فعال‌سازی TLR9 باعث ایجاد گلیکوزیلاسیون نابجای IgA از طریق مسیرهای واسطه‌ای APRIL و IL-6 در نفروپاتی IgA می‌شود.

مخاطب:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساپ: 008618081934791

یوکو ماکیتا 1 , هیتوشی سوزوکی 1 , توشیکی کانو 1 , آکیکو تاکاهاتا 1 , بروس ای جولیان 2,3 , جان نواک 3 و یوسوکه سوزوکی 1

کلمات کلیدی: آوریل; IgA1 کمبود گالاکتوز؛ نفروپاتی IgA؛ IL-6; کمپلکس ایمنی

IgA1 کمبود گالاکتوز (Gd-IgA1) نقش مهمی در ایجادنفروپاتی IgA(IgAN). با این حال، مکانیسم‌های بیماری‌زایی که باعث تولید Gd-IgA1 می‌شوند، به طور کامل مشخص نشده‌اند. فعال‌سازی ایمنی ذاتی از طریق گیرنده 9 شبه Toll (TLR9) در تولید Gd-IgA1 نقش دارد. یک لیگاند القاکننده تکثیر (APRIL) و IL{9}} نیز برای تقویت سنتز Gd-IgA1 در IgAN شناخته شده است. با این پیش‌زمینه، بررسی کردیم که چگونه فعال‌سازی TLR9 در سلول‌های ترشح‌کننده IgA منجر به تولید بیش از حد IgA نفریتوژن در موش ddY مستعد IgAN و در سلول‌های ترشح‌کننده IgA{14} انسان می‌شود. تزریق لیگاند TLR9 CpG-الیگونوکلئوتیدها باعث افزایش تولید کمپلکس های ایمنی IgA و IgG-IgA گلیکوزیله نابجا در موش های ddY شد که به نوبه خود باعث تشدید شد.آسیب کلیه. موش‌های تحریک‌شده با CpG-oligonucleotide سطوح سرمی APRIL را افزایش دادند که با کمپلکس‌های ایمنی IgA و IgG-IgA گلیکوزیله نابجا مرتبط بود. درونکشتگاهی،فعال سازی TLR9تولید IgA نفریتوژن و همچنین APRIL و IL{0}} را در سلول‌های طحال موش‌های ddY و در سلول‌های ترشح‌کننده IgA{1} انسانی افزایش داد. با این حال، فروپاشی siRNA در آوریل، تولید بیش از حد Gd-IgA1 ناشی از IL{5}} را به طور کامل سرکوب کرد. خنثی سازی IL{6}} تولید بیش از حد Gd-IgA1 ناشی از CpG-الیگونوکلئوتید را کاهش داد. علاوه بر این، مسیرهای APRIL و IL{11}} هر کدام به طور مستقل با واسطه TLR{12}}تولید بیش از حد Gd-IgA1 را القا کردند. بنابراین، فعال‌سازی TLR9 باعث افزایش سنتز IgA گلیکوزیله نابجا شد که در مدل موشی IgAN، آسیب کلیوی را بیشتر افزایش داد. از این رو، APRIL و IL{16}} به طور هم افزایی، و همچنین به طور مستقل، سنتز Gd-IgA1 را افزایش می دهند.

بیانیه ترجمه

درمان بیماری خاص که IgA1 دارای کمبود گالاکتوز را هدف قرار می دهد، می تواند یک درمان آتی باشد.نفروپاتی IgA. نتایج حاصل از این مطالعه، که دخالت یک لیگاند القاکننده تکثیر (APRIL) و اینترلوکین-6 (IL-6) را در تولید بیش از حد IgA گلیکوزیله نابجا نشان داد، از منطق هدف قرار دادن APRIL و IL پشتیبانی می‌کند. {3}} در نفروپاتی IgA (IgAN). در واقع، یک مطالعه اخیر اثرات مثبت آنتی بادی مونوکلونال ضد APRIL را در IgAN موش نشان داد، و یک مطالعه بالینی با آنتی بادی خنثی کننده APRIL در حال حاضر در بیماران مبتلا به IgAN در حال انجام است.

نفروپاتی IgA (IgAN)، شایع‌ترین گلومرولونفریت اولیه، در 20 تا 40 درصد از بیماران در عرض 20 سال پس از شروع این بیماری، در مرحله پایانی بیماری کلیوی ایجاد می‌کند. هماچوری ماکروسکوپیک همزمان با عفونت دستگاه تنفسی فوقانی نشان می دهد که سیستم ایمنی مخاطی نقش مهمی در تظاهرات بالینی IgAN ایفا می کند.

سیستانچتوبولوزاجلوگیری می کندکلیهمرض، برای دریافت نمونه اینجا کلیک کنید

گلیکوزیلاسیون نابجا IgAدر پاتوژنز IgAN مرکزی است. IgA گلومرولی در بیماران مبتلا به IgAN به زیر کلاس IgA1 محدود می شود و برای مولکول هایی غنی شده است که دارای برخی O-گلیکان های ناحیه لولای دارای کمبود گالاکتوز هستند (IgA1 دارای کمبود گالاکتوز [Gd-IgA1]). علاوه بر این، سطوح سرمی Gd -دارای IgA1 و IgA{11}}کمپلکس های ایمنی(ICs) با اتوآنتی بادی‌های اختصاصی Gd-IgA1 در بیماران مبتلا به IgAN افزایش می‌یابد. با این حال، مکانیسم‌های تولید Gd-IgA1 هنوز به طور کامل شناخته نشده است.

ما در این مطالعه از مدل موش ddY مستعد IgAN استفاده کردیم. موش‌های ddY دچار آسیب‌های گلومرولی شبیه به آسیب‌های گلومرولی انسان‌های مبتلا به IgAN می‌شوند. اگرچه موش‌ها دارای مولکول‌های IgA با O-گلیکان معمولی برای IgA1 انسانی نیستند، IgAN انسانی و این مدل موش ddY مستعد IgAN برخی ویژگی‌های خاص بیماری مانند افزایش سرمی را دارند. IgA و IgG-IgA IC.6،11 در واقع، گلیکوزیلاسیون نابجای IgA به دلیل کمبود b1،{10}}گالاکتوزیلاسیون N-گلیکان ها IgAN موش را به دلیل افزایش سطح سرمی با وزن مولکولی بالا تحریک می کند. IC حاوی IgA و IgA همراه با رسوب کلیوی بعدی و آسیب گلومرولی. موش های 12 ddY پروتئینوری و گلومرولونفریت پرولیفراتیو مزانژیال را با رسوب همزمان IgA و C3 در گلومرول ها نشان می دهند. یک مطالعه مرتبط با ژنوم، جایگاه‌های کاندید مرتبط با پیشرفت IgAN را در موش‌های ddY شناسایی کرد. جایگاه‌ها شامل ژن‌هایی هستند که عملکردی مشابه با ژن‌های مرتبط با IgAN انسانی دارند. این یافته‌ها نشان می‌دهد که IgAN در موش‌های ddY و در انسان ممکن است تحت تأثیر قرار گیرد. حداقل تا حدی توسط همان ژن های حساسیت. اگرچه ویژگی های مولکولی IgA موش و IgA1 انسانی متفاوت است، IgA گلیکوزیله نابجا تمایل به تشکیل IC های پلیمری IgA و IgG-IgA دارد که متعاقباً باعث پیشرفت آسیب کلیوی در مدل موشی ddY IgAN و همچنین در IgAN انسانی می شود. بنابراین مدل موش ddY دارای برخی ویژگی‌های مشترک با IgAN انسانی است و می‌تواند ابزار مفیدی برای تجزیه و تحلیل ویژگی‌های پاتوژنتیک مختلف IgAN باشد.

