مطالعه تجربی اثر حفاظتی پیش درمان با گلیکوزید سیستانش بر آسیب ایسکمی- پرفیوژن مجدد کلیه

برای اطلاعات بیشتر:ali.ma@wecistanche.com

ژو جون، ژائو شیمین

(بخش جراحی، بیمارستان منطقه ای باوشان طب سنتی چینی و غربی، شانگهای 201900)

【خلاصه】هدف ایجاد مدل احیای شوک هموراژیک در موش صحرایی و مشاهده اثر محافظتیسیستانچگلیکوزیدهای تام (CTG) در آسیب ایسکمی-پرفیوژن مجدد کلیه - سایپرز، باشگاه دانش روش‌ها موش‌های SD به طور تصادفی به 3 گروه تقسیم شدند: گروه جراحی شم، گروه تجربی (گروه احیای شوک)، گروه درمان CTG، 10 موش در هر گروه. گروه آزمایش و گروه درمان CTG مدل‌های ایسکمی خونرسانی مجدد کلیه را ایجاد کردند. به موش‌های گروه درمان CTG 400 میلی‌گرم بر کیلوگرم به صورت داخل صفاقی و به گروه آزمایش و گروه عمل شم سالین تزریق شد. محتوای میوکارد خون، محتوای نیتروژن اوره و سیستاتین C در هر گروه برای تعیین عملکرد کلیه تشخیص داده شد، تجزیه و تحلیل فلوسیتومتری برای تشخیص میزان آپوپتوز سلول های کلیوی استفاده شد. از روش ایمونواسی مرتبط با آنزیم (ELISA) برای تشخیص پیوند کروموزوم X در موش صحرایی استفاده شد.کلیهبیان بافتی بازدارنده مرتبط با X پروتئین آپوپتوز (XIAP). نتایج در مقایسه با گروه CTG با گروه تجربی، کروم خون، BUN و سیستاتین C به طور معنی‌داری کاهش یافت (P<0.01), renal="" cell="" apoptosis="" was="" reduced=""><0.05), ctg="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). conclusion="" the="" total="" glycosides="" of="">سیستانچدارای یک اثر محافظتی بر آسیب ایسکمی- خونرسانی مجدد کلیه در موش صحرایی است که ممکن است به ارتقای بیان XIAP مرتبط باشد.

[کلید واژه ها] کلیه; آسیب ایسکمی خونرسانی مجدد؛ کل گلیکوزیدهای سیستانش؛ مهارکننده پروتئین آپوپتوز مرتبط با کروموزوم؛ آپوپتوز؛ موش صحرایی

[شماره طبقه بندی کتابخانه چینی] R692 [Document Marking Code] A [Article Number] 1008 -0392 (2015) 02-0037 -04

روی پودر عصاره سیستانچ برای کلیه کلیک کنید

آسیب ایسکمی خونرسانی مجدد (I/R) یک پدیده پاتوفیزیولوژیک شایع آسیب کلیوی در فرآیند شوک هموراژیک، ترومای شدید است.کلیهپیوند، وکلیهجراحی تومور مطالعات نشان داده اند که آپوپتوز بخش مهمی از آسیب عملکرد کلیه ناشی از آسیب I/R است (1). مهارکننده پروتئین آپوپتوز مرتبط با X (XIAP) یکی از قوی ترین مهارکننده های آپوپتوز درون زا است که تاکنون یافت شده است (2). مطالعات کمی در مورد اثر ضد آپوپتوز XIAP در بافت کلیه پس از آسیب I/R وجود دارد.سیستانچگلیکوزیدهای کل (CTG) یک ترکیب گلیکوزید کل فنیل اتانوئیدی است که از آن استخراج می شودسیستانچ، که عملکردهای بیولوژیکی متنوعی دارد. مطالعات کمی در مورد حفاظت کلیوی آن پس از آسیب I/R وجود دارد. . این مطالعه مدلی از احیای شوک هموراژیک را در موش‌ها ایجاد کرد و مدلی از آسیب سیستمیک I/R را برای بررسی اثر محافظتی گلیکوزیدهای کل فتق گوشت بر رویکلیهاز آسیب I/R و کشف مکانیسم احتمالی آن.

1مواد و روش ها

1.1 حیوانات و گروه بندی

30 موش نر تمیز و سالم توسط مرکز تجربی دانشگاه طب سنتی چینی شانگهای با وزن (30 ± 320) گرم ارائه شده است. به طور تصادفی به 3 گروه: گروه عمل شم، گروه آزمایش (گروه احیای شوک)، گروه CTG، هر یک با 10 موش تقسیم شدند.

