پرفیوژن کلیوی Normothermic Ex-vivo طولانی مدت: تاثیر ترکیب پرفیوژن

edmund.chen@wecistanche.com

خلاصه

پرفیوژن ماشین نورموگرمیک (NMP) اهداکنندهکلیه ها فرصتی را برای بهبود حفظ پیوند و ارزیابی عینی اندام پیش از پیوند در خارج از بدن فراهم می کند. در حال حاضر، بسیاری از محلول های پرفیوژن برای NMP کلیوی وجود دارد. این مطالعه با هدف ارزیابی چهار محلول پرفیوژن مختلف در کنار یکدیگر و تعیین تأثیر ترکیبات مختلف پرفیوژن بر اندازه‌گیری‌ها انجام شد.کلیهپارامترهای پرفیوژن خوککلیه هاو خون از یک کشتارگاه به دست آمد.کلیه هاتحت NMP در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 7 ساعت، با 4 محلول پرفیوژن مختلف (n=5 در هر گروه). گروه 1 شامل گلبول های قرمز (RBCs) و محلول پرفیوژن بر اساس محیط E ویلیامز بود. گروه 2 شامل گلبول های قرمز، آلبومین و یک ترکیب الکترولیت متعادل بود. گروه 3 حاوی گلبول های قرمز و یک محیط مبتنی بر محلول NMP بالینی بریتانیا بود. گروه 4 حاوی گلبول های قرمز و یک محیط مورد استفاده در آزمایشات پرفیوژن 24-ساعته بود. الگوهای جریان NMP برای راه‌حل‌های 1 و 2 مشابه بودند، راه‌حل‌های 3 و 4 نرخ جریان کمتر اما پایدارتری را نشان دادند. مواد واکنش دهنده تیوباربیتوریک اسید در محلول 1 و 4 به طور معنی داری بیشتر از سایر گروه ها بود. سطوح نشانگر آسیب N-استیل{16}D گلوکوزامینیداز در محلول 2 به طور قابل توجهی کمتر از محلول 3 و 4 بود. این مطالعه نشان می دهد که ترکیب پرفیوژن در طول NMP به طور قابل توجهی بر پارامترهای پرفیوژن و آسیب اندازه گیری شده تأثیر می گذارد و بنابراین بر تفسیر تأثیر می گذارد. نشانگرهای زنده ماندن بالقوه تحقیقات بیشتر برای بررسی تأثیرات فردی اجزای اصلی پرفیوژن برای تعیین بهینه ترین شرایط در طول NMP و در نهایت ایجاد معیارهای ارزیابی جهانی اعضا مورد نیاز است.

کلید واژه ها:عملکرد کلیه؛ کلیه; آسیب کلیه؛ کلیه پرفیوژن؛ لوله های کلیوی

سیستانچ عملکرد کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

مقدمه

در سراسر جهان، اهدا کننده استانداردکلیهروش نگهداری سردخانه استاتیک (SCS) است. با این حال، در هلند پرفیوژن دستگاه هیپوترمیک (HMP) از نظر بالینی برای حفظ تمام اهداکنندگان فوت شده استفاده می شود.کلیه ها.HMP کاهش عملکرد پیوند با تاخیر و بهبود 1- و 3-سال را نشان داد.کلیهبقای پیوند در مقایسه با حفظ SCS [1،2]. به منظور به حداقل رساندن شکاف اساسی بین عرضه و تقاضای اهداکنندهکلیه ها،اهداکننده متوفی غیربهینهکلیه هابه طور فزاینده ای مورد استفاده قرار می گیرند. با توجه به افزایش استفاده از این اهداکننده با کیفیت کمترکلیه ها،ایجاد استراتژی های بهینه شده بیشتر برای ارزیابی قوی و عینی قبل از پیوند و همچنین حفظ، بسیار مهم است. استفاده از پرفیوژن دستگاه نورموترمیک (NMP) برای این اهداکنندگان فوت شدهکلیه هابه طور فزاینده ای مورد توجه قرار می گیرد. مطالعات پیش بالینی نشان داده است که NMP ممکن است منجر به نتیجه بهتر پیوند در مقایسه با SCS به تنهایی شود [3]. به عنوان اهدای پس از مرگ قلبی و معیارهای گسترده اهدا کنندهکلیه هادر مقایسه با اندام‌هایی که از روش‌های اهداکننده معیارهای استاندارد به دست می‌آیند، تحمل کمتری نسبت به ذخیره‌سازی هیپوترمی دارند، اندام‌های اهداکننده با کیفیت حاشیه‌ای می‌توانند از حفظ NMP بهره ببرند [4،5]. در حال حاضر، تنها یک بالینیکلیهکارآزمایی NMP در انگلستان با یک دوره پرفیوژن نسبتاً کوتاه قبل از پیوند 1 ساعت انجام می شود [6]. با این حال، برای ارزیابی کافی اندام و احیاء، زمان NMP طولانی تر به طور قابل تصوری ضروری است [7]. این روش فرصتی را برای تشخیص اعضای قبل از پیوند، بهبود حفظ و مداخلات ex-vivo قبل از پیوند برای بهبود پس از پیوند فراهم می کند.عملکرد کلیه. امروزه، بسیاری از مراکز پیوند شروع به سرمایه گذاری در این استراتژی پرفیوژن ex-vivo نورموترمیک امیدوارکننده کرده اند. در میان این مراکز، طیف گسترده ای از محلول های پرفیوژن NMP وجود دارد. ناهمگونی زیاد در ترکیب می تواند مانع از هدف نهایی برای تعریف معیارهای ارزیابی NMP یکنواخت و قوی شود. این ناهمگونی تا حدی ناشی از درک محدود فعلی از فرمول دقیق یک محلول NMP است. به احتمال زیاد، یک محلول پرفیوژن نرموترمیک باید حاوی یک حامل اکسیژن، یک کلوئید و یک ترکیب الکترولیت متعادل باشد [8]. این ترکیب همچنین به مدت NMP بستگی دارد، زیرا دوره های طولانی تر پرفیوژن به ترکیبات پرفیوژن بهینه برای حفظ یک محیط نزدیک فیزیولوژیکی پایدار در کل پرفیوژن نیاز دارد. این مطالعه چهار محلول پرفیوژن نورموترمیک مختلف، سه محلول رایج موجود که هیچ تغییری در آنها ایجاد نشد و یک محلول جدید طراحی شده را ارزیابی کرد. ما NMP طولانی مدت (7 ساعت) را در خوک انجام دادیمکلیهمدل اهدا هدف ما این بود که تجزیه و تحلیل کنیم که ترکیبات مختلف پرفیوژن تا چه حد بر تعادل الکترولیت تاثیر می گذارد.عملکرد کلیهو نشانگرهای آسیب در طول NMP اندازه گیری شد.

مواد و روش ها

کلیه و بازیابی خونخوک زندهکلیه هااز خوک‌های بومی بومی (بذر؛ نوع Topigs 20) و خون از یک کشتارگاه محلی (Kroon Vlees، گرونینگن، هلند) به دست آمد. خوک‌ها با شوک الکتریکی دو زمانی گیج شدند و متعاقباً طبق روش‌های عادی کشتارگاه خارج شدند. خون اتولوگ جمع آوری شد و هپارین (5000 واحد بین المللی در هر میلی لیتر (IU)، LEO1 pharma، Ballerup، دانمارک) برای جلوگیری از لخته شدن خون اضافه شد.کلیه هاپس از مرگ خوک در گردش خون به سرعت بازیابی شدند، که منجر به حدود 20 دقیقه ایسکمی گرم (WI) قبل از نگهداری سرد شد. پس از دوره WI،کلیه هابا 180 میلی‌لیتر کلرید سدیم (NaCl) (0.9 درصد) (باکستر BV، اوترخت، هلند) در دمای 4 درجه سانتی‌گراد شسته و سرد شدند، که نشان‌دهنده شروع ایسکمی سرد (CI) بود.کلیه هاعاری از بافت چربی اضافی تشریح شد و عروق خونی در معرض دید قرار گرفتند. بعد،کلیه هابه a متصل شدندکلیهدستگاه Assist Transport HMP (Organ Assist، گرونینگن، هلند). این دستگاه HMP حفظ شده استکلیه هابا محلول پرفیوژن دستگاه UW سرد (0–4˚C) (محلول بلزر UW-MP، Bridge to Life Ltd، کلمبیا، SC) به مدت 2 تا 4 ساعت با استفاده از HMP ضربانی اکسیژن‌دار با فشار متوسط ​​شریانی 25 میلی‌متر جیوه . خون اتولوگ هپارینه شده با استفاده از فیلتر لکوسیتی (BioR 02 به علاوه BS PF، Fresenius Kabi، Zeist، هلند)، لکوسیت تخلیه شد، سانتریفیوژ شد و پس از آن، پلاسمای رویی خارج شد.

محلول های پرفیوژنچهار گروه آزمایشی (n=5 در هر گروه) با یک راه حل NMP متفاوت در هر گروه تعریف شد. مقدم برکلیهبازیابی، محلول پرفیوژنی که در طول آزمایش استفاده می‌شود، تعیین شد. هر چهار محلول پرفیوژن حاوی گلبول های قرمز خوک اتولوگ (RBCs) بودند، اما ترکیب هر محیط NMP متفاوت بود (جدول 1). در آزمایشگاه ما، تجربه کافی با پرفیوژن گوشت خوک به دست آمده استکلیه هاو کبد جوندگان با استفاده از ویلیامز Medium E (WME) (Life Technologies Ltd، Bleiswijk، هلند) [9-11]. این پرفیوژن حاوی گشادکننده عروق نیست و ما تصمیم گرفتیم آن را تولید نکنیم

تغییرات در محلول اولیه محلول پرفیوژن گروه 2 توسط گروه ما ساخته شد تا حاوی الکترولیت ها در غلظت های فیزیولوژیکی باشد و فشار اسمزی کلوئیدی فیزیولوژیکی را بر روی غشای گلومرولی اعمال کند. پرفیوژن گروه 3 یک محلول NMP بریتانیایی بدون کلوئید بود که در حال حاضر در یک کارآزمایی تصادفی کنترل شده در مقایسه NMP 1 ساعته با SCS اهداکننده مرده انسانی مورد استفاده قرار می گیرد.کلیه هادر بریتانیا [12]. همانطور که برای گروه 4، این محلول با موفقیت در مطالعه خود پیوند خوک در آرهوس، دانمارک [13] استفاده شد. این بر اساس عطری است که توسط Weissenbacher و همکاران طراحی شده است، که انسان دور ریخته شده را با هم ترکیب کردند.کلیه هادر طول 24 ساعت [7]. علاوه بر ترکیبات فوق، پرفیوژن در گروه 1 با کاهش غلظت به زیر 4 میلی مول در لیتر، با گلوکز تکمیل شد. ادرار تولید شده بود

ساعتی با WME جایگزین شد. در گروه 2 یک پمپ تزریق سرنگی تغذیه کامل تزریقی (SmofKabiven) (Fresenius Kabi Nederland BV, Zeist, Netherlands) را با سرعت 0.5 میلی‌لیتر / انسولین دستی (10{{1{) تزریق کرد. {12}}}}0 IU، همچنین Novo Nordisk A/S) با سرعت 0.005 میلی لیتر در ساعت. پس از هر ساعت، تولید ادرار در گروه 2 برای حفظ تعادل الکترولیت پایدار در گردش مجدد قرار گرفت. در گروه سوم، 170 میلی‌لیتر گلبول قرمز خالص با 120 میلی‌لیتر سالین، آدنین، گلوکز و مانیتول (SAG-M) مخلوط شد که منجر به هماتوکریت 0.5-0.65 لیتر در لیتر شد، تا ترکیب یک واحد معمولی مورد استفاده بالینی را تقلید کند. گلبول های قرمز (که در پرفیوژن NMP بالینی بریتانیا استفاده می شود). در طی این آزمایش‌ها، از سه پمپ تزریق سرنگی برای تزریق فللان (GlaxoSmithKline BV، Zeist، هلند) با سرعت 5 میلی‌لیتر در ساعت، گلوکز 5 درصد (باکستر BV، اوترخت، هلند) با سرعت 4 میلی‌لیتر در ساعت استفاده شد. ساعت و مخلوطی از 150 میلی‌لیتر سینتامین-17 10 درصد (باکستر بهداشت، نورفولک، انگلستان)، 6 میلی‌لیتر بی کربنات سدیم (NaHCO 3) 8.4 درصد (B. Braun Melsungen AG، Melsungen، آلمان) 30 IU انسولین (1000 IU، Novo Nordisk A/S، Bagsværd، Den-mark) و Cernevit (باکستر BV، اوترخت، هلند) با سرعت 20 میلی لیتر در ساعت، طبق پروتکل مطالعه بالینی فعلی انگلستان. تولید ادرار ساعتی با رینگر لاکتات (همچنین باکستر BV) جایگزین شد. در طول NMP از گروه چهارم، یک پمپ تزریق سرنگ وراپامیل (2.5 میلی گرم در میلی لیتر، همچنین Sandoz BV) را با سرعت 0.3 میلی لیتر در ساعت در سالین انفوزیون کرد. تولید ادرار نیز در این گروه پس از هر ساعت برای حفظ تعادل الکترولیت پایدار در گردش مجدد قرار گرفت. حجم نمونه در هر گروه با اجزای مختلف تصحیح شد. حجم در گروه 1 با WME، در گروه 2 با محیط پرفیوژن، در گروه 3 با رینگر لاکتات و در گروه 4 با استروفوندین1 (همچنین B. Braun) جایگزین شد.

راه اندازی NMPتنظیم پرفیوژن با آنچه قبلاً توسط گروه ما توضیح داده شد یکسان بود [14]. راکلیه هابه روش ضربانی آسینوسی، با فرکانس 60 پالس در دقیقه، تنظیم آتا، تنظیم بدون فیدبک، فشار 110/70 میلی‌متر جیوه و اکسیژن‌رسانی با 95 درصد اکسیژن / 5 درصد دی اکسید کربن (کربوژن) در طول آزمایش‌ها پرفیوژن شدند. این سطح اکسیژن فوق فیزیولوژیکی رویه استاندارد در هر چهار پروتکل موجود است. پرفیوژن توسط یک رابط الکترونیکی سفارشی و نرم افزار کنترل (LabView Software، National Instruments Netherlands BV، Woerden، هلند) کنترل می شد. شکل شماتیک مدار پرفیوژن گرما گرما در شکل 1 نشان داده شده است.

تجزیه و تحلیل ادرار و پرفیوژنهر ساعت نمونه‌های پرفیوژن شریانی و ادرار گرفته شد. در گروه 2 و 4 که ادرار در آنها گردش مجدد می شد، نمونه های پرفیوژن قبل از گردش مجدد ادرار گرفته شد. نمونه های گاز خون شریانی پرفیوژن پس از 0، 240 و 420 دقیقه NMP آنالیز شد. پارامترهای پرفیوژن هر نیم ساعت ثبت شد. غلظت لاکتات دهیدروژناز (LDH) و آسپارتات آمینوترانسفراز (ASAT)، سدیم، پتاسیم، گلوکز و کراتینین با سنجش بالینی استاندارد در پرفیوزیت اندازه‌گیری شد. کلیرانس کراتینین، دفع کسری کراتینین در هر 100 گرم (FE کراتینین/100 گرم)، و دفع کسری سدیم (FENa پلاس) برای تعیین محاسبه شد.عملکرد کلیه. معادلات را می توان در ضمیمه S1 یافت. هر دو N-استیل- -D گلوکوزامینیداز (NAG) (همچنین Sigma-Aldrich)، به عنوان نشانگرکلیهاختلال عملکرد/آسیب لوله‌ای، و مواد واکنش‌دهنده اسید تیوباربیتوریک (TBARS) (پراکسیداسیون لیپیدی-مالون دی‌آلدئید (MDA)) کیت سنجش، Sigma-Aldrich BV، Zwijndrecht، هلند)، برای تعیین کمیت استرس اکسیداتیو، در عطر اندازه‌گیری شد.

بافت شناسیبیوپسی سوزنی قسمت فوقانیقشر کلیهقبل از شروع NMP گرفته شد. در پایان هر آزمایش، نمونه‌های بافت جراحی از قشر فوقانی جمع‌آوری شد. این بیوپسی ها بودند

تحلیل آماریتجزیه و تحلیل داده ها با استفاده از GraphPad Prism نسخه 8.3.1 (نرم افزار GraphPad Inc., La Jolla, CA, USA) انجام شد. برای همه متغیرهای اندازه گیری طولی پیوسته، مانند ASAT و LDH، سطح زیر منحنی (AUC) محاسبه شد. در صورتی که داده ها به طور نرمال توزیع شده باشند (آزمون شاپیرو ویلک) و دارای همگنی واریانس باشند (با استفاده از آزمون بارتلت) از یک آنالیز واریانس یک طرفه با مقایسه های متعدد برای مقایسه مقادیر AUC بین گروه ها استفاده شد. در صورت عدم موفقیت داده ها در این فرضیات از آزمون کروسکال-والیس با آزمون مقایسه های چندگانه دان استفاده شد. مقادیر p دو طرفه 0.05 یا کمتر برای نشان دادن معنی‌داری آماری در نظر گرفته شد.

نتایج

پارامترهای پرفیوژندر جدول 2، داده ها (میانگین، حداقل و حداکثر) در مورد ایسکمی گرم و سرد، مدت زمان و وزن HMP قبل از شروع و بعد از NMP و همچنین وزن دلتا (تفاوت وزن در t=420 در مقابل t {{2 }}) ارائه شده است. وزن دلتا در گروه 1 به طور معنی داری بیشتر از گروه 2 بود (041/0=0). تفاوت معنی داری بین مقادیر تمامی گروه های آزمایشی وجود نداشت. در طول NMPکلیهجریان شریانی در طی 60 دقیقه اول خونرسانی مجدد در گروه 1 و 2 افزایش یافت. پس از 60 دقیقه نرخ جریان به طور معمول شروع به کاهش کرد. پرفیوژن در گروه 3 و 4 با مقادیر جریان کمتر شروع شد اما جریان ثابت تری را در سراسر NMP نشان داد. مقادیر نهایی پس از 7 ساعت NMP تقریباً 75 میلی لیتر در دقیقه / 100 گرم در همه گروه ها بود (شکل 2).

تجزیه و تحلیل ادرار و پرفیوژنداده های فردی در مورد پارامترهای عملکردی و آسیب در سراسر پرفیوژن را می توان در جدول 3 یافت.عملکرد کلیه.گروه 3 بالاترین سطوح برون ده ادرار را نشان داد (شکل 3). دیورز تجمعی در گروه 3 در مقایسه با گروه 1 (p=0.003)، گروه 2 (p <0.001) و="" گروه="" 4="" (p="0.008)" به="" طور="" معنی="" داری="" بیشتر="" بود.="" برخی="">کلیه هادر گروه 2 در t=180 و t=300 ادرار تولید نکردند، که منجر به کاهش میانگین سطح تولید تجمعی ادرار در t=360 و t=420 شد. سطوح سدیم و پتاسیم به طور قابل توجهی بین گروه ها متفاوت بود (شکل 4). سطوح در t=0 مقادیر اولیه اولیه در پرفیوژن را نشان می دهد. خصوصاً گروه 3 بسیار خوب بود

در طی پرفیوژن، pH در گروه 3 بدون تثبیت کاهش یافت، در حالی که گروه های دیگر پس از 7 ساعت NMP به سطح متعادل تری یعنی تقریباً 7.4 رسیدند (شکل 5). کلیرانس کراتینین در همه گروه ها کم بود (شکل 6A و 6B). با این وجود، نسبت به گروه 3 به طور معنی داری بیشتر از گروه 2 بود (039.0=0 p). دفع جزئی کراتینین در هر 100 گرم (شکل 6C و 6D) در گروه 3 در مقایسه با گروه 1 (026.0.0=0)، گروه 2 (0.017. p=0.045). FENa plus در همه گروه‌ها بالا بود، که نشان می‌دهد عملکرد لوله‌ای به شدت در این گروه‌ها آسیب دیده است (شکل 6E و 6F)کلیه ها. FENa plus در گروه 3 در مقایسه با گروه 2 (p=0.037) و گروه 4 (p=0.019) به طور قابل توجهی بالاتر بود. همه گروه های دیگر تفاوت معنی داری نداشتند.آسیب کلیوی.سطوح ASAT در طول NMP (شکل 7A و 7B) به عنوان نشانگری برای آسیب سلولی عمومی مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. میانگین AUC برای هر گروه تعیین شد. سطوح در گروه 4 به طور قابل توجهی بالاتر از گروه 1 (p=0.022) و گروه 2 (p=0.011) بود. سطوح LDH همچنین در پرفیوژن به عنوان نشانگر آسیب عمومی اندازه گیری شد (شکل 7C و 7D). یک AUC محاسبه شد که کمترین سطوح LDH را در گروه‌های 1 و 2 نشان داد. گروه 2 در مقایسه با گروه 4 به‌طور معنی‌داری کمتر بود (020/0=0). گروه 1 به طور قابل توجهی سطوح پایین تری نسبت به گروه 4 نشان داد (022.0.0=0 p). سطوح NAG در گروه 3 در مقایسه با گروه 1 (0.043.=0) و گروه 2 (006.0.=0) به طور قابل توجهی بالاتر بود (شکل 8A و 8B). TBARS، غلظت مالون دی آلدئید (MDA)، در هر چهار گروه به عنوان نشانگر پراکسیداسیون لیپیدی اندازه گیری شد (شکل 8C و 8D). سطوح MDA در گروه 1 در مقایسه با گروه 2 (003/0.=0) و گروه 3 (001/0>p) به طور قابل توجهی بالاتر بود. گروه 2 سطوح MDA به طور قابل توجهی پایین تری نسبت به گروه 4 نشان داد (006/0=0). گروه 3 به طور معنی داری سطوح پایین تری نسبت به گروه 4 نشان داد (ص<>

بافت شناسی

نمودارهای نقطه ای در شکل 9 نشان می دهدکلیهامتیازات آسیب توبولی/ATN، اتساع لوله، و اتساع گلومرولی قبل از شروع NMP (t {{0}}) و پس از 7 ساعت NMP (t=420). مقادیر اولیه نکروز بافت‌شناسی و اتساع لوله‌ای بین گروه‌ها قابل مقایسه بود و تنها تفاوت‌های حاشیه‌ای در نمرات نقطه پایانی داشتند. اتساع گلومرولی در t=420 در گروه 2 به طور قابل ملاحظه ای کمتر از 3 گروه دیگر بود. ارقام بافت شناسی در هر گروه را می توان در القای برابری S1 Fig. Bax و Bcl{8} یافت، شاخص هایی برای بیان ژن پرو و ​​ضد آپوپتوز، به ترتیب، هر دو تغییر در سطوح NMP نقطه پایانی را در مقایسه با سطوح نشان دادند. t=0 (شکل 10). بیان ژن دلتا باکس (تفاوت بین t=0 و t=420) در همه گروه ها محاسبه شد و در گروه 1 به طور معنی داری بیشتر از گروه 2 (p=0.046)، گروه 3 بود. (p <0.001) و="" گروه="" 4="" (p="0.003)." بیان="" bcl{26}}="" در="" همه="" گروه‌ها="" پس="" از="" 7="" ساعت="" پرفیوژن="" کاهش="" یافت="" و="" تفاوت="" معنی‌داری="" بین="" گروه‌ها="" مشاهده="">

بحث

علاقه عمومی درکلیهتکنیک‌های پرفیوژن با ماشین ex-vivo در حال افزایش است، اما شواهد بالینی تنها با یک کارآزمایی بالینی NMP محدود باقی می‌ماند. مطالعات پیش بالینی گسترده ای برای بررسی پتانسیل NMP انجام شده است. انبوهی از مختلفکلیهپرفیوزیت های نورموترمیک در بین گروه های تحقیقاتی مختلف وجود دارد. با این حال، این سوال که ترکیب پرفیوژن تا چه حد تأثیر می گذاردعملکرد کلیهو چگونگی تأثیر آن بر تفسیر نشانگرهای قابلیت زنده ماندن بالقوه باقی مانده است. بنابراین، این مطالعه تاثیر چهار محلول پرفیوژن ex-vivo نورموترمیک مختلف را در کنار یکدیگر بر رویعملکرد کلیهوآسیب کلیهدر طول طولانی مدت NMP با استفاده از خوککلیهمدل اهدای پس از مرگ گردش خون

ارزیابی جدا شدهعملکرد کلیهقبل از پیوند هاسگود و همکارانش اولین شواهد بالینی از امکان سنجی ارزیابی زنده ماندن قبل از پیوند را ارائه کردندکلیهNMP محلول پرفیوژن آنها در حال حاضر بیشترین استفاده را در طول NMP دارد و در ابتدا برای ارزیابی توسعه داده شدعملکرد کلیهقبل از پیوند در یک بازه زمانی 1-2 ساعته [16].کلیه هاپرفیوژن با این محلول معمولاً تولید ادرار بالایی را نشان می دهد [17]. در واقع، بیشترین تولید ادرار در گروه 3 مشاهده شد که مبتنی بر این پرفیوزیت بالینی انگلستان است که منجر به دفع ادراری بیش از حجم گردش خون پرفیوژن در این گروه در طی 7 ساعت NMP شد. از دست دادن مداوم حجم مایع پرفیوژن در گردش باید با افزودن متناوب حجم های مشابه لاکتات رینگر، مطابق با پروتکل بالینی برای این محلول پرفیوژن جبران شود. در مطالعه ما، این منجر به تغییرات قابل توجهی در ترکیب الکترولیت و pH شد، زیرا ادرار در گردش مجدد قرار نمی گرفت. این تولید زیاد ادرار را به احتمال زیاد می توان به عدم وجود کلوئید در این محلول پرفیوژن نسبت داد. محلول های پرفیوژن هر سه گروه دیگر حاوی مقدار قابل توجهی آلبومین بود. در فضای داخل عروقی، آلبومین جزء اصلی است که فشار اسمزی کلوئیدی نرمال را حفظ می کند [18]. تعادل بین فشار هیدرواستاتیک و فشار اسمزی کلوئیدی منجر به نرخ اولترافیلتراسیون فیزیولوژیکی بر روی غشای گلومرولی می شود [19]. کاتس و همکاران نشان داد که تولید ادرار در طول NMP با عملکرد پس از پیوند ارتباطی ندارد. آنها فرض کردند که تولید ادرار تا حد زیادی تحت تأثیر ترکیب پرفیوژن، به ویژه فشار انکوتیک و اسمولاریته است، که با نتایج ما مطابقت دارد [20].

CISTANCHE نارسایی کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

ارگان مسئول اصلی تنظیم الکترولیت ها استکلیهاما شواهدی وجود دارد که نشان می دهدکلیهخود نیز از تعادل در الکترولیت ها سود می برد. ثابت شده است که عدم تعادل در پتاسیم و به طور خاص هیپوکالمی می تواند منجر به تغییرات مختلفی درعملکرد کلیهاز جمله اختلال در حمل و نقل لوله ای، اختلال در توانایی تمرکز ادرار، تغییر در بازجذب سدیم و اسیدوز داخل سلولی [21-23]. Weissenbacher et al. پیشنهاد استفاده از گردش مجدد ادرار در طول NMP. آنها نشان دادند که نگهداری مناسب از حجم پرفیوژن و هموستاز را در انسان دور ریخته شده تسهیل می کندکلیه ها، حتی پس از 24 ساعت NMP [7]. غلظت آلبومین اندازه گیری شده در پرفیوژن با گذشت زمان در طول پرفیوژن کاهش یافت. این کاهش به احتمال زیاد ناشی از چسبیدن آلبومین به لوله پلاستیکی مدار پرفیوژن است و تنها مقدار کمی را می توان به از دست دادن ادرار تولید شده نسبت داد که در سایر مطالعات NMP نیز مشاهده شده است [24]. این از دست دادن آلبومین در ادرار ممکن است با آسیب ناشی از ایسکمی گرم به سلول‌های اندوتلیال همراه با اختلال در دیافراگم فیلتر که منجر به پروتئینوری می‌شود، توضیح داده شود، که با سطوح مشاهده‌شده آلبومینوری در طول NMP همخوانی دارد [25].

ما نمی توانیم به طور کامل مکانیسم تفاوت های بین گروه هایی را که در آنها مشاهده کردیم توضیح دهیمکلیهافزایش وزن در طول NMP بررسی بافت شناسی در مناطق احتمالی تشکیل ادم تعیین کننده نبود. تحقیقات بیشتر برای روشن شدن مکانیسم های بالقوه چند عاملی افزایش وزن در رابطه با محلول پرفیوژن مورد استفاده مورد نیاز است. پارامترهای پرفیوژن مختلف، که در آن اندازه گیری شدکلیهجریان بارزترین تفاوت ها را نشان داد.کلیویجریان در گروه های 3 و 4 پایدارترین سطوح را در طول دوره 7-ساعت NMP حفظ کرد. محلول‌های این گروه‌ها با گشادکننده عروق تکمیل شد، در حالی که محلول‌های دو گروه اول مکمل نبود. گشادکننده‌های عروق درون‌زا باعث آرامش عضلات صاف عروق می‌شوند و در نتیجه جریان خون منطقه‌ای را تنظیم می‌کنند [26]. از آنجایی که گروه 1 و 2 با یک گشادکننده عروق تکمیل نشدند، اسپاسم عروقی ممکن است منجر به کاهش شود.کلیهجریان شریانی علاوه بر این، شواهدی وجود دارد که جریان مدولاری و قشر مغز را می توان به صورت جداگانه تنظیم کرد [27،28]. داده‌های منتشر نشده اولیه از گروه ما، بر اساس اندازه‌گیری‌های دقیق و کمی جریان MRI عملکردی (ASL) در طول NMP، قویاً از این مکانیسم پشتیبانی می‌کند. در آن آزمایشات،کلیهجریان در ساعت اول NMP عمدتاً مدولار است که پس از بیش از یک ساعت پرفیوژن به جریان قشر مغز منتقل می شود. این توزیع مجدد منطقه ای جریان ممکن است اوج مشاهده شده در پرفیوژن گروه های 1 و 2 را توضیح دهد، احتمالاً به دلیل شانت مدولاری در طول ساعت اول. افزودن یک گشادکننده عروق در شروع NMP می‌تواند یک میکروپرفیوژن عمدتاً قشر مغز را بلافاصله در شروع NMP افزایش دهد و منجر به جریان پایدارتری همانطور که در گروه 3 و 4 مشاهده شد. پرفیوژن در طول NMP مورد نظر است، ممکن است توصیه شود که یک گشادکننده عروق به محلول پرفیوژن اضافه شود. روش دیگر، شستشوی مکرر گلبول های قرمز قبل از پرفیوژن می تواند کاهش یابدکلیهانقباض عروق با کاهش فعالیت منقبض کننده عروق RBC [29].

عملکرد کلیهدر طول NMP به طور قابل توجهی در تمام خوک مختل شدکلیه ها، احتمالاً به دلیل آسیب اولیه ایسکمیک گرم و فقدان مکانیسم های تنظیم کننده هومورال فیزیولوژیکی، مانند مکانیسم هایی که توسط هورمون ضد ادرار و آلدوسترون هدایت می شوند. کلیرانس کراتینین پایین بود و مقادیر بالای FENa plus در همه گروه ها مشاهده شد. افزایش ناگهانی FENa پلاس پس از 3 ساعت NMP در گروه 2 می تواند نتیجه عدم تولید ادرار در چندین مورد باشد.کلیه هادر t=240 و t=300، در حالی که در پایان پرفیوژنکلیه هادوباره شروع به تولید ادرار کرد. افزایش مقادیر FENa پلاس احتمالاً نتیجه نکروز لوله ای است همانطور که در مطالعات قبلی نیز گزارش شده است [30،31]. علاوه بر این، ترخیص کالا از گمرک کراتینین in-vivo و سطوح FENa پلاس تا حد زیادی تحت تأثیر تنظیم هومورال قرار دارند. به عنوان تنظیم هومورال

در طول آزمایشات NMP وجود نداشت، ترخیص کالا از گمرک فیزیولوژیکی کراتینین و سطوح FENa پلاس در تنظیم NMP ما انتظار نمی رود.

برای تعیین کمیت آسیب بهکلیهسلول ها، سطوح ASAT و LDH اندازه گیری شد. بالاترین سطح در گروه 3 و 4 مشاهده شد که نشان می دهد بیشترین آسیب در این دو گروه رخ داده است. کاتس و همکاران نشان داد که افزایش سطح ASAT در طول NMP با پس از پیوند ارتباط داردعملکرد کلیهو بنابراین ASAT ممکن است یک نشانگر زیستی مهم ارزیابی حیات اندام باشد [20]. تأثیر ترکیب‌های مختلف پرفیوژن بر سطوح اندازه‌گیری‌شده ASAT بر اهمیت هماهنگ کردن پروتکل‌های NMP در میان مراکز پیوند تأکید می‌کند تا بتوان تفسیر سازگار از داده‌های NMP را بر مبنای جهانی انجام داد. سطوح NAG، نشانگر تغییر یکپارچگی لوله و آسیب لوله [32،33]، در گروه 3 بالاترین بود که نشان می دهد بیشترین آسیب لوله ای در این گروه رخ داده است. سطوح TBARS برای تعیین کمیت استرس اکسیداتیو در طول پرفیوژن اندازه گیری شد. بالاترین سطوح در گروه 1 و 4 مشاهده شد که نشان می دهدکلیه هادر این گروه ها بیشترین استرس اکسیداتیو را تجربه کردند که می تواند منجر به اختلال در عملکرد سلولی شود [34]. تغییر در نسبت Bax/Bcl-2 پس از 7 ساعت NMP در مقایسه با نمونه‌برداری قبل از NMP احتمالاً نتیجه دوره اولیه ایسکمیک گرم است، نه اثرات مخرب بالقوه در طول NMP. آسیب ایسکمیک به دنبال خونرسانی مجدد متعاقب آن باعث ایجاد یک آبشار آپوپتوز تنظیمی می شود که نقش کلیدی در روند ترمیم لوله پروگزیمال آسیب دیده دارد [35]. اگرچه بسیاری از نشانگرهای آسیب نورموترمیک پیشنهاد شده است، تا به امروز هیچ کدام در یک کارآزمایی بالینی قوی تایید نشده اند. یک مطالعه مرتبط با مجموعه ای از نشانگرهای آسیب امیدوارکننده اندازه گیری شده در طول NMP با پس از پیوندعملکرد کلیهلازم است مشخص شود که کدام نشانگرهای زیستی بالقوه باید در معیارهای ارزیابی زیست محیطی طبیعی گرمازا گنجانده شوند.

سیستانچ عفونت کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

راه‌اندازی NMP ما همراه با یک مدل خوکی از DCD استفاده شدکلیهاهدایی در کدام کشتارگاهکلیه هامورد استفاده قرار گرفتند. محدودیت این مطالعه این است که یک روش کشتارگاهی مبتنی بر تخلیه و به دنبال آن ایست قلبی است، که آن را کمی با یک مدل DCD واقعی که در آن ایست گردش خون ناشی از ایسکمی و/یا نارسایی قلبی است، متفاوت می‌کند. با این حال، ما مشاهده کردیمکلیه هادر مطالعه ما آسیب ایسکمیک مشابه آنچه پس از DCD ایجاد شده بود نشان داد [36،37]. از این رو، ما احساس می کنیم که مدل DCD کشتارگاه حاضر به کاهش استفاده از حیوانات آزمایشگاهی کمک می کند و در عین حال قابلیت اطمینان و تکرارپذیری اساسی را حفظ می کند. اگرچه گروه های آزمایشی ما نسبتاً کوچک بودند، اندازه گروه ما با گروه های دیگر خوک قابل مقایسه استکلیهمطالعات پرفیوژن ماشینی [17،38-40]. پارامترهای پرفیوژن NMP که ما در گروه 3 ثبت کردیم، که بر اساس محلول پرفیوژن بالینی بریتانیایی استفاده شده توسط Hosgood و همکاران بود، نمی توان به طور کامل با نتایجی که قبلا توسط گروه Leicester/Cambridge گزارش شده بود مقایسه کرد [6،12]. در مطالعه ما،کلیه هاتحت یک دوره بسیار طولانی تر NMP قرار گرفتند و با فشار شریانی متوسط ​​بالاتر پرفیوژن شدند. علاوه بر این،کلیه هاتوسط Hosgood et al. پس از پرفیوژن دستگاه پیوند شدند. برای مقایسه کاملاً قابل اعتماد بین چهار محلول پرفیوژن، یک مطالعه آینده باید شامل پیوند باشدکلیه هاپس از NMP زیرا این امکان را برای پیگیری واقعی و ارزیابی عملکردی در داخل بدن فراهم می کند.

در نتیجه، پرفیوژن خوککلیه هابا هر چهار راه حل آزمایش شده امکان پذیر است. با این حال، تفاوت های قابل توجهی بین سطوح الکترولیت وجود دارد،عملکرد کلیهپارامترها و نشانگرهای آسیب در چهار گروه. این تفاوت‌ها، در ترکیب با ناهمگونی فعلی در محلول‌های پرفیوژن کاربردی در بین گروه‌ها، مانع از پیشرفت معیارهای ارزیابی استاندارد NMP می‌شود. ما احساس می کنیم که هم در NMP تجربی و هم بالینی ضروری است که هدف دقیق و مدت زمان مورد نظر NMP را با دقت از قبل مشخص کنیم، زیرا هر کدام می توانند تنظیمات لازم را در پروتکل پرفیوژن و پرفیوژن نیاز داشته باشند. مهم است که تأکید شود که این مطالعه به جای بررسی نقش اجزای پرفیوژن فردی، بر تأثیرات پرفیوژن های موجود به عنوان یک کل بر نتایج اندازه گیری شده متمرکز شده است. مطالعات بیشتری برای روشن کردن تأثیرات و مزایای هر یک از مواد پرفیوژن در طول NMP مورد نیاز است.