گیرنده های شبه Toll (TLRs) مولکول های کلیدی در سیستم ایمنی ذاتی هستند و در پاتوژنز IgAN نقش دارند. آنتی ژن های برون زا مشتق شده از پاتوژن ها مسیر سیگنال دهی TLR9-MyD88 را فعال می کنند.21 این فرآیند منجر به افزایش قابل توجهی سنتز سیتوکین های التهابی، مانند اینترفرون نوع 1 و اینترلوکین{7}} (IL-6). اخیراً نشان دادیم که فعال سازی TLR9 تشدید می شود.آسیب کلیهدر موش های ddY مستعد IgAN، با افزایش سطح سرمی IgA و IgG-IgA ICs.16 علاوه بر این، پلی مورفیسم های خاص TLR9 با پیشرفت بیماری در بیماران مبتلا به IgAN مرتبط است. سطح سرمی فاکتور نکروز تومور-a و IL{{ 6}} در بیماران مبتلا به IgAN افزایش می‌یابد. 23 علاوه بر این، IL{8}} و IL{9}} تولید IgA1 را افزایش می‌دهند و درجه کمبود گالاکتوز را تشدید می‌کنند و سنتز Gd-IgA1 توسط IgA را افزایش می‌دهند{13} }ترشح رده های سلولی از بیماران مبتلا به IgAN.24 این یافته ها نشان می دهد که IL{15}} ممکن است یک واسطه کلیدی این فرآیند باشد.24،25.

ژن عضو فوق خانواده لیگاند فاکتور نکروز تومور 13 (TNFSF13) یک لیگاند القاکننده تکثیر (APRIL) را کد می کند که یک سایتوکین مرکزی برای بلوغ و بقای سلول های B است. 26 آوریل برخی از گیرنده های سیگنالینگ مهم برای رشد سلول های B را با دیگری به اشتراک می گذارد. لیگاند ابرخانواده TNF، فاکتور فعال کننده سلول B (BAFF). BAFF همچنین در بلوغ میل ترکیبی سلول های B نقش دارد. یک مطالعه ارتباط گسترده ژنومی، TNFSF13 را به عنوان یکی از ژن‌های کاندید مرتبط با IgAN شناسایی کرد. در واقع، در بیماران مبتلا به IgAN، سطح سرمی APRIL افزایش می‌یابد و سطح آن با پیش آگهی کلیوی مرتبط است.

برای به دست آوردن درک بهتر از مکانیسم های اساسی درگیر در تولید بیش از حد IgA گلیکوزیله نابجا از طریق فعال سازی TLR9 توسط لیگاند CpG oligodeoxynucleotides (ODNs)، ما از موش های ddY مستعد IgAN و سلول های ترشح کننده IgA{2} انسانی استفاده کردیم.

نتایج

فعال‌سازی TLR9 آسیب کلیوی را در موش‌های ddY از طریق افزایش تولید IgA نفریتوژن تشدید کرد.

TLR9 می تواند توسط لیگاندهای مربوطه مانند CpG-ODN فعال شود. برای آزمایش اثر فعال‌سازی TLR9 در مدل موشی IgAN، ما از تزریق لیگاند در موش‌های ddY مستعد IgAN استفاده کردیم. موش های تزریق شده با CpG-ODN تکثیر مزانژیال و گسترش ماتریکس خارج سلولی را توسعه دادند (شکل 1a). نمرات بافت شناسی کلیه بر اساس تکثیر مزانژیال و گسترش ماتریکس مزانژیال در موش های تزریق شده با CpG-ODN به طور قابل توجهی بالاتر از موش های کنترل بود (P < 0.{11}}1؛="" شکل="" 1a).="" سطح="" آلبومین="" ادرار="" در="" موش‌های="" تزریق="" شده="" با="" cpg-odn="" در="" مقایسه="" با="" موش‌های="" کنترل="" به‌طور="" معنی‌داری="" افزایش="" یافت="" (p="">< 0.{{2{30}}}}1؛="" شکل="" 1a).="" فقط="" موش‌هایی="" که="" با="" cpg-odn="" تزریق="" شده‌اند،="" رسوبات="" مزانژیالی="" iga،="" igg="" و="" c3="" مکمل="" ایجاد="" کردند="" (شکل="" 1b).="" موش="" های="" تزریق="" شده="" با="" cpg-odn="" سطوح="" سرمی="" به="" طور="" قابل="" توجهی="" بالاتری="" از="" iga="" (p=""><0.01) و="" igg="" (p=""><0.01) نسبت="" به="" موش="" های="" کنترل="" نشان="" دادند="" (شکل="" 1c).="" iga="" سرم="" موش‌های="" تزریق="" شده="" با="" cpg-odn="" نسبت="" به="" موش‌های="" کنترل="" (شکل="" 1c)="" واکنش‌پذیری="" کمتری="" با="" لکتین‌های="" آگلوتینین="" آگلوتینین-i="" ricinus="" communis="" (rca-i)="" و="" sambucus="" nigra="" آگلوتینین="" داشت="" (شکل="" 1c)،="" که="" نشان‌دهنده="" محتوای="" کمتر="" گالاکتوز="" و="" اسید="" سیالیک="" در="" n="" است.="" -گلیکان="" iga="" موش="" علاوه="" بر="" این،="" سطح="" سرمی="" igg-iga="" ic="" در="" موش="" های="" تزریق="" شده="" با="" cpg-odn="" به="" طور="" قابل="" توجهی="" بالاتر="" از="" موش="" های="" کنترل="" بود="" (p=""><0.05؛ شکل="" 1c).="" این="" یافته="" ها="" نشان="" داد="">فعال سازی TLR9توسط CpG-ODN منجر به تولید بیش از حد IgA و IgG-IgA IC گلیکوزیله نابجا شد که منجر بهکمپلکس ایمنیرسوب و آسیب کلیوی

سلول های B و سلول های دندریتیک در پاسخ های CpG-ODN نقش داشتند

ما بررسی کردیم که کدام نوع سلول در القای تولید بیش از حد IgA گلیکوزیله نابجا در پاسخ به CpG-ODN نقش دارند. سلول‌های B و سلول‌های دندریتیک (DCs) از طحال موش‌های ddY با استفاده از آنتی‌بادی‌های CD19 و CD11c ضد موش به ترتیب با مرتب‌سازی سلولی فعال شده با فلورسانس FL جدا شدند. تحریک CpG-ODN سلول های B جدا شده باعث تولید بیش از حد IgA می شود. علاوه بر این، CpG-ODN به طور قابل توجهی باعث افزایش تولید IgA در هنگام کشت همزمان سلول های B با DCها شد (شکل تکمیلی S1). این نتایج نشان می‌دهد که CpG-ODN مستقیماً سلول‌های B را فعال می‌کند و DCS تولید IgA را پس از فعال‌سازی TLR9 افزایش می‌دهد.

تولید بیش از حد APRIL باعث افزایش سنتز IgA و IgG-IgA گلیکوزیله نابجا شد.

ما ارزیابی کردیم که آیا APRIL و/یا BAFF در سنتز IgA نفریتوژنیک ناشی از فعال‌سازی TLR9 نقش دارند یا خیر. تزریق CpG-ODN در موش های ddY به طور قابل توجهی سطوح سرمی APRIL و BAFF را افزایش داد (شکل 2a). سطح بیان APRIL در سلول های طحال با تولید IgA گلیکوزیله نابجا و تشکیل IC IgG-IgA ارتباط دارد (شکل 2b). سطح بیان BAFF در سلول های طحال با تولید IgA گلیکوزیله نابجا ارتباط دارد اما با تشکیل IgG-IgA IC ارتباط ندارد (شکل 2b). علاوه بر این، سطوح سرمی APRIL اما نه BAFF به طور قابل توجهی با سطوح سرمی افزایش یافته IgA و IgG-IgA IC گلیکوزیله نابجا در موش های تزریق شده با CpG-ODN همبستگی داشت (شکل 2c). این یافته ها نشان می دهد که APRIL و BAFF هر دو ممکن است در تولید IgA گلیکوزیله نابجا نقش داشته باشند، اگرچه APRIL ممکن است بیشتر در تولید IgG-IgA IC نقش داشته باشد.

