تقویت عضلانی با HIFN-Alpha 2b حفاظت ناشی از BCGphipps را در مدل جذام موشی افزایش می دهد.

خلاصه:

ایمنی میزبان در برابر مایکوباکتریوم لپره طیفی از مکانیسم‌ها را در بر می‌گیرد که از حفاظت مبتنی بر ایمنی سلولی تا آسیب‌های مرتبط با ایمنی هومورال مانند واکنش‌های نوع{1} جذام را شامل می‌شود. اگرچه اینترفرون های نوع I (IFNs) در از بین بردن پاتوژن های داخل سلولی شرکت می کنند، سهم آنها در تولید آنتی بادی ها و CD3 به علاوه FOXP3 به علاوه سلول های T تنظیمی (Tregs) در حفاظت با واسطه واکسن BCG در جذام ناشناخته است. پرایمینگ BCGphipps (BCGph) و به دنبال آن hIFN{5}}b داخل عضلانی باعث کاهش قابل توجه اندازه ضایعه و رشد مایکوباکتریوم لپراموریوم در پوست می شود. سلول های تنظیم کننده فولیکولی T (TFR)، زیرمجموعه ای از Tregs ناشی از ایمن سازی یا عفونت، در مراکز ژرمینال (GCs) ساکن هستند و تولید آنتی بادی را تعدیل می کنند.

در تخلیه گره‌های لنفاوی موش‌های تقویت‌شده با BCGph و hIFN- 2b، در القای Treg مختل و GCهای بهبود یافته یافتیم. علاوه بر این، این موش ها مقادیر قابل توجهی از IL-4 و IL-10 را در سرم ایجاد کردند. بنابراین، نتایج ما از خواص کمکی hIFN- 2b در زمینه پرایمینگ BCGph برای تقویت ایمنی محافظتی در برابر جذام پوست پشتیبانی می‌کند.

ایمنی حفاظتی به توانایی بدن در دفاع در برابر عوامل بیماری زا عفونی با تولید آنتی بادی ها، سلول های T و غیره اشاره دارد و یکی از مکانیسم های مهم بدن برای مقاومت در برابر بیماری ها است. ایمنی به توانایی بدن در تشخیص و پاسخ به مواد خارجی مختلف (از جمله پاتوژن ها، اجسام خارجی، سلول های تومور و غیره) از جمله ایمنی سلولی و ایمنی هومورال اشاره دارد. مصونیت حفاظتی بخشی از مصونیت است و این دو ارتباط نزدیک دارند. ایمنی خوب می تواند باعث بهبود ایمنی محافظتی شود تا بهتر از بروز بیماری ها جلوگیری کند. در عین حال، بهبود ایمنی محافظتی همچنین می تواند ایمنی را تقویت کند و به بدن اجازه می دهد تا با چالش های مختلف خارجی بهتر مقابله کند. بنابراین، حفظ یک سیستم ایمنی سالم، از جمله ایمنی محافظتی خوب، برای حفظ سلامت بسیار مهم است. از این منظر مصونیت نیز بسیار مهم است. اگر بخواهیم ایمنی خود را بهبود ببخشیم، سیستانچ می تواند ایمنی انسانی ما را به میزان قابل توجهی بهبود بخشد. پلی ساکاریدهای موجود در سیستانچ می توانند پاسخ ایمنی سیستم ایمنی انسان را تنظیم کرده و سلول های ایمنی را بهبود بخشند. توانایی استرس، افزایش اثر باکتری کش سلول های ایمنی.

روی فواید سلامتی سیستانچ کلیک کنید

کلید واژه ها:

مایکوباکتریوم لپراموریوم؛ جذام موش؛ اینترفرون آلفا؛ BCGphipps; مراکز ژرمینال؛ سلول های T تنظیمی

1. معرفی

مایکوباکتریوم لپرا و مایکوباکتریوم لپروماتوز، عوامل ایجاد کننده جذام انسان [1،2]، بر پوست و اعصاب محیطی تأثیر می گذارند [3]. اگرچه درمان‌های چند دارویی (MDT) برای جذام در دسترس است، اما تعداد موارد جدید ثابت است (700،000 در سال).

علاوه بر این، فقدان یک روش تشخیصی موثر، ردیابی انتقال M. leprae را دشوار می کند [4-7]. استعداد ژنتیکی به جذام زودرس [8] بر نیاز به تشخیص مناسب و توسعه روش های ایمنی درمانی کم هزینه برای کاهش بروز جذام در کشورهای توسعه یافته تأکید می کند [9،10]. طیف تظاهرات بالینی در جذام با نوع پاسخ ایمنی ایجاد شده در ارتباط است. برای مثال، جذام توبرکلوئیدی (TT)، که با پاسخ غالب Th1 مشخص می‌شود، رشد باسیل‌ها را از طریق فعال‌سازی عملکردهای میکروب‌کشی ماکروفاژها توسط IFN محدود می‌کند. در مقابل، تولید سیتوکین‌های کلاسیک Th2 (IL{9}} و IL{10}}) با از دست دادن محافظت و افزایش رشد باسیلی در جذام جذام منتشر (LL) مرتبط است [10]. همچنین انواع فرعی میانی وجود دارد که ترکیبی از پاسخ های Th1 و Th2 را نشان می دهد [10].

عفونت موش ها با M. lepraemurium (MLM) [11،12] برای مطالعه مکانیسم های ایمونولوژیک جذام انسانی [11-13] استفاده شده است، حتی اگر MLM برای اعصاب محیطی تروپیسم [11،13] را مانند M. leprae نشان نمی دهد. انجام می دهد [14]. با این وجود، هر دو مایکوباکتری غیرقابل کشت هستند و به کندی در میزبان رشد می کنند و تعداد آنها در عرض 1 تا 3 هفته دو برابر می شود.

عفونت زیر جلدی تجربی با دوزهای کوچک باکتری، از نزدیک بیماری طبیعی را تقلید می‌کند که معمولاً زمانی رخ می‌دهد که اختلال در موانع، کلونیزاسیون مایکوباکتری را تسهیل می‌کند و واکنش ایمنی را در سطح محیطی ایجاد می‌کند [13،15-17]. در حالی که ایمنی با واسطه سلولی (CMI) مختل است، ایمنی هومورال عملاً در جذام انسان و موش تحت تأثیر قرار نمی گیرد [18]. علاوه بر این، سلول‌های Th1- یا Th2-، سایر لنفوسیت‌های T، ایمنی میزبان را در برابر عفونت M. leprae شکل می‌دهند [18،19].

این جالب است که چگونه M. leprae بر ایمنی میزبان در زیرگروه های مختلف بیماری مایکوباکتریایی تأثیر می گذارد. یک فرضیه این است که پاتوژن ایمنی هومورال و سلولی میزبان را کاهش می دهد تا پوست و اعصاب محیطی را آلوده کند [3،14،15]. همچنین شواهدی وجود دارد که نشان می دهد باسیل باعث اختلال در فعالیت ماکروفاژها می شود. همچنین بیان TNF-α و مولکول‌هایی مانند پروستاگلاندین‌ها را کاهش می‌دهد که تولید IL{4}} و واسطه‌های اکسیژن و نیتروژن فعال (ROI و RNI) را که در عملکرد مایکوباکتری‌کشی ماکروفاژها حیاتی هستند، القا می‌کنند [20-22].

پاسخ‌های هومورال تولید شده در GCs بافت‌های لنفاوی ثانویه و سوم در ایمنی محافظتی در برابر پاتوژن‌ها شرکت می‌کنند [23-26]. گزارش اخیر در مورد جذام، نقش حیاتی Tregs را در مهار پاسخ سلولی Th1 و Th17 برجسته کرده است [19]. در واقع، تعادل بین این زیرمجموعه‌های سلول‌های T در GCs [27-29] پیامدهای محافظتی یا پاتولوژیک بیماری‌های عفونی و خودایمنی را دیکته می‌کند [30،31] و برای توسعه درمان‌هایی برای القای ایمنی محافظتی حیاتی است [26،27] ].

به طور خاص، سلول‌های فولیکولی کمکی T (TFH) و به‌ویژه سلول‌های تنظیم‌کننده فولیکولی T (TFR) پاسخ GC را تعدیل می‌کنند تا پاسخ‌های ایمنی هومورال طولانی‌مدت را القا کنند در حالی که از تولید اتوآنتی‌بادی‌ها جلوگیری می‌کنند [32،33]. با توجه به اینکه IFN نوع I با تولید هر دو TFH و Tregs مرتبط است، به عنوان یک ادجوانت امیدوارکننده برای تحریک پاسخ های TFH در GCها در زمینه واکسیناسیون BCG ظاهر می شود [34].

تجویز مخاطی IFN های نوع I باعث بلوغ سلول های دندریتیک و تولید CXCR5 به علاوه CD4 به علاوه TFH می شود و توسعه GC و تولید آنتی بادی های با میل ترکیبی بالا در غدد لنفاوی را تسهیل می کند [34]. در مقابل، IFNهای نوع I با مهار تولید نیتریک اکسید سنتاز القایی (iNOS)، IL{4}p40، IL-1A و IL-1 در حین القا، ایمنی میزبان را در سل انسانی لغو می‌کنند. آنتاگونیست های IL-10 و IL-1R [35-38]. بنابراین، مشارکت IFN های نوع I وابسته به زمینه است [38-42]. IFN های نوع I در سطح ثابتی تولید می شوند، اما هنگامی که یک پاتوژن داخل سلولی به میزبان حمله می کند، چندین پاسخ ضد ویروسی یا ضد باکتریایی ذاتی ناهمگن و پیچیده القا می شود [43-48]، از جمله تعویض کلاس آنتی بادی، هیپرجهش سوماتیک، و افزایش در دسترس بودن آنتی ژن در GCها که منجر به پاسخ های آنتی بادی قوی و موثر می شود [34،49].

ما قبلاً حفاظت اعطا شده توسط تقویت متوالی IFN داخل عضلانی را در موش‌های واکسینه شده با مایکوباکتریوم بوویس BCG و چالش با MLM [42] یا در برابر چالش M. tuberculosis در هوا [41] گزارش کردیم. در موش هایی که با MLM به چالش کشیده شدند، حفاظت با افزایش تولید iNOS، اکسید نیتریک و آنتی بادی های IgG3 ارتباط داشت [42]. در زمینه چالش M. tuberculosis، موش های محافظت شده پاسخ Th1 را برانگیختند [41].

