خلاصه:روغن دانه کدو تنبل یک محصول جانبی، سرشار از مواد مغذی و اجزای زیست فعال است که فواید متعددی برای سلامتی دارد. این مطالعه با هدف مقایسه ترکیبات شیمیایی، آنتی اکسیدانی و فعالیت های دارویی روغن دانه کدو تنبل استخراج شده از Cucurbita moschata Duch انجام شد. Ex Poir. (PSO1) و Cucurbita moschata (کدو تنبل ژاپنی) (PSO2) با استخراج آنزیمی آبی. مخلوط آنزیمی متشکل از پکتیناز، سلولاز و پروتئاز (1:1:1) در فرآیند استخراج آنزیمی استفاده شد. ترکیب اسیدهای چرب روغن ها با استفاده از طیف سنجی جرمی کروماتوگرافی متیل استر/گاز اسید چرب تعیین شد. سنجش فعالیت آنتی اکسیدانی با استفاده از دی فنیل پیکریل هیدرازیل رادیکال آزاد پایدار، کاتیون رادیکال 2، 20 -آزینوبیس-({10}} اتیل بنزوتیازولین-6-سولفونات، قدرت احیا کننده/آنتی اکسیدانی آهن، و سنجش تیوسیانات آهن از آهن اندازه گیری شد. آنزیم های مربوط به روند پیری و سفید شدن پوست مورد بررسی قرار گرفتند.لینولئیک اسید جزء اصلی تمام روغن های دانه کدو تنبل بود.علاوه بر این، مقدار قابل توجهی اسید اولئیک، اسید پالمیتیک و اسید استئاریک نیز شناسایی شد. PSO2 دارای بالاترین فعالیت آنتی اکسیدانی در مقایسه با PSO1 و روغن‌های تجاری دانه کدو تنبل (COM1 و COM2). هر دو PSO1 و PSO2 اثرات بازدارندگی بالاتری بر هیالورونیداز، کلاژناز و تیروزیناز نسبت به آگهی‌های تجاری نشان دادند. بنابراین، استخراج آنزیمی آبی می‌تواند روغن‌های تخم کدو را با آنتی اکسیدان، ضد پیری و پیری بالاتر تولید کند. فعالیت های سفید کننده این برای مطالعات فارماکولوژیک بیشتر مفید است و می تواند به عنوان یک غذای کاربردی برای فواید پوست استفاده شود.

طبق مطالعات مربوطه،سیستانچگیاهی رایج است که به عنوان "علف معجزه آسا طولانی کننده عمر" شناخته می شود. جزء اصلی آن استسیستانوزید، که دارای اثرات مختلفی مانندآنتی اکسیدان, ضد التهاب، وارتقاء عملکرد سیستم ایمنی. مکانیسم بین سیستانچ وپوست سفید کردندر اثر آنتی اکسیدانی سیستانچ نهفته استگلیکوزیدها. ملانین در پوست انسان از اکسیداسیون تیروزین که توسط آن کاتالیز می شود تولید می شودتیروزینازو واکنش اکسیداسیون نیاز به مشارکت اکسیژن دارد، بنابراین رادیکال‌های آزاد اکسیژن در بدن به عامل مهمی بر تولید ملانین تبدیل می‌شوند. سیستانچ حاوی سیستانوزید است که یک آنتی اکسیدان است و می تواند تولید رادیکال های آزاد را در بدن کاهش دهد.مهار تولید ملانین.

