مهار تکثیر سلول های کلیه گربه سانان کراندل ریس توسط پیری ناشی از اشعه ایکس

تماس: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ایمیل:audrey.hu@wecistanche.com

Manabu KOIKE^1,2)*، یاسوتومو یوتوکو¹⁾و آکی KOIKE¹⁾

چکیده.به دنبال درمان سرطان در گربه سانان، مقاومت رادیویی و سمیت رادیویی گزارش شده است. بهینه‌سازی دوزهای پرتو برای القای اثرات سیتوتوکسیک فقط به سلول‌های سرطانی و نه سلول‌های طبیعی برای دستیابی به پرتودرمانی مؤثر حیاتی است. با این حال، مکانیسم های مقاومت در برابر تشعشع، سمیت رادیویی، و پاسخ آسیب DNA (DDR) در سلول های گربه هنوز مشخص نشده است. شکستن دو رشته ای DNA (DSB) سمی ترین نوع استDNAآسیب ناشی از اشعه ایکس و پرتوهای یون سنگین مورد استفاده در درمان سرطان. گربه کرندل ریسکلیه(CRFK) سلول ها یکی از پرکاربردترین سلول های گربه در تحقیقات علوم زیستی هستند. در اینجا، ما آن را گزارش می کنیمDSBپیری تحریک شده ناشی از اشعه ایکس در مهار تکثیر مهم است.CRFKسلول ها. ما از طریق سنجش تکثیر سلولی نشان دادیم که اشعه ایکس در دوزهای 2 و 10 گری برای سمی است.CRFKسلول هایی که تابش سلول های CRFK از تکثیر آنها جلوگیری می کند. در سلول‌های CRFK تحت تابش X، افزایش وابسته به دوز در پیری ناشی از DSB با توجه به تغییرات مورفولوژیکی و با استفاده از روش رنگ‌آمیزی گالاکتوزیداز مرتبط با پیری تشخیص داده شد. علاوه بر این، داده های ما نشان داد که درCRFKسلول ها، مسیر اصلی DDR، که شامل فسفوریلاسیون استH2AXدر Ser139، به طور معمول توسط کینازهای ATM فعال می شد. یافته های ما در درک پیری سلولی ناشی از اشعه ایکس و در روشن کردن اثرات بیولوژیکی تشعشع، به عنوان مثال، سمیت، در سلول های گربه مفید است. علاوه بر این، یافته‌های ما نشان می‌دهد که رده سلولی CRFK یک ماتریس عالی برای روشن کردن مقاومت رادیویی و سمیت رادیویی در سلول‌های گربه است.

کلید واژه ها:گربه، حیوان همراه، شکستن دو رشته DNA، تشعشع، پیری

عصاره گیاه سیستانچ دسرتیکولا: بهبود سیستم ایمنی بدن

حیوانات همنشین نقش مهمی را در جامعه بشری ایفا می کنند. به دلیل افزایش طول عمر حیوانات همراه، تعداد سگ ها و گربه های مسن افزایش یافته است و هر ساله بسیاری از سگ ها و گربه ها به تازگی به سرطان مبتلا می شوند [26، 27]. پرتودرمانی که یکی از سه درمان اصلی سرطان است، به طور فزاینده ای در بیمارستان های دامپزشکی به عنوان جایگزینی برای درمان سرطان در سگ ها و گربه ها استفاده می شود [24، 26]. برای دستیابی به موثرترین پرتودرمانی، ایجاد تعادل بین سمیت بین سلول های طبیعی و سرطانی مهم است. در همین حال، اگرچه مقاومت رادیویی در گربه ها و تومورهای گربه به دنبال پرتودرمانی سرطان مشاهده می شود، مکانیسم چنین مقاومتی هنوز مشخص نشده است [24].