در یک مطالعه جدیدتر، IFNهای نوع I اتوفاژی و متابولیسم را در جذام تعدیل کردند [50]. ما در این مطالعه تصمیم گرفتیم که حفاظت در برابر جذام موش ناشی از واکسیناسیون با M. bovis BCGphipps (BCGph) و ارائه دارویی IFN- 2b [51] انسانی را بیشتر بررسی کنیم. در مطالعات اخیر، یک BCG نوترکیب که IFN- 2b انسانی را بیان می‌کند برای درمان موفقیت‌آمیز سرطان مثانه استفاده شد [51-55]. مطابق با این داده ها، هدف ما در این مطالعه تجزیه و تحلیل حفاظت ناشی از پرایمینگ BCGph و تقویت hIFN- 2b در مدل جذام موش بود. در مجموع، نتایج ما پتانسیل پرایمینگ زیر جلدی BCGph و تقویت داخل عضلانی hIFN- 2b را برای ایجاد ایمنی محافظتی در برابر جذام انسانی در نظر می‌گیرد.

2. مواد و روشها

2.1. حیوانات

موش‌های Balb/c بدون پاتوژن خاص پرورش داده شدند و در تأسیسات حیوانی Escuela Nacional de Ciencias Biológicas، Instituto Politécnico Nacional در مکزیکو سیتی نگهداری شدند.

تمام آزمایشات حیوانی پس از تایید (7 مارس 2014) توسط کمیته مراقبت و مدیریت حیوانات سازمانی (CIE-ENCB ZOO 016/2014) انجام شد.

2.2. میکروارگانیسم ها

سویه BCG Phipps (ATCC® 35744™) (BCGph) گونه‌ای از سویه BCG است که ناحیه RD1 را که ESAT{2}} و CFP10 را کد می‌کند، با کمترین تعداد اپی توپ سلول T از دست داده است. ، 316، در مقابل BCG توکیو، 359، و BCG پاستور، 331، (ژانگ و همکاران، 2{29}}13) [51] و توسط دکتر هرناندز-پاندو (INCMNSZ، مکزیکو سیتی، MX) ارائه شد. سپس سوسپانسیون‌های واکسن تا زمان استفاده در دمای -80 ◦C نگهداری شدند. سویه غیرقابل کشت مایکوباکتریوم لپراموریوم (MLM) از طحال موش‌هایی که دارای عفونت چهار ماهه بودند، از طریق روشی که توسط Prabhakaran و همکاران، 1976 [56] توضیح داده شد، جدا شد و سپس با استفاده از روش جداسازی شخصی که توسط Draper P توضیح داده شد، خالص‌سازی شد. ، 1980 [57]. به طور خلاصه، 4 گرم از بافت طحال در 20 میلی لیتر ساکارز 0.2 مولار معلق و در یک هموژنایزر شیشه ای از نوع Potter-Elvehjem آسیاب شد. سوسپانسیون حاصل به مدت 20 دقیقه در 150 × گرم سانتریفیوژ شد تا بقایای سلولی (Sorvall RV5B، روتور HB4) حذف شود (Sorvall Instruments, Wilmington, DE, USA). سپس، 9 میلی‌لیتر از مایع رویی روی 12 میلی‌لیتر ساکارز 0.3 مولار پوشانده شد و لوله‌ها در 3500× گرم به مدت 10 دقیقه در دمای 4-10 درجه سانتیگراد سانتریفیوژ شدند (Sorvall RC5B). گلوله غنی از باسیل به دست آمده در 20 میلی لیتر ساکارز 0.2 مولار مجدداً معلق شد و مقادیر 9 میلی لیتری روی 12 میلی لیتر KCl 1.5 مولار قرار گرفتند.

سپس، لوله در دمای 4◦C به مدت 1{5}} دقیقه در 3500× گرم سانتریفیوژ شد. باسیل‌ها جمع‌آوری شدند، سه بار با سالین بافر فسفات (PBS) (0.01 مولار Na/K فسفات، 0.15 مولار NaCl، pH 7.4) شسته شدند و در 40 میلی‌لیتر محلول حاوی مخلوطی از Percoll (3 قسمت) مجدداً معلق شدند. و 0.1 درصد توئین 80 (7 قسمت). سوسپانسیون در 23،{18}}× گرم سانتریفیوژ شد. گلوله باسیلی جمع آوری شد و پنج بار با PBS شسته شد تا Percoll از بین برود. خلوص آماده سازی باسیلی با رنگ آمیزی Ziehl-Neelsen تایید شد. سوسپانسیون باسیلی خالص شده در محیط مصنوعی 7H9 Middlebrook brothOADC (DIFCO, Detroit, MI, USA) (محیط 7H9-OADC) تهیه شد و از طریق یک منحنی مرجع نفلومتری تهیه شده با مقادیر شناخته شده باکتری تعیین شد. سوسپانسیون باسیلی جدا شد و در دمای 20- درجه سانتیگراد منجمد شد تا برای استفاده آماده شود.

2.3. ایمن سازی ها

گروه‌هایی از موش‌های هشت هفته‌ای Balb/c (n=6) به‌صورت زیر جلدی با 8 × 103 واحد تشکیل‌دهنده کلنی (CFU) BCGphipps در 200 میکرولیتر PBS استریل واکسینه شدند. یک ماه بعد، هر گروه از موش ها طی سه روز متوالی (30، 31 و 32 روز پس از واکسیناسیون) با 100 میکرولیتر PBS یا با 100، 200 یا 300 واحد بین المللی hIFN به صورت عضلانی تقویت شدند. }b (Urifron، Probiomed، Azcapotzalco، مکزیکو سیتی، مکزیک).

2.4. چالش M. lepraemurium

برای آزمایش های چالشی، موش ها به صورت داخل جلدی با 2 × 106 MLM زنده در 20 میکرولیتر PBS تلقیح شدند. سپس موش ها در شرایط استاندارد قرار گرفتند و به طور آزاد با آب تصفیه شده و چیپس جوندگان Purina (Cuautitlan Izcalli، مکزیک) عرضه شدند. موش های آلوده به مدت هشت هفته تحت نظر قرار گرفتند، زمان هایی که ضایعات در پوست حیوانات آلوده مشهود بود. پیشرفت بیماری در موش‌ها متغیر بود و با درمان‌های تجربی (PBS، BCGph، یا hIFN{3}}b) همبستگی داشت.

2.5. سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم (ELISA)

آنتی بادی‌های موجود در سرم موش‌های آلوده به MLM با روش‌های ایمونوسوربنت غیرمستقیم مرتبط با آنزیم (ELISA) اندازه‌گیری شد. به طور خلاصه، 96-صفحات چاه (Nunc، Rochester، NY، USA) یک شبه در دمای 4◦C با 1.{5}} میکروگرم پپتیدوگلیکولیپید محلول در اتانول پوشش داده شدند [38]. پس از تبخیر اتانول در دمای اتاق [37]، اتصال غیر اختصاصی با 3 درصد شیر بدون چربی در PBS از 2 تا 3 ساعت مسدود شد. پس از دور ریختن محلول مسدودکننده، 0.1 میلی لیتر از سرم رقیق شده (1:100) در 1 درصد شیر بدون چربی در PBS به چاهک ها اضافه شد و یک شب در دمای 4 درجه سانتیگراد انکوبه شد.

سپس، پلیت ها به طور گسترده با PBS شسته شدند و آنتی بادی های متصل با {{0}}.1 میلی لیتر IgG ضد موش (1:4{42}}00, BD 550487, BD Pharmingen, San) شناسایی شدند. دیگو، کالیفرنیا، ایالات متحده آمریکا)، IgG1-HRP (1:2500، ab 97240، Abcam، کمبریج، MA، ایالات متحده)، IgG2a-HRP (1:2500، ab97245، Abcam)، IgG2b-HRP (1: 2500، ab97250، Abcam)، یا IgG3-HRP (1:2500، ab97260، Abcam)، یا آنتی بادی مونوکلونال موش ضد IgA موش کونژوگه با بیوتین (1:1000، BD 550487، BD Pharmingen)، به دنبال آن آنتی بادی ضد Ig موش موش کونژوگه با پراکسیداز ترب (HRP) (1:1000، BD 550487، BD Pharmingen) یا آویدین-HRP (ab 59653، abcam) سوبسترای کروموژنیک، تترا متیل-بنزیدین در 0.05 MpHc. 5.2)، همراه با 0.01 درصد پراکسید هیدروژن (H2O2)، برای توسعه رنگ به چاهک ها اضافه شد. واکنش با 1 مولار H3PO4 متوقف شد. چگالی نوری در 450 نانومتر در یک میکروپلیت الایزا ریدر (LabSystems Multiskan Plus، LabX، Midland، ON، کانادا) اندازه‌گیری شد. IFN-، IL{51}}، IL{52}}، IL{53}}، TNF- و IL{55}} در سرم با کیت های الایزای ساندویچ خاص (PEPROTEC Inc., Cranbury) اندازه گیری شد. ، نیوجرسی، ایالات متحده آمریکا). طبق دستورالعمل سازنده

2.6. اندازه گیری NO در سرم موش ها

به طور خلاصه، سرم ها با اتانول (1:1) برای رسوب پروتئین ها و سایر عوامل تداخل کننده تیمار شدند. پس از سانتریفیوژ در 3{11}}00 دور در دقیقه به مدت 20 دقیقه، 20 میکرولیتر از سرم بازیابی شده همراه با 100 میکرولیتر از معرف گریس و 80 میکرولیتر آب مقطر در چاهک های صفحه ELISA قرار داده شد. معرف گریس مخلوط حجم به حجم محلول A (2 درصد سولفانیل آمید در اسید فسفریک 5 درصد) و محلول B (0.1 درصد N-({14}}نفتیل) اتیلن دی آمین، دی هیدروکلراید است. پس از 30 دقیقه انکوباسیون در در دمای 25 درجه سانتیگراد، رنگ صورتی ایجاد شده در یک ELISA reader در طول موج 595 نانومتر ثبت شد و مقادیر به منحنی استاندارد نیتریت سدیم در محدوده 1 تا 100 میکرومولار تعمیم داده شد.

2.7. ایمونوفلورسانس

آنتی بادی های اولیه از شرکت های زیر به دست آمد: ضد iNOS بز (کلون M-19، بیوتکنولوژی سانتا کروز، دالاس، TX، ایالات متحده)، خرگوش آنتی نیتروتیروزین (AB 5411، EMD، Millipore، Burlington، MA، ایالات متحده آمریکا). ), موش بیوتین Ly6C/Ly6G (کلون RB6-8C5, BD Pharmingen), گیت anti-CD3 epsilon (Clone M-20, Santa Cruz Biotechnology), موش ضد موش FoxP3 (کلون FJK{12} }s، eBioscience، San Diego، CA، USA)، آنتی ژن هسته ای سلول ضد تکثیر بز (کلون C{14}}، سانتا کروز بیوتکنولوژی)، آگلوتینین FITC-بادام زمینی (L7381- 1MG، SIGMA، St. . Louis, MO, USA) و CD45R ضد موش APC (کلون RA{20}}B2، BD Pharmingen).

آنتی بادی های اولیه با آنتی بادی های ثانویه زیر آشکار شدند: Alexa Fluor 568 donkey anti-beat IgG (A11057, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA), Alexa Fluor 488 IgG ضد خرگوش الاغی (711-546, Jackson ImmunoResearch Labories) ، West Grove، PA، USA، و Alexa Fluor 680 streptavidin (S32358, Thermo Fisher Scientific).

بخش‌های پارافین‌شده با فرمالین تثبیت‌شده با پنج میکرومتر در دمای ۶0 ◦C در طول شب برای پارافین‌زدایی انکوبه شدند. بخش‌های بافت به سرعت به زایلن‌ها ({3}}.5L، SIGMA) منتقل شدند و با غوطه‌ور کردن متوالی اسلایدها در الکل مطلق، 96 درصد الکل، 70 درصد الکل و آب هیدراته شدند. اسلایدها در محلول بازیابی آنتی ژن غوطه ور شدند، به مدت 30 دقیقه جوشانده شدند و به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق (RT) خنک شدند. اسلایدها چندین بار در آب شسته و به PBS منتقل شدند. اتصال غیر اختصاصی با 5 درصد سرم الاغ طبیعی در PBS حاوی 0.1 درصد Tween 20 و 0.1 درصد Triton-X{17}} به مدت 30 دقیقه در RT در یک محفظه مرطوب مسدود شد. آنتی بادی های اولیه به اسلایدها اضافه شدند و یک شبه در یک محفظه مرطوب در RT انکوبه شدند. اسلایدها به آرامی در PBS شسته شدند و آنتی‌بادی‌های ثانویه نشاندار شده با فلورسنت به مدت 2 ساعت، در RT یا یک شب در یک محفظه مرطوب انکوبه شدند.

در نهایت، اسلایدها به مدت 1 ساعت در PBS شسته شدند و با محیط نصب ضد محو شدن Vectashield با DAPI (H{1}}، Vector Laboratories، Burlingame، CA، USA) سوار شدند. تصاویر با میکروسکوپ زایس آکسیوپلان گرفته شده است. تمام مراکز ژرمینال (GCs) در بخش غدد لنفاوی با ابزار خودکار میکروسکوپ کارل زایس اندازه‌گیری شد و میانگین اندازه GC با استفاده از نرم‌افزار Prism محاسبه شد. CD3 به علاوه FoxP3 به علاوه Tregs در 5 میدان تصادفی 200 × در هر بافت شمارش شد تا میانگین تعداد سلول های مثبت در هر میدان محاسبه شود.

2.8. تحلیل آماری

تفاوت‌های آماری معنی‌دار بین گروه‌ها با استفاده از آنالیز واریانس یک‌طرفه، مقایسه‌های چندگانه نیومن-کولز، آزمون t استودنت دو دنباله بدون جفت/جفت، و مقادیر P <{3}}.05 به‌عنوان معنی‌دار در نظر گرفته شد. تفاوت های آماری با Graph Pad Prism محاسبه شد.

3. نتایج

3.1. پرایمینگ BCGphipps (BCGph) و به دنبال آن تقویت پی در پی داخل عضلانی hIFN- 2b از موش های Balb/c در برابر چالش داخل پوستی با M. lepraemurium محافظت می کند.

ما قبلاً یک پروتکل تقویت اولیه مبتنی بر تقویت متوالی عضلانی IFN پس از واکسیناسیون BCG موش [42] با نتایج حفاظتی امیدوارکننده ایجاد کردیم. مطالعات اخیر از یک نوترکیب BCG استفاده کرد که IFN- 2b انسانی را برای درمان سرطان مثانه بیان می‌کند [51،53]. بنابراین، در مطالعه حاضر، هدف ما تجزیه و تحلیل حفاظت ناشی از پرایمینگ BCGph به دنبال تقویت hIFN- 2b در مدل موشی جذام، به دنبال طرح نشان‌داده‌شده در شکل 1 بود.

شکل 1. پروتکل Prime-boost برای ارزیابی حفاظت موش ها در برابر چالش داخل پوستی با M. lepraemurium. گروه‌های موش Balb/c (n=6) به صورت زیر جلدی با دوز پایین BCGph (8 × 103 CFU) واکسینه شدند. موش های هر گروه در روزهای متوالی (30، 31 و 32 روز پس از واکسیناسیون) با PBS یا hIFN b به صورت عضلانی تقویت شدند. موش ها هشت هفته پس از آخرین تقویت با 2 × 106 MLM زنده به چالش کشیده شدند. پس از آن، موش‌ها قربانی شدند و نمونه‌های زیستی هشت هفته پس از چالش جمع‌آوری شدند. توسعه ضایعات پوستی همانطور که در مواد و روش ها توضیح داده شد، کنترل و اندازه گیری شد.

به طور خلاصه، موش‌ها هشت هفته پس از سومین تقویت با 300 واحد بین‌المللی hIFN- 2b به‌صورت داخل جلدی با MLM به چالش کشیده شدند. پیشرفت بیماری در طول هشت هفته بعد نظارت شد. در پایان این دوره، غدد لنفاوی اینگوینال را برای شناسایی GCها و شمارش Tregs و سایر جمعیت‌های سلولی توسط ایمونوفلورسانس جمع‌آوری کردیم. ما همچنین از ایمونوفلورسانس برای تجسم تولید iNOS توسط ماکروفاژهای فعال، محل باقی‌مانده‌های نیتروتیروزین (NT) و تجمع سلول‌های Gr-1 به‌علاوه میلوئید در پوست موش‌های آزمایشی خود استفاده کردیم. علاوه بر این، ما سرم را برای اندازه گیری سیتوکین ها و آنتی بادی های گلیکولیپیدهای MLM با روش الایزا جمع آوری کردیم (شکل 1).

ابتدا، برای ارزیابی اثر محافظتی پرایمینگ BCGph و تقویت hIFN{{0}}b در برابر چالش داخل پوستی موش‌های مبتلا به MLM، ضایعات پوستی را اندازه‌گیری کردیم و کلونیزاسیون باسیل‌های پوست را توسط رنگ Ziehl-Neelsen مشاهده کردیم. (شکل 2A-E). پوست موش های بدون پرایم که فقط وسیله نقلیه (PBS) را بدون چالش MLM دریافت کردند، هیچ باسیلی را نشان نداد (شکل 2A). موش های تلقیح شده با وسیله نقلیه و چالش با MLM مقادیر زیادی از باسیل های MLM را در پوست نشان دادند (شکل 2B) در حالی که پرایمینگ موش ها با BCGph منجر به کاهش رشد مایکوباکتریوم شد (شکل 2C). تجویز پی در پی hIFN{5}}b همچنین رشد مایکوباکتری را در پوست در مقایسه با موش هایی که با MLM به چالش کشیده بودند کاهش داد (شکل 2D). موش‌هایی که با BCGph آغاز شده و با hIFN{7}}b تقویت شده‌اند، کمترین رشد مایکوباکتریومی را داشتند (شکل 2E). مطابق با این داده‌ها، موش‌های سالمی که با MLM به چالش کشیده شده‌اند و فقط وسیله نقلیه (PBS) دریافت کرده‌اند، گسترده‌ترین ضایعات پوستی (9.9 ± 35 میلی‌متر مربع) را ایجاد کرده‌اند، در حالی که موش‌هایی که با BCGph آماده شده‌اند ضایعات پوستی با اندازه‌های مشابه با ضایعات ایجاد شده در موش ها با وسیله نقلیه تلقیح شده و با MLM (4.24 ± 13.5 میلی متر مربع) به چالش کشیده شدند (شکل 2F). موش هایی که به صورت زیر جلدی hIFN b تزریق شدند، ضایعات پوستی کوچک تری (20 ± 1.77 میکرومتر مربع) نشان دادند. نکته قابل توجه، موش‌هایی که BCGph آماده شده بودند و با hIFN{25}b تقویت شده بودند، کاهش قابل توجهی در اندازه ضایعه پوستی (5 ± 7.07 میلی‌متر مربع) نشان دادند (0.05 < p) (شکل 2F).

\

شکل 2. ضایعات پوستی و رشد مایکوباکتریوم در Balb/c که با M. lepraemurium به چالش کشیده شده است. حفاظت از موش ها با توسعه ضایعه پوستی و تجسم رشد مایکوباکتریوم در ضایعه پوستی در هشت هفته پس از چالش با MLM ارزیابی شد. ضایعات پوستی با Ziehl-Neelsen رنگ آمیزی شدند. نماینده 400× تصاویر بزرگ‌نمایی (A) موش‌های بدون پرایم و موش‌های بدون چالش. (ب) موش تلقیح شده با PBS و به چالش کشیده با MLM. (C) موش ها با BCGph آماده شده و با MLM به چالش کشیده شده اند. (D) موش‌هایی که به صورت عضلانی با hIFN- 2b تلقیح شده و با MLM به چالش کشیده شده‌اند. (E) موش‌هایی که با BCGph آغاز شده، با hIFN- 2b تقویت شده و با MLM به چالش کشیده شده‌اند. (F) حفاظت کارآمد معادل عدم وجود ضایعات پوستی یا کاهش قابل توجه اندازه ضایعه پوستی است که در mm2، n=6 موش/گروه بیان می‌شود. * p < 0.05; ** p < 0.005; *** p < 0.0005 از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد.

3.2. حداقل آسیب شناسی پوست در موش های پرایم شده با BCGphipps و تقویت شده با hIFNa 2b با کاهش تجمع نیتروتیروزین و اختلال در نفوذ نوتروفیل ارتباط دارد.

اکسید نیتریک برای کشتن پاتوژن های داخل سلولی حیاتی است. با این حال، تولید بیش از حد اکسید نیتریک، رادیکال سوپراکسید (O،-، و پراکسید هیدروژن) منجر به تولید پراکسی نیتریت سمی و ناپایدار می شود، مولکولی که با باقی مانده های تیروزین روی پروتئین ها واکنش می دهد و NT پایدار را تشکیل می دهد 56-601. اگرچه پراکسی نیتریت مایکوباکتری ها را می کشد، همچنین به سلول های ایمنی آسیب می رساند [57-59].

