الاستین پروتئین الاستیک بافت های همبند اپیدرم را با کلاژن تشکیل می دهد

لطفا تماس بگیریدoscar.xiao@wecistanche.comبرای اطلاعات بیشتر

خلاصه:یک گزانتون گلیکوزید جدید، 135،6-تتراهیدروکسی گزانتون-C{3}}D-گلوکوپیرانوزید از عصاره متانولی برگهای Mangifera Indica (Anacardiaceae) که در مصر رشد می‌کرد، جدا شد. ساختار با داده های طیف سنجی 1D و 2D-NMR روشن شد. خواص فیزیکوشیمیایی ترکیب مانند چربی دوستی، حلالیت و ملاحظات فرمولاسیون از طریق تکنیک ADMET در سیلیکو با استفاده از سرور SwissADME پیش‌بینی شد. این تکنیک قانون پنج لیپینسکی مانند جذب GIT، توزیع، متابولیسم و ​​نفوذ پوست را ارائه کرد. فعالیت‌های بازدارنده در شرایط آزمایشگاهی علیه آنزیم‌های با واسطه پیری مانند کلاژناز، الاستاز، هیالورونیداز و تیروزیناز مورد ارزیابی قرار گرفت. این ترکیب اثرات ضد کلاژناز، ضد الاستاز، ضد هیالورونیداز و ضد تیروزیناز با مقادیر IC5{20}} به ترتیب 1.06،419.10، 1.65 و 0.48 میکروگرم در میلی لیتر در مقایسه با کنترل مثبت نشان داد. این ترکیب حلالیت آبی پیش‌بینی‌شده و نفوذ معقول به پوست را نشان داد که نشان‌دهنده مناسب بودن ترکیب برای فرمولاسیون موضعی به عنوان یک عامل ضد پیری برای آماده‌سازی‌های آرایشی است.

کلید واژه ها:گزانتون; Mangifera indica; سالخورده؛ سلولاژناز؛ الاستاز؛ تیروزیناز؛ هیالورونیداز؛ در سیلیکو ADMET

1. مقدمه

فرآیند پیری یک فرآیند بیوشیمیایی پیچیده مرتبط با استرس اکسیداتیو است که توسط رادیکال‌های آزاد اکسیژن و نیتروژن درون‌زا ایجاد می‌شود که در طول امید به زندگی تولید می‌شوند، که ممکن است به پیشرفت تظاهرات مرتبط با سن کمک کند [1]. آسیب شناسی های پیری پوست مانند چین و چروک، هایپرپیگمانتاسیون، لکه های پیری، چین و چروک، ملاسما، کک و مک، لنتیگو، افلیدها، خال ها، قهوه ای شدن و ملانوما با فعال شدن گونه های فعال اکسیژن (ROS) انجام می شوند [2]. رادیکال‌های آزاد یا ROS به طور بالقوه می‌توانند تغییری در ترکیب ساختاری سلول‌های پوست ایجاد کنند و با تحریک اکسیداسیون لیپیدها و پروتئین‌ها به غشای سلولی آسیب برسانند و منجر به آسیب DNA و مرگ سلولی شوند [3،4]. علاوه بر این، ROS با آسیب رساندن به پروتئین‌های اصلی پوست مانند کلاژن و الاستین با فعال‌سازی آنزیم‌های کلاژناز و الاستاز، نقش مهمی در روند پیری پوست ایفا می‌کند. علاوه بر این، رادیکال های آزاد از طریق فعال شدن هیالورونیدازها باعث تخریب اسید هیالورونیک می شوند که منجر به هیدراتاسیون نامناسب پوست می شود [5،6]. پیش‌بینی این فرآیندهای پویا یک مسئله کلیدی برای حوزه آرایشی و بهداشتی در نظر گرفته می‌شود و نیروی کار تحقیقاتی قابل توجهی برای کشف فرمول‌های محافظ جدید هزینه می‌شود[7]. آنتی اکسیدان ها آنزیم های دفاعی طبیعی موجود در پوست هستند و با رادیکال های آزاد بیش از حد تولید شده در بدن مقابله می کنند. با این حال، تعادل اکسیداتیو ممکن است توسط عوامل متعددی از جمله رژیم غذایی و آلودگی هوا که منجر به استرس اکسیداتیو می شود، مختل شود. در این استرس اکسیداتیو، بار رادیکال های آزاد در بدن به طور قابل توجهی بیشتر از آنتی اکسیدان های طبیعی است. بنابراین، استفاده از آنتی اکسیدان های خارجی از منابعی مانند رژیم غذایی، لوازم آرایشی یا دارویی برای خنثی کردن رادیکال های آزاد و مقابله با روند پیری پوست بسیار مهم است [5،8]. مطالعات مدرن نشان داده اند که چندین متابولیت ثانویه طبیعی، عمدتاً فلاونوئیدها و پلی فنولیک ها به طور قابل توجهی در فعالیت آنتی اکسیدانی کل بسیاری از گیاهان نقش دارند [9]. این امر منجر به علاقه مندی به بررسی فعالیت آنتی اکسیدانی بسیاری از گیاهان شده است [10]. میوه ها به دلیل غنی بودن از این فنول ها و فلاونوئیدها و همچنین ویتامین ها گزارش شده اند [11].