شکل 1|تولید IgA نفریتوژنیک ناشی از تحریک CpG-oligodeoxynucleotide (ODN). تزریق با CpG-ODN سطوح خونی IgA و کمپلکس ایمنی IgG-IgA (IC) گلیکوزیله نابجا را افزایش داد و آسیب کلیوی را در موش‌های ddY تشدید کرد. (الف) موش ddY قبل از توسعهنفروپاتی IgA(IgAN) با CpG-ODN سه بار در هفته به مدت 12 هفته به صورت داخل صفاقی تزریق شد. در تجزیه و تحلیل بافت شناسی ضایعات گلومرولی، موش های تزریق شده با CpG-ODN تکثیر سلول های مزانژیال و گسترش ماتریکس خارج سلولی را نشان دادند. پانل سمت راست ارزیابی آسیب های کلیوی را با نمره گذاری نیمه کمی نشان می دهد. نمرات بافت شناسی کلیه که بر اساس درصد گلومرول های دارای ضایعات فوق الذکر ارزیابی شد، نشان داد که آسیب کلیوی در موش های تزریق شده با CpG-ODN تشدید شده است. سطح آلبومین ادرار در موش های تزریق شده با CpG-ODN در مقایسه با موش های کنترل به طور قابل توجهی افزایش یافت. میله ها در پانل های پایین ¼ میانگین ± SEM. (ب) تجزیه و تحلیل ایمونوهیستوشیمی رسوبات IgA، IgG و C3 گلومرولی. تنها موش هایی که با CpG-ODN تزریق شده بودند، رسوبات مزانژیالی IgA، IgG و C3 را ایجاد کردند. (ج) سطح سرمی IgA، IgG، و IgG-IgA IC ها پس از درمان CpG-ODN به مدت 12 هفته به طور قابل توجهی افزایش یافت. IgA سرم در موش های تزریق شده با CpG-ODN واکنش پذیری قابل توجهی کمتری با لکتین های Ricinus communis agglutinin-I (RCA-I) و Sambucus nigra agglutinin (SNA) نسبت به IgA در موش های کنترل نشان داد. این نتایج نشان می دهد که تزریق CpG-ODN باعث افزایش سطح سرمی IgA گلیکوزیله نابجا شد. نقاط فردی نشان داده شده است. *P < 0.05،="" **p=""><0.01. od،="" چگالی="" نوری.="" برای="" مشاهده="" بهینه="" این="" تصویر،="" لطفاً="" نسخه="" آنلاین="" این="" مقاله="" را="" در="" www.kidney-international.org="">

شکل 2|همبستگی بین تولید بیش از حد یک لیگاند القاکننده تکثیر (APRIL) و IgA گلیکوزیله نابجا در موش‌های تزریق شده با CpG-oligodeoxynucleotide (ODN). (الف) تزریق موش‌های ddY با CpG-ODN باعث افزایش سطح سرمی فاکتور فعال‌کننده سلول B (BAFF) و APRIL شد. (ب) سطح بیان BAFF در سلول های طحال کامل با کاهش واکنش پذیری با لکتین Ricinus communis آگلوتینین-I (RCA-I) مرتبط بود اما با تشکیل کمپلکس ایمنی IgG-IgA (IC) ارتباطی نداشت. در همین حال، سطح بیان APRIL با تولید IgA گلیکوزیله نابجا و تشکیل IC IgG-IgA مرتبط بود. (ج) در موش های تزریق شده با CpG-ODN، سطوح سرمی APRIL با کاهش واکنش IgA با لکتین RCA-I و سطوح IgG-IgA IC همراه بود. سطح سرمی BAFF با تولید IgA گلیکوزیله و تشکیل IC IgG-IgA ارتباطی نداشت. میله ها ¼ به معنی - SEM. *P < 0.05.="" od،="" چگالی="">

IL{0}} باعث تولید IgA گلیکوزیله نابجا شد

سطح سرمی IL{{0}} در موش‌های تزریق شده با CpG-ODN در مقایسه با موش‌های کنترل به‌طور معنی‌داری بالاتر بود (P <0.05؛ شکل="" 3a).="" با="" استفاده="" از="" اسپلنوسیت‌های="" موش‌های="" ddy="" مستعد="" igan،="" بررسی="" کردیم="" که="" آیا="" tlr{6}}فعال‌سازی="" سلولی="" و="" تولید="" بیش="" از="" حد="" iga="" گلیکوزیله‌شده="" نابجا="" توسط="" il="" ایجاد="" می‌شود="" یا="" خیر.="" تحریک="" cpg-odn="" تولید="" il{9}}="" توسط="" سلول‌های="" طحال="" را="" در="" شرایط="" آزمایشگاهی="" افزایش="" داد.="" افزودن="" il{10}}="" به="" محیط="" کشت="" طحال،="" تولید="" iga="" را="" افزایش="" داد.="" علاوه="" بر="" این،="" il="" سنتز="" iga="" گلیکوزیله="" نابجا="" و="" تشکیل="" ic="" igg-iga="" را="" افزایش="" داد="" و="" تولید="" آوریل="" را="" افزایش="" داد="" (شکل="" 3a).="" il{14}}-آنتی="" بادی="" خنثی="" کننده="" iga="" کل="" ناشی="" از="" cpg-odn،="" تولید="" iga="" گلیکوزیله="" نابجا="" و="" تشکیل="" ic="" igg-iga="" را="" کاهش="" داد="" (شکل="" 3b).="" این="" یافته‌ها="" نشان="" می‌دهد="" که="" فعال‌سازی="" tlr9،="" حداقل="" تا="" حدی،="" توسط="" il{19}}="" واسطه="" شده="" است.="" علاوه="" بر="" این،="" مسیر(های)="" واسطه‌ای="" tlr{20}}ممکن="" است="" در="" تولید="" iga="" گلیکوزیله="" نابجا="" نقش="" داشته="">

سیستانچمی شود بهترش کردکلیهعملکرد

APRIL و IL{0}} باعث افزایش سنتز Gd-IgA1 در سلول های ترشح کننده IgA{3}} انسان شدند.

ما بیشتر آزمایش کردیم که آیا APRIL و IL-6 در میانجی‌های اصلی که تولید IgA نفریتوژنیک را در سلول‌های ترشح کننده IgA{1}} انسانی افزایش می‌دهند، مشترک هستند یا خیر. مکمل CpG-ODN افزایش IL{3}}، بیان APRIL، تولید پروتئین APRIL و تولید IgA و Gd-IgA1 را افزایش داد (شکل 4a). تحریک با IL-6 و با APRIL تولید IgA و Gd-IgA1 را افزایش داد (شکل 4b، c). اثرات تحریک CpG-ODN بر تولید IgA و Gd-IgA1 تا حدی توسط آنتی بادی های خنثی کننده IL کاهش یافت (شکل 4d). علاوه بر این، کاهش تداخل (si)RNA APRIL همچنین تولید IgA و Gd-IgA1 ناشی از تحریک IL{18}} را کاهش داد (شکل 4b)، که نشان می‌دهد APRIL و IL{20}} به طور هم افزایی تولید Gd را ارتقا می‌دهند. -IgA1.

بحث

IgA مزانژیال در IgAN انسان منحصر به زیر کلاس IgA1 است که O-گلیکوزیلاسیون غیر طبیعی را نشان می دهد. 29،30 IgA1 انسانی دارای یک منطقه لولا با O-گلیکان است که در IgA موش وجود ندارد. افزایش IgA گلیکوزیله نابجا و IC حاوی IgA. 11،12 تغییرات نابهنجار کربوهیدرات های IgA در O- یا N-گلیکان ها، ویژگی های مشخصه IC حاوی IgA نفریتوژنیک است.

چندین مطالعه فعال شدن TLR9 را در پیشرفت IgAN نشان داده‌اند. در مطالعه حاضر، ما نشان دادیم که فعال‌سازی TLR9 با تزریق داخل صفاقی CpG-ODN در موش‌های ddY باعث تشدید آسیب‌های کلیوی همراه با رسوبات IgA و IgG گلومرولی می‌شود. افزایش سطح سرمی IgA و IgG-IgA IC گلیکوزیله نابجا. علاوه بر این، ما نشان دادیم که فعال‌سازی TLR9 در سنتز Gd-IgA1 در رده‌های سلولی ترشح‌کننده IgA انسانی نقش دارد.

شکل 3|تأثیر CpG-الیگودئوکسی نوکلئوتید (ODN) و اینترلوکین (IL){2}} بر روی سلول‌های طحال کشت‌شده موش‌های ddY. (الف) سطح سرمی IL{3}} در موش های تزریق شده با CpG-ODN به طور قابل توجهی در مقایسه با موش های کنترل بالاتر بود. تحریک CpG-ODN تولید IL{6}} سلول‌های طحال موش‌های ddY را در کشت افزایش داد. انکوباسیون اسپلنوسیت‌های موش‌های ddY با IL نوترکیب، تولید IgA کل و IgA گلیکوزیله نابجا را افزایش داد، که منجر به تشکیل کمپلکس ایمنی IgG-IgA (IC) شد. IL نوترکیب{9}} تولید بیش از حد یک لیگاند القاکننده تکثیر (APRIL) را افزایش داد. (ب) سلول‌های طحال در کشت با CpG-ODN در حضور یا عدم حضور آنتی‌بادی خنثی‌کننده IL{12}} تحریک شدند. آنتی بادی ضد IL{13}} تولید IgA کل و IgA گلیکوزیله نابجا را کاهش داد و در نتیجه، تشکیل IgG-IgA IC ناشی از CpG-ODN را کاهش داد. میله ها ¼ میانگین ± SEM. * P < 0.05،="" **p=""><0.01. od،="" چگالی="" نوری؛="" pbs،="" محلول="" نمک="" بافر="" فسفات؛="" rca-i،="" ricinus="" communis="" agglutinin-i;="" sna،="" sambucus="" nigra="">

شکل 4|اثر مکمل CpG-oligodeoxynucleotide (ODN) یا یک لیگاند محرک تکثیر (APRIL) بر رده های سلولی ترشح کننده IgA انسانی بر روی IgA1، IgA1 دارای کمبود گالاکتوز (Gd-IgA1) و اینترلوکین (IL){{ 9}} تولید. (الف) مکمل CpG-ODN تولید IL را افزایش داد{11}}. CpG-ODN بیان ژن APRIL را افزایش داد. تجزیه و تحلیل وسترن بلات نشان داد که CpG-ODN سطح پروتئین APRIL را افزایش داد. نتایج به روش تراکم سنجی ارزیابی شد. تحریک با CpG-ODN باعث تولید IgA و Gd-IgA1 شد. (ب) فروپاشی RNA مداخله‌گر (siRNA) APRIL باعث کاهش تولید بیش از حد IgA و Gd-IgA1 ناشی از IL{17}} شد. (ج) سلول‌های تولیدکننده IgA{{2{3{3{32}}}}} که با APRIL نوترکیب تحریک شده‌اند، IgA و Gd-IgA1 بیشتری تولید می‌کنند. (د) سلول‌های ترشح‌کننده IgA با آنتی‌بادی ضد IL{24} پس از تحریک CpG-ODN انکوبه شدند. تولید افزایش یافته IgA و Gd-IgA1 ناشی از CpG-ODN توسط آنتی بادی anti-IL{29}} و با حذف siRNA از APRIL کاهش یافت. میله ها ¼ میانگین ± SEM. *P <0.05، **p=""><0.01. gadph،="" گلیسرآلدئید{34}فسفات="" دهیدروژناز.="" pbs،="" محلول="" سالین="" بافر="">

ما مکانیسمی را ارزیابی کردیم که توسط آن فعال‌سازی TLR9 باعث افزایش تولید IgA گلیکوزیله نابجا می‌شود. BAFF و APRIL به دلیل نقش خود در بقا و تمایز سلول های B شناخته شده اند. مک کارتی و همکاران 33 نشان دادند که موش‌های تراریخته با بیان بیش از حد BAFF رسوبات IgA مزانژیال را با آسیب کلیوی و ناهنجاری‌های ادراری ایجاد می‌کنند. علاوه بر این، بیان بیش از حد APRIL در مراکز زایای لوزه‌ها با سطح سرمی Gd-IgA1 و شدت بیماری در بیماران مبتلا به IgAN مرتبط است. با این حال، ارتباط بین BAFF/APRIL و فعال‌سازی TLR9 نامشخص است. در مطالعه حاضر، فعال سازی TLR9 بیان ژن و سطوح سرمی APRIL را افزایش داد. سطح سرمی IgA گلیکوزیله نابجا با سطح بیان BAFF و APRIL در سلول‌های طحال مرتبط است. با این حال، سطح سرمی IgG-IgA IC با سطح بیان APRIL اما نه BAFF در ارتباط است. علاوه بر این، سطوح سرمی APRIL با تولید بیش از حد IgA و IgG-IgA IC گلیکوزیله نابجا در موش‌های فعال شده با TLR مرتبط بود. در سلول‌های ترشح‌کننده IgA، فعال‌سازی TLR9 همچنین باعث تولید بیش از حد Gd-IgA1 از طریق آوریل شد. این نتایج نشان داد که APRIL نقش مهمی در تولید بیش از حد ناشی از TLR{18}}IgA نفریتوژنیک و تشکیل IC IgG-IgA دارد.

پاسخ بر اساس نوع سلول برای تعیین نقش سلولهای B و T و DCها باید روشن شود. در مطالعه حاضر، ما نقش سلول‌های B و پلاسماسیتوئید DCها را ارزیابی کردیم. TLR9 توسط سلول‌های DC، B و ماکروفاژها بیان می‌شود اما توسط سلول‌های T بیان نمی‌شود. 35-37 سهم BAFF/APRIL در پاسخ آنتی‌بادی مستقل از سلول T شناخته شده است. در اینجا ما آزمایش کردیم که آیا فعال‌سازی TLR9 می‌تواند سنتز IgA گلیکوزیله نابجا و تشکیل IC IgG-IgA از طریق APRIL به روشی مستقل از سلول T. ما همچنین از رده‌های سلولی ترشح‌کننده IgA انسانی شبیه‌سازی‌شده استفاده کردیم و نشان دادیم که فعال‌سازی TLR9 تولید Gd-IgA1 را از طریق APRIL و IL{13}} افزایش می‌دهد، که نشان می‌دهد این فرآیند مستقل از سلول T است. علاوه بر این، ما نقش سلول‌های B و DCها را ارزیابی کردیم. ما نشان دادیم که CpG-ODN اختصاصی برای سلول‌های B و DCها باعث افزایش تولید IgA گلیکوزیله نابجا در سلول‌های طحال می‌شود. علاوه بر این، ما بررسی کردیم که آیا تحریک CpG-ODN در شرایط آزمایشگاهی می‌تواند تولید IgA را افزایش دهد یا خیر. تحریک CpG-ODN سلول های B جدا شده باعث تولید بیش از حد IgA می شود. علاوه بر این، CpG-ODN به طور قابل توجهی باعث افزایش تولید IgA در هنگام کشت همزمان سلول های B با DCها شد (شکل تکمیلی S1). این نتایج نشان می‌دهد که فعال‌سازی CpG-ODN بیشتر می‌شودتولید IgA و گلیکوزیلاسیون نابجاتوسط TLR9 به روشی مستقل از سلول T واسطه می شود.

IL{0}} به عنوان تقویت کننده تکثیر سلول های تولید کننده ایمونوگلوبولین و تمایز نهایی سلول های پلاسما شناخته شده است. 0.43،44 سلول های کمکی فولیکولی T برای بلوغ میل ترکیبی سلول های B، نوترکیبی سوئیچ کلاس و تولید سلول های B حافظه و سلول های پلاسما در مرکز ژرمینال ضروری هستند.43،44 در مدل موش لوپوس، IL{12}} کمبود از تمایز سلول‌های کمکی فولیکولی T و گسترش سلول‌های B مرکز ژرمینال جلوگیری می‌کند و منجر به کاهش تولید آنتی‌بادی خودکار می‌شود. IL{19}} باعث تولید بیش از حد IgA و IgG-IgA IC گلیکوزیله نابجا در مدل موشی IgAN شد. در سلول‌های ترشح‌کننده IgA انسانی، تأیید کردیم که IL-6 تولید Gd-IgA1 را افزایش می‌دهد. یافته‌های ما نشان می‌دهد که IL-6 ممکن است یکی از مولکول‌های اصلی باشد که باعث تولید بیش از حد IgA نفریتوژن می‌شود. با واسطه فعال سازی TLR9.

APRIL نقش مهمی در سوئیچینگ کلاس IgA و تمایز پلاسماسیتوئید ایفا می کند. 46،47 IL{3}} تمایز نهایی سلول های B را به سلول های پلاسمایی ترشح کننده IgA ترویج می کند.41،42 مطالعه حاضر نشان داد که IL{7} } تحریک باعث تولید APRIL شد. سپس ما فرض کردیم که ارتباطی بین APRIL و IL-6 با واسطه فعال‌سازی TLR9 وجود دارد که باعث تولید IgA گلیکوزیله نابجا می‌شود. ما دریافتیم که آنتی‌بادی خنثی‌کننده IL به طور کامل تولید بیش از حد Gd-IgA1 ناشی از CpG-ODN را مسدود نمی‌کند و کاهش siRNA در APRIL تولید بیش از حد Gd-IgA1 ناشی از IL را کاهش نمی‌دهد. این داده‌ها نشان می‌دهند که APRIL و IL{17}} به‌طور هم‌افزایی تولید Gd-IgA1 را به واسطه فعال‌سازی TLR9 ارتقا می‌دهند. علاوه بر این، هم آنتی‌بادی خنثی‌کننده IL{21}} و هم کاهش siRNA APRIL تولید IgA و Gd-IgA1 را بیشتر از آنتی‌بادی خنثی‌کننده IL{24}} به تنهایی کاهش داد. بنابراین مسیر فعال سازی TLR9 شامل اثرات هم افزایی IL{26}} و APRIL بر تولید آنتی بادی و گلیکوزیلاسیون است (شکل 5). مطالعات اخیر همچنین نشان داده است که IL{28}}، در ترکیب با APRIL، تولید و بقای سلول‌های پلاسما را القا می‌کند. تولید IgA نفریتوژنیک

سیستانچبرایکلیهعفونت

در نتیجه،فعال سازی TLR9با افزایش تولید IgA گلیکوزیله نابجا و تشکیل IC IgG-IgA، آسیب کلیوی را در مدل موشی IgAN تشدید کرد. در این فرآیند، تولید بیش از حد APRIL و IL{1}} ناشی از فعال‌سازی TLR9، تولید IgA نفریتوژن را افزایش داد. علاوه بر این، مطالعه حاضر روشن کرد که APRIL و IL{3}} به طور هم افزایی و همچنین به طور مستقل برای تولید IgA گلیکوزیله نابجا عمل می کنند. این یافته‌ها ممکن است به توسعه آینده رویکردهای درمانی جدید برای IgAN کمک کند.

شکل 5|نقش هم افزایی بین گیرنده Toll مانند 9 (TLR9)، یک لیگاند القا کننده تکثیر (APRIL) و اینترلوکین (IL){5}} در سلول های تولید کننده IgA در نفروپاتی IgA (IgAN). فعال‌سازی TLR9 باعث تولید APRIL و IL{8}} شد که منجر به

تولید بیش از حد IgA گلیکوزیله نابجا. APRIL و IL{0}} به طور هم افزایی برای ترویج تولید IgA گلیکوزیله نابجا عمل می کنند. علاوه بر اینکه APRIL تولید IL-6 را القا می کند، همانطور که قبلاً گزارش شد، IL-6 همچنین می تواند سنتز APRIL را افزایش دهد. علاوه بر این، APRIL و IL{3}} به طور مستقل تولید IgA گلیکوزیله نابجا را ترویج می کنند. NF-kB، عامل هسته ای-kB.

مواد و روش ها

حیوانات و پروتکل های آزمایشی

موش ddY مستعد IgAN یک مدل شناخته شده از IgAN خود به خودی با بروز و میزان آسیب گلومرولی متغیر است که تقلید از IgAN انسان است. موش های ddY 10 بر اساس تظاهرات به 3 گروه تقسیم می شوند.آسیب کلیه: موش با موش زودرس یا دیر شروع و ساکن. بیماری زودرس در موش‌های ddY با پروتئینوری و رسوبات IgA گلومرولی پس از 20 هفتگی تظاهر می‌کند. بنابراین، ما از موش‌های ddY در 18 هفتگی استفاده کردیم تا بررسی کنیم که آیا فعال‌سازی TLR9 باعث تشدید IgAN در این مدل می‌شود یا خیر. در مجموع 30 موش ماده ddY (SLC ژاپن، Shizuoka، ژاپن) در مرکز حیوانات دانشگاه Juntendo، توکیو، ژاپن نگهداری شدند. موش‌ها با غذای معمولی (شرکت مخمر شرقی، توکیو، ژاپن) و آب به طور آزاد تغذیه شدند و در یک اتاق خاص عاری از بیماری‌زا قرار گرفتند. پروتکل آزمایشی توسط کمیته بازبینی اخلاقی برای آزمایش روی حیوانات دانشکده پزشکی دانشگاه جونتندو تأیید شد. در 6 هفتگی موش ها به طور تصادفی به 2 گروه تقسیم شدند. یک گروه 3 بار در هفته به مدت 12 هفته CpG-ODN تزریقی داخل صفاقی دریافت کردند. گروه دوم (شاهد) بدون CpG-ODN تزریق شد. CpG-ODN و غیر CpG-ODN به صورت شیمیایی سنتز شدند (Invitrogen؛ Thermo Fisher Scientific، Kanagawa، ژاپن). توالی های ODN به ترتیب TCGTCGTT TTCGGCGCGCGCGCCG یا TGCTGCTTTTGGGGGGCCCCCC (50/30) برای CpG یا غیر CpG ODN هستند.

تعیین IgA، IgG، IgG-IgA IC و IgA گلیکوزیله نابجا در سرم موش

نمونه خون از ورید باکال جمع آوری شد. IgA، IgG، و IgG-IgA IC سرم با استفاده از روش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم (ELISA؛ Bethyl Laboratories، Montgomery، TX) با استفاده از روش اصلاح شده بر اساس گزارش قبلی ما اندازه‌گیری شد. 5{16}} سنجش اتصال به لکتین برای دسترسی به گلیکوفرم IgA استفاده می شود. RCA-I بیوتینیله شده (Vector Laboratories, Burlingame, CA) و لکتین پوست Sambucus nigra (Vector Laboratories) که به ترتیب گالاکتوز و اسید سیالیک متصل به گالاکتوز (عمدتاً در پیوند a2,6) را تشخیص دادند، در این سنجش مورد استفاده قرار گرفتند. در 100 نانوگرم IgA در هر چاهک اضافه شد. پلیت های میکروتیتر پوشش داده شده با 1 میلی گرم در میلی لیتر IgA ضد موش بز (100 میلی لیتر در چاه) برای تعیین کمیت IgA سرم با این نمونه ها انکوبه شدند و سپس آگلوتینین Sambucus nigra بیوتینیله یا RCA-I اضافه شد. کونژوگه آویدین ترب پراکسیداز (ExtrAvidin؛ سیگما آلدریچ، سنت لوئیس، MO) استفاده شد. سطوح سرمی IgA متصل به گلیکوزیله نابجا در واحد (1 واحد به عنوان چگالی نوری 1.0 اندازه‌گیری شده در 490 نانومتر) بیان شد. سطوح سرمی APRIL و BAFF با استفاده از کیت APRIL ELISA موش (MyBioSource, San Diego, CA) و کیت BAFF ELISA موش (R&D Systems, Minneapolis, MN) طبق پروتکل‌های سازنده اندازه‌گیری شد.

سنجش برای Gd-IgA1 تولید شده توسط سلول‌های ترشح کننده IgA{2}} انسانی

یک ELISA ساندویچ برای Gd-IgA1 با استفاده از آنتی بادی اختصاصی Gd-IgA1 (IBL، ژاپن) ساخته شد. 52 آنتی بادی اختصاصی Gd-IgA1 (7.5 میلی گرم در میلی لیتر) رقیق شده در محلول نمکی بافر فسفات، روی یک صفحه ELISA به مدت 18 پوشش داده شد. ساعت در دمای اتاق نمونه ها اعمال و به مدت 2 ساعت در دمای اتاق انکوبه شدند. بشقاب ها شسته و به مدت 2 ساعت در دمای اتاق با یک آنتی بادی مونوکلونال اختصاصی زنجیره ای (Southern Biotech, Birmingham, AL) موش رقیق شده با پراکسیداز ترب کوهی 1:{14}} ضد IgA1 انسانی رقیق شدند و انکوبه شدند. پس از شستشو، صفحات با محلول SIG-MAFAST o-phenylenediamine (Sigma-Aldrich) ساخته شدند و واکنش با افزودن اسید سولفوریک 1 مولار (Wako، اوزاکا، ژاپن) متوقف شد. سطوح Gd-IgA1 با ارجاع به منحنی استاندارد (4-برازش منحنی لجستیک پارامتر) با چگالی نوری در 490 نانومتر برون یابی شد و بر حسب واحد بیان شد. Gd-IgA1 تولید شده به صورت آنزیمی از IgA152 پلاسمای انسان به صورت متوالی (1.37-1000 نانوگرم در میلی لیتر) رقیق شد تا یک منحنی استاندارد ایجاد شود. در این مطالعه، 1 واحد به عنوان 1 نانوگرم در میلی لیتر از استاندارد Gd-IgA1.52 تعریف شد.