بنابراین، ما تصمیم گرفتیم سلول‌های تولیدکننده iNOS و نوتروفیل‌ها را در پوست موش‌های آزمایشی خود با ایمونوفلورسانس جستجو کنیم. سیگنال‌های پس‌زمینه برای iNOS و NT و تعداد بسیار کمی از سلول‌های Gr-1 پلاس را در پوست موش‌هایی که فقط PBS دریافت می‌کنند مشاهده کردیم (شکل 3A). افزایش بار مایکوباکتریومی و ضایعات نکروز بزرگ شده در پوست با تجمع باقیمانده های NT در ناحیه پوست نکروزه (58،59 موش های واکسینه نشده (شکل 3B) و BCGph آماده شده با MLM (شکل 3C) مطابق با پاسخ التهابی موضعی متعادل تر مرتبط است. و بهبود آسیب شناسی پوست، NT و انفیلتراسیون نوتروفیل در موش هایی که تلقیح های متوالی با hIFN- 2b (شکل 3D) یا موش BCGph پرایم شده و تقویت شده با hIFN 2b (شکل 3E) دریافت کردند، کاهش یافت. نفوذ مختل با Gr{11 }} به‌علاوه نوتروفیل‌ها و نواحی کاهش‌یافته NT با کوچک‌ترین ناحیه التهابی در بخش‌های پوست بافت‌شناسی موش‌هایی که با BCGph آغاز شده و با hIFN- 2b تقویت شده‌اند، همزمان بود (شکل 3F).

شکل 3. حفاظت با کاهش تجمع نیتروتیروزین، اختلال در تجمع نوتروفیل ها و بهبود التهاب پوست همراه است. مقاطع ضایعه پوستی با ترکیبی از آنتی بادی های اختصاصی iNOs (قرمز)، NT (سبز) و Gr{1}} (سفید) رنگ آمیزی شدند. نماینده 200× تصویر از (A) پوست موش‌های پرایم نشده و بدون چالش، (B) موش‌های تلقیح شده با PBS و چالش‌شده با MLM، (C) موش‌هایی که با BCGphipps پرایم شده و با MLM چالش‌شده بودند، ( د) موش‌هایی که به صورت عضلانی با hIFN- 2b تلقیح شدند و با MLM و (E) موش‌های آماده‌شده با BCGph، تقویت‌شده با hIFN- 2b و چالش‌شده با MLM مواجه شدند. (F, G) کمی ناحیه التهابی با ابزارهای خودکار میکروسکوپ Zeiss Axioplan، ضایعات پوستی در هشت هفته پس از چالش با MLM جمع‌آوری شدند، گرافیک‌ها میانگین منطقه اشغال شده توسط سلول‌های التهابی در ضایعات پوستی جذامی را نشان می‌دهند که برحسب میکرومتر مربع بیان می‌شود. نوار مقیاس=100 میکرومتر. n=6 موش/گروه * p < 0.05; ** p < 0.005; *** p < 0.0005 از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد.

تولید NO از نظر آماری در مقایسه با سایر گروه‌های آزمایشی معنی‌دار نبود، اما در گروه موش‌هایی که با BCGph پرایم شده و با hIFN{1}}b تقویت شده بودند، غلظت NO بالاتر بود (68.28 میکرومولار در لیتر ± 0). 0.889) نسبت به گروه‌های PBS و MLM (1±62.79 µM/L). ) (شکل 3G).

3.3. سیتوکین های ضد التهابی در سرم موش ها با BCGphipps افزایش یافته و با hIFN{3}}b تقویت می شوند

سیتوکین های پیش و ضد التهابی در سرم موش Balb/c پس از چالش با MLM اندازه گیری شد. مطابق با حالت سرکوب کننده سیستم ایمنی ناشی از MLM، غلظت سیتوکین های پیش التهابی در سرم موش های Balb/c تلقیح شده با PBS و به چالش کشیده شده با MLM کم بود (IFN-، 442 ± 625 pg/ml؛ TNF-، 436 ± 697 pg/mL. میلی لیتر؛ IL{8}}، 68 ± 48 pg/mL؛ IL{11}}، 67 ± 95 pg/mL). در مقابل، آنها سطوح متوسطی از سیتوکین های ضد التهابی در سرم داشتند (IL{15}}، pg/mL 124 ± 1763 و IL{18}}، 173 ± 1250 pg/mL). اگرچه موش‌ها با پرایمینگ BCGph و تقویت متوالی با hIFN{21}b محافظت شدند، مقادیر سیستمیک سایتوکاین‌های پیش‌التهابی از نظر آماری با موش‌های تلقیح شده با PBS و چالش‌شده با MLM تفاوتی نداشت. بطور غیر منتظره، غلظت IL{22}} (1875 ± 352 pg/mL، 0.05 > p) و IL{27}} (4250 ± 271 pg/mL) در سرم این موش‌ها در مقایسه با افزایش معنی‌دار افزایش یافت. با موش های تلقیح شده با PBS و چالش با MLM (جدول 1). این نتایج نشان می دهد که پروتکل واکسیناسیون ما ممکن است مسیرهای ضد التهابی را برای جلوگیری از آسیب بافتی فعال کند.

3.4. اختلال در تجمع ترگ در گره های لنفاوی تخلیه کننده (DLN) موش هایی که با BCGphipps پر شده یا با hIFN تقویت شده اند- 2b

با توجه به اینکه Tregs IL-10 [61،62] تولید می کند، تصمیم گرفتیم CD3 به علاوه FOXP3 به علاوه Tregs را در غدد لنفاوی تخلیه کننده (DLN) که در نزدیکی محل واکسیناسیون قرار دارند، کمی کنیم. در موش‌های غیر آلوده (PBS)، Tregs همچنان وجود داشت (CD3 9.8 ± 113 به علاوه FOXP3 به علاوه Treg/200 × میدان) (شکل 4A). همانطور که انتظار می رفت، Tregs در موش هایی که با MLM به چالش کشیده شده بودند و واکسن (BCGph) یا hIFN{12}}b (30 ± 214 CD3 به اضافه FOXP3 به اضافه Tregs/200 × میدان) را دریافت نکردند، به طور قابل توجهی افزایش یافت (شکل 4B). به طور همزمان، سطوح پایین تر Tregs در موش هایی که با BCGph (160 ± 26 CD3 به علاوه FOXP3 به علاوه Tregs/200 × میدان) اولیه شده بودند (شکل 4C) و موش هایی که hIFN{25}}b (162 ± 33 CD3 پلاس دریافت کردند) مشاهده شد. FOXP3 plus Tregs/200 × field) (شکل 4D); موش‌هایی که با BCGph آماده شده بودند و با hIFN{32}}b (127 ± 16 CD3 به اضافه FOXP3 به علاوه Tregs/200 × میدان) (شکل 4E) تراکم Tregs مشابهی نسبت به موش‌های واکسینه نشده بدون hIFN داشتند{39}}b افزایش. با این حال، پس از شمارش کورکورانه CD3 به‌علاوه FOXP3 به‌علاوه Tregs در DLN‌های موش‌های آزمایشی، متوجه شدیم که Tregs در DLN موش‌ها پس از پرایمینگ BCGph به طور قابل‌توجهی کاهش یافته است (p=0.0013), hIFN- 2 b تلقیح (p=0.0074)، یا پرایمینگ ترکیبی BCGph و تقویت hIFN- 2b (p=0.0013) در مقایسه با موش‌های به چالش کشیده شده با MLM (شکل 4E).

شکل 4. اختلال در تجمع سلول‌های T تنظیمی (Tregs) در غدد لنفاوی تخلیه‌کننده (DLNs) موش‌هایی که با BCGphipps پر شده و با hIFN- 2 تقویت شده‌اند. موش ها قربانی شدند و DLN ها هشت هفته پس از چالش با MLM جمع آوری شدند. DLN با آنتی‌بادی‌های اختصاصی برای CD3 (قرمز) و FOXP3 (هسته‌های سبز) رنگ‌آمیزی شد تا CD3 به علاوه FOXP3 به‌علاوه Tregs توسط ایمونوفلورسانس شناسایی شود. (الف) تجمع پایه Tregs در DLN موش های واکسینه نشده. B موش های تقویت شده؛ (F) تجزیه و تحلیل مورفومتریک کاهش قابل‌توجهی در Tregs در DLN‌های موش‌های تقویت‌شده با BCGph primed/hIFN{12}}b را نشان می‌دهد. نوار مقیاس=100 میکرومتر، n=6 موش/گروه * p < 0.05; ** p < 0.005; *** p < 0.0005 از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد.

3.5. BCGphipps Priming و hIFN- 2b بر پاسخ‌های GCs در DLN ماوس تأثیر می‌گذارد

Tregs خاصی در GCها وجود دارد که به عنوان سلول های تنظیم کننده فولیکولی T شناخته می شوند (TFRآنها هر دو پاسخ GCs را تعدیل می کنند و از تولید سلول های پلاسما خود واکنشی جلوگیری می کنند (28،33). با BCGph آغاز شده و با hlFN-a 2b تقویت شده است. مطابق با عدم وجود تحریک آنتی ژنی، ما GCها را در DLNهای موشهای غیر آلوده شناسایی نکردیم.

شکل 5. پرایمینگ BCGphipps و تقویت کننده hFN-a 2b بر پاسخ های GC در DLN پس از چالش MLM تأثیر می گذارد. موش‌ها در هشت هفته پس از چالش با ML M قربانی شدند. غدد لنفاوی تخلیه (DLNs) با آنتی‌بادی‌های مشخص‌کننده آنتی ژن هسته‌ای سلولی تکثیرکننده (PCNA، هسته‌های قرمز)، آگلوتینین بادام‌زمینی (PNA، سبز) و CD45R (B22{13) رنگ‌آمیزی شدند. }}، سفید) برای شناسایی GC های حاوی خوشه های فشرده PCNA*PNA به اضافه * B220سلول های GC B پایین. سلول های GC B در DL Ns موش های (A) بدون پرایم و بدون چالش؛ (B) موش های تلقیح شده با PBS و به چالش کشیده شده با MLM. (C) موش‌های آماده شده با BCGph و چالش با MLM. (D) موش ها به صورت عضلانی با hlFN-a 2b تقویت شده و با MLM به چالش کشیده شدند. (E) موش ها با BCGph تقویت شده با hlFN-a 2b، و با ML M به چالش کشیده شدند. (F) GC در DL Ns منفرد موش های تجربی اندازه گیری میانگین GC اندازه گیری شد. نوار مقیاس=100 um.=6 موش/گروه. "p < 0.05، * p <0.005؛ *** y <0.0005 از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد.

شکل 5. پرایمینگ BCGphipps و تقویت کننده hlFN-a 2b بر پاسخ های GC در DLN پس از چالش ML M تأثیر می گذارد. موش‌ها در هشت هفته پس از چالش با ML M قربانی شدند. غدد لنفاوی تخلیه (DLNs) با آنتی‌بادی‌های اختصاصی برای تکثیر آنتی‌ژن هسته‌ای سلولی (PCNA، هسته‌های قرمز)، آگلوتینین بادام‌زمینی (PNA، سبز) و CD45R (B22) رنگ‌آمیزی شدند. 13}}، سفید) برای شناسایی GC های حاوی خوشه های فشرده PCNAPNA به علاوه سلول های B220GC B پایین. سلول های GC B در DL Ns موش های (A) بدون پرایم و بدون چالش؛ (B) موش های تلقیح شده با PBS و به چالش کشیده شده با MLM. (C) موش ها با BCGph آماده شده و با MLM به چالش کشیده شده اند. (D) موش‌هایی که به صورت عضلانی با hlFN-a 2b تقویت شده و با MLM به چالش کشیده شده‌اند؛ (E) موش‌هایی که با BCGph تقویت شده با hlFN-a 2b آغاز شده و با MLM به چالش کشیده شده‌اند. (F) GC در DLN های منفرد موش های تجربی برای محاسبه اندازه متوسط ​​GC اندازه گیری شد. نوار مقیاس=100 um. 1=6 موش/گروه. " y < 0.05. * y < 0.005، *** y < 0.0005 از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد.

جالب توجه است، موش‌هایی که با BCGph پرایم شده بودند، GCهای بزرگ‌تری نسبت به موش‌هایی داشتند که با MLM به چالش کشیده شدند (شکل 5C). موش های ایمن شده با hlFN-a 2b (شکل 5D) دارای GCهایی با اندازه مشابه با موش هایی بودند که با MLM به چالش کشیده شده بودند. موش هایی که با BCGph آماده شدند و با hlFN-a 2b تقویت شدند، GCهایی با اندازه متوسط ​​داشتند (شکل 5E). برای داشتن یک ارزیابی کمی بیشتر از پاسخ‌های GCs در DLNs، ما میانگین اندازه GC را در بخش‌های جداگانه DLN محاسبه کردیم. مطابق با مشاهدات ما، کاهش قابل توجهی در اندازه متوسط ​​GC در DLN ها پس از تزریق hlFN-a 2b و در پروتکل تقویت کننده BCGph priming/hIFN-a 2b یافتیم (شکل 5E).

3.6. سطوح قابل مقایسه آنتی بادی های اختصاصی گلیکولیپید در موش ها با M. lepraemurium پس از پرایمینگ BCGphipps و تقویت hIFN{3}}b به چالش کشیده شد.

با توجه به تفاوت های مشاهده شده در تشکیل و سازماندهی GC، غلظت آنتی بادی های مخصوص گلیکولیپیدهای استخراج شده از MLM را اندازه گیری کردیم. در سطح جهانی، نتایج ما نشان می‌دهد که مقادیر سیستمیک کلاس‌ها و ایزوتیپ‌های مختلف آنتی‌بادی‌های اختصاصی گلیکولیپید تحت تأثیر واکسیناسیون، تجویز متوالی hIFN- 2b یا پروتکل BCGph priming/hIFN- 2b قرار نگرفته است. جدول 2). موش هایی که فقط با hIFN{4}}b تقویت شده بودند، مقدار بیشتری از آنتی بادی های IgG و IgG1 را در سرم ایجاد کردند. با این حال، سطح آنتی بادی IgG و Ig G1 در مقایسه با سایر گروه های تجربی از نظر آماری معنی دار نبود (جدول 2).

4. بحث

در مطالعه حاضر، ما نشان دادیم که پروتکل تقویت کننده اصلی ما بر اساس پرایمینگ زیر جلدی BCGphipps و تقویت متوالی داخل عضلانی با افزایش مقادیر hIFN{1}b از موش ها در برابر چالش داخل پوستی با MLM محافظت می کند.

پروتکل تقویت کننده اولیه از رشد MLM در پوست جلوگیری کرد و آسیب شناسی موضعی را با کاهش تولید NT و التهاب نوتروفیل بهبود بخشید (شکل 3E). همچنین منجر به القای سایتوکین‌های ضد التهابی (IL-4 و IL-10) شد که احتمالاً با التهاب بیش از حد در پوست مقابله می‌کند و به‌صورت سیستمی ظاهر می‌شود. به طور غیر منتظره، اگرچه رژیم درمانی CD3 به علاوه FOXP3 به علاوه Tregs را در DLN ها کاهش داد (شکل 4E)، پاسخ های GC به شدت افزایش پیدا نکرد (شکل 5E)، و غلظت سرمی آنتی بادی های اختصاصی گلیکولیپید در همه گروه های آزمایشی به جز در گروه آزمایش مشابه بود. موش‌هایی که فقط با hIFN{10}}b تلقیح شدند (جدول 2). با این وجود، داده های تجربی ما از استفاده بالقوه از پرایمینگ BCG همراه با تقویت IFN 2b داخل عضلانی، به عنوان یک ایمونوتراپی امیدوارکننده که سزاوار کاوش در جذام انسانی است، پشتیبانی می کند.

تظاهرات بالینی جذام با طیف ایمونولوژیک شناسایی شده در بیماران مرتبط است و از LL تا TT متغیر است [2،4،14،18]. به طور کلی، ایمنی میزبان نسبت به M. leprae عمدتاً با یک پاسخ کمکی T قطبی شده (Th1/Th2) مشخص می شود. در یک طرف طیف، اگرچه LL با انرژی مشخص می شود، اما هنوز مقداری واکنش به آنتی ژن های مایکوباکتریایی و تولید IL-4 و IL-10 وجود دارد. در مقابل، در TT، یک پاسخ غالب Th1 منجر به فعال شدن ماکروفاژها توسط IFN می‌شود که از بین بردن باسیل‌ها را تسریع می‌کند. موش‌های آلوده به MLM معمولاً به جذام شبه جذام مبتلا می‌شوند، بدون اینکه تسلط آشکاری برای ایمنی هومورال یا سلولی داشته باشند [18-20].

آنتی‌بادی‌های محافظ ایجاد شده توسط عفونت یا واکسیناسیون [63] توسط فرآیندی به نام بلوغ میل ترکیبی تولید می‌شوند که در مراکز ژرمینال تشکیل شده در اندام‌های لنفاوی ثانویه (طحال، غدد لنفاوی) یا لنفوئید ثالث (TLO) تولید شده در بافت‌های محیطی انجام می‌شود [23،25] . دقیقاً در GCها است که تولید سلول‌های B حافظه و سلول‌های پلاسمایی ترشح‌کننده آنتی‌بادی طولانی‌مدت به ایجاد مصونیت طولانی‌مدت در برابر برخوردهای آینده با پاتوژن‌ها کمک می‌کند. القای موثر پاسخ های GC به همکاری انواع سلول های متعدد، از جمله سلول های B، سلول های کمکی فولیکولی T (TFH)، ماکروفاژهای بدن قابل لمس و سلول های دندریتیک فولیکولی (FDCs) بستگی دارد [64]. در واقع، واکسن‌ها پاسخ‌های موفق GC و مراکز ژرمینال نابجا را در غدد لنفاوی تحریک می‌کنند [24،25،31،49].

علاوه بر این، سلول های کمکی فولیکولی T و سلول های تنظیم کننده فولیکولی T [27-30] تعادل ظریف بین القای پاسخ های آنتی بادی موثر و خودایمنی را حفظ می کنند. اگرچه ما القای خودایمنی را در مطالعه خود رد نکردیم، اما همچنان بر اثرات پروتکل تقویت کننده اولیه با BCGph و hIFN- 2b روی Tregs از DLNها تمرکز کردیم. موش‌های محافظت‌شده CD3 به‌علاوه FOXP3 به علاوه Tregs در DLN‌هایشان به‌طور قابل‌توجهی کمتر بودند. با این حال، مطالعات بیشتری برای تعیین اینکه آیا برخی از این Tregs سلول‌های کمکی فولیکولی T هستند که واکنش‌های GC را تنظیم می‌کنند، مورد نیاز است [27-30]. این نتایج ممکن است دلالت بر این داشته باشد که القای کارآمد ایمنی محافظ همراه با کاهش جزئی Tregs در DLN ها برای کنترل رشد مایکوباکتری و جلوگیری از التهاب پاتولوژیک در پوست مورد نیاز است.

مطالعات قبلی اثرات سیستمیک و مخاطی IFN نوع I را بر روی سلول های کمکی فولیکولی T و سلول های تنظیم کننده فولیکولی T گزارش کرده اند [19،32،64]. در واقع، IFN نوع I به طور غیرمستقیم TFH را در غدد لنفاوی با تحریک پرایمینگ سلول های T توسط سلول های دندریتیک افزایش می دهد [34]. IFN نوع I همچنین سوئیچ ایزوتیپ را در GCها ترویج می کند. علاوه بر این، یک مطالعه اخیر نشان داد که IFN نوع I باعث ایجاد CXCL{4}}در ریه‌ها می‌شود [49].

بنابراین، القای CXCL13 توسط IFN نوع I می‌تواند جذب سلول‌های B ساده به اندام‌های لنفوئیدی ثانویه را افزایش دهد و تولید سلول‌های پلاسمایی ترشح‌کننده آنتی‌بادی را افزایش دهد، و در سطح جهانی حافظه طولانی‌مدت و پاسخ‌های ایمونولوژیک سلول‌های پلاسما را بهبود بخشد [23-25،64]. ]، به ویژه در حضور ادجوانت هایی مانند پلی آی سی [65]. علاوه بر این، تجویز IFN نوع I باعث ایجاد GC در ریه های بیماران مبتلا به بیماری های خودایمنی [31] یا سل می شود [66،67]. بنابراین، محاصره CXCL13 می تواند به درمان این اختلالات التهابی مزمن کمک کند [49]. در این زمینه، ما کاهش بسیار ملایمی در اندازه GC در DLN موش‌های محافظت‌شده با پرایم بوست مشاهده کردیم (شکل 5E). با این حال، تحقیقات بیشتری برای تعریف بهتر همبستگی بین تشکیل GC و محافظت ایجاد شده در آن موش‌های تقویت‌شده اولیه مورد نیاز است. تحت تنظیمات آزمایشی پرایمینگ با BCGph و تقویت داخل عضلانی hIFN- 2b (51)، موش‌های مطالعه ما حفاظت بالاتری را با تجویز BCGph-hIFN- 2b (80 درصد) نسبت به BCGph به تنهایی تجربه کردند. (60 درصد)، همانطور که با عدم وجود یا اندازه کوچک ضایعات پوستی (شکل 2) و مقدار قابل مقایسه ای از آنتی بادی های IgG و IgG1 خاص برای گلیکولیپیدهای MLM تعیین می شود (جدول 2). نتایج ما با افزایش مقدار IgG در موش های محافظت شده توسط واکسیناسیون با سویه متفاوت BCG (پاستور) در تضاد است [41]. این داده ها نشان می دهد که نوع سویه BCG مورد استفاده برای فرموله کردن واکسن می تواند بر نتیجه پاسخ ایمنی هومورال علیه MLM یا M. leprae تأثیر بگذارد [51].

