FGIN{0}} یک گیرنده مهارکننده اتصال دیازپام میتوکندریایی مصنوعی (MDR) است.آگونیستی که فعالیت ضد آپوپتوتیک، ضد اضطراب و استروئیدوژنیک را نشان داده است.در مطالعات مختلف در اینجا ما گزارش می دهیم، برایاولینزمان، اثر ضد ملانوژنازFGIN-1-27درونکشتگاهیوin vivo. FGIN-1-27 بطور قابل توجهیبازال و -هورمون محرک ملانوسیت ( -MSH)-، 1-اولئویل-2-استیل-sn-گلیسرول (OAG)-و ملانوژنز ناشی از اندوتلین-1 (ET-1) بدون سمیت سلولی.سنجش فعالیت تیروزیناز قارچ نشان داد که FGIN{0}} مستقیماً مهار نمی‌کند.فعالیت تیروزیناز، نشان می دهد که FGIN{0}} یک مهارکننده مستقیم تیروزیناز نیست. اگرچه نمی تواند فعالیت کاتالیزوری را تعدیل کندتیروزیناز قارچدرونکشتگاهی، FGIN-1-27 سطوح بیان را کاهش دادپروتئین های کلیدی که در ملانوژنز عمل می کنند. FGIN{0}} این توابع را بازی کردبا سرکوب PKA/CREB، PKC- و مسیرهای MAPK. پس از غیرفعال شدن، آن رابیان MITF، تیروزیناز، TRP-1 و TRP-2 را کاهش داد و مانعفعالیت تیروزیناز،سرانجاممهار ملانوژنز در حینin vivoآزمایش،FGIN{0}} رنگدانه بدن گورخرماهی را مهار کردو کاهش UVB ناشی ازهیپرپیگمانتاسیون در پوست خوکچه هندی، اما نه کاهش تعدادی از ملانوسیت ها.مایافته هانشان داد که FGIN{0}} هیچ سمیت سلولی نشان نداد و مهار شدملانوژنز در هر دودرونکشتگاهیوin vivoمدل ها. ممکن است کاملاً مفید باشدعامل سفید کننده ایمن پوست

طبق مطالعات مربوطه،سیستانچگیاهی رایج است که به عنوان "علف معجزه آسا طولانی کننده عمر" شناخته می شود. جزء اصلی آن سیستانوزید است که اثرات مختلفی از جملهآنتی اکسیدان, ضد التهابو ارتقاء عملکرد سیستم ایمنی بدن مکانیسم بین سیستانچ وسفید شدن پوستدر اثر آنتی اکسیدانی گلیکوزیدهای سیستانش نهفته است.ملانیندر پوست انسان از اکسیداسیون تیروزین که توسط آن کاتالیز می شود تولید می شودتیروزینازو واکنش اکسیداسیون نیاز به مشارکت اکسیژن دارد، بنابراین رادیکال های آزاد اکسیژن در بدن به عامل مهمی در تولید ملانین تبدیل می شوند. سیستانچ حاوی سیستانوزید است که یک آنتی اکسیدان است و می تواند تولید رادیکال های آزاد را در بدن کاهش دهد.مهار تولید ملانین.

روی Cistanche Tubulosa کلیک کنید

برای اطلاعات بیشتر: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

معرفی

ملانوژنز مهمترین عملکرد ملانوسیت ها در پوست است. چندین عامل حیاتی مرتبط با ملانوژنز روشن شده است (راپوسو و مارکس، 2007؛ نوگوچی و همکاران، 2014). آنزیم کلیدی که ملانوژنز را تنظیم می کند تیروزیناز است و با پروتئین 1 مربوط به تیروزیناز (TRP1) و پروتئین مربوط به تیروزیناز 2 (TRP2) برای تقویت سنتز ملانین عمل می کند (Zhu et al., 2015). عامل مهم دیگری که در رنگدانه نقش دارد، فاکتور رونویسی مرتبط با میکروفتالمیا (MITF) است که نه تنها تکثیر و بقای ملانوسیت ها را تنظیم می کند، بلکه بیان تیروزیناز، TRP1 و TRP2 را نیز تنظیم می کند (کاوازاکی و همکاران، 2008؛ لوی و فیشر، 2). ). محرک های محیطی، مانند تابش اشعه ماوراء بنفش (UV)، نقش مهمی در ملانوژنز دارند (عبدالناصر و همکاران، 2003). در مواجهه با اشعه ماوراء بنفش، کراتینوسیت ها و ملانوسیت های فعال یک هورمون محرک ملانوسیت (-MSH)، دی اسیل گلیسرول (DAG) و اندوتلین{19}} (ET{20}}) تولید می کنند (D'Mello et al., 2016؛ Bae Harboe and Park، 2012). هنگامی که هورمون محرک ملانوسیت (-MSH) به گیرنده ملانوکورتین (MC1R) در ملانوسیت ها متصل می شود، می تواند سطوح داخل سلولی آدنوزین مونوفسفات حلقوی (cAMP) را افزایش داده و پروتئین کیناز A (PKA)/ (CREB) را فعال کند. ) مسیر، در نهایت باعث ترویج ملانوژنز می شود (Corre et al., 2004; Rzepka et al., 2016). دی اسیل گلیسرول (DAG) برای فعال سازی پروتئین کیناز C- (PKC-) در ملانوسیت ها ضروری است، که فعالیت تیروزیناز را افزایش می دهد و رنگدانه را القا می کند (کیم و همکاران، 2006؛ کاواگوچی و همکاران، 2012؛ یوان و جین، 2018). ). 1-Oleoyl{36}} استیل-sn-گلیسرول (OAG) یک آنالوگ DAG مصنوعی و قابل نفوذ در غشاء است که به طور گسترده به عنوان یک فعال کننده دارویی PKC- استفاده شده است (Rainbow et al., 2011). اندوتلین{42}} (ET{43}}) ملانوژنز را در ملانوسیت ها از طریق فعال شدن مسیر پروتئین کیناز فعال شده با میتوژن (MAPK) القا می کند (Park et al., 2015; Regazzetti et al., 2015).

ملانین نقش مهمی در محافظت از پوست در برابر اثرات مضر اشعه ماوراء بنفش مانند سرطان پوست و پیری دارد (Slominski et al., 2004). با این وجود، تولید بیش از حد و تجمع غیرطبیعی ملانین منجر به مشکلات زیبایی پوست، مانند ملاسما، کک و مک و لکه های تیره می شود (Jadotte and Schwartz, 2010). چندین ترکیب سفیدکننده فعال، از جمله اسید کوجیک و آربوتین، قبلاً به عنوان افزودنی های آرایشی تأیید شده اند (کیم و همکاران، 2008). اما گزارش شده است که آربوتین دارای اثرات سیتوتوکسیک است و اسید کوجیک می تواند باعث ایجاد سرطان شود (Singh et al., 2016). بنابراین، کشف عوامل موثرتر و ایمن‌تر سفیدکننده پوست بسیار مهم است.

گیرنده مهارکننده اتصال دیازپام میتوکندری (MDR) نقش مرکزی را در تنظیم سنتز لیپید و استروئید ایفا می کند و به طور گسترده در بافت های محیطی از جمله پوست توزیع می شود (Alho et al., 1993). در مطالعات قبلی ما، دیازپام، یک آگونیست MDR، رنگدانه را از طریق مسیر PKA/CREB تنظیم کرد (Lv et al., 2019). علاوه بر این، یافته‌های اخیر نشان می‌دهد که فعال‌سازی MDR کمی تعداد ملانوسیت‌های جدید را در گورخرماهی افزایش می‌دهد (Allen et al., 2020). در مقایسه با دیازپام، FGIN{3}} (N, N-Dihexyl-2-(4-فلوروفنیل) ایندول-3- استامید) میل و ویژگی نسبتاً بالاتری برای MDR (Freeman) نشان می‌دهد. و یانگ، 2000). FGIN{9}}-27 فعالیت پیش آپوپتوز و استروئیدزایی را نشان داده است (لاکاپیر و پاپادوپولوس، 2003). اخیراً گزارش شده است که FGIN{13}} اثرات ضد اضطراب و ضد هراس را در داخل بدن ایجاد می‌کند (Lima-Maximino et al., 2018). با این حال، اثر FGIN{18}} بر روی رنگدانه در شرایط in vitro و in vivo گزارش نشده است.

مواد و روش ها

مواد

FGIN-1-27(N، N-Dihexyl-2-(4-فلوروفنیل)ایندول-3-استامید)، OAG (1-Oleoyl-2-acetyl-sn -گلیسرول)، و آنتی بادی‌ها علیه PKC- (1:200)، p-PKA cat (فسفو T197)(1:200)، گربه PKA (1:500)، p-CREB (1:200)، CREB (1:200)، p-ERK(1:200)، ERK (1:200)، p-p38 (1:200)، p38 (1:200)، p-JNK (1:200)،و JNK (1:200) از بیوتکنولوژی سانتا کروز به دست آمد(CA، ایالات متحده آمریکا). تیروزیناز قارچ، -MSH، ET-1 (اندوتلین-1) و PTU (N-Phenylthiourea) بدست آمداز علاءالدین (شانگهای، چین). آنتی بادی های علیهتیروزیناز (1:1،000)، TRP-1(1:1،000)، TRP-2 (1:1،000)، MITF(1:2000)، و -اکتین (1:3،{3}}) از Abcam به دست آمد(کمبریج، انگلستان). محلول رنگ آمیزی ملانین ماسون-فونتانااز فناوری بیولوژیکی SenBeiJia (نانجینگ،چین). کیت های RT-qPCR از تاکارا بیومدیکال خریداری شدفناوری (پکن، چین). بافر لیز سلولی و پروتئین BCAکیت سنجش از Beyotime Biotechnology (شانگهای،چین).

کشت سلولی

سنجش زنده ماندن سلولی

زنده ماندن سلول‌های SK-MEL{1}} و HEM از طریق روش MTT اندازه‌گیری شد (Zhou و همکاران، 2{9}}14). سلول‌های SK-MEL{4}} و HEM به ترتیب در صفحات چاهک با تراکم 2×104 سلول در هر چاهک قرار گرفتند. FGIN{8}} (0، 1، 2، 4، 8، 16 میکرومولار) به مدت 48 ساعت روی سلول‌های SK-MEL{16}} و HEM اعمال شد. محلول MTT (20 میکرولیتر) به مدت 4 ساعت دیگر به هر چاهک 96-چاهی اضافه شد. پس از برداشتن محلول، DMSO (200 میکرولیتر) به هر چاهک اضافه شد و جذب در طول موج 570 نانومتر با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتر میکروپلیتی (BioTek Instruments) بررسی شد.

سنجش ملانین

سلول‌های SK-MEL-2 و HEM به ترتیب در 6-صفحه‌های چاهک با غلظت 5×105 سلول در هر چاهک قرار گرفتند. پس از 24 ساعت انکوباسیون در دمای 37 درجه، FGIN{7}} (0، 1، 2، 4 میکرومولار) روی سلول‌های SK-MEL-2 و HEM اعمال شد. سلول‌ها به مدت 48 ساعت دیگر انکوبه شدند، با PBS شسته شدند، سپس با لیز بافر لیز سلولی به مدت 20 دقیقه در دمای 4 درجه سانتی‌گراد، و لیزات‌ها با سرعت 13، {18}} دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه در دمای 4 درجه سانتی‌گراد سانتریفیوژ شدند. ملانین کل در گلوله سلولی در 100 میکرولیتر محلول NaOH (1 mol/L، حاوی 10 درصد DMSO) در دمای 80 درجه سانتیگراد به مدت 1 ساعت حل شد (Lv et al., 2015). جذب نوری با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتر میکروپلیتی (BioTek Instruments) در طول موج 405 نانومتر اندازه گیری شد.

سنجش فعالیت تیروزیناز

فعالیت تیروزیناز سلولی همانطور که قبلاً توضیح داده شد انجام شد (Lv و همکاران، 2020). سلول های SK-MEL{2}} با غلظت های مختلف FGIN{3}} (0، 1، 2، 4 میکرومولار) یا OAG (200 میکرومولار) به مدت 12 ساعت یا 48 ساعت انکوبه شدند و سپس لیز شدند. با بافر لیز سلولی لیزهای سلولی با سرعت 13، 000 دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه در دمای 4 درجه سانتیگراد سانتریفیوژ شدند تا مایع رویی برای سنجش فعالیت تیروزیناز به دست آید. غلظت پروتئین توسط کیت BCA با آلبومین سرم گاوی (BSA) به عنوان استاندارد تعیین شد. 100 میکرولیتر PBS (0.1 M، pH 6.5) حاوی 30 میکروگرم پروتئین مخلوط با 100 میکرولیتر L-DOPA (0.1 درصد) و سپس در دمای 37 درجه انکوبه شد. C به مدت 1 ساعت جذب نوری با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتر میکروپلیتی (BioTek Instruments) در طول موج 475 نانومتر اندازه گیری شد.

اثر مستقیم FGIN{{0}} بر فعالیت تیروزیناز مطابق با روش قبلی انجام شد (تومیتا و همکاران، 2010؛ Lv و همکاران، 2020). 100 میکرولیتر PBS (0.1 M، pH 6.5) حاوی غلظت‌های مختلف FGIN{8}} با تیروزیناز قارچ (10 واحد) و 50 میکرولیتر L-تیروزین (0.05 درصد) مخلوط شده و سپس در دمای 37 درجه به مدت 10 دقیقه انکوبه شد. جذب نوری با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتر میکروپلیتی (BioTek Instruments) در طول موج 475 نانومتر اندازه گیری شد.

رنگ آمیزی نقره ماسون-فونتانا

برای تشخیص رنگدانه ملانین، سلول‌های SK-MEL-2 روی یک 6-صفحه چاهی حاوی 13- میلی‌متر ورقه‌های شیشه‌ای در 2.0 میلی‌لیتر محیط کشت (10) قرار گرفتند. درصد سرم جنین گاوی) در هر چاهک. در 48 ساعت پس از تجویز، سلول ها با فرمالین (10 درصد بافر خنثی) به مدت 20 دقیقه تثبیت شدند.

سلول ها و اسلایدهای پوست طبق روش رنگ آمیزی نقره آمونیاکی Masson-Fontana رنگ آمیزی شدند (لی و همکاران، 2013). سلول ها و لام های پوستی با محلول رنگ آمیزی ملانین Masson-Fontana به مدت 16 ساعت در دمای اتاق انکوبه شدند. سپس سلول ها و لام های پوستی 3 بار در آب مقطر شسته و به مدت 7 دقیقه با محلول هایپو انکوبه شدند. پس از شستشوی کامل در آب مقطر، سلول‌ها و لام‌های پوستی به مدت 7 دقیقه با یک لکه قرمز خنثی رنگ آمیزی شدند. سلول ها و اسلایدهای پوست با استفاده از میکروسکوپ نیکون Ti2-U مشاهده شدند.

ایمونوهیستوشیمی برای S-100

S{0}} ایمونوهیستوشیمی همانطور که قبلاً توضیح داده شد انجام شد (لی و همکاران، 2013). اسلایدها با 5 درصد BSA به مدت 1 ساعت در دمای اتاق مسدود شدند و سپس در آنتی بادی اولیه ضد S{5} (Dako، Carpentaria، CA) رقیق شده در محلول مسدود کننده به مدت یک شب در دمای 4 درجه سانتی گراد انکوبه شدند. روز بعد، لام ها با TBST 4 بار شسته شدند و با یک آنتی بادی ثانویه (Dako، Carpentaria، CA) انکوبه شدند. سپس، اسلایدها با آمینو اتیل کاربازول تیمار شدند تا برش‌ها ایجاد شوند. اسلایدهای پوستی با استفاده از میکروسکوپ نیکون Ti{8}}U مشاهده شد.

رونویسی معکوس - PCR کمی (RT-qPCR)

RT-qPCR همانطور که قبلاً توضیح داده شد انجام شد (Lv et al., 2020). به طور خلاصه، RNA کل سلول SK-MEL{3}} با استفاده از معرف TRIZol استخراج و به روش اسپکتروفتومتری اندازه‌گیری شد. cDNA تک رشته ای با استفاده از ترانس کریپتاز معکوس SuperScript II مطابق دستورالعمل سازنده سنتز شد. تجزیه و تحلیل کمی PCR SYBR-Green با سیستم تشخیص توالی ABI PRISM (Applied Biosystems) و مجموعه پرایمرهای از پیش تأیید شده انجام شد. تمام نمونه ها در سه نسخه اجرا شد. چرخه های آستانه در بخش لگاریتمی منحنی تقویت قرار گرفتند و نتایج به GAPDH نرمال شدند. تفاوت برابری بین دو نمونه با روش دلتا-دلتا Cq تعیین شد. توالی پرایمرهای ژن Mitf عبارتند از 5'-AGAGCAGGGCAGAGAGAGTGAGTG-3'، 5'-AACTTGATT CCAGGCTGATGATGATGTC{13}}».

تجزیه و تحلیل وسترن بلات

سوسپانسیون پروتئین به روش ذکر شده در بالا به دست آمد. پروتئین‌های داخل سلولی استخراج‌شده (30 میکروگرم) توسط SDS-PAGE (10 درصد) جدا و سپس به غشای پلی‌وینیلیدین L فلوراید (PVDF) با پیروی از پروتکل استاندارد انتقال مرطوب منتقل شدند. غشاء با استفاده از 2.5 درصد BSA در دمای اتاق به مدت 1 ساعت مسدود شد، یک شبه در معرض آنتی بادی های اولیه مناسب در دمای 4 درجه سانتیگراد قرار گرفت و 4 بار با TBST شسته شد. غشاها به مدت 1 ساعت در معرض IgG ضد خرگوش بز با برچسب HRP (1:1،{12}}) یا IgG ضد موش بز (1:1،000) در دمای اتاق قرار گرفتند و با آن شسته شدند. TBST 4 بار (لیائو و همکاران، 2017). سپس غشاها با استفاده از یک سیستم تصویربرداری نورتابی شیمیایی چند منظوره (Tanon 4600) مشاهده شدند. کنترل های داخلی از همان بلات با آنتی اکتین بررسی شدند.

ارزیابی و تعیین محتوای ملانین بر اساس فنوتیپ در گورخرماهی

گورخرماهی های بالغ در یک مخزن با شرایط زیر نگهداری می شدند: 28.5 درجه، با چرخه نور/تاریکی 14/10 ساعت. جنین ها از تخم ریزی طبیعی که در صبح با روشن کردن نور القا می شد به دست آمد. جمع آوری جنین ها در 30 دقیقه تکمیل شد. ارزیابی مبتنی بر فنوتیپ همانطور که قبلا توضیح داده شد انجام شد (چوی و همکاران، 2007). به طور خلاصه، جنین های هماهنگ شده توسط پیپت جمع آوری و آرایه شدند (3-4 جنین در هر چاه در 96-صفحه چاه حاوی 200 میکرولیتر محیط جنین). FGIN{10}} و PTU در 0.1 درصد DMSO حل شدند، سپس از 35 تا 60 ساعت (در معرض قرار گرفتن 25 ساعت) به محیط جنین اضافه شدند. اثرات روی ملانوژنز گورخرماهی تحت استریومیکروسکوپ مشاهده شد.

مدل خوکچه هندی هایپرپیگمانتاسیون ناشی از UVB

هشت خوکچه هندی قهوه ای (6 هفته، تقریباً 3{6}} گرم) از موسسه علوم آزمایشگاهی حیوانات (پکن، چین) به دست آمد. خوکچه های هندی به صورت جداگانه در یک اتاق با دمای کنترل شده تحت شرایط آزمایشگاهی استاندارد، با چرخه 12 ساعت نور/12 ساعت تاریکی (نور در 9:{8}} صبح تا 9:00 بعد از ظهر) با دمای ثابت (3±23 درجه) و رطوبت (50±10 درصد). نواحی جداگانه (دایره قطری 1 سانتی متر) پشت هر حیوان در معرض 500 mJ/cm2 UVB (Sigma SH{16}}، شانگهای، چین) یک بار در روز به مدت 1 هفته قرار گرفت (Fujimoto et al., 1988; لی و همکاران، 2013). سپس وسیله نقلیه (PEG400/EtOH 7:3) و FGIN{23}} (1 درصد) دو بار در روز به مدت 3 هفته به نواحی پرپیگمانته (محلول 20 لیتر در هر دایره) داده شد. درجه رنگدانه توسط اسپکتروفتومتر (YS3010، 3nh، شنژن، چین) اندازه گیری شد. مقدار ΔL با توجه به مقدار L اندازه گیری شده توسط اسپکتروفتومتر به شرح زیر تعیین شد: ΔL L (در هر روز اندازه گیری شده) -L (در روز 0). تمام مراحل حیوانی برای این مطالعه بر اساس "راهنمای مراقبت و استفاده از حیوانات آزمایشگاهی NIH" و تایید شده توسط کمیته مراقبت و استفاده از حیوانات دانشگاه چانگژو انجام شد.

تحلیل آماری

نتایج

FGIN{0}} مهار -MSH، OAG یا ET-1-سنتز ملانین القا شده در سلول‌های SK-MEL{4}}

قبل از بررسی اثرات FGIN{0}} (شکل 1A) بر روی رنگدانه، یک سنجش زنده ماندن سلولی برای بررسی اثرات FGIN-1-27 بر رشد سلول SK-MEL{4}} انجام شد. همانطور که در شکل 1B نشان داده شده است، FGIN{6}} هیچ تاثیری بر رشد سلول های SK-MEL- 2 در محدوده دوز 1-16 میکرومولار پس از 48 ساعت نداشت. در سنجش محتوای ملانین، FGIN{12}} ملانوژنز پایه را مهار کرد (شکل 1C). -MSH یک بالابر cAMP داخل سلولی است که به طور قابل توجهی ملانوژنز را القا می کند (Rzepka و همکاران، 2016؛ Corre و همکاران، 2004؛ لی و همکاران، 2013). FGIN{18}} همچنین سنتز ملانین ناشی از -MSH را مهار کرد (شکل 1C). به طور مداوم، رنگ آمیزی نقره آمونیاکی Masson-Fontana نشان داد که FGIN{22}} به طور قابل توجهی غلظت ملانین را در سلول های SK-MEL{24}} با یا بدون -MSH کاهش می دهد (شکل 1D). علاوه بر این، OAG یک بالابرنده PKC است و ET{27}} یک فعال کننده مسیر MAPK است، که هر دو می توانند سنتز ملانین را تقویت کنند (کیم و همکاران، 2006؛ پارک و همکاران، 2015؛ رگازتی و همکاران، 2015). همانطور که در شکل های 1E و 1F نشان داده شده است، FGIN{33}} همچنین به طور قابل توجهی ملانوژنز ناشی از OAG یا ET را مهار کرد.

FGIN{0}} بیان تیروزیناز، TRP-1، TRP-2 را سرکوب کرد و فعالیت تیروزیناز سلولی را کاهش داد

ملانوژنز توسط سه آنزیم حیاتی کنترل می شود: تیروزیناز، TRP{0}} و TRP{1}} (Zhu et al., 2015). -MSH و ET{4}} سنتز ملانین را با افزایش بیان سه آنزیم ملانوژنیک مهم ترویج کردند (Regazzetti و همکاران، 2015؛ لی و همکاران، 2013). برای بررسی اینکه آیا اثرات سفیدکننده FGIN{7}} به بیان این پروتئین‌ها مرتبط است، ما تأثیر FGIN{8}} را بر بیان تیروزیناز، TRP{9}} و TRP مطالعه کردیم. }} از طریق تحلیل وسترن بلات. همانطور که در شکل 2A نشان داده شده است، FGIN{13}} بیان تیروزیناز، TRP-1، و TRP{15}} را با یا بدون -MSH سرکوب کرد. FGIN{17}} همچنین به طور مداوم افزایش بیان تیروزیناز، TRP{19}} و TRP{20}} ناشی از ET-1- را معکوس کرد (شکل 2B). برخلاف -MSH و ET{23}}، OAG با افزایش مستقیم فعالیت تیروزیناز سلولی، ملانوژنز را ارتقا داد (D'Mello et al., 2016). همانطور که در شکل 2C و 2D نشان داده شده است، درمان 12 ساعته FGIN{27}} از افزایش فعالیت تیروزیناز سلولی ناشی از OAG جلوگیری کرد و بر بیان تیروزیناز تأثیری نداشت. علاوه بر این، یک سنجش فعالیت تیروزیناز قارچی برای بررسی اثرات مستقیم FGIN{30}} بر فعالیت تیروزیناز انجام شد. همانطور که در شکل 2E نشان داده شده است، FGIN{32}} بر فعالیت آنزیمی تیروزیناز قارچ تاثیری نداشت. این نتایج نشان می‌دهد که FGIN{33}} بیان تیروزیناز، TRP{34}} و TRP{35}} را سرکوب می‌کند و فعالیت تیروزیناز سلولی را کاهش می‌دهد، اما تأثیر مستقیمی بر فعالیت‌های آنزیمی تیروزیناز ندارد.

FGIN{0}} بیان MITF را کاهش داد

MITF فاکتور اصلی رونویسی است که بیان تیروزیناز، TRP{0}} و TRP-2 را القا می‌کند (کاوازاکی و همکاران، 2008؛ لوی و فیشر، 2011). همانطور که در شکل 3A نشان داده شده است، FGIN{5}} رونویسی MITF را مهار کرد. همچنین بیان MITF را بعد از تیمار سلول‌های SK-MEL با -MSH در حضور یا عدم حضور FGIN اندازه‌گیری کردیم. همانطور که در شکل 3B نشان داده شده است، -MSH به طور قابل توجهی بیان MITF را ارتقا داد. جالب توجه است که بیان MITF در حضور FGIN به طور قابل توجهی کاهش یافت. FGIN{13}} همچنین به طور مداوم افزایش بیان MITF ناشی از ET را سرکوب کرد (شکل 3C). این نتایج نشان داد که FGIN{16}} بیان MITF را مهار می‌کند.

FGIN{0}} بیان PKC-، p-PKA Cat، p-CREB، p-p38، و p-ERK را کاهش داد

PKA، PKC و MAPK مسیرهای انتقال حیاتی در ملانوژنز هستند (D'Mello et al., 2016). دومین cAMP پیام رسان می تواند PKA را فعال کند که CREB را فسفریله می کند و در نهایت بیان MITF را ترویج می کند (کور و همکاران، 2004؛ رزپکا و همکاران، 2016). مسیر وابسته به PKC، ملانوژنز را از طریق فعال شدن تیروزیناز تنظیم می کند (کیم و همکاران، 2006؛ کاواگوچی و همکاران، 2012؛ یوان و جین، 2018). MAPK، از جمله p38، پروتئین کیناز تنظیم شده با سیگنال خارج سلولی (ERK) و کیناز N ترمینال c-jun (JNK)، گزارش شده است که رنگدانه را تنظیم می کند (Zhou et al., 2014). برای درک بیشتر مکانیسم‌های مولکولی تنظیم ملانوژنز توسط FGIN{12}}، ما مسیرهای انتقال درگیر در رنگدانه را اندازه‌گیری کردیم. همانطور که در شکل 4 نشان داده شده است، FGIN{14}} به طور قابل توجهی بیان PKC-، p-PKA cat، p-CREB، p-p38، و p-ERK را کاهش داد.

FGIN{0}} ملانوژنز را در ملانوسیت های انسانی مهار کرد

مهار FGIN{0}} در ملانوژنز در ملانوسیت‌های اپیدرم انسانی (HEM) ارزیابی شد. همانطور که در شکل تکمیلی S1 نشان داده شده است، FGIN{2}} هیچ تاثیری بر رشد HEM در محدوده دوز 1-16 میکرومولار پس از 48 ساعت نداشت. همانطور که در شکل 5 الف نشان داده شده است، FGIN{7}} به طور قابل توجهی ملانوژنز را در HEM مهار کرد. تجزیه و تحلیل وسترن بلات نشان داد که FGIN{8}} سطوح بیان تیروزیناز، TRP-1 و TRP{10}} را در HEM کاهش می‌دهد (شکل 5B). همانطور که در شکل تکمیلی S2 نشان داده شده است، درمان 12 ساعته FGIN{13}} از افزایش فعالیت تیروزیناز سلولی ناشی از OAG در HEM جلوگیری کرد. علاوه بر این، بیان MITF را پس از درمان با HEM با -MSH در حضور یا عدم حضور FGIN اندازه‌گیری کردیم. همانطور که در شکل 5C نشان داده شده است، بیان MITF در حضور FGIN به طور قابل توجهی کاهش یافت. علاوه بر این، مانند سلول‌های SK-MEL{21}}، دخالت PKC-، PKA، و MAPK در ضد ملانوژنیک با واسطه FGIN{23}}در HEM نیز تأیید شد (شکل 5D).

برای اطلاعات بیشتر: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501