOS توسط گروه ما نشان داده شد (Oe et al. 2016). Edoxaban (50 mg/kg/day)، یک مهارکننده خوراکی FXa، به eNOS-/- تجویز شد. موش‌های Ins2Akita/+ به مدت سه ماه، و نتایج بهبود آسیب‌های بافت‌شناسی مانند تکثیر ماتریکس مزانژیال را نشان داد. سطح بیان ژن های التهابی در کلیه ها توسط ادوکسابان کاهش یافت (جدول 1). FXa هر دو PAR1 و PAR2 را فعال می کند. برای روشن کردن مکانیسم آسیب کلیه با واسطه FXa، ما نشان دادیم که اثرات ضد التهابی مهارکننده‌های FXa مشابه اثرات ضد التهابی موجود در موش‌های PAR2-/- و موش‌های PAR2-/- با مهارکننده‌های FXa است. . این یافته‌ها نشان داد که FXa احتمالاً از طریق مکانیسم وابسته به PAR در DKD باعث التهاب می‌شود. در مقابل، ممنوعیت ردوکس آسیب گلومرولی را در eNOS +/+ بهبود نمی بخشد. موش های Ins2Akita/+، نشان می دهد که اثر درمانی مهار FXa با بیش انعقادی وابسته به eNOS در نوع I مرتبط است.موش های دیابتی.

سایر عوامل انعقادی در DKD

زیرا ترومبین PAR1 را هدف قرار می دهد که پیشرفت می کندالتهاب عروقی(چن و دورلینگ 2009)،ترومبین احتمالا DKD را تشدید می کند. با این حال، نقش محافظتی یا مضر ترومبین در پاتوژنز DKD نشان داده شده است. از ترومبین با دوز پایین (50 pM) جلوگیری شد، در حالی که ترومبین با دوز بالا (20 نانومولار) تشدید شد،آپوپتوز ناشی از گلوکزدر پودوسیت ها (وانگ و همکاران 2011b). اثرات مهارکننده های ترومبین مانند دابیگاتران بر موش های دیابتی فاقد eNOS باید در آینده روشن شود.

فیبرینوژن در موارد مختلفی نقش داردوضعیت های التهابی. جالب توجه است، کاهش جزئی یا عدم وجود فیبرینوژن برای مدل‌های ایسکمی-پرفیوژن مجدد کلیوی یا فیبروز انسدادی کلیه مفید بود (Sörensen et al. 2011; Craciun et al. 2014). از آنجایی که رسوب فیبرین گلومرولی در موش های دیابتی فاقد eNOS افزایش یافته است (ناکاگاوا و همکاران 2007؛ لی و همکاران 2010؛ وانگ و همکاران 2011a)، نقش آن را درپاتوژنز DKDسزاوار تحقیق بیشتر است

بیان PAR1 و PAR2 در موش های دیابتی فاقد eNOS

افزایش بیان PARs با آسیب کلیه همراه است. ما و دیگران نشان داده‌ایم که سطح بیان mRNA ژن Par1 و/یا Par2 در مدل‌های حیوانی مبتلا به نفروپاتی دیابتی، آسیب کلیه ناشی از آدنین، فیبروز انسدادی کلیه و آسیب کلیه ناشی از سیس پلاتین افزایش یافته است (چانگ و همکاران 2013؛ هایاشی و همکاران، 2013). همکاران 2016؛ Oe و همکاران 2016؛ Watanabe و همکاران 2019). علاوه بر این، سطح پروتئین PAR2 گلومرولی در موش‌های db/db، مدلی از نوع دوم DM افزایش یافت (Sumi et al. 2011). ما ارتباط بین بیان PAR و کمبود eNOS را در موش‌های دیابتی نشان دادیم (Oe et al. 2016). سطح بیان mRNA ژن Par1 به طور قابل توجهی در eNOS بالاتر بود - / -. موش های Ins2Akita/+ نسبت به eNOS-/-. موش Ins2Akita/+ و غیر DM. به طور مشابه، بیان Par2 به طور قابل توجهی در eNOS بالاتر بود -/-. موش های Ins2Akita/+ نسبت به موش های غیر DM. در مقابل، سطوح mRNA ژن Par4 بین ژنوتیپ‌ها تفاوتی نداشت. فقدان eNOS التهاب را در DKD تشدید می کند (وانگ و همکاران 2011a). از آنجا که سیتوکین های پیش التهابی گزارش شده است که PARs را افزایش می دهند (Nystedt et al. 1996)، التهاب افزایش یافته ناشی از کمبود eNOS احتمالاً بیان پارس کلیوی را در DKD القا می کند. در مجموع، نتایج مطالعات ما نشان داد که سطوح بیان PAR1 و PAR2، مشابه مورد TF، در کلیه‌های دیابتی در صورت کمبود eNOS افزایش یافته است (شکل 2).