مطالعات متعددی در مورد اثرات تابش بر سلول های مشتق شده از انسان و جوندگان انجام شده است [6، 10، 23، 28]. DNA ژنومی هدف بیولوژیکی اصلی درمان هایی است که از پرتوهایی مانند اشعه ایکس و پرتوهای یون سنگین استفاده می کنند. شکست دو رشته ای (DSB) بحرانی ترین نوع آسیب DNA ناشی از تشعشع است. مسیرهای مختلف پاسخ آسیب DNA (DDR) از جمله سنجش آسیب DNA، سیگنال دهی DDR و ترمیم DNA، هنگام وقوع DSB فعال می شوند. در نتیجه، سلول‌ها از آسیب ناشی از تشعشع بهبود می‌یابند و DNA آسیب‌دیده به طور دقیق و کارآمد ترمیم می‌شود [8، 25]. در سلول‌های سگ و گربه، DSB‌ها عمدتاً ممکن است توسط یک مکانیسم ترمیم غیرهمولوگ (NHEJ) ترمیم شوند، که باعث اتصال انتهای DSB هترودایمر Ku متشکل از Ku70 و Ku80 می‌شود [14-17]. با این حال، مطالعات بیشتری برای روشن شدن این موضوع مورد نیاز است. علاوه بر این، در مراحل اولیه ترمیم، کینازها، مانند کینازهای DNA-PK و ATM، فعال می شوند و Ser139 هیستون H2AX در نزدیکی سایت های DSB فسفریله می شوند [5، 6]. این احتمال وجود دارد که DSB ها مکانیسم های مرگ سلولی برنامه ریزی شده، از جمله آپوپتوز و پیری را در زمانی که سلول ها قابل ترمیم نیستند، فعال کنند [9، 32]. مکانیسم های مولکولی DDR های مختلف، مانند ترمیم DNA، در سلول های گربه، ضعیف مورد مطالعه قرار گرفته است.

گربه سانان جاودانه کرندل ریسکلیه(CRFK) رده سلولی یکی از پرمصرف ترین رده های سلولی گربه است. رده سلولی CRFK برای اولین بار در سال 1964 تاسیس شدکلیهقشر یک بچه گربه ماده 12- هفته ای [3]. کراندل و همکاران [3] توضیح داد که رده سلولی CRFK در تحقیقات ویروس گربه و پزشکی تشخیصی مفید است و در تحقیقات سرطان مورد توجه خاص قرار گرفته است. در حال حاضر، رده سلولی CRFK در تحقیقات علوم زیستی، از جمله تحقیقات سرطان و ویروس، ضروری است. بنابراین، درک حساسیت پرتوی سلول‌های CRFK، که مسیرهای مولکولی مختلف آن‌ها مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفته‌اند، برای به دست آوردن اطلاعات تحقیقات اولیه برای روشن کردن مکانیسم‌های مولکولی اثرات بیولوژیکی تشعشع در گربه‌ها مهم است. با این حال، در حال حاضر هیچ گزارشی در مورد اثرات و مکانیسم های تابش بر تکثیر سلول های CRFK وجود ندارد.

در این مطالعه، ما اثرات بیولوژیکی اشعه ایکس بر تکثیر سلول‌های CRFK را بررسی کردیم. یافته های ما نشان می دهد که اشعه ایکس به طور قابل توجهی تکثیر سلول های CRFK را سرکوب می کند. علاوه بر این، نتایج ما نشان داد که سرکوب تکثیر به دلیل افزایش پیری سلولی ناشی از DSB ها بود. علاوه بر این، ما در سلول های CRFK تأیید کردیم که مسیر اصلی DDR به طور طبیعی توسط کینازهای ATM فعال می شود.

عصاره cistanche tubolosa: درمان بیماری کلیوی

مواد و روش ها

کشت سلولی، مواد شیمیایی و اشعه ایکس

سلول های CRFK (HSRRB، اوزاکا، ژاپن) در محیط Eagle اصلاح شده Dulbecco که با 10 درصد سرم جنین گاو همانطور که قبلا توضیح داده شد، کشت داده شدند [17]. سلول های چسبنده با اشعه ایکس با سرعت 1، 2، یا 1{8}} گری و با سرعت دوز 71/0.77-{12}} Gy/min (200 kV/20) تابش شدند. mA با فیلترهای 0.{13}}mm Al و 0.5-mm Cu) با استفاده از Pantak HF320S (Shimadzu، کیوتو، ژاپن) در دمای اتاق، همانطور که در مطالعات قبلی توضیح داده شد [17]. KU{18}}، یک مهارکننده کیناز ATM، از Wako Pure Chemical (اوزاکا، ژاپن) خریداری شد. KU{19}} در DMSO (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) رقیق شد و بلافاصله قبل از استفاده در محیط کشت رقیق شد.

تعیین تعداد سلول زنده

برای تعیین تعداد سلول های زنده از آزمون خروج تریپان بلو استفاده شد. سلول ها با تراکم 2.2 × 104 سلول در هر ظرف در ظرف های 60- میلی متری کاشته شدند. روز بعد، سلول ها با اشعه ایکس تحت تابش قرار گرفتند و به مدت 5 روز پس از تابش انکوبه شدند. متعاقباً، سلول‌ها با سالین بافر فسفات (PBS)، معلق در محلول Trypsin-EDTA (T3924، Sigma-Aldrich)، جمع‌آوری، سانتریفیوژ، رنگ‌آمیزی با 0}.4 درصد وزنی در برابر تریپان آبی (Trypan Blue Solution) شدند. Wako Pure Chemical) یا 0.4 درصد تریپان آبی (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) و با استفاده از شمارنده سلولی خودکار TC10 (Bio-Rad) شمارش می شود. تمام تابش ها در سه تکرار انجام شد.

ایمونوبلات

استخراج پروتئین کل و آنالیز وسترن بلات طبق روش‌های توصیف‌شده قبلی ما [11، 17] با تغییرات زیر انجام شد. کل پروتئین ها روی Extra PAGE One Precast Gel 5-20 درصد (Nacalai Tesque، کیوتو، ژاپن) یا Super Sep ACE Gel 5-20 درصد (Wako Pure Chemical) الکتروفورز شدند. محصولات تکه تکه شده به صورت الکتروفورزی روی غشاهای Hybond-P (GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Piscataway, NJ, USA) منتقل شدند. سپس غشاها در Blocking One (Nacalai Tesque) به مدت 60 دقیقه در دمای اتاق مسدود شدند و با آنتی بادی مونوکلونال ضد H2AX موش (JBW301) (Upstate Biotechnology Inc., Charlottesville, VA, USA) یا آنتی بادی مونوکلونال اکتین موش انکوبه شدند. سیگما آلدریچ). پس از شستشو، غشاها با ضد موش IgG HRP-Linked Whole Ab (از گوسفند) (NA931) (GE Healthcare Bio-Sciences Corp.) به مدت 60 دقیقه در دمای اتاق انکوبه شدند. Immunoblotting با استفاده از Select Western Blotting System Detection (GE Healthcare Bio-Sciences Corp.) انجام شد. باندهای پروتئینی با استفاده از سیستم ChemiDoc XRS (Bio-Rad) مشاهده شدند.

ایمونوسیتوشیمی

رنگ آمیزی ایمنی همانطور که قبلاً توضیح داده شد [12، 17] با تغییرات زیر انجام شد. به طور خلاصه، سلول‌های کشت‌شده در پارافورمالدئید 4 درصد به مدت 30 دقیقه تثبیت شدند، با 0.5 درصد تریتون X-100 در PBS به مدت 5 دقیقه نفوذپذیر شدند، با استفاده از محلول مسدودکننده مسدود شدند و انکوبه شدند. با آنتی بادی مونوکلونال ضد H2AX موش (JBW301) (Upstate Biotechnology Inc.) به مدت 60 دقیقه در دمای اتاق. پس از شستشوی سلول‌ها با PBS، تشخیص با استفاده از آنتی‌بادی ثانویه کونژوگه الکسا فلور 568- (Molecular Probes, Eugene, OR, USA) یا آنتی‌بادی ثانویه کونژوگه با ایزوتیوسیانات فلورسین (Cappel Laboratories, Durham, NC, USA) انجام شد. ). سپس، هسته ها با 0.025 میکروگرم در میلی لیتر از رنگ فلورسنت 4،{17}}دیامینو-2-فنیلندول (DAPI) رنگ آمیزی شدند (Boehringer Mannheim، Mannheim، آلمان). تصاویر سلول ها با استفاده از میکروسکوپ فلورسانس المپوس BX51 (المپوس، توکیو، ژاپن) مجهز به دوربین دیجیتال (Olympus DP50، Olympus) به دست آمد.

سنجش رنگ آمیزی گالاکتوزیداز مرتبط با پیری (SA{1}}gal)

برای این سنجش، سلول‌های (5×103) در پلیت‌های 35- میلی‌متری قرار گرفتند و با استفاده از کیت رنگ‌آمیزی Senescence-Galactosidase (Cell Signaling Technology Inc., Danvers, MA, USA) 5 روز بعد رنگ‌آمیزی شدند. تابش طبق دستورالعمل سازنده با تغییرات زیر. هسته ها با 025/0 میکروگرم بر میلی لیتر رنگ فلورسنت DAPI رنگ آمیزی شدند. تصاویر سلول های رنگ آمیزی شده پس از 18 ساعت با استفاده از میکروسکوپ Olympus CKX41 مجهز به دوربین دیجیتال (Olympus DP12, Olympus) یا با استفاده از میکروسکوپ فلورسانس Olympus BX51 مجهز به دوربین دیجیتال (Olympus DP50) به دست آمد. درصد سلول‌های رنگ‌آمیزی مثبت با آنالیز سه میدان تصادفی حداقل 100 سلولی با استفاده از نرم‌افزار Image J تعیین شد. اندازه سلول هسته ای با آنالیز سه میدان تصادفی 10 سلولی با استفاده از نرم افزار Image J تعیین شد. تمام تابش ها در سه تکرار انجام شد.

