بررسی پتانسیل عصاره جلبک دریایی ایسلندی تولید شده توسط استخراج پالس آبی به کمک میدان های الکتریکی برای کاربردهای آرایشی بخش 2

لطفا تماس بگیریدoscar.xiao@wecistanche.comبرای اطلاعات بیشتر

2.5.4. فعالیت مهار هیالورونیداز

تمام عصاره جلبک دریایی به طور قابل توجهی بالا بودضد هیالورونیدازفعالیت (جدول 4)، که نتایج قابل مقایسه ای را با محلول های اسید تانیک (یک مهار کننده معروف هیالورونیداز) نشان می دهد. به طور خاص، عصاره A.esculenta 100 درصد مهار را برای تمام روش های آزمایش شده نشان داد. علاوه بر این، عصاره‌های U. Lactuca فعالیت‌های بالاتر از 90 درصد مهار را نشان دادند، که در آن مهار عصاره‌های تولید شده توسط PEF (96.8 درصد) و ترکیبی از PEF به اضافه HW (97.3 درصد) بیشتر از مهار تولید شده توسط آب گرم سنتی بود. روش 93.4 درصد )(ص<0.05). all="" p.palmaria="" extracts="" exhibited="" similar="" activities="" (p=""><0.05), the="" inhibition="" of="" the="" extracts="" produced="" by="" pef="" was="" (91.9="" %)="" and="" the="" combination="" of="" pef+="" hw="" (89.5%)="" and="" the="" traditional="" hot="" water="" method="">

لطفا برای دانستن بیشتر اینجا را کلیک کنید

سایر نویسندگان همچنین فعالیت ضد هیالورونیداز عصاره های مختلف جلبک دریایی را، به ویژه برای عصاره های غنی ازفلوروتانین هااز جلبک های قهوه ای [73،74]. با این حال، با بهترین دانش ما، این اولین بار است که فعالیت های مهاری هیالورونیداز عصاره های P. palmitate و U.lactuca تولید شده توسط PEF گزارش شده است.

سیستانچ می تواند ایمنی را بهبود بخشد

اسید هیالورونیک جزء اصلی درم است، جایی که در ترمیم بافت نقش دارد، با افزایش سن تجزیه می شود و باعث ایجاد چین و چروک و از دست دادن استحکام پوست می شود. از این نظر، مهارکننده‌های هیالورونیداز سطح اسید هیالورونیک ماتریکس خارج سلولی پوست را برای بهبود ظاهر پیری افزایش می‌دهند.پوست صورت[13]. بنابراین، نتایج این مطالعه ممکن است راه‌های جدیدی را برای بهره‌برداری از مهارکننده‌های طبیعی هیالورونیداز از منابع جلبک با استفاده بالقوه در محصولات آرایشی باز کند.

به طور خلاصه، داده‌های جمع‌آوری‌شده به ما این امکان را داد که نتیجه بگیریم که عصاره‌های A.esculenta فعالیت‌های بازدارندگی بهتری نسبت به P.palmaria و U. Lactuca نسبت به آنزیم‌های آزمایش‌شده نشان دادند. بنابراین، امیدوار کننده ترین گونه جلبک دریایی با عالی استضد آنزیمیفعالیت ها و بنابراین برای مطالعات بیشتر در آزمایشگاه ما انتخاب شد. اگرچه به نظر می رسد که عصاره های خام از A.esculenta کاندیدهای خوبی برای آزمایش های آزمایشگاهی هستند، مطالعات بیشتری برای روشن شدن هویت متابولیت های مسئول این اثرات بیولوژیکی باید انجام شود.

2.6. ارتباط بین ترکیبات شیمیایی و خواص زیست فعال

نتایج حاصل از تجزیه و تحلیل مؤلفه های اصلی (PCA)، نشان داد که جداسازی اصلی گروه ها توسط PC1 و PC2 تعریف شده است که به ترتیب 71.9 درصد و 14.5 درصد از واریانس داده ها را تشکیل می دهند (شکل 2). عصاره A.esculenta با محتوای بالاتر فلاونوئیدها و ترکیبات فنلی، اثرات بازدارنده بر روی آنزیم ها (کلاژناز، تیروزیناز و الاستاز)، و مقادیر DPPH و FRAP نسبت به گونه های دیگر، P. palmata و Ul مشخص شد. لاکتوکا. از سوی دیگر، A.esculenta محتوای کربوهیدرات کمتری داشت، به ویژه در مقایسه با P. palmitate (که در طرف مقابل PC1 قرار داشت). تنوع در داده ها در امتداد PC2 عمدتاً مربوط به ABTS و بودهیالورونیدازبازداری. همانطور که توسط مکان در طرح مشخص شد، P. palmata همبستگی قوی تری با ABTS داشت در حالی که U. Lactuca بیشتر بههیالورونیدازاثرات بازدارندگی در مقایسه با این دو گونه.