ارزیابی آسیب کلیوی در موش‌های ddY

کلیه هاwere removed after perfusion with normal saline solution. Renal tissue specimens for microscopic examination were fixed in 20% formaldehyde, embedded in paraffin, cut into 3-mm-thick sections, and then stained with periodic acid–Schiff. Specimens were quantitatively analyzed to determine the percentage of glomeruli with segmental and global sclerosis and/or mesangial cell proliferation and/or increase in the mesangial matrix. Each section was scored semiquantitatively for percentages of glomeruli with aforementioned lesions (0, 0%; 1, 1% to 24%; 2, 25% to 49%; and 3, >50 درصد از 20 گلومرول). نمونه ها به ضخامت 3- میلی متر بریده شدند، با استون در دمای -20 درجه به مدت 5 دقیقه ثابت شدند، با محلول سالین بافر فسفات شسته شدند، با یک عامل مسدود کننده مسدود شدند (DS Pharma Biomedical Co.، اوزاکا، ژاپن) در دمای اتاق به مدت 30 دقیقه، و سپس در دمای اتاق به مدت 2 ساعت با آنتی بادی های اولیه زیر انکوبه شد: IgA ضد موش بز، IgG ضد موش بز کونژوگه الکسا و آنتی C3 موش (Bethyl Laboratories). پس از 3 بار شستشوی دیگر با محلول سالین بافر فسفات، لام ها با محیط نصب (داکو، توکیو، ژاپن) سوار شدند. نمونه ها با استفاده از میکروسکوپ لیزری کانفوکال (شرکت المپوس، توکیو، ژاپن) آنالیز و تصویربرداری شدند.

واکنش زنجیره ای پلیمراز کمی در زمان واقعی

RNA از سلول های طحال با استفاده از محلول توریزول (Invitrogen، توکیو، ژاپن) استخراج شد و با کیت RNeasy Mini (74106؛ Qiagen، Valencia، CA) خالص شد. واکنش زنجیره‌ای پلیمراز کمی در زمان واقعی با استفاده از سیستم واکنش زنجیره‌ای پلیمراز 7500 Real-Time Applied Biosystems با استفاده از SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems، توکیو، ژاپن) و پرایمرهای خاص: ماوس TLR9 پرایمر فوروارد TCTCCCAACATGGTTGTCGTCGATCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTCGTC ماوس MyD88 پرایمر جلو GCACCTGTGTCTGGTCCATT، پرایمر معکوس CTGTTGGA CACCTGGAGACA; و ژن خانه داری گلیسرآلدئید-3-فسفات دهیدروژناز پرایمر فوروارد CATTGTGGAAG GGCTCATGA، پرایمر معکوس TCTTCTGGGTGGCAGTGATG. شرایط تقویت به شرح زیر بود: پیش گرم کردن در دمای 95 درجه به مدت 20 ثانیه و سپس 40 سیکل دناتوراسیون در دمای 95 درجه به مدت 3 ثانیه و بازپخت و گسترش در 60 درجه به مدت 30 ثانیه. سنجش بیان ژن TaqMan اختصاصی Homo sapiens (Life Technologies، Carlsbad، CA) برای پرایمر APRIL، Hs{15}}g1، Mm03809849-s1، و BAFF، Mm01168134-m1 خریداری شد. . شرایط چرخه واکنش زنجیره ای پلیمراز TaqMan به شرح زیر بود: پیش گرم کردن در دمای 95 درجه به مدت 20 ثانیه و سپس 40 چرخه دناتوراسیون در 95 درجه به مدت 3 ثانیه و بازپخت و گسترش در 60 درجه به مدت 30 ثانیه.

مطالعات آزمایشگاهی با سلول‌های طحال موش‌های ddY

اسپلنوسیت ها در محیط کشت Roswell Park Memorial Institute-1640 با 20 درصد سرم جنین گوساله، 100 میلی گرم در میلی لیتر استرپتومایسین و 100 واحد بر میلی لیتر پنی سیلین کشت داده شدند. گلبول‌های قرمز خون در بافر لیز گلبول قرمز (R7757؛ Sigma-Aldrich) در دمای اتاق به مدت 1 دقیقه لیز شدند و سپس در محیط Roswell Park Memorial Institute-1640 شسته شدند. 50 کشت سلولی در انکوباتور مرطوب شده در دمای 37 درجه نگهداری شدند. 5 درصد CO2. کلاس C CpG-ODN (TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCGCCG) به عنوان لیگاند TLR9 استفاده شد. IL نوترکیب{14}}، آنتی بادی ضد IL{15}} و کنترل ایزوتیپ IgG1 موش از R&D Systems به دست آمد. سلول ها با غلظت های متوسط ​​یا توصیه شده CpG-ODN، 10 نانوگرم در میلی لیتر IL نوترکیب و 100 نانوگرم در میلی لیتر آنتی بادی ضد IL6 کشت داده شدند. IgA، IgA گلیکوزیله نابجا، IgG-IgA IC، و APRIL تولید شده توسط اسپلنوسیت ها پس از {24} ساعت انکوباسیون در شرایط آزمایشگاهی با روش ELISA اندازه گیری شد.

مطالعات آزمایشگاهی با رده‌های سلولی ترشح‌کننده IgA{0}} انسانی

سلول‌های B از خون یک فرد سالم با ویروس اپشتین بار جاودانه شدند، برای تولید رده‌های سلولی ترشح‌کننده IgA زیرکلون شدند و همانطور که توضیح داده شد کشت داده شدند. -6. سلول ها در محیط کشت Roswell Park Memorial Institute-1640 حاوی 20 درصد سرم جنین گوساله، استرپتومایسین و پنی سیلین در انکوباتور مرطوب شده در دمای 37 درجه با 5 درصد CO2 کشت داده شدند. کلاس B CpG-ODN (TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT) به عنوان لیگاند TLR9 استفاده شد. آنتی بادی IL نوترکیب{11}}، APRIL نوترکیب، آنتی بادی ضد IL{12}} و آنتی بادی کنترل IgG بز از R&D Systems به دست آمد. سلول‌ها با غلظت‌های متوسط ​​یا توصیه‌شده CpG-ODN، 50 نانوگرم در میلی‌لیتر IL نوترکیب، 40 نانوگرم در میلی‌لیتر APRIL نوترکیب و 100 نانوگرم در میلی‌لیتر آنتی‌بادی ضد IL به مدت 72 ساعت کشت داده شدند.

وسترن بلاتینگ

سوپرناتانت از سلول های ترشح کننده IgA با الکتروفورز ژل سدیم دودسیل سولفات-پلی آکریل آمید تحت شرایط احیا با استفاده از ژل های شیب دار 5 تا 15 درصد جدا شد. ژل ها به غشاهای پلی وینیلیدین دی فلوراید منتقل شدند و با آنتی بادی های اختصاصی برای APRIL (Abcam Inc., Cambridge, MA) و گلیسرآلدئید{4}فسفات دهیدروژناز (Abcam Inc) انکوبه شدند. لکه‌ها با نورتابی شیمیایی با استفاده از نورتابی شیمیایی افزایش یافته (GE Healthcare، توکیو، ژاپن) و آشکارساز لومینسانس (Konica Minolta Healthcare، توکیو، ژاپن) مشاهده شدند. نتایج به روش تراکم سنجی ارزیابی شد.

سقوط siRNA آوریل

سلول‌های ترشح‌کننده IgA{0}} انسانی در 24-صفحه‌های کشت چاهی کشت و با siRNA اختصاصی APRIL (GS8741، Qiagen) یا کنترل غیر هدف siRNA (GS10673، Qiagen) با استفاده از پروتکل ترانسفکشن طبق دستورالعمل‌های سازنده ترانسفکت شدند. . پس از انکوباسیون به مدت 24 ساعت، سلول ها با 50 نانوگرم در میلی لیتر IL نوترکیب (R&D Systems) به مدت 72 ساعت انکوبه شدند. پس از انکوباسیون، سلول ها و مواد رویی برای اندازه گیری IgA و Gd-IgA1 برداشت شدند.