1.2 معرف ها و ابزار اصلی

کل گلیکوزیدهای برنج چسبناک (شماره دسته ای: 20081516) از شرکت دارویی ژجیانگ هانگژو Xinghui Tianli خریداری شد. سدیم پنتوباربیتال، Hoechst 33258، و پروپیونیل یدید از سیگما، ایالات متحده آمریکا خریداری شد. کیت سنجش پروتئین مهارکننده آپوپتوز مرتبط با کروموزوم X موش (XIAP) و کیت الایزا از شرکت شانگهای Kemin Biotechnology، Ltd. خریداری شد. میکروپلیت ریدر از شرکت ترمو آمریکا خریداری شد. آشکارساز فیزیولوژیکی چند پارامتری از شرکت نیهون کوهدن ژاپن خریداری شد. فلوسایتومتر BDFACSAria از Becton، ایالات متحده آمریکا - شرکت Dickinson خریداری شد. تروکار 24G از شرکت تجهیزات پزشکی شاندونگ جیروی خریداری شد.

1.3 روش تجربی

1.3.1 آماده سازی موش های SD مدل حیوانی 12 ساعت قبل از آزمایش ناشتا بودند و با تزریق داخل صفاقی پنتوباربیتال سدیم (50 میلی گرم بر کیلوگرم) بیهوش شدند.

موش در وضعیت خوابیده به پشت ثابت شد، یک برش 3 سانتی متری در قسمت پایین شکم چپ ایجاد شد، شریان فمورال جدا شد، یک تروکار 24G وارد شد و یک آشکارساز فیزیولوژیکی چند پارامتری متصل شد. میانگین فشار خون موش به صورت (15±113) میلی‌متر جیوه، هپارین سرنگی 20 میلی‌لیتری اندازه‌گیری شد. فشار خون با دستگاه سه طرفه اتصال شیمیایی به 40 میلی‌متر جیوه (1 میلی‌متر جیوه=0. 133 کیلو پاسکال) کاهش یافت. شوک شروع شده در نظر گرفته شد و فشار خون به مدت 90 دقیقه حفظ شد. حجم خون‌ریزی (3±13) میلی‌لیتر بود و سپس خون اتولوگ در سرنگ تزریق مجدد آهسته حدود 30 دقیقه طول می‌کشد و فشار خون به بیش از 90 درصد مقدار اولیه باز می‌گردد و احیا موفقیت‌آمیز تلقی می‌شود (3). . تروکار بیرون کشیده شد، شریان فمورال بسته شد و برش بخیه شد. پس از بیدار شدن موش ها، آنها را برای مشاهده به قفس بازگرداندند و آنها آزاد بودند که بخورند و بنوشند. 24 ساعت پس از احیاء، تزریق داخل صفاقی پنتوباربیتال سدیم (50 میلی گرم بر کیلوگرم) برای بیهوشی، لاپاراتومی، 5 میلی لیتر خون از ورید اجوف تحتانی جمع آوری شد، موش ها بلافاصله قربانی شدند و کلیه های چپ و راست خارج شدند. استفاده کنید.

1.3.2 روش‌های دارویی گروه درمان CTG 2 ساعت قبل از خون‌رسانی به موش‌ها CTG داده شد و با دوز 400 میلی‌گرم بر کیلوگرم به داخل حفره شکمی تزریق شد. به گروه تجربی 2 ساعت قبل از خون ریزی 3 میلی لیتر نرمال سالین به صورت داخل صفاقی تزریق شد. گروه عمل شم فقط تحت بیهوشی، لاپاراتومی و جداسازی شریان فمورال، گذاشتن تروکار و بخیه برش قرار گرفتند، اما خونریزی یا احیا نشد. بقیه هم مثل گروه آزمایش بودند.

1. 4 شاخص و روش های تشخیص

1.4.1 تعیین محتوای BUN، کروم و سیستاتین C خون سیستاتین C یک نشانگر درون زا از تغییرات در میزان فیلتراسیون گلومرولی است. هنگامی که عملکرد کلیوی مختل می شود، میزان فیلتراسیون گلومرولی کاهش می یابد، غلظت سیستاتین C در خون می تواند 10 برابر افزایش یابد و دقت تشخیصی سیستاتین C به طور قابل توجهی بهتر از مسمومیت عضلانی سرم است. محتوای BUN، کروم و سیستاتین C خون برای تعیین به آزمایشگاه بیمارستان ما ارسال شد.