سنجش آپوپتوز Annexin V/Propidium Iodide (PI).

سلول های (2.2 × 104) در صفحات 60- میلی متری قرار گرفتند و در روز بعد با اشعه ایکس تابش شدند. پنج روز پس از تابش، سلول‌ها برداشت شدند و با محلول Annexin V Alexa Fluor 488-PI-محلول (Tali™ Apoptosis Kit، Invitrogen، Carlsbad، CA، USA) مطابق با دستورالعمل‌های سازنده رنگ‌آمیزی شدند. برای رنگ‌آمیزی از رقت 200- برابری محلول رنگ‌آمیزی PI استفاده شد. علاوه بر این، سلول‌های آپوپتوز نشان‌دار Annexin V با استفاده از سیتومتر مبتنی بر تصویر تالی (Invitrogen) شناسایی شدند. تمام تابش ها در سه تکرار انجام شد.

تحلیل آماری

نتایج آماری به صورت میانگین ± انحراف استاندارد (n{0}}) ارائه شده است. تجزیه و تحلیل آماری بدون احتساب اندازه هسته با استفاده از آزمون های مقایسه چندگانه ANOVA و Ryan (ANOVA4 در وب، https://www.hju.ac.jp/~kiriki/anova4/) انجام شد. اندازه هسته با استفاده از آزمون t-test مورد بررسی قرار گرفت. P-value کمتر از 0.05 از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد.

سیستانچ بیابانی

نتایج

مهار تکثیر سلولی CRFK توسط اشعه ایکس

برای بررسی اثر اشعه ایکس بر تکثیر سلول‌های CRFK، تابش در دو و 10 گری انجام شد. همانطور که در شکل 1 نشان داده شده است، تکثیر سلولی به طور قابل توجهی به روشی وابسته به دوز مهار شد (P<0.05). these="" findings="" indicate="" that="" the="" proliferation="" was="" inhibited="" by="" x-rays="" at="" both="">

القای DSBs در سلول های CRFK توسط اشعه ایکس

فسفوریلاسیون H2AX در Ser139 یکی از DDRهای سلولی اصلی و اولیه به DSBها است [8، 20، 28]. H2AX یک نشانگر زیستی استاندارد طلایی برای DSB ها است [8، 20، 28]. پیش از این، با استفاده از وسترن بلات، تغییر در بیان H2AX در سلول‌های CRFK را بین 1 ساعت تا 24 ساعت پس از تابش اشعه ایکس با دوز واحد 10 گری تعیین کردیم [17]. در نتیجه، سطح بیان H2AX پس از 1 ساعت بالاترین میزان بود [17]. برای بررسی اینکه آیا فسفوریلاسیون H2AX در کل عصاره‌های سلول‌های CRFK 1 ساعت پس از تابش وابسته به دوز القا شده است، آنالیز وسترن بلات با آنتی‌بادی ضد H2AX انجام شد. همانطور که در شکل 2A نشان داده شده است، تجزیه و تحلیل وسترن بلات نشان داد که بیان H2AX بسته به دوز اشعه ایکس افزایش می یابد. در مرحله بعد، ما بررسی کردیم که آیا کانون H2AX در سلول‌های تحت تابش با استفاده از روش رنگ‌آمیزی ایمنی با استفاده از آنتی‌بادی ضد H2AX شناسایی شده است یا خیر. نتایج ما نشان داد که کانون های H2AX در هسته سلول های CRFK در 1 ساعت پس از تابش تشکیل شده است (شکل 2B).

فسفوریلاسیون وابسته به ATMkinase H2AXat Ser139 در سلول های CRFK توسط اشعه

یکی از نقش های مهم ATGM کیناز یا DNA-PK در DDR که توسط اشعه ایکس تحریک می شود، فسفریله کردن H2AX اطراف محل های DSB در سلول های مختلف انسان و جوندگان است [18، 29]. با این حال، چنین نقشی هنوز در سلول های گربه، از جمله سلول های CRFK بررسی نشده است. برای تأیید اینکه آیا ATM کیناز مسئول فسفوریلاسیون H2AX ناشی از اشعه ایکس در Ser139 در سلول‌های CRFK است، سلول‌ها در محیطی حاوی بازدارنده ATM کیناز KU{9}} (10 میکرومولار) یا حلال (DMSO) به مدت 1 انکوبه شدند. ساعت قبل از تابش (10 گری). همانطور که در شکل 3 نشان داده شده است، تشکیل کانون های H2AX در سلول های تحت تابش در حضور KU مهار شد. این نتایج نشان می دهد که ATM کیناز اصلی برای فسفوریلاسیون H2AX در Ser139 ناشی از تابش در سلول های CRFK است.

