مخاطب:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساپ: 008618081934791

برای اطلاعات در مورد قسمت دوم (مقدمه، مواد و روش ها) این مقاله اینجا را کلیک کنید.

داروهای چینی که کلیه را تقویت می کنند چگونه آپوپتوز نورون دوپامینرژیک را مهار می کنند؟

Shaogang Lin، 1 Shuifen Ye، 2 Jinmu Huang، 1 Yun Tian، 3 Yihui Xu، 2 Mengqi Wu، 2 Jingxia Wang، 2 Songying Wu، 4 و Jing Cai، MD، Ph.D.2

خلاصه

موش‌های صحرایی ویستار به صورت داخل معده با داروهای چینی مورد استفاده برای تونیف‌کننده تزریق شدندکلیه. اینها شامل {{0}}.180 گرم در میلی لیتر Herba Epimedii (Epimedium)، Semen Cuscutae (Dodder Seed) یا Herba Cistanches (Desertliving Cistanche)، 0.04 میلی گرم در میلی لیتر از مهارکننده مونوآمین اکسیداز B سلژیلین، یا آب مقطر به مدت 14 روز متوالی برای تهیه سرم حاوی دارو یا سرم خالی. سلول های MES23.5 در فاز لگاریتمی در محیط های حاوی 15 درصد سرم حاوی دارو به مدت 24 ساعت کشت داده شدند و سپس در محلول کشت حاوی 100 میکرومول در لیتر H2O2 به مدت 3 ساعت انکوبه شدند. 3-(4,{18}}دی متیل تیازول-2-ایل){20}}،5-دی فنیل تترازولیوم بروماید (MTT) و نتایج تونومتری جریان نشان داد که همه سرم های حاوی دارو باعث بهبود میزان بقای H2O{24}}سلول های آسیب دیده MES23.5، بیان پرو آپوپتوز FasL و کاسپاز{28} را مهار کرد، بیان Bcl{30}} ضد آپوپتوز را ارتقا داد. با این حال، سرم های حاوی دارو تأثیر کمی بر بیان Fas در سلول های H2O{33} آسیب دیده MES23.5 داشتند. نتایج سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم نشان داد که سرم حاوی Herba Cistanches یا Herba Epimedii بیان فاکتور رشد عصبی، فاکتور نوروتروفیک مشتق از مغز و فاکتور نوروتروفیک مشتق از خط سلول گلیال را در سلول‌های آسیب دیده MES23.5 افزایش داد. Semen Cuscutae حاوی سرم تنها بیان عامل نوروتروفیک مشتق از مغز را افزایش داد. در حالی که بیان عوامل نوروتروفیک فوق در سلول های تیمار شده با سلژیلین حاوی سرم یکسان باقی ماند. این یافته‌ها نشان می‌دهد که داروهای چینی که برای تقویت کلیه استفاده می‌شوند، می‌توانند با تنظیم بیان از سلول‌های عصبی محافظت کنندآپوپتوزعوامل مرتبط و عوامل نوروتروفیک در سلول های MES23.5.

کلید واژه ها: بازسازی عصبی، طب سنتی چینی، سرم حاوی دارو، MES23.5دوپامینرژیکسلول های عصبی، عوامل نوروتروفیک،آپوپتوزعوامل، بیماری پارکینسون، محافظت عصبی

نکات برجسته تحقیق

(1) این مطالعه عوامل مرتبط با آپوپتوز و عوامل نوروتروفیک را برای آشکار کردن اثرات مهاری داروهای چینی برای تقویتکلیهدر آپوپتوز در سطح مولکولی.

