کمبود کلوتو بیان IFN ناشی از هیپوکسی را تشدید می کند / از طریق دخیل در RIG-I در کلیه ها

edmund.chen@wecistanche.com

خلاصه هیپوکسی یک مسیر رایج برای پیشرفت مرحله نهایی استبیماری کلیوی.ژن القایی با رتینوئیک اسید I(RIG-I) یک RNA هلیکاز را رمزگذاری می کند که ویروس هایی از جمله SARS-CoV2 را که مسئول تولید اینترفرون (IFN)-a/ برای جلوگیری از گسترش عفونت ویروسی است، شناسایی می کند. اخیراً، فعال‌سازی RIG-l در شرایط هیپوکسیک پیدا شد و کمبود کلوتو باعث تشدید فعال‌سازی RIG-I در مغز موش شد. با این حال، نقش این توابع در التهاب کلیه مبهم باقی می ماند. در اینجا، برای مطالعه آزمایشگاهی، بیان RIG-I و IFN-a/ در موش های صحرایی سالم مورد بررسی قرار گرفت.کلیه(NRK)-52سلولهای E تحت شرایط هیپوکسیک (1 درصد O2) انکوبه شدند. در مرحله بعد، siRNA هدف RIG-I یا siRNA درهم به سلول های NRK52E برای بررسی بیان RIG-I و IFN-a/ß در شرایط هیپوکسیک ترانسفکت شد. ما همچنین سطوح بیان RIG-I و IFN-a/ را در 33 انسان بررسی کردیمکلیهنمونه های بیوپسی با نفروپاتی lgA تشخیص داده شده است. برای مطالعه Vivo، ما هیپوکسی کلیوی را با بستن شریان کلیوی به مدت 10 دقیقه در موش‌های نوع وحشی (موش‌های WT) و موش‌های Klotho ناک اوت (KIT / موش) القا کردیم. جوجه کشی در شرایط هیپوکسیک بیان RIG-lI و IFN-a/ را در سلول های NRK52E افزایش داد. دخیل بودن آنها در سلول های NRK52E ترانسفکت شده با siRNA که RIG-I را هدف قرار می دهد، مهار شد. در بیماران مبتلا به نفروپاتی IgA، رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمیایی نمونه‌های بیوپسی کلیه نشان داد که بیان RIG-I با بیان IFN-a/ همبستگی دارد (r{10}}.57,P<0.001, and="" r=""><0.001, respectively).="" the="" expression="" levels="" of="" rig-i="" and="" ifn-a/β="" were="" upregulated="" in="">کلیه هاموش های هیپوکسیک WT و دخیل بیشتر در موش های هیپوکسیک مشاهده شد. این یافته ها نشان می دهد که هیپوکسی بیان IFN-a/ را از طریق تنظیم مثبت RIG-I القا می کند و کمبود کلوتو این بیان ناشی از هیپوکسی را در بدن تشدید می کند.کلیه ها.

کلید واژه ها:بیماری کلیوی؛ سلول های کلیه؛ جایگزینی کلیه؛ آسیب کلیوی؛ کلیه

CISTANCHE عملکرد کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

مقدمهمزمنبیماری کلیوی(CKD) در سال 2017 بر 697.5 میلیون نفر در سراسر جهان تأثیر گذاشت [1]، بنابراین به عنوان یک نگرانی عمده برای سلامت شناخته شده است. برای به تاخیر انداختن پیشرفت CKD، مهارکننده های مسیر سیستم رنین-آنژیوتانسین-آلدوسترون (RAAS) در یک محیط بالینی استفاده می شود [2،3]. با این حال، اثرات مفید آنها محدود است و بسیاری از بیماران در نهایت نیاز به درمان جایگزینی کلیه دارند [4]. از نظر پاتولوژیک، التهاب مزمن و فیبروز بینابینی، بدون در نظر گرفتن بیماری اولیه، ویژگی های مشترک CKD هستند [5]. اگرچه فاکتور رشد تبدیل کننده (TGF) نقش اساسی در ایجاد فیبروز بینابینی ایفا می کند، اما مطالعات قبلی نشان داده اند که نفوذ سلول های التهابی مسئول تولید TGF است{12} } [9]. این یافته‌ها نشان می‌دهد که التهاب رویداد بالادستی فیبروز بینابینی است و التهاب یک هدف درمانی کاندید برای CKD است.