القای پیری در سلول های CRFK توسط اشعه ایکس

برای بررسی اینکه آیا مهار تکثیر سلولی CRFK در پاسخ به تابش با پیری و آپوپتوز مرتبط است یا خیر، سلول‌ها با اشعه ایکس در ۲ و ۱۰ گری تابش شدند. ابتدا، 5 روز پس از تابش، سلول‌ها با استفاده از رنگ‌آمیزی SA{4}gal، یک روش استاندارد طلایی برای پیری آنالیز شدند. ما مورفولوژی‌های خاص پیری مانند شکل سلولی بزرگ و مسطح (شکل 4A) و هسته‌های غیرطبیعی، از جمله هسته‌های بزرگ شده یا چند هسته‌ای (شکل 4B) را در سلول‌های تحت تابش مشاهده کردیم. علاوه بر این، در سلول‌های CRFK تابش‌شده، سلول‌های SA{10}گال مثبت به طور قابل‌توجهی به صورت وابسته به دوز افزایش یافت (شکل 4A-C). ما همچنین به طور کمی بزرگ شدن اندازه هسته سلول را که نشانگر دیگری برای سلول های پیر است، تجزیه و تحلیل کردیم. همانطور که در شکل 4D نشان داده شده است، اندازه هسته سلول در سلول های CRFK تابش شده به طور قابل توجهی بزرگتر بود (P<0.05). altogether,="" these="" findings="" indicate="" that="" x-rays="" highly="" induce="" senescence="" in="" crfk="" cells.="" next,="" to="" examine="" whether="" x-rays="" induced="" apoptosis="" in="" the="" irradiated="" crfk="" cells,="" apoptosis="" was="" quantified="" using="" tali™="" image-based="" cytometer.="" dual="" staining="" with="" fluorescent="" annexin="" v="" and="" pi="" was="" performed="" to="" detect="" apoptotic="" cells.="" cells="" stained="" positive="" for="" annexin="" v="" are="" considered="" apoptotic="" cells.="" as="" shown="" in="" fig.="" 5,="" the="" proportion="" of="" apoptotic="" cells="" was="" significantly="" higher="" in="" the="" 10-gy="" group="" than="" in="" the="" non-irradiated="" group="" and="" the="" 2-gy="" group="" but="" was="" lower="" (approximately="" 6%)="" in="" the="" 10-gy="" group.="" in="" addition,="" no="" significant="" increase="" in="" apoptosis="" was="" observed="" in="" the="" 2-gy="" group="" compared="" with="" the="" non-irradiated="">

خواص سیستانچ برای سلامتی: ضد سرطان

بحث

درک اثر بیولوژیکی تابش بر سلول‌های گربه در روشن کردن سمیت رادیویی و ایجاد پروتکل‌های درمانی جدید برای درمان سرطان مهم است. در مطالعه حاضر متوجه شدیم که تکثیر گربهکلیهرده سلولی CRFK به طور قابل توجهی توسط اشعه ایکس در دوزهای 2 و 10 گری سرکوب شد. این یافته ها نشان می دهد که اشعه ایکس برای رشد سلول های CRFK در شرایط مورد استفاده در این مطالعه سمی است. علاوه بر این، سلول های پیر به طور قابل توجهی در سلول های CRFK تابش شده افزایش یافت. در همین حال، یافته‌های ما در سلول‌های CRFK نشان داد، کیناز ATM باعث فسفوریلاسیون H2AX در Ser139 می‌شود، که یکی از DDR‌های اصلی به DSB‌های تولید شده توسط اشعه ایکس است. گزارش شده است که DSB های ناشی از تشعشع می توانند پیری و آپوپتوز را در سلول های انسان و جوندگان القا کنند [4، 22]. یافته های ما نشان می دهد که مکانیسم پیری فعال شده توسط DSBs به سرکوب تکثیر سلول های CRFK توسط اشعه ایکس کمک می کند.