لطفا برای دانستن بیشتر اینجا را کلیک کنید

الاستین پروتئین الاستیک بافت های همبند اپیدرم را با کلاژن تشکیل می دهد و نقش مهمی در پیشگیری از چین و چروک و استحکام پوست دارد[12]. در طول پیری سلولی، متالوپروتئینازهای ماتریکس مانند کلاژناز، الاستاز و هیالورونیداز تنظیم می شوند [13]. سرکوب این آنزیم ها یکی از موثرترین راهبردهای درمانی برای مدیریت بدتر شدن شرایط پوستی در طول پیری است [14]. ترکیبات فنلی مشتق شده از گیاه به دلیل خواص بازدارندگی تیروزیناز [15] و برخی از آنها (از طریق اثر بازدارندگی الاستاز می توانند در بازسازی ماتریکس نقش داشته باشند، به عنوان واسطه های سفیدکننده قوی توصیف شده اند [16]).

Mangifera indica L. یکی از مهمترین گیاهان خوراکی متعلق به خانواده Anacardiaceae است که در بسیاری از کشورها به ویژه مناطق گرمسیری پراکنده شده است [17]. میوه‌های انبه بیش از 4000 سال است که نقش مهمی در زمینه‌های کشاورزی، غذایی، دارویی و غذایی داشته‌اند [18]. همچنین میوه انبه در بین محصولات صنعتی پس از بالانا از نظر تولید و پوشش در جایگاه دوم قرار دارد [19]. بخش های مختلف Mangifera indica منبع غنی از ترکیبات گیاهی مختلف از جمله فلاونوئیدها، گزانتونوئیدها، اسیدهای فنولیک و تری ترپنوئیدها با ارزش بالقوه به عنوان مولکول های عملکردی هستند [18]. علاوه بر این، میوه ها اجزای حیاتی مانند کربوهیدرات ها، پروتئین ها، چربی ها، مواد معدنی، ویتامین ها، اسیدهای آمینه ضروری، کاروتنوئیدها، فیبرهای غذایی و فنولیک ها را به بدن انسان می رسانند [20]. به طور سنتی، فرهنگ های مختلف گزارش کردند که دم کرده برگ برای چندین بیماری مانند اسهال، اسهال خونی خونی، کم خونی، آسم، برونشیت، فشار خون بالا، بی خوابی، روماتیسم، سوء هاضمه، هپاتیت، کزاز، سقط جنین و خونریزی استفاده شده است [21]. علاوه بر این، دود سوزاندن برگها برای سکسکه و ناراحتی های گلو استنشاق شد [18]. از پوست به عنوان مدر و در پانسمان های ضد روماتیسمی استفاده می شد. این دانه ها برای درمان سرماخوردگی، آسم، اسهال و توده های خونریزی دهنده به خوبی شناخته شده اند. فعالیت آنتی اکسیدانی، فنل کل بالا (TPC)، محتویات فلاونوئید کل (TFC)، فعالیت مهارکننده 2،{10}دی فنیل{11}}پیکریل هیدرازیل (DPPH) و ظرفیت بازدارندگی لینولئیک قسمت های گیاه Mangifera indica گزارش شده است. 22].