1.4.2 تعیین میزان آپوپتوز سلولی فلوسیتومتری برای تشخیص میزان آپوپتوز سلول های کلیه استفاده شد. کلیه را بردارید و با تیغه خرد کنید و کمی PBS اضافه کنید و داخل لوله آزمایش بریزید. 0.3 درصد تریپسین را برای هضم در حمام آب 37 P اضافه کنید، 2{18}} دقیقه انکوبه کنید، وقتی محتویات داخل لوله آزمایش کدر شد، 2 برابر PBS اضافه کنید تا هضم متوقف شود، فیلتر با یک توری نایلونی 0 مش 30، ناخالصی ها را دور بریزید و در یک سانتریفیوژ با دمای پایین سانتریفیوژ کنید. شعاع سانتریفیوژ 8 سانتی متر، 12، 000 r/min، سانتریفیوژ به مدت 5 دقیقه، مایع رویی را دور بیندازید، غلظت سلول را روی 1 ~ 1.5 x 106/ml تنظیم کنید، 0.4 میلی لیتر از سوسپانسیون سلولی فوق را بردارید و 1.2 اضافه کنید. ml Hoechst 33258 (10 pil/ml)، تیره 37 تن: در حمام آب انکوبه کنید، لوله آزمایش را درپوش بگذارید، بعد از 5 دقیقه با PBS شستشو دهید، شعاع سانتریفیوژ 8 سانتی متر، 12 000 r/min، سانتریفیوژ به مدت 5 دقیقه مایع رویی را دور بریزید، دوباره به همان روش آبکشی کنید. 0.4 میلی لیتر PI را به مدت 5 دقیقه رنگ آمیزی کنید و درصد سلول های طبیعی، نکروزه و آپوپتوز کلیه را تشخیص دهید. با توجه به میل ترکیبی دو رنگ انواع مختلف سلول ها، مشخص شده است که فقط سلول های رنگی PI سلول های مرده هستند، تنها سلول های رنگی Hoechst 33258 سلول های آپوپتوز هستند و هیچ یک از آنها سلول های زنده عادی رنگی نیستند.

1.4.3 ایمونواسی مرتبط با آنزیم (ELISA) برای تشخیص بیان XIAP در بافت کلیه موش صحرایی هر گروه از کلیه ها را بگیرید و بافت های تازه کلیه را با لیزات بافتی درمان کنید. سانتریفیوژ در یک سانتریفیوژ با دمای پایین با سرعت 12 000 r/min به مدت 5 دقیقه. مایع رویی را بردارید و طبق دستورالعمل کیت XIAP ELISA عمل کنید. دانشگاه شانگهای جیائوتنگ Fenghe Technology Co., Ltd. مسئول آزمایش است.

1.5 پردازش آماری

داده های تجربی هر گروه با خاک یوان و SPSS 17 نشان داده شده است. برای تجزیه و تحلیل آماری از نرم افزار 0 استفاده شده است. پ<0.05 indicates="" that="" the="" difference="" is="" statistically="">

سیستانچ می تواند عملکرد جنسی را بهبود بخشد

2 نتیجه

شاخص های عملکرد کلیه مقادیر Cr، BUN و سیستاتین C از نظر آماری معنی دار بود (F<0.01); the="" experimental="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" sham="" operation="" group="" (p=""><0.01), indicating="" that="" the="" rat="" the="" kidney="" i/r="" model="" was="" successfully="" prepared;="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" values="" of="" cr,="" bun="" and="" cystatin="" c="" in="" the="" ctg="" group="" were="" significantly="" reduced=""><0.01). renal="" cell="" apoptosis="" rate:="" in="" the="" sham-operated="" group,="" only="" a="" few="" cells="" in="" the="" kidney="" tissue="" experienced="" apoptosis.="" apoptotic="" cells="" accounted="" for="" 0.42%="" ±="" 0.08%,="" and="" the="" experimental="" group="" had="" a="" significant="" increase="" in="" apoptosis,="" accounting="" for="" 18.="" 22%="" ±="" 5.="" 32%="" (p=""><0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" showed="" apoptosis="" the="" number="" decreased="" to="" 12.71%="" ±="" 3.81%="">< 0.01).="" the="" effect="" of="" ctg="" on="" the="" expression="" of="" xiap="" in="" i/r="" injured="" renal="" tissue:="" the="" sham="" operation="" group="" only="" had="" weak="" xiap="" expression,="" while="" the="" experimental="" group="" xiap="" expression="" increased="" significantly,="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap="" (f=""><0.05), see="" table="">

جدول 1 عملکرد کلیه مقادیر کروم، BUN و سیستاتین-C را در موش‌های صحرایی در هر گروه نشان می‌دهد. 1 شاخص های عملکرد کلیوی در سه گروه

در مقایسه با گروه عملیات شم، *ص<0.01; compared="" with="" the="" experimental="" group,=""><0.05><>