مکانیسم اساسی تفاوت در حساسیت پرتوی در بین انسان، سگ و گربه و مکانیسم ترمیم سلول‌های گربه هنوز مشخص نشده است. همانطور که در بالا ذکر شد، داده های ما نشان داد که DDR وابسته به ATM کیناز توسط اشعه ایکس در سلول های CRFK فعال می شود. علاوه بر این، این مطالعه و مطالعات قبلی نشان می‌دهند که DSBهای القا شده با اشعه ایکس در سلول‌های CRFK را می‌توان با آنالیز وسترن بلات و ایمونوسیتوشیمی با استفاده از آنتی‌بادی ضد H2AX در دسترس تجاری شناسایی کرد [17]. این یافته ها نشان می دهد که سلول های CRFK در شفاف سازی مکانیسم های مولکولی DDR در سلول های گربه مفید هستند. مور [24] توضیح داد که پرتودرمانی برای گربه ها از نظر پاسخ های تومور و سمیت بافت نرمال با سگ ها متفاوت است. فوجی و همکاران [7] نشان داد که فیبروبلاست‌ها در گربه‌ها نسبت به انسان در تجزیه و تحلیل تشکیل کلنی مقاوم‌تر به پرتو هستند و کانون‌های H2AX ناشی از تشعشع ممکن است سریع‌تر و مؤثرتر در فیبروبلاست‌های گربه‌سانی ترمیم شوند. علاوه بر این، آنها این احتمال را پیشنهاد کردند که آسیب DNA و کروموزوم ناشی از اشعه ایکس در لنفوسیت های گربه نسبت به لنفوسیت های انسان یا سگ به طور موثر تر ترمیم شود. این یافته‌ها نشان می‌دهد که تفاوت در مقاومت پرتویی در بین انسان‌ها، سگ‌ها و گربه‌ها ممکن است به تفاوت در قابلیت تعمیر DNA مرتبط باشد. اخیراً، ما با استفاده از سلول‌های CRFK نشان دادیم که پروتئین‌های اصلی ترمیم NHEJ، یعنی گربه Ku70، Ku80، و XLF، در سایت‌های DSB ناشی از میکرولیزر 405-nm [17] تجمع می‌کنند. ما همچنین نشان دادیم که استخدام گربه XLF، XLF انسان، یا XLF سگ به حضور Ku وابسته است [13، 14، 17]. این یافته‌ها قویاً تأیید می‌کنند که تنظیم مکانی و زمانی عوامل اصلی NHEJ، از جمله Ku70، Ku80، و XLF، در تنظیم تعمیر NHE مهم است [10، 19]. در مجموع، سلول‌های CRFK ممکن است در کشف مکانیسم‌های مولکولی نه تنها در زمینه تفاوت‌های مقاومت پرتوی در بین سلول‌های گربه، سگ و انسان، بلکه همچنین DDR‌ها، از جمله تعمیر NHEJ وابسته به Ku در آنها مفید باشد.

انتقال اپیتلیال - مزانشیمی (EMT) یک مکانیسم مهم برای تبدیل بدخیم است، به عنوان مثال، تغییر مقاومت سلول های سرطانی در برابر تشعشع و داروهای ضد سرطان. اخیراً گزارش شده است که سلول‌های CRFK ویژگی‌های فیبروبلاست را دارند، به‌ویژه از نظر مورفولوژی، بیوشیمی و زیست‌شناسی مولکولی، اگرچه سلول‌های CRFK به عنوان یک رده سلولی اپیتلیال ایجاد شده‌اند [21]. علاوه بر این، van Beusekom و همکاران. [31] گزارش کرد که TGF{3}} مورفولوژی سلول‌های CRFK را از یک فنوتیپ اپیتلیال به یک فنوتیپ فیبروبلاستیک تغییر داد و به طور قابل‌توجهی بیان برخی از ژن‌های نشانگر EMT را در سلول‌های CRFK القا کرد، که نشان می‌دهد سلول‌های CRFK می‌توانند تحت EMT قرار بگیرند. در مطالعه حاضر، پیری برای سرکوب رشد در سلول‌های CRFK تابش‌شده مهم‌تر از آپوپتوز به نظر می‌رسد. در مجموع، رده سلولی CRFK ممکن است یک روش عالی نه تنها برای روشن کردن رابطه متقابل بین یا بین پیری ناشی از اشعه ایکس، مقاومت در برابر پرتو، و/یا سمیت رادیویی در گربه باشد.کلیهسلول های اپیتلیال و همچنین برای روشن کردن اثرات EMT در برابر تشعشع و شیمی درمانی.

