فعالیت چند جهته باکوچیول در برابر مکانیسم های سلولی پیری صورت - شواهد تجربی برای رویکرد درمان جامع بخش 1

خلاصه

هدف، واقعگرایانه: پیری پوست یک فرآیند چند عاملی است که شامل تشکیل گونه‌های فعال اکسیژن، التهاب متوالی با کاهش زنده‌مانی سلول‌های اپیدرمی و پوستی و در نتیجه آسیب به ماتریکس خارج سلولی است. روش‌های مؤثر درمان درمو-زیبایی باید به طور ایده‌آل به این علائم با رویکردی جامع بپردازند. در اینجا، پروفایل فعالیت مربوطه باکوچیول، یک مروترپن مشتق شده از گیاه، را در مجموعه‌ای از مطالعات in vitro، ex vivo و in vivo تعیین کردیم و آن را با رتینول مقایسه کردیم، که در حال حاضