فیکساتور کارنوفسکی از ظاهر شدن مصنوعات به صورت واکوئلاسیون ناشی از پردازش بافت در کلیه‌های تحت درمان با الیگونوکلئوتید آنتی‌سنس جلوگیری می‌کند.

از نظر ماکروسکوپی، هیچ تغییر غیر طبیعی مشاهده نشد. علاوه بر این، در شیمی خون، پارامترهای کلیوی (به عنوان مثال، BUN و CRE) هیچ تغییر قابل توجهی در هیچ گروهی نشان نداد (جدول 1).

مکمل سیستانچ مکمل پشتیبانی از عملکرد کلیه PhGs75% Ech 30% Act 12%

خلاصه ای از یافته های هیستوپاتولوژیک در کلیه های ثابت شده با 10% NBF در جدول 2 نشان داده شده است. از نظر میکروسکوپی، گرانول ها و واکوئل های بازوفیل در لوله های پروگزیمال، به ویژه در بخش S1 و S2، در هر دو ASO{4}}W مشاهده شد. و گروه‌های ASO{5}} برای کلیه‌ها با 10% NBF ثابت شده‌اند (شکل 1A). این تغییرات در گروه ASO-2W شدیدتر از گروه ASO-1W بود. تجمع گرانول های بازوفیل عمدتا در مرز قلم مو لوله های پروگزیمال به عنوان سنگدانه ها و / یا ساختارهای نقطه گذاری مشاهده شد. از آنجایی که گرانول‌های بازوفیل هم در داخل آندوزوم‌ها یا لیزوزوم‌ها و هم آزادانه در سیتوپلاسم اپیتلیوم لوله‌ای پروگزیمال وجود دارند، این اشکال مختلف ممکن است ناحیه انباشته‌شده‌شان را منعکس کنند. به این معنا که، ساختارهای دانه‌بندی و نقطه‌گذاری ممکن است به ترتیب در لیزوزوم‌ها و سیتوپلاسم تجمع کنند. واکوئل ها در لوله های پروگزیمال گرد و خشن شکل بودند و اکثر آنها با واکوئل های مجاور ذوب شده بودند. علاوه بر این، برخی از واکوئل‌ها حاوی گرانول‌های بازوفیل ضعیف بودند (شکل 1E)، که نشان می‌دهد واکوئل‌ها مربوط به تجمع ASOs هستند. از نظر ایمونوهیستوشیمی، LAMP{12}} روی سطح غشای واکوئل ها مثبت بود (شکل 1G و 1H). نتایج نشان داد که واکوئلاسیون اتساع لیزوزوم ها است. تفاوت در شدت واکوئلاسیون بین گروه های ASO{15}}W و ASO-2W ممکن است نشان دهنده تفاوت در تعداد ASOهای انباشته شده در لیزوزوم باشد. ما حدس می زنیم که مقدار ASO های انباشته شده در لیزوزوم ها با افزایش زمان قرار گرفتن در معرض ASO ها افزایش می یابد. در نتیجه، گسترش لیزوزومی به عنوان واکوئلاسیون به دلیل پردازش بافت ظاهر شد.

جدول 1. داده های شیمی خون

جدول 2. یافته های هیستوپاتولوژیک در کلیه ها با 10% نیتروژن ثابت شده است

اگرچه واکوئلاسیون متوسط ​​مشاهده شد، دژنراسیون لوله پروگزیمال مشهود نبود، و اکثر اپیتلیوم‌های واکوئله شده برای KIM{0}} در رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمی منفی بودند (شکل 1D). در مقابل، برای نمونه‌های ثابت شده در فیکساتور کارنوفسکی، واکوئل‌ها در لوله‌های پروگزیمال در همه افراد وجود نداشت، در حالی که گرانول‌های بازوفیل اغلب مشاهده شدند (شکل 1B). دانه‌های بازوفیلیک برجسته‌تر از نمونه‌هایی بودند که در معرض 10% تثبیت NBF قرار گرفتند، زیرا ساختار سلولی به خوبی حفظ شده بود (شکل 1F). در نمونه های تحت تثبیت 4% PFA، واکوئل ها و گرانول های بازوفیل مشاهده شد. با این حال، شدت واکوئلاسیون کمی کمتر از نمونه هایی بود که در معرض 10% تثبیت NBF قرار گرفتند (شکل 1C).

الیگونوکلئوتیدها مولکول های بسیار محلول در آب هستند و به دلیل عدم اتصال متقابل کامل اجزای سلولی از بافت ها در طول پردازش استخراج می شوند.

بر اساس این نتایج، ما به این نتیجه رسیدیم که واکوئل‌ها در لوله‌های پروگزیمال تحت‌تاثیر روش تثبیت قرار گرفتند و تغییرات مورفولوژیکی مشاهده‌شده در بافت‌هایی که در معرض تثبیت 10% NBF و 4% PFA قرار گرفتند ممکن است مصنوعاتی در ناحیه تجمع ASO در طول پردازش بافت باشند. به عبارت دیگر، واکوئلاسیون ممکن است از نظر سم شناسی ناچیز باشد زیرا هیچ دژنراسیون لوله ای، افزایش بیان KIM{2}} یا تغییرات غیر طبیعی در پارامترهای کلیوی مشاهده نشد. بنابراین، ما استفاده از فیکساتور کارنوفسکی را به عنوان روش تثبیت اختیاری برای بررسی دقیق پاتولوژیک کلیه در حیوانات تحت درمان با ASO پیشنهاد می کنیم.

در نتیجه، یافته‌های فعلی ما تخمین بیش از حد احتمالی واکوئلاسیون را هنگام استفاده از روش تثبیت NBF معمولی نشان داد. فیکساتور کارنوفسکی ممکن است ابزار مفیدی برای تشخیص واکوئل های مصنوعی از سمیت کلیوی واقعی باشد.

شکل 1. فتومیکروگراف های نماینده کلیه های تحت درمان با الیگونوکلئوتید آنتی سنس (ASO). تغییرات هیستوپاتولوژیک در اسید نوکلئیک قفل شده هفته ای حاوی الیگونوکلئوتید آنتی سنس (LNA-ASO) گروه تیمار شده (ASO{4}}W) برای کلیه ها ثابت شده با (A) محلول فرمالدئید 10٪ بافر خنثی (NBF)، ( ب) فیکساتور کارنوسکی یا (C) بافر فسفات پارافورمالدئید 4% (PFA). (د) رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمیایی برای مولکول آسیب کلیه-1 (KIM-1) ​​ASO-2W برای کلیه‌ها با 10% NBF ثابت شده است.تغییرات هیستوپاتولوژیک در 1-گروه تحت درمان با LNA-ASO در هفته (ASO-1W) برای کلیه‌ها که با (E) 10% NBF و (F) فیکساتور کارنوسکی تثبیت شد. رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمی برای پروتئین غشایی مرتبط با لیزوزومی 2 (LAMP{7}}) از (G) ASO-1W و (H) ASO-2W برای کلیه‌ها با 10% NBF تثبیت شد. (الف) گرانول های بازوفیل (فلش های سیاه) و واکوئل ها (سر فلش های سیاه) در لوله های پروگزیمال مشاهده می شوند. رنگ آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین (H&E). نوار{11}} میکرومتر. (ب) واکوئل ها مشاهده نمی شوند، اما گرانول های بازوفیلیک (فلش های سیاه) مشاهده می شوند. رنگ آمیزی H&E نوار{12}} میکرومتر. (ج) گرانول های بازوفیل (فلش های سیاه) و واکوئل ها (سر فلش های سیاه) مشاهده می شوند. با این حال، شدت واکوئلاسیون کمتر از نمونه‌هایی بود که در معرض 10% تثبیت NBF قرار گرفتند. رنگ آمیزی H&E نوار{14}} میکرومتر. (د) اکثر توبولهای پروگزیمال واکوئله شده برای KIM منفی هستند{15}}. نوار{16}} میکرومتر. (E, F) برخی از واکوئل های مشاهده شده در لوله های پروگزیمال حاوی گرانول های بازوفیل به طور ضعیف (فلش های سبز) بودند. گرانول های بازوفیل به وضوح مشاهده می شوند و ساختار سلول حفظ می شود (سر پیکان های سبز). رنگ آمیزی H&E میله‌ها{17}} میکرومتر. (G, H) سطح غشای واکوئل ها برای LAMP{18}} (فلش های آبی) مثبت هستند. میله‌ها{19}} میلی‌متر.

