تجزیه و تحلیل مؤلفه ها و فعالیت آنتی اکسیدانی پلی ساکاریدهای گیاه سیستانش دسرتیکولا

چکیده: در این مقاله پلی ساکاریدها از آن استخراج شده استCistanche deserticola, Cistanche deserticolaخامپلی ساکاریدCLP توسط کروماتوگرافی ستونی سلولز DEAE خالص می شود و شکر خنثی CLP و قند اسیدی CLP2 از سیستانچ دزرتیکولا به دست می آید، محتوای قند کل، اسید اورونیک و پروتئین درپلی ساکارید خام Cistanche deserticolaCLP، Cistanche deserticola قند خنثی CLPl وشکر اسیدی سیستانچ دسرتیکولاCLP2 با اسکن طیفی UV تعیین می شود و وزن مولکولی و ترکیب مونوساکارید پلی ساکاریدها تعیین می شود. در همان زمان، ظرفیت مهار رادیکال DPPH و ظرفیت کل آنتی اکسیدانی پلی ساکارید خام Cistanche deserticola CLP، قند خنثی Cistanche deserticola CLP1 و Cistanche deserticola قند اسیدی Cl.P2 مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. داده های اندازه گیری شده نشان می دهد که اجزای پلی ساکارید خام Cistanche deserticola CLP، شکر خنثی Cistanche deserticola CLP1 و Cistanche deserticola قند اسیدیCLP2 مشابه هستند، اما تفاوت های زیادی در محتوای آنها وجود دارد، هنگامی که Cistanche deserticola قند خنثی CLP1 و C می توان پیک های شستشوی متعدد را به دست آورد. قند اسیدی deserticola CLP2 توسط ستون کروماتوگرافی سلولز DEAE جدا و خالص می شود و توزیع وزن مولکولی 0~{8}} Da است، که نشان می دهد اجزای اصلی پلی ساکاریدهای Cistanche deserticola قندهای مولکولی کوچک هستند. نتایج تعیین مونوساکارید قند خنثی Cistanche deserticola CLPl نشان می دهد که مونوساکاریدهای موجود در قند خنثی Cistanche deserticola CLP1 عمدتاً مانوز، اسید گالاکترونیک، گلوکز، گالاکتوز و آرابینوز هستند. قند اسیدی ClP2 عمدتاً رامنوز، گالاکتورونیک اسید، گلوکز و گالاکتوز است، نتایج آزمایش مهار رادیکال DPPH و آزمایش ظرفیت آنتی اکسیدانی کل پلی ساکاریدهای Cistanche deserticola نشان می دهد که ظرفیت آنتی اکسیدانی قند خنثی Cistanche deserticola بالاتر از Cistanche deserticola polyscharticola است. قند اسیدی CLP و Cistanche deserticola CLP2.

کلید واژه ها:Cistanche deserticola; پلی ساکاریدها; تجزیه و تحلیل اجزا؛فعالیت آنتی اکسیدانی; جذب

عصاره سیستانچ توبولوزا را برای اثری هدفمند دریافت کنید

سیستانچیک گیاه انگلی علفی است که دارای تعداد زیادی استگلیکوزید فنولیکsبیوسنتز،گلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی، قندها و الکل ها. گلیکان ها عمدتاً به شکل پلی ساکارید هستند. پلی ساکارید سیستانچ عملکرد قوی تنظیم کننده فعالیت ایمنی [1-2] دارد.

رادیکال‌های آزاد به عنوان متابولیت‌های واسطه در فعالیت‌های زندگی انسان، در حالت پایدار ناپایدار هستند و شدت فعالیت اکسیداتیو بالایی دارند که می‌تواند باعث ایجاد ماکرومولکول‌های بیولوژیکی شود، بنابراین استفاده از آنتی‌اکسیدان طبیعی استفاده از مواد آنتی‌اکسیدانی طبیعی برای از بین بردن رادیکال‌های آزاد باعث می‌شود. به سمت اصلی تحقیقات فعلی مواد غذایی تبدیل شود. ترکیب پلی ساکارید ازسیستانچدارای توانایی آنتی اکسیدانی قوی است که می تواند رادیکال های آزاد را در بدن انسان از بین ببرد. ترکیب پلی ساکارید سیستانچ دارای توانایی آنتی اکسیدانی قوی است و می تواند باعث از بین بردن رادیکال های آزاد در بدن انسان شود [3].