هیپوکسی وضعیتی است که در آن اکسیژن ناکافی آن را وارد بافت ها می کند. به عنوان یک پاسخ سلولی به هیپوکسی، عوامل القا کننده هیپوکسی (HIF) نقش مهمی در جلوگیری از آسیب بافت ایفا می کنند [10-12]. با این حال، هیپوکسی شدید منجر به بیماری‌های عروقی حاد، مانند سکته مغزی [13]، آنژین صدری [14] و بیماری شریان محیطی [15] می‌شود. اخیراً گزارش شده است که هیپوکسی مزمن مانند آپنه خواب نیز در ایجاد بیماری های مختلف نقش دارد [16]. در موردکلیهگزارش شده است که هیپوکسی با پیشرفت مرحله CKD تشدید می شود و در حال حاضر پاتوفیزیولوژی رایج در نظر گرفته می شود که منجر به مرحله نهایی می شود.بیماری کلیوی[17]. همانطور که در بالا ذکر شد، التهاب به عنوان یک رویداد بالادست در نظر گرفته می شود، بنابراین مکانیسمی که هیپوکسی باعث ایجاد التهاب می شود باید در سطح مولکولی روشن شود. التهاب با درد، گرما، قرمزی، تورم و از دست دادن عملکرد مشخص می شود[18]. با این حال، اساساً برای از بین بردن علت اولیه آسیب سلولی و پاکسازی سلول های نکروزه و بافت آسیب دیده عمل می کند. در هر صورت، التهاب یک پاسخ خاص نیست و ایمنی ذاتی عمدتاً از طریق تولید اینترفرون (IFN) در فرآیند اولیه التهاب شرکت می کند - / [19]. در میان عوامل دخیل در ایمنی ذاتی، یک ژن القایی با رتینوئیک اسید I (RIG-I) مسئول پاسخ های ایمنی به عفونت های ویروسی است. به طور قابل توجهی، مطالعات اخیر نشان داده اند که هیپوکسی بیان RIG-I را در مغز و کبد تنظیم می کند و در نتیجه تولید IFN- / [21،22] می شود. با این حال، نقش هیپوکسی در بیان IFN-/B با واسطه RIG-I درکلیهگریزان باقی می ماند.

کلوتو برای اولین بار به عنوان یک پروتئین ضد پیری گزارش شد [23]. در واقع، موش‌های فاقد کلوتو طول عمر کوتاه‌تری دارند که با فنوتیپ‌هایی شبیه به پیری انسان همراه است. در مقابل، موش‌های تراریخته کلوتو طول عمر طولانی‌تری دارند [24]. از نظر اثرات محافظتی مجدد، مشخص شده است که کمبود کلوتو آسیب کلیوی را در مدل های تجربی بیماری های کلیوی تشدید می کند، در حالی که بیان بیش از حد کلوتو یا تجویز پروتئین کلوتو آن را بهبود می بخشد [25]. پروتئین کلوتو به سه شکل وجود دارد: غشایی، ترشحی و کوتوی درون سلولی. در این میان، کلوتو داخل سلولی گزارش شده است که بیان RIG-I را همراه با التهاب سرکوب می کند [26]، و این احتمال را افزایش می دهد که کمبود کلوتو باعث تشدید تنظیم دخیل ناشی از هیپوکسی RIG-I و IFN- درکلیه ها.این یافته‌ها ما را به این فرض سوق داد که بیان RIG-I و IFN-/ تحت شرایط هیپوکسیک در رده سلولی سلول‌های لوله‌ای کلیوی افزایش یافته و تنظیم دخیل ناشی از هیپوکسی آنها در موش‌های کلوتو ناک اوت تشدید شده است (KI{4}} موش). در این مطالعه، ما نشان می‌دهیم که هیپوکسی RIG-I و همچنین IFN-a/ را در موش‌های سالم تنظیم می‌کند.کلیهسلول‌ها (NRK-52E) و کلیه‌های موش. ما همچنین نشان می‌دهیم که RIG-I مسئول تنظیم دخیل IFN-c/B ناشی از هیپ-اکسی است. در انسان واقعیکلیهنمونه هایی از بیماران مبتلا به نفروپاتی IgA تشخیص داده شد، بیان RIG-I با IFN-/ همبستگی مثبت داشت. در نهایت، تنظیم دخیل ناشی از هیپوکسی RIG-Iand IFN-/ در موش های KI-/- تشدید شد. این یافته‌ها نشان می‌دهد که کمبود کلوتو بیان IFN-/ ناشی از هیپوکسی را از طریق تنظیم مثبت RIG-I در بدن تشدید می‌کند.کلیه ها.

CISTANCHE نارسایی کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

مواد و روش ها حیواناتموش‌های نر C57BL/6J نوع وحشی (WT) (8 هفته‌ای و وزن 20-25 گرم) از آزمایشگاه‌های رودخانه چارلز ژاپن (یوکوهاما، ژاپن) به‌دست آمدند. موش‌های نر (6 هفته‌ای و با وزن تقریباً 15 گرم) از شرکت CLEA Japan خریداری شدند. کمیته سازمانی مراقبت و استفاده از حیوانات دانشگاه هیروشیما (شماره مجوز: A19-158 و 2019-156) و مطابق با دستورالعمل‌های مؤسسه ملی بهداشت (NIH) در مورد استفاده از حیوانات آزمایشگاهی انجام شد. موش‌های WT و KI-' به یک گروه کنترل یا یک گروه هیپوکسی (n=5در هر گروه) تقسیم شدند. شرایط هیپوکسیک با بستن شریان کلیوی چپ به مدت 1{13}} دقیقه تحت بیهوشی عمومی (0.3 mg/kg مدتومیدین، 4 mg/kg میدازولام و 5 mg/kg بوتورفانول) ایجاد شد[28]. موش‌های گروه کنترل تحت یک عمل ساختگی قرار گرفتند که مانند موش‌های گروه هیپوکسی بود، به جز عدم بستن شریان. پس از 10 دقیقه هیپوکسی، موش ها با سوراخ کردن قلب و موش ها کشته شدندکلیه هابرداشت شدند. هیپوکسیکلیهتوسط وسترن بلات برای بیان اریتروپویتین تایید شد (شکل S1).

کشت سلولیموش معمولیکلیه(NRK){0}}سلول‌های E از مجموعه کشت نوع آمریکایی (ماناساس، VA، ایالات متحده آمریکا) خریداری شدند. سلول‌های NRK-52در محیط کشت RPMI-1640 حاوی 10 درصد جنین کشت شدند. سرم گاو (FBS) (Nichirei Bioscience، توکیو، ژاپن) و پنی سیلین/استرپتومی سین (Nacalai Tesque، کیوتو، ژاپن). این سلول ها در ظروف کشت 10 سانتی متری کاشته شدند. پس از رشد تا زیر تلاقی، سلول ها در یک اتاقک جوجه کشی مدولار 1 درصدی O2 (MIC 101؛ Billups-Rothenberg، San Diego، CA، USA) به مدت 30،60،90 و 120 دقیقه انکوبه شدند، لیزهای سلول کامل تهیه و در معرض قرار گرفتند. به تجزیه و تحلیل وسترن بلات. هیپوکسی سلول‌های NRK{15}}E با وسترن بلات برای بیان HIF{16}} تأیید شد (شکل S2).

انتقال siRNA RIG-Iسلول‌های NRK52E با siRNA 20 نانومولار با هدف RIG-I (RSS311418: Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) یا siRNA کنترل منفی (4390843؛ Applied Biosystems, Waltham, MA, USA) با استفاده از Lipofectamine 2000ScientificTh (ResignificantTher) ترانسفکت شدند. ، مطابق با دستورالعمل سازنده. پس از 43-45 ساعت، برخی از این سلول‌ها در شرایط هیپوکسیک (1 درصد O،) به مدت 30 دقیقه برای ارزیابی RIG-I انکوبه شدند. سلول های دیگر به یک محیط تازه تبدیل شدند. پس از 24 ساعت، این سلول‌ها به مدت 60 و 120 دقیقه تحت شرایط هیپوکسیک (O2 1 درصد) به مدت 60 و 120 دقیقه انکوبه شدند.

تجزیه و تحلیل وسترن بلاتجمع‌آوری نمونه و وسترن بلات مطابق با روش‌های توصیف شده قبلی انجام شد[29]. آنتی بادی مونوکلونال ضد RIG-I خرگوش (#3743S؛ فناوری سیگنالینگ سلولی، Danvers، MA، ایالات متحده)، آنتی بادی پلی کلونال خرگوش ضد IFN- 11 (bs-7023R؛ Bioss Anti-bodies، Woburn، MA، ایالات متحده)، آنتی بادی ضد IFN- پلی کلونال خرگوش (GTX37658; GeneTex, Irvine, CA, USA), آنتی بادی مونوکلونال ضد RIG-I خرگوش (=700366؛ Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), پلی کلونال خرگوش آنتی بادی ضد IFN- 2 (ab193055؛ Abcam، کمبریج، انگلستان)، آنتی بادی ضد IFN- پلی کلونال خرگوش (PA{19}}؛ Invitrogen)، آنتی بادی مونوکلونال ضد کلوتو انسان موش (KO603؛ TransGenic، Fukuoka) ، ژاپن)، آنتی بادی ضد اکتین مونوکلونال موش (A5316؛ Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA) و آنتی بادی مونوکلونال ضد توبولین موش (T9026؛ Sigma-Aldrich) استفاده شد. به عنوان آنتی بادی های اولیه ایمونوگلوبولین G ضد خرگوش بز کونژوگه با پراکسیداز ترب (Dako، Glostrup، دانمارک) و ایمونوگلوبولین G ضد موش بز (Dako) به عنوان آنتی بادی ثانویه استفاده شد. برای تشخیص سیگنال ها از SuperSignal West Dura و سیستم Pico (Thermo Fisher Scientific) استفاده شد. شدت هر باند توسط نرم افزار ImageJ (نسخه 1.47y؛ مؤسسه ملی بهداشت، Bethesda، MD، ایالات متحده آمریکا) اندازه گیری شد و به سطح اکتین یا توبولین نرمال شد.

سیستانچ بیماری کلیوی/کلیوی را بهبود می بخشد

تجزیه و تحلیل ایمونوهیستوشیمی بافت کلیه موشرنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمی مطابق با روش‌های توصیف‌شده قبلی انجام شد [27]. به عنوان آنتی بادی های اولیه، محصولات زیر استفاده شد: آنتی بادی مونوکلونال ضد RIG-I خرگوش (#700366؛ Invitrogen)، آنتی بادی پلی کلونال ضد IFN{5}} خرگوش (ab193055؛ Abcam)، آنتی بادی پلی کلونال ضد IFN- خرگوش ( PA5-20390؛ Invitrogen) و آنتی بادی مونوکلونال ضد کلوتو انسانی موش صحرایی (KO603; TransGenic).RIG-I-، IFN-a/ -، و نواحی کلوتو مثبت به عنوان میانگین 20 میدان به طور تصادفی انتخاب شدند. نرم افزار ImageJ

جمع آوری نمونه بالینی و بیانیه اخلاقنمونه‌های کلیه با بیوپسی کلیه در بیمارستان دانشگاه هیروشیما بین اوت 2014 تا نوامبر 2016 از 33 بیمار که مبتلا به نفروپاتی IgA تشخیص داده شده بودند، تهیه شد. این مطالعه به اصول مندرج در بیانیه هلسینکی پایبند بود و توسط کمیته اخلاق دانشگاه هیروشیما (E{3}}) تأیید شد، رضایت آگاهانه به صورت انصراف در یک وب سایت (httns:/inzounaika) اخذ شد. Hiroshima-uaciplresearchl انصراف داد.html).