مکانیسم آسیب کلیه ایسکمی-پرفیوژن مجدد بسیار پیچیده است. این یک فرآیند پاتولوژیک است که به طرق مختلف تحت تأثیر عوامل مختلف مانند اضافه بار یون کلسیم، آسیب پراکسیداسیون لیپیدی، آپوپتوز سلولی و نکروز رخ می دهد که در این میان آپوپتوز سلولی وابسته به کاسپاز یکی از اشکال اصلی سلول های اپیتلیال لوله های کلیوی است. آسیب ناشی از آسیب کلیه I/R (4). بازدارنده خانواده پروتئین آپوپتوز (IAP) تنها مهارکننده کاسپاز درون زا است که تاکنون در سلول های پستانداران یافت شده است که می تواند به طور موثری از بروز آپوپتوز سلولی جلوگیری کند. XIAP عضوی است که قوی ترین اثر مهاری بر روی کاسپاز در خانواده IAP دارد. می تواند آپوپتوز سلولی ناشی از انواع محرک های پاتولوژیک را مهار کند و اثر محافظتی بر روی اندام های آسیب دیده داشته باشد (5).

در حال حاضر، بیشتر روش‌ها برای ایجاد مدل‌های حیوانی آسیب I/R کلیوی، برداشتن یک کلیه و بستن طرف دیگر ساقه کلیوی یا شریان کلیوی ⑹ برای شبیه‌سازی وضعیت پیوند کلیه است. این مطالعه از یک مدل شوک/احیای هموراژیک استفاده می‌کند که به فرآیند پاتوفیزیولوژیک ایسکمی-پرفیوژن مجدد سیستمیک که در شوک تروماتیک بالینی رخ می‌دهد نزدیک‌تر است. در این آزمایش، سطوح BUN، کروم، و سیستاتین C خون موش‌های SD بهبود قابل توجه، اختلال شدید عملکرد کلیه، یک مدل حیوانی ایده‌آل برای مطالعه آسیب کلیوی I/R است.

CTG یک ماده دارویی مهم خمیر گوشت دخترانه طب سنتی چینی است. خمیر بادمجان، که طبیعت گرم، شیرین و نمکی دارد، به نصف النهار کلیه و روده بزرگ باز می گردد و در اصل در Materia Medica Shennong وجود داشت. «بن سوترا»: پنج زایمان اصلی و هفت جراحت، تغذیه وسط، تغذیه پنج اندام داخلی، تقویت یین، تغذیه جوهر و چی.سیستانچدو هزار سال است که در کشور من استفاده شده است. در گذشته در فرمول های افزایش قدرت رتبه 1 و پس از جینسینگ در فرمول های مغذی رتبه دوم را به خود اختصاص داده است. مطالعات نشان داده است کهسیستانچمی توانبهبود عملکرد جنسی, اعصاب و غدد را تنظیم می کند، وبهبود عملکرد سیستم ایمنی. , آنتی اکسیدان ها، متابولیسم مواد را تقویت می کند، از میوکارد ایسکمیک و سایر عملکردها محافظت می کند. به عنوان ماده اصلی دارویی پوره خانواده گوشت، CTG عملکردهای زیادی دارد. تحقیقات بر روی مدل‌های ایسکمی-پرفیوژن مجدد مغزی نشان داد که CTG می‌تواند اسیدهای آمینه تحریک‌کننده در بافت مغز را پس از ایسکمی-پرفیوژن مجدد کاهش دهد و از بافت مغز موش‌های SD محافظت کند (7). CTG دارای یکاثر آنتی اکسیدانیبر روی بافت موش و اثر محافظتی خاصی بر هیپوکسی حاد مغزی در موش و آسیب عضله قلب در موش دارد (9). CTG می تواند به طور قابل توجهی رفتار عصبی را بهبود بخشدپارکینسونموش ها را مدل می کنند و از کاهش تعداد نورون های دوپامین در جسم سیاه جلوگیری می کنند (9). CTG با افزایش فعالیت آنزیم های مهار کننده رادیکال های آزاد، جلوگیری از پراکسیداسیون لیپیدی، مهار رسوب پپتید B-آمیلوئید در مغز و مهار آپوپتوز سلول های مغزی، یادگیری را به میزان قابل توجهی بهبود می بخشد.بیماری آلزایمرموش ناشی از پپتید آمیلوئید B توانایی حافظه w. این مطالعه نشان داد که پس از اعمال پیش تیمار CTG، محتوای BUN، کروم و سیستاتین C خون موش‌ها به‌طور معنی‌داری کاهش یافت و آسیب کلیوی کاهش یافت. CTG پروتئین مهار کننده آپوپتوز XIAP را در بافت کلیوی آسیب دیده I/R افزایش داد و آپوپتوز سلولی را مسدود کرد. وقوع مرگ اثر محافظتی بر آسیب کلیه دارد.