زمینه.حادآسیب کلیه(AKI) یک عارضه مکرر سیروز جبران نشده با افزایش مرگ و میر است. بیومارکرهای سنتی مانند کراتینین سرم برای تشخیص آسیب بدون تغییر عملکرد حساس نیستند. ما فرض می کنیم که اگزوزوم های ادراری به طور بالقوه حامل نشانگرهایی هستند که نوع آن را متمایز می کند.آسیب کلیهدر بیماران سیروزی

مواد و روش ها.این یک مطالعه آینده نگر، تک مرکزی و مشاهده ای بر روی بیماران بزرگسال مبتلا به سیروز است. گروه‌های بیمار شامل افراد سالم سالم، سیروز جبران‌شده با نرمال بودندعملکرد کلیهسیروز جبران نشده با نرمالعملکرد کلیهو سیروز جبران نشده با AKI. داده ها از پرونده سلامت الکترونیکی شامل علت بیماری کبدی، امتیاز MELD، سابقه جبران خسارت، امتیاز Child-Turcotte-Pugh، سابقه AKI و مواجهه با دارو استخراج شد. نمونه ادرار در زمان رضایت جمع آوری شد. محتوای پروتئین اگزوزوم ادرار مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت و داده های پروتئومی با بلات ایمنی تایید شد. تجزیه و تحلیل آماری شامل تجزیه و تحلیل تفکیک حداقل مربعات جزئی همراه با اهمیت متغیر در شناسایی طرح ریزی بود.

نتایج.هجده فرد مبتلا به سیروز وارد مطالعه شدند و شش فرد سالم از مخزن زیستی ما استخراج شدند. اگزوزوم ادرار جدا شد و 1572 پروتئین شناسایی شد. مالتاز-گلوکوآمیلاز بالاترین پروتئین متمایزکننده بود که توسط وسترن بلات تأیید شد.

نتیجه گیری. بیماران مبتلا به سیروز و AKI دارای تنظیم دگرگونی دی ساکاریداز مرزی برس کلیه، MGAM، در اگزوزوم های ادراری هستند که ممکن است نوع آن را متمایز کند.آسیب کلیهدر سیروز؛ با این حال، اهمیت بالینی این نیاز به اعتبار بیشتر دارد.

برای اطلاعات بیشتر لطفا تماس بگیرید:joanna.jia@wecistanche.com

آسیب حاد کلیهتحت درمان قرار گیردسیستانچ

1. مقدمه

حادآسیب کلیه(AKI) تقریباً در 20 درصد بیماران بستری در بیمارستان مبتلا به سیروز رخ می دهد [1، 2]. AKI در بیماران سیروز بستری در بیمارستان اغلب پیشرونده، شدید و یک پیش بینی کننده منفی مستقل مرگ و میر است [3]. *شایع ترین علت AKI در سیروز همودینامیک است که 70 درصد موارد را تشکیل می دهد. نکروز حاد توبولار (ATN) 30 درصد موارد را تشکیل می دهد و علل پس از کلیوی نادر است که کمتر از 1 درصد موارد را تشکیل می دهند. سندرم هپاتورنال (HRS) همودینامیک بدون قابل شناسایی استآسیب کلیهیا بیماری و تقریباً در 20 درصد از بیماران سیروز رخ می دهد [4، 5].

کراتینین سرم (Scr) پرکاربردترین بیومارکر برای ارزیابی استعملکرد کلیهو شناسایی کنیدآسیب کلیه. با این حال، SCR در بیماران سیروزی برای جلد تحقیق و تمرین مراقبت های حیاتی هنداوی 2019 کمتر از حد مطلوب است، دلایل متعددی از جمله کاهش تولید کبد، تحلیل عضلانی با کاهش ذخایر، افزایش حجم توزیع و سوء تغذیه پروتئین-کالری. میانگین مقادیر Scr در بیماران سیروزی در مقایسه با جمعیت عمومی کمتر است و در نتیجه بر اساس تعریف فعلی AKI، AKI با تاخیر تشخیص داده می شود [6]. علاوه بر این، Scr یک نشانگر زیستی استعملکرد کلیهو یک نشانگر آسیب حساس نیست. بیومارکرهای جدید آسیب کلیه برای بهبود تشخیص AKI و کمک به افتراق علت AKI پدیدار شده‌اند.آسیب کلیهنشانگرهای زیستی از جملهآسیب کلیهمولکول-1 (KIM-1)، لیپوکالین مرتبط با ژلاتیناز نوتروفیل (NGAL)، اینترلوکین-18، پروتئین اتصال دهنده به اسید چرب کبد (L-FABP)، پروتئین اتصال دهنده فاکتور رشد شبه انسولین -7 (IGFBP-7)، و مهارکننده بافتی متالوپروتئیناز-2 (TIMP{10}}) ممکن است قبل از افزایش تشخیص SCR افزایش یابدآسیب کلیهبدون تغییر عملکردی [7]. مطالعات نشان داده اند که این بیومارکرها ممکن است سبب شناسی AKI را متمایز کنند [8، 9]. بیومارکرهای بهبود یافته برای تشخیص و تمایز AKI نشان دهنده نیازهای بالینی برآورده نشده مهم در بیماران مبتلا به سیروز است.

اگزوزوم ها نانووزیکول هایی هستند که به عنوان مکانیزم ارتباط بین سلولی از سلول های زنده آزاد می شوند [10]. نشان داده شده است که محتوای پروتئین e اگزوزوم ها تحت شرایط پاتولوژیک یا استرس به طور قابل توجهی اصلاح شده است [11-13]. درکلیه،اگزوزوم ها از تمام انواع سلول ها به ادرار تحویل داده می شوند [14، 15]، و اگزوزوم های ادراری به طور بالقوه می توانند به عنوان امضای بیوشیمیایی سوژه در نظر گرفته شوند. از آنجایی که اگزوزوم های ادراری به طور معمول مورد سنجش قرار نمی گیرند، ممکن است اطلاعات ناشناخته بیشتری در مورد بیومارکرهای پروتئینی AKI در بیماران مبتلا به سیروز فراهم کنند.

هدف از این مطالعه بررسی پروتئومیکس اگزوزوم ادرار در بیماران مبتلا به سیروز و AKI در مقایسه با افراد سالم بود. ما فرض کردیم که محتوای پروتئین اگزوزوم ادرار در بیماران مبتلا به سیروز جبران‌شده یا جبران‌شده که AKI را تجربه می‌کنند در مقایسه با افراد سالم سالم متفاوت است. علاوه بر این، ما فرض کردیم که محتوای متفاوت پروتئین اگزوزومی ادرار می‌تواند بینشی در مورد مکانیسم‌هایآسیب کلیهدر سیروز

2. مواد و روشها

این یک مطالعه آینده نگر، تک مرکزی و مشاهده ای بر روی بیماران بزرگسال مبتلا به سیروز است. همه بیماران برای مطالعه از سیستم بهداشت UC San Diego بین 1 ژوئیه 2013 و 1 ژوئن 2014 انتخاب شدند و رضایت آگاهانه ارائه کردند. بیمارانی که تشخیص سیروز داشتند و قادر به ارائه نمونه ادرار بودند، واجد شرایط ورود بودند. سیروز با بیوپسی کبد، تصویربرداری مقطعی، یا از نظر بالینی (از طریق شناسایی یک رویداد جبران ناپذیر که توسط متخصص کبد تعیین شده است) تعیین شد. داده‌ها از پرونده‌های سلامت الکترونیکی شامل مشخصات دموگرافیک، آنتروپومتریک، علائم حیاتی، مشکلات پزشکی همراه، علت سیروز، عوارض سیروز (آسیت، واریس، آنسفالوپاتی کبدی و کارسینوم کبدی)، سابقه AKI یابیماری مزمن کلیویو قرار گرفتن در معرض دارو ظرف 30 روز پس از ثبت نام. فقط بیمارانی که داده‌های بالینی و تست‌های آزمایشگاهی کامل در 30 روز پس از ثبت‌نام داشتند، واجد شرایط ورود به این مطالعه بودند. بیماران به گروه های زیر تقسیم شدند:

(1) گروه 0: کنترل های سالم عادی

(2) گروه 1: سیروز جبران شده (کلاس A Child-Turcotte- Pugh، MELD 10) بدون سابقه AKI و طبیعیعملکرد کلیه

(3) گروه 2: سیروز جبران نشده (Child-Turcotte- Pugh کلاس B یا C) بدون سابقه AKI و طبیعیعملکرد کلیه

(4) گروه 3: سیروز جبران نشده (Child-Turcotte- Pugh کلاس B یا C) و AKI

طبیعیعملکرد کلیهبه عنوان GFR تخمینی > 60 میلی‌لیتر در دقیقه/1.73 متر مربع (فرمول MDRD)، بدون آلبومینوری و بدون سابقه AKI تعریف شد. AKI بر اساس معیارهای AKIN تعریف شد: افزایش Scr 0.3 mg/dl در 48 ساعت یا 50 درصد افزایش Scr از سطح پایه [16]. بیماران مبتلا به AKI در طول پذیرش و مشاوره از خدمات کبدی بستری در صورتی که نمونه‌های خون و ادرار در طول دوره AKI گرفته شده بودند، انتخاب شدند. چهارمین گروه از کنترل های سالم از یک مخزن زیستی طبیعی سالم در مرکز UCSD O'Brien برای تحقیقات AKI در دانشکده پزشکی UC San Diego استخراج شد. *این کار توسط هیئت بررسی نهادی دانشگاه کالیفرنیا، سن دیگو تایید شده است.

2.1. نمونه‌برداری و پردازش ادرار برای جداسازی اگزوزوم.

ادرار در 3{10}} ×g به مدت 30 دقیقه سانتریفیوژ شد. pH مایع رویی روی 7 تنظیم شد، به مقدار کمی تقسیم شد و در دمای 80- درجه سانتیگراد منجمد شد. اگزوزوم ها با استفاده از رسوب ناشی از پلی اتیلن گلیکول (PEG-) تهیه شدند [17]. نمونه های ادرار مخلوط شده با PEG به مدت 2 ساعت در دمای اتاق نگهداری شدند و به مدت 30 دقیقه در 10000 × گرم چرخانده شدند. پلت e در 10 میلی مولار تریس با 1 میلی مولار نمک EDTA-Na مجدداً معلق شد. *مرحله is دو بار برای حذف ناخالصی ها تکرار شد. SDS PAGE یک بعدی از پروتئین های اگزوزوم قبل از تریپسینیزاسیون در ژل برای جلوگیری از گیج کننده انجام شد [18].

2.2. آنالیز پروتئومی

ژل به 1 میلی‌متر × 1 میلی‌متر بریده شد و 3 بار با استفاده از 1{22}}{29}} میکرولیتر بی‌کربنات آمونیوم 100 میلی‌مولاری به مدت 15 دقیقه و سپس 100 میکرولیتر استونیتریل (ACN) به مدت 15 دقیقه رنگ‌آمیزی شد. ]. *e مایع رویی لیوفیلیز شد و گلوله حاصل با 200 میکرولیتر بی کربنات آمونیوم 100 میلی مولار{11}} میلی مولار DTT کاهش یافت و در دمای 56 درجه به مدت 30 دقیقه انکوبه شد. پس از خارج کردن مایع، قطعات ژل به 200 میکرولیتر بی کربنات آمونیوم 100 میلی مولار-55 میلی مولار یدوااستامید اضافه شد. *در دمای اتاق به مدت 20 دقیقه در تاریکی انکوبه شد. مایع رویی خارج شد و با 100 میلی مولار بی کربنات آمونیوم به مدت 15 دقیقه شسته شد. *en، 100 میکرولیتر ACN برای آبگیری قطعات ژل اضافه شد و محلول لیوفیلیز شد. سپس تریپسین سرد (0.01 میکروگرم بر میکرولیتر) در محلول بی کربنات آمونیوم 50 میلی مولار برای پوشاندن قطعات ژل برای فرآیند هضم اضافه شد و به مدت 30 دقیقه روی یخ قرار گرفت. هنگامی که آبرسانی کامل شد، بی کربنات آمونیوم 50 میلی مولار تازه برای جایگزینی اضافی اضافه شد. تریپسین و یک شب در دمای 37 درجه باقی می ماند. استخراج پپتیدها دو بار با افزودن 50 میکرولیتر اسید فرمیک 0.2 درصد و ACN 5 درصد انجام شد و به مدت 30 دقیقه در دمای اتاق گرداب شد. پس از برداشتن مایع رویی، 50 میکرولیتر اسید فرمیک 50 درصد ACN{35}}.2 درصد به نمونه اضافه شد و دوباره به مدت 30 دقیقه در دمای اتاق گرداب شد. *is supernatant از اولین استخراج خارج شد و با مایع رویی قبلی ترکیب شد. نمونه‌ها با استفاده از Eksigent nano-LC-Ultra® 2D با سیستم انعطاف‌پذیر cHiPLC-nano (Eksigent، AB SCIEX Dublin، CA، USA) در حالت trap-lute در ترکیب با طیف‌سنجی جرمی پشت سر هم با استفاده از طیف‌سنج جرمی QExactive (Thermo Fisher) آنالیز شدند. Scientific, San Jose', CA, USA) با یونیزاسیون الکترواسپری [17].

2.3. مدیریت اطلاعات.

در تجزیه و تحلیل از موتور جستجوی SEQUEST (نرم افزار Thermo Scientific Proteome Discoverer، نسخه 1.4) استفاده شد. * پایگاه داده پروتئین e برای توالی های پپتید تریپتیک برای انسان انسان خردمند از مرکز ملی اطلاعات بیوتکنولوژی (NCBI) برای مقایسه طیف های تجربی MS/MS ما استفاده شد. برای شناسایی توالی‌های پپتیدی و پروتئین‌های مرتبط، از معیارهای منتشر شده قبلی استفاده کردیم [17]. برای ارزیابی اهمیت آماری، جستجوهای هدف و فریب جداگانه و محاسبه نرخ‌های کشف کاذب مبتنی بر امتیاز کلاسیک (FDRs) استفاده شد. در نهایت، داده‌های خروجی SEQUEST را فیلتر کردیم تا امتیاز نهایی را به پروتئین‌ها اختصاص دهیم. حداقل مقادیر امتیاز همبستگی (Xcorr) 1.5، 2.{7}}، 2.25 و 2.5 به ترتیب برای یون های تک، دو، سه و چهار قطبی انتخاب شد. پارامترهای منتشر شده قبلی برای تضمین سختی بالا [20] مورد استفاده قرار گرفتند و نسبت پپتید مثبت کاذب کمتر از 3 درصد بود.

2.4. تحلیل آماری.

فاکتور فراوانی طیفی نرمال شده (NSAF) برای محاسبه فراوانی نسبی پلی پپتیدها استفاده شد [21]. تبدیل ورود به سیستم و پوسته پوسته شدن تعداد پپتیدها قبل از تجزیه و تحلیل آماری انجام شد. از پورتال وب MetaboAnalyst 2.0 برای انجام آزمون t Student، تجزیه و تحلیل تفکیک حداقل مربعات جزئی (PLS-DA) و اهمیت متغیر در طرح ریزی (VIP) با p پیشینی <0 استفاده="" شد.="" 05="" [22].="" نسبت="" e="" پروتئین="" فردی="" به="" غلظت="" کل="" با="" استفاده="" از="" آزمون="" t="" زوجی="" دانشجویی="" برای="" هر="" گروه="" ارزیابی="" شد.="" pls-da="" و="" vip="" برای="" شناسایی="" پروتئین="" های="" تبعیض="" آمیز="" استفاده="" شد="" [23].="" ما="" پروتئین="" هایی="" با="" نرخ="" کشف="" کاذب="" (fdr)="" کمتر="" یا="" مساوی="" 10="" درصد="" را="" برای="" تأیید="" با="" استفاده="" از="" وسترن="" بلات="" انتخاب="">

2.5. وسترن ایمونوبلات و کمی سازی

آنتی بادی علیه MGAM از Proteintech Group, Inc. (شیکاگو، IL، ایالات متحده آمریکا) خریداری شد و برای تجزیه 100 میکروگرم پروتئین از اگزوزوم ادرار هر فرد مورد استفاده قرار گرفت. پس از جداسازی، پروتئین ها به کاغذ نیتروسلولز منتقل شدند، مسدود شدند، با آنتی بادی اولیه یک شب قبل از شستشو با تریس بافر سالین انکوبه شدند، به مدت 1 ساعت با ترکیب آنتی بادی ثانویه HRP انکوبه شدند و با توسعه همانطور که در انتشارات قبلی از آزمایشگاه ما توضیح داده شد، مشاهده شدند. 24، 25]. نرم افزار ImageJ (NIH) برای تعیین کمیت نوارهای ایمونوبلوت غربی [24] استفاده شد و رسم شد (GraphPad Prism، ​​San Diego، CA، USA).

3. نتایج

3.1. ویژگی های بالینی سیروز و افراد سالم کنترل.

شش بیمار در هر گروه با اطلاعات بالینی کامل مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند و با شش فرد سالم مقایسه شدند. دموگرافیک و علت بیماری کبدی در جدول 1 خلاصه شده است. همانطور که طبق طرح مطالعه پیش بینی می شد، نمرات Child Turcotte-Pugh و MELD بین گروه های بیمار به طور قابل توجهی متفاوت بود.

3.2. تجزیه و تحلیل پروتئومی اگزوزوم ادرار از بیماران سیروز و کنترل سالم.

در کل، در هر 4 گروه، 1572 پروتئین منحصر به فرد شناسایی شد. 360 پروتئین وجود داشت که در همه گروه ها مشترک بود. ما 83 پروتئین اگزوزومی منحصر به فرد برای گروه 0 (شاهد)، 250 برای گروه 1، 84 برای گروه 2، و 212 پروتئین برای گروه 3 پیدا کردیم (شکل 1). ما بیشتر PLS-DA چند متغیره را روی پروتئین ها انجام دادیم که جدایی واضحی را بین گروه کنترل سالم و زیرگروه های مختلف افراد مبتلا به سیروز نشان داد، همانطور که در شکل 2 نشان داده شده است. افراد مبتلا به سیروز جبران شده و جبران نشده بدونآسیب کلیه(گروه های 1 و 2) همپوشانی قابل توجهی را نشان دادند در حالی که افراد مبتلا به سیروز با AKI (گروه 3) جدایی واضحی از سایر افراد سیروز و افراد سالم نشان دادند. یک ANOVA جداگانه از پروتئین ها بین چهار گروه نشان داد که 126 پروتئین به طور قابل توجهی تغییر یافته بودند (05/0p < 0)="" که="" از="" این="" تعداد="" 13="" پروتئین="" به="" نرخ="" کشف="" نادرست="" (fdr)="" برش=""><10% (table="" 2).="" maltase-glucoamylase="" (mgam)="" was="" the="" top="" discriminant="" protein="" with="" a="" vip="" score="" of="" 4.35="" for="" the="" entire="" study="">

3.3. پروتئین مالتاز-گلوکومیلاز در اگزوزوم های ادرار سیروزی جبران نشده افزایش می یابد.

داده های پروتئومی غلظت بالاتری از MGAM را در اگزوزوم ادرار بیماران سیروزی جبران نشده، با و بدون آن نشان داد.آسیب کلیه(گروه 2 و 3). این متمایزترین پروتئین در بین هر چهار گروه با امتیاز VIP 4.35 بود (شکل 3). وسترن بلات تاییدی این اگزوزوم ها پروتئین قابل تشخیص را فقط در بیماران سیروزی باآسیب کلیه(گروه 3) (شکل 4).

4. بحث

ما یک آنالیز پروتئومی از محتوای اگزوزوم ادراری از بیماران مبتلا به سیروز جبران‌شده، سیروز جبران‌نشده، و سیروز جبران‌نشده با AKI انجام دادیم و آنها را با افراد سالم مقایسه کردیم. تجزیه و تحلیل پروتئومیک اگزوزوم های ادراری در بیماران سیروزی چندین نشانگر زیستی بالقوه مهم را شناسایی کرد.آسیب کلیهمهم‌ترین آن MGAM، یک آنزیم دو عملکردی است. ما بالاترین غلظت MGAM را در اگزوزوم های ادراری بیماران مبتلا به سیروز و AKI یافتیم. علاوه بر این، MGAM در بیماران مبتلا به سیروز افزایش یافت اما نه به اندازه بیماران مبتلا به AKI. MGAM در گروه کنترل سالم غایب بود و نقش بالقوه آن را به عنوان نشانگر زیستی بیماری بحرانی برجسته می کرد.

این مطالعه چندین یافته مهم دیگر نیز دارد. اول، طبق دانش ما، این اولین گزارش در مورد تجزیه و تحلیل توصیفی محتوای پروتئین اگزوزوم ادرار در افراد سیروز با مشخصه خوب است. دوم، این اولین مطالعه ای است که افزایش دی ساکاریداز اپیتلیال لوله ای را گزارش می کندآسیب سیروز کلیهالگو. داده‌های پروتئومی اگزوزوم ادرار از 4 گروه مختلف نشان داد که تنظیم مثبت MGAM در گروه AKI سیروز قوی و ثابت است. مالتاز دی ساکاریداز اصلی در غشای مرزی برس کلیوی است [26، 27]، اما عملکرد دقیق این آنزیم به وضوح مشخص نشده است. با این حال، نقش احتمالی دی ساکاریدازهای مرتبط، سوکراز-ایزومالتاز، و ترهالاز در انتقال قند فرض شده است [28]. در ده گونه پستانداران، دی ساکاریدهای مرتبط با MGAM در مرز برس کلیوی یافت شده است [27]. Farquhar و همکارانش نشان داده‌اند که مالتاز در میکروویلی‌های لوله پیچ خورده پروگزیمال وجود دارد و احتمالاً در بازجذب و انتقال گلوکز عمل می‌کند. و این ظرفیت جذب به سمت قسمت های دیستال نفرون کاهش می یابد [29]. نشان داده شد که MGAM در اگزوزوم ها و ریزذرات در مدل موش مبتلا به استئاتوهپاتیت غیر الکلی (NASH) [30] که یک علت شایع سیروز است، وجود دارد. از آنجایی که بیماران سیروز دارای چندین بیماری زمینه ای هستند که به کاهش Scr کمک می کند، تشخیص AKI مشکل ساز است. علاوه بر این، علت آسیب اغلب ناشناخته است و افتراق بین سندرم کبدی و سایر علل AKI دشوار است. علاوه بر این، پاتوفیزیولوژی سیروز جبران نشده با AKI نامشخص است زیرا ممکن است تغییرات همودینامیک یا واسطه های التهابی را در مورد نارسایی حاد و مزمن کبد منعکس کند [31]. ما استدلال کردیم که تغییرات ساختاری و عملکردی سیروز و پرفشاری خون پورتال ایجاد می کندعملکرد کلیهبا توجه به شدت سیروز، شدت آن متفاوت است. این تفاوت بین بیماری کبد جبران شده و جبران نشده باآسیب کلیهرا می توان با مطالعه محصولات پایین دستی درک کردکلیهمانند ادرار با توجه به محموله خاص حالت سلول نفرون اگزوزوم ادرار، ما فرض کردیم که تجزیه و تحلیل اگزوزوم ادرار حاوی اطلاعات کلیدی است که مربوط به تمایز AKI در سیروز است. این گزارش اولین گام برای آزمون این فرضیه است.

این طرح مطالعه دارای چندین محدودیت بود. اولاً، تعداد موضوعات مورد تجزیه و تحلیل در هر گروه کم است. اندازه نمونه بزرگتر ممکن است استحکام این داده ها را بیشتر افزایش داده باشد و پروتئین های اضافی ممکن است به آستانه FDR قابل قبول رسیده باشند.<10%. however,="" despite="" this="" small="" sample,="" these="" data="" demonstrating="" mgam="" as="" a="" unique="" exosomal="" protein="" in="" cirrhotic="" patients="" with="" aki="" is="" robust.="" second,="" we="" used="" 1d="" gel="" electrophoresis="" to="" resolve="" the="" exosome="" proteins="" prior="" to="" lc/ms-ms="" analysis="" that="" resulted="" in="" the="" identification="" of="" 1572="" proteins="" overall.="" if="" we="" had="" conducted="" direct="" exosome="" protein="" trypsinization="" instead="" of="" following="" this="" method,="" perhaps="" the="" number="" of="" identified="" proteins="" might="" have="" increased.="" in="" our="" experience,="" exosomes="" are="" packaged="" with="" nonfull="" length="" peptides="" from="" proteolytic="" action="" as="" well="" as="" endogenous="" peptides="" and="" may="" have="" con-founded="" the="" analysis.="" by="" following="" the="" gel="" electrophoresis="" method,="" we="" ensured="" that="" we="" only="" compared="" full-length="" protein="" differences="" between="">

به طور خلاصه، ما تفاوت‌های پروتئین اگزوزوم ادرار را در افراد سالم و افراد مبتلا به سیروز جبران‌شده و جبران‌شده با و بدون AKI با روش‌های پروتئومی مشخص کرده‌ایم. کار از گروه Knepper نشان می‌دهد که بسیاری از پروتئین‌های مهم کلیوی (به عنوان مثال، آکواپورین‌ها، پلی سیستین‌ها و پودوسین) در اگزوزوم ادرار ریخته می‌شوند [32، 33]. گزارش فعلی ما MGAM را به این گروه از پروتئین‌های کلیوی مهم که در اگزوزوم‌های ادرار شناسایی شده‌اند اضافه می‌کند. یافته های ما نشان می دهد که MGAM ممکن است آسیب لوله پروگزیمال را از سایر انواع AKI در بیماران سیروزی متمایز کند. با این حال، اهمیت بالینی تنظیم مثبت MGAM در افراد مبتلا به سیروز مبتلا به AKI باید در مطالعات آینده مشخص شود.

در دسترس بودن داده ها

داده‌های بالینی و پروتئومی مورد استفاده برای حمایت از یافته‌های این مطالعه توسط هیئت بازبینی سازمانی UCSD به منظور محافظت از حریم خصوصی بیمار محدود شده است. معیارهای دسترسی به داده های محرمانه

تضاد علاقه

نویسندگان اعلام می کنند که هیچ تضاد منافعی ندارند.

قدردانی

تحقیقات از طریق NIH NIDDK UAB/UCSD O'Brien Grant DK0793337 پشتیبانی می شود.

نویسنده

لیندا آودیشو،^1,2 شرلی تسونودا,¹ میشل پرلمن،³ چانتل کوکوی-موندراگون،²مجید قاسمیان⁴رابرت کی ناویوکس،⁵هدر ام. پاتون،³راویندرا ال. مهتا،²بهاویا ویجی،⁶و ساتیش P.راماچاندرا رائو ^2,6,7

1UC San Diego Skaggs School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, San Diego, USA

آزمایشگاه 2Biomarkers، مرکز اوبراین برایآسیب حاد کلیهتحقیقات، نفرولوژی-فشار خون، UC سن دیگو، گروه پزشکی، سن دیگو، ایالات متحده آمریکا

3UC سن دیگو، گروه پزشکی، بخش گوارش، سن دیگو، ایالات متحده آمریکا

4UC سن دیگو، دپارتمان شیمی و بیوشیمی، مرکز طیف‌سنجی بیومولکولی و پروتئومیکس، سن دیگو، ایالات متحده آمریکا

5UC سن دیگو، گروه های پزشکی، اطفال و آسیب شناسی، سن دیگو، ایالات متحده آمریکا

آزمایشگاه نشانگرهای زیستی 6I-AIM، دانشگاه علوم و فناوری بهداشت بین رشته‌ای (TDU)، بنگلور، هند

7UC سن دیگو، بخش پزشکی، بخش بیماری های عفونی، سن دیگو، ایالات متحده آمریکا

مکاتبات باید به Satish P. Ramachandra Rao ارسال شود. دریافت 30 اکتبر 2018; بازبینی شده در 31 دسامبر 2018; پذیرش در 19 فوریه 2019; منتشر شده در 16 آوریل 2019 ویرایشگر آکادمیک: آنتونیو آرتیگاس

حق چاپ © 2019 لیندا آودیشو و همکاران. این یک مقاله با دسترسی آزاد است که تحت عنوان توزیع شده است,که اجازه استفاده، توزیع و تکثیر نامحدود را در هر رسانه ای می دهد، مشروط بر اینکه اثر اصلی به درستی ذکر شده باشد.

منابع

[1] F. Fabrizi و P. Messa، "چالش‌ها در درمان نارسایی کلیه قبل از پیوند کبد،"کلینیک ها که در کبد مرض، جلد 21، شماره 2، صفحات 303-319، 2017.

[2] P. Tandon، MT James، JG Abraldes، CJ Karvellas، F. Ye و N. Pannu، "ارتباط تعاریف جدید با بروز و پیش آگهی حاد".آسیب کلیهدر بیماران بستری با سیروز: یک مطالعه کوهورت مبتنی بر جمعیت گذشته نگر،PLoS One، جلد 11، نه 8، شناسه مقاله e0160394، 2016.

[3] JM Belcher، G. Garcia-Tsao، AJ Sanyal و همکاران، "ارتباط AKI با مرگ و میر و عوارض در بیماران بستری در بیمارستان مبتلا به سیروز."کبد شناسی، جلد 57، شماره 2، ص 753- 762، 2013.

[4] G. Garcia-Tsao، CR Parikh، و A. Viola، "آسیب حاد کلیهدر سیروز"کبد شناسی، جلد 48، شماره 6، ص 2064-2077، 2008.

[5] R. Moreau و D. Lebrec، "نارسایی حاد کلیه در بیماران مبتلا به سیروز: دیدگاه‌ها در سن MELD،"کبد شناسی، جلد 37، شماره 2، صفحات 233-243، 2003.

[6] F. Wong، JG O'Leary، KR Reddy، و همکاران، "تعریف اجماع جدید ازآسیب حاد کلیهبه طور دقیق مرگ و میر 30-روزه را در بیماران مبتلا به سیروز همراه با عفونت پیش بینی می کند."دستگاه گوارش، جلد 145، شماره 6، صفحات 1280.e1–1288.e1، 2013.

[7] PT Murray، RL Mehta، A. Shaw، و همکاران، "استفاده بالقوه از نشانگرهای زیستی درآسیب حاد کلیه: گزارش و خلاصه توصیه های دهمین کنفرانس همفکری ابتکار عمل کیفیت دیالیز حاد"کلیهبین المللی، جلد 85، شماره 3، صفحات 513-521، 2014.

[8] WK Han، V. Bailly، R. Abichandani، R. Thadhani، و JV Bonventre، "آسیب کلیهمولکول-1 (KIM-1): یک نشانگر زیستی جدید برای آسیب لوله پروگزیمال کلیه انسان،کلیه بین المللی، جلد 62، شماره 1، صفحات 237-244، 2002.

[9] SG Coca، GN Nadkarni، AX Garg، و همکاران، "اولین ادرار پس از عملآسیب کلیهنشانگرهای زیستی و ارتباط با مدت زمان AKI در گروه TRIBE-AKI."PLoS One، جلد 11، نه 8، شناسه مقاله e0161098، 2016.

[10] C. Looze، D. Yui، L. Leung، و همکاران، "نمونه پروتئومی اگزوزوم های پلاسمای انسانی PPAR را شناسایی می کند.c به عنوان یک پروتئین مرتبط با اگزوزوم،ارتباطات تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیکی، جلد 378، شماره 3، صفحات 433-438، 2009.

[11] J. Conde-Vancels، E. Rodriguez-Suarez، N. Embade، و همکاران، "ویژگی و مشخصات پروتئومی جامع اگزوزوم های ترشح شده توسط سلول های کبدی."مجله تحقیقات پروتئوم، جلد 7، نه 12، صفحات 5157-5166، 2008.

[12] GI Lancaster و MA Febbraio، "قاچاق وابسته به اگزوزوم HSP70،"مجله شیمی بیولوژیکی، جلد 280، شماره 24، صفحات 23349–23355، 2005.

[13] GI Lancaster و MA Febbraio، "مکانیسم‌های آزادسازی HSP72 سلولی ناشی از استرس: پیامدهایی برای افزایش ناشی از ورزش در HSP72 خارج سلولی،"ایمونولوژی ورزشمرور، جلد 11، صفحات 46-52، 2005.

[14] JPJJ Hegmans، PJ Gerber، و BN Lambrecht، "Exosomes" درپروتئومیکس عملکردی، جلد 484، صفحات 97-109، Humana Press، شهر نیویورک، نیویورک، ایالات متحده آمریکا، 2008.

[15] R. Zhan، X. Leng، X. Liu، و همکاران، "پروتئین شوک حرارتی 70 از سلول های اندوتلیال توسط یک مسیر غیر کلاسیک شامل اگزوزوم ها ترشح می شود."ارتباطات تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیکی، جلد 387، شماره 2، صفحات 229-233، 2009.

[16] RL Mehta، JA Kellum، SV Shah، و همکاران، "آسیب حاد کلیهشبکه: گزارش یک ابتکار برای بهبود نتایج در آسیب حاد کلیه،بحرانی مراقبت، جلد 11، نه 2، ص. R31، 2007.

[17] SP Ramachandra Rao، MA Matthias، C. Kokoy-Mon-dragonet al.، "تجزیه و تحلیل پروتئومی اگزوزوم های ادرار پاسخ توبول کلیوی به کلونیزاسیون لپتوسپیرال را در موش های آزمایشگاهی آلوده نشان می دهد."بیماری های استوایی نادیده گرفته شده PLoS، جلد 9، نه 3، مقاله e0003640، 2015.

[18] HC Christianson، KJ Svensson، TH van Kuppevelt، J.-P. لی و ام. بلتینگ، "اگزوزوم های سلول سرطانی برای درونی سازی خود به پروتئوگلیکان های هپاران سولفات سطح سلول وابسته هستند.

و فعالیت عملکردی"اقدامات از را ملی فرهنگستان علوم، جلد 110، شماره 43، صفحات 17380-17385، 2013.

[19] A. Shevchenko، M. Wilm، O. Vorm و M. Mann، "توالی سنجی طیف سنجی جرمی پروتئین ها از ژل های پلی آکریل آمید رنگ آمیزی شده با نقره."شیمی تجزیه، جلد 68، شماره 5، صص 850-858، 1996.

[20] F. Brambilla، F. Lavatelli، D. Di Silvestre، و همکاران، "پروفایل پروتئین تفنگ ساچمه ای بافت چربی انسان و تغییرات آن در رابطه با آمیلوئیدوزهای سیستمیک."مجله تحقیقات پروتئوم، جلد 12، شماره 12، صفحات 5642-5655، 2013.

[21] AC Paoletti، TJ Parmely، C. Tomomori-Sato، و همکاران، "تحلیل کمی پروتئومی کمپلکس‌های میانجی پستانداران متمایز با استفاده از عوامل فراوانی طیفی نرمال شده،"مجموعه مقالات آکادمی ملی علوم، جلد 103، شماره 50، صفحات 18928-18933، 2006.

[22] J. Xia، R. Mandal، IV Sinelnikov، D. Broadhurst، و

DS Wishart، "MetaboAnalyst 2.{1}}یک سرور جامع برای تجزیه و تحلیل داده های متابولومیک،"تحقیقات اسیدهای نوکلئیک، جلد 40، شماره W1، صفحات W127–W133، 2012.

[23] J. Xia، N. Psychogios، N. Young، و DS Wishart، "MetaboAnalyst: یک وب سرور برای تجزیه و تحلیل و تفسیر داده های متابولومیک،"تحقیقات اسیدهای نوکلئیک، جلد 37، شماره S2، صفحات W652–W660، 2009.

[24] SPR Rao، R. Wassell، MA Shaw و K. Sharma، "پروفایل زیرپروتئوم های سلولی مزانژیال انسانی نقش کالمودولین را در جذب گلوکز نشان می دهد."مجله آمریکاییازفیزیولوژی-کلیوی فیزیولوژی، جلد 292، شماره 4، صفحات F1182–F1189، 2007.

[25] SP Ramachandra Rao، Y. Zhu، T. Ravasi، و همکاران، "Pirfenidone محافظت کننده مجدد دربیماری کلیه دیابتی"مجله انجمن نفرولوژی آمریکا، جلد 20، شماره 8، صفحات 1765-1775، 2009.

[26] یو. ریس و بی. ساکتور، "کلیهمالتاز غشایی مرزی برس: تصفیه و خواص، آرشیو بیوشیمی و بیوفیزیک، جلد 209، شماره 2، صفحات 342-348، 1981.

[27] ب. ساکتور، "ترهالاز و انتقال گلوکز در پستاندارانکلیهو روده،" مجموعه مقالات آکادمی ملی علوم، جلد 60، شماره 3، صفحات 1007-1014، 1968.

[28] SJ Berger و B. Sacktor، "جداسازی و خصوصیات بیوشیمیایی مرزهای قلم مو از خرگوشکلیه," مجله زیست شناسی سلولی، جلد 47، شماره 3، صفحات 637-645، 1970.

[29] D. Kerjaschki، L. Noronha-Blob، B. Sacktor، و

MG Farquhar، "Microdomains از ترکیب متمایز گلیکوپروتئین درکلیهلبه برس لوله پروگزیمال"مجله زیست شناسی سلولی، جلد 98، شماره 4، صفحات 1505-1513، 1984.

[30] D. Povero، A. Eguchi، H. Li و همکاران، "وزیکول های خارج سلولی در گردش با پروتئوم خاص و میکروRNA های کبدی نشانگرهای زیستی بالقوه ای برای آسیب کبدی در بیماری کبد چرب تجربی هستند."PLoS One، جلد 9، نه 12، شناسه مقاله e113651، 2014.

[31] R. Hernaez, E. Sola`, R. Moreau, and P. Gine`s, "نارسایی حاد کبدی مزمن: یک به روز رسانی"روده، جلد 66، شماره 3، صفحات 541-553، 2017.

[32] T. Pisitkun، R.-F. شن، و MA Knepper، "شناسایی و مشخصات پروتئومی اگزوزوم ها در ادرار انسان،"مجموعه مقالات آکادمی ملی علوم، جلد 101، شماره 36، صص 13368–13373، 2004.

[33] PA Gonzales، T. Pisitkun، JD Hoffert، و همکاران، "پروتئومیکس در مقیاس بزرگ و فسفوپروتئومیکس اگزوزوم های ادراری."مجله از را آمریکایی جامعه از نفرولوژی، جلد 20، شماره 2، صص 363-379، 2009.