علاوه بر این، چندین مطالعه در مورد سل، اثرات بالقوه و سودمند استراتژی هترولوگ تقویت اولیه را در القای پاسخ‌های ایمنی محافظتی نشان داده‌اند [68-70]. علاوه بر این، به خوبی شناخته شده است که نوع و مسیر ایمن سازی بر میزان آنتی بادی و پاسخ های ایمنی سلولی تأثیر می گذارد. به‌طور شگفت‌انگیزی، موش‌های محافظت‌شده در مقایسه با موش‌هایی که فقط با PBS، BCGph یا hIFN- 2b به تنهایی درمان شده‌اند، به‌طور قابل‌توجهی IL{3}} و IL-10 بالاتری را در سرم نشان می‌دهند (جدول 1). اینکه چگونه سایتوکین های ضد التهابی بر ایمنی محافظتی در جذام تأثیر می گذارند در حال حاضر در آزمایشگاه ما تحت بررسی است. با این حال، چندین مطالعه نشان داده اند که ایمنی سلولی کارآمد در برابر مایکوباکتریوم ها بر تعادل ظریف بین محافظت و پیشگیری از آسیب شناسی متکی است [71]. علاوه بر این، شواهدی مبنی بر القای هر دو نوع سیتوکین در مدل های تجربی دیگر وجود دارد [72-75].

نتایج جمعی ما نشان می دهد که موفقیت پروتکل تقویت اولیه ما به القای یک پاسخ ایمنی متعادل بستگی دارد که به طور موثر MLM را در پوست از بین می برد و آسیب بافت را با القای سایتوکین های ضد التهابی (IL-4 و IL10) محدود می کند. احتمالاً از سلول های ایمنی محافظت می کند [76،77]. در واقع، IL-10 تولید شده توسط Tregs القایی، التهاب را در سطوح مخاطی، به ویژه سطوح مربوط به بیماری التهابی روده تعدیل می‌کند [77،78]. این یافته‌ها یک مطالعه دقیق جنبشی فعال‌سازی سلول‌های B، تشکیل و تنظیم GC، تولید سلول‌های تنظیم‌کننده فولیکولی T، و فعال‌سازی NF-kB در سیستم پرایم بوست ما با BCGph و hIFN{11}}b و سپس عفونت MLM را تضمین می‌کند. درک مکانیکی بیشتری از نقش سلول های ایمنی و مسیرهای NF-kB در القای ایمنی محافظتی در پوست و غدد لنفاوی پس از چالش MLM دارند.

5. نتیجه گیری ها

از این داده‌ها، می‌توان نتیجه گرفت که تقویت متوالی عضلانی با hIFN- 2b واکسیناسیون BCG M. bovis را افزایش می‌دهد، در برابر چالش داخل پوستی با MLM محافظت می‌کند و خواص کمکی امیدوارکننده IFN-a 2b انسانی را در زمینه BCG آشکار می‌کند. واکسیناسیون برای جلوگیری از عفونت جذام در مناطق آندمیک. با بهترین دانش ما، این اولین گزارش از اثربخشی درمانی BCGphipps در ترکیب با ارائه دارویی hIFN- 2b در یک مدل پیش بالینی بیماری شبه جذام است.

مشارکت نویسنده:

طراحی مطالعه، GGG، OR-E.، SOI-T. و JR-M. انجام مطالعه، GGG، OR-E.، SOI-T. و JR-M. تجزیه و تحلیل داده ها: GGG، OR-E.، SOI-T. و JR-M. تفسیر داده، GGG، OR-E.، SOI-T. و JR-M. پیش نویس نسخه خطی، GGG، OR-E.، SOI-T. و JR-M.؛ بازنگری محتوای دستنوشته، GGG، OR-E.، SOI-T. و JR-M. GGG، OR-E.، SOI-T. و JR-M. مسئولیت یکپارچگی تجزیه و تحلیل داده ها را بر عهده بگیرید. همه نویسندگان نسخه منتشر شده نسخه خطی را خوانده و با آن موافقت کرده اند.

منابع مالی:

GGG و OR-E. توسط SNI، CONACYT (مکزیکو سیتی، مکزیک) پشتیبانی شدند. GGG از Perfil Prodep 2019-2022 و JR-M پشتیبانی دریافت کرد. توسط بودجه داخلی از گروه پزشکی دانشگاه مرکز پزشکی روچستر و RO1AI111914 پشتیبانی شد.

بیانیه هیئت بررسی نهادی:

تمام آزمایشات حیوانی پس از تأیید کمیته مراقبت و مدیریت حیوانات سازمانی (ZOO-010-2020) انجام شد. CIE-ENCB ZOO 016/2014، 07 مارس 2014.

بیانیه رضایت آگاهانه:

قابل اجرا نیست.

بیانیه در دسترس بودن داده ها:

داده ها طبق دستورالعمل های سازمانی به اشتراک گذاشته خواهد شد.

قدردانی ها:

ما از Ricardo Villalobos برای کمک به IHC، و Rogelio Hernandez Pando (INCMNSZ، مکزیکو سیتی)، که سویه BCGphipps را ارائه کردند، سپاسگزاریم.

تضاد علاقه:

نویسندگان هیچ تضاد منافع را اعلام نمی کنند.

منابع

1. WHO. سازمان بهداشت جهانی: سل — حقایق جهانی 2011/2102. ژنو: سازمان بهداشت جهانی برای متوقف کردن سل 2012. در دسترس آنلاین: http://www.who.int/tb/publications/2011/factsheet_tb_2011.pdf (در 1 فوریه 2021 قابل دسترسی است).

2. جذام خوب، PE: چه چیزی در حال "حذف" است؟ گاو نر ارگان بهداشت جهانی. 2007، 85، 1-2. [CrossRef]

3. Rambukkana، A. چگونه Mycobacterium leprae سیستم عصبی محیطی را هدف قرار می دهد؟ Trends Microbiol. 2000، 8، 23-28. [CrossRef]

4. رودریگز، JIA; Triellato، GL; Meirelles، NML؛ Teixeira، CC; لیون، اس. Esteves، روش های طبقه بندی جذام ARM: یک مطالعه مقایسه ای در یک شخصیت ارجاعی در برزیل. بین المللی ج. عفونی کردن. دیس 2016، 45، 118-122. [CrossRef] [PubMed]

5. گلوک، ع. ون در پلوگ، جی. تله، OBR; کیز، ال. فرانکن، ام سی؛ پرینس، سی. ووتر، دی جی; Sarno، NE; Sampaio، EP; Otenhoff، THM ترکیب منطقی پپتیدهای مشتق شده از پروتئین های مختلف مایکوباکتریوم لپره، حساسیت را برای تشخیص ایمنی عفونت M. leprae بهبود می بخشد. کلین واکسن ایمونول. 2008، 15، 522-533. [CrossRef] [PubMed]

6. گلوک، ع. بوبوشا، ک. شیپ، JJVDP-V. اسپنسر، جی اس. بانو، س. مارتینز، MVSB؛ Cho، SN; فرانکن، KLMC؛ کیم، اچ جی; بکله، ی. و همکاران نشانگرهای زیستی جدید مرتبط با تشخیص جذام قابل استفاده در مناطق هیپرآندمیک جذام. J. Immunol. 2012، 188، 4782-4791. [CrossRef]

7. Geluk، A. نشانگرهای زیستی برای جذام: آیا T (سلول ها) را ترجیح می دهید؟ لپر Rev. 2013, 84, 3-12. [CrossRef] [PubMed]

8. Alcaïs, A.; آلتر، ا. آنتونی، جی. اورلووا، م. نگوین، وی تی. سینگ، ام. وندربرگت، روابط عمومی؛ کاتوچ، ک. میرا، ام تی؛ Vu، HT؛ و همکاران تکرار گام به گام یک آلل لنفوتوکسین کم تولید را به عنوان یک عامل خطر اصلی برای جذام زودرس شناسایی می کند. نات. ژنت 2007، 39، 517-522. [CrossRef] [PubMed]

9. آوانزی، ج. سینگ، پی. ترومن، RW; Suffys، PN اپیدمیولوژی مولکولی جذام: به روز رسانی. آلوده کردن ژنت تکامل. 2020، 86، 104581. [CrossRef]

10. Lastoria, JC; Abreu، MA بررسی جذام جنبه های بالینی و بیماری زایی اپیدمیولوژیک - قسمت 1. Bras. درماتول. 2014، 89، 205-218. [CrossRef]

11. Rojas-Espinosa، O. موضوعات فعلی در مورد مشخصات پاسخ ایمونولوژیک میزبان به عفونت های مایکوباکتریایی. کتاب نقد و بررسی؛ Tomioka، H.، Ed. راهنمای تحقیق: تریواندروم، هند، 2009; صص 97-140.

12. آدامز، LB; پنا، TM; شارما، آر. هاگ، AD; شور، ای. ترومن، RW بینش از مدل های حیوانی در مورد ایمنی ژنتیک جذام. بازنگری. مم Inst. اسوالدو کروز 2012، 107، 197-208. [CrossRef]

13. روخاس-اسپینوزا، او. بسریل-ویلانووا، ای. وک رودریگز، ک. Arce-Paredes، P. Reyes-Maldonado، E. فلج اندام‌های عقب در موش‌های آلوده به مایکوباکتریوم لپراموریوم ناشی از آسیب استخوان و نه درگیری عصبی است. کلین انقضا ایمونول. 2005، 140، 436-442. [CrossRef]

14. Modlin, LR پاسخ ایمنی ذاتی در جذام. کر. نظر. ایمونول. 2010، 22، 48-54. [CrossRef]

15. اولیویرا، RB; اوچوا، MT; Sieling، PA; Rea، TH; رامبوکانا، ا. Sarno، EN; Modlin، RL بیان گیرنده Toll-like 2 بر روی سلول های شوان انسانی: مکانیزم آسیب عصبی در جذام. آلوده کردن ایمنی 2003، 71، 1427-1433. [CrossRef] 16. MacMicking، J.; Xie، QW; ناتان، C. اکسید نیتریک و عملکرد ماکروفاژ. آنو. کشیش ایمونول. 1997، 15، 323-350. [CrossRef]

17. ایوانز، تی. باتری، ال. کارپنتر، ا. اسپرینگال، DR. پولاک، جی. کوهن، جی. نوتروفیل های انسانی تحت درمان با سیتوکین حاوی سنتاز اکسید نیتریک القایی هستند که نیتراسیون باکتری های بلعیده شده را تولید می کند. Proc. Natl. آکادمی علمی ایالات متحده آمریکا 1996، 93، 9553-9554. [CrossRef] [PubMed]

18. Fonseca، AB; سیمون، دکتر کازانیگا، RA; د مورا، TR; د آلمیدا، RP; دوتی، ام اس; رید، اس جی; de Jesus, AR تأثیر پاسخ‌های ایمنی ذاتی و سازگار بر نتایج بالینی متفاوت جذام. آلوده کردن دیس فقر 2017، 6، 5-13. [CrossRef] [PubMed]

19. Sadhu، S. Khaitan, BK; جوشی، بی. سنگوپتا، U. Nautiyal، AK; میترا، DK متقابل بین سلول های T تنظیمی و سلول های Th17: ارتباط با ایمنی قطبی در جذام. PLoS Negl. تروپ دیس 2016, 10, e0004338. [CrossRef] [PubMed]

20. روخاس اسپینوزا، او. وک رودریگز، ک. Arce-Paredes، P. اثر پراکسیداز اگزوژن بر تکامل جذام موش. بین المللی جی. لپر. مایکوباکت دیگر دیس 2002، 70، 191-200.

21. Ischiroopoulos، H. نیتراسیون تیروزین بیولوژیکی: عملکرد پاتوفیزیولوژیکی اکسید نیتریک و گونه های اکسیژن فعال. قوس. بیوشیمی. بیوفیز. 1998، 356، 1-11. [CrossRef]

22. جوان، DB لیپید جذام کلید ورود به سلول شوان را فراهم می کند. Trends Microbiol. 2001، 9، 52-54. [CrossRef]

23. بنارد، او. مراکز سیستر، JG Germinal: برای بلوغ میل ترکیبی و تنوع آنتی بادی برنامه ریزی شده است. کر. نظر. ایمونول. 2017، 45، 21-30. [CrossRef] [PubMed] 24. Victora, DG; مراکز Nussenweig، MC Germinal. آنو. کشیش ایمونول. 2012، 30، 429-457. [CrossRef] [PubMed]

25. Cirelli، KM; Crotty، SH تقویت مرکز ژرمینال با در دسترس بودن آنتی ژن گسترده. کر. نظر. ایمونول. 2017، 47، 64-69. [CrossRef]

26. Good-Jacobson، KL; Szumilas، CG; چن، ال. شارپ، ق. Tomayko، MM; Shlomchik، MJ PD{2}} بقای سلول های B مرکز ژرمینال و تشکیل و میل ترکیبی سلول های پلاسما با عمر طولانی را تنظیم می کند. نات. ایمونول. 2010، 11، 535-542. [CrossRef]

27. ولنبرگ، آی. Agua-Doce، A.; هرناندز، آ. آلمیدا، سی. اولیویرا، وی جی؛ فارو، ج. Graca، L. تنظیم واکنش مرکز ژرمینال توسط Foxp3 به علاوه سلول های T تنظیم کننده فولیکولی. J. Immunol. 2011، 187، 4553-4560. [CrossRef] [PubMed]

28. Litterman، MA; پیرسون، دبلیو. لی، SK; کالیس، ا. کاواموتو، اس. راینر، TF; سریواستاوا، م. Divekar، DP; بیتون، ال. هوگان، جی جی; و همکاران سلول های T تنظیم کننده فولیکولی FOXP3 به علاوه پاسخ مرکز ژرمینال را کنترل می کنند. نات. پزشکی 2011، 17، 975-982. [CrossRef]

29. مایلز، بی. Connick, E. کنترل مرکز ژرمینال توسط سلولهای T تنظیم کننده فولیکولی در طول عفونت. جلو. ایمونول. 2018، 9، 2704–3710. [CrossRef]

30. فو، دبلیو. لیو، ایکس. لین، ایکس. فنگ، اچ. سان، ال. لی، اس. چن، اچ. تانگ، اچ. لو، ال. جین، دبلیو. و همکاران کمبود سلول های تنظیم کننده فولیکولی T باعث افزایش خودایمنی می شود. J. Exp. پزشکی 2018، 215، 815–825. [CrossRef]

31. پیتزالیس، سی. جونز، GW; بمباردیری، م. جونز، SA ساختارهای لنفاوی نابجا در عفونت، سرطان و خودایمنی. نات. کشیش ایمونول. 2014، 14، 447-462. [CrossRef]

32. علولو، م. کار، ای جی. گادور، م. بیگنون، آ. لیبلائو، آر اس؛ فازیلو، ن. سلول های T تنظیم کننده فولیکولی Linterman، MA می توانند برای آنتی ژن ایمن ساز اختصاصی باشند و از سلول های T ساده مشتق شوند. نات. اشتراک. 2016، 7، 10579–10589. [CrossRef]

33. Vinuesa، CG; سانز، آی. کوک، MC اختلال در تنظیم مراکز ژرمینال در بیماری خودایمنی. نات. کشیش ایمونول. 2009، 9، 845-857. [CrossRef]

34. Cucak، H. یرلید، یو. رییسیس، بی. کالینکه، یو. Johansson-Lindborn، B. سیگنال‌دهی اینترفرون نوع I در سلول‌های دندریتیک باعث تحریک رشد سلول‌های کمکی فولیکولی T ساکن گره‌های لنفاوی می‌شود. مصونیت 2009، 31، 491-501. [CrossRef]

35. Desvignes, L. ولف، ای جی. ارنست، JD نقش پویای IFNهای نوع I و نوع II در عفونت اولیه با مایکوباکتریوم توبرکلوزیس. J. Immunol. 2012، 188، 6205-6215. [CrossRef]

36. Teles, MBR; Graeber، GT; Krutzik، RS; مونتویا، دی. شنک، م. لی، جی دی. کومیسوپولو، ای. کلی-اسکومپیا، ک. چون، آر. ایر، اس اس. و همکاران اینترفرون نوع I، پاسخ های ضد مایکوباکتری انسانی ناشی از اینترفرون نوع دوم را سرکوب می کند. Science 2013, 339, 1448-1453. [CrossRef]

37. جی، دی ایکس; یاماشیرو، LH; چن، کی جی. موکایدا، ن. کرامنیک، آی. داروین، KH; حساسیت ونس، RE نوع I مبتنی بر اینترفرون به مایکوباکتریوم توبرکلوزیس توسط IL-1Ra واسطه می‌شود. نات. میکروبیول. 2019، 4، 2128–2135. [CrossRef]

38. مانکا، سی. تسنوا، ال. برگتولد، ا. فریمن، SH; تووی، م. Musser، MJ; باری، EC، 3; Freedman، HV; کاپلان، G. ویروسی بودن جدایه بالینی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در موش با عدم القای ایمنی نوع Th1 تعیین می شود و با القای IFN-/ مرتبط است. Proc. Natl. آکادمی علمی USA 2007, 98, 5752–5757. [CrossRef] [PubMed]

39. Telesca، C. آنجلیکو، م. پیکولو، پی. نوسوتی، ال. مورون، آ. لونگی، سی. کربن، م. Baiocchi، L. درمان هپاتیت D با اینترفرون آلفا باعث تشدید سل در یک مهاجر می شود. ج. عفونی کردن. 2007، 54، e223–e226. [CrossRef] [PubMed]

40. جیاکومینی، ای. Remoli، ME; گافا، وی. پردینی، م. فتورینی، ال. Coccia، EM IFN- با تأثیر بر بلوغ DC، ایمنی زایی BCG را بهبود می بخشد. J. Leukoc. Biol. 2008، 85، 462-468. [CrossRef] [PubMed]

41. ریواس سانتیاگو، م. Guerrero، GG IFN- تقویت مایکوباکتریوم بوویس باسیلوس Calmette Güerin-واکسن پاسخ سلولی نوع Th1 و محافظت در برابر عفونت M. tuberculosis را تقویت کرد. BioMed Res. بین المللی 2017، 2017، 6760. [CrossRef]

42. Guerrero، GG; رنگل مورنو، جی. Islas-Trujillo, S.; روجاس-اسپینوزا، O. تقویت متوالی عضلانی با IFN-Alpha از موش های واکسینه شده با مایکوباکتریوم بوویس BCG در برابر عفونت M. lepraemurium محافظت می کند. BioMed Med. Res. بین المللی 2015, 2015, 414027.

43. مک ناب، ف. مایر-باربر، ک. شر، ا. واک، ا. O'Garra، A. اینترفرون نوع I در بیماری های عفونی. نات. کشیش ایمونول. 2015، 15، 67-103. [CrossRef]

44. اوشی، جی جی; ویسکونتی، R. IFN های نوع I و تنظیم پاسخ های TH1: معماها هم حل شدند و هم ظاهر شدند. نات. ایمونول. 2000، 1، 17-19. [CrossRef]

45. González-Navajas، JM; لی، جی. دیوید، م. Raz، E. عملکردهای تعدیل کننده ایمنی اینترفرون های نوع I. نات. کشیش ایمونول. 2012، 12، 125-135. [CrossRef]

46. ​​لو بون، ا. اینترفرون DF نوع I سخت به عنوان یک محرک برای پرایمینگ متقاطع. واقعیت رشد سیتوکین Rev. 2008، 19، 33-40. [CrossRef]

47. براچی، ال. کنینی، آی. پوزلی، اس. سستیلی، پ. وندیتی، ام. اسپادا، م. دوناتلی، آی. بلاردلی، اف. Proietti, E. نوع I IFN یک ادجوانت قوی مخاطی برای واکسیناسیون انتخابی داخل بینی در برابر ویروس آنفلوانزا در موش است و بر جذب آنتی ژن در سطح مخاطی تأثیر می گذارد. واکسن 2005، 23، 2994-3004. [CrossRef]

48. نیمکت، RB; Atmar, RL; کیت، TR; کوارلز، جی.ام. کایتل، WA; آردن، NH; ولز، جی. نینو، دی. Wyde, PR اثرات متضاد اینترفرون نوع I به عنوان کمکی مخاطی برای واکسن آنفولانزا در موش و انسان. واکسن 2009، 27، 5344-5348. [CrossRef] [PubMed]

49. Denton، AE; اینوسنتین، اس. کار، ای جی. برادفورد، بی.ام. لافورس، اف. مابوت، NA; موربه، U. لودویگ، بی. داماد، JR; Good-Jacobson، KL; و همکاران اینترفرون نوع I CXCL13 را برای حمایت از تشکیل مرکز ژرمینال نابجا القا می کند. J. Exp. پزشکی 2019، 216، 621–637. [CrossRef]