افشای تضاد منافع بالقوه: نویسندگان اعلام می کنند که هیچ تضاد منافعی ندارند.

قدردانی: نویسندگان از کیسوکه یوشیکاوا و تتسویا اوهتا به خاطر توصیه های مهربانشان سپاسگزار هستند.

منابع

1. Rinaldi C و Wood MJA. الیگونوکلئوتیدهای آنتی سنس: مرز بعدی برای درمان اختلالات عصبی Nat Rev Neurol. 14: 9-21. 2018. [Medline] [CrossRef]

2. Uemura Y و Kobayashi K. هدف قرار دادن ماکروفاژهای آلوئولی موش با تجویز داخل تراشه اسید نوکلئیک قفل شده حاوی الیگونوکلئوتیدهای آنتی سنس. Drug Deliv. 26: 803-811. 2019. [Medline] [CrossRef]

3. بنت سی اف. الیگونوکلئوتیدهای آنتی سنس درمانی به سن بلوغ می رسند. Annu Rev Med. 70: 307-321. 2019. [Medline] [CrossRef]

4. Frazier KS. درمان های الیگونوکلئوتیدی آنتی سنس: نوید و چالش ها از دیدگاه آسیب شناس سم شناسی پاتول سمی 43: 78-89. 2015. [Medline] [CrossRef]

5. Engelhardt JA. مقایسه سمیت شناسی کلیه الیگونوکلئوتیدهای آنتی سنس. اسید نوکلئیک وجود دارد. 26: 199-209. 2016. [Medline] [CrossRef]

6. Frazier KS، Sobry C، Derr V، Adams MJ، Besten CD، De Kimpe S، Francis I، Gales TL، Haworth R، Maguire SR، Mirabile RC، Mullins D، Palate B، Doorten YPS، Ridings JE، Scicchitano MS ، Silvano J، و Woodfine J. پاسخ های التهابی خاص گونه به عنوان یک جزء اولیه برای ایجاد ضایعات گلومرولی در موش ها و میمون ها به دنبال تجویز مزمن یک الیگونوکلئوتید آنتی سنس نسل دوم. پاتول سمی 42: 923-935. 2014. [Medline] [CrossRef]

7. Sewing S، Gubler M، Gérard R، Avignon B، Mueller Y، Braendli-Baiocco A، Odin M و Moisan A. کونژوگاسیون GalNAc سمیت سلولی داروهای الیگونوکلئوتیدی آنتی سنس را در سلول های لوله کلیوی کاهش می دهد. اسیدهای نوکلئیک مول تر. 14: 67-79. 2019. [Medline] [CrossRef]

8. Kakiuchi-Kiyota S، Koza-Taylor PH، Mantena SR، Nelms LF، Enayetallah AE، Hollingshead BD، Burdick AD، Reed LA، Warneke JA، Whiteley LO، Ryan AM، و Mathialagan N. مقایسه پروفایل های رونویسی قفل شده کبدی الیگونوکلئوتیدهای آنتی سنس اسید ریبونوکلئیک: شواهدی از مسیرهای متمایز کمک کننده به سمیت با واسطه غیر هدف در موش Toxicol Sci. 138: 234-248. 2014. [Medline] [CrossRef]

9. Hagedorn PH، Yakimov V، Ottosen S، Kammler S، Nielsen NF، Høg AM، Hedtjärn M، Meldgaard M، Møller MR، Ørum H، Koch T، و Lindow M. پتانسیل هپاتوتوکسیک الیگونوکلئوتیدهای درمانی را می توان از طریق آنها پیش بینی کرد. و الگوی اصلاح اسید نوکلئیک وجود دارد. 23: 302-310. 2013. [Medline] [CrossRef]