بر روی مکمل Cistanche Tubulosa کلیک کنید

برای اطلاعات بیشتر:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

1. معرفی

کدو تنبل از تیره Cucurbita و خانواده Cucurbitaceae است، گیاهی رایج و معروف که در شمال مکزیک کشت می‌شده و به اروپا، آمریکای غربی و آسیا گسترش یافته است [1]. کدو تنبل یک غذای کاربردی در نظر گرفته می شود که حاوی مواد مغذی فراوانی مانند پروتئین، کربوهیدرات، لیپید، فیبر و غیره به همراه ترکیبات فیتوشیمیایی مانند توکوفرول ها، کاروتنوئیدها و -سیتوسترول است [2]. فیتونوترینت‌های موجود در قسمت‌های مختلف کدو تنبل دارای فعالیت‌های دارویی هستند [2]. عصاره پوست کدو تنبل اثرات مفید زخم سوختگی را در مدل های حیوانی نشان داد [3]. پالپ کدو تنبل فعالیت آنتی اکسیدانی، ضد التهابی و ضد رگ زایی [2] و همچنین فعالیت ضد خستگی را در موش نشان داد [4]. علاوه بر این، دانه کدو تنبل منبع طبیعی خوبی از اسیدهای چرب ضروری و فیتواسترول ها است که خطر مرگ و میر قلبی عروقی را کاهش می دهد [5،6]. روغن دانه کدو تنبل محصول فرعی فرآوری دانه های کدو تنبل است که سرشار از اسیدهای چرب مختلف و ترکیبات فعال زیستی مانند کاروتن ها، توکوفرول، ویتامین B، لوتئین، فیتواسترول ها و سایر مواد معدنی است [7،8]. این روغن اثرات آنتی اکسیدانی، ضد التهابی، ضد باکتریایی و ترمیم زخم دارد [1،9]. علاوه بر این، چندین فواید سلامتی در برابر بیماری‌هایی مانند فشار خون بالا، دیابت و سرطان دارد [8،10].

روش های مختلفی برای استخراج روغن بذر توسعه یافته است، از جمله روش های مکانیکی مانند پرس سرد [11] و استخراج با فشار بالا [12]. استخراج روغن دانه با حلال با استفاده از حلال های آلی مانند هگزان، اتیل استات، استون و متانول نیز مستند شده است [13،14]. استخراج به کمک آنزیم یک روش جایگزین برای صنعت روغن های گیاهی است زیرا یک فناوری سازگار با محیط زیست و ایمن است. مکانیسم اصلی استخراج آنزیمی آبی هیدرولیز و شکستن دیواره های سلولی مواد گیاهی است که منجر به نفوذپذیری بیشتر و آزاد شدن اجزای زیست فعال از جمله فاز روغن می شود [15]. مخلوط‌های آنزیمی مختلفی که در این استخراج به کار می‌روند از پکتینازها، سلولازها، همی سلولازها، آرابینوز، گلوکاناز و زایلاناز تشکیل شده‌اند [16،17]. شرایط بهینه یک مخلوط آنزیمی، به عنوان مثال، دما، pH، زمان واکنش، اندازه ذرات و غلظت آنزیم نیز فعالیت آنزیم را افزایش می‌دهد [16]. امروزه این روش به طور گسترده ای برای استخراج روغن از بسیاری از میوه ها و دانه های گیاهان استفاده شده است [18،19]. برخی از مطالعات قبلی شرایط بهینه روغن دانه کدو تنبل را برای به دست آوردن عملکرد بالا و فعالیت های دارویی موثر نشان دادند [20،21].

در حال حاضر، مردم روغن دانه کدو تنبل را در دسرها یا سس های سالاد مصرف می کنند و همچنین یک ماده محبوب در لوازم آرایشی است. پیری پوست یک فرآیند بیولوژیکی پیچیده است که با چین و چروک، از دست دادن خاصیت ارتجاعی، از دست دادن رطوبت، و بافت زبر ناشی از استرس اکسیداتیو، آسیب DNA، و تجمع محصول نهایی گلیکاسیون پیشرفته مشخص می شود [22]. اسید هیالورونیک، کلاژن و الاستین که اجزای مهم پوست هستند، به ترتیب توسط آنزیم های هیالورونیداز، کلاژناز و الاستاز تجزیه می شوند و در نتیجه باعث پیری پوست می شوند. چندین روغن گیاهی مانند روغن زیتون، روغن دانه آفتابگردان، روغن هسته انگور و روغن جوجوبا برای خواص آرایشی پوست برای حفظ رطوبت، بهبود عملکرد سد پوست و جلوگیری از پیری پوست استفاده شده است [23]. علاوه بر این، رنگدانه پوست یک فنوتیپ متغیر و قابل توجه در انسان است که ملانوژنز را شامل می شود و توسط آنزیم تیروزیناز تنظیم می شود [24]. در حال حاضر، عصاره های مختلف گیاهی برای مواد آرایشی و دارویی آزمایش شده اند تا تولید ملانین را کاهش دهند و به عنوان عوامل سفید کننده عمل کنند [25،26].