50. تولدو، PTG; باتیستا-سیلوا، ال آر. Medeiros، RCA; لارا، FA; مورائس، اینترفرون های MO نوع I، اتوفاژی و متابولیسم میزبان در جذام. جلو. ایمونول. 2018، 23، 806-817. [CrossRef]

51. ژانگ، دبلیو. ژانگ، ی. ژنگ، اچ. پان، ی. لیو، اچ. دو، پ. وان، ال. لیو، جی. زو، بی. ژاگ، جی. و همکاران تعیین توالی ژنوم و تجزیه و تحلیل سویه های واکسن BCG. PLoS ONE 2013, 8, e071243. [CrossRef]

52. وک رودریگز، ک. سیلوا-میراندا، م. Arce-Paredes، P. روجاس اسپینوزا، O. اثر واسطه های اکسیژن فعال بر زنده ماندن و عفونت مایکوباکتریوم لپراموریوم. بین المللی J. Exp. پاتول. 2007، 88، 137-145. [CrossRef]

53. کیم، ش. کوهن، بی. نویک، دی. گیرنده های اینترفرون نوع I پستانداران Rubinstein، M. از دو زیر واحد تشکیل شده است: IFN-R1 و IFN-R2. ژن 1997، 196، 279-286. [CrossRef]

54. لو، ی. چن، ایکس. هان، RA; O'Donnell، M. باسیل نوترکیب Calmette-Guérin (BCG) که اینترفرون آلفا 2B انسانی را بیان می کند، ایمنی زایی افزایش یافته را نشان می دهد. کلین انقضا ایمونول. 2001، 123، 264-270. [CrossRef] [PubMed]

55. سان، ای. نیان، ایکس. لیو، سی. فن، X. Han, R. ساخت IFN انسانی نوترکیب -2b BCG و اثرات ضد توموری آن بر سلول‌های سرطانی مثانه در شرایط آزمایشگاهی. ژنت مول. Res. 2015، 14، 3436-3449. [CrossRef] [PubMed]

56. پرابهاکاران، ک. هریس، EB; Kirchheimer، WF اتصال دوپا نشاندار شده با 14C توسط Mycobacterium leprae در شرایط آزمایشگاهی. بین المللی جی. لپر. مایکوباکت دیگر دیس 1976، 44، 58-64.

57. Draper, P. Purification of Mycobacterium leprae. در مجموعه مقالات ضمیمه 4 گزارش پنجمین جلسه کارگروه علمی ایمنی شناسی جذام (IMMLEP)، ژنو، سوئیس، 24-26 ژوئن 1980. سازمان بهداشت جهانی: ژنو، سوئیس، 1980.

58. ایسکیروپولوس، اچ. نلسون، جی. دوران، دی. آل مهدی، ع. واکنش های اکسید نیتریک و پراکسی نیتریت با مولکول های آلی و پراکسیداز ترب فری: تداخل در تعیین پراکسید هیدروژن. رادیک آزاد. Biol. پزشکی 1996، 20، 373-381. [CrossRef]

59. شون، تی. هرناندز-پاندو، آر. Negesse، Y. لیکاسا، آر. ساندکویست، تی. بریتون، اس. بیان نیتریک اکسید سنتاز و نیتروتیروزین القایی در ضایعات جذام مرزی. برادر جی درماتول. 2001، 145، 809-815. [CrossRef]

60. سیلوا-میراندا، م. WeK-Rodriguez، K. مارتینز، CE; روجاس-اسپینوزا، O. بیان سیکلواکسیژناز-2، آلفا 1-گلیکوپروتئین اسید و نیتریک اکسید سنتاز القایی در ضایعات در حال توسعه جذام موش. بین المللی J. Exp. مسیر. 2006، 87، 485-494. [CrossRef]

61. هرناندز-پاندو، آر. شون، تی. Orozco، EH; سرافین، تی. استرادا-گارسیا، I. بیان نیتریک اکسید سنتاز و نیتروتیروزین القایی در طول تکامل سل ریوی تجربی. انقضا سمی پاتول. 2001، 53، 257-265. [CrossRef]

62. ایزکیو، ا. کومبز، جی ال. Powrie، F. لنفوسیت های تنظیمی، و التهاب روده. آنو. کشیش ایمونول. 2009، 27، 313-338. [CrossRef]

63. ساکاگوچی، س. میارا، م. کوستانتینو، سی ام. هافلر، DA FOXP3 به علاوه سلول های T تنظیم کننده در سیستم ایمنی بدن انسان. نات. کشیش ایمونول. 2010، 10، 490-500. [CrossRef]

64. Plotkin، SA همبستگی حفاظت ناشی از واکسیناسیون. کلین واکسن ایمونول. 2010، 17، 1055-1065. [CrossRef] [PubMed]

65. وو، اچ. چن، ی. لیو، اچ. Xu، L.-L. توشر، پی. وانگ، اس. لو، اس. سلول های T تنظیم کننده فولیکولی دندانه دار، AL تولید سیتوکین توسط سلول های T کمک کننده فولیکولی را سرکوب می کنند و پاسخ های IgG را در موش بهینه می کنند. یورو J. Immunol. 2016، 46، 1152-1161. [CrossRef] [PubMed]

66. جیاناتان، م. دامیانوویچ، دی. Shaler، CR; لای، آر. ورتزمن، ام. یین، سی. Zganiacz، A.; لیچتی، دی. زینگ، زی. ایمنی ذاتی حک شده متفاوت توسط واکسیناسیون تقویتی مخاطی، نتایج محافظتی ایمنی ضد سل را مستقل از ایمنی سلول T تعیین می کند. ایمونول مخاطی. 2013، 6، 612-625. [CrossRef] [PubMed]

67. جیاناتان، م. شائو، ز. یو، ایکس. هارکنس، آر. جیانگ، آر. لی، جی. زینگ، ز. Zhu, T. AdHu5Ag85A ایمن سازی تقویت کننده مخاط تنفسی محافظت در برابر سل ریوی را در پستانداران غیر انسانی BCG-Primed افزایش می دهد. PLoS ONE 2015, 10, e0135009. [CrossRef]

68. افهمی، س. دراموند، ویرجینیا؛ D'Agositnio، MR; جیاناتان، م. گیلگراس، ا. زینگ، زی. راهبردهای پیشرفته واکسن ایمنی درمانی در برابر سل ریوی. جلو. ایمونول. 2020, 11, 557809. [CrossRef]

69. تورادو، ای. رابینسون، RT; Cooper، AM پاسخ سلولی به مایکوباکتریوم: حفظ تعادل و آسیب شناسی. Trends Immunol. 2011، 32، 66-72. [CrossRef]

70. خو، ایکس. گائو، دبلیو. چنگ، اس. یین، دی. لی، اف. وو، ی. سان، دی. ژو، اس. وانگ، دی. ژانگ، ی. و همکاران مکانیسم های ضد التهابی و تعدیل کننده ایمنی آتورواستاتین در مدل موشی آسیب مغزی تروماتیک J. التهاب عصبی. 2017، 14، 167-182. [CrossRef]

71. عظیم، دبلیو. Maukon، BR; اپل، اس. Maegrete، AO; Kalland، KH Dual Pro- و ویژگی های ضد التهابی سلول های دندریتیک مشتق از مونوسیت. جلو. ایمونول. 2020، 11، 438-453. [CrossRef]

72. سلطانه، س. Bishay، B. خنثی سازی TNFR-1 و TNFR-2 آرتریت سپتیک ناشی از استافیلوکوکوس اورئوس را با تنظیم سطوح سیتوکین های پیش التهابی و ضد التهابی در طول پیشرفت بیماری تعدیل می کند. ایمونول. Lett. 2018، 196، 33-51. [CrossRef]

73. پورنوگرافی، د. گیلیگان، MM; هوانگ، اس. گارتونگ، آ. کورتس-پوچ، آی. Sime، PJ; فیپس، RP; سرهان، CHN; Hammock، وضوح التهاب BD: یک رویکرد دو طرفه برای جلوگیری از طوفان‌های سیتوکین در COVID{3}} متاستاز سرطان Rev. 2020، 39، 337-340. [CrossRef]

74. لونگی، نماینده مجلس; ترامپفلر، سی. ایدویاگا، جی. کیسکی، م. ماتوس، آی. کلوگر، سی. سالازار، AM; کولونا، ام. سلول‌های دندریتیک Steinman، RM به یک پاسخ اینترفرون سیستمیک نوع I برای بالغ شدن و القای ایمنی CD4 به علاوه Th1 با پلی IC به عنوان ادجوانت نیاز دارند. J. Exp. پزشکی 2009، 206، 1589-1602. [CrossRef]

75. خادر، س. گوگلانی، ل. رنگل مورنو، جی. گوپال، آر. جونکو، BAF; فواره، JJ; مارتینو، سی. مروارید، JE; تیگه، م. لین، Y.-Y. و همکاران IL{3}} برای کنترل طولانی مدت مایکوباکتریوم توبرکلوزیس و تشکیل فولیکول سلول B در ریه آلوده مورد نیاز است. J. Immunol. 2011، 187، 5402-5407. [CrossRef] [PubMed]

76. Choreño-Parra, JA; بابا، اس. رنگل مورنو، جی. احمد، م. مهرا، س. رزا، بی. مارتین، جی. میتروا، م. کاوشال، دی. زونیگا، جی. و همکاران عفونت مایکوباکتریوم توبرکلوزیس HN878 باعث ایجاد فولیکول های سلول B مانند انسان در موش می شود. ج. عفونی کردن. دیس 2020، 221، 1636–1646. [CrossRef] [PubMed]

77. اشمیت، EG; حریبهای، د. ویلیامز، جی بی. آگاروال، پ. جیا، اس. Charbonnier، LM; یان، ک. لوریر، آر. ترنر، آ. زیگلباوئر، جی. و همکاران IL-10 تولید شده توسط سلول های iTreg کولیت و بیماری زا را کنترل می کند. سلول های Treg در طول ایمونوتراپی J. Immunol. 2012، 189، 5628-5648. [CrossRef]

78. Rubtsovo، YP; راسموسن، جی پی؛ چی، ی. فونتنوت، ج. کاستلی، آی. بله، X. تروتینگ، پ. Siewe، I. رورز، آ. هندرسون، WRJ؛ و همکاران اینترلوکین تنظیمی مشتق از سلول T-10 التهاب را در رابط های محیطی محدود می کند. مصونیت 2018، 28، 546-558. [CrossRef] [PubMed]

For more information:1950477648nn@gmail.com