(2) نتایج نشان داد که داروهای چینی برای مقوی کردنکلیهمی تواند از سلول های عصبی با تنظیم بیان محافظت کندآپوپتوز-عوامل مرتبط و عوامل نوروتروفیک

سیستانچ برای درمان عملکرد کلیه

مقدمه

بیماری پارکینسون با دژنراسیون و از دست دادن مشخص می شوددوپامینرژیکنورون‌ها در جسم سیاه، ناحیه‌ای از مغز میانی، و همچنین تشکیل بدن لوی[1،2]. از دست دادن نورون های دوپامینرژیک و بیماری پارکینسون با فعال شدن مسیر آپوپتوز ارتباط زیادی دارد [3،4]. انواع سیتوکین ها و فاکتورهای نوروتروفیک برای محافظت عصبی استفاده شده است [5،6]. آماده سازی ترکیبی از داروهای چینی است که می تواند مقویکلیهگزارش شده است که به طور قابل توجهی علائم بیماری پارکینسون را بهبود می بخشد. با این حال، مکانیسم عمل نامشخص است [7،8،9]. ما قبلاً نشان داده‌ایم که داروهای چینی که کلیه را مقوی می‌کنند می‌توانند محافظت کننددوپامینرژیکنورون ها با تنظیم بیانآپوپتوزعوامل مرتبط و افزایش محتوای فاکتور نوروتروفیک در مدل حیوانی بیماری پارکینسون[10]. با این حال، شواهدی از آزمایش‌های آزمایشگاهی وجود ندارد.

رده سلولی MES23.5 از سلول‌های مغز میانی از جنین موش صحرایی و رده سلولی گلیوما نوروبلاستوما موش N18TG2 هیبرید شده است. این خط سلولی دارای خواصدوپامینرژیکسلول های عصبی و کشت آسان تر از سلول های عصبی مغز میانی است. بنابراین، این سلول ها به طور گسترده ای برای مطالعه بیماری های عصبی مورد استفاده قرار گرفته اند[11].

برای بررسی اینکه آیا داروهای چینی که تونیک کننده هستند یا خیرکلیهمی تواند از کشت های in vitro محافظت کنددوپامینرژیکنورون‌ها، با استفاده از H2O2 آسیب اکسیداتیو را در سلول‌های MES23.5 القا کردیم و سلول‌های آسیب‌دیده را با Herba Epimedii (Epimedium)، Semen Cuscutae (Dodder Seed)، یا Herba Cistanches (Desertliving Cistanche) حاوی سرم درمان کردیم. فلوسیتومتری و سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم (ELISA) برای تشخیص بیان استفاده شد.آپوپتوز-عوامل مرتبط و عوامل نوروتروفیک هدف ما بررسی مکانیسم محافظت عصبی داروهای چینی است که می‌تواند آن را تقویت کندکلیهبرای پیشگیری از بیماری پارکینسون مهارکننده های سلژیلین و مونوآمین اکسیداز-B به عنوان کنترل استفاده شد.

نتایج

تأثیر غلظت های مختلف H2O2 بر رشد سلولی MES23.5

نتایج {{0}}(4،5-دی متیل تیازول-2-ایل)-2،5-دی فنیل تترازولیوم بروماید (MTT) نشان داد که میزان بقای MES23. 5 سلول پس از قرار گرفتن در معرض 50، 1{{3{38}}}} 0، 150، 200، 300 و 400 میکرومول در لیتر H2O2 به مدت 1 ساعت (P > 0.05) باقی ماندند، اما پس از آن به طور قابل توجهی کاهش یافت. 3 ساعت، به جز سلول هایی که در معرض 50 میکرومول در لیتر H2O2 قرار گرفتند (01/0 > P). علاوه بر این، تفاوت معنی داری در میزان بقا در بین گروه های مختلف غلظت H2O2، به جز 50 میکرومول در لیتر H2O2، در هر نقطه زمانی وجود نداشت (05/0 P>). میزان بقای سلول‌های MES23.5 تا 50 میکرومول در لیتر H2O2 به مدت 24 ساعت کاهش نیافت (P <0.05). بنابراین،="" سلول="" های="" mes23.5="" را="" با="" 100="" میکرومول="" در="" لیتر="" h2o2="" به="" مدت="" 3="" ساعت="" درمان="" کردیم="" (جدول="">

جدول 1 میزان بقا (درصد) سلول های MES23.5 تیمار شده با غلظت های مختلف H2O2 در طول زمان

تأثیر غلظت‌های مختلف سرم حاوی دارو بر رشد سلول‌های MES23.5 القا شده با H2O{2}}

نتایج MTT نشان داد که هیچ تغییری در سلول‌های MES23.5 القاء شده با H2O که با سرم حاوی 5 درصد (v/v) و 1{8}} درصد (v/v) به مدت 24 ساعت پیش تیمار شده بودند، مشاهده نشد. P > {{20}}.05). با این حال، پیش تیمار با 15 درصد (v/v)، 20 درصد (v/v)، 25 درصد (v/v) و 30 درصد (v/v) سرم حاوی دارو به مدت 24 ساعت، میزان بقای H2O را به طور قابل توجهی بهبود بخشید. {17}}سلولهای MES23.5 را القا کرد (05/0 > P یا 01/0 > P)، اما تفاوت معنی‌داری بین غلظت‌ها مشاهده نشد (05/0 > P). بنابراین، 15 درصد (v/v) سرم حاوی دارو در آزمایشات بعدی استفاده شد (جدول 2).

جدول 2

میزان بقا (درصد) سلول‌های MES23.5 القا شده با H2O{1}} پس از درمان با سرم حاوی دارو در غلظت‌های مختلف

تأثیر سرم حاوی دارو بر بیان عوامل مرتبط با آپوپتوز در سلول‌های MES23.5 القا شده با H2O{3}}

فلوسیتومتری نشان داد که محتوای FasL و کاسپاز{{0}} در گروه مدل در مقایسه با گروه تحت درمان با سرم خالی به طور قابل توجهی افزایش یافته است. P < 0.05).="" محتوای="" fasl="" و="" کاسپاز{4}}="" در="" گروه‌های="" herba="" epimedii،="" semen="" cuscutae،="" herba="" cistanches="" و="" selegiline="" در="" مقایسه="" با="" گروه="" مدل="" به="" طور="" قابل‌توجهی="" کاهش="" یافت="" (p=""><0.05). با="" این="" حال،="" محتوای="" fasl="" و="" کاسپاز{7}}="" در="" گروه="" herba="" epimedii،="" و="" همچنین="" محتوای="" fasl="" در="" گروه="" herba="" cistanches،="" در="" مقایسه="" با="" گروه="" سرم="" خالی="" بالاتر="" باقی="" ماند="" (p=""><0.05؛ جدول="">

جدول 3

نرخ بیان مثبت FasL-، Fas-، کاسپاز-3- و Bcl-2- (درصد) در سلول‌های MES23.5 القایی H2O2- پس از درمان با سرم حاوی دارو

تغییرات در محتوای Bcl{{0}} در سلول‌های هر گروه برخلاف سطوح FasL و کاسپاز-3 بود. محتوای Bcl-2 در گروه مدل در مقایسه با گروه سرم خالی به طور قابل توجهی کاهش یافت (P < 0.{10}}5).="" محتوای="" bcl{5}}="" در="" گروه‌های="" herba="" epimedii،="" herba="" cistanches،="" و="" selegiline="" در="" مقایسه="" با="" گروه="" مدل="" به="" طور="" قابل‌توجهی="" بالاتر="" بود="" (0.05="">< p)،="" اما="" افزایش="" محتوای="" bcl-2="" در="" منی="" آشکار="" نبود.="" گروه="" cuscutae="" (جدول="" 3).="" تفاوت="" معنی="" داری="" در="" محتوای="" fas="" در="" بین="" گروه="" ها="" مشاهده="" نشد="" (05/0=""> P؛ جدول 3).

تأثیر سرم حاوی دارو بر بیان فاکتورهای نوروتروفیک در سلول‌های MES23.5 القا شده با H2O{2}

نتایج ELISA نشان داد که محتوای فاکتور رشد عصبی در گروه مدل و سلژیلین در مقایسه با گروه سرم خالی به طور معنی‌داری کاهش یافت (05/0 < {{0}}}).="" با="" این="" حال،="" سطوح="" فاکتور="" رشد="" عصبی="" در="" گروه‌های="" herba="" epimedii،="" semen="" cuscutae="" و="" herba="" cistanches="" در="" مقایسه="" با="" گروه="" مدل="" بیشتر="" بود،="" اما="" تفاوت‌های="" معنی‌داری="" فقط="" بین="" هربا="" سیستانچ‌ها="" و="" گروه‌های="" مدل="" مشاهده="" شد="" (p=""><0.05؛ جدول="">