2. مواد و روشها

2.1. مواد گیاهی

2.2. مواد شیمیایی و معرف ها 

2.3. استخراج آنزیمی آبی

روغن دانه کدو تنبل از هر دو C. moschata Duch. Ex Poir و C. moschata (کدو تنبل ژاپنی) به روش استخراج آنزیمی آبی با استفاده از پارامترهای هیدرولیز آنزیمی از مطالعه قبلی توسط Kanopka و همکاران استخراج شدند. (2{14}}16)، از جمله غلظت آنزیم، نسبت آنزیم به سوبسترا، دمای واکنش، pH و زمان واکنش [21]. سه نوع مختلف آنزیم، از جمله پکتیناز، سلولاز و پروتئاز، در یک نسبت وزنی 1:1:1 برای تولید یک ترکیب غلیظ از آنزیم‌ها ترکیب شدند. پس از آن، کوکتل کنسانتره حاصل در آب DI رقیق شد تا یک مخلوط آنزیمی آبی 2 درصد w/w تولید کند. سپس دانه‌های کدو تنبل بدون پوسته با نسبت وزنی 1:1 به مخلوط آنزیمی آبی حاصل اضافه شدند. سپس مخلوط با استفاده از مخلوط کن Moulinex DB81 در دمای اتاق تا یکدست شدن ریز آسیاب شد. سپس pH دوغاب حاصل با استفاده از 0.1 مولار HCl روی 4.7 تنظیم شد و به مدت 15 ساعت در دمای 54 ◦C انکوبه شد. پس از سرد شدن دوغاب تا دمای اتاق، به مدت 10 دقیقه در 11500× گرم سانتریفیوژ شد. لایه بالایی مواد رویی که فاز روغنی بود جمع آوری شد. کرم تولید شده در طول فرآیند استخراج امولسیون نشد، بلکه با سیفون کردن با استفاده از میکروپیپت حذف شد. باقیمانده دانه کدو تنبل با فیلتر کردن از طریق کاغذ صافی شماره 1 واتمن تحت خلاء حذف شد [21]. روغن دانه کدو تنبل از C. moschata Duch. Ex Poir (PSO1) و C. moschata (کدو تنبل ژاپنی) (PSO2) در ظروف در بسته و مقاوم در برابر نور در دمای اتاق تا آزمایش بعدی نگهداری شدند.

2.4. تعیین ترکیب شیمیایی روغن تخم کدو با استفاده از متیل استر اسید چرب/گاز کروماتوگرافی- طیف سنجی جرمی (FAME/GC/MS)

2.5. تعیین فعالیت های آنتی اکسیدانی

2.5.1. 2،2-دی فنیل-1-پیکریل هیدرازیل (DPPH) رادیکال اسکینجینگ سنجش

فعالیت مهار رادیکال DPPH (DPPH•) با استفاده از روش ایجاد شده توسط Chaiyana و همکاران تعیین شد. (2017) [27]. به طور خلاصه، 20 میکرولیتر نمونه روغن (PSO1، PSO2، COM1، COM2) و اسید لینولئیک محلول در DMSO با 180 میکرولیتر محلول اتانولی DPPH 167 میکرومولار در یک صفحه چاهی مخلوط و سپس به مدت 30 دقیقه در انکوبه شدند. دمای اتاق در تاریکی اسید اسکوربیک (1 میلی گرم در میلی لیتر) به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. چگالی نوری (OD) در 520 نانومتر با استفاده از یک میکروپلیت خوان (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England) اندازه گیری شد. آزمایش ها در سه تکرار و در سه آزمایش مستقل انجام شد. درصد مهار DPPH با استفاده از رابطه (1) محاسبه شد:

مهار DPPH (درصد)={[(ODA - ODB) - (ODC - ODD)]/(ODA - ODB)} × 100، (1)

2.5.2. 2، 20 -آزینو-بیس-3-اتیل بنزتیازولین-6-آزمایش اسید سولفونیک (ABTS)

