خلاصه

عصاره اتانولی آبی ساقه های پودری Dendrobium loddigesii سه فنول جدید شامل سه-7-O-ethyl-9-O-(4-hydroxyphenyl)propionyl-diacylglycerol (1)، (R){{ 7}},5,4ʹ-تری هیدروکسی-3,3ʹ, -trimethoxybibenzyl (2) and (S)-5,5',7-trihydroxy-3',4' -dimethoxyfavanone (3)، همراه با یازده آنالوگ شناخته شده. ساختار آنها با تجزیه و تحلیل طیف سنجی گسترده تعیین شد. برای شناسایی آنتی اکسیدان های طبیعی، سفید کننده ها و عوامل ضد پیری، توانایی این فنول ها برای از بین بردن رادیکال 1،2-دی فنیل-2-پیکریل هیدرازیل (DPPH)، توانایی آنها در مهار تولید تیروزیناز، و توانایی آنها برای تحریک تولید کلاژن توسط سنجش فیبروبلاست های پوستی انسان بالغ (HDFa). مشخص شد که ترکیبات 1، 4-8، 13، و 14 فعالیت‌های مهار رادیکال DPPH قابل‌توجهی را نشان می‌دهند، ترکیب 10 فعالیت مهاری تیروزیناز (IC{33}}.904 ug/mL) و ترکیب 9 تولید کلاژن قابل‌توجهی با مقدار EC50 3.182 ug/mL. این نتایج نشان می دهد که ترکیبات فنلی از D. loddigesii ممکن است آنتی اکسیدان های کاندید، سفید کننده پوست، و/یا عوامل ضد پیری باشند.

طبق مطالعات مربوطه،سیستانچرایج استگیاه داروییکه به عنوان "گیاه معجزه آسا که عمر را طولانی می کند" شناخته می شود. جزء اصلی آن استسیستانوزید، که دارای اثرات مختلفی از جملهآنتی اکسیدان, ضد التهاب، وارتقاء عملکرد سیستم ایمنی. مکانیسم بین سیستانچ وسفید شدن پوستدر اثر آنتی اکسیدانی نهفته استگلیکوزیدهای سیستانش. ملانین در پوست انسان از اکسیداسیون تولید می شودتیروزینتوسط تیروزیناز کاتالیز می شود و واکنش اکسیداسیون نیاز به مشارکت اکسیژن دارد، بنابراین رادیکال های آزاد اکسیژن در بدن به عامل مهمی در تولید ملانین تبدیل می شوند. سیستانچ حاوی سیستانوزید است که یک آنتی اکسیدان است و می تواند تولید رادیکال های آزاد را در بدن کاهش دهد.مهار تولید ملانین

بر روی مکمل Cistanche Tubulosa کلیک کنید

برای اطلاعات بیشتر:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

چکیده گرافیکی

1. معرفی

جنس Dendrobium (Orchidaceae) دارای تقریباً 1500 گونه در سطح جهان است که حدود 80 گونه از آن در چین رشد می کنند [1]. ساقه چندین گیاه در این جنس به نام "شی هو" شناخته می شود که هزاران سال است که هم به عنوان طب سنتی چینی و هم به عنوان درمان های عامیانه برای درمان گاستریت آتروفیک مزمن، پیری پوست، تب، بیماری های قلبی عروقی و ... استفاده می شود. یک مقوی برای تقویت تولید مایعات بدن [2]. مطالعات قبلی روی این جنس منجر به جداسازی یک سری از پلی ساکاریدها، ترکیبات فنلی، آلکالوئیدها و sesquiterpenoids شد [1، 3-5]، که برخی از آنها دارای فعالیت های زیستی مختلفی از جمله ضد التهابی [6]، ضد میکروبی [2]، آنتی اکسیدانی هستند. [7]، ضد تومور [8]، تجمع ضد پلاکتی [9]، تعدیل کننده سیستم ایمنی [10] و فعالیت های آنفولانزای A [11].

Dendrobium loddigesii، یک گیاه اپی فیتیک چند ساله، به طور گسترده در منطقه جنوب غربی چین، مانند استان های گوانگشی، گوئیژو و یوننان توزیع شده است [12]. از ساقه آن در طب عامیانه برای درمان ورم معده، تب و سرگیجه استفاده شده است [13]. در ادامه جستجو برای محصولات طبیعی متنوع ساختاری و بیولوژیکی فعال از این جنس [1، 5، 14-17]، یک بررسی عمیق از ترکیبات فعال دارویی از این گونه گیاهی در اینجا انجام شد. در نتیجه، سه ترکیب فنلی جدید (1-3) و یازده ترکیب شناخته شده (شکل 1) از یک عصاره اتانولی 80 درصدی ساقه D. loddigesii جدا شد. جداسازی، توضیح ساختار و ارزیابی بیولوژیکی این ترکیبات در اینجا ارائه شده است.

2 نتایج و بحث

ترکیب 1، که به عنوان یک جامد سفید به دست می آید، فرمول مولکولی C21H26O7 را که توسط یون (-)-HRESIMS در m/z 389.1602 [M-H]- تعیین می شود، به دست می دهد (برای C21H25O7، 389.16 محاسبه می شود. 28}}6) با نه درجه اشباع. طیف 1H NMR 1 حاوی هفت پروتون آروماتیک در δH 6.85 (1H, d, J=1.7Hz), 6.75 (1H, d, J=8.0Hz), 6.68 (1Hz) ، dd، J = 8.0، 1.7 هرتز)، 7.01 (2H، d، J = 8.5 هرتز) و 6.68 (2H، d، J = 8.5 هرتز)، وجود یک حلقه بنزن 1،3،{43}}سه‌جای‌گزین‌شده و یک حلقه بنزن جایگزین‌شده با ۱،4- را نشان می‌دهد. طیف 13C NMR آن 21 رزونانس کربن شامل دو متیل (یک متوکسی)، چهار متیلن آلیفاتیک، نه متین (دو sp3، هفت sp2) و شش کربن چهارتایی (یک کربنیل، پنج الفینی شامل سه مورد اکسیژن) را نشان داد. همبستگی های HMBC (شکل 2) H{51}}/C{52}} (δC 131.6)، C{55}} (δC 111.7)، C-6 (δC 121.4)، C -8 (δC 74.2)، و C-10 (δC 65.3); H{67}}/C-7 (δC 83.8) و C-8 (δC 74.2); H{74}}/C-11 (δC 15.6); 3-OMe (δH 3.81)/C{81}} (δC 149.1)، همراه با همبستگی‌های H{84}}/H{85}}/H2-9 و H{{ 87}}/H{88}} از طیف 1 H-1 H COZY (شکل 2) حضور 7-O-ethylguaiacylglycerol [18] را نشان داد. گزارش شده است که J7,8 برای ایزومر اریترو حدود 5 هرتز و برای سه ایزومر در موارد سرنگ-گلیسرول و مشتقات دی اسیل گلیسرول 7 هرتز بود. بنابراین، ترکیب 1 به عنوان سه ایزومر با J7،8 (6.5 هرتز) در نظر گرفته شد [18]. همبستگی HMBC H-7ʹ (δH 2.79، t، J = 7.5 هرتز)/C-8ʹ (δC 37.1)، C-1ʹ (δC 132.7)، C-2ʹ، 6ʹ (δC 130.2) و C-9ʹ (δC 174.6)، H-8ʹ (δH 2.59، t، J = 7.5 هرتز)/C-7ʹ (δC 31.0)، C-1ʹ، و C-9ʹ، همراه با پیک های متقاطع COZY H-8ʹ/H-7ʹ نشان داده شده است وجود اسید p-هیدروکسی کوماریک [19]. بر اساس شواهدی که در بالا توضیح داده شد، 1 پیشنهاد شد که دارای یک نصفه 7-O-ethylguaiacylglycerol و اسید p-هیدروکسی کوماریک از طریق یک پیوند استری باشد. همبستگی HMBC از H-9 به C-9' نشان داد که پیوند استری بین C-9 و C-9' بود. بنابراین، ساختار 1 مطابق شکل تعیین شد.

(R){{0}}،5،4ʹ-Trihydroxy-3،3ʹ، -trimethoxybibenzyl (2) به عنوان یک جامد سفید به دست آمد. طیف HRESIMS 2 یک پیک یون شبه مولکولی را در m/z 319.1180 [M-H]- (محاسبه برای C17H19O6، 319.1187) با 8 درجه غیراشباع نشان داد. طیف 1H NMR 2 سه گروه متوکسیل را در δH 3.75 (3H، s)، 3.7 0 (3H، s)، و 3.17 (3H، s) نشان داد. یک پروتون متین اکسیژن دار در δH 4.13 (1H, t, J=6.8 Hz, H- ); دو سیگنال متیلن در δH 2.73 (1H, dd, J{37}}.5, 6.9 Hz) and 2.96 (1H, dd, J=13.5, 6.9 Hz); و پنج پروتون آروماتیک، که به‌عنوان یک حلقه معطر 1،3،4،{51}}تترا جایگزین در δH 6.28 (1H, d, J=1.8Hz) و 6.34 (1H, d, J{{{{ 6{81}}}}.8 هرتز)، و یک حلقه معطر 1،3،4-سه جایگزین در δH 6.49 (1H, d, J{=2}.0 هرتز)، 6.62 (1H, d، J=8.0 هرتز) و 6.52 (1H، dd، J = 8.0، 2.0 Hz). طیف 13CNMR و DEPT 2 سه اکسی متیلن، یک متیلن، یک متین اکسیژن دار و 12 کربن معطر (پنج اکسیژن دار) را نشان داد. مقایسه داده‌های NMR آن (جدول 1) با دندروکاندین C [20] شباهت‌های زیادی را نشان داد به جز وجود یک گروه متوکسیل دیگر که در C-3ʹ توسط همبستگی HMBC از 3'-OMe و H-5' به قرار داشت. C-3ʹ (δC 148.4). علاوه بر این، برهمکنش‌های چندگانه HMBC (شکل 2) 3-OMe و H-2/C{87}} (δC 149.5). -OMe/C- (δC 86.9) گروه‌های متوکسیل دیگر را به ترتیب در C-3 و C- پیشنهاد کرد. پیکربندی مطلق در C- بر اساس چرخش نوری منفی ([훼] 26 D -12.46)، شبیه به D [훼] 20 D -20.3، MeOH) به صورت R تعیین شد [15]. بر این اساس، ساختار 2 مطابق شکل تعیین شد.

(S){{{0}},7,5'-Trihydroxy-3',4'-dimethoxyfavanone (3) به صورت پودر آمورف زرد به دست آمد و دارای C17H16O7 مولکولی بود (1{{{69}) } شاخص های کمبود هیدروژن) با توجه به یون (-)-HRESIMS در m/z 331.0819 [M - H]- (محاسبه 331.0823). حداکثر جذب UV در 206 و 294 نانومتر نشان دهنده وجود فلاوانون است [21]. طیف 1H NMR (جدول 1) سه سیگنال را در ناحیه غیر معطر نشان داد که در δH 5.29 (1H, dd, J=12.7, 3.1, H-2), 3.04 (1H, dd، J{34}}.1، 12.7، H{38}}ax) و 2.71 (1H، dd، J=17.1، 3.1، H-3 معادله)، چهار پروتون های آروماتیک δH 5.87 (1H, d, J=2.2, H-6), 5.91 (1H, d, J=2.2, H-8), 6.62 (1H، d، J{=2.0، H-2ʹ) و 6.61 (1H، d، J{=2.0، H-6ʹ)، دو گروه متوکسیل δH 3.83 (3H، s) و 3.77 (3H، s). طیف 13C NMR و DEPT (جدول 1) حاوی رزونانس برای 17 کربن شامل دو متوکسی، یک متیلن، یک متین، یک کربن کربونیل و 12 کربن معطر است. تجزیه و تحلیل جامع داده‌های NMR آن نشان داد که ساختار مسطح آن ارتباط نزدیکی با دی هیدروتریسین [22] دارد، به جز رزونانس‌های OH-4' و OCH3-5' در دی هیدروتریسین در 3. این مورد توسط HMBC متقاطع تأیید شد. قله ها (شکل 2) از H-2ʹ، H-6ʹ، و OCH3-4ʹ تا C-4ʹ (δC 137.7)، از H-6ʹ تا C-5ʹ (δC 151.8). پیکربندی مطلق در C{64}} بر اساس یک مقدار چرخش خاص منفی (46.64، MeOH) در چرخش نوری آن به شکل S فرض شد [23]. بنابراین، ساختار ترکیب 3 به طور واضح همانطور که نشان داده شده است اختصاص داده شد.

یازده ترکیب شناخته شده به عنوان ترپیداشن 4 [24]، مسکالین 5 [25]، 4،5،4'-تری هیدروکسی- 3،3'-dimethoxybibenzyl 6 [26]، 4'،{14}} شناسایی شدند. دی هیدروکسی-3،3'- دی متوکسی بی بنزیل 7 [27]، تریستین 8 [28]، باتاتاس در III 9 [27]، 3،5،3′-هیدروکسی بی بنزیل 10 [29]، آفیلوس C 11 [15]، دنتی فرم A 12 [30]، دی هیدروکنیفریل دی هیدرو-پی کومارات 13 [31]، p-هیدروکسی فنیل ترانس فرولات 14 [32] با تجزیه و تحلیل طیف سنجی و مقایسه داده های طیفی آنها با ادبیات.

ترکیبات فنلی، بخش ضروری رژیم غذایی انسان هستند و به دلیل عملکرد قوی زنجیره‌شکن، به عنوان آنتی‌اکسیدان‌های قوی شناخته می‌شوند و ممکن است مستقیماً در فعالیت آنتی اکسیدانی نقش داشته باشند [33]. روش مهار رادیکال DPPH یکی از رایج ترین و نسبتاً سریع ترین روش های مورد استفاده برای ارزیابی فعالیت آنتی اکسیدانی است. ترکیباتی که می توانند یک اتم هیدروژن را به رادیکال DPPH اهدا کنند و سپس شکل کاهش یافته DPPH را ایجاد کنند، به عنوان عوامل آنتی اکسیدانی بالقوه در نظر گرفته می شوند. همه ترکیبات برای فعالیت‌های مهار رادیکال DPPH مورد ارزیابی قرار گرفتند. نتایج حاضر (جدول 2) نشان داد که اکثر ترکیبات فنلی (1، 4-8، 13، و 14) فعالیت های قابل توجهی با ظرفیت های مهار در محدوده 89.411 تا 94.278 درصد در 100 میکروگرم در میلی لیتر نشان دادند.

از سوی دیگر، تیروزیناز یک آنزیم حاوی مس است و نقش مهمی در کنترل مسیر بیوسنتز ملانین در ملانوسیت ها ایفا می کند [34]. بنابراین، مهارکننده‌های تیروزیناز به اجزای مهم لوازم آرایشی یا محصولات دارویی برای هیپرپیگمانتاسیون و ایجاد عوامل سفیدکننده پوست تبدیل شدند. در مطالعه حاضر تمامی ایزوله ها از نظر فعالیت مهاری تیروزیناز مورد بررسی قرار گرفتند (جدول 2). کوجیک اسید، یک عامل روشن کننده ظاهری پوست، به عنوان یک کنترل مثبت استفاده شد. 3،5،3'-hydroxybibenzyl (10) یک فعالیت مهاری قابل توجهی با مقدار IC50 37.904 میکروگرم در میلی لیتر نشان داد. Aphyllals C (11) مهار متوسطی را نشان داد (IC50، 152.56 ug/mL). تمام ترکیبات باقی مانده در غلظت های تا 200 میکروگرم بر میلی لیتر غیر فعال بودند. در این مطالعه می توان نتیجه گرفت که ترکیبات 10 و 11 می توانند کاندیدای بالقوه ای برای درمان بیماری های پوستی مرتبط با بیوسنتز ملانین باشند.

با توجه به اینکه از این گونه برای پیری پوست استفاده می شود، زیرا کلاژن برای استحکام و خاصیت ارتجاعی پوست بسیار مهم است و تخریب آن منجر به چین و چروک هایی می شود که با پیری همراه است [35]. از این رو، تمام ترکیبات نیز به طور عمدی برای اثرات آنها بر تولید کلاژن در HDFa مورد ارزیابی قرار گرفتند. نتایج (جدول 2) نشان داد که ترکیب 9 به طور قابل توجهی فعالیت تولید کلاژن HDFa را تحریک می کند (EC{3}}.182 میکروگرم در میلی لیتر). ترکیبات 6 و 7 با تولید کلاژن 33.062 درصد و 29.157 درصد در 10 ug/mL فعالیت ضعیف تری نشان دادند. نتایج حاضر نه تنها استفاده قومی دارویی از D. loddigesii را پشتیبانی می کند، بلکه یک الگوی ساختاری قابل اعتماد برای ایجاد بیماری های مرتبط با کمبود کلاژن مانند سوختگی و زخم ارائه می دهد.

3 تجربی

3.1 رویه های آزمایشی عمومی

3.2 مواد گیاهی

ساقه های D. loddigesii در سپتامبر 2014 از شهر ونشان، استان یوننان، جمهوری خلق چین جمع آوری شد و توسط پروفسور هونگ یو (دانشگاه یوننان، کونمینگ، جمهوری خلق چین) شناسایی شد. نمونه کوپن (شماره 20,140,829) در آزمایشگاه کلید دولتی فیتوشیمی و منابع گیاهی در غرب چین، موسسه گیاه شناسی Kunming، آکادمی علوم چین سپرده شده است.

3.3 استخراج و جداسازی

ساقه های خشک و پودر شده (10.2 کیلوگرم) D. loddigesii سه بار با 80 درصد اتانول در دمای اتاق استخراج و تحت فشار کاهش یافته تغلیظ شد. سپس، باقیمانده در H2O تعلیق شد و با EtOAc تقسیم شد تا بخش EtOAc (22{95}} گرم) بدست آید، که تحت کروماتوگرافی ستونی سیلیکاژل شسته شده با گرادیان نفت اتر/استون (15:1 تا {{101}) قرار گرفت. {110}}:1) برای استطاعت 22 کسر (Fr.1–22). Fr.11 (6 گرم) تحت سیلیکاژل CC شسته شده با CHCl3/MeOH (300:1)، سپس ستون MCI (شیب MeOH/H2O، 60:40-95:5) و سیلیکاژل CC (CHCl3/) قرار گرفت. MeOH، 200:1) برای تولید 12 (4 میلی گرم). Fr.13 (850 میلی گرم) روی ستونی از MCI (MeOH/H2O، 60:40 تا 95:5) جدا شد تا پنج بخش (Fr.13.1-Fr.13.5) بدست آورد. Fr.13.4 (150 میلی گرم) ترکیبات 4 (3 میلی گرم) و 5 (5 میلی گرم) را با آماده سازی HPLC (MeOH/H2O، 60:40) به دست آورد. Fr.16 (19 گرم) بر روی ستون سیلیکاژل شسته شده با CHCl3/MeOH (100:1 تا 20:1) کروماتوگرافی شد تا 6 زیربخش (Fr.16.1-Fr.16.6) بدست آید. Fr.16.4 (2.3 گرم) از ستون MCI شسته شده با MeOH/H2O (50:50-100:0) استفاده شد و سپس بر روی ستونی از Sephadex LH{69}} (MeOH/H2O, 90:10) تکه تکه شد. بازده 7 (716 میلی گرم) و 13 (39 میلی گرم). با استفاده از شرایط مشابه Fr.16.4، Fr.16.6 (240 میلی گرم) ترکیب 9 (7 میلی گرم) را به دست آورد. Fr.18 (10 گرم) توسط ژل سیلیکا CC (CHCl3/MeOH، 100:1-20:1) جدا شد، سپس از MCI (شیب MeOH/H2O، 50:50-100:0) و Sephadex LH عبور کرد. 96}} (MeOH/H2O، 90:10) ستون برای تولید 3 (25 میلی گرم) و 11 (4 میلی گرم). Fr.19 (20 گرم) در معرض یک ستون MCI شسته شده با MeOH/H2O (30:70-100:0) قرار گرفت تا هفت فراکسیون به دست آید (Fr.19.1-Fr.19.7). Fr.19.5 (2.3 گرم) توسط ستون سیلیکاژل مکرر (CHCl3/MeOH، 30:1) جدا شد تا 8 (15 میلی گرم) و 10 (7 میلی گرم) بدست آید. Fr.19.6 (4.3 گرم) بر روی ستونی از سیلیکاژل (CHCl3/MeOH، 30:1) تکه تکه شد تا 5 بخش (Fr.19.6.1– Fr.19.6.5) بدست آید. Fr.19.6.1 (1.2 گرم) در معرض ستون سیلیکاژل (CHCl3/MeOH، 30:1) قرار گرفت و پس از خالص سازی با HPLC (MeOH/H2O، 45:55)، 1 (15 میلی گرم) ارائه شد. Fr.19.6.3 (540 میلی گرم) به ستونی از ستون Sephadex LH{157}} که با MeOH/H2O (90:10) شسته شده بود، اعمال شد و سپس با HPLC نیمه آماده‌ای (MeOH/H2O، 45:55) خالص‌سازی شد. برای ارائه 2 (6 میلی گرم) و 6 (5 میلی گرم). Fr.20 (12 گرم) به مرحله کروماتوگرافی ژل MCI (MeOH/H2O، 30:70-100:0) اعمال شد و سپس تحت سیلیکاژل CC (CHCl3/MeOH، 30:1) قرار گرفت تا 14 (21) بدست آید. میلی گرم).سه {{0}}O-Ethyl-9-O-(4-hydroxyphenyl) propionyl-diacylglycerol (1): جامد سفید. []D 26 - 3.72 (c 0.51، MeOH)؛ UV (MeOH) λmax (log ε) 203 (4.53)، 225 (4.17)، 280 (3.66) نانومتر. IR (KBr) νmax 3426، 1727، 1516، 829 cm-1. 1H و 13C NMR (CD3OD)، جدول 1 را ببینید. ESIMS m/z 389 [M-H]-، HRESIMS m/z 389.1602 [M-H]- (محاسبه برای C21H25O7، 389.1606).

(R)-4،5،4'-Trihydroxy-3،3ʹ، -trimethoxybibenzyl (2): پودر آمورف سفید. [ ]D 26 -12.46 (c 1.07، MeOH)؛ UV (MeOH) λmax (log ε) 204 (4.59)، 286 (3.75) نانومتر. IR (KBr) νmax 3418، 1607، 1517، 1455، 1434، 796 cm-1. 1H و 13C NMR (CD3OD)، جدول 1 را ببینید. ESIMS m/z 319 [M-H]-، HRESIMS m/z 319.1180 [M-H]- (محاسبه برای C17H19O6، 319.1187).

(2S)-5,7,3ʹ-Trihydroxy-6,4,5-trimethoxyfavone (3): پودر آمورف زرد; [ ]D 26 - 46.64 (c 0.46، MeOH); UV (MeOH) λmax (log ε) 206 (4.70)، 294 (4.17) نانومتر. IR (KBr) νmax 3335، 2940، 1641، 1514، 1462، 1345، 1434، 1182، 1091، 998، 833 cm-1. 1H و 13C NMR (CD3OD)، جدول 1 را ببینید. ESIMS m/z 331 [M-H]-، HRESIMS m/z 331.0819 [M-H]- (محاسبه برای C17H15O7، 331.0823).

3.4 سنجش فعالیت پاکسازی رادیکال DPPH

سنجش فعالیت مهار رادیکال آزاد طبق روش قبلی [36] با برخی تغییرات انجام شد. به طور خلاصه، 3{11}} نمونه میکرولیتر (1{13}}00 میکروگرم در میلی‌لیتر، محلول در اتانول) و Trolox (1 میلی‌مولار) به 270 میکرولیتر محلول DPPH (100 میکرومولار، محلول در متانول) به ترتیب. واکنش به مدت 1 ساعت در دمای 37 درجه روی یک میکروپلیت 96-چاهی ادامه یافت. سپس جذب در 515 نانومتر خوانده شد و درصد کل فعالیت مهار رادیکال با استفاده از فرمول زیر محاسبه شد: درصد مهار =[(A0− A1)/A0]×100 درصد، که در آن A0 جذب DPPH بدون نمونه (واکنش کنترل) و A1 جذب DPPH انکوبه شده با نمونه ها است. تمامی آزمایشات در سه تکرار انجام شد و از Trolox به عنوان عامل کنترل مثبت استفاده شد.

3.5 روش مهاری قارچ تیروزیناز

مهار فعالیت تیروزیناز طبق روشی که قبلا [36] با برخی تغییرات شرح داده شد، به روش اسپکتروفتومتری تعیین شد. به طور خلاصه، غلظت‌های مختلف ترکیبات مورد آزمایش در 10 درصد DMSO تهیه شد. هر یک از محلول‌های نمونه (2{15}} میکرومولار) با L-Dopa (1.25 میلی‌مولار) مخلوط شده و با 97{17}} میکرولیتر از 0.05 میلی‌مولار بافر فسفات سدیم (PBS، pH 6.8) در لوله های آزمایش. واکنش با افزودن تیروزیناز قارچ (U/mL 25) آغاز شد. مخلوط واکنش به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق انکوبه شد. مقدار دوپاکروم موجود در مخلوط با اندازه گیری جذب هر چاهک در طول موج 490 نانومتر تعیین شد. اسید کوجیک به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. درصد مهاری تیروزیناز بر اساس معادله زیر محاسبه شد: درصد مهار=[(A0− A1)/A0] × 100 درصد، که در آن A0 جذب دوپاکروم بدون ترکیبات آزمایشی (واکنش کنترل) و A1 است. جذب دوپاکروم انکوبه شده با ترکیبات آزمایش است.

3.6 تولید کلاژن توسط روش HDFa

قدردانی این پروژه توسط اداره علم و فناوری استان یوننان (شماره‌های 2017ZF003-04، 2015HB093 و 2019HA001) حمایت مالی شد. نویسندگان از کارکنان گروه تحلیلی آزمایشگاه کلیدی دولتی فیتوشیمی و منابع گیاهی در غرب چین، موسسه گیاه شناسی Kunming، آکادمی علوم چین، برای اندازه گیری همه طیف ها سپاسگزاری می کنند.

رعایت استانداردهای اخلاقی

دسترسی آزاداین مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution 4 توزیع می‌شود.0 مجوز بین‌المللی، که استفاده، توزیع، و بازتولید نامحدود را در هر رسانه‌ای مجاز می‌سازد، مشروط بر اینکه اعتبار مناسب را به نویسنده(های) اصلی و منبع بدهید. ، پیوندی به مجوز Creative Commons ارائه دهید و نشان دهید که آیا تغییراتی ایجاد شده است یا خیر.

منابع

برای اطلاعات بیشتر: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501