تحلیل آماری

همبستگی بین پارامترهای مختلف با استفاده از تحلیل واریانس مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. داده ها به صورت میانگین ± انحراف معیار یا مقادیر میانه بیان شد. مقادیر P < {{0}}.05="" از="" نظر="" آماری="" معنی="" دار="" در="" نظر="" گرفته="" شد.="" تمام="" تجزیه="" و="" تحلیل="" های="" آماری="" با="" استفاده="" از="" graphpad="" prism="" نسخه="" 6.0="" برای="" ویندوز="" (نرم="" افزار="" graphpad,="" san="" diego,="" ca)="" انجام="">

سیستانچبرایکلیهعلائم بیماری

افشای

همه نویسندگان هیچ علاقه رقیبی را اعلام نکردند.

قدردانی

این مطالعه تا حدی توسط JSPS KAKENHI Grant No. 18K08252 و پروژه تحقیقاتی عملی برای بیماری‌های کلیوی از آژانس تحقیقات و توسعه پزشکی ژاپن، AMED پشتیبانی شد. JN و BAJ تا حدی توسط کمک های مالی مؤسسه ملی بهداشت DK078244 و DK082753 حمایت شدند. ما از خانم ترومی شیباتا برای کمک های فنی عالی تشکر می کنیم. همچنین از خانم تاکاکو ایکگامی و خانم تومومی ایکدا (بخش تحقیقات مولکولی و بیوشیمیایی، دانشکده پزشکی دانشگاه جونتندو) و خانم تامی ساکانیشی (بخش زیست‌شناسی سلولی، دانشکده پزشکی دانشگاه جونتندو) برای کمک‌های فنی عالی تشکر می‌کنیم. .

مواد تکمیلی

فایل تکمیلی (PDF)

شکل S1. سلول های B فعال شده با CpG-oligodeoxynucleotide (ODN) و سلول های دندریتیک (DCs) تولید IgA را بیشتر افزایش می دهند. سلول‌های B و DCs از طحال موش‌های ddY جدا شدند. تحریک CpG-ODN باعث افزایش تولید IgA در سلول های B جدا شده شد. این افزایش با کشت همزمان سلول های B با DCها بیشتر شد. *P < 0.05.="" روش="" های="" دقیق="" در="" روش="" های="" تکمیلی="" ارائه="" شده="" است.="" روشهای="">

منابع

1. Myette JR، Kano T، سوزوکی H، و همکاران. آنتی بادی هدفمند لیگاند تحریک کننده تکثیر (APRIL) یک درمان ایمن و موثر برای نفروپاتی IgA موش است. کلیه بین المللی 2019؛ 96:104–116.

2. Levy M, Berger J. دیدگاه جهانی نفروپاتی IgA. جی کیدنی دیس هستم. 1988؛ 12:340-347.

3. D'Amico G. شایع ترین گلومرولونفریت در جهان: نفروپاتی IgA. QJ Med. 1987؛ 64: 709-727.

4. Feehally J, Beattie TJ, Brenchley PE, et al. مطالعه متوالی سیستم IgA در نفروپاتی عودکننده IgA. کلیه بین المللی 1986؛ 30:924-931.

5. Wyatt RJ، Julian BA. نفروپاتی IgA N Engl J Med. 2013؛ 368:2402-2414.

6. سوزوکی اچ، یاسوتاکه جی، ماکیتا وای و همکاران. نفروپاتی IgA و واسکولیت IgA همراه با نفریت یک ویژگی مشترک شامل پاتوژنز IgA{2}} با کمبود گالاکتوز دارند. کلیه بین المللی 2018؛ 93:700–705.

7. Glassock RJ. تجزیه و تحلیل فعالیت آنتی بادی در نفروپاتی IgA جی کلین سرمایه گذاری. 2009؛ 119: 1450-1452.

8. Moldoveanu Z، Wyatt RJ، Lee JY، و همکاران. بیماران مبتلا به نفروپاتی IgA سطح سرمی IgA1 با کمبود گالاکتوز را افزایش می دهند. کلیه بین المللی 2007؛ 71: 1148-1154.

9. سوزوکی H، Moldoveanu Z، Hall S، و همکاران. رده‌های سلولی ترشح‌کننده IgA از بیماران مبتلا به نفروپاتی IgA، IgA1 گلیکوزیله نابه‌هنجار تولید می‌کند. جی کلین سرمایه گذاری. 2008؛ 118:629-639.

10. Imai H، Nakamoto Y، Asakura K، و همکاران. رسوب خود به خودی IgA گلومرولی در موش ddY: مدل حیوانی نفریت IgA کلیه بین المللی 1985؛ 27:756-761.

11. Okazaki K، سوزوکی Y، Otsuji M، و همکاران. توسعه یک مدل نفروپاتی IgA با شروع زودرس جی ام سوک نفرول. 2012؛ 23:1364-1374.

12. Nishie T، Miyaishi O، Azuma H، و همکاران. ایجاد یک بیماری مشابه نفروپاتی ایمونوگلوبولین A در موش های دارای کمبود بتا-1،4-گالاکتوسیل ترانسفراز-I. جی پاتول هستم. 2007؛ 170:447-456.

13. سوزوکی H، سوزوکی Y، یاماناکا تی، و همکاران. اسکن گسترده ژنوم در یک مدل جدید نفروپاتی IgA، یک منبع حساسیت را بر روی کروموزوم 10 موش، در یک منطقه مصنوعی IGAN1 انسان در کروموزوم 6q شناسایی می‌کند22-23. جی ام سوک نفرول. 2005؛ 16:1289-1299.

14. Takei T، Iida A، Nitta K، و همکاران. ارتباط بین پلی مورفیسم های تک نوکلئوتیدی در ژن های سلکتین و نفروپاتی ایمونوگلوبولین A. من جی هوم ژنت هستم. 2002؛ 70:781-786.

15. غروی AG، Yan Y، Scolari F، و همکاران. نفروپاتی IgA، شایع ترین علت گلومرولونفریت، با 6q22-23 مرتبط است. نات ژنت. 2000؛ 26:354-357.

16. سوزوکی H، سوزوکی Y، ناریتا I، و همکاران. گیرنده شبه 9 بر شدت نفروپاتی IgA تأثیر می گذارد. جی ام سوک نفرول. 2008؛ 19:2384-2395.

17. ناکاتا جی، سوزوکی ی، سوزوکی اچ، و همکاران. تغییرات در IgA1 با کمبود گالاکتوز سرم در نفروپاتی IgA به دنبال برداشتن لوزه و استروئید درمانی. PLoS One. 2014؛ 9: e89707.

18. Sato D، سوزوکی Y، Kano T، و همکاران. بیان TLR9 لوزه و اثربخشی برداشتن لوزه با پالس درمانی استروئیدی در بیماران نفروپاتی IgA. پیوند نفرول دیال. 2012؛ 27:1090-1097.

19. Coppo R, Camilla R, Amore A, et al. عبارات گیرنده شماره 4 در سلول های تک هسته ای در گردش بیماران مبتلا به نفروپاتی ایمونوگلوبولین A افزایش می یابد. Clin Exp Immunol. 2010؛ 159:73-81.

20. Maiguma M، سوزوکی Y، سوزوکی H، و همکاران. روی رژیم غذایی یک اصلاح کننده محیطی کلیدی در پیشرفت نفروپاتی IgA است. PLoS One. 2014؛ 9: e90558.

21. Kawai T، Akira S. سیگنال دهی به NF-kappaB توسط گیرنده های Toll مانند. Trends Mol Med. 2007؛ 13:460-469.

22. کوواتا اچ، ماتسوموتو ام، آتاراشی ک، و همکاران. IkappaBNS القای زیرمجموعه ای از ژن های وابسته به گیرنده شبه Toll را مهار می کند و التهاب را محدود می کند. مصونیت. 2006؛ 24:41-51.

23. Rostoker G, Rymer JC, Barnard G, et al. عدم تعادل در سیتوکین های پیش التهابی سرم و گیرنده های محلول آنها: نقش احتمالی در پیشرفت نفروپاتی IgA ایدیوپاتیک (IgAN) و نفریت پورپورای هنوخ شونلاین و هدف بالقوه ایمونوگلوبولین درمانی؟ Clin Exp Immunol. 1998؛ 114:468-476.