فعالیت مهار رادیکال کاتیونی ABTS (ABTS Plus) با روش رنگ سنجی طبق Chaiyana و همکاران اندازه گیری شد. (2{11}}17) و Paradee et al. (2{13}}19) [27,28] با اندکی تغییر. ABTS• plus با افزودن 2 میلی‌لیتر ABTS 7 میلی‌مولار با 3 میلی‌لیتر پرسولفات پتاسیم 2.45 میلی‌مولار تولید شد و به مدت 16 تا 24 ساعت در دمای اتاق در تاریکی انکوبه شد. ABTS• پلاس حاصل پس از آن با اتانول رقیق شد تا OD 0.1 ± 0.7 در 750 نانومتر به دست آید. به طور خلاصه، 20 میکرولیتر نمونه روغن (PSO1، PSO2، COM1، COM2) و اسید لینولئیک محلول در DMSO با 180 میکرولیتر ABTS• به اضافه محلول اتانولی در یک صفحه چاهی مخلوط و به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق انکوبه شدند. . OD در 750 نانومتر با استفاده از یک میکروپلیت خوان (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England) اندازه گیری شد. اسید اسکوربیک (1 میلی گرم در میلی لیتر) به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. منحنی استاندارد با رسم جذب در 750 نانومتر در مقابل غلظت‌های مختلف Trolox در محدوده 2.5-30 میکروگرم بر میلی‌لیتر تولید شد. ABTS• به علاوه فعالیت مهار از منحنی استاندارد Trolox (R{31}.9922) محاسبه شد و به عنوان ظرفیت آنتی اکسیدانی معادل Trolox (TEAC) بیان شد. آزمایش ها در سه تکرار و در سه آزمایش مستقل انجام شد.

2.5.3. سنجش قدرت آنتی اکسیدانی کاهش دهنده آهن (FRAP).

قدرت آنتی اکسیدانی کاهش دهنده آهن (FRAP) هر یک از نمونه ها با استفاده از روش FRAP همانطور که در مطالعه قبلی توسط Chaiyana و همکاران توضیح داده شد، تعیین شد. (2{32}}17) که اندکی از Saeio و همکاران اصلاح شده بود. (2{34}}11) [27،29]. معرف FRAP به تازگی با مخلوط کردن بافر استات 300 میلی مولار (pH 3.6)، 10 میلی مولار 2،4،6 تری پیریدیل-s-تریازین (TPTZ) در 40 میلی مولار HCl و 20 میلی مولار FeCl3 به نسبت 10:1:1 تولید شد. در این مطالعه، 20 میکرولیتر نمونه روغن (PSO1، PSO2، COM1، COM2) و اسید لینولئیک با 180 میکرولیتر معرف FRAP در یک صفحه چاهی مخلوط و به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق در تاریکی انکوبه شدند. OD در 595 نانومتر با استفاده از یک میکروپلیت خوان (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England) اندازه گیری شد. اسید اسکوربیک (1 میلی گرم در میلی لیتر) به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. منحنی استاندارد با رسم جذب در 595 نانومتر در مقابل غلظت‌های مختلف سولفات آهن (FeSO4) در محدوده 0.003-0.5 میلی‌مولار تولید شد. مقدار FRAP از منحنی استاندارد FeSO4 (R{37}}.9965) محاسبه و به صورت ظرفیت معادل (EC1) بیان شد. آزمایش ها در سه تکرار و در سه آزمایش مستقل انجام شد.

2.5.4. سنجش تیوسیانات فریک (FTC).

2.6. تعیین فعالیت های ضد پیری

2.6.1. فعالیت ضد هیالورونیداز

اندازه گیری فعالیت ضد هیالورونیداز همانطور که قبلا توسط Chaiyana و همکارانش توضیح داده شد انجام شد. (2{13}}20) [31]. ابتدا 20 میکرولیتر از نمونه‌های روغن (PSO1، PSO2، COM1، COM2) با 100 میکرولیتر محلول هیالورونیداز 15 U/mL مخلوط شدند و در دمای 37 درجه سانتی‌گراد به مدت 10 دقیقه انکوبه شدند. پس از انکوباسیون، 100 میکرولیتر از هیالورونیک اسید 0.03 درصد وزنی در حجم 0.03 درصد که در بافر فسفات 20 میلی مولار حل شده بود (pH 5.35) اضافه شد، سپس به مدت 45 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه شد. پس از آن، 1 میلی لیتر آلبومین سرم گاوی 0.1 درصد اضافه شد و به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق انکوبه شد. OD در 600 نانومتر با استفاده از یک آشکارساز چند حالته (Beckman Coulter DTX880, Fullerton, CA, USA) تعیین شد. اسید اولئانولیک (25/0 درصد وزنی بر حجم) به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. آزمایش ها در سه تکرار و در سه آزمایش مستقل انجام شد. درصد مهار هیالورونیداز با استفاده از رابطه (3) محاسبه شد:

2.6.2. فعالیت ضد کلاژناز

اندازه گیری فعالیت ضد کلاژناز طبق فرآیند ایجاد شده توسط Chaiyana و همکاران انجام شد. (2{11}}19) و Thring و همکاران. (2009) با تغییرات جزئی [32،33]. به طور خلاصه، 20 میکرولیتر از نمونه های روغن (PSO1، PSO2، COM1، COM2) با 20 میکرولیتر محلول کلاژناز 0.1 واحد بر میلی لیتر از کلستریدیوم هیستولیتیکوم مخلوط شده و در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه انکوبه شدند. پس از انکوباسیون، 80 میکرولیتر بافر تریسین 50 میلی‌مولار (400 میلی‌مولار NaCl و 10 میلی‌مولار CaCl2، pH 7.5) و 40 میکرولیتر N-[3-(2-فوریل) آکریلول]-Leu-Gly- محلول سوبسترای Pro-Ala (FALGPA) اضافه شد. OD بلافاصله در 340 نانومتر تشخیص داده شد و سپس به مدت 20 دقیقه به طور مداوم با استفاده از یک میکروپلیت خوان (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England) اندازه گیری شد. اسید اولئانولیک (1 درصد وزنی در حجم) به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. آزمایش ها در سه تکرار و در سه آزمایش مستقل انجام شد. درصد مهار کلاژناز با استفاده از رابطه (4) محاسبه شد:

2.6.3. فعالیت ضد الاستاز

اندازه گیری فعالیت آنتی الاستاز طبق فرآیند ایجاد شده توسط Chaiyana و همکاران انجام شد. (2{11}}19) و Thring و همکاران. (2{17}}09) با تغییرات جزئی [32،33]. به طور خلاصه، 10 میکرولیتر نمونه روغن (PSO1، PSO2، COM1، COM2) با 40 میکرولیتر محلول الاستاز 0.03 واحد بر میلی لیتر از پانکراس خوک، سپس 50 میکرولیتر از بافر 200 میلی مولار Tris-HCL (pH 8.0) و 100 میکرولیتر مخلوط شدند. محلول بستر N-Succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (AAAPVN) 0.8 میلی مولار اضافه شد. OD بلافاصله در 410 نانومتر تشخیص داده شد و سپس به مدت 20 دقیقه به طور مداوم با استفاده از یک میکروپلیت خوان (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England) اندازه گیری شد. اسید اولئانولیک (1 درصد وزنی در حجم) به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. آزمایش ها در سه تکرار و در سه آزمایش مستقل انجام شد. درصد مهار الاستاز با استفاده از رابطه (5) محاسبه شد:

2.7. تعیین فعالیت های ضد تیروزیناز

اثر سفید کنندگی یک عصاره طبیعی با اندازه گیری فعالیت ضد تیروزیناز که طبق Saeio و همکاران انجام شد، ایجاد شد. (2011) و Laosirisathian و همکاران. (2020) [29،34]. L-تیروزین و L-DOPA سوبستراهای آنزیم تیروزیناز در این مطالعه بودند. به طور خلاصه، 10 میکرولیتر نمونه روغن (PSO1، PSO2، COM1، COM2) با 30 میکرولیتر تیروزیناز در یک صفحه چاهی مخلوط شد، سپس در دمای اتاق به مدت 10 دقیقه انکوبه شد. پس از انکوباسیون، 100 میکرولیتر از بستر، که 2.5 میلی مولار L-تیروزین یا L-DOPA است، اضافه شد و به مدت 30 دقیقه انکوبه شد. OD در 450 نانومتر با استفاده از یک میکروپلیت خوان (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England) تعیین شد. اسید کوجیک (20 میکروگرم بر میلی لیتر) به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. آزمایش ها در سه تکرار و در سه آزمایش مستقل انجام شد. درصد مهار تیروزیناز با استفاده از رابطه (6) محاسبه شد:

2.8. تحلیل آماری

تمام داده ها به عنوان میانگین ± انحراف معیار (SD) نشان داده شد. معنی‌داری آماری با استفاده از آنالیز واریانس یک‌طرفه (ANOVA) و سپس آزمون تعقیبی توکی با استفاده از GraphPad Prism (نسخه 8.{3}}، نرم‌افزار GraphPad) مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت و p < 0.05 در نظر گرفته شد. از نظر آماری معنی دار است.

3. نتایج و بحث

3.1. شخصیت روغن دانه کدو تنبل

در این مطالعه از استخراج آنزیمی آبی به جای استخراج با حلال آلی برای استخراج روغن دانه کدو تنبل از C. moschata Duch استفاده شد. Ex Poir (PSO1) و C. moschata (PSO2) زیرا فرآیندی ساده، مؤثر و سازنده است [15،21]. PSO1 یک مایع قهوه ای تیره با ویسکوزیته کم بود، در حالی که PSO2 یک مایع قهوه ای مایل به سبز با ویسکوزیته کم بود. هر دو روغن دانه کدو تنبل بوی خاص خود را داشتند. بازده PSO1 و PSO2 به ترتیب 17.7 درصد و 15.6 درصد حجم در وزن بود. به غیر از روغن، تخم کدو حاوی انواع ترکیبات تغذیه ای گزارش شده است. ترکیبات نزدیک C. moschata عمدتاً کربوهیدرات (39.51 درصد)، پس از آن چربی (28.49 درصد)، پروتئین (19.23 درصد)، آب (7.67 درصد)، و خاکستر (5.18 درصد) بودند [35]. با این حال، در مقایسه با مطالعات قبلی با استفاده از پرس حلال و مکانیکی، مطالعه حاضر بازده کمتری از روغن C. moschata را نشان داد. اگرچه استخراج با حلال به عنوان مؤثرترین روش استخراج روغن توصیف شده است که استخراج تا 98 درصد روغن ها از دانه ها است، اما در مورد باقیمانده حلال و خلوص روغن تولیدی، مسائلی وجود دارد [36]. علاوه بر این، حلال به کار رفته در فرآیند استخراج بر عملکرد روغن تولید شده تأثیر می گذارد. استخراج با هگزان، پترولیوم اتر، بنزن نفتی، سیکلوهگزان، ایزوپروپیل اتر، اتیل استات، تتراهیدروفوران، پروپان{26} و استون 43.4-64.4 درصد به دست آمد [37،38]. بنابراین، پرس سرد به استخراج با حلال ارجحیت داشت. با این حال، پرس سرد ممکن است در مرحله اولیه استفاده از پرس پیچ پیچیدگی هایی ایجاد کند [39]. بنابراین، استخراج آنزیمی آبی می تواند یک روش استخراج جایگزین باشد زیرا در مقایسه با روغن فشرده سرد (33.5 درصد) محتوای روغن دانه کدو تنبل (36.{36}} درصد) بالاتری را به همراه داشت [21]. اگرچه فرآیند استخراج آنزیمی آبی پیچیده‌تر از پرس سرد بود، اما شامل هزینه سرمایه‌گذاری نسبتاً ارزان‌تر، کاهش مداوم هزینه آماده‌سازی آنزیمی تجاری، امکان جداسازی همزمان اجزای گیاهی منحصر به فرد و ارزشمند و همچنین پرداختن به آن است. تمایل گسترده برای اجرای فناوری های سبز [21]. مطالعات اولیه توصیف کردند که چندین آنزیم مانند سلولازها، پکتینازها، همی سلولاز و پروتئاز اغلب برای از بین بردن ساختار دیواره سلولی گیاه به منظور افزایش استخراج زیست فعال از گیاهان استفاده شده است [16،17]. بنابراین، ما این مطالعه را برای استخراج روغن دانه با استفاده از مخلوط آنزیمی حاوی پکتیناز، سلولاز و پروتئاز (1:1:1) طراحی کردیم که قبلا توسط Kanopka و همکارانش توضیح داده شد. (2016)، که شرایط هیدرولیز آنزیمی را برای به دست آوردن بالاترین عملکرد روغن دانه کدو تنبل بهینه کرد [21]. علاوه بر این، این روش جایگزین‌های ایمن‌تر و پایدارتر از نظر زیست‌محیطی را برای استخراج با حلال نشان می‌دهد که در اینجا «استخراج سبز» نامیده می‌شود.

