متفورمین با کاهش مدولاسیون سلول های بنیادی مشتق از چربی انسان را بهبود می بخشد.

لطفا تماس بگیریدoscar.xiao@wecistanche.comبرای اطلاعات بیشتر

خلاصه:بافت چربی نقش مهمی در تنظیم هموستاز متابولیک با ذخیره چربی اضافی و محافظت از سایر اندام ها در برابر سمیت چربی ایفا می کند. افزایش سن با توزیع مجدد چربی مرکزی همراه است که منجر به کاهش سطح زیر جلدی حساس به انسولین و افزایش انبارهای چربی احشایی مقاوم به انسولین می شود. سلول های بنیادی مشتق از چربی (ASCs) نقش مهمی در بازسازی بافت چربی دارند. ASCهای پیر به دلیل تجمع استرس اکسیداتیو و آسیب سلولی مرتبط با اختلال عملکرد میتوکندری، کاهش ساقه و پتانسیل بازسازی را نشان می دهند. متفورمین یک داروی ضد دیابت شناخته شده است که اثرات ضد پیری را در موجودات مختلف و مدل های حیوانی نشان داده است. در این مطالعه، ما اثر درمان با متفورمین را بر روی ساقه سلول‌های ASC انسانی در مدل‌های کشت سلولی و بافت چربی کامل مورد تجزیه و تحلیل قرار دادیم. نتایج ما نشان می‌دهد که متفورمین ساقه سلول‌های ASC را بهبود می‌بخشد، سرعت تکثیر و تمایز سلول‌های چربی را کاهش می‌دهد. با بررسی مکانیسم زمینه‌ای احتمالی، کاهش فعالیت mTOR و ERK را در ASCهای تحت درمان با متفورمین مشاهده کردیم. علاوه بر این، ما افزایش فعالیت اتوفاژی را در درمان متفورمین مشاهده کردیم. ما به این نتیجه رسیدیم که درمان با متفورمین با کاهش mTOR و ERKsignaling و افزایش اتوفاژی، ساقه ASCs را بهبود می‌بخشد. ارزیابی‌های آتی in vivo در مدل‌های حیوانی و انسان، راه را برای سازگاری بالینی این داروی تثبیت‌شده برای احیای بنیادی سلول‌های بنیادی مسن هموار خواهد کرد.

لطفا برای دانستن بیشتر اینجا را کلیک کنید

کلید واژه ها:سلول های بنیادی چربی؛ بافت چربی؛ ساقه تفکیک؛ افزایش؛ متفورمین;mTOR; ERK; خویشتن خواری

1. مقدمه

بافت چربی یک اندام پویا است که نقش هموستاتیک مهمی در تنظیم تعادل مواد مغذی، حساسیت به انسولین و تعدیل ایمنی دارد. بافت چربی این نقش را با ذخیره و اکسید کردن اسیدهای چرب اضافی انجام می دهد، بنابراین از استئاتوز و سمیت چربی در سایر اندام ها جلوگیری می کند [1]. مقاومت به انسولین مرتبط با سن شایع ترین بیماری متابولیک است. تقریباً 25 درصد از جمعیت بالای 65 سال ایالات متحده از دیابت رنج می برند که منجر به مرگ و میر بالاتر، کاهش وضعیت عملکردی، افزایش خطر بستری شدن در بیمارستان و بار بیش از حد بر اقتصاد سلامت می شود [2]. اگرچه ارتباط بین دیابت و چاقی مدت‌هاست که به رسمیت شناخته شده است، اما ارتباط بین پیری و دیابت نوع 2 مبهم است [3]. اولین مشاهدات مربوط به کاهش تحمل گلوکز به پیری در سال 1921 انجام شد [4]. از آن زمان تاکنون چندین مطالعه کاهش حساسیت به انسولین را به عنوان علت اصلی اختلال متابولیسم گلوکز ناشی از افزایش سن شناسایی کرده اند [5،6]. بر اساس محلی سازی آناتومیکی، بافت چربی را می توان به طور کلی به دو دپو تقسیم کرد: انبارهای چربی زیر جلدی و احشایی. محل و عملکرد انبار بافت چربی از نظر حساسیت به انسولین مهم است. به عنوان مثال، انبار احشایی مقاوم تر است در حالی که انبار زیر جلدی به انسولین حساس تر است [7]. کاهش تدریجی حجم بافت چربی زیر جلدی ناشی از افزایش سن منجر به کاهش جذب گلوکز و چربی می شود که منجر به سرریز چربی و رسوب خارج از رحم لیپیدها در عضله و کبد می شود و به ایجاد مقاومت به انسولین کمک می کند [8].

بافت چربی از انواع مختلف سلول تشکیل شده است. هضم آنزیمی بافت چربی با کلاژناز دو بخش اصلی ایجاد می کند: بخش چربی و بخش عروقی استرومایی (SVF) [9]. SVF شامل سلول های بنیادی مشتق شده از چربی (ASCs)، لنفوسیت ها، سلول های اندوتلیال، پری سیت ها و فیبروبلاست ها می شود [10]. سلول‌های ASC از نظر فنوتیپی ایمنی به‌عنوان سلول‌های CD34 به علاوه CD90 به علاوه CD29 به علاوه CD{7}}سلول‌های CD31 با منشأ مزانشیمی تعریف می‌شوند که قابلیت تمایز سه‌گانه‌ای را به استخوان، غضروف یا چربی نشان می‌دهند [11،12]. در بافت‌های چربی سفید، این سلول‌ها عمدتاً در استرومای عروقی اطراف رگ‌های خونی کوچک قرار دارند و می‌توانند تکثیر شده و به سلول‌های چربی تمایز یابند[11]. سلول های بنیادی مشتق شده از چربی (ASCs) با انجام تکثیر، خود نوسازی و تمایز نقش مهمی در بازسازی بافت چربی ایفا می کنند. پیری با از دست دادن این ویژگی های ساقه در ASCها همراه است [13،14]. اعتقاد بر این است که کاهش مربوط به سن در اندازه ذخیره چربی زیر جلدی به دلیل تغییر تکثیر و تمایز ASCها است[{18}}]. فاندایزن و همکاران نشان دهنده تجمع استرس اکسیداتیو در بافت چربی در طول پیری است که بر ظرفیت تمایز تأثیر منفی می گذارد؛ [15] با این حال، مکانیسم(های) دقیقی که زمینه از دست دادن ساقه در ASCها را فراهم می کند، شناخته نشده است. مطالعات اخیر نشان داده‌اند که کاهش اتوفاژی، هدف مکانیکی بالاتر فعالیت مسیر راپامایسین (mTOR) و تجمع گونه‌های فعال اکسیژن (ROS) با از دست دادن ساقه در ASCها و القای پیری زودرس در ASCها مرتبط است [{20}}].

سیستانچ می تواند ضد پیری باشد

متفورمین یک داروی ضد دیابت است که معمولا برای کاهش قند خون و بهبود حساسیت به انسولین استفاده می شود. می توان از آن برای درمان انواع اختلالات متابولیک مرتبط با افزایش سن، مانند بیماری های قلبی عروقی، سرطان ها و زوال شناختی استفاده کرد [21،22]. اثرات افزایش طول عمر متفورمین در کرم‌ها، موش‌ها و موش‌ها از طریق محدودیت‌های غذایی نشان داده شده است که اثر تحریک فعالیت پروتئین کیناز فعال شده با آدنوزین مونوفسفات (AMPK) را تقلید می‌کند [23]. مطالعات مختلف نشان داده اند که متفورمین هدف پستانداران راپامایسین (mTOR) را مهار می کند [24،25]. مسیرهای سیگنالینگ AMPK-mTOR به طور خاص ویژگی های هموستازهای سلولی مانند اتوفاژی، تکثیر، متابولیسم انرژی و سنتز پروتئین را تنظیم می کند [26]. نشان داده شده است که متفورمین از تکثیر، تمایز و التهاب جلوگیری می کند، استرس اکسیداتیو و پتانسیل میتوکندری را کاهش می دهد و ساقه کلی را در انواع مختلف سلول های بنیادی بالغ بهبود می بخشد [27،28]. اثر متفورمین بر متابولیسم و ​​ساقه سلول های ASC در شرایط آزمایشگاهی و درون تنی مشخص نیست.

در این مطالعه، ما از کشت دوبعدی ASCهای انسانی و تکنیک‌های کشت بافت چربی کل انسان برای شبیه‌سازی سازمان سلولی در داخل بدن و ریزمحیط بافت استفاده کردیم. با استفاده از این مدل‌های تجربی، ما تأثیر درمان با متفورمین را بر تمایز، تکثیر و ساقه سلول‌های ASC بررسی کردیم و مکانیسم‌های مولکولی درگیر در این فرآیندهای سلولی را بررسی کردیم.

2. مواد و روشها

2.1. مشخصات اهداکننده

بافت چربی از پنج اهداکننده زن غیر دیابتی در محدوده سنی 13±39 و محدوده BMI 4±27 که تحت عمل جراحی پلاستیک انتخابی در مرکز پزشکی دانشگاه پیتسبورگ (UPMC) قرار داشتند، جمع‌آوری شد. روش جمع آوری بافت توسط هیئت بررسی نهادی دانشگاه پیتسبورگ (IRB No.0511186) تایید شد.

2.2. جداسازی و پرورش ASCهای انسانی

سلول های پیش ساز چربی به شرح زیر جدا شدند [19،29]. نمونه‌برداری از بافت چربی پس از عمل جراحی در یک ظرف استریل در بسته به آزمایشگاه منتقل شد. بافت با نمک بافر بافر فسفات Dulbecco (PBS؛ Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA) و به دنبال حذف مواد فیبری و رگ های خونی توسط تشریح شسته شد. بافت به قطعات ({4}} میلی گرم) بریده شد و در بافر هضم (HBSS حاوی 2{14}}0 U/mL کلاژناز (CLS Type II، Worthington Biochemical Corp.، Lakewood، NI) هضم شد. ، ایالات متحده آمریکا) و 2 درصد w/o BSA (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)) تحت هم زدن به مدت 60 دقیقه در دمای 37 درجه؛ 1 میلی گرم بافت چربی / 3 میلی لیتر بافر هضم. بافت پراکنده به مدت 10 دقیقه در 200 × گرم در دمای اتاق سانتریفیوژ شد. سلول‌های چربی شناور آسپیره شدند و سلول‌های پلت‌شده بخش عروقی استروما (SVF) در بافر لیز گلبول قرمز (0.155 M NH4CI، 5.7 میلی‌مولار K2HPO4، 0.1 میلی‌مولار EDTA، pH 7.3) معلق شدند و در دمای 10 دقیقه در اتاق انکوبه شدند. برای حذف بقایای بافت، سوسپانسیون سلولی از طریق یک مش نایلونی (اندازه منافذ 100 میکرومتر؛ Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) فیلتر شد. پس از یک مرحله سانتریفیوژ دیگر (10 دقیقه در 200×g) SVF پلت شده در محیط ASC (محیط Eagle اصلاح شده Dulbecco (DMEM)/F{29}} (1:1) با HEPES و L-گلوتامین (Thermo Fisher) معلق شد. علمی، Waltham، MA، ایالات متحده)، مکمل با 33 میکرومولار بیوتین (Sigma-Aldrich، سنت لوئیس، MO، ایالات متحده)، 17 میکرومولار پانتوتنات (Sigma-Aldrich، St.Louis، MO، ایالات متحده)، 10ng/ml EGF، 1 نانوگرم در میلی لیتر bFGF، انسولین 500 نانوگرم در میلی لیتر، سرم جنین گاوی 2.5 درصد و جنتامایسین 12.5 میکرومولار در میلی لیتر (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) و با تراکم 50 سلول بذر شده /cm2 در فلاسک T175.

پس از رسیدن به 70 درصد تلاقی، سلول ها با PBS شسته و با استفاده از محلول 0.05 درصد تریپسین-EDTA 1x (Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA) تریپسینیزه شدند. تریپسین با افزودن محیط ASC به اضافه 10 درصد FBS غیرفعال شد و با سانتریفیوژ در 300×g به مدت 5 دقیقه قبل از اینکه سلول ها در تراکم 5000 سلول در سانتی متر مربع بذر داده شوند، حذف شد. ASCها قبل از تقسیم شدن مجدداً تا 70 درصد تلاقی رشد کردند. ASCها در معابر 3-4 در این مطالعه استفاده شدند. سلول ها با غلظت های مختلف متفورمین (Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA)، راپامایسین (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) یا مهارکننده U0126 بر اساس طرح تجربی تیمار شدند.

2.3. تمایز چربی

برای القای چربی زایی، ASCها با تراکم 5{3}}،000 سلول/cm² در صفحات کشت سلولی 6-چاه کاشته شدند. آدیپوژنز با استفاده از یک محیط تمایز، متشکل از 0.2 uM انسولین (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)،0.5 mM 1-متیل{9 القا شد. }}ایزوبوتیل گزانتین (IBMX) (سیگما-آلدریچ، سنت لوئیس، MO، ایالات متحده)، 0.25 میکرومولار دگزامتازون (سیگما-آلدریش، سنت لوئیس، MO، ایالات متحده) و 10 ug/mL، ترانسفرین، Sigma-Ald. Louis، MO، USA) در ASCmedium. پس از 3 روز تمایز، محیط کشت تغییر کرد و سلول ها به مدت 14 روز در محیط تمایز بدون IBMX کشت شدند.

2.4. کشت بافت چربی

کشت بافت چربی در 6-صفحات کشت سلولی چاهک، با تغییراتی انجام شد، همانطور که توسط هارمز و همکاران منتشر شد. [30]. بافت چربی کامل به قطعات کوچکتر به اندازه 3-5 میلی متر خرد شده و در محیط کشت سلولی 5 میلی لیتری کشت داده شد. صافی های سلولی با اندازه منافذ 70 میکرومولار روی قطعات بافت نگه داشته شدند تا بافت در محیط غوطه ور بماند. قطعات بافت با کلاژناز هضم شدند، همانطور که در بالا برای روش جداسازی ASCها توضیح داده شد، و SVF برای بیان ژن های بنیادی مرتبط با ASC مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.

2.5. Oil Red O رنگ آمیزی

برای تجسم قطرات لیپیدی، سلول ها با 4 درصد پارافورمالدئید در PBS به مدت 1 ساعت تثبیت شدند و با 0.3 درصد Oil Red O (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) در ایزوپروپانول/آب رنگ آمیزی شدند. 60:40) به مدت 1 ساعت. شستشوی نهایی دو بار با آب مقطر انجام شد. برای تعیین کمیت Oil Red Oil جذب شده، رنگ با ایزوپروپانول (Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA) شسته شد و چگالی نوری در طول موج 518 نانومتر اندازه‌گیری شد.

2.6. رنگ آمیزی بدن

در روز 14 پس از القای آدیپوژنز، سلول ها با Bodipy (Invitrogen، Waltham، MA، USA) و Hoechst (Sigma-Aldrich، St. Louis، MO، USA) به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه رنگ آمیزی شدند. تصاویر با استفاده از میکروسکوپ فلورسنت به دست آمد و با نرم افزار ImageJ تجزیه و تحلیل شد.

2.7. فلوسایتومتری

ASCها در پاساژ سه برای آنالیزهای فلوسایتومتری برای بیان سطحی CD29 (Biolegend، San Diego، CA، USA)، CD90 (Biolegend، San Diego، CA، USA)، CD45 (BD، Franklin Lakes، NJ، USA) استفاده شدند. , CD24 (Biolegend, San Diego, CA, USA) و CD31 (BD, NJ, USA). سلول‌ها تریپسینیز شدند، با PBS شسته شدند و با آنتی‌بادی‌ها در بافر رنگ‌آمیزی FACS (1 درصد BSA در PBS) رنگ‌آمیزی شدند. ASC های رنگ آمیزی نشده به عنوان کنترل مورد استفاده قرار گرفتند. سیگنال فلورسنت با استفاده از فلوسیتومتر (Fortessa, BD, Franklin Lakes, NJ, USA) اندازه گیری شد و داده ها با استفاده از نرم افزار FlowJo (BD, Franklin Lakes, NJ, USA) تجزیه و تحلیل شدند.

2.8. تمایز استخوانی

ASCها در {0}}صفحه چاهک رشد کردند و تمایز استخوانی با استفاده از یک محیط استخوان زا (DMEM 10 درصد FBS، 0.1uM دگزامتازون، 10 میلی مولار -گلیسرول فسفات و 50 میکرومولار اسید اسکوربیک) القا شد. در روز 21 پس از تمایز، سلول ها در 4 درصد پارافورمالدئید (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) تثبیت شدند و با رنگ آمیزی قرمز Alizarin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) رنگ آمیزی شدند. با استفاده از نرم افزار Image J انجام شد.

2.9. تشخیص آپوپتوز با رنگ آمیزی Annexin V-APC/PI

مرگ سلولی آپوپتوز با استفاده از کیت Annexin V-APC/PI (Biolegend، San Diego، CA، USA) اندازه‌گیری شد. در مجموع 10،000(سلول/چاه) ASC بر روی صفحات {3}چاهی کاشته شد و در دمای 37 درجه با 5 درصد CO2 انکوبه شد. سلول‌ها با متفورمین ({9}}.25 میلی‌مولار، 0.5 میلی‌مولار، 1 میلی‌مولار، 2.5 میلی‌مولار، و 5 میلی‌مولار) (Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA) تیمار شدند. پس از 72 ساعت درمان، سلول‌ها با تریپسینیزاسیون جمع آوری شد و با 2.5μL AnnexinV-APC و 2.5μL بافر اتصال PIin رنگ آمیزی شد، در تاریکی در دمای اتاق به مدت 15 تا 20 دقیقه انکوبه شد و با فلوسیتومتری آنالیز شد (Fortessa، BD، NJ، ایالات متحده).

2.10. Reactioe Oxygen Detection

سطوح ROS با استفاده از پروب رنگ فلورسنت 2'،7'-دی کلروفلورسئین دی استات (DCFH{3}}DA) (Invitrogen، Waltham، MA، USA) تعیین شد. سلول‌های ASC (10،{5}} سلول/چاه) در یک صفحه {6} چاهک کشت داده شدند و با متفورمین (5 میلی‌مولار) در دمای 37 درجه، 5 درصد CO، به مدت 72 ساعت انکوبه شدند. پس از انکوباسیون، ASCها تریپسینیز شدند و با رنگ 50 میکرومولار DCFH{12}}DA به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه رنگ‌آمیزی شدند و با استفاده از میکروسکوپ فلورسانس آنالیز شدند.

2.11. رنگ آمیزی TMRM

سلول‌های ASC (10،000 سلول/چاه) در یک صفحه 6-چاهی کشت داده شدند، با دوزهای مختلف متفورمین (5 میلی‌مولار) به مدت 72 ساعت تیمار شدند و در 37 درجه با 100 نانومولار TMRM (سیگما آلدریچ) انکوبه شدند. ، سنت لوئیس، MO، ایالات متحده) به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد. پس از انکوباسیون، سلول ها در زیر میکروسکوپ فلورسانس مشاهده شدند. Image] برای تعیین کمیت فلورسانس تصاویر میکروسکوپی استفاده شد.

2.12. بیان ژن کمی RT-PCR

RNA کل با میکرو کیت RNeasy (Qiagen، Hilden، آلمان) جدا شد و سنتز cDNA با کیت سنتز cDNA رشته اول RevertAid (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) انجام شد. آغازگرهای اختصاصی ژن از سیگما آلدریچ، سنت لوئیس، MO، ایالات متحده آمریکا خریداری شدند. تجزیه و تحلیل بیان کمی با استفاده از Quantstudio 3 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) انجام شد. کمی سازی mRNA با استفاده از -اکتین برای عادی سازی انجام شد. داده‌ها برای هر رونوشت ژن با محاسبه تفاوت (ACt) بین ژن‌های Ct-housekeeping و Ct-Target نرمال شد. افزایش یا کاهش نسبی بیان با مقایسه ژن مرجع با ژن هدف (AACT) با استفاده از فرمول بیان نسبی (=24ACt) محاسبه شد.

2.13. وسترن بلات

تجزیه و تحلیل وسترن بلات اساساً همانطور که توضیح داده شد [19] انجام شد. روش مورد استفاده برای نرمال کردن سطوح پروتئین "کیت سنجش پروتئین Pierce BCA" (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) بود. لیزات سلولی (15 یوگا پروتئین کل در هر خط) در بافر نمونه سدیم دودسیل سولفات (SDS) تهیه شد که توسط SDS-PAGE جدا شد و روی غشاهای پلی وینیلیدین دی فلوراید لکه دار شد. آنتی بادی های زیر مورد استفاده قرار گرفتند: موش ضد اکتین انسانی (Proteintech، IL، ایالات متحده آمریکا)، پریلیپین (Cell Signaling، MA، USA)، فسفر-P70S6K (Cell Signaling، MA، ایالات متحده)، کل P70S6K (Sell Signaling، MA، ایالات متحده آمریکا)، pERK1/2 (سیگنالینگ سلولی، MA، ایالات متحده)، کل ERK1/2 (سیگنالینگ سلولی، MA، ایالات متحده)، ترکیب ضد IgG HRP موش (Proteintech، IL، ایالات متحده)، و IgG HRP ضد موش خرگوش ( Proteintech، IL، ایالات متحده). برای آنالیزهای چگالی سنجی از نرم افزار Image J استفاده شد. 2.14.تحلیل آماری

تجزیه و تحلیل های آماری در GraphPad Prism (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA) انجام شد. FlowJo برای تجزیه و تحلیل FACS استفاده شد. معنی‌داری تفاوت بین میانگین‌ها با استفاده از آزمون t-student یا آنالیز واریانس ارزیابی شد. خطای خالی به عنوان میانگین ± SEM نشان داده می شود. مقادیر در مقادیر p معنی دار بود<><0.01 and=""><>

3. نتایج

متفورمین یک داروی ضد دیابت شناخته شده است که نقش مهمی در افزایش طول عمر دارد [31]. برای مطالعه اثر درمان با متفورمین بر روی ساقه سلول‌های بنیادی مشتق از چربی، ASCs را از بافت چربی اهداکنندگان انسانی با هضم کلاژناز جدا کردیم. ASCهای جدا شده چسبنده پلاستیک بودند و مورفولوژی فیبروبلاستیک یا دوکی شکل را نشان دادند. تجزیه و تحلیل فلوسیتومتری نشان داد که ASCها برای نشانگرهای سلول های بنیادی مزانشیمی مانند CD29، CD90 و CD24 مثبت بودند، اما برای نشانگر اصل و نسب خونساز CD45 و نشانگر خط اندوتلیال CD31 منفی بودند (شکل 1A). علاوه بر نمایش فنوتیپ ASC معمولی، ASCها پتانسیل تمایز چربی زایی و استخوان زایی قوی را نشان دادند که به ترتیب با رنگ آمیزی Bodipy و Alizarin Red S شناسایی شدند (شکل 1B).سیستانچ แอ ม เว ย์ASCهای مشخص شده برای آزمایشات بیشتر در مطالعه ما مورد استفاده قرار گرفتند.

در مقالات گزارش شده است که متفورمین تمایز چربی زایی سلول های بنیادی را کاهش می دهد. هدف ما بررسی تنظیم تمایز سلولهای چربی ASC در درمان متفورمین است. ASCها با 1،2.5 و 5 متفورمین از 2 روز قبل از القای چربی و در طول فرآیند تمایز تحت درمان قرار گرفتند. Bodipy و Oil Red Ostains برای تجسم قطرات روغن در روز 14 پس از القای تمایز استفاده شد. نتایج رنگ‌آمیزی Oil Red O (شکل 1C) و رنگ‌آمیزی Bodipy (شکل 1D) نشان می‌دهد که درمان با متفورمین به طور قابل‌توجهی تمایز چربی‌زایی را به روشی وابسته به دوز در مقایسه با سلول‌های شاهد مهار می‌کند. مهار تمایز چربی با استفاده از تجزیه و تحلیل وسترن بلات پروتیین نشانگر تمایز سلولی پریلیپین تایید شد. برای این کار، لیزات سلولی از سلول های تمایز یافته در روز 14 تمایز چربی جمع آوری شد و بیان پریلیپین مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. نتایج وسترن بلات ما کاهش معنی‌دار بیان پری‌لیپین را در درمان متفورمین در طول تمایز چربی‌زایی نشان می‌دهد (شکل 1E)، که با کاهش رنگ‌های Bodipy و Oil Red O مرتبط است. نتیجه می‌گیریم که درمان با متفورمین تمایز چربی‌زایی ASCهای انسانی را مهار می‌کند، با میزان مهار با دوز درمان متفورمین ارتباط مثبت دارد.