همبستگی مثبت بالا و معنادار بین TPC، TFC، DPPH، FRAP و اثرات بازدارنده بر کلاژناز، الاستاز وتیروزینازبا استفاده از تحلیل همبستگی پیرسون (جدول 5) نشان داده شد.

شکل 2. تجزیه و تحلیل مؤلفه های اصلی (PCA) بای پلات بارهای عاملی (دایره های سیاه) و امتیازات برای عصاره جلبک ها (P. palmata: نقاط قهوه ای (بالا سمت راست)؛ U. Lactuca: مثلث های سبز (عمدتا در سمت چپ بالا)؛ A esculenta: مربع های آبی (قسمت پایینی طرح).

این در توافق با مطالعات قبلی بود و گزارش می‌داد که ترکیبات فنلی (از جمله فلاونوئیدها) عوامل اصلی فعالیت آنتی‌اکسیدانی علف‌های هرز دریایی مختلف هستند [75-77]. فعالیت آنتی اکسیدانی بالای عصاره های ماکروجلبک های قهوه ای به گروه خاصی از پلی فنل ها، فلوروتانین ها و ساختار مولکولی منحصر به فرد آنها مربوط می شود. گزارش شده است که فلوروتانیس از جلبک های قهوه ای دارای حداکثر هشت حلقه فنلی به هم پیوسته است که به عنوان تله الکترونی عمل می کنند [78،79]. انتظار می رفت که ABTs با TPC، سایر پارامترهای آنتی اکسیدانی مرتبط باشد. دلایل احتمالی ممکن است این باشد که روش ها بر اساس شرایط واکنش متفاوت هستند و واکنش پذیری هم از نظر زمان و هم از نظر دامنه اجزا متفاوت است. به عنوان مثال، معرف ABTS با طیف وسیع تری از واکنش نشان می دهدآنتی اکسیدان هااز رادیکال DPPH [80]. از طرف دیگر، یکی از محدودیت هایی که برای ABTS ذکر شد، واکنش طولانی است و زمان واکنش عمومی ممکن است اجازه ندهد به نقطه پایانی برسد.

نتایج نشان می‌دهد که همبستگی مثبت بالای TPC و TFC با فعالیت مهاری کلاژناز، الاستاز و تیروزیناز وجود دارد ({0}}.93-0.99)، در حالی که ارتباط با مهار وجود دارد. هیالورونیداز آنقدر قوی نبود (r{3}}.42 و 0.54، به ترتیب). این نشان می دهد که سایر اجزا ممکن است در اثر بازدارندگی عصاره ها نقش داشته باشند. مطالعات دیگر گزارش کرده اند که پلی ساکاریدها دارای فعالیت بازدارنده هیالورونیداز هستند، به عنوان مثال اسید آلژینیک در جلبک های قهوه ای [81،82]. مطالعات بیشتر در مورد ترکیب شیمیایی گونه های ماکروجلبک برای اثرات ترکیبات جدا شده بر روی آنزیم برای ارزیابی سهم هر یک از اجزای شیمیایی مورد نیاز است، زیرا در این مطالعه تمرکز بر روی عصاره های خام بود.

این یافته ها با مطالعات قبلی هماهنگ بود و بیان می کرد که ترکیب شیمیایی و سطوح زیست فعالی عصاره ها به طور قابل توجهی بین سه دودمان (جلبک قرمز، سبز و قهوه ای) و بین گونه های مختلف متعلق به یک شاخه متفاوت است و تحت تأثیر سن قرار می گیرد. و نوع بافت علاوه بر این، ترکیب و ویژگی‌ها به بسیاری از عوامل محیطی مؤثر بر توزیع و رشد جلبک‌های بزرگ بستگی دارد. به عنوان مثال، نور (اشعه UV)، دما، در دسترس بودن مواد مغذی، قرار گرفتن در معرض هوا، حرکت آب، قرار گرفتن در معرض امواج و شوری. دما به عنوان عاملی که قوی ترین تأثیر را بر تشکیل رنگدانه و غلظت مواد مغذی، شوری و اشعه ماوراء بنفش دارد به عنوان عوامل مؤثر بر غلظت TPC توصیف شده است [83].