جدول 4

فاکتور رشد عصبی (NGF)، فاکتور نوروتروفیک مشتق از مغز (BDNF) و فاکتور نوروتروفیک مشتق از خط سلول گلیال (GDNF) تغییرات محتوایی (جذب) در سلول‌های MES23.5 ناشی از H2O به دنبال درمان با دارو حاوی سرم به مدت 24 ساعت

محتوای فاکتور نوروتروفیک مشتق از مغز در گروه مدل و سلژیلین در مقایسه با گروه سرم خالی به طور قابل توجهی کاهش یافت (P <0.05) و در Herba Epimedii، Semen Cuscutae به طور قابل توجهی بیشتر بود. و هربا سیستانچز در مقایسه با گروه سرم خالی (P <0.05؛ جدول 4).

محتوای فاکتور نوروتروفیک مشتق از رده سلول گلیال در گروه هربا سیستانچز در مقایسه با گروه‌های سرم، مدل، Semen Cuscutae و سلژیلین به‌طور معنی‌داری بیشتر بود (05/0 < 0)، اما تفاوت معنی‌داری بین گروه‌ها مشاهده نشد. گروه Herba Epimedii و Herba Cistanches (جدول 4).

سیستانچ برای بهبود عملکرد کلیه

بحث

تغییرات بیوشیمیایی پاتولوژیک و عصبی در بیماری پارکینسون عمدتاً شاملدوپامینرژیکاز دست دادن نورون در جسم سیاه جسم مخطط، تشکیل اجسام لوئی ائوزینوفیلیک، و کاهش فرستنده های دوپامین در جسم مخطط [14]. مطالعات نشان داده اند که نورونآپوپتوزعامل مهمی برای بروز و پیشرفت بیماری های عصبی مانند بیماری پارکینسون و بیماری آلزایمر است [15،16].

مطالعات فارماکولوژیک مدرن نشان داده است که داروهای چینی Herba Epimedii، Semen Cuscutae، و Herba Cistanches که می‌توانند باعث تقویتکلیه، محافظ عصبی هستند. Herba Epimedii، یک گیاه علفی از خانواده Berberidaceae، می تواند از سلول های عصبی در برابر آسیب بتا پپتید آمیلوئید (25-35) محافظت کند و کاهش دهد.آپوپتوز[17]. Semen Cuscutae دانه‌ی بالغ خشک شده ی ددر است. می تواند ایمنی را تنظیم کند، پیری را به تاخیر بیندازد، تولید رادیکال های آزاد را کاهش دهد، تولید سوپراکسید دیسموتاز را تقویت کند، محتوای Ca2 پلاس در سرم را افزایش دهد، کانال های کلسیم نوع L را مهار کند، هجوم کلسیم را کنترل کند، پوکی استخوان را تنظیم کند و سلول های عصبی را سرکوب کند.آپوپتوز[18،19]. Herba Cistanches در مناطق خشک دارای برگ فلس دار است. این می تواند طول عمر را طولانی کند، اکسیداسیون را مهار کند و محتوای انتقال دهنده عصبی مرکزی را بهبود بخشد [20،21]. سلژیلین، مهارکننده مونوآمین اکسیداز B، همچنین می تواند از سلول های عصبی با چندین مسیر محافظت کند که شامل مهار فعالیت مونوآمین اکسیداز-B، کاهش درون زا یا اگزوژن است.دوپامینتخریب، حفظ غلظت دوپامین در پایانه سیناپسی، کاهش مونوآمین اکسیداز-B، ارتقای فعالیت آنتی اکسیداز، اکسیداسیون آهسته، کاهش تولید رادیکال هیدروکسیل، و محافظت از نورون های دوپامینرژیک [22].