میزان تمایز و تکثیر بالاتر منجر به از دست دادن ساقه می شود. از آنجایی که مشاهده کردیم که متفورمین تمایز چربی زایی را کاهش می دهد، ما علاقه مند به بررسی اثر درمان با متفورمین بر تکثیر ASCs در شرایط آزمایشگاهی بودیم. سلولهای ASC با متفورمین تحت درمان قرار گرفتند و سلولها در روز چهارم پس از کشت در حضور یا عدم حضور متفورمین شمارش شدند. از نتایج ما، مشاهده کردیم که متفورمین به طور قابل توجهی سرعت تکثیر سلولی را در مقایسه با ASC های کنترل کاهش می دهد (شکل 2A). سلول های بنیادی نقش مهمی در بازسازی و نگهداری بافت دارند.چه مقدار سیستانچ مصرف کنیمسلول های بنیادی برای ایفای موثر نقش احیا کننده خود، باید ویژگی بنیادی خود را حفظ کنند. ما تأثیر درمان متفورمین را بر بیان ژن‌های بنیادی در سلول‌های ASC تجزیه و تحلیل کردیم. برای این منظور، ما از PCR زمان واقعی کمی برای تجزیه و تحلیل ژن‌های مربوط به حفظ ساقه در ASCها استفاده کردیم. ما مشاهده کردیم که متفورمین به طور قابل توجهی بیان نشانگرهای سلول های بنیادی چربی مانند BMP7، DPP4، Sox2، Oct3/4، Wnt2، ICAM1، CD90 و DLK1 را در مقایسه با ASCs کنترل افزایش داد (شکل 2B). نتایج ما نشان می‌دهد که درمان با متفورمین به طور موثری تکثیر ASCها را کاهش می‌دهد، در نتیجه با افزایش بیان ژن‌های امضاکننده ساقه، از فرسودگی تکثیر سلول‌ها جلوگیری می‌کند.

شکل 1. درمان با متفورمین تمایز چربی زایی ASCها را به روشی وابسته به دوز مهار می کند. (الف) ASCها برای بیان CD29، CD90، CD24، CD31، و CD45 توسط فلوسیتومتری مورد آزمایش قرار گرفتند. هر دو درصد مثبت نشان داده شده در هیستوگرام و میانگین شدت فلورسانس (MFI) نشان داده شده در جدول کنترل (ASCهای رنگ آمیزی نشده) و رنگ آمیزی شده (ASCهای تیمار شده با آنتی بادی های مربوطه) ارائه شده است. (B) ASCها با استفاده از کوکتل‌های تمایز خاص دودمان تحت تمایز چربی یا استخوان‌زایی قرار گرفتند. تمایز به دودمان چربی با رنگ آمیزی بادیپی و استخوان زایی با رنگ آمیزی آلیزارین رد تایید شد. درصد ناحیه رنگ‌آمیزی آلیزارین قرمز با استفاده از Image J محاسبه شد. سلول‌های ASC با یک کوکتل تمایز سلولی چربی در حضور یا عدم حضور دوزهای مختلف متفورمین به مدت 14 روز تیمار شدند. رشد سلول‌های چربی در روز 14 پس از القا با رنگ‌آمیزی قطرات چربی با استفاده از رنگ‌آمیزی Oil Red O ارزیابی شد. رنگ روغن جذب شده قرمز O استخراج شد و چگالی نوری اندازه گیری شد. چگالی نوری از ASCهای کنترل 100 درصد در نظر گرفته شد و تغییر نسبی بر روی تیمار متفورمین ترسیم شد (n =3). (D) محتوای لیپید در روز 14 با استفاده از رنگ آمیزی Bodipy (سبز) تعیین شد. برای رنگ آمیزی هسته ها از هوخست (آبی) استفاده شد.سیستانچ چیست(E) تجزیه و تحلیل وسترن بلات بیان پروتئین perilipin. اکتین به عنوان کنترل بارگذاری استفاده شد. کمی سازی تراکم باند پروتئین پریلیپین نرمال شده به اکتین - Image J. تصاویر و نمودارها نماینده سه تکرار مستقل هستند (n=3). *پ<0.05,**><0.01,***p><0.001 and="" ***=""><0.0001 as="" compared="" with="">

برای رد این که کاهش تمایز و تکثیر به دلیل هیچ گونه اثرات سیتوتوکسیک متفورمین بر ASC ها نیست، زنده ماندن سلول های تیمار شده با متفورمین را تجزیه و تحلیل کردیم. آنالیز رنگ‌آمیزی AnnexinV/PI توسط فلوسایتومتری نشان داد که هیچ افزایش قابل‌توجهی در سلول‌های آپوپتوتیک یا نکروزه پس از تیمار با افزایش غلظت متفورمین تا 5 در مقایسه با محیط کشت سلولی کنترل نشده است (شکل 3A). فعالیت میتوکندری و تولید گونه‌های اکسیژن فعال (ROS) برای تمایز سلولی مهم هستند و افزایش سطح متابولیسم میتوکندری و تولید ROS در طول تمایز چربی‌زایی مشاهده شده است [32]. از نتایج ما، مشاهده کردیم که درمان با متفورمین باعث کاهش تمایز چربی‌زایی ASCها می‌شود. ما بعداً اثرات روی فعالیت میتوکندری و تولید ROS را بررسی کردیم. ASCها با متفورمین تیمار شدند و با TMRM برای ارزیابی فعالیت غشای میتوکندری و با DCF2DA برای تخمین غلظت ROS رنگ‌آمیزی شدند. تصاویر میکروسکوپ فلورسنت و تعیین کمیت سیگنال فلورسنت نشان داد که درمان با متفورمین به طور قابل توجهی فعالیت میتوکندری (شکل 3، C) و تولید ROS را کاهش می دهد (شکل 3D، E). نتیجه می گیریم که کاهش فعالیت میتوکندری و تولید ROS به واسطه متفورمین به افزایش ساقه ASCها کمک می کند.

