Gao-Zi-Yao عملکرد یادگیری و حافظه را در موش‌های قدیمی پرفشاری خون خودبه‌خود بهبود می‌بخشد قسمت 2

حیوانات آزمایشی

موش‌های صحرایی نر 12 ماهه و هشت هفته‌ای با فشار خون بالا (SHR) از مرکز مدل حیوانی نانجینگ خریداری شدند.

یک رابطه قوی بین 8-مردهای یک هفته‌ای و حافظه وجود دارد. در این دوره، مغز موجود نر به سرعت در حال توسعه است و ارتباطات بین نورون های آن به تدریج افزایش می یابد که به نوبه خود بر رشد حافظه او تأثیر می گذارد.

تحقیقات نشان می دهد که حافظه موجودات نر با افزایش سن بهتر می شود. این امر نه تنها بر بقا و تولیدمثل آنها تأثیر بسزایی دارد، بلکه به آنها کمک می کند تا بهتر با محیط سازگار شوند و با چالش های جدید کنار بیایند.

بنابراین، ما باید به طور فعال مردان جوان را تشویق کنیم تا در انواع فعالیت‌های مفید، مانند حل پازل، یادگیری مهارت‌های جدید و کاوش در زمینه‌های جدید شرکت کنند. این فعالیت ها مغز آنها را تحریک می کند و به آنها اجازه می دهد سریعتر رشد کنند و توانایی های حافظه خود را بهبود بخشند.

در عین حال باید محیط و فضای مناسبی را برای موجودات نر جوان نیز فراهم کنیم. ایجاد احساس امنیت و نزدیکی به آنها می تواند رشد مغز آنها را تقویت کند و حافظه آنها را بهبود بخشد.

به طور خلاصه، ما باید هر کاری که می توانیم انجام دهیم تا به پسران جوان کمک کنیم تا حافظه خود را بهبود بخشند تا موجوداتی باهوش تر، با اعتماد به نفس تر و توانا شوند. این نه تنها به رشد شخصی آنها کمک می کند، بلکه به شکوفایی و بقای کل گونه نیز کمک می کند. مشاهده می شود که ما نیاز به بهبود حافظه داریم و گیاه سیستانچ دسرتیکولا می تواند حافظه را به میزان قابل توجهی بهبود بخشد، زیرا گیاه سیستانچ دسرتیکولا دارای اثرات آنتی اکسیدانی، ضد التهابی و ضد پیری است که می تواند به کاهش واکنش های اکسیداتیو و التهابی در مغز کمک کند و در نتیجه از مغز محافظت کند. سلامت سیستم عصبی علاوه بر این، Cistanche deserticola همچنین می‌تواند رشد و ترمیم سلول‌های عصبی را تقویت کند، بنابراین اتصال و عملکرد شبکه‌های عصبی را افزایش می‌دهد. این اثرات می تواند به بهبود حافظه، یادگیری و سرعت تفکر کمک کند و همچنین ممکن است از ایجاد اختلالات شناختی و بیماری های عصبی جلوگیری کند.

برای تقویت حافظه روی مکمل‌های شناختی کلیک کنید

در این مدل، فشار خون بالا از 4 ماهگی با بروز تغییرات مرتبط با فشار خون در عروق مغزی در 6 ماهگی شروع می شود [37].

موش‌ها در شرایط نامناسب و با رعایت بهداشت استاندارد قرار گرفتند، در دمای 25 درجه با چرخه نور/تاریکی 12/12 نگهداری شدند، و به طور آزاد با غذا و آب استاندارد موش تغذیه شدند.

همه رویه‌ها توسط Soochow University، که با گزارش قبلی ما مطابقت دارد، تأیید شده و طبق دستورالعمل‌های مراقبت و استفاده از حیوانات ایجاد شده است[35].

آزمایش‌ها بر اساس دستورالعمل‌های مؤسسه ملی بهداشت برای استفاده از حیوانات آزمایشگاهی (NIH، شماره انتشار 85-23، اصلاح‌شده در سال 1996) انجام شد. مطالعه حاضر با دستورالعمل ARRIVE گزارش شده است.

SHR هشت هفته‌ای برای کنترل پیری اعمال شد (SHR-Young، n=10). موش‌های دوازده ماهه با یا بدون Gao-Zi-Yao برای آب مقطر (SHR-C قدیمی، n=10)، دوز پایین (SHR-L قدیمی، n=10)، دوز متوسط ​​تحت درمان قرار گرفتند. (SHR-M قدیمی، n=10)، دوز بالا (SHR-H قدیمی، n=10) با تغذیه معده.

دوزهای Gao-Zi-Yao کم، متوسط ​​و زیاد برابر با 1/2-، 1-، دوز سه برابری برای کاربرد بیمار بالینی بر اساس سطح بدن محاسبه می‌شود. Gao-Zi-Yao قبل از استفاده در 5 میلی لیتر آب مقطر حل شد و یک بار به مدت 4 هفته از لبنیات استفاده شد.

فشار خون و ضربان قلب هر هفته با روش دم کاف کنترل می شد و وزن بدن نیز طبق مشاهدات قبلی ما هر هفته کنترل می شد [35].

پس از 4 هفته، آزمایش ماز آبی موریس انجام شد و موش‌ها تحت بیهوشی توسط سدیم پنتوباربیتال (50 میلی‌گرم بر کیلوگرم داخل صفاقی) قربانی شدند، بافت هیپوکامپ برای تجزیه و تحلیل بیشتر جمع‌آوری شد. تمام پروتکل‌های آزمایشی توسط کمیته صدور مجوز اخلاق دانشگاه سوچو تأیید شد.

آزمایش ماز آبی موریس

آزمایش ماز آبی موریس (BW-MWM101، Shanghai Bio-will Co., Ltd., Shanghai, China) همانطور که قبلاً با برخی تغییرات توضیح داده شد، انجام شد [38]. آزمون برای 6 روز برنامه ریزی شده بود، روزهای 1 تا 5 برای دوره آموزشی و روز 6 برای نتایج آزمایش بود.

موش‌ها به مدت 2 دقیقه با لبنیات آموزش دیدند، زمان ضبط برای سوار شدن بر روی سکو به عنوان زمان تأخیر. در روز 6 سکو برداشته شد. موش ها در دورترین ربع فاصله قرار گرفتند و مسیر شنا به مدت 2 دقیقه ثبت شد.

پارامترهای یادگیری و عملکرد حافظه توسط نرم افزار محاسبه شد.

اندازه گیری سطوح سرمی NO و عوامل التهابی با روش الایزا

سطوح سرمی NO (شماره کاتالوگ: S0023)، IL-1 (شماره کاتالوگ: A301BH80153)، IL{4}} (شماره کاتالوگ:A31038348)، IL-6 (شماره کاتالوگ: A30681042)، و TNF- (شماره کاتالوگ: A38280855) با استفاده از کیت های ELISA در دسترس تجاری (BiotechnologyCo., Ltd. Shanghai Research Anzyme. Shanghai, China) اندازه گیری شدند. تمام مراحل طبق دستورالعمل سازنده انجام شد.

رنگ آمیزی نیسل

بافت هیپوکامپ موش جدا شد، ثابت شد، پارافین جاسازی شد، سپس در محلول رنگ‌آمیزی تولویدین آبی 1% به مدت 5 تا 10 دقیقه در دمای اتاق انکوبه شد. ده بخش در آب مقطر شسته شد، در اتانول 95 درصد به مدت 5 تا 30 دقیقه خیس شد و در اتانول 100 درصد آبگیری شد.

پس از آبگیری، برش در زایلن قرار داده شد و با استفاده از یک محیط رزینی پوشش داده شد. تعداد نورون ها در نواحی CA1، CA2 و شکنج دندانه دار (DG) هیپوکامپ مشاهده و با استفاده از برنامه تحلیل ImageJ آنالیز شد.

وسترن بلات برای یادگیری و پروتئین های مرتبط با حافظه

وسترن بلات برای پروتئین های مرتبط با یادگیری و حافظه همانطور که در گزارش قبلی ما با برخی تغییرات توضیح داده شد انجام شد [39].

هیپوکامپوست ها با بافر RIPA (50 mmTris، 150 میلی مولار NaCl، 1٪ Triton-X{4}}، pH 7.0) حاوی فنیل منتان سولفونیل فلوراید (R&D Systems Inc.، Minneapolis، US) همگن شدند. هموژن ها در 12،{8}} × گرم به مدت 10 دقیقه در 4 درجه سانتریفیوژ شدند.

پروتئین های سلولی توسط SDS-PAGE جدا شدند و به غشاهای PVDF (Hybond TM-ECL؛ AmershamPharmacia Biotech, Inc.) منتقل شدند. غشاها در 5% شیر بدون چربی در PBS و 0.1% Tween-20در دمای اتاق مسدود شدند.

سپس بلات ها با آنتی بادی اولیه انکوبه شدند: گیرنده ضد گلوتامات 1 (1:1000، Abcam، Inc.، شماره کاتالوگ: ab183797)، آنتی بادی AntiNMDAR2B (1:1000، Abcam، Inc.، شماره کاتالوگ: ab28373)، آنتی فسفو آنتی بادی CaMKII (1:1000، Abcam، Inc.، شماره کاتالوگ: ab171095)، آنتی بادی Antiphospho-CREB (1:1000، Abcam، Inc.، شماره کاتالوگ: 32096) یا ضد GAPDH (Santa Cruz Biotech، Inc.، شماره کاتالوگ: sc{19}}).

سپس، غشاها به مدت 1 ساعت با یک آنتی بادی ثانویه انکوبه شدند (HRP conjugated anti-rabbit Ig-G, 1:2000, Abcam, Inc. Catalog No: ab205718). سپس غشاها سه بار به مدت 15 دقیقه با استفاده از TBS-T برای حذف آنتی‌بادی‌های اضافی قبل از انکوباسیون به مدت 1 دقیقه با معرف‌های نورتابی شیمیایی (ECL، R&D Systems Inc.، Minneapolis، MN، USA) شسته شدند.

علاوه بر این، باندهای واکنش‌گر ایمنی توسط یک سیستم آنالیز ژل الکتروفورز (GL2200 Pro، Crestream Inc. USA) شناسایی شدند. شدت باندها توسط نرم افزار Image J آنالیز شد. مقدار پروتئین های هدف با بیان GAPDH نرمال شد [39].

تحلیل آماری

برای تجزیه و تحلیل آماری از نرم افزار SPSS 18.{1}} استفاده شد. داده‌ها به‌عنوان میانگین ± SEM ارائه می‌شوند. مقدار P

نتایج

فشار خون سیستولیک (SBP)، ضربان قلب و وزن بدن بین SHR جوان و SHR پیر

Yong SHR SBP کمتری را در دو هفته اول در مقایسه با SHR قدیمی نشان داد، سپس در سه هفته بعد بین دو گروه تفاوتی نداشت (شکل 2A).

برعکس، ضربان قلب در دو هفته اول بین دو گروه تفاوتی نداشت، سپس SHR جوان به طور قابل توجهی در مقایسه با SHR قدیمی در سه هفته بعد افزایش یافت (شکل 2B). SHR جوان وزن بدن کمتری را در مقایسه با SHR قدیمی در طول کل دوره مشاهده نشان داد (شکل 2C).

پارامترهای ماز آبی موریس بین SHR جوان و SHR پیر

برای تعیین یادگیری و حافظه وابسته به هیپوکامپ، آزمایش ماز آبی موریس انجام شد. SHR قدیمی تاخیر فرار طولانی تری را در چهار روز اول در مقایسه با SHR جوان نشان داد (شکل 3A).

زمان عبور از ربع هدف در SHR قدیمی کمتر از SHR جوان بود (شکل 3B).

درصد زمان در ربع پلت فرم هدف در مقایسه با SHR جوان کوتاه‌تر بود (شکل 3C). درصد طول مسیر در ربع نیز در SHR قدیمی در مقایسه با SHR قدیمی کوتاهتر بود (شکل 3D). این نتایج نشان می دهد که SHR قدیمی دارای اختلال در عملکرد شناختی است.

تعداد نورون ها در هیپوکامپ بین SHR جوان و SHR پیر

تعداد نورون ها در نواحی مختلف هیپوکامپ با رنگ آمیزی Nissl شمارش شد. نتایج نشان داد که تعداد کمتری نورون در CA1، CA2، و DGregions SHR قدیمی در مقایسه با SHR جوان وجود دارد (شکل 4).

بیان پروتئین مرتبط با حافظه و یادگیری در هیپوکامپ بین SHR جوان و SHR پیر است

نتایج وسترن بلات نشان داد که بیان پروتئین های مرتبط با یادگیری و حافظه (GluR1، NMDAR 2B، فسفریله-CaMK II، و فسفریله-CREB) در هیپوکامپ SHR قدیمی کمتر از آن در هیپوکامپ SHR جوان بود (شکل 5).

اثر Gao-Zi-Yao بر SBP، ضربان قلب و وزن بدن در SHR قدیمی

اثر Gao-Zi-Yao بر SBP مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. درمان با دوز پایین Gao-Zi-Yao به طور قابل توجهی SBP را در SHR قدیمی از هفته دوم تا هفته چهارم در مقایسه با گروه کنترل قدیمی SHR کاهش داد، دوزهای متوسط ​​و بالای Gao-Zi-Yao به طور قابل توجهی SBP را در SHR قدیمی از هفته اول تا هفته کاهش داد. هفته چهارم در مقایسه با کنترل قدیمی SHR (شکل 6A). این نتایج نشان می دهد که Gao-Zi-Yao اثر ضد فشار خون در SHR اعمال می کند.

ما همچنین داده‌های مربوط به اثرات ضربان قلب Gao-Zi-Yaoon و وزن بدن را مقایسه کردیم. داده‌های ما نشان داد که تفاوت معنی‌داری در ضربان قلب و وزن بدن در بین همه گروه‌ها در طول کل دوره مشاهده وجود نداشت (شکل 6B، C).

اثر Gao-Zi-Yao بر سطوح سرمی NO، IL-1، IL-2، و TNF- در SHR قدیمی

درمان با دوزهای متوسط ​​و بالا GAO-ZIYAO باعث افزایش سطح NO سرم در مقایسه با سطوح در گروه کنترل SHR شد (شکل 7A). درمان با تمام دوزهای آزمایش شده GAO-ZI-YAO باعث کاهش سطح سرمی IL-1، IL-2 در مقایسه با سطوح در گروه کنترل SHR شد (شکل 7B، C). با این حال، تنها دوز بالای GAO-ZI-YAO سطح سرمی TNF- را سرکوب کرد (شکل 7D).

این نتایج نشان می دهد که GAO-ZI-YAO می تواند استرس اکسیداتیو و التهاب را تنظیم کند.

For more information:1950477648nn@gmail.com