پراکنش گونه های مختلف ماکروجلبک با عمق آب متفاوت است. موقعیت‌های بالاتر از ساحل در منطقه جزر و مدی یا ساحلی استرس بیشتری دارند زیرا گونه‌هایی که در آنجا رشد می‌کنند، باید تغییرات متعددی را در عوامل غیرزیستی به دلیل تغییرات جزر و مدی تحمل کنند. به عنوان مثال، اثر خشک شدن هوا، تابش زیاد خورشید (در جزر و مد)، تغییرات در شوری و دما و در شرایط دمای پایین هوا، از جمله یخ زدگی. در زیر علامت کم آب، افزایش عمق منجر به کاهش بسیار سریع شدت نور و قرار گرفتن کمتر در معرض تابش می شود.

جلبک‌هایی که در محدوده جزر و مدی رشد می‌کنند حساسیت کمتری نسبت به اشعه ماوراء بنفش دارند و سریع‌تر از تنش خورشیدی بهبود می‌یابند. در حالی که جلبک‌هایی که در ناحیه زیر ساحلی رشد می‌کنند نسبت به اشعه ماوراء بنفش حساس‌تر هستند و بازیابی کمتری از استرس خورشیدی دارند[84]. در همان زمان، ستون آب محافظت می کند. در مطالعه حاضر، قرار گرفتن در معرض نور خورشید احتمالا برای P. palmata در مقایسه با گونه‌های دیگر قوی‌تر بود. مطالعات دیگر نشان داده اند که تشکیل MAAs به طور مستقیم با نور خورشید مرتبط است [85] و از ارگانیسم ها در برابر اشعه UV-A و UV-B محافظت می کند. علاوه بر این، نشان داده شد که مقدار ویژه MAAs با افزایش عمق جمع آوری کاهش می یابد. کلپ هایی مانند A.esculenta شناخته شده اند که در ناحیه زیر ساحلی بالایی رشد می کنند، اما همچنین به سمت پایین ترین جزر و مدی درست بالای واترمارک پایین گسترش می یابند. به این معنی که ستون آب حفاظت قوی تری نسبت به P.palmata داشت. علاوه بر این، ویژگی های مورفولوژیکی متفاوت است، تیغه های A.esculenta در مقایسه با دو گونه دیگر ضخیم تر است. UI. لاکتوکا که عمدتاً در جزر و مد و زیر ساحل رشد می کند، قادر به فتوسنتز و رشد در زیر تابش بسیار کم است. قرار گرفتن در معرض نور UVB برای تسریع بازیابی پارامترهای فتوسنتزی U. Lactuca از اثرات منفی نور UVA بیان شده است. کوچکتر، ساختار ساده‌تر و کوتاه‌تر (3 ماه) از A.esculenta (5-7 vear) و P. palmata است که هر سال رشد جدیدی دارد.

به طور خلاصه، می‌توان این فرضیه را بیان کرد که تفاوت‌های اصلی در خواص عصاره‌ها، تنوع در طول عمر، ویژگی‌های مورفولوژیکی و شرایط رشد گونه‌های جلبک است.

3. مواد و روشها 3.1. مواد

جلبک‌های دریایی ایسلندی U.lactuca (جلبک سبز)، A.esculenta (جلبک قهوه‌ای)، و P. palmitate (جلبک قرمز) توسط صدف‌های آبی ایسلندی و جلبک دریایی تهیه شدند که علف‌های هرز دریایی در Breidafjordur (غرب ایسلند) برداشت شدند. پس از برداشت، جلبک‌های دریایی خشک شدند (تا حدود 90 درصد مواد خشک)، آسیاب شدند و در بسته‌بندی خلاء تحویل داده شدند. نمونه ها تا زمان استفاده در مکانی خشک و تاریک در دمای اتاق نگهداری شدند.

تیروزیناز قارچ، L-3،4-دی هیدروکسی فنیل آلانین (L-DOPA)، الاستاز از پانکراس خوک، اسید اسکوربیک، N-Succinyl-Ala-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (AAAPVN)، هیالورونیداز از بیضه گاو، کوئرستین، توکوفرول، اسید تانیک، 2،2-دی فنیل{12}}پیکریل هیدرازیل (DPPH)، 24،{14}}تری پیریدیل-s-تریازین (TPTZ)، ترولوکس، فولین-سیوکالتیو معرف، اسید گالیک، و کیت سنجش رنگ سنجی فعالیت کلاژناز (MAK293) از شرکت سیگما آلدریچ (سنت لوئیس، MO، ایالات متحده آمریکا) خریداری شد. نمک سدیم هیالورونیک اسید از MakingCosmetics (Redmond, WA, USA) خریداری شد. تمام مواد شیمیایی و معرف های دیگر مورد استفاده دارای درجه تحلیلی بودند و از VWR International LLC بدست آمدند. آب دیونیزه (ElixEssential، Merck، Darmstadt، آلمان) برای استخراج و تهیه محلول های مبتنی بر آب استفاده شد.