برای درک آبشار سیگنال دهی احتمالی مسئول کاهش تمایز سلولی چربی، تکثیر و تنظیم مثبت ژن‌های بنیادی در ASCها پس از درمان با متفورمین، ما بر روی mTOR، اتوفاژی و آبشارهای سیگنالینگ کیناز تنظیم‌شده با سیگنال خارج سلولی (ERK) تمرکز کردیم. مطالعات قبلی نقش مهم این مسیرها را در حفظ ساقه در ASC ها نشان داده اند [19،33]. هر دو سیگنالینگ ERK و mTOR نقش مهمی در ترویج تکثیر و تمایز سلول ایفا می کنند. پس از تیمار ASC با دوزهای مختلف متفورمین، لیزات سلولی جمع آوری شد و آنتی بادی های LC3، فسفریله-p70S6 کیناز، کل p70S6 کیناز، فسفریله-ERK42/44 و کل آنتی بادی ERKp42/44 وسترن بلات شد. بتا اکتین به عنوان یک ژن خانه دار استفاده شد. تجزیه و تحلیل وسترن بلات نشان داد که در مقایسه با ASCهای کنترل، تیمار متفورمین بیان p70S6K فسفریله و کیناز فسفریله-ERK42/44 را کاهش داد (شکل 4A, B, D). هر دو سیگنالینگ ERK و mTOR نقش مهمی در تنظیم مسیر اتوفاژی دارند.بیوفلاونوئیدهانتایج وسترن بلات نشان داد که درمان با متفورمین باعث افزایش فعالیت اتوفاژی در ASCها می شود (شکل 4A, C). ما بیشتر بیان ژن‌های مسیر اتوفاژی را در درمان متفورمین در سطح mRNA با استفاده از PCR زمان واقعی کمی تجزیه و تحلیل کردیم. با تجزیه و تحلیل qPCR، ما افزایش قابل توجهی در ژن های مسیر اتوفاژی VMP1، P62، ATG5، و ATG7 پس از درمان با متفورمین مشاهده کردیم (شکل 4E)، که با افزایش فعالیت اتوفاژی نشان داده شده در نتایج وسترن بلات ما مطابقت دارد. افزایش غیر قابل توجهی در بیان ATG 9 نیز در تجزیه و تحلیل ما مشاهده شد. نتیجه می گیریم که درمان با متفورمین فعالیت ERK و mTOR را کاهش می دهد و اتوفاژی را در ASCها به عنوان مکانیزم زمینه ای احتمالی برای کاهش تکثیر و تمایز و افزایش ساقه افزایش می دهد.

برای تأکید بر نقش مستقیم سیگنال دهی ERK و mTOR در مهار تمایز و افزایش ساقه در ASCها به واسطه درمان متفورمین، ما به طور جداگانه سیگنالینگ ERK و مسیر mTOR را با استفاده از مهارکننده ERK U0126 و راپامایسین مهار کردیم و اثرات آن را بر ASC تجزیه و تحلیل کردیم. تمایز و ریشه [19،33]. افزودن مهارکننده ERK U0126 در طول تمایز سلول‌های چربی ASC منجر به کاهش قابل‌توجه تمایز شد، همانطور که توسط تصاویر رنگ‌آمیزی بادیپی و کمی‌سازی فلورسانس آشکار شد (شکل 5A، B). سیگنال دهی ERK (شکل 5C) بیشتر از یافته های ما حمایت می کند که کاهش مسیر ERK توسط درمان متفورمین به افزایش ساقه کمک می کند.

سپس ما از راپامایسین، یک مهارکننده معروف مسیر mTOR که می‌تواند اتوفاژی را فعال کند، استفاده کردیم و اثرات آن را روی چربی‌زایی و بیان ژن ساقه ارزیابی کردیم [19]. لیزات سلولی سلول های ASC تیمار شده با راپامایسین جمع آوری و با آنتی بادی های فسفریله-p70S6 کیناز، کل p70S6 کیناز و آنتی بادی -اکتین بررسی شدند. ما مشاهده کردیم که راپامایسین بیان کیناز p70S6 فسفریله شده را کاهش داد (شکل 6A). برای تعیین نقش عملکردی در تمایز چربی‌زایی، ASCها با راپامایسین تیمار و با محیط چربی‌زایی القا شدند. پس از 14 روز، سلول ها با رنگ آمیزی Bodipy رنگ آمیزی شدند تا چربی زایی بررسی شود. مشاهده کردیم که درمان راپامایسین به طور قابل توجهی تمایز چربی زایی را کاهش داد (شکل 6B، C). در مرحله بعد، ما اثر مسدود کردن انتقال سیگنال mTOR را بر روی ساقه ASC ها تجزیه و تحلیل کردیم. برای این منظور، ASC ها با راپامایسین درمان شدند و از PCR بلادرنگ برای اندازه گیری بیان رونوشت های مربوط به ساقه استفاده شد. ما مشاهده کردیم که راپامایسین به طور قابل توجهی بیان مارکرهای مربوط به ساقه را افزایش داد (شکل 6D). نتیجه می گیریم که مهار هر دو مسیر ERK و mTOR به کاهش تمایز سلول های چربی و افزایش ساقه در سلول های ASC انسان کمک می کند.

در مرحله بعد، ما آزمایش کردیم که آیا می‌توانیم اثرات تقویت‌کننده ساقه درمان متفورمین را بر روی سلول‌های ASC 2Dcultured در یک مدل کشت بافت چربی کامل‌تر و قابل ترجمه در داخل بدن بازتولید کنیم. برای این کار، پروتکل کشت بافت چربی منتشر شده توسط هارمز و همکاران 30] را با استفاده از صافی‌های سلولی به جای درج‌های transwell اصلاح کردیم تا قطعات بافت چربی در محیط غوطه‌ور نگه داشته شوند (شکل 7A). پس از کشت قطعات 3-5 میلی‌متری بافت چربی انسان با یا بدون متفورمین به مدت 5 روز، بخش عروقی استرومایی (SVF) را با هضم کلاژناز قطعات بافت چربی جدا کردیم و بیان ژن‌های مرتبط با ساقه را تجزیه و تحلیل کردیم. داده‌های Real-time PCR نشان داد که SVF از بافت چربی تیمار شده با متفورمین افزایش قابل توجهی در بیان نشانگرهای ساقه مانند BMP7، DLK1، MYC1، DPP4، OCT3/4، Sox2، Nanog، KLF4، PDGFR، و Wnt2 نشان داد (شکل 7B). ).