3.2. ترکیب شیمیایی روغن دانه کدو تنبل

برای تجزیه و تحلیل ترکیب اسیدهای چرب، روغن دانه کدو تنبل با استفاده از استخراج آنزیمی آبی (PSO1 و PSO2) با روغن دانه کدو تنبل تجاری (COM1 و COM2) تولید شده توسط استخراج با پرس سرد مقایسه و تجزیه و تحلیل شد. ترکیبات اسیدهای چرب PSO1، PSO2، COM1 و COM2 در جدول 1 نشان داده شده است. تمام نمونه های روغن دانه کدو تنبل شامل اسیدهای چرب چند غیراشباع (PUFA)، تک غیراشباع (MUFA) و اشباع شده است. سیس لینولئیک اسید (C18:2) جزء اصلی در تمام نمونه های روغن بود. COM2 حاوی بالاترین محتوای اسید چرب (51.74 درصد) و پس از آن COM1 (48.{18}} درصد)، PSO1 (39.{41}}9 درصد) و PSO2 (37.63 درصد) بود. به طور مشابه، سیس اولئیک اسید (C18:1) در درصد بالایی به ویژه در PSO2 (37.45 درصد) و پس از آن COM1 (33.39 درصد)، PSO1 (31.22 درصد) و COM2 (28.64 درصد) وجود داشت. اسیدهای چرب اشباع مانند اسید پالمیتیک (C16:0) و اسید استئاریک (C18:0) تنها در مقادیر کمی در هر یک از نمونه‌های روغن یافت شد. مقادیر کمی از سایر PUFA، MUFA و اسیدهای چرب اشباع نیز مشاهده و شناسایی شدند.

در ادبیات، اسید لینولئیک با نام امگا{0}} نیز شناخته می‌شود، یک اسید چرب ضروری که توسط بدن انسان نمی‌تواند سنتز شود و فقط با مصرف رژیم غذایی دریافت می‌شود. اسید لینولئیک یک ماده مغذی مهم برای عملکردهای سلامتی در انسان است که شامل یک پیش ماده برای سرامیدها است که جزء اصلی غشاهای سلولی، ویتامین D و انواع هورمون ها است [40،41]. مطالعات حیوانی نشان داده است که کمبود اسید لینولئیک می تواند باعث پوسته پوسته شدن و خارش پوست شود [23]. علاوه بر این، اسید لینولئیک حاصل از روغن گیاهی به بهبود زخم های پوستی کمک کرده و از التهاب پوست و آکنه جلوگیری می کند [23]. علاوه بر این، اسید اولئیک یا امگا{5}} در پیشگیری از سرطان، بیماری‌های خودایمنی و التهابی مفید بوده است [42]. در واقع، اسید اولئیک به طور قابل توجهی تولید اکسید نیتریک را در محل زخم کاهش داد و در نتیجه باعث بسته شدن سریعتر زخم شد [43]. این داده‌ها نشان می‌دهد که روغن دانه کدو تنبل، که اسید لینولئیک (امگا-6) ​​و اسید اولئیک (امگا-9) را غنی می‌کند، دارای مزایای بالقوه سلامتی است.