در این مقاله،پلی ساکاریدهادر Cistanche stannic استخراج و با نفوذ ژل با راندمان بالا طبقه بندی شدند. وزن مولکولی پلی ساکاریدها در سیستانچ توسط کروماتوگرافی نفوذ ژل با کارایی بالا تعیین شد. وزن مولکولی پلی ساکاریدهای سیستانچ با استفاده از کروماتوگرافی نفوذ ژل با کارایی بالا و ترکیب پلی ساکاریدها نیز تعیین شد. تجزیه و تحلیل کرد.

فعالیت آنتی اکسیدانی سیستانچ با تعیین قدرت مهار رادیکال آزاد و ظرفیت آنتی اکسیدانی کل اجزای پلی ساکارید مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. ما همچنین توانایی مهار رادیکال‌های آزاد و ظرفیت آنتی‌اکسیدانی کل اجزای پلی‌ساکارید سیستانچ را تعیین کردیم و مبنایی نظری برای توسعه و استفاده از سیستانچ و ارزش افزوده آن فراهم کردیم.

1 نمونه تهیه و استخراج مواد پلی ساکارید از سیستانچ

2.5 کیلوگرم سیستانچ را وزن کنید، آن را برش دهید، 12.5 لیتر آب مقطر اضافه کنید و به مدت 3 ساعت بجوشانید. پس از 3 ساعت جوشاندن، فیلتر با فیلتراسیون جمع آوری شد و به اتانول 75 درصد اضافه شد و به مدت 24 ساعت باقی ماند. پس از جوشاندن، فیلتراسیون با فیلتراسیون جمع‌آوری شد، به اتانول 75 درصد اضافه شد و به مدت 24 ساعت باقی ماند و به مدت 30 دقیقه با سرعت 4000r/min سانتریفیوژ شد و رسوب جمع‌آوری شد. رسوب جمع آوری، منجمد و خشک شد تا پلی ساکارید خام Cistanche CLP بدست آید [4]. رسوب برای به دست آوردن پلی ساکارید خام CLP سیستانچ یخ خشک شد [4]. سلولز DEAE گرفته شد، خیس شد و متورم شد، گاز زدایی شد و بر روی یک ستون تبادل آنیونی سلولز DEAE بارگذاری شد و با آب مقطر و محلول NaCl متعادل شد. برای تعادل از آب و محلول NaCl استفاده شد. با وزن 100 میلی گرم پلی ساکارید خام Cistanche tubulosa CLP در 10 میلی لیتر آب مقطر حل شد و پس از شستشو با آب مقطر، محلول شستشو جمع آوری شد.

محلول شستشو پس از شستشو با آب مقطر جمع آوری شد و با غلظت انجماد خشک شد تا قند خنثی CLP1 سیستانچ بدست آید. محلول شستشو پس از شستشو با محلول NaCl جمع آوری شد و پس از دیالیز برای بدست آوردن قند اسیدی Cistanche CLP1 تغلیظ و خشک شد. پس از شستشو با محلول NaCl، محلول خروجی جمع‌آوری و با دیالیز تغلیظ شد و در انجماد خشک شد تا قند اسیدی سیستانش CLP2 بدست آید [5].

قند خنثی CLP1 و قند اسیدی CLP2 سیستانچ توبولوزا به ترتیب در غلظت 1 میلی گرم بر کیلوگرم تهیه شد. محلول های پلی ساکارید در غلظت 1 میلی گرم بر میلی لیتر تهیه شد و پلی ساکاریدها با طیف سنجی UV با استفاده از اسپکتروفتومتر در 210-600 نانومتر آنالیز شدند. طیف UV با استفاده از یک اسپکتروفتومتر در 210-600 نانومتر اسکن شد، و هنگامی که پیک در 260-280 نانومتر ظاهر شد، هنگامی که پیک در 260-280 نانومتر ظاهر شد، محلول حاوی پروتئین و اسید نوکلئیک ثابت شد. [6].