تجزیه و تحلیل ایمونوهیستوشیمی بافت کلیه انسانرنگ‌آمیزی ایمنی مطابق با روش‌های توصیف‌شده قبلی انجام شد [27]. آنتی بادی های اولیه زیر استفاده شد: آنتی بادی ضد RIG-I مونودونال خرگوش (#700366؛ Invitrogen)، آنتی بادی مونوکلونال ضد IFN- موش (sc-373757)، بیوتکنولوژی سانتا کروز، دالاس، TX، ایالات متحده آمریکا، و خرگوش آنتی بادی پلی کلونال آنتی بادی ضد IFN (PA{9}}؛ Invitrogen)، RIG-I-و IFN-a/-مثبت نواحی به عنوان میانگین پنج فیلد به طور تصادفی انتخاب شده با نرم افزار Image] اندازه گیری شد.

تحلیل آمارینتایج به عنوان میانگین ± انحراف استاندارد (SD) ارائه شده است. همبستگی ها با استفاده از تحلیل رگرسیون تک متغیره محاسبه شد، برای مقایسه های چندگانه، از تحلیل واریانس یک طرفه (ANOVA) و به دنبال آن آزمون t استودنت با تصحیح بونفرونی استفاده شد. تفاوت بین دو گروه با استفاده از آزمون t-test آنالیز شد<0.05 was="" considered="" as="" statistically="">

نتایج:هیپوکسی RIG-I و IFN-a/ را در رده سلولی سلول های اپیتلیال کلیه موش صحرایی تنظیم می کند.برای شناسایی اثر هیپوکسی بر بیان RIG-I و IFN-a/ در شرایط آزمایشگاهی، ما آنالیز وسترن بلات را برای این پروتئین‌ها در سلول‌های NRK{2}E کشت‌شده در شرایط هیپوکسیک انجام دادیم. سطح پروتئین RIG-I در 30 دقیقه به اوج خود رسید و سپس به تدریج در سلول های NRK{5}} تحت تحریک هیپوکسیک کاهش یافت (شکل 1A). سطوح IFN-/ß در NRK به ترتیب در 120 و 60 دقیقه افزایش یافت و به اوج رسید. -52سلولهای E با تحریک هیپوکسیک (Eig 1Band1C). حذف RIG-I بیان IFN-a/ را در سلول‌های NRK52E با هیپوکسی کاهش می‌دهد برای ارزیابی اینکه آیا RIG-I در بیان IFN-/در شرایط هیپوکسیک شرکت می‌کند، بیان آن‌ها را در سلول‌های NRK{18}}E ترانسفکت شده با RIG-I siRNA یا منفی

کنترل siRNA ابتدا، ما اثر شکست RIG-siRNA در سلول‌های NRK{1}}E را تأیید کردیم. وسترن بلات برای RIG-I نشان داد که RIG-I siRNA بیان RIG-I را در سلول های NRK{5}} با یا بدون تحریک هیپوکسیک (Eig 2A) کاهش داد. -I در بیان IFN- /B در سلول‌های NRK{10}E با استفاده از RIG-I siRNA یا کنترل منفی. RIG-siRNA بیان IFN- / را در NRK{14}}Ecells (Eig2Band2C) سرکوب کرد.