سیستانچ می تواند ضد پیری باشد

این مطالعه به منظور بررسی خواص بازدارندگی در شرایط آزمایشگاهی یک ترکیب جدید زانتون به‌دست‌آمده از عصاره متانولی 70 درصدی برگ‌های Mangifera indica L. علیه کلاژناز، الاستاز، تیروزیناز و هیالورونیداز طراحی شد. علاوه بر این، خواص فارماکوکینتیکی مانند جذب، توزیع، متابولیسم و ​​سمیت (در پیش‌بینی ADMET سیلیکونی) با استفاده از قانون پنج SwissADME و Lipinski برای ارزیابی حلالیت، نفوذپذیری و ضرورت‌های فرمولاسیون دارو انجام شد.

2. نتایج و بحث

2.1. توضیح ساختار ترکیب جدا شده

این ترکیب به صورت کریستال های زرد (18.29 میلی گرم) به دست آمد. تجزیه و تحلیل کروماتوگرافی یک نقطه زرد کم رنگ در TLC را تحت نور طولانی UV (365 نانومتر) در سیستم‌های حلال DCM:MeOH (7:3) و BAW نشان داد. هنگامی که لکه با محلول 1 درصد متانولی کلرید آهن درمان شد، سبز تیره شد و با محلول آمونیاک پاششی به رنگ زرد درآمد. داده های طیفی lH-NMR، APT و HMBC ترکیب در جدول 1 گردآوری شده است. 7.57 و 6.79 با ثابت جفت شدن 8.24 هرتز که نشان دهنده وجود دو پروتون جفت شده ارتو است. علاوه بر این، منطقه آروماتیک طیف H-NMR حضور یک سیگنال منفرد را در Su 5.96 نشان داد که نشان دهنده حضور یک پروتون منفرد در حلقه آروماتیک است. پروتون آنومری واحد C-glucosyl در Su 4.60 ppm با مقدار ثابت جفت 7 هرتز اختصاص داده شده برای -anomer تشخیص داده شد. این الگوی پروتون های آروماتیک در طیف H-NMR ترکیب جدا شده شبیه ساختار گزانتون است. علاوه بر این، حضور یک پروتون آنومریک در ou 4.60 با تغییرات شیمیایی مشخصه گلوکز در 3.21 تا 4.60 از lH-NMR (ناحیه قند) نشان داد که یک پیوند C-گلیکوزیدی بین قند و گزانتون وجود دارد. همانطور که در شکل S3 نشان داده شده است، طیف APT ترکیب، حضور نوزده سیگنال کربن را نشان می دهد که نشان دهنده ساختار گزانتون و C-گلوکوزید است.بررسی cistanche tubulosaآزمایش APT سه گروه CH (C{0}}، 131.95؛ C-7، 115.10؛ C-2، 95.35 ppm) را در قسمت زانتون و آنومریک C-1 شناسایی کرد. از C-گلوکز در SH75.13 ppm. ما آزمایش‌های NMR دو بعدی (HMBC؛ شکل S4) را برای تأیید پیوند گلیکوزیدی C-گلوکز در C{16} گزانتون انجام دادیم. سیگنال‌های همبستگی لگاریتم برد فراوان 2,3JCH، ستون فقرات گزانتون را با پیک‌های متقاطع مشاهده‌شده از H-1'(6) 4.60) تا C{25}} (6c 104.13 ppm) و C{29}} تأیید کردند. (6c 158.95).بیوفلاونوئیدهای مرکباتبرای بخش گزانتون، یک همبستگی دوربرد 2,3JCH نیز از H-2(8) تا C-4(6c 104.13 ppm)، C{9}} (8c 158.95) شناسایی شد. و C{13}}b(6c 107.45). علاوه بر این، یک همبستگی دوربرد از H-8(8)7.57) با گروه کربونیل C-9( 6c 195.14)، C-8a(6c 131.22)، و C{31}} （6c161.87）. برای همان حلقه، aJcH از H{35}} (6μ 6.79) به C{ {39}}a (6c 131.22) مشاهده شد. این همبستگی ها در ساختار ترکیب در شکل 1 نشان داده شده است. آزمایش H، H COZY (شکل S6) یک همبستگی متقاطع قوی بین H{48}} (δu 6.79) و H{51}} (8H7.57) را نشان داد. علاوه بر این، این ترکیب یک پیک یون شبه مولکولی [MH]- را در m/z 421 نشان داد که نشان‌دهنده فرمول مولکولی CgHngOrin در حالت منفی آنالیز ESI-MS است (شکل S7). داده‌های 1H-NMR، APT، IH، H COSY، HMBC، و HSQC ما را به این فرض سوق داد که این ترکیب می‌تواند 1،3،5،6-تتراهیدروکسی‌گزانتون-C{67}}D-گلوکوپیرانوزید باشد. این با مقایسه با داده های NMR گزارش شده از ایزومانگیفرین در ادبیات تایید شد [23،24].