2 تعیین ترکیب ماده پلی ساکارید سیستانچ

برای تعیین میزان کل قند در نمونه سیستانچ از روش فنل-سولفوریک اسید استفاده شد. محلول‌های گلوکز 1.1 میلی‌گرم در میلی‌لیتر، 0.2، 0.4، 0.6، 0.8 و 1 میلی‌لیتر اندازه‌گیری شد. در لوله های آزمایش شیشه ای، آب مقطر اضافه شد تا حجم آن به 1 میلی لیتر برسد. سپس 0.5 میلی‌لیتر معرف فنل و 2.5 میلی‌لیتر اسید سولفوریک غلیظ با غلظت 6 درصد به لوله‌های آزمایش اضافه شد، خوب تکان داده شد و تا دمای اتاق خنک شد. جذب با استفاده از اسپکتروفتومتر در طول موج 490 نانومتر اندازه گیری شد و منحنی استاندارد با مقدار قند به عنوان مختصات افقی و جذب به عنوان مختصات عمودی ترسیم شد و معادله رگرسیون محاسبه شد [{19}}].

میزان پروتئین نمونه های سیستانچ با استفاده از روش کوماس برلیانت بلو تعیین شد. محتوای پروتئین نمونه ها توسط اسپکتروفتومتر در طول موج 495 نانومتر اندازه گیری شد و میزان پروتئین بر اساس معادله منحنی استاندارد [9] محاسبه شد.

محتوای گلی اگزالات در نمونه سیستانچ با استفاده از روش m-hydroxyphenyl تعیین شد. غلظت‌های مختلف استاندارد و 0}.4 میلی‌لیتر از محلول نمونه با غلظت 1.1 میلی‌گرم 0 در میلی‌لیتر به لوله آزمایش با 2.5 میلی‌لیتر اسید سولفوریک غلیظ، تکان داده شد.

غلظت m-hydroxybiphenyl و 0.5 درصد محلول هیدروکسید سدیم به لوله آزمایش اضافه شد، خوب تکان داده شد و به مدت 30 دقیقه باقی ماند. میزان جذب در طول موج 525 نانومتر با اسپکتروفتومتر اندازه گیری شد و مقدار گلی اگزالات در نمونه بر اساس معادله منحنی استاندارد [10-11] محاسبه شد. وزن مولکولی نسبی پلی ساکاریدهای سیستانچ با کروماتوگرافی ژل با کارایی بالا و ترکیب مونوساکاریدهای سیستانچ با کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا تعیین شد. ترکیب مونوساکارید سیستانچ توسط کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا تعیین شد [12].

3 نتایج و تجزیه و تحلیل ترکیب پلی ساکاریدی سیستانش توبولوزا

از شکل 1 می توان دید که قند خنثی CLP1 سیستانچ توبولوزا پیک جذب آشکاری در 280 نانومتر نشان داد، در حالی که قند اسیدی CLP2 سیستانچ توبولوزا پیک جذب آشکاری در 260-280 نانومتر نداشت، اما طیف جذب UV بالاتر بود. از آنجایی که تریپتوفان و تیروزین موجود در پروتئین ها دارای مقادیر جذب بیشتری برای UV در 280 نانومتر بودند، می توان قضاوت کرد که قند خنثی Cistanche CLP1 حاوی گلیکوپروتئین است، اما نمی توان قضاوت کرد که آیا قند اسیدی Cistanche CLP2 حاوی اسیدهای نوکلئیک و پروتئین است یا خیر.

نمی توان تعیین کرد که آیا قند اسیدی CLP2 سیستانچ حاوی اسیدهای نوکلئیک و پروتئین است یا خیر.

تجزیه و تحلیل ستون کروماتوگرافی تبادل یونی سلولز منفی DEAE می تواند مواد یونی و ناخالصی های موجود در ستون را برای جداسازی مواد پلی ساکارید جذب کند و پس از تغلیظ و خشک کردن آب مقطر، در مجموع 34.68 میلی گرم قند خنثی سیستانچ CLP1 به دست آمد و پس از آن با استفاده از محلول NaCl برای شستشو و تغلیظ و خشک کردن، در مجموع 16.52 میلی گرم قند اسیدی Cistanche CLP2 به دست آمد. معادله منحنی استاندارد محتوای قند کل، محتوای پروتئین و معادله منحنی استاندارد گلیوکسیلات. اندازه گیری قند کل، پروتئین و گلیوکسیلات سیستانچ به دست آمد. میزان کل قند، پروتئین و اسید گلوکورونیک سیستانچ اندازه گیری و در جدول 1 نشان داده شده است.