از یافته‌های ما، روغن دانه کدو تنبل (PSO1، PSO2، COM1 و COM2) شامل بسیاری از اسیدهای چرب از جمله اسید لینولئیک (C18:2)، اسید اولئیک (C18:2)، اسید پالمیتیک (C16:{9}}) است. و اسید استئاریک (C18:{11}}) که اجزای رایج موجود در روغن دانه کدو تنبل هستند [44]. اسید لینولئیک (امگا-6) و اسیدهای اولئیک (امگا-9) در همه نمونه‌های روغن غالب بودند. بیشترین میزان اسید لینولئیک COM2 بود و به ترتیب COM1، PSO1 و PSO2 قرار گرفتند. همچنین بیشترین میزان اسید اولئیک PSO2 و پس از آن COM1، PSO1 و COM2 بود. این نتایج توضیح می دهد که استخراج آنزیمی آبی روغن دانه کدو تنبل دارای اسید لینولئیک کمی کمتر است، اما اسید اولئیک نسبت به استخراج سرد پرس ندارد. دلیل محتوای کمتر اسید لینولئیک در دانه کدو تنبل حاصل از استخراج آنزیمی آبی نسبت به نمونه‌های روغن تجاری به دلیل تفاوت در فرآیند استخراج بود. مطالعات قبلی تناقضاتی را در میزان اسیدهای چرب غیراشباع، به ویژه اسید اولئیک و اسید لینولئیک، در روغن دانه کدو تنبل از استخراج‌های متمایز یافته‌اند [39]. محتوای اسید اولئیک از 28.19 درصد در روغن دانه کدو تنبل فشرده سرد تا 30.56 درصد در روغن دانه کدو استخراج شده توسط پنتان متغیر بود، در حالی که محتوای اسید لینولئیک از 43.{31}} درصد در روغن دانه کدو تنبل استخراج شده توسط پنتان متغیر بود. به 46.67 درصد در روغن دانه کدو تنبل فشرده شده سرد [39]. جدای از روش‌های مختلف استخراج، حلال‌های مورد استفاده در فرآیند استخراج و دمای بلوغ بذر نیز بر محتوای اسید لینولئیک دانه‌های گیاه تأثیر گذاشت. مطالعه قبلی نشان داد که اتر نفتی روغن بذر کتان با محتوای لینولئیک پایین (26.2 درصد) تولید می کند، در حالی که n-هگزان نتایج متناقضی با محتوای اسید لینولئیک 46.5 درصد به دست می دهد [45]. علاوه بر این، اسید لینولئیک نسبت معکوس با دما در طول بلوغ دانه آفتابگردان دارد [46].

علاوه بر این، یک مطالعه نسبی نشان داد که ترکیب شیمیایی از نظر ترکیب اسیدهای چرب نشان داد که اسیدهای لینولئیک و اولئیک به ترتیب در 47.45 درصد و 35 درصد در روغن دانه کدو تنبل (C. maxima) استخراج شده با استفاده از دی اتیل اتر وجود دارد [47] . به گفته آکین و همکاران. (2018)، محتوای اسید لینولئیک از 53.19 درصد تا 53.27 درصد متغیر بود، پس از آن اسید اولئیک، که در مقادیر زیادی از 27.52 درصد تا 27.59 درصد در استخراج روغن دانه C. pepo L. با فشار سرد وجود داشت [48]. ]. بنابراین، استخراج آنزیمی آبی در این مطالعه نیز بازده کمتری از اسیدهای چرب نسبت به استخراج با حلال و استخراج با پرس سرد که در مطالعات قبلی ذکر شد، به دست آورد. در مقایسه رقم، ما دریافتیم که PSO1 (C. moschata Duch. Ex Poir) مقدار بیشتری از اسید لینولئیک را نسبت به PSO2 (C. moschata یا کدو تنبل ژاپنی) نشان داد. به طور متفاوت، PSO2 مقدار بیشتری از اسید اولئیک را نسبت به PSO1 ارائه کرد. به طور مهمی، تغییرات در پروفایل اسیدهای چرب و مقادیر روغن دانه کدو تنبل به منشا ارقام خاص، شرایط آب و هوایی و مدیریت پس از برداشت بستگی دارد [49]. جدا از تفاوت در پروفایل اسیدهای چرب روغن دانه کدو تنبل به دست آمده از روش های مختلف استخراج، روغن های حاصل از فناوری آنزیمی آبی غنی از فیتواسترول و توکوفرول گزارش شده است [50]. بنابراین، PSO1 و PSO2 که از روش استخراج سبز تولید شده‌اند، به عنوان روغن‌های جایگزین دانه کدو تنبل برای کاربردهای بیشتر پیشنهاد می‌شوند.

برای اطلاعات بیشتر: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501