2.2. در پیش بینی فارماکوکینتیک سیلیکو از ترکیب جدا شده

سرور آنلاین SwissADME برای ارزیابی توانایی دارویی ترکیب جدا شده با تخمین قانون پنج لیپینسکی (RO5) برای شباهت دارویی استفاده شد[25]. لیپینسکی گزارش داد که 90 درصد داروهای خوراکی فعال که به وضعیت بالینی فاز II رسیده‌اند دارای MWT کمتر یا مساوی 500، logp کمتر یا مساوی 5، اهداکنندگان باند H کمتر یا مساوی 5، و گیرنده‌های باند H کمتر از یا برابر با 10 [26]. SwissADME شش پارامتر فیزیکوشیمیایی اضافی مرتبط با شباهت دارویی مانند چربی دوستی [27]، اندازه، قطبیت [28]، حلالیت [29،30]، انعطاف پذیری، و اشباع را پیش بینی می کند [31،32] همانطور که در شکل 2 و جدول 2 نشان داده شده است.cistanche انگلستاننمودار SWISSADME شباهت دارویی ترکیب جدا شده نشان داد که بیشتر خواص فیزیکوشیمیایی ترکیب در محدوده مطلوب [33] است به جز تعداد گیرنده‌های پیوند H، اهداکنندگان باند H و قطبیت ترکیب. مقدار PSA 201.28 A2 است (محدوده مطلوب (بین 20 تا 130 A2) [28]. این قطبیت بالا ممکن است به وجود یک نصفه قند نسبت داده شود. ] و Log S (ESOL) [30]. این فرمولاسیون آینده این ترکیب را تسهیل می‌کند. فارماکوکینتیک پیش‌بینی‌شده نشان داد که این ترکیب دارای جذب GIT پیش‌بینی‌شده پایین و بدون نفوذ به BBB مطابق با مدل تخم‌مرغ آب‌پز دانیا [34] است که توسط سرور آنلاین SwissADME[33].cistanche wirkungعلاوه بر این، این ترکیب هیچ اثر بازدارنده ای روی پنج ایزوفرم سیتوکروم P450 (1A2،2C19،2C9،2D6، و 3A4) نشان نداد [35]، که نشان دهنده احتمال کم تداخلات دارو و دارو است. نفوذ پوست پیش بینی شده توسط یک مدل رگرسیون خطی چندگانه محاسبه می شود که اندازه مولکولی و چربی دوستی را با نفوذپذیری پوست مرتبط می کند [36]. هر چه log Kp منفی‌تر باشد (با Kp بر حسب سانتی‌متر بر ثانیه)، میزان نفوذ مولکول به پوست کمتر است [33،36].عصاره cistanche tubulosaگزارش پیش‌بینی‌شده نفوذ پوست Kp بر حسب سانتی‌متر بر ثانیه -9.14 سانتی‌متر بر ثانیه است.