Fas، FasL، و خانواده پروتئین کاسپاز و Bcl{0}} نقش مهمی در تنظیم سلول دارند.آپوپتوز[23،24]. آزمایش‌های قبلی روی حیوانات از گروه ما نشان داده است که داروهای چینی که باعث تقویت آن می‌شوندکلیهمی تواند محتوای کاسپاز{0}} و FasL را در جسم مخطط جسم سیاه موش های مبتلا به بیماری پارکینسون کاهش دهد[11]. این نشان می دهد که نقش مهمی برای داروهای چینی که مقوی هستندکلیهبا کاهش عوامل آپوپتوز برای محافظت از نورون ها در موش های مبتلا به بیماری پارکینسون. این مطالعه از سلول های کشت شده در شرایط آزمایشگاهی استفاده کرد و آنها را در معرض سرم حاوی دارو قرار داد تا به طور مستقیم اثرات داروهای چینی را مشاهده کند. علاوه بر این، این روش تداخل مواجهه مستقیم سلول ها با داروها را به حداقل رساند. نتایج نشان داد که Herba Epimedii و Herba Cistanches بیان Bcl-2 را افزایش دادند و Herba Epimedii، Semen Cuscutae و Herba Cistanches بیان کاسپاز-3 و FasL را کاهش دادند. این نشان می دهد که تنظیم بیان Bcl-2 و کاسپاز-3 توسط Herba Epimedii و Herba Cistanches نقش مهمی در سلول عصبی دارد.آپوپتوز.

فاکتورهای نوروتروفیک نوعی پلی پپتید یا پروتئین هستند که توسط ارگانیسم ها آزاد می شوند. مطالعات نشان داده اند که فاکتور رشد عصبی، فاکتور نوروتروفیک مشتق از مغز و فاکتور نوروتروفیک مشتق از خط سلول گلیال می توانند یک ریزمحیط تغذیه ای برای سیستم عصبی ارائه دهند و نقش مهمی در حفظ رشد طبیعی سیستم عصبی، بقای نورون ها و سیستم عصبی ایفا کنند. مقررات[25،26،27]. عامل رشد عصب عمدتاً مسئول توسعه، تمایز و بقا استدوپامینرژیکنورون هاو همچنین ترمیم مصدوماندوپامینرژیکنورون ها[28،29]. عوامل نوروتروفیک مشتق از مغز می توانند به عنوان یک آنتی اکسیدان عمل کنند و با هم افزایی عوامل نوروتروفیک مشتق از خط سلولی گلیال از سلول های عصبی محافظت کنند [30،31]. فاکتور نوروتروفیک مشتق شده از خط سلول گلیال دارای اثرات تغذیه ای خاص بر روی نورون های دوپامینرژیک است و می تواند سلول های عصبی را با تغییر حجم سلول های عصبی، طول فرآیندها و تحت تاثیر قرار دادن تولید پروتئین خاص تغذیه کند [32]. مطالعه قبلی ما نشان داد که داروهای چینی که می توانند تونیک کنندکلیهمی تواند محتوای درون زا فاکتور رشد عصبی، فاکتور نوروتروفیک مشتق از مغز و فاکتور نوروتروفیک مشتق از خط سلول گلیال را در جسم سیاه جسم مخطط موش های مبتلا به بیماری پارکینسون تنظیم کند و به طور موثر سلول های عصبی را کاهش دهد.آپوپتوز[11]. نتایج حاصل از این مطالعه نشان داد که هربا سیستانچ فاکتور رشد عصبی و محتوای فاکتور نوروتروفیک مشتق از خط سلول گلیال را افزایش داد و Herba Epimedii، Semen Cuscutae و Herba Cistanches محتوای فاکتور نوروتروفیک مشتق از مغز را در سلول‌های MES23.5 افزایش داد.

به طور خلاصه، داروهای چینی برای مقوی سازی استفاده می شودکلیهمانند Herba Epimedii و Herba Cistanches، می توانند با تنظیم بیان از سلول های عصبی محافظت کنند.آپوپتوز-عوامل مرتبط و عوامل نوروتروفیک عمل سمن کوسکوتا آهسته و خفیف است، بنابراین تأثیر آن بر سلول استآپوپتوزآشکار نیستند. با این حال، ما فقط اثرات مهاری آپوپتوز این داروها را بررسی کردیم. مطالعات بیشتری برای بررسی مکانیسم‌های محافظت عصبی این موارد مورد نیاز استکلیهتقویت کننده داروهای چینی