2 روش های تست

2.1 تجزیه و تحلیل فارماکولوژی شبکه

2.1.1 مواد موثره سیستانچ دسرتیکولا

بر اساس مطالعات موجود [7، 22]، "Echinacoside"، "ورباسکوزید", "سیستانوزید A", "توبولوزید A", "ایزواکتئوزید", "2-استیلاکتئوزید"و"توبولوزید B" به عنوان اجزای فعال زیستی برای تجزیه و تحلیل انتخاب شدند. داده های ساختار شیمیایی سه بعدی هفت ماده فوق را از طریق Pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/) پیدا کنید و آنها را در قالب sdf ذخیره کنید.

2.1.2 پیش بینی و غربالگری اهداف بالقوه

فایل های ساختار سه بعدی را وارد کنیدمواد فعال در پایگاه داده PharmMapper(http://lilab-ecust.cn/pharmmapper/index.html). "فقط اهداف پروتئین انسانی" را به عنوان گونه هدف انتخاب کنید و گزینه های دیگر را به عنوان پیش فرض نگه دارید تا داده های مربوط به مواد مختلف را بدست آورید. هدف هدف مربوطه

پایگاه داده UniProt (https://www.uniprot.org/) برای به دست آوردن اطلاعات نام پروتئین و نام ژن مربوط به هر هدف استفاده شد. نقاط هدف مربوط به 7 جزء را ادغام کنید.

در پایگاه داده GeneCards (https://www.genecards.org/)، از "بیماری التهابی روده" به عنوان کلمه کلیدی برای جستجوی ژن های مرتبط با بیماری التهابی روده و سازماندهی نتایج جستجو استفاده کنید.

مکمل سیستانچ مکمل حمایتی ضد التهابی PhGs75% Ech 30% Act 12%

2.1.3 برهمکنش پروتئین-پروتئین (PPI)

ساخت شبکه از jvenn (https:/jvenn.toulouse.inrae.fr/app/example.html) برای ترسیم نمودار ون به صورت آنلاین برای به دست آوردن تقاطع اهداف ماده فعال Cistanche deserticola و اهداف IBD استفاده کنید. اهداف تقاطع به دست آمده را برای تجزیه و تحلیل غربالگری PPI در پایگاه داده String بارگذاری کنید. فایل TSV شبکه PPI را دانلود کنید، آن را به Cytoscape 3.8 وارد کنید.{2}}، مقدار درجه شبکه تعامل پروتئین را محاسبه کنید و سپس نمودار شبکه PPI را بر اساس مقدار درجه زیبا کنید.

2.1.4 هستی شناسی ژن (GO)

تجزیه و تحلیل مسیر غنی‌سازی عملکردی و دایره‌المعارف ژن‌ها و ژنوم کیوتو (KEGG) با استفاده از پایگاه داده DAVID (https://david.ncifcrf.gov/) برای شناسایی اهداف اثرات محافظتی مواد فعال Cistanche deserticola بر IBD انجام شد. تجزیه و تحلیل GO بر روی نقاط انجام شد، و سپس پایگاه داده DAVID برای انجام تجزیه و تحلیل غنی‌سازی مسیر KEGG بر روی اهدافی که در آن مواد فعال Cistanche deserticola نقش محافظتی در IBD دارند، استفاده شد.

2.1.5 ساخت شبکه Cistanche deserticola "ماده فعال-هدف-مسیر"

مواد فعال سیستانش دسرتیکولا، اهداف تقاطع مواد فعال سیستانش دسرتیکولا و IBD و مسیرهای غنی شده توسط KEGG برای ساخت یک شبکه ماده فعال-هدف-مسیر استفاده شد.

2.2 اعتبار سنجی مدل حیوانی

2.2.1 ایجاد مدل حیوانی

موش‌های نر BALB/c با درجه SPF (5 تا 8 هفته، 18 تا 21 گرم) مورد استفاده قرار گرفتند که توسط مرکز تست غذای بهداشتی دانشکده هنرهای کاربردی و علوم، دانشگاه اتحادیه پکن [شماره مجوز استفاده از حیوانات آزمایشی: SYXK (Beijing) ) 2017-0038]، آنها در اتاق حیوانات با درجه SPF با دمای (2±23) درجه، رطوبت نسبی 50٪ تا 70٪ و 12 ساعت قرار گرفتن در معرض نور فلورسنت متناوب در روز و شب نگهداری شدند. . پروتکل‌های آزمایش حیوانی همگی توسط آزمایشگاه حیوانات مرکز آزمایش غذای بهداشتی، دانشکده علوم و هنرهای کاربردی، دانشگاه اتحادیه پکن تأیید شدند. پس از تغذیه تطبیقی ​​به مدت 3 روز، 20 موش به طور تصادفی بر اساس وزن بدن به 4 گروه و در هر گروه 5 موش تقسیم شدند. ①گروه کنترل (CZ): آب استریل را آزادانه بنوشید و آب استریل را به مدت 7 روز متوالی گاواژ کنید. ②گروه کنترل DSS

(DZ): نوشیدن رایگان محلول 3٪ DSS که روزانه به مدت 7 روز متوالی تهیه می شود. ③ گروه با دوز پایین از کل گلیکوزیدهای Cistanche deserticola (LZ) (غلظت مایع: 0.1 گرم در میلی لیتر): نوشیدنی رایگان محلول 3٪ DSS روزانه به مدت 7 روز تهیه می شود. مایع گاواژ به مدت 7 روز متوالی; ④ Cistanche deserticola تام گلیکوزیدهای گروه با دوز بالا (HZ) (غلظت مایع 0.4 گرم /

میلی لیتر): محلول تازه تهیه شده 3% DSS را هر روز آزادانه بنوشید و به مدت 7 روز متوالی محلول را با گاواژ بدهید. پس از 7 روز مدل سازی مداوم، 12 ساعت ناشتا بودند و سپس با دررفتگی دهانه رحم قربانی شدند. گلبول های قرمز مرغ 4 ساعت قبل از اعدام به صورت داخل صفاقی تزریق شد. بلافاصله پس از اعدام، کره چشم برای جمع آوری خون برداشته شد. مایع صفاقی خارج و حفره شکمی باز شد. طول کولون اندازه گیری شد و طحال موش، گره پیر و سایر اندام ها برداشته شد.

مکمل سیستانچ مکمل حمایتی ضد التهابی

2.2.2 شاخص فعالیت بیماری (DAI)

موش‌ها قبل از تزریق داخل معده هر روز در ساعت معینی وزن شدند و وضعیت روانی و خواص مدفوع موش‌ها مشاهده شد. خون مخفی مدفوع اندازه گیری و بر اساس آن نمره گذاری شد. استانداردهای امتیازدهی در جدول 1 نشان داده شده است. امتیاز DAI=(امتیاز وزن بدن + امتیاز شخصیت مدفوع + امتیاز خون مخفی مدفوع)/3 (1)

جدول 1 معیارهای امتیازدهی DAI

2.2.3 تشخیص فلورسانس کمی PCR تشخیص مسیر سیگنال ایمنی (qRT-PCR)

طحال موش جمع آوری شد، به بلوک های بافتی 0.5 سانتی متری بریده شد و برای ذخیره در محلول تثبیت کننده RNA بافت خیس شد. بافت را بردارید و آن را به قطعات برش دهید، محلول استخراج RNA را اضافه کنید و به قطعات خرد کنید تا RNA کل استخراج شود. پس از رونویسی معکوس و تقویت PCR، فعال شدن دو مسیر سیگنالینگ ایمنی کلیدی mTOR و TGF- در طحال موش شناسایی شد. توالی پرایمرهای مورد استفاده در qRT-PCR در جدول 2 نشان داده شده است.

جدول 2 جدول توالی پرایمر