RIG-I با سطح بیان IFN- / در نمونه های کلیه انسان نفروپاتی IgA ارتباط دارد.ما بررسی کردیم که آیا سطح بیان RIG-I با IFN-a/ در نمونه‌های بیوپسی کلیه به‌دست‌آمده از بیماران مبتلا به نفروپاتی IgA مرتبط است (n=33). مشخصات بالینی دقیق این بیماران در جدول S1 نشان داده شده است. رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمیایی برای RIG-I و IFN-/ بیان آنها را در گلومرول‌ها و لوله‌های کلیوی نشان داد (شکل 3A) و نشان داد که RIG-I با IFN-o/ همبستگی مثبت دارد (r{9}}.57,P<0.001, and="" r=""><0.001, respectively)(eig="">

هیپوکسی سطح بیان کلوتو را در موش‌های WT و K{0}} تغییر نمی‌دهدبرای تعیین اثر تحریک هیپوکسیک بر بیان کلوتو در داخل بدن، بیان آن را در موش‌های WT و K-/با یا بدون 10 دقیقه تحریک هیپوکسیک بررسی کردیم. وسترن بلات و رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمی نشان داد که بیان کلوتو بین موش‌های WT با و بدون هیپوکسی تفاوتی ندارد و بیان کلوتو در KIT/موش‌ها بدون در نظر گرفتن وجود یا عدم وجود تحریک هیپوکسیک (Eig 4Aand4B) مشاهده نشد. در موش‌های WT، کلوتو پروتئین در سیتوپلاسم سلول های لوله ای رنگ آمیزی شد (شکل 4B).بیان RIG-I در شرایط هیپوکسیک در موش های K~ تشدید می شود.طبق گزارشات، کلوتو داخل سلولی توانایی سرکوب التهاب ناشی از RIG-I را اعطا می کند، بنابراین ما سطح بیان و محلی سازی RIG-I را در هیپوکسیک بررسی کردیم.کلیه هاموش WT و Kl-/-. وسترن بلات نشان داد که بیان RIG-I در موش های WT با تحریک هیپوکسیک افزایش یافته و در موش های Kl-/- تشدید شده است (شکل 5A). ایمونوهیستوشیمی نشان داد که ناحیه RIG-I مثبت در موش های Kl-/- افزایش یافته است که مشابه نتایج بدست آمده از وسترن بلات بود (شکل 5B).

IFN- تحت شرایط هیپوکسیک در موش‌های KI{1}} تنظیم می‌شودبرای شناسایی اثرات هیپوکسی بر بیان-a در wvo، سطح بیان و محلی سازی آن را در موش های WT و KI-هیپوکسیک بررسی کردیم. وسترن بلات نشان داد که بیان IFN در موش های WT با تحریک هیپوکسیک افزایش یافته و در موش ها بیشتر تنظیم شده است (شکل 6A). رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمی همچنین نشان داد که ناحیه مثبت IFN عمدتاً در سلول‌های لوله‌ای مشاهده می‌شود و سطح بیان IFN- تمایل مشابهی را در وسترن بلات نشان می‌دهد (شکل 6B).

IFN- تحت شرایط هیپوکسیک در موش K1T-// افزایش می یابدعلاوه بر IFN-c، سطح بیان و محلی سازی IFN-Bin WT هیپوکسیک و موش ها را بررسی کردیم. از نتایج وسترن بلات، بیان IFN در موش های WT با تحریک هیپوکسیک افزایش یافت، در حالی که افزایش بیشتر در موش/KIT مشاهده شد (شکل 7A). با تعیین کمیت ناحیه مثبت IFN، سطح بیان IFN- در موش KI-/- در مقایسه با موش WT' افزایش یافت (شکل 7B).