2.3. ارزیابی خواص ضد پیری پوست

2.3.1. تعیین فعالیت های آنتی کلاژناز و آنتی الاستاز

کلاژن و الاستین پروتئین های ساختاری حیاتی اپیدرم هستند که خاصیت ارتجاعی، لحن مویرگی و استحکام شیکین را همراه با اسید هیالورونیک حفظ می کنند [39]. در طول فرآیند پیری، استرس اکسیداتیو و قرار گرفتن بیش از حد در معرض اشعه ماوراء بنفش منجر به فعال شدن آنزیم‌های هیدرولیزکننده مانند الاستاز، کلاژناز و هیالورونیداز می‌شود و در نتیجه استحکام و انعطاف‌پذیری پوست از بین می‌رود و چین و چروک ظاهر می‌شود[4{17}} . مهار فعالیت کلاژناز و الاستاز یکی از راهبردهای موثر برای محافظت از پوست در برابر تظاهرات پیری پوست است [41]. همانطور که در شکل 3A مشخص شد، این ترکیب دارای خاصیت ضد کلاژناز متوسط ​​با مقدار ICso 419.10 ug/mL، در مقایسه با فنانترولین (IC{7}}.80 میکروگرم در میلی لیتر) به عنوان استاندارد بود. با توجه به اثر مهاری الاستاز (شکل 3B)، اثر قابل توجهی با مقدار ICso 1.06 ug/mL نشان داد، در حالی که کنترل مثبت، N-methoxysuccinyl-Ala-Pro-Val-chloromethyl keton، مقدار ICso 0.63 ug را اعمال کرد. /mL. مطابق با این نتایج، یک مطالعه قبلی گزارش داد که عصاره برگ متانولی انبه یک 10-بازدارنده الاستاز قوی نسبت به توکوفرول استاندارد منتسب به خاصیت بازدارندگی غیررقابتی مانگیفرین است[42]. علاوه بر این، گزارش‌های قبلی فعالیت ضد الاستاز ترکیبات پلی فنلی را به دلیل وجود گروه‌های آبدوست مانند هیدروکسیل یا کربوکسیل ثابت کردند که می‌توانند بر مهار رقابتی آنزیم‌ها تأثیر مثبت بگذارند [43].

2.3.2. تعیین فعالیت های آنتی هیالورونیداز و آنتی تیروزیناز

اسید هیالورونیک گلیکوزآمینوگلیکان رایج پوست است که رطوبت آن را حفظ می کند[44]. به طور آنزیمی توسط هیالورونیداز هیدرولیز می شود که منجر به از بین رفتن یکپارچگی ساختار پوست و اختلال در نفوذپذیری بافت می شود [45]. سرکوب هیالورونیداز یکپارچگی پوست را حفظ می کند، پیشرفت پیری پوست را به تاخیر می اندازد و هیدراتاسیون پوست را حفظ می کند [13]. مطالعات قبلی نشان می‌دهد که مهارکننده‌های طبیعی هیالورونیداز می‌توانند به‌خوبی به عنوان عوامل ضد پیری برای تولید محصولات مرتبط با سلامت پوست عمل کنند[46]. همانطور که در شکل 4A نشان داده شده است، ترکیب جدا شده می تواند به طور قابل ملاحظه ای فعالیت هیالورونیداز را با مقدار ICso 1.65 ug/mL در مقایسه با 6-O-palmitoyl L-ascorbic acid به عنوان یک کنترل مثبت (2.55 ug/mL) کاهش دهد.

در میان تظاهرات بالینی پیری پوست، هیپرپیگمانتاسیون پوست می‌تواند توسط آنزیم تیروزیناز در حضور گونه‌های فعال اکسیژن (ROS) تسریع شود [46]. تیروزیناز، یک گلیکوپروتئین حاوی مس، از طریق هیدروکسیلاسیون L-تیروزین به 3،{5}دی هیدروکسی فنیل آلانین (DOPA) و به دنبال آن اکسیداسیون DOPA به DOPAquinone، نقش مهمی در سنتز ملانین ایفا می کند [47]. بنابراین، سرکوب فعالیت تیروزیناز به طور بالقوه هیپرپیگمانتاسیون پوست را کاهش می دهد [48]. از این دیدگاه، این ترکیب به طور بالقوه تیروزیناز را با مقدار ICso 0.48 میکروگرم در میلی لیتر، در مقایسه با اسید کوجیک به عنوان یک کنترل مثبت (0}.82 میکروگرم در میلی لیتر) همانطور که در نشان داده شده است، مهار کرد. شکل 4B. مطالعه قبلی روی عصاره دانه Mangifera indica نتایج برجسته ضد تیروزیناز و ضد هیالورونیداز را نشان داد که با محتوای پلی فنولیک مرتبط است [47]. در سطح مولکولی، هر دو تیروزین و DOPA حاوی گروه های هیدروکسیل هستند که به عنوان دهنده های پروتون ضروری برای فعال سازی تیروزیناز بیان می شوند [49]. به همین ترتیب، این ترکیب چهار بخش هیدروکسیل را در اسکلت خود نگه می‌دارد که می‌توانند با واکنش به عنوان سوبسترا به تیروزیناز به عنوان بازدارنده‌های رقابتی رفتار کنند.