3.2. طراحی تجربی

یک طرح فاکتوریل برای ارزیابی اثرات گونه‌های جلبک دریایی ایسلندی (U.lactuca، A.esculenta، P. palmata) و تیمار استخراج (استخراج با آب گرم (HW، 95 درجه سانتی‌گراد)، استخراج به کمک PEF (PEF) و ترکیبی از هر دو روش (PEF به علاوه HW)، بر روی ترکیب عصاره و زیست فعالی (جدول 6) استخراج در سه تکرار برای هر گروه انجام شد و هر تکرار عصاره در سه تکرار آنالیز شد.

3.3. استخراج مواد فعال زیستی از جلبک های دریایی ایسلند

بهره برداری از زیست توده ماکرو جلبکی در سطوح مختلف، دانشمندان را برانگیخته است تا تکنیک های استخراج دوستدار محیط زیست، کارآمد و مقرون به صرفه را بر اساس رویکردهای استخراج سبز کشف کنند. در این کار، استخراج به کمک PEF به عنوان یک روش جدید و سبز برای تولید عصاره‌های کاربردی مورد ارزیابی قرار گرفت، در حالی که از استخراج سنتی آب گرم برای مقایسه استفاده شد. علاوه بر این، اثر ترکیب هر دو تکنیک، درمان PEF جلبک‌های ماکرو به دنبال استخراج سنتی آب گرم، بر بازیابی زیست فعال مورد مطالعه قرار گرفت. با توجه به الکتروپوریشن مورد انتظار تولید شده در غشای سلولی پس از درمان فیزیکی، استخراج زیر با آب داغ می‌تواند آزادسازی مواد داخل سلولی [86] را تسهیل کند و بازده استخراج را افزایش دهد. مدت زمانی پس از درمان برای انتشار مواد به خارج از سلول ها مورد نیاز است [87،88]، و در این آزمایش، سوسپانسیون ها یک شب تا جدا شدن مایع (عصاره) از پالپ صبر کردند.

با توجه به محیط استخراج، از آب مقطر برای تولید عصاره جلبک دریایی برای غلبه بر محدودیت‌های مربوط به استفاده از سموم و حلال‌های آلی استفاده شد. ثابت شد که آب حلال خوبی برای استخراج چندین ترکیب فعال زیستی از جلبک های دریایی است [46,89-91] و دوستدار محیط زیست است. علاوه بر این، آب معمولاً برای استخراج به کمک PEF استفاده می شود زیرا رسانای خوبی برای الکتریسیته است.

3.3.1. مراحل استخراج

برای هر تکرار در هر گروه، جلبک دریایی (15 گرم) یک شبه در دمای اتاق (22 درجه) در آب دیونیزه (300 میلی لیتر) خیس شد. سپس، سوسپانسیون با PEF (PEF)، حرارت داده شده (HW)، یا هر دو تیمار با PEF و حرارت داده شد (PEF به علاوه HW). سوسپانسیون ها یک شبه در یخچال و سپس با یک کاغذ صافی درشت (20 میکرومتر) فیلتر شدند. سپس فیلترها (عصاره ها) در دمای 4 درجه نگهداری شدند تا زمانی که آنالیز شوند.

استخراج به کمک میدان های الکتریکی پالسی با استفاده از یک ژنراتور پالس ساخته شده در داخل انجام شد. این یک خازن FuGHCK-200-2000 (Fu.G.Elektronik GmbH، Rosenheim، آلمان) و شکاف جرقه (18.5 کیلوولت OG75، Perkin-Elmer Optoelectronics، GMBH، Wiese-baden، آلمان) داشت. تجهیزات PEF پالس های فروپاشی نمایی با عرض 0.96 ما و دامنه 18 کیلو ولت تولید کردند. یک محفظه تصفیه پلکسی گلاس با ابعاد (L×H×W)20×8×2.5 سانتی‌متر، با کمترین فاصله بین الکترودهای صفحه برای درمان سوسپانسیون‌ها با میدان الکتریکی 8 کیلوولت بر سانتی‌متر در فرکانس 1.2 هرتز به مدت 10 دقیقه استفاده شد. عصاره HW با حرارت دادن سوسپانسیون در یک لیوان در حمام آب ترموستاتیک تهیه شد و به مدت 45 دقیقه در دمای 95 درجه نگهداری شد. برای میدان الکتریکی پالسی ترکیبی و عملیات حرارتی، سوسپانسیون‌ها تحت درمان با PEF قرار گرفتند و سپس در یک بشر قرار داده شدند، در حمام آب گرم شدند و به مدت 45 دقیقه در دمای 95 درجه نگهداری شدند.