4. بحث

سلول‌های بنیادی چربی (ASCs) بافت چربی را از طریق خود نوسازی و تمایز بازسازی می‌کنند و در نتیجه سلول‌های بنیادی بافت را حفظ می‌کنند. با این حال، افزایش سن و چاقی با از دست دادن خواص ساقه در ASCs مرتبط است. متفورمین یک داروی ضد دیابت است و به عنوان یک عامل ضد پیری نتایج امیدوارکننده ای از خود نشان داده است. ما بر تجزیه و تحلیل اثر متفورمین بر روی ساقه سلول‌های ASC و درک مکانیسم زمینه‌ای تمرکز کردیم، با هدف ایجاد متفورمین به عنوان یک عامل بالقوه برای حفظ ساقه در ASCها با افزایش سن. برای ترجمه آسان‌تر نتایج خود به افراد انسانی، از یک مدل کشت سلولی دو بعدی از ASCهای انسانی استفاده کردیم و از روش کشت بافت چربی انسانی برای شبیه‌سازی محیط بافت پیچیده‌تر استفاده کردیم. ما از بافت چربی زیر جلدی به عنوان منبع بافت برای مطالعات خود استفاده کردیم. با استفاده از این سلول‌ها و روش‌های کشت بافت متنوع، ما تأثیر درمان با متفورمین را بر روی ساقه سلول‌های ASC بررسی کردیم.

چاقی باعث تغییر در سینتیک تمایز ASC می شود که باعث کاهش تجمع سلول های بنیادی می شود. نتایج ما نشان داد که در مقایسه با ASC های درمان نشده، درمان با متفورمین میزان چربی زایی را به روشی وابسته به دوز کاهش می دهد. این مشاهدات با گزارش‌های قبلی مطابقت دارد که نشان می‌داد متفورمین باعث مهار چربی‌زایی در سلول‌های بنیادی چربی، سلول‌های استرومایی مغز استخوان، سلول‌های بنیادی لیگامان پریودنتال و رده‌های سلولی 3T3 می‌شود [34-37]. سرعت تکثیر سلول های بنیادی نقش مهمی در حفظ مخزن سلول های بنیادی، ساقه و قابلیت خود تجدیدی ایفا می کند. ما مشاهده کردیم که متفورمین تکثیر ASCها را بدون ایجاد هیچ گونه اثر سیتوتوکسیک بر ASCها مهار می کند، که با سایر مطالعات منتشر شده روی سلول های بنیادی مشتق از چربی موش [28]، سلول های استرومایی و فیبروبلاست ها مطابقت دارد [38،39].سیستانچ بخریک مطالعه اخیر با استفاده از سلول های بنیادی مشتق شده از چربی از اسب، اثر تکثیری متفورمین را نشان داد [27]. محتمل ترین توضیح برای این مشاهدات متناقض، تفاوت در گونه های اهداکننده و محل آناتومیکی برداشت سلول است، زیرا ASCهای اسب از دم برداشت شدند. آگنیشکا اسمیزک و همکاران مشاهده کرد که متفورمین از تکثیر سلولی جلوگیری می کند و با افزایش دوز (5 و 10 میلی مولار) در سلول های استرومایی مشتق از مغز استخوان موش و رده سلولی فیبروبلاست جنینی Balb/3T3 باعث مرگ سلولی می شود [40]. علاوه بر این، متفورمین از تکثیر سلول های ماهواره ای جدا شده از عضلات موش جلوگیری می کند |41. Min-lung Park و همکاران با حمایت از مشاهدات ما. گزارش داد که متفورمین با کاهش سطح بیان IL-1، IL{13}} و TGF- خواص ضد التهابی ASCهای انسانی را بهبود می بخشد. متفورمین همچنین بقای ASCهای پیوندی را افزایش می دهد و از مرگ سلولی آپوپتوز محافظت می کند [42]. این نتایج نشان دهنده اثرات متفاوت درمان با متفورمین بر روی زنده ماندن سلول های مشتق شده از گونه های مختلف است و اینکه ASCهای انسانی در برابر اثرات سیتوتوکسیک بالقوه درمان با متفورمین مقاوم هستند.

تمایز ASCها به سلول‌های چربی با نیازهای انرژی و نرخ‌های متابولیک بالاتر همراه است که منجر به فعالیت میتوکندری و تولید ROS می‌شود. ROS نقش مهمی در حفظ سکون و ساقه در سلول‌های بنیادی بالغ دارد، زیرا سطوح بالاتر ROS سلول‌ها را به سمت تمایز و در نهایت پیری سلول‌های بنیادی و مرگ سلولی سوق می‌دهد [43]. ما مشاهده کردیم که متفورمین به طور قابل توجهی پتانسیل غشای میتوکندری و تولید گونه های اکسیژن فعال را کاهش می دهد. مطابق با داده‌های ما، مطالعات قبلی همچنین گزارش دادند که متفورمین استرس اکسیداتیو را کاهش می‌دهد و بیان آنتی‌اکسیدانی را در فیبروبلاست‌های جنینی موش [44]، ASCs موش [38] و سلول‌های اندوتلیال آئورت انسان [45] بهبود می‌بخشد. علاوه بر این، در توافق با مطالعه ما، Chien-Hung Lin و همکاران، گزارش دادند که متفورمین با کاهش استرس اکسیداتیو در سلول های بنیادی عصبی انسان به عنوان یک عامل محافظت کننده عصبی عمل می کند [46]. چندین مطالعه دیگر تایید می‌کنند که متفورمین با کاهش استرس اکسیداتیو و افزایش بیان آنزیم آنتی‌اکسیدانی مانند سوپراکسید دیسموتاز در سلول‌های ASC موش، میوبلاست‌های C2C12 موش و سلول‌های پیش ساز اندوتلیال انسان در گردش عمل می‌کند [38،47،48]. علاوه بر این، مطالعه آلخاندرو مارتین-مونتالوو و همکاران. از مشاهدات ما حمایت می کند و نشان می دهد که متفورمین به طور قابل توجهی کمپلکس میتوکندری را مهار می کند و تنفس میتوکندریایی را در موش ها مهار می کند [49] اثرات متفورمین بر کاهش تولید گونه های فعال اکسیژن احتمالاً با افزایش گلوتاتیون کاهش یافته [50] در مکانیزمی که شامل Redox می شود واسطه می شود. فاکتور رونویسی حساس Nrf2 [51].