حذف PAR2 بهبود کلیه دیابتی

آسیب در موش با کاهش eNOS

ما و دیگران به نقش PAR2 در DKD در مطالعات قبلی پرداخته‌ایم. حذف Par2 بر آسیب گلومرولی در موش‌های دیابتی نوع وحشی آکیتا (Ins2Akita/+) با eNOS تأثیری نداشت (Oe et al. 2016). علاوه بر این، موش‌های دیابتی ناشی از STZ فاقد PAR2، آلبومینوری کاهش یافته را در مقایسه با موش‌های دیابتی نوع وحشی نشان دادند، اما میانگین گسترش هدف را افزایش دادند (Waasdorp et al. 2017). در مجموع، این نتایج نشان می دهد که هیچ یا اثرات درمانی خفیفی از مهار PAR2 بر آسیب کلیه در مدل های اولیه و خفیف DKD وجود ندارد. در مقابل، ما اثرات کمبود PAR2 را بر DKD در موش‌های دیابتی آکیتا با کاهش بیان eNOS (eNOS+/-؛ Ins2Akita/+) نشان داده‌ایم (Oe et al. 2016). فقدان PAR2 به طور قابل توجهی سطوح دفع آلبومین ادراری، گسترش مزانژیال و ضخامت GBM را کاهش داد. سطح بیان ژن‌های پیش التهابی و مرتبط با فیبروز، از جمله Tnfa، Tgfb، و Col4 نیز در کلیه‌های موش کاهش یافت. این یافته ها نشان می دهد که PAR2 نه در مراحل اولیه، بلکه در آسیب گلومرولی دیابتی نسبتاً پیشرفته ناشی از کمبود eNOS بیماریزا است (جدول 1).

بلوک دوگانه PAR1 و PAR2 در موش های دیابتی با کاهش eNOS

ما نشان داده‌ایم که PAR1 و PAR2 با همکاری یکدیگر در پاتوژنز DKD نقش دارند (Mitsui et al. 2020). در این مطالعه، موش‌های نر آکیتا دیابتی نوع I هتروزیگوت برای eNOS (Ins2Akita/+؛ eNOS+/-) به عنوان مدل DKD استفاده شدند. این موش‌ها به مدت 4 هفته با وسیله نقلیه، آنتاگونیست PAR1 (E5555، 60 میلی‌گرم/کیلوگرم در روز)، آنتاگونیست PAR2 (FSLLRY، 3 میلی‌گرم/کیلوگرم در روز)، یا E{12}} FSLLRY تحت درمان قرار گرفتند. تجویز آنتاگونیست PAR1 یا PAR2 به تنهایی آسیب گلومرولی، مانند گسترش مزانژیال و رسوب کلاژن IV را در مقایسه با تجویز یک وسیله نقلیه کاهش می دهد. اثرات درمانی هم افزایی مهار PAR1 و PAR2 مشاهده شد، و نسبت آلبومین ادرار به کراتینین به طور قابل توجهی کاهش یافت زمانی که هر دو PAR1 و PAR2 با E{22}} FSLLRY در مقایسه با تجویز وسیله نقلیه مسدود شدند. علاوه بر این، محاصره دوگانه PAR1 و PAR2 توسط E{25}} FSLLRY هم افزایی آسیب بافتی، از جمله گسترش مزانژیال، نفوذ ماکروفاژ گلومرولی، و رسوب کلاژن نوع IV را بهبود بخشید. سطح بیان ژن های مرتبط با التهاب و فیبروز در کلیه ها نیز کاهش یافت (جدول 1).

ما بر روی اثرات پیش التهابی آگونیست‌های PAR1 و PAR2 روی سلول‌های اندوتلیال انسان تمرکز کردیم (Mitsui et al. 2020). نتایج نشان داد که تحریک با هر دو آگونیست PAR1 و PAR2 به طور هم افزایی سطوح بیان mRNA ژن MCP1 و PAI1 را افزایش داد. اثر آگونیست PAR1 توسط یک مهارکننده NF-kB مسدود شد، در حالی که اثر آگونیست PAR2 توسط مهارکننده‌های NF-kB و MAPK مسدود شد. در مجموع، PAR1 و PAR2 از طریق مسیرهای سیگنالینگ مختلف به التهاب عروقی و DKD کمک می کنند (شکل 3).