24. سوزوکی اچ، راسکا ام، یامادا ک، و همکاران. سیتوکین ها گلیکوزیلاسیون IgA1 O را با اختلال در تنظیم آنزیم های C1GalT1 و ST6GalNAc-II تغییر می دهند. جی بیول شیمی. 2014؛ 289:5330-5339.

25. Yamada K, Huang ZQ, Raska M, et al. مهار سیگنال دهی STAT3 باعث کاهش تولید اتوآنتی ژن IgA1 در نفروپاتی IgA می شود. Kidney Int Rep. 2017؛ 2:1194-1207.

26. اشنایدر پی، مک کی اف، اشتاینر وی، و همکاران. BAFF، یک لیگاند جدید از خانواده فاکتور نکروز تومور، رشد سلول های B را تحریک می کند. J Exp Med. 1999؛ 189: 1747-1756.

27. Kiryluk K، Li Y، Scolari F، و همکاران. کشف مکان های خطر جدید برای نفروپاتی IgA، ژن های دخیل در ایمنی در برابر پاتوژن های روده را دخیل می کند. نات ژنت. 2014؛ 46: 1187-1196.

28. Han SS، Yang SH، Choi M، و همکاران. نقش عضو 13 ابرخانواده TNF در پیشرفت نفروپاتی IgA. جی ام سوک نفرول. 2016؛ 27:3430-3439.

29. Hiki Y، Odani H، Takahashi M، و همکاران. طیف سنجی جرمی گلیکوزیلاسیون زیر O IgA1 گلومرولی را در نفروپاتی IgA ثابت می کند. کلیه بین المللی 2001؛ 59: 1077-1085.

30. Allen AC، Bailey EM، Brenchley PE، et al. IgA1 مزانژیال در نفروپاتی IgA، O-گلیکوزیلاسیون نابجا را نشان می دهد: مشاهدات در سه بیمار. کلیه بین المللی 2001؛ 60:969-973.

31. Hiki Y. الیگوساکاریدهای مرتبط با O در ناحیه لولا IgA1: نقش ساختار نابجای آن در بروز و/یا پیشرفت نفروپاتی IgA. Clin Exp Nephrol. 2009؛ 13:415-423.

32. Mestecky J, Tomana M, Moldoveanu Z, et al. نقش گلیکوزیلاسیون نابجا مولکول های IgA1 در پاتوژنز نفروپاتی IgA. کليه پرس خون Res. 2008؛ 31:29-37.

33. McCarthy DD، Kujawa J، Wilson C، و همکاران. موش هایی که بیش از حد BAFF بیان می کنند دچار نفروپاتی وابسته به فلور فلور مشترک و مرتبط با IgA می شوند. جی کلین سرمایه گذاری. 2011؛ ​​121:3991-4002.

34. موتو ام، مانفروی بی، سوزوکی اچ، و همکاران. تحریک گیرنده 9 شبه تلفن باعث بیان نابجای لیگاند القاکننده تکثیر توسط سلول های B مرکز ژرمینال لوزه در نفروپاتی IgA می شود. جی ام سوک نفرول. 2017؛ 28:1227-1238.

35. Latz E, Schoenemeyer A, Visintin A, et al. TLR9 پس از انتقال از ER به DNA CpG در لیزوزوم سیگنال می دهد. نات ایمونول. 2004؛ 5:190-198.

36. Hornung V، Rothenfusser S، Britsch S، و همکاران. بیان کمی mRNA گیرنده شبه شماره 1-10 در زیر مجموعه های سلولی سلول های تک هسته ای خون محیطی انسان و حساسیت به الیگودئوکسی نوکلئوتیدهای CpG. جی ایمونول. 2002؛ 168:4531-4537.

37. Kadowaki N, Ho S, Antonenko S, et al. زیرمجموعه‌های پیش‌سازهای سلول دندریتیک انسانی، گیرنده‌های شبه تلفات مختلفی را بیان می‌کنند و به آنتی‌ژن‌های میکروبی مختلف پاسخ می‌دهند. J Exp Med. 2001؛ 194: 863–869.

38. He B, Xu W, Santini PA, et al. باکتری های روده ای با القای ترشح سیتوکین APRIL از سلول های اپیتلیال، تغییر کلاس ایمونوگلوبولین A2 مستقل از سلول T را تحریک می کنند. مصونیت. 2007؛ 26:812-826.

39. Mackay F, Schneider P. شکستن کد BAFF. Nat Rev Immunol. 2009؛ 9: 491-502.

40. Kunimoto DY، Nordan RP، Strober W. IL-6 یک کوفاکتور قوی IL-1 در سنتز IgM و IL-5 در سنتز IgA است. جی ایمونول. 1989؛ 143: 2230-2235.

41. بیگلی KW، Eldridge JH، Lee F، و همکاران. اینترلوکین ها و سنتز IgA اینترلوکین 6 انسانی و موشی ترشح IgA با سرعت بالا را در سلول های B متعهد به IgA القا می کند. J Exp Med. 1989؛ 169:2133-2148.

42. Ramsay AJ, Husband AJ, Ramshaw IA, et al. نقش اینترلوکین-6 در پاسخ آنتی بادی IgA مخاطی در داخل بدن. علوم پایه. 1994؛ 264:561-563.

43. Nurieva RI، Chung Y، Martinez GJ، و همکاران. Bcl6 باعث ایجاد سلول های کمکی فولیکولی T می شود. علوم پایه. 2009؛ 325: 1001-1005.

44. Poholek AC, Hansen K, Hernandez SG, et al. تنظیم درون تنی رشد سلول های کمکی فولیکولی Bcl6 و T جی ایمونول. 2010؛ 185: 313-326.

45. جین اس، پارک جی، اسپرول تی جی، و همکاران. اینترلوکین 6 با ترویج پیشرفت بیماری مشابه لوپوس اریتماتوز سیستمیک در موش های BXSB.Yaa مرگ و میر را تسریع می کند. PLoS One. 2016؛ 11:e0153059.

46. ​​Litinskiy MB، Nardelli B، Hilbert DM، و همکاران. DCها باعث تغییر کلاس ایمونوگلوبولین مستقل CD از طریق BLyS و APRIL می‌شوند. نات ایمونول. 2002؛ 3: 822-829.

47. Castigli E, Wilson SA, Scott S, et al. TACI و BAFF-R تغییر ایزوتیپ را در سلول های B واسطه می کنند. J Exp Med. 2005؛ 201:35-39.

48. Jourdan M, Chen M, Robert N, et al. IL-6 از تولید سلول‌های پلاسما با عمر طولانی انسان در ترکیب با APRIL یا عوامل محلول در سلول استروما پشتیبانی می‌کند. سرطان خون. 2014؛ 28:1647-1656.

49. Chu VT، Fröhlich A، Steinhauser G، و همکاران. ائوزینوفیل ها برای نگهداری سلول های پلاسما در مغز استخوان مورد نیاز هستند. نات ایمونول. 2011؛ ​​12: 151-159.

50. سوزوکی H، سوزوکی Y، Aizawa M، و همکاران. پلاریزاسیون Th1 در نفروپاتی IgA موشی که توسط سلول های مشتق از مغز استخوان هدایت می شود. کلیه بین المللی 2007؛ 72: 319-327.

51. Chintalacharuvu SR، Emancipator SN. گلیکوزیلاسیون IgA تولید شده توسط سلول های B موش توسط سیتوکین های Th2 تغییر می یابد. جی ایمونول. 1997؛ 159:2327-2333.

52. Yasutake J, Suzuki Y, Suzuki H, et al. رویکرد جدید مستقل از لکتین برای تشخیص IgA1 کمبود گالاکتوز در نفروپاتی IgA. پیوند نفرول دیال. 2015؛ 30:1315-1321.

53. Katafuchi R، Kiyoshi Y، Oh Y، و همکاران. امتیاز گلومرولی به عنوان پیش آگهی در نفروپاتی IgA: سودمندی و محدودیت آن کلین نفرول. 1998؛ 49: 1-8.

54. Ballardie FW, Roberts IS. کارآزمایی آینده نگر کنترل شده پردنیزولون و سیتوتوکسیک در نفروپاتی پیشرونده IgA. جی ام سوک نفرول. 2002؛ 13: 142-148.