درمان پیری یک استراتژی جدید ضد سرطان بر اساس القای پیری سلول های سرطانی است. به منظور اعمال این استراتژی در درمان گربه ها، لازم است مکانیسم مولکولی القای پیری در سلول های گربه روشن شود. از سوی دیگر، لی و همکاران. [22] توضیح داده‌اند که عوامل سنولیتیک، دسته‌ای از مولکول‌های کوچک که می‌توانند به طور انتخابی سلول‌های پیر را از بین ببرند، پتانسیل زیادی برای کاهش قابل توجه عوارض جانبی ناشی از رادیوتراپی دارند در حالی که به طور منطقی از سرطان‌زایی جلوگیری می‌کنند. اخیراً نشان داده شده است که یک عامل سنولیتیک ABT{3}} سلول‌های پیر ناشی از تشعشعات یونیزان را از ریه‌های موش‌های تحت تابش حذف می‌کند [35]. همانطور که در بالا ذکر شد، داده های ما نشان داد که سلول های پیر به طور قابل توجهی در سلول های CRFK تابش شده افزایش یافته است. یافته‌های ما و مطالعات بیشتر با استفاده از سلول‌های CRFK ممکن است برای تحقیقات پایه برای توسعه نه تنها درمان پیشروی گربه‌ها بلکه همچنین عوامل سنولیتیک به منظور کاهش عوارض جانبی ناشی از پرتودرمانی در دسترس باشد.

CRFKیکی از مهم‌ترین رده‌های سلولی پستانداران است و به‌طور گسترده در آزمایش‌هایی از جمله آزمایش‌هایی بر روی ویروس‌ها، مانند کروناویروس سندرم حاد تنفسی (SARS-CoV) یا SARS-CoV استفاده می‌شود-2. ترمیم DNA و تحقیقات سرطان در گربه ها.مزمنکلیه مرض; و تولید واکسن [1، 2، 17، 30، 33، 34]. سلول‌های CRFK می‌توانند با ویروس‌های مختلف از جمله انکوویروس‌ها آلوده شوند [1-3، 34]. بر این اساس، ما حدس می زنیم که رده سلولی CRFK ممکن است برای تحقیقات اساسی در مورد تغییرات در حساسیت پرتوی ناشی از عفونت ویروسی و تأثیر پرتودرمانی بر تومورهای ناشی از عفونت ویروسی مناسب باشد.CRFKسلول‌ها را می‌توان برای روشن کردن مکانیسم‌های نهفته در مقاومت رادیویی و سمیت رادیویی در سلول‌های اپیتلیال کلیه گربه و تأثیر عفونت ویروسی بر حساسیت به پرتو استفاده کرد. در نهایت، سلول‌های CRFK ممکن است خطوط سلولی عالی برای انجام تحقیقات در مورد سمیت رادیویی در گربه‌ها و تحقیقات پایه برای توسعه روش‌های جدید درمان سرطان باشند.

مزایای سلامتی cistanche tubolosa

تضاد منافع.نویسندگان هیچ تضاد منافع را اعلام نمی کنند.

قدردانی.این کار با حمایت مؤسسه ملی علوم و فناوری کوانتومی و رادیولوژیکی و گروه زیست شناسی تنظیمی، دانشکده علوم، دانشگاه سایتاما انجام شد.

منابع

1. Altamura, G., Power, K., Martano, M., Degli Uberti, B., Galiero, G., De Luca, G., Maiolino, P. and Borzacchiello, G. 2018. Felis catus

نوع ویروس پاپیلوم{0}} E6 به E6AP متصل می‌شود، اتصال E6AP/p53 را تقویت می‌کند و تخریب پروتئازومی p53 را افزایش می‌دهد. علمی شماره 8: 17529.

2. چو، اچ.، چان، جی اف، یوئن، تی تی، شوآی، اچ، یوان، اس.، وانگ، ی.، هو، بی.، ییپ، سی سی، تسانگ، جو، هوانگ، ایکس، چای، Y.، Yang، D.، Hou، Y.، Chik، KK،

Zhang، X.، Fung، AY، Tsoi، HW، Cai، JP، Chan، WM، Ip، JD، Chu، AW، Zhou، J.، Lung، DC، Kok، KH، To، KK، Tsang، OT، چان، KH و یوئن، KY 2020. تروپیسم مقایسه ای، سینتیک تکرار، و پروفایل آسیب سلولی SARS-CoV-2 و SARS-CoV با پیامدهایی برای تظاهرات بالینی، قابلیت انتقال، و مطالعات آزمایشگاهی COVID-19 : مطالعه مشاهده ای. Lancet Microbe 1: e14–e23.