بدون توجه به وجود تحریک هیپوکسیک در موش های Kl-/- مشاهده شده است. ما نشان دادیم که هیپوکسی کلیه بیان RIG-I و IFN-/ را افزایش داد و بیان آنها در موش های Kl-/- تشدید شد. این یافته‌ها نشان می‌دهد که کمبود کلوتو بیان RIG-I ناشی از هیپوکسی را تشدید می‌کند و در نتیجه تنظیم مثبت IFN-/. ما تشخیص دادیم که هیپوکسی بیان RIG-I و IFN-/ را در هر دو مطالعات in vitro و in vivo ایجاد می‌کند. برای انطباق با شرایط هیپوکسیک، HIF تثبیت می شود و به عنوان یک فاکتور رونویسی عمل می کند [30]. در یک مطالعه قبلی، گزارش شده بود که RIG-I در مولکول های القایی با HIF نقش دارد. با این حال، ما نتوانستیم تشخیص دهیم که RIG-I یک عامل پایین دستی HIF است. علاوه بر عفونت ویروسی، بیان RIG-I در شرایط هیپوکسیک افزایش می یابد [31]. اگرچه مطالعات قبلی گزارش کردند که هیپوکسی بر سلول‌های اپیتلیال لوله‌ای، سلول‌های اندوتلیال، پری‌سیت‌ها، فیبروبلاست‌ها، سلول‌های التهابی و سلول‌های پیش‌ساز در کلیه‌ها تأثیر می‌گذارد [32،33]، ما نشان می‌دهیم که تنظیم مثبت RIG-I عمدتاً در سلول‌های اپیتلیال لوله‌ای در موش مشاهده شد. با تحریک هیپوکسیک، و همچنین در بیماران مبتلا به نفروپاتی IgA. از آنجایی که لوله های کلیوی به عنوان محل ورود پاتوژن های ترانس پیشابراه [34] در نظر گرفته می شوند، RIG-I ممکن است نقش محوری در پاسخ ایمنی سلول های اپیتلیال لوله ای تحت شرایط هیپوکسیک داشته باشد. پاسخ ایمنی ذاتی نه تنها توسط میکروارگانیسم‌ها، بلکه سیگنال‌های هشدار از سلول‌های آسیب‌دیده، آسیب‌دیده یا تحت فشار نیز فعال می‌شود [35]. در این مطالعه، ما نشان دادیم که بیان RIG-I ناشی از هیپوکسی در تولید IFN- / در یک رده سلولی موش از لوله‌های کلیوی شرکت می‌کند. داده های ارائه شده نشان می دهد که بیان RIG-I به عنوان سیستم ایمنی ذاتی سیتوزول در پاسخ به استرس هیپوکسیک و همچنین عفونت ویروسی عمل می کند. مطالعات قبلی توصیف کردند که هیپوکسی در طول ایجاد CKD بدون توجه به بیماری اولیه افزایش می یابد و هیپوکسی به پیشرفت آسیب کلیوی کمک می کند [17]. در یک مطالعه بالینی با استفاده از تصویربرداری تشدید مغناطیسی وابسته به سطح اکسیژن خون، هیپوکسی کلیه نه تنها در طول پیشرفت CKD تشدید شد، بلکه چنین پیشرفتی را نیز پیش بینی کرد [36]. بنابراین، هیپوکسی در حال حاضر به عنوان مسیر رایج برای پیشرفت مرحله نهایی در نظر گرفته می شودبیماری کلیویبنابراین التهاب ناشی از هیپوکسی باید یک هدف درمانی برای سرکوب پیشرفت CKD باشد.