3. مواد و روش ها

3.1. مواد گیاهی

برگ‌های تازه برگ‌های Mangifera indica L. در مرحله باردهی از یک باغ خصوصی در منطقه ابوزبال (N 30 درجه 1743.5336"E 3128.254)، دولت Qualiobya، مصر، در 20 ژوئیه 2021 به دست آمد. خانم Treize Labib، متخصص طبقه‌بندی در باغ گیاه‌شناسی الاورمان، جیزه، مصر. نمونه‌های کوپن با کد PHG-P-MI{11}} در گالری گروه فارماکوگنوزی، دانشکده داروسازی، دانشگاه عین شمس قرار داده شد.

3.2. استخراج و جداسازی کروماتوگرافی

برگهای خشک شده در هوای Mangifera indica L. (56/1 کیلوگرم) به مدت 5 روز در 7{24}} درصد متانول (27 لیتر) نفوذ داده و سپس فیلتر شدند. فیلتر به طور کامل در خلاء در دمای 47 درجه تا خشک شدن تبخیر شد تا یک باقیمانده خشک تولید شود (90.36 گرم؛ 5.79 درصد وزنی بر وزن). بازده استخراج به صورت معادله زیر محاسبه شد: [وزن کل عصاره خشک/وزن کل گیاه ترش] × 1{41}}0. سپس عصاره به دست آمده بر روی شکنش Diaion HP{12}} اعمال شد. شستشوی گرادیان (آب / متانول) استفاده شد. پنج بخش اصلی به دست آمد: 100 درصد آب، 25 درصد متانول، 50 درصد متانول، 75 درصد متانول، و 100 درصد متانول. کسر محلول در متانول 50 درصد (26.38 گرم) در معرض پلی آمید قرار گرفت و ابتدا با 100 درصد آب شسته شد، سپس گرادیان با آب / متانول (از 100:0 تا 0:100، w/o) شسته شد تا شش زیربخش: 100 به دست آید. درصد آب، 20 درصد، 40 درصد، 60 درصد، 80 درصد و 100 درصد متانول. زیرکسری محلول در متانول 40 درصد (2.36 گرم) بر روی Sephadex LH{37}} با استفاده از MeOH (شرق ایزوکراتیک) اعمال شد. A3(0.{42}} g) روی صفحات کروماتوگرافی لایه نازک (TLC) آماده سازی با استفاده از اسید بوتانولاستیک: آب (BAW; 4:1:5) به عنوان توسعه دهنده فاز متحرک برای جداسازی ترکیب به عنوان یک نور استفاده شد. پودر آمورف زرد

3.3. طیف سنج رزونانس مغناطیسی هسته ای (NMR).

یک طیف سنج بروکر اسند 400/R (Burker Avance Ⅲ، فالاندن، سوئیس) در مرکز کشف، تحقیق و توسعه دارو، دانشکده داروسازی، دانشگاه عین شمس استفاده شد. 3.4. طیف سنجی جرمی

یک طیف سنج جرمی Finnigan LCQ-DECA (San Jose، CA، USA) متصل به آشکارساز PDA برای تجزیه و تحلیل طیف سنجی جرمی استفاده شد. نمونه ها در HzO:MeOH به عنوان مخلوط حل شده و مستقیماً به سیستم HPLC/ESI-MS تزریق شدند. هر دو حالت یون یونیزاسیون ESI منفی و مثبت تحت شرایط زیر اعمال شد: گاز خشک کردن و نبولیز کردن، N2. دمای مویرگی، 250 درجه؛ ولتاژ پاشش، 4.48 کیلو ولت؛ ولتاژ مویرگی، 39.6 V; ولتاژ لنز لوله، 10.00 V; و حالت اسکن کامل در محدوده جرمی m/z 100-2000. تجزیه و تحلیل ESI-MS برای ترکیب جدا شده بر روی یک طیف سنج جرمی Waters Xevo TQD با حالت UPLC Acquity (Milford، CT، ایالات متحده آمریکا) در مرکز کشف دارو، تحقیق و توسعه، دانشکده داروسازی، دانشگاه عین شمس انجام شد.