نشان داده شده است که متفورمین با کاهش متابولیسم مورد نیاز برای تکثیر و تمایز، حالت سکون سلول های ماهواره ای را تقویت می کند. مطالعات مختلف همچنین تایید می‌کنند که متفورمین به شدت باعث تقویت بنیادی و جوان‌سازی سلول‌های بنیادی می‌شود [23،39،41،49،52،53]. همچنین شناخته شده است که به طور قابل توجهی سطح بیان نشانگرهای سلول های بنیادی را بهبود می بخشد و افزایش می دهد. از آنجایی که مشاهده کردیم که متفورمین با مهار استرس اکسیداتیو و فعالیت میتوکندریایی، تکثیر و چربی زایی را مهار می کند، به دنبال این بودیم که آیا متفورمین ساقه را در ASCs یا در مدل کشت بافت چربی در شرایط آزمایشگاهی بهبود می بخشد یا خیر. بر این اساس، مشاهده کردیم که متفورمین به طور قابل‌توجهی بیان نشانگر مرتبط با ساقه را در مدل‌های کشت بافت دوبعدی ASCculture و بافت چربی بهبود می‌بخشد. . استفاده از کشت بافت چربی کامل فرصتی منحصر به فرد برای شبیه‌سازی ریزمحیط بافت انسانی در داخل بدن است، جایی که سلول‌ها مانند معماری طبیعی خود جهت‌گیری می‌کنند و پشتیبانی تعاملی از انواع سلول‌های مختلف بافته شده در ماتریکس بافت دارند. تا جایی که ما می دانیم، مطالعه ما برای اولین بار اثر تقویت کننده ساقه درمان متفورمین را بر ASCهای انسانی، هم در کشت بافت چربی دو بعدی و هم در کل بافت چربی نشان می دهد. ما نتایج خود را نشان می‌دهد که نشان‌دهنده افزایش امضای ژن‌های بنیادی در ASCهای جدا شده از قطعات بافت چربی تحت درمان با متفورمین است، به عنوان حمایت از تحقیقات بیشتر در مورد استفاده از متفورمین به عنوان درمانی برای کند کردن روند پیری و جوان‌سازی بافت‌های چربی پیر.

هدف مکانیکی راپامایسین (mTOR) نقش کلیدی در تکثیر و تمایز سلول های بنیادی ایفا می کند. تعدیل فعالیت mTOR با دستکاری ژنتیکی، مداخله درمانی یا تغییرات مرتبط با سبک زندگی باعث افزایش ساقه و طول عمر می شود [19،20]. از آنجایی که مشاهده کردیم که متفورمین باعث مهار چربی زایی می شود، اثر متفورمین را بر سیگنال دهی mTOR آزمایش کردیم. جالب توجه است، نتایج نشان داد که متفورمین سطوح فسفوریلاسیون PS70S6 کیناز را که یک مولکول سیگنال‌دهنده کلیدی در پایین دست mTOR و گزارش‌دهنده فعالیت مسیر mTOR است، کاهش می‌دهد. مطالعات قبلی همچنین نشان می‌دهد که متفورمین با مهار مسیر سیگنالینگ mTOR در فیبروبلاست‌های جنینی موش (MEF)، سلول‌های بنیادی مزانشیمی موش C3H10T1/2 و پیش‌آدیپوسیت‌های 3T{11}L1 [34]، آدیپوژنز را سرکوب می‌کند. هدف مکانیکی راپامایسین از دو کمپلکس mTORCl و mTORC2 تشکیل شده است و سیگنال دهی نقش مهمی در چربی زایی دارد. نشان داده شده است که مهار سیگنال دهی mTORC1 با راپامایسین از طریق کاهش فسفوریلاسیون PS6kinase در پره‌آدیپوسیت‌های 3T{18}L1، باعث ایجاد چربی‌زایی می‌شود. این مطالعات همچنین نشان داد که مهار سیگنال دهی mTOR با کاهش سطح بیان نشانگرهای اصل و نسب چربی مانند PPARgamma، CEBPI، CEBP1، و آدیپونکتین [{21}}] باعث مهار چربی زایی می شود. علاوه بر این، سیگنال دهی mTOR توسط فسفوریلاسیون S6 کیناز انجام می شود. نشان داده شد که کاهش S6 کیناز در برابر چاقی و افزایش وزن در شرایط رژیم غذایی پرچرب به دلیل اختلال در چربی زایی مقاوم است [57]. ما مشاهده خود را از کاهش فعالیت mTOR به واسطه متفورمین به عنوان واسطه احتمالی افزایش ساقه و کاهش تمایز ASCها با استفاده از راپامایسین تأیید کردیم، که به طور خاص فعالیت مسیر mTOR را مسدود می‌کند.

علاوه بر mTOR، مسیر سیگنالینگ ERK نقش مهمی در تکثیر و چربی زایی دارد. Xiaomin Ning و همکاران، در انتشارات خود، معتقدند که چربی زایی توسط سیگنال دهی ERK فعال می شود [58]. از آنجایی که مشاهده کردیم که متفورمین باعث مهار چربی زایی و تکثیر می شود، تصمیم گرفتیم اثر متفورمین را بر سیگنال دهی ERK بررسی کنیم. مطابق با گزارش‌های قبلی، نتایج ما همچنین نشان می‌دهد که متفورمین ممکن است از طریق سرکوب سیگنال‌دهی ERK با افزایش بیان ژن مرتبط با ساقه، ادیپوژنز را مهار کند. سیگنال‌دهی mTOR برای تکثیر و تمایز سلولی لازم است و تنظیم‌کننده منفی اتوفاژی است [{2 }}]. با این حال، از دست دادن اتوفاژی با از دست دادن ساقه مرتبط است، اگرچه درمان متفورمین بیان ژن مربوط به ساقه را از طریق فعال کردن بیان نشانگر مربوط به اتوفاژی مانند LC3Il بهبود بخشید. بنابراین، نتایج ما نشان می‌دهد که متفورمین با بهبود ساقه در ASC انسان یا مدل‌های کشت بافت چربی انسان از طریق فعال‌سازی اتوفاژی و مهار مسیرهای سیگنال‌دهی mTOR، باعث اختلال در ایجاد چربی می‌شود. مطالعات آتی in vivo بر روی حیوانات و انسان‌ها با تمرکز بر ارزیابی اثرات متفورمین بر روی بیولوژی ASCها، انطباق استفاده از متفورمین به عنوان یک عامل ضد پیری سلول‌های بنیادی را هدایت خواهد کرد.

این مقاله از Biomedicines 2021, 9, 1782 استخراج شده است. https://doi.org/10.3390/biomedicines9121782 https://www.mdpi.com/journal/biomedicines