نتیجه

در این بررسی، ما بر رابطه بین مسیر پروتئاز-PAR انعقادی و کمبود eNOS در موش‌های دیابتی تمرکز کردیم. تولید کم eNOS با انعقاد بیش از حد و افزایش سیگنال دهی PAR مرتبط است که برای DKD مضر است. این یافته ها ممکن است نشان دهنده نقش پاتولوژیک آنها در مرحله پیشرفته یا بعدی DKD باشد (مثلاً با نارسایی کلیوی و/یا پروتئینوری عظیم). مهارکننده های خوراکی FXa به طور گسترده برای جلوگیری از ترومبوز استفاده می شود (Patel et al. 2011; Robertson et al. 2015). استفاده از آنها در درمان DKD یک گزینه امیدوارکننده است. علاوه بر این، برخی از آنتاگونیست های PAR1، از جمله آتوپاکسار و وراپاکسار، می توانند در درمان ضد پلاکتی برای جلوگیری از سندرم حاد کرونری استفاده شوند (Goto et al. 2010; Tricoci et al. 2012). علاوه بر این، پیشرفت قابل توجهی در توسعه آنتاگونیست های PAR2 وجود دارد (Lim et al. 2013; Cheng et al. 2017; Jiang et al. 2018)، و آنها می توانند گزینه های درمانی جدیدی برای درمان بیماران مبتلا به DKD باشند.

قدردانی

این مطالعه توسط بنیاد پزشکی گونریو پشتیبانی شد. مایلیم از Editage (https://www. editage.com) برای ویرایش زبان انگلیسی تشکر کنیم.

تضاد منافع نویسندگان هیچ گونه تضاد منافع را اعلام نمی کنند.

منابع

Afkarian, M., Sachs, MC, Kestenbaum, B., Hirsch, IB, Tuttle, KR, Himmelfarb, J. & de Boer, IH (2013) بیماری کلیوی و افزایش خطر مرگ و میر در دیابت نوع 2.مربا. Soc. نفرول., 24, 302-308. 

Azushima، K.، Gurley، SB & Coffman، TM (2018) مدل سازی نفروپاتی دیابتی در موش.نات. کشیش نفرول., 14، 48-56. Brosius، FC، Alpers، CE، Bottinger، EP، Breyer، MD، Coffman، TM، Gurley، SB، Harris، RC، Kakoki،

M., Kretzler, M., Leiter, EH, Levi, M., McIndoe, RA, Sharma, K., Smithies, O., Susztak, K., et al. (2009) مدل های موش نفروپاتی دیابتی.مربا. Soc. نفرول., 20، 2503-2512. Camerer, E., Huang, W. & Coughlin, SR (2000) فاکتور بافتی و فعال شدن وابسته به فاکتور X گیرنده 2 فعال شده با پروتئاز توسط فاکتور VIIa.Proc. Natl. آکادمی علمی ایالات متحده آمریکا, 97, 5255-5260. 

Chen, D. & Dorling, A. (2009) نقشهای مهم ترومبین در التهاب حاد و مزمن.جی. ترومب. هموست., 7 Suppl 1, 122-126. Cheng, H., Wang, H., Fan, X., Paueksakon, P. & Harris, RC (2012) بهبود فعالیت سنتاز اکسید نیتریک اندوتلیال پیشرفت نفروپاتی دیابتی را در موش db/db به تاخیر می اندازد.کلیه های داخلی, 82، 1176-1183. Cheng، RKY، Fiez-Vandal، C.، Schlenker، O.، Edman، K.، Aggeler، B.، Brown، DG، Brown، GA، Cooke، RM، Dumelin، CE، Doré، AS، Geschwindner، S. , Grebner, C., Hermansson, NO, Jazayeri, A., Johansson, P., et al. (2017) بینش ساختاری در مورد مدولاسیون آلوستریک گیرنده فعال شده با پروتئاز 2.

طبیعت, 545، 112-115. Chung, H., Ramachandran, R., Hollenberg, MD & Muruve, DA (2013) گیرنده فعال شده با پروتئین{3}} ترانسفعال سازی گیرنده فاکتور رشد اپیدرمی و تبدیل فاکتور رشد مسیرهای سیگنال دهی گیرنده به فیبروز کلیه کمک می کند.جی بیول. شیمی., 288، 37319-37331. Coughlin، SR (2005) گیرنده های فعال شده با پروتئاز در هموستاز، ترومبوز و بیولوژی عروقی.جی. ترومب. هموست., 3، 1800-1814. کراسیون، فلوریدا، آجی، AK، هافمن، دی.، سایکومار، جی.، فابیان، SL،

Bijol, V., Humphreys, BD & Vaidya, VS (2014) کاهش فارماکو منطقی و ژنتیکی فیبرینوژن از فیبروز کلیه محافظت می کند.صبح. جی. فیزیول. فیزیول کلیه, 307, 

F{0}}. Cunningham, MA, Rondeau, E., Chen, X., Coughlin, SR, Hold sworth, SR & Tipping, PG (2000) گیرنده 1 فعال شده با پروتئاز واسطه التهاب کلیوی وابسته به ترومبین و با واسطه سلول در گلومرولونفریت هلالی است.J. Exp. پزشکی, 191, 455-462.