3.5. پیش بینی فارماکوکینتیک در سیلیکو

قانون پنج لیپینسکی، پارامترهای فیزیکوشیمیایی مانند چربی دوستی، حلالیت، و خواص فارماکوکینتیک مانند جذب GIT، توزیع، متابولیسم و ​​نفوذ پوست ترکیب جدا شده با استفاده از سرور آنلاین SwissADME [36] انجام شد. 3.6. ارزیابی خواص ضد پیری پوست

3.6.1. تعیین فعالیت ضد کلاژناز

توانایی مهاری ترکیب جدا شده در برابر فعالیت کلاژناز با استفاده از کیت غربالگری مهارکننده کلاژناز فلورومتریک (BioVision، شماره کاتالوگ # K833-100) طبق روشی که قبلاً توضیح داده شد [50] ارزیابی شد. کنترل مرجع (1،10) -فنانترولین بود. ترکیب مورد آزمایش و کنترل مرجع در غلظت‌های 1،10،100 و 1000 میکروگرم بر میلی‌لیتر برای آنالیز تهیه شد. ترکیب آزمایش شده در یک صفحه چاهی 96- با کف صاف تهیه شد. ابتدا بستر کلاژناز در بافر سنجش کلاژناز (CAB) حل شد. نمونه برای آنالیز با مخلوط کردن ترکیب با کلاژناز و CAB تهیه شد. آماده‌سازی نمونه‌های کنترل مهارکننده با مخلوط کردن مهارکننده ((1،10) -فنانترولین (80 میلی‌مولار)) با آنزیم کلاژناز رقیق‌شده و بافر CAB انجام شد. کنترل آنزیمی با مخلوط کردن کلاژناز رقیق شده با CAB تهیه شد. بافر CAB به عنوان کنترل پس زمینه استفاده شد. تمام نمونه ها در دمای اتاق به مدت 15 دقیقه انکوبه شدند. در طی این مدت، مخلوط واکنش با مخلوط کردن کلاژناز با CAB تهیه شد. در مرحله بعد، مخلوط واکنش با نمونه های آماده شده کاملا مخلوط شد. فلورسانس بلافاصله در طول موج تحریک 490 نانومتر و طول موج انتشار 520 نانومتر با استفاده از یک میکروپلیت خوان (FilterMax F5، Thermo Fisher) اندازه گیری شد. اندازه گیری در حالت سینتیکی در دمای 37 درجه به مدت 60 دقیقه انجام شد. نمونه ها در دو نسخه تهیه شدند و اثر بازدارندگی کلاژناز ترکیب مورد آزمایش با استفاده از معادله زیر محاسبه شد:

3.6.2.تعیین فعالیت آنتی الاستاز

فعالیت ضد الاستاز این ترکیب با استفاده از کیت سنجش الاستاز EnzChek§Elastase (E{1}}) طبق روش گزارش شده قبلی [51] مورد بررسی قرار گرفت. ترکیب مورد آزمایش و شاهد مرجع در غلظت‌های 1.10.1، 100 و ug/mL 100 0 تهیه شد. این ترکیب در 96-صفحات چاهی با کف شفاف برای سنجش فلورومتری تهیه شد. به طور خلاصه، محلول های آنزیم الاستاز، سوبسترای الاستاز و کنترل مهارکننده طبق توصیه تهیه شد. سپس محلول الاستاز رقیق شده به چاهک ها اضافه شد. ترکیب آزمایش شده، کنترل بازدارنده و کنترل آنزیم به چاهک های بعدی اضافه شد. نمونه ها روی شیکر مخلوط شده و به مدت 5 دقیقه در دمای 37 درجه انکوبه شدند. بافر سنجش با سوبسترا مخلوط شد تا مخلوط واکنش فلورومتری تهیه شود، که سپس اضافه شد و با هر نمونه کاملا مخلوط شد. فلورسانس بلافاصله در طول موج تحریک 400 نانومتر و طول موج گسیل 505 نانومتر با استفاده از یک میکروپلیت خوان (FilterMax F5, Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) اندازه‌گیری شد. تمام نمونه های آزمایش شده در دو نسخه تهیه و مورد سنجش قرار گرفتند و اثر بازدارندگی الاستاز ترکیب آزمایش شده با استفاده از رابطه زیر محاسبه شد:

جایی که:

△RFU{0}}تغییر در واحدهای فلورسانس نسبی EC=کنترل آنزیم

3.6.3. تعیین فعالیت ضد تیروزیناز

فعالیت های بازدارنده روغن ها در برابر کلاژناز با استفاده از کیت سنجش رنگ سنجی غربالگری Abcam@Tyrosinase Inhibitor (کاتالوگ # ab204715) آزمایش شد. سنجش طبق دستورالعمل ارائه شده انجام شد. مهارکننده استاندارد تیروزیناز اسید کوجیک بود. ترکیب مورد آزمایش در غلظت‌های 0.1 تا 10 ug/mL برای آنالیز تهیه شد. حدود 2 uL از تیروزیناز ارائه شده با 48 uL از بافر سنجش تیروزیناز مخلوط شد. نمونه‌های اسانس یا پایه (20 uL) با مخلوط آنزیمی (50 میکرولیتر) مخلوط شده و در دمای 25 درجه به مدت 10 دقیقه انکوبه شدند. سپس 30 میکرولیتر محلول سوبسترای تیروزیناز به چاه اسانس و استاندارد اضافه شد. سپس، صفحه در طول موج 510 نانومتر به مدت 30-60 دقیقه در دمای ۲۵ درجه به روش اسپکتروفتومتری اندازه‌گیری شد.

3.6.4. تعیین فعالیت آنتی هیالورونیداز

فعالیت هیالورونیداز به روش اسپکتروفتومتری با اندازه گیری مقدار N-acetylglucosamine تشکیل شده از هیالورونات سدیم ارزیابی شد [52]. ترکیب آزمایش شده و شاهد مرجع در غلظت‌های بین 0.1 تا 1{7}} میکروگرم در میلی‌لیتر برای آنالیز تهیه شدند. پنجاه میکرولیتر هیالورونیداز گاوی (7900 واحد میلی‌لیتر{6}}، (سیگما، سنت لوئیس، MO، ایالات متحده) محلول در بافر استات 0.1 مولار (pH{9}}.5) با 100 میکرولیتر از یک ماده تعیین‌شده مخلوط شد. غلظت این ترکیب در 5 درصد DMSO حل شد و سپس در حمام آب در دمای 37 درجه به مدت 20 دقیقه انکوبه شد و گروه شاهد به جای نمونه با 100 میکرولیتر DMSO 5 درصد تیمار شد و چگالی نوری مخلوط واکنش در طول موج 585 نانومتر اندازه‌گیری شد. توسط اسپکتروفتومتری

3.7.تحلیل آماری

همه آزمایشات در سه تکرار انجام شد. داده‌های مربوط به ICso فعالیت مهاری آنزیم با استفاده از تحلیل واریانس یک‌طرفه (ANOVA) مورد بررسی آماری قرار گرفت. تجزیه و تحلیل های آماری با استفاده از GraphPad Prism 5 انجام شد.{3}}. 4. نتیجه گیری و چشم اندازهای آینده

محصولات طبیعی مشتق شده از گیاه در بازار جهانی تقاضای زیادی برای توسعه عوامل جدید برای طرح های آرایشی دارند. در این مطالعه، یک ترکیب جدید گزانتون، 1.3.5،6-تتراهیدروکسی گزانتون-C-4- -D-گلوکوپیرانوزید، از عصاره برگ M. indica جدا شد. بر اساس سنجش‌های مهاری آنزیم، این ترکیب احتمالاً می‌تواند خواص ضد کلاژناز، ضد الاستاز، آنتی هیالورونیداز و ضد تیروزیناز خوبی از خود نشان دهد، در نتیجه یک اثر ضعیف‌کننده جامع در برابر آنزیم‌های مرتبط با پیری پوست ایجاد می‌کند. علاوه بر این، یک پارامتر فیزیکوشیمیایی سیلیکونی و مطالعه ADME از ادغام آن در فرم‌های دوز موضعی پشتیبانی می‌کند زیرا حلالیت آبی امیدوارکننده و نفوذ پیش‌بینی شده معقول به پوست را نشان می‌دهد. بنابراین، این ترکیب می‌تواند به‌عنوان یک عامل زیست فعال چندمنظوره برای فرمول‌های غذایی و آرایشی استفاده شود. با این وجود، ارزیابی های سم شناسی و بالینی به طور بالقوه امیدوارکننده هستند.

این مقاله از Molecules 2022, 27, 2609 استخراج شده است. https://doi.org/10.3390/molecules27092609 https://www.mdpi.com/journal/molecules