ما نشان دادیم که هیپوکسی باعث تولید IFN-/ می شود که به عنوان اینترفرون نوع 1 طبقه بندی می شوند. اینترفرون های نوع 1 اساساً برای مهار تکثیر ویروسی [37] و مقاومت در برابر سرکوب سیستم ایمنی ناشی از هیپوکسی [21،22] عمل می کنند. با این حال، مطالعات انجام‌شده تا به امروز گزارش داده‌اند که اینترفرون‌های نوع 1 منجر به فعال‌سازی سلول‌های کشنده طبیعی می‌شوند و نقش مهمی را نه تنها در حذف سلول‌های آلوده به ویروس، بلکه در آسیب بافتی نیز ایفا می‌کنند [38]. در واقع، مطالعات قبلی گزارش کردند که RIG-I به التهاب در اندام های مختلف، مانند ریه کمک می کند [39]،کلیه[40] و سیستم عصبی [21]. در این مطالعه، ما همچنین نشان دادیم که تنظیم افزایشی RIG-I ناشی از هیپوکسی مسئول تولید IFN-/. بنابراین، اینترفرون های نوع 1 ممکن است برای محافظت در برابر عفونت در حالت هیپوکسی عمل کنند، اما در شرایط غیر عفونی مضر خواهند بود. علاوه بر این، یک مطالعه قبلی گزارش داد که، علاوه بر اینترفرون های نوع 1، RIG-I در تولید سیتوکین های مختلف مانند IL-1، IL{9}} و TNF- [41] نقش دارد. از آنجایی که این سیتوکین ها باعث آسیب بافتی می شوند، تنظیم دخیل RIG-I ناشی از هیپوکسی ممکن است در پیشرفت CKD شرکت کند. ما نشان دادیم که کمبود کلوتو بیان RIG-I ناشی از هیپوکسی را افزایش می‌دهد، که با تنظیم مثبت IFN-/ همراه است. بیان کلوتو با افزایش سن و پیشرفت CKD کاهش می یابد [42،43]. بنابراین، بیان RIG-I ممکن است در افراد مسن و بیماران CKD تحت شرایط هیپوکسیک بیشتر تنظیم شود که منجر به تولید IFN-/. همانطور که در بالا ذکر شد، کلوتو به سه شکل وجود دارد - کلوتو غشایی، ترشحی و درون سلولی - که دومی مسئول سرکوب تولید سیتوکین های التهابی با واسطه RIG-I است [26]. از نظر محلی‌سازی، نشان دادیم که بیان کلوتو عمدتاً در سلول‌های لوله‌ای کلیوی رخ می‌دهد، با شواهدی مبنی بر اینکه بیان RIG-I عمدتاً در سلول‌های لوله‌ای کلیوی تحت شرایط هیپوکسیک تشدید می‌شود. این یافته ها نشان می دهد که کاهش سطح بیان کلوتو به افزایش تولید اینترفرون های نوع 1 با واسطه RIG-I در شرایط هیپوکسیک کمک می کند.

سیستانچ درد کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

به طور خلاصه، ما نشان دادیم که RIG-I و IFN-/ ناشی از تحریک هیپوکسیک در کلیه‌های موش و یک رده سلولی موش صحرایی از سلول‌های لوله‌ای کلیوی، و RIG-I در تنظیم دخیل در آزمایش‌های آزمایشگاهی IFN-/القای هیپوکسی نقش داشته است. در نمونه‌های بیوپسی کلیه از بیماران مبتلا به نفروپاتی IgA، بیان RIG-I با تنظیم مثبت IFN-/ . در نهایت، بیان RIG-I ناشی از هیپوکسی در موش‌های klotho-nockout همراه با تنظیم مثبت IFN-/ تشدید شد. بیان اینترفرون نوع 1 با واسطه RIG-I در شرایط هیپوکسیک افزایش یافت، و دخیل بیشتر در حالت تنظیم کلوتو داونره مشاهده شد. طبق مطالعات بالینی، هیپوکسی با مرحله پیشرفته CKD [36] تشدید می شود و پیش بینی کننده پیشرفت طولانی مدت CKD است [36]. علاوه بر این، بیان کلوتو با کاهش عملکرد کلیه کاهش می یابد و کاهش بیان کلوتو با آسیب کلیوی همراه است [44]. در این مطالعه، ما نشان می‌دهیم که کمبود کلوتو بیان IFN-/ ناشی از هیپوکسی را از طریق تنظیم مثبت RIG-I در کلیه‌ها تشدید می‌کند و بیان RIG-I با IFN-/ در بیماران واقعی مبتلا به نفروپاتی IgA مرتبط است. با در نظر گرفتن این یافته ها با هم، هیپوکسی و کاهش کلوتو در طول پیشرفت CKD ترویج می شوند و بنابراین فعال شدن ایمنی ذاتی در بیماران CKD افزایش می یابد.