3. Crandell, RA, Fabricant, CG and Nelson-Rees, WA 1973. توسعه، خصوصیات و حساسیت ویروسی رده سلولی کلیه گربه (Felis catus) (CRFK). In vitro 9: 176-185.

4. d'Adda di Fagagna، F. 2008. زندگی در یک استراحت: پیری سلولی به عنوان یک پاسخ به آسیب DNA. نات. Rev. Cancer 8: 512-522.

5. Durocher، D. and Jackson، SP 2001. DNA-PK، ATM، و ATR به عنوان حسگرهای آسیب DNA: تغییرات در یک موضوع؟ کر. نظر. سلول بیول. 13: 225-231.

6. Firsanov, DV, Solovjeva, LV and Svetlova, MP 2011. فسفوریلاسیون H2AX در محل شکستگی های دو رشته ای DNA در سلول ها و بافت های پستانداران پرورشی. کلین اپی ژنتیک 2: 283-297.

7. Fujii, Y., Yurkon, CR, Maeda, J., Genet, SC, Kubota, N., Fujimori, A., Mori, T., Maruo, K. and Kato, TA 2013. مطالعه مقایسه ای مقاومت پرتویی بین سلول های گربه و سلول های انسانی. رادیات. Res. 180: 70-77.

8. Huang، RX، و Zhou، PK 2020. مسیرهای سیگنالینگ پاسخ آسیب DNA و اهداف برای حساسیت رادیوتراپی در سرطان. انتقال سیگنال هدف. آنجا 5:60.

9. جکسون، SP 2002. سنجش و ترمیم شکستگی های دو رشته ای DNA. سرطان زایی 23: 687-696.

10. Koike, M. 2002. Dimerization, translocation, and localization ofKu70 and Ku80 proteins. ج. رادیات. Res. (توکیو) 43: 223-236.

11. Koike، M. و Koike، A. 2008. تجمع پروتئین های Ku80 در شکستگی های دو رشته ای DNA در سلول های زنده. انقضا Cell Res. 314: 1061-1070.

12. Koike, M., Shiomi, T. and Koike, A. 2001. دیمرسازی و محلی سازی هسته ای پروتئین های Ku. جی. بیول. شیمی. 276: 11167-11173.

13. Koike, M., Yutoku, Y. and Koike, A. 2011. تجمع Ku70 در شکستگی های دو رشته ای DNA در سلول های اپیتلیال زنده. انقضا Cell Res. 317: 2429-2437.

14. Koike, M., Yutoku, Y. and Koike, A. 2017. شبیه سازی، محلی سازی و تشکیل تمرکز در محل های آسیب DNA سگ XLF. J. Vet. پزشکی علمی 79: 22-28.

15. Koike, M., Yutoku, Y. and Koike, A. 2017. شبیه سازی، محلی سازی و تشکیل تمرکز در محل های آسیب DNA سگ کو70. J. Vet. پزشکی علمی 79: 554-561.

16. Koike, M., Yutoku, Y. and Koike, A. 2017. شبیه سازی Ku80 سگ و محلی سازی و تجمع آن در سایت های آسیب DNA. FEBS Open Bio 7: 1854-1863.

17. Koike, M., Yutoku, Y. and Koike, A. 2019. Feline XLF در مکان های آسیب DNA به روشی وابسته به Ku تجمع می یابد. FEBS Open Bio 9: 1052-1062.

18. Koike, M., Sugasawa, J., Yasuda, M. and Koike, A. 2008. فسفوریلاسیون H2AX وابسته به DNA-PK خاص بافت و حذف گاما-H2AX پس از تابش X در داخل بدن. بیوشیمی. بیوفیز. Res. اشتراک. 376: 52-55. [Medline] [CrossRef]

19. Koike, M., Awaji, T., Kataoka, M., Tsujimoto, G., Kartasova, T., Koike, A. and Shiomi, T. 1999. محلی سازی دیفرانسیل درون سلولی اجزای پروتئین کیناز وابسته به DNA Ku و DNA-PKcs در طول میتوز. J. Cell Sci. 112: 4031-4039. [مدلاین]

20. Kopp, B., Khoury, L. and Audebert, M. 2019. اعتبار سنجی نشانگر زیستی H2AX برای ارزیابی سمیت ژنی: یک بررسی. قوس. سموم 93: 2103-2114. [Medline] [CrossRef]