منحنی اسکن طیف UV فتومتر از 210 تا 600 نانومتر در شکل 1 نشان داده شده است.

از شکل 1، می توان مشاهده کرد که قند نوتروفیل سیستانش CLP1 یک پیک جذب واضح در 280 نانومتر نشان داد، در حالی که قند اسیدی سیستانچ CLP2 اوج جذب را در 260-280 نانومتر نشان داد. و قند اسیدی CLP2 سیستانش توبولوزا اوج جذب واضحی را در 260-280 نانومتر نشان داد. اگرچه اوج جذب آشکاری در 260-280 نانومتر وجود نداشت، طیف جذب UV بالاتر بود. از آنجایی که تریپتوفان و تیروزین موجود در پروتئین ها ارزش جذب بیشتری در طول موج 280 نانومتر برای مقدار جذب اشعه ماوراء بنفش داشتند، می توان قضاوت کرد که قند نوتروفیل سیستانش CLP1 حاوی گلیکوپروتئین است، اما تعیین اینکه آیا قند اسیدی سیستانچ CLP2 حاوی اسیدهای نوکلئیک و پروتئین است یا خیر ممکن نبود. . وجود اسیدهای نوکلئیک و پروتئین در Cistanche CLP2 نمی تواند تعیین شود.

تجزیه و تحلیل ستون کروماتوگرافی تبادل یونی منفی سلولز DEAE می تواند مواد یونی و ناخالصی ها را به ستون جذب کند. جداسازی مواد پلی ساکاریدی با جذب مواد یونی و ناخالصی های روی ستون انجام شد. محلول آب مقطر غلیظ و خشک شد تا شکر خنثی سیستانچ بدست آید پس از تغلیظ و خشک شدن آب مقطر، در مجموع 68/34 میلی گرم CLP1 و پس از تغلیظ و خشک شدن با محلول NaCl، شکر اسیدی CLP1 به دست آمد. قند اسیدی CLP2 سیستانچ 16.52 میلی گرم به دست آمد. معادله منحنی استاندارد محتوای قند کل، محتوای پروتئین و محتوای گلی اکسیلات سیستانش به دست آمد. و معادله منحنی استاندارد گلیوکسیلات. اندازه گیری قند کل، پروتئین و گلیوکسیلات سیستانچ به دست آمد. میزان کل قند، پروتئین و اسید گلوکورونیک سیستانچ اندازه گیری و در جدول 1 نشان داده شده است.

جدول 1 محتوای قند کل، پروتئین و اسید اورونیک در سیستانش دسرتیکولا

وزن مولکولی و مساحت پیک نمونه استاندارد را می توان تعیین کرد و معادله رگرسیون رگرسیون را می توان با جایگزین کردن سیگنال انتشار نور نمونه مورد آزمایش در معادله رگرسیون به دست آورد. وزن مولکولی نمونه مورد آزمایش را می توان بدست آورد. وزن مولکولی نمونه‌های مورد آزمایش را می‌توان با جایگزین کردن مقادیر سیگنال انتشار نور نمونه‌های مورد آزمایش در معادله رگرسیون بدست آورد. میانگین وزن مولکولی، میانگین وزن مولکولی سنگین و ضریب پراکندگی Cistanche Tubulosa CLP1 و Cistanche Tubulosa CLP2 به دست آمد. قند خنثی Cistanche CLP1 و Cistanche CLP2 اسیدی با استفاده از کروماتوگرافی نفوذ ژل با کارایی بالا تعیین شدند. نتایج محاسبه زمان ماند و وزن مولکولی در جدول 2 نشان داده شده است. نسبت وزن مولکولی متوسط ​​سنگین به وزن مولکولی میانگین عددی برای نشان دادن عرض توزیع مولکولی استفاده شد. نسبت وزن مولکولی متوسط ​​سنگین به وزن مولکولی متوسط ​​عددی برای نشان دادن عرض توزیع مولکولی استفاده می شود.

بیشتر بخواهید:

ایمیل:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel: plus 86 15292862950