3.3.2. رسانایی، pH و اندازه گیری دما

هدایت الکتریکی و pH سوسپانسیون جلبک‌های دریایی پس از خیساندن و پس از تیمارهای استخراج، در دمای اتاق، با استفاده از یک pH سنج (Orion StarTM A215 pH/Conductivity Benchtop Meter, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) مجهز به رسانایی اندازه‌گیری شد. سنسور و الکترود ترکیبی تریود pH/ARC. همچنین تغییرات دمایی ناشی از تیمارها ثبت شد.

3.4. مشخصات طیفی عصاره جلبک دریایی

طیف جذب UV-VIS عصاره‌های مختلف جلبک دریایی برای محدوده 200 تا 450 نانومتر با استفاده از یک پرتو دوگانه Thermo Scientific Evolution 350 UV-Vis Spectrophotometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) با 1 سانتی‌متر مکعب کوارتز اندازه‌گیری شد. سه اسکن برای هر عصاره جلبک دریایی انجام شد. 3.5. تعیین محتوای پلی فنلی تام

محتوای فنلی کل (TPC) در عصاره جلبک دریایی با استفاده از معرف Folin-Ciocalteu به دنبال یک روش کمی تغییر یافته که توسط Zhang [92] با استفاده از طیف‌سنج میکروپلیت Multiskan Sky (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) توصیف شد، تعیین شد. 20 میکرولیتر عصاره جلبک دریایی یا محلول استاندارد سریال با 100 میکرولیتر معرف Folin-Ciocalteu (10 درصد در آب مقطر) مخلوط شد و پس از 5 دقیقه 80 میکرولیتر محلول کربنات سدیم 7.5 درصد (o/w) اضافه شد. مخلوط واکنش اضافه شد. در دمای اتاق و تاریکی به مدت 30 دقیقه انکوبه شد، جذب در طول موج 760 نانومتر اندازه‌گیری شد، از آب مقطر به‌عنوان خالی استفاده شد، منحنی استاندارد اسید گالیک برای تعیین محتوای فنلی کل استفاده شد و به صورت ug معادل‌های اسید گالیک بیان شد. (GAE) در هر گرم ماده خشک (ug GAE/g dw).

3.6. تعیین محتوای فلاونوئید کل

محتوای فلاونوئید کل (TFC) در عصاره جلبک دریایی با روش توصیف شده توسط Kamtekar 【93】 تعیین شد و با میکروپلیت های چاهی سازگار شد. به طور خلاصه، حجم 25 میکرولیتر از عصاره جلبک دریایی یا محلول استاندارد سریال با 1{4}} 0 میکرولیتر نیتریت سدیم (0.375 درصد وزنی بر حجم) مخلوط شد. پس از 5 دقیقه، 25 میکرولیتر کلرید آلومینیوم (3 درصد وزنی بر حجم) به مخلوط اضافه شد و به مدت 6 دقیقه در دمای اتاق انکوبه شد. سپس 100 میکرولیتر هیدروکسید سدیم (2 درصد وزنی بر حجم) به مخلوط اضافه و مخلوط شد. بلافاصله جذب در طول موج 510 نانومتر اندازه‌گیری شد. از آب مقطر و اتانول به عنوان بلانک استفاده شد. منحنی استاندارد کورستین (محلول در اتانول) برای تعیین محتوای فنلی کل استفاده شد و به صورت ug معادل کوئرستین (QE) در هر گرم ماده خشک (ug QE/g do) بیان شد. 3.7. تعیین محتوای کربوهیدرات

محتوای قندهای آزاد با توجه به روش توصیف شده توسط [94]، با تغییرات جزئی اندازه گیری شد. 50 میکرولیتر محلول فنل (4 درصد) و 250 میکرولیتر اسید سولفوریک (96 درصد) به 100 میکرولیتر نمونه یا محلول استاندارد اضافه شد. پس از 10 دقیقه انکوباسیون در دمای اتاق، میزان جذب مخلوط در 490 نانومتر خوانده شد. منحنی استاندارد گلوکز برای تعیین محتوای کربوهیدرات کل استفاده شد و به صورت میلی گرم گلوکز معادل (GluE) در هر گرم ماده خشک (mg GluE/g dw) بیان شد.

3.8. خواص آنتی اکسیدانی عصاره جلبک دریایی

3.8.1.2، 2 دی فنیل-1-پیکریل هیدرازیل (DPPH) روش مهار رادیکال آزاد

فعالیت آنتی اکسیدانی (DPPH) عصاره جلبک دریایی به دنبال روش توصیف شده قبلی 【94】 با برخی تغییرات تعیین شد. به طور خلاصه، 200 میکرولیتر از محلول 10.825×10-5M DPPH به 100 میکرولوف نمونه (1∶1 در متانول) در یک صفحه 96-چاهی اضافه شد. همان حجم DPPH با استاندارد 50 میکرولیتر به اضافه 50 میکرولیتر متانول مخلوط شد. سپس نمونه ها و استاندارد در یک مکان تاریک در دمای اتاق به مدت 30 دقیقه انکوبه شدند. جذب در طول موج 517 نانومتر اندازه‌گیری شد. آب مقطر به عنوان بلانک استفاده شد. توانایی حذف رادیکال DPPH با استفاده از معادله زیر محاسبه شد:

که در آن یک کنترل جذب کنترل است (محلول DPPH بدون نمونه)، نمونه A جذب نمونه آزمایش (محلول DPPH به اضافه نمونه آزمایشی)، نمونه خالی نمونه A تنها جذب نمونه است (نمونه بدون محلول DPPH ) و آمتانول بلانک فقط جذب متانول است. آنتی اکسیدان های تجاری (اسید اسکوربیک، اسید گالیک و توکوفرول) به عنوان کنترل مثبت استفاده شد.

3.8.2. سنجش قدرت آنتی اکسیدانی کاهش دهنده یون آهن (FRAP).

فعالیت FRAP بر اساس روش Benzie and Strain [95] اندازه گیری شد. به طور خلاصه، بافر استات (300 میلی‌مولار، pH3.6)، 2،4، 6-تری پیریدیل-s-تریازین (TPTZ) 10 میلی‌مولار در 40 میلی‌مولار هیدروکلراید، و FeCl3·6H2O (20 میلی‌مولار) در نسبت مخلوط شدند. از 10:1:1 برای به دست آوردن معرف FRAP در حال کار. مخلوط واکنش در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه انکوبه شد. یک نمونه A50μL از هر عصاره با 150μL محلول FRAP کار به مدت 8 دقیقه در دمای اتاق مخلوط شد. جذب محصول رنگی، Ferrous-TPTZ در طول موج 593 نانومتر اندازه‌گیری شد. مقادیر FRAP عصاره جلبک دریایی به عنوان میکرومولار معادل Trolox (TE) در هر گرم ماده خشک بیان شد.

3.8.3.2، 2، آزینو بیس (3-اتیل بنزوتیازولین-6- اسید سولفونیک) (ABTS)

تجزیه و تحلیل با استفاده از پروتکل رنگ زدایی ABTS [76] با برخی تغییرات انجام شد. یک کاتیون رادیکال ABTS (ABTS plus) با واکنش ABTS (66 میلی‌گرم) با 10 میلی‌لیتر محلول پرسولفات پتاسیم (2.45 میلی‌مولار) تولید شد. مخلوط به مدت 12-16 در تاریکی در دمای اتاق باقی ماند. ساعت قبل از استفاده محلول ABTS پلاس با آب تا جذب 0.700 در 734 نانومتر رقیق شد. مخلوط واکنش (200 ul) به یک میکروپلیت منتقل شد، 50 میکرولیتر نمونه به آن اضافه شد و سپس 150 میکرو لیتر از محلول معرف اضافه شد. صفحه به مدت 10 ثانیه با سرعت متوسط ​​تکان داده شد و جذب پس از 5 دقیقه انکوباسیون در دمای اتاق در 734 نانومتر اندازه گیری شد. یک منحنی استاندارد با رسم مهار A734nm استانداردهای Trolox به عنوان تابعی از غلظت آنها تهیه شد. مقدار ظرفیت آنتی اکسیدانی معادل Trolox (TEAC) نمونه ها با استفاده از معادله به دست آمده از رگرسیون خطی منحنی استاندارد جایگزین مقادیر A734nm برای هر نمونه محاسبه شد:

فعالیت آنتی اکسیدانی بر حسب غلظت TEAC، umol/g وزن خشک جلبک بیان شد.

3.9. فعالیت های ضد آنزیمی عصاره جلبک دریایی 3.9.1. سنجش مهار کلاژناز

یک کیت سنجش رنگ سنجی فعالیت کلاژناز (MAK293)، خریداری شده از Sigma-Aldrich، برای تعیین مهار کلاژناز عصاره جلبک دریایی استفاده شد. این کیت فعالیت کلاژناز را با استفاده از یک پپتید مصنوعی (FALGPA) که ساختار کلاژن را تقلید می کند، اندازه گیری کرد. این روش طبق دستورالعمل کیت انجام شد.

3.9.2. سنجش مهار الاستاز

مهار الاستاز عصاره جلبک دریایی در محلول بافر TRIS با روش اصلاح شده همانطور که قبلاً توضیح داده شد 【96】 بررسی شد. به طور خلاصه، 100 میکرولیتر از محلول TRIS بافر 0.1 مولار (pH8.0)، 25 میکرولیتر الاستاز (1 U/mL در TRISbuffer) و عصاره نمونه 25 میکرولیتر مخلوط و به مدت 15 دقیقه در 30 انکوبه شدند. C قبل از افزودن بستر برای شروع واکنش. پس از زمان انکوباسیون، 50 uL محلول 2 میلی مولار AAAPVN اضافه شد. سپس، جذب در 420 نانومتر به مدت 20 دقیقه با استفاده از میکروپلیت ریدر در دمای ثابت 30 درجه سانتیگراد بررسی شد. در نهایت، مهار الاستاز بر حسب درصد با استفاده از معادله محاسبه شد:

که در آن کنترل Abs جذب سنجش با استفاده از بافر به جای بازدارنده (نمونه) است و Abssample جذب عصاره نمونه است. کوئرستین به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. بافر تریس به عنوان خالی استفاده شد.

3.9.3. سنجش مهار تیروزیناز

سنجش مهاری تیروزیناز طبق روشی که قبلاً با 【66】 با استفاده از L-DOPA به عنوان سوبسترا شرح داده شد، انجام شد. 20 میکرولیتر از نمونه، 10 میکرولیتر محلول قارچ تیروزیناز (50 واحد بر میلی لیتر در بافر فسفات) و 80 میکرولیتر بافر فسفات (pH =6.8) در میکروپلیت مخلوط شده و در دمای 37 درجه از قبل انکوبه شدند. به مدت 5 دقیقه سپس 90 میکرولیتر L-DOPA (2 میلی گرم بر میلی لیتر) اضافه شد. تشکیل دوپاکروم بلافاصله به مدت 20 دقیقه در 475 نانومتر در دستگاه میکروپلیت خوان تحت دمای ثابت 37 درجه کنترل شد. درصد مهار آنزیم تیروزیناز با استفاده از معادله محاسبه شد:

که در آن کنترل Abs جذب سنجش با استفاده از بافر به جای بازدارنده (نمونه) و نمونه Abs جذب عصاره نمونه است. کوئرستین به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. بافر فسفات به عنوان بلانک استفاده شد.

3.9.4. سنجش مهار هیالورونیداز

فعالیت مهاری هیالورونیداز همانطور که قبلا توسط [66] با تغییرات اندکی توصیف شد اندازه گیری شد. حجم 100 ulof نوع-1-بیضه Sbovine هیالورونیداز (2100 U/mL) حل شده در 0.1 M بافر استات (pH 3.5) با 100 میکرولیتر عصاره مخلوط شد و در دمای 37 درجه به مدت 20 دقیقه انکوبه شد. حجم 200 میکرولیتر از 6 میلی مولار کلرید کلسیم به مخلوط واکنش اضافه شد و سپس مخلوط به مدت 20 دقیقه در دمای 37 درجه انکوبه شد. این Ca2 + هیالورونیداز فعال شده با 250 میکرولیتر هیالورونات سدیم (1.2 میلی گرم در میلی لیتر) محلول در بافر استات 0.1 مولار (PH 3.5) تیمار شد و سپس در حمام آب در دمای 37 درجه به مدت 40 دقیقه انکوبه شد. 50 میکرولیتر سدیم 09. و 100 میکرولیتر سدیم بورات 0.2 مولار به مخلوط واکنش اضافه شد و سپس در حمام آب جوش به مدت 5 دقیقه انکوبه شد. پس از سرد شدن تا دمای اتاق، 250 میکرولیتر محلول p-dimethylaminobenzaldehvde (DAMB) به مخلوط واکنش اضافه شد. محلول DAMB با حل کردن 0.25 گرم DAMB در 21.88 میلی لیتر اسید استیک 100 درصد و 3.12 میلی لیتر اسید هیدروکلریک 10 نیوتن تهیه شد. گروه کنترل با 100 میکرولیتر 5 درصد آب به جای عصاره تیمار شدند. جذب در طول موج 585 نانومتر پس از 45 دقیقه اندازه گیری شد. درصد مهار آنزیم با استفاده از رابطه زیر محاسبه شد:

که در آن کنترل Abs جذب سنجش با استفاده از بافر به جای بازدارنده (نمونه) و نمونه Abs جذب عصاره نمونه است. اسید تانیک به عنوان استاندارد مرجع استفاده می شود.

3.10. تحلیل آماری

میانگین تجزیه و تحلیل سه تکراری هر عصاره محاسبه شد و برای یافتن مقادیر میانگین و انحراف استاندارد برای هر گروه (n=3) استفاده شد. مدل‌های خطی عمومی (GLM) برای عوامل ثابت برای ارزیابی اثرات اصلی و تعامل دو طرفه عوامل تجربی (گونه‌ها و روش‌های استخراج) بر روی متغیرهای اندازه‌گیری شده استفاده شد. علاوه بر این، ANOVA و آزمون Tukey-Kramer برای شناسایی معنی دار (ص<0.05)differences between="" the="" groups.="" pearson="" correlation="" was="" used="" to="" evaluate="" the="" linear="" relationship="" between="" the="" variables.="" principal="" component="" analysis(pca)was="" used="" to="" detect="" structure="" in="" the="" relationship="" between="" measured="" variables="" and="" experimental="" factors.="" the="" pca="" reduces="" voluminous="" data="" to="" a="" small="" set="" of="" linear="" combinations="" of="" related="" variables="" (i.e.,="" factors)="" based="" on="" patterns="" of="" correlation="" among="" the="" original="" variables.="" the="" resulting="" linear="" attribute="" combinations="" can="" be="" used="" for="" profiling="" specific="" product="" characteristics="" based="" on="" the="" variables="" studied.="" all="" statistical="" analyses="" were="" performed="" using="" ncss="" 2020="" statistical="" software="" (2020)="" (ncss,="" llc.,="" kaysville,="" ut,="">

4. نتیجه گیری

نتایج این اولین آزمایش غربالگری پتانسیل سه گونه جلبک دریایی ایسلندی را با ارائه اثرات مفید موثر از طریق چندین مسیر نشان داد. رویکرد سبز توسعه یافته با استفاده از میدان‌های الکتریکی پالسی آبی نتایج مشابهی را با استخراج سنتی آب گرم نشان داد که مزایای متعددی مانند ماهیت غیر حرارتی و زمان استخراج کوتاه‌تر (10 دقیقه در مقابل 45 دقیقه) را نشان می‌دهد. در بین سه گونه جلبک، جلبک ماکرو قهوه‌ای A.esculenta بالاترین محتوای TPC و TFC را نشان داد و همچنین بیشترین ظرفیت آنتی‌اکسیدانی را از خود نشان داد. تیروزیناز و هیالورونیداز امیدوارکننده‌ترین گونه جلبک دریایی با فعالیت‌های ضد آنزیمی عالی برای استفاده در سفید کردن پوست، ضد پیری و سلامت پوست هستند. جالب توجه است، عصاره A. esculenta تولید شده با روش PEF مهار کلاژناز 91 درصد را نشان داد، که بیشتر از فعالیت بازداری نشان داده شده توسط استخراج سنتی آب گرم و حتی بیشتر از بازدارنده ارائه شده توسط کیت تجاری است. در نتیجه، مطالعه اولیه ما نشان می‌دهد که عصاره‌های مبتنی بر جلبک دریایی ایسلندی، به‌ویژه عصاره‌های ماکرو جلبک قهوه‌ای A.esculenta، تولید شده توسط استخراج با میدان‌های الکتریکی پالسی آبی، ترکیبات کاربردی بالقوه‌ای هستند که می‌توانند به عنوان ترکیبات فعال برای فرمولاسیون‌های آرایشی و بهداشتی استفاده شوند. در آینده ی نزدیک.

این مقاله از Mar. Drugs 2021, 19, 662 استخراج شده است. https://doi.org/10.3390/md19120662 https://www.mdpi.com/journal/marinedrugs