اثرات سیستانش دسرتیکولا دسرتیکولا و کامفرول بر رشد سلول های گرانولوزا در فولیکول های پیش انباشته شده مرغ

خلاصه:برای بررسی اثرات Cistanche deserticola و Kaempferol بر رشد فولیکولی مرغ، این آزمایش اثرات غلظت‌های مختلف Cistanche deserticola و Kaempferol را بر روی فعالیت سلول‌های گرانولوزای مرغ از پیش درجه‌بندی شده با روش MTT تجزیه و تحلیل کرد و غلظت بهینه را تعیین کرد. PCR کمی فلورسنت بلادرنگ برای تشخیص اثرات Cistanche deserticola و Kaempferol بر روی آنتی ژن هسته ای سلول تکثیر (PCNA)، گیرنده هورمون محرک فولیکول (FSHR) و گیرنده استروژن سلول های گرانولوزای مرغ (ER) استفاده شد. تاثیر بیان mRNA؛ اثرات سیستانش دسرتیکولا و کامپفرول بر رشد فولیکول تخمدان با کشت آزمایشگاهی بافت تخمدان مورد بررسی قرار گرفت. ، می تواند به طور قابل توجهی تکثیر سلول های گرانولوزا را تقویت کند، در حالی که بیان mRNA سلول های گرانولوزا را PCNA، FSHR و ER نیز ترویج می کند (P<0.01); Cistanche deserticola and Kaempferol significantly increased the number of follicles in ovarian tissue, and granulosa cells proliferated from monolayer to multilayer. Studies have shown that Cistanche deserticola and Kaempferol can promote the proliferation of aggregate granulosa cells, and promote FSHR and ER α MRNA expression promoting the development of pre-grade follicles towards grade follicles.

واژه‌های کلیدی: سیستانچ کویر; کامفرول؛ جوجه؛ سلول های گرانول قبل از درجه. بافت تخمدان

گیاه چینی سیستانچ

برای مزارع مرغ تخمگذار در مقیاس بزرگ، سطح نرخ تولید تخم بر مزایای اقتصادی آن تأثیر می گذارد و توسعه فولیکول های تخمدان به طور مستقیم بر عملکرد تولید مرغ های تخمگذار تأثیر می گذارد. فولیکول ها بر اساس وضعیت عملکردی خود به سه مرحله تقسیم می شوند: فولیکول های اولیه، فولیکول های ثانویه و فولیکول های بالغ [1]. هر روز یک فولیکول برای رشد تا بلوغ انتخاب می‌شود و تخمک به داخل لوله فالوپ بیرون می‌رود و از قیف، بزرگ شدن، تنگی، رحم و واژن عبور می‌کند و ساختاری شبیه تخمک ایجاد می‌کند [2-3]. شروع فولیکول های بدوی با رشد سلول های گرانولوزای فولیکولی مرتبط است. هورمون محرک فولیکول (FSH) به گیرنده هورمون محرک فولیکول (FSHR) روی سلول های گرانولوزا متصل می شود و باعث ایجاد گیرنده هورمون لوتئین کننده (LHR) و تحریک سنتز هورمون های استروئیدی می شود [4-6]. FSH و هورمون لوتئینیزه کننده (LH) به طور هم افزایی روی سلول های گرانولوزا عمل می کنند تا رشد و بلوغ فولیکولی را تقویت کنند و در انتخاب فولیکول های غالب شرکت کنند. تحقیقات نشان داده است که اگرچه فولیکول‌های اولیه فاقد سلول‌های گرانولوزا فعال شده‌اند، اما در نهایت همه آنها به آترزی مبتلا می‌شوند [7]. در طول رشد فولیکولی، استروژن می تواند تکثیر سلول های گرانولوزای تخمدان را تقویت کند، در حالی که با FSH و LH برای ترویج تکثیر و تمایز سلول های گرانولوزای تخمدان همکاری می کند. هنگامی که محتوای استروژن در پلاسما افزایش می یابد، از طریق سیستم گردش خون محیطی به هیپوتالاموس بازگردانده می شود، بنابراین ترشح هورمون آزاد کننده گنادوتروپین (GnRH) از هیپوتالاموس را مهار می کند. GnRH می تواند آدنوهیپوفیز را برای سنتز و ترشح FSH و LH تحریک کند تا رشد فولیکول تخمدان را تقویت کند. هنگامی که ترشح GnRH کم باشد، می تواند ترشح FSH و LH را مهار کند و در نهایت منجر به مهار رشد فولیکولی شود [8-9].

مطالعات قبلی نشان داد که Cistanche deserticola و Cuscuta chinensis اثر ترمیم خوبی بر روی مجرای تخمدان آتروفیک و مجرای تخمک آسیب دیده پس از بهبودی داشتند و می‌توانند نرخ تخم‌گذاری مرغ‌های کم‌تول را بهبود بخشند [10]. در تولید دام، استفاده از فلاونوئیدها می تواند به طور قابل توجهی عملکرد تولید دام را بهبود بخشد، مقاومت در برابر بیماری حیوانی را بهبود بخشد و عملکرد ایمنی حیوانات را بهبود بخشد.

داروهای چینی مانند جینسینگ، سیستانچ دسرتیکولا و گون

کل فلاونوئیدهای Cistanche deserticola می توانند به طور قابل توجهی باعث تکثیر سلول های گرانولوزای فولیکولی پیش درجه و درجه مرغ در شرایط آزمایشگاهی، سطح رونویسی پروتئین تنظیم کننده سریع استروئیدی (StAR)، آنزیم برش زنجیره جانبی کلسترول (CYP11A1) و mRNA ترشحی شوند. پروژسترون جزء نماینده کل فلاونوئیدهای سیستانش دسرتیکولا، سیستانش دسرتیکولا است. وزن مولکولی آن کوچک است و از مزیت عبور از سد خونی مغزی برخوردار است. در عین حال دارای اثرات ضد التهابی، ضد توموری و استروژن مانند است [11]. جزء شیمیایی اصلی Cuscuta chinensis کل فلاونوئیدهای Cuscuta chinensis است. در حال حاضر انواع فلاونوئیدها از Cuscuta chinensis جدا شده اند که عمدتاً کوئرستین و کامفرول هستند که فعالیت آنتی اکسیدانی بالایی دارند.

استفاده از عصاره فلاونوئیدی دانه ددر در موش های ماده فعالیت استروژنی را نشان می دهد که تأثیر خاصی در ارتقاء عملکرد گیرنده hCG/LH تخمدان دارد. این یک اثر گنادوتروپین روی موش های جوان دارد و می تواند رشد سیستم تولید مثل آنها را تقویت کند [12-14].

در این آزمایش، ما سلول‌های گرانولوزای فولیکولی پیش‌گرید مرغ را انتخاب کردیم و اثر تقویت‌کننده Cistanche deserticola و Kaempferol را بر تکثیر سلول‌های گرانولوزای فولیکولی پیش‌گرید مرغ و بیان گیرنده‌های مرتبط از طریق اثر Cistanche deserticola و Kaempferol بر رشد فولیکولی مرغ بررسی کردیم. ارائه یک مرجع نظری برای تحقیق و توسعه افزودنی های خوراکی ایمن، موثر و بدون باقی مانده برای بهبود عملکرد تولید لایه ها.

اثرات کلیه تونیک کننده سیستانچ

1 مواد و روش ها

1.1 مواد تست

Cistanche deserticola (خلوص بیش از یا برابر با 98 درصد) از Shanghai Jizhi Biochemical Technology Co., Ltd خریداری شد. Kaempferol (خلوص بیش از یا برابر با 98 درصد) از Shanghai Aladin Biochemical Technology Co., Ltd خریداری شد.

1.2 معرف ها و ابزار اصلی

معرف های اصلی: نوع II کلاژناز و DMEM از شرکت Thermo Fisher Technology (China) خریداری شد. DMSO از Beijing Solebao Technology Co., Ltd خریداری شد. کیت M5 Super qPCR RT با کیت رونویسی معکوس حذف gDNA از Beijing Jumei Biotechnology Co., Ltd. ابزار اصلی: BCM{1}}یک میز کار تصفیه خریداری شده از کارخانه تجهیزات پزشکی Shanghai Boxun Industrial Co., Ltd. سانتریفیوژ انجماد پرسرعت AXTGL20M از Hunan Hexi Instrument Equipment Co., Ltd خریداری شده است. دستگاه جوجه کشی با دمای ثابت Heracell 150i GP از شرکت بیوتکنولوژی Bingshan Songyang (Dalian) خریداری شد. LightCycle ® دستگاه PCR کمی فلورسانس نوع 96 و ابزار برچسب گذاری آنزیمی نوع DR{6}} هر دو از Bole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd خریداری شده اند.

1.3 جداسازی و استخراج سلول های گرانولوزا از فولیکول ها قبل از درجه بندی مرغ

سی مرغ تخم‌گذار قهوه‌ای Hailan سالم 150-روزه (تهیه‌شده توسط شرکت Hebei Baoding Dingnong) انتخاب شدند، با خون‌ریزی شریان کاروتید کشته شدند و تخمدان‌های آن‌ها به‌صورت آسپتیک خارج شدند (تست‌های تحقیقاتی حیوانی در داخل بدن طبق دستورالعمل‌های تأیید شده توسط کمیته اخلاق حیوانات دانشگاه کشاورزی هبی). فولیکول های پیش درجه را می توان به فولیکول های کوچک سفید تقسیم کرد (SWF,<2 mm), large white follicles (LWF, 3-5 mm), small yellow follicles (SYF, 6-8 mm), and large yellow follicles (LYF, 9-12 mm). Collect granulosa cells from pre-graded follicles with a diameter of 6-8 mm and prior stages. The grading of follicles (see Figure 1). 

توجه: SWF نشان دهنده فولیکول های کوچک سفید، LWF نشان دهنده فولیکول های سفید بزرگ، SYF نشان دهنده فولیکول های زرد کوچک، LYF نشان دهنده فولیکول های زرد بزرگ، و F1، F2، F3، F4 و F5 نشان دهنده پنج فولیکول بالغ است.

فولیکول های جمع آوری شده سه بار با الکل 75 درصد و در نهایت یک بار با PBS شسته شدند. سوزن استریل برای آزادسازی مایع زرده در PBS حاوی 3 درصد پنی سیلین و استرپتومایسین، برداشتن لایه سلولی غشایی و جداسازی لایه سلولی دانه ای استفاده شد. 15 میلی‌لیتر لوله EP برای افزودن لایه سلولی گرانولوزای بریده شده فولیکول‌ها و 4 میلی‌لیتر کلاژناز نوع II 0.1 درصد به آن اضافه شد. در شیکر 37 درجه به مدت 3 دقیقه تکان داده شد. پس از اتمام نوسان، مقدار مساوی محلول کشت حاوی 0.5 درصد FBS اضافه کنید تا هضم خاتمه یابد. به ترتیب با الک 200 مش و الک 400 مش فیلتر کنید. فیلتر را در دمای اتاق با سرعت r/min 1200 به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ کرده و سانتریفیوژ را دو بار تکرار کنید. مایع رویی را دور بیندازید، محیط کشت را اضافه کنید، باد کنید و به طور یکنواخت آسپیره کنید، و سوسپانسیون سلولی را تا 5 × 106 قطعه در میلی لیتر رقیق کنید و به طور یکنواخت در ظرف پتری به قطر 100 میلی متر اضافه کنید و در دمای 37 درجه و 5 درصد CO2 کشت کنید. .

1.4 اثرات Cistanche deserticola و Kaempferol بر فعالیت سلول های گرانولوزا

سلول های گرانول به طور معمول در محیط DMEM حاوی 10 درصد سرم جنین گاوی کشت داده شدند. سلول های فاز رشد لگاریتمی گرفته و با 2.5 گرم در لیتر تریپسین هضم شدند. سلول ها به طور مساوی در صفحات 96 چاهی پخش شدند. هر صفحه به 10 گروه با 6 سوراخ تکراری در هر گروه تقسیم شد. 200 عدد را به سوراخ های اطراف صفحه کشت اضافه کنید μ L PBS به عنوان یک منافذ مرطوب کننده عمل می کند. غلظت Cistanche deserticola روی 1 × 10-4 mol/L, 1 × 10-5 mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × 10-7 mol/L تنظیم شده است. L, 5 × 10-8 mol/L, 1 × 10-8 mol/L, 5 × 10-9 mol/L, 1 × 10-9 mol/L, 1 × {{ 24}} مول در لیتر. یک گروه کنترل خالی تنظیم کنید. پس از کشت همزمان سلول‌ها با سیستانچ بیزرتیکولا به مدت 24 ساعت، 10 درصد به هر چاهک μ 5 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر MTT از L اضافه کنید. لرزاننده دمای ثابت در 37 درجه. جذب را در 450 نانومتر اندازه گیری کنید. آزمایش سه بار تکرار شد و روند غربالگری دوز بهینه ایمن کامفرول برای سلول های گرانولوزا مانند بالا بود.

کلیه زنده بیابانی تقویت کننده سیستانچ

1.5 اثرات Cistanche deserticola و Kaempferol بر تکثیر آنتی ژن هسته ای سلول، گیرنده هورمون محرک فولیکول و گیرنده استروژن در سلول های گرانولوزا

اثر بیان mRNA در سلول های گرانولوزای فاز رشد لگاریتمی، تلقیح شده در سه ظرف کشت با تراکم سلولی 5 × 106 قطعه در میلی لیتر مشاهده شد. ظروف پتری به گروه شاهد خالی تقسیم شدند. گروه Cistanche deserticola، یعنی بعد از 24 ساعت کشت سلولی، 1× 10-4 mol/L Cistanche deserticola اضافه کنید. در گروه Kaempferol، 1 بعد از 24 ساعت کشت سلولی × 10-4 mol/L Kaempferol اضافه کنید. گروه استروژن، 5 عدد را بعد از 24 ساعت کشت سلولی اضافه کنید × با 10 تا 8 مول در لیتر استروژن تیمار کنید. پس از 24 ساعت کشت، تمام محیط کشت را دور بریزید، با PBS شستشو دهید، 1 میلی لیتر آنزیم پانکراس را برای هضم اضافه کنید و پس از چند دقیقه به مقدار مساوی محیط کشت اضافه کنید تا هضم خاتمه یابد. سوسپانسیون سلولی را با سرعت 1000 r/min به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ کنید، مایع رویی را دور بیندازید و معرف تریزول را در جعبه یخ اضافه کنید. پس از آن، کلروفرم اضافه شد و به شدت تکان داده شد، حدود 3 دقیقه در جعبه یخ قرار داده شد و به مدت 10 دقیقه در 4 درجه با سرعت 12000 دور در دقیقه سانتریفیوژ شد. RNA را به یک لوله EP جدید منتقل کنید، حجم مساوی ایزوپروپانول را اضافه کنید، به آرامی خوب مخلوط کنید و بگذارید 10 دقیقه در یک جعبه یخ بماند. پس از سانتریفیوژ در دمای 4 درجه به مدت 10 دقیقه با سرعت 12 000 r/min، مایع رویی را دور بریزید و رسوب را با اتانول 80 درصد بشویید. با سرعت 10 000 r/min و 4 درجه به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ کنید، اتانول را دور بیندازید، 5-10 دقیقه در هوا خشک کنید، و آب DEPC را برای دمیدن و مکش اضافه کنید تا رسوب حل شود. غلظت RNA را با استفاده از اسپکتروفتومتر UV اندازه گیری کنید.

از کیت M5 Super plus qPCR RT با کیت حذف gDNA برای رونویسی معکوس برای به دست آوردن cDNA استفاده کنید. تشخیص آنتی ژن هسته ای سلولی در حال تکثیر، گیرنده هورمون محرک فولیکول و گیرنده استروژن در سلول های گرانولوزا توسط سطح رونویسی نسبی MRNA PCR کمی فلورسنت در زمان واقعی. اطلاعات پرایمر در جدول 1 نشان داده شده است و پرایمرها توسط Shenggong Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. طراحی و سنتز شدند. گروه مرجع داخلی - Actin، سطح رونویسی نسبی mRNA برای هر ژن توسط 2- تعیین می شود. ΔΔ محاسبه شده توسط Ct.

جدول 1 اطلاعات آغازگر

1.6 کشت آزمایشگاهی و مشاهده مورفولوژیکی بافت تخمدان

بافت تخمدان 30 40-مرغ تخمگذار قهوه ای Hailan یک روزه را بردارید و سه بار با الکل ۷۵ درصد بشویید. بافت تخمدان را به قطعات کوچک 1-2 میلی‌متر مکعب در یک جدول فوق‌العاده تمیز برش دهید، با نرخ 500 در هر چاه میکرولیتر به DMEM و محیط ITS (10 میکروگرم در میلی‌لیتر انسولین، 5 میکروگرم در میلی‌لیتر ترانسفرین). و 30 نانومول در لیتر سلنیت سدیم). پس از 72 ساعت کشت در انکوباتور با توجه به وضعیت گروه بندی تیمار کنید. بافت تخمدان به یک گروه کنترل خالی، گروه Cistanche deserticola، گروه Kaempferol و گروه استروژن تقسیم شد. پس از 72 ساعت کشت، بافت تخمدان با فرمالدئید 4 درصد تثبیت شد و برش های بافتی به طور معمول برای مشاهده در زیر میکروسکوپ نوری آماده شدند.

1.7 آمار و تجزیه و تحلیل

داده‌های qPCR با استفاده از نرم‌افزار Biorad CFX Manager 2.{1}} و نرم‌افزار Microsoft Excel و از نرم‌افزار SPSS 21 برای ANOVA یک طرفه استفاده شد. برای مقایسه چندگانه از روش دانکن استفاده شد. نتایج به صورت «میانگین ± انحراف معیار» نمایش داده شده و با استفاده از نرم افزار GraphPad Prism 5 ترسیم شده است.{6}}. پ<0.05 indicates significant differences, while P<0.01 indicates extremely significant differences.

2 نتایج و تجزیه و تحلیل

2.1 اثرات Cistanche deserticola و Kaempferol بر تکثیر سلول های گرانولوزا

از شکل‌های 2 و 3 مشاهده می‌شود که هم Cistanche deserticola و هم Kaempferol می‌توانند تکثیر سلول‌های گرانولوزا را تقویت کنند. در 1 × 10-4 ~ 1 × در یک گرادیان غلظت 10-10 مول در لیتر، در مقایسه با گروه شاهد خالی، غلظت 1 × 10-4 مول در لیتر، 1 × {{ 9}} مول در لیتر، 1 × 10-6 مول در لیتر، 1 × در 10-7 مول در لیتر، تفاوت بسیار معنی دار بود (P<0.01), with a concentration of 5 × The difference was significant at 10-8 mol/L (P<0.05).

توجه: "* *" نشان دهنده تفاوت معنی داری در مقایسه با گروه شاهد خالی است (ص<0.01), and "*" indicates a significant difference compared to the blank control group (P<0.05), the same below.

شکل 2 مقادیر جذب سلول های گرانولوزا در معرض سیستانش دسرتیکولا در غلظت های مختلف به مدت 24 ساعت

شکل 3 مقادیر جذب سلول های گرانولوزا در معرض کامفرول در غلظت های مختلف به مدت 24 ساعت

2.2 اثرات Cistanche deserticola و Kaempferol بر تکثیر آنتی ژن هسته ای سلول، گیرنده هورمون محرک فولیکول و گیرنده استروژن سلول های پره گرانولوزای مرغ تأثیر mRNA بر سطوح رونویسی نسبی

از جدول 2 مشاهده می شود که گروه های Cistanche deserticola و Kaempferol روی تکثیر آنتی ژن هسته ای سلول، گیرنده هورمون محرک فولیکول و گیرنده استروژن سلول های گرانولوزای مرغ از پیش درجه بندی شده تأثیر دارند. گروه کنترل و گروه استروژن (P<0.05 or P<0.01), and the follicle-stimulating hormone receptor and estrogen receptor of chicken pre aggregate cells in the Kaempferol group α The transcription level of mRNA is the highest (P<0.01).

جدول 2 اثرات Cistanche deserticola و Kaempferol بر تکثیر آنتی ژن هسته ای سلول، گیرنده هورمون محرک فولیکول، و گیرنده استروژن سلول های پره گرانولوزای مرغ تاثیر mRNA بر سطوح رونویسی نسبی

2.3 مشاهده بافت شناسی تخمدان ها

از شکل 4 مشاهده می شود که در مقایسه با گروه کنترل، تعداد فولیکول ها در بافت تخمدان تیمار شده با Cistanche deserticola و Kaempferol به طور قابل توجهی افزایش یافت و سلول های گرانولوزا از تک لایه به چند لایه تکثیر شدند. در مقایسه با گروه استروژن، گروه Cistanche deserticola و گروه Kaempferol توانایی آشکارتری برای ترویج بلوغ و توسعه بافت تخمدان دارند و گروه Cistanche deserticola و گروه Kaempferol تأثیر آشکارتری نسبت به گروه Kaempferol دارند.

3 بحث

3.1 اثر Cistanche deserticola و Kaempferol

کل فرآیند رشد فولیکولی با تکثیر سلول های گرانولوزا همراه است که برای رشد فولیکولی اهمیت زیادی دارند. آنها رشد فولیکول های اولیه را با ساختن ریزمحیط های مولکولی مطلوب آغاز می کنند. در طول رشد فولیکولی، آپوپتوز سلول‌های گرانولوزا نقش مهمی در تنظیم رشد فولیکولی، بلوغ سلول‌های تخمک و ترشح استروژن دارد [15-16]. Cistanche deserticola، یک داروی گیاهی چینی، دارای اثری شبیه به هورمون جنسی است که می‌تواند باعث رشد فولیکول‌های حیوانی و تولید اسپرم، افزایش رسیدن طبیعی فحلی، بهبود عملکرد و فعالیت تخمدان‌ها و بهبود عملکرد تولید مثل شود. Cuscuta chinensis، به عنوان یک داروی سنتی چینی تقویت کننده کلیه، دارای اثرات آنتی اکسیدانی، تولید مثلی و ضد پیری به عنوان فلاونوئیدهای جزء موثر آن است. مطالعات نشان داده است که دوز معینی از فلاونوئیدها از Cuscuta chinensis اثر تکثیری بر سلول های بینابینی بیضه موش دارد [17-18]. در این آزمایش، Cistanche deserticola و Kaempferol، به عنوان اجزای اصلی داروهای سنتی چینی Cistanche deserticola و dodder، برای بررسی اثرات آنها بر توانایی بیان سلول‌های گرانولوزای فولیکولی مرغ و گیرنده‌های مرتبط با آنها و بافت تخمدان، برای تایید اثرات انتخاب شدند. Cistanche deserticola و Kaempferol در توسعه سیستم تولید مثل طیور.

اثرات کلیه تونیک کننده سیستانچ

برای مشاهده محصولات Cistanche for Kidney بیماری اینجا را کلیک کنید

【بیشتر بخواهید】 ایمیل:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

3.2 تکثیر آنتی ژن هسته ای سلول، گیرنده هورمون محرک فولیکول، و گیرنده استروژن نقش

PCNA یک آنتی ژن هسته ای سلولی در حال تکثیر است که نقش مهمی در شروع تکثیر سلولی ایفا می کند و شاخص خوبی برای تکثیر سلولی است. بنابراین، افزایش PCNA در نتایج آزمایش تأیید کرد که Cistanche deserticola و Kaempferol وقتی روی سلول‌های گرانولوزا عمل می‌کنند، تکثیر سلولی را تقویت می‌کنند. FSH هورمون اصلی است که باعث رشد فولیکولی می شود [19] و محل بیان گیرنده هورمون محرک فولیکول (FSHR) عمدتاً در تخمدان و فولیکول ها متمرکز است. راه اصلی شرکت FSH در فعالیت های تولید مثلی مرغ ها از طریق تنظیم رشد فولیکول ها است. هنگامی که ترشح FSH افزایش می یابد، می تواند باعث افزایش FSHR در سلول های گرانولوزا شود و ترکیب این دو می تواند با فعال کردن آروماتاز، سنتز LHR را القا کند. جوجه می تواند تحت اثر هم افزایی FSH و LH [{2}}] تخمک گذاری را القا کند. قبل از انتخاب فولیکول، سلول های گرانولوزا فقط سطوح پایه FSHR را بیان می کنند که برای دریافت سیگنال های FSH و تولید سطوح پایین آدنوزین فسفات حلقوی برای حفظ فعالیت سلولی استفاده می شود. هنگامی که بیان FSHR به طور قابل توجهی در سلول‌های گرانولوزای یک فولیکول پیش‌گرید تنظیم می‌شود، نشان می‌دهد که فولیکول برای تبدیل شدن به یک فولیکول درجه [23-24] انتخاب می‌شود. در این مطالعه، در مقایسه با گروه کنترل، بیان mRNA ژن FSHR در گروه‌های Cistanche deserticola و Kaempferol به طور قابل‌توجهی افزایش یافت، که نشان می‌دهد Cistanche deserticola و Kaempferol می‌توانند رونویسی mRNA ژن FSHR، افزایش ترشح FSH و ارتقای انتخاب را افزایش دهند. فولیکول ها به عنوان فولیکول های درجه. E2 نوعی هورمون استروئیدی است که توسط سلول های theca ترشح می شود. عملکرد آن ارتقاء بلوغ جنسی حیوانات ماده و نشان دادن دومین ویژگی جنسی است. تحت تأثیر FSH، آروماتاز ​​تولید شده توسط سلول های گرانولوزای تخمدان، آندروژن را به E2 تبدیل می کند که توسط دو گیرنده استروژن (ER و ER) تنظیم می شود و بر اندام های مختلف حیوانات ماده تأثیر می گذارد و نقش مهمی در تولید مثل حیوانات، به ویژه در زمینه های فیزیولوژیکی دارد. فعالیت هایی مانند رشد فولیکولی استروژن یک مولکول تنظیم کننده کلیدی درون سلولی است که تکثیر سلول های گرانولوزا را تسریع می کند و اثرات FSH و LH بر تکثیر و تمایز سلول های تخمدان را افزایش می دهد. ER تنظیم اصلی بازخورد منفی، ER است. رشد فولیکول ها از طریق مسیرهای داخلی و خارجی تخمدان تنظیم می شود [26]. ER عمدتاً در بافت ها و اندام هایی مانند غده پستانی، رحم و واژن حیوانات بیان می شود، در حالی که ER عمدتاً در بیضه ها بیان می شود. ، تخمدان ها، پروستات و هیپوتالاموس [27].

در این مطالعه، ER میزان بیان Cistanche deserticola و Kaempferol به طور قابل توجهی در گروه Cistanche deserticola و Kaempferol افزایش یافت، که نشان می دهد سیستانچ و کامفرول اثرات مثبتی بر رشد، بلوغ و تخمک گذاری تخمدان مرغ دارند. نتایج این مطالعه نشان داد که ER اندازه گیری شد و سطح بیان نسبتاً پایین است. این با یافته‌های تحقیقاتی Guo Miao [28] مطابقت دارد که در رشد جنینی جوجه‌ها، تخمدان‌های جوجه‌های اولیه مکان‌های اتصال خاصی برای ER دارند. در فولیکول های سفید، فولیکول های زرد و سلول های گرانولوزای جوجه ها، بیان ER به طور قابل توجهی بیشتر از ER است. فلاونوئیدهای سویا، به عنوان یک استروژن گیاهی، می توانند نرخ تولید تخم مرغ را در صورت اضافه شدن به جیره افزایش دهند [29] که نشان دهنده رابطه مستقیم بین سطح هورمون استروژن و سرعت تولید تخم است.

شکل 4 بافت تخمدان پس از رنگ آمیزی HE (10×）

3.3 اثرات Cistanche deserticola و Kaempferol بر بافت تخمدان

در این آزمایش، با کشت توام Cistanche deserticola و Kaempferol به ترتیب با بافت تخمدان، مشخص شد که تعداد فولیکول‌های بافت تخمدان تحت تأثیر Cistanche deserticola و Kaempferol به طور معنی‌داری افزایش یافته و سلول‌های گرانولوزا از تک لایه به چند لایه تکثیر می‌شوند. این بیشتر ثابت می کند که Cistanche deserticola و Kaempferol می توانند رشد تخمدان را از منظر بافت شناسی تقویت کنند. آنتی ژن سلولی در حال تکثیر، گیرنده هورمون محرک فولیکول و گیرنده استروژن اندازه‌گیری شده در نتایج این آزمایش، تغییرات شاخص‌ها تایید کرد که Cistanche deserticola و Kaempferol دارای اثرات مشابه استروژن هستند که مبنایی تجربی برای کاوش هدف اجزای اصلی فراهم می‌کند. از Cistanche deserticola و dodder.

4. نتیجه گیری

این مطالعه تأیید کرد که Cistanche deserticola و Kaempferol می‌توانند تکثیر سلول‌های گرانولوزای پیش‌گروه شده توسط مرغ را افزایش دهند و PCNA، FSHR و ER را افزایش دهند.

ارجاع:

［1］Yang Pengyun, Song Beibei, Ma Jinrui, et al. نقش سلولهای گرانولوزا در تشکیل تخمک [J] Poultry Science، 2021 (11): 50-54

2/2 HUO SY، LI YR، GUO Y، و همکاران. بهبود اثرات فلاونوئیدهای Epimedi⁃ um بر ویژگی های تولید مثلی انتخاب شده در مرغ های لایه ای پس از پوست اندازی اجباری (J］). علوم طیور، 2020،99 (5): 2757-2765.

3/3 HUO SY، LI YR، ZHANG S، و همکاران. عملکردهای اپیمدیوم بر روی مجرای تخمک پسرفته و فولیکول‌های مرغ‌های لایه‌ای با نیروی ذوب شده (J) Journal of World's Poultry Research, 2020,10（2）:326- 335.

4/4 راجو GR، چاوان آر، دینادیال ام، و همکاران. هم افزایی هورمون لوتئینه کننده و هورمون محرک فولیکول: مروری بر نقش در تحریک بیش از حد تخمدان کنترل شده (J［). Journal of Hu⁃ man reproductive ences,2013,6（4）:227-234.

［5］ SCHMIDT D. فاکتور رونویسی مارپیچ بالدار موش Foxl2 برای تمایز سلولی گرانولوزا و نگهداری تخمدان مورد نیاز است. توسعه، 2004،131 (4): 933-942.

6/6 سالیوان مگاوات، استوارت-آکرز A، کراسنو جی اس، و همکاران. پاسخ های تخمدان در زنان به هورمون تاخیری نوترکیب محرک فولیکول و هورمون لوتئینیزه کننده (LH): نقش LH در مراحل نهایی بلوغ فولیکولی (J］). مجله بالینی غدد درون ریز و متابولیسم، 1999، 84 (1): 228-232.

7/7 GUO Y، LI YR، ZHANG S، و همکاران. تأثیر کل فلاونوئیدهای اپی‌مدیوم بر رشد سلول‌های گرانولوزا در مرغ‌های تخم‌گذار. علوم طیور، 2020،99(9):4598-4606.

8/8 ZHANG WD، LI N، DU ZR، و همکاران. گیرنده IGF{1}} در اثرات تنظیمی ایکاریین و ایکاریتین در آستروسیت ها در شرایط پایه و پس از یک چالش التهابی (J］) نقش دارد. مجله اروپایی فارماکولوژی، 2021,906 (5):174269- 174278.

FREDERIQUE RZ، MIGUEL F، GE Y و همکاران. ساختار تنظیمی سلول گنادوتروپ L T2 زیربنای پاسخ به هورمون آزاد کننده گنادوتروپین (J［). مرزها در اندوکرینول⁃ اوگی، 2018، 9:34.

［10］ Huo Shuying، Kang Jingmin، Li Yurong، و همکاران اثر "پودر Yimu" بر ترمیم لوله های فالوپ و عملکرد تخمگذار در مرغ های تخمگذار [J] China Poultry، 2018، 40 (19): 4

11/1 وانگ اس، وانگ کیو، وانگ اچ و همکاران. القای پیری وابسته به آسیب ROS و DNA توسط ایکاریتین به فعالیت ضد توموری آن در سلول های سرطان کبد (J［J］) کمک می کند. زیست شناسی دارویی، 2019،57 (1):424-431.

［12］ Wang Jianhong، Wang Minzhang، Wu Qinghua، et al.

［13］Miao Jiangxia پیشرفت در تحقیق بر روی اجزای فعال و مکانیسم عمل دانه های دمنوش در تنظیم تولید مثل//مجموعه مقالات کنفرانس علمی در مورد گیاه شیمی دارویی و توسعه پایدار منابع طب سنتی چینی (I)، 2009: 323-325

14/14 TAO CC، WU Y، GAO X، و همکاران. اثرات ضد توموری Icari⁃ قلع علیه سرطان سینه مربوط به گیرنده های استروژن (J］) است. پزشکی مولکولی کنونی، 2020،21 (1):73-85.

15/1 MONNIAUX، DANIELLE. هدایت فولیکولوژنز توسط گفتگوی سلول-سوماتیک oo3: درس هایی از مدل های ژنتیکی (J］). ریوژنولوژی⁃، 2016،86(1):41-53.

16 تاکاشی شیمیزو، نائومیچی کوزاکا، چیاکیمو رایاما آ و همکاران. بیان گیرنده آپلین و APJ در سلول‌های گرانولوزا و تکا در مراحل مختلف رشد فولیکولی در تخمدان گاو: دخالت آپوپتوز و تنظیم هورمونی - Sciencedirect［J］. علوم تولید مثل حیوانات، 2009،116(1-2):28-37.

［17］ Lin Siwen، Chen Shaobo، Yin Changchang، و همکاران اثر استروژنی کل فلاونوئیدهای Cistanche deserticola deserticola بر ارتقای تمایز استخوانی ［ J ］ تحقیق و توسعه محصول طبیعی، 2020، 32 (3): {{4}

Tao Jinliang، Wang Xiao، Wei Yuanyuan، و همکاران اثر محافظتی فلاونوئیدهای Cuscuta chinensis بر ترشح غیرطبیعی هورمون‌های مردانه ناشی از BPA در سلول‌های بینابینی بیضه موش [J] Progress in Animal Medicine 2019، {4 (2019)، {4}}

［19］ Wang Peng، Hou Deyu، Shi Liguang، و همکاران Danzhou Chicken FSH مطالعه بر روی چندشکلی تک نوکلئوتیدی ژن ［ J ］ Heilongjiang Animal Husbandry and Veterinary Medicine، 2018، 10 (19}):

20/20 ZHANG M، SHI H، SEGALOFF DL، و همکاران. بیان و کالیزاسیون گیرنده هورمون لوتئینیزه کننده در دستگاه تناسلی موش ماده (J［). زیست شناسی تولید مثل، 2001،64 (1): 179-187.

［21］ Li Qin, Wang Qigui TGF- پیشرفت تحقیق و چشم انداز اعضای خانواده در تنظیم رشد فولیکولی در طیور ［ J ］ China Poultry, 2019, 41 (19): 1-5

［22］Guan Hongbin، Li Qingzhang پیشرفت تحقیقات در مورد هورمون محرک فولیکول [J] مجله دانشگاه کشاورزی شمال شرقی، 2002، 8 (3): 306-311

［23］ Wu Xinpei, Wang Shuying ایمونوهیستوشیمی محلی سازی FSHR و LHR در تخمدان های Laiwu Black Goat ［ J ］ Life Science Research, 2006, 25 (4): 367-371

TISCHKAU SA، HOWELL RE، HICKOK JR، و همکاران. افزایش هورمون lu⁃ teinizing بیان ژن ساعت شبانه روزی را در تخمدان مرغ تنظیم می کند. Chronobiology international, 2011,28(1):10-20.

［25］Tang Haifei، Wang Zhiwen، Zheng Xuesong، et al پیشرفت در تحقیقات عملکرد استروژن [J] تولید مثل و پیشگیری از بارداری، 2019، 39 (4): 334-340

［26］ لیو لینگبین اثر نور تابش تک رنگ بر گیرنده استروژن (ER، ER)، تأثیر بیان گیرنده پروژسترون (PR-A، PR-B) در بافت تخمدان Ya'an: دانشگاه کشاورزی سیچوان، 2013

27/2 COUSE JF، LINDZEY J، GRANDIEN K، و همکاران. توزیع بافتی و تجزیه و تحلیل کمی گیرنده استروژن آلفا (ERal3 pha) و گیرنده استروژن - بتا (ERبت) در نوع پیام رسان ریبونوکل اسیدی. و موش ERalpha ناک اوت (J］). En⁃ docrinology,1997,138（11）:4613-4621.

［28］Guo Miao ER در بافت تخمدان مرغ های تخمگذار تنظیم ظاهری تغییرات دینامیکی و غربالگری ژن تنظیم کننده Tai'an: دانشگاه کشاورزی شاندونگ، 2017. [پیشرفت پژوهشی Zhao Biqian در کاربرد دایدزین در تولید مرغ های تخمگذار [J ] فید گوانگدونگ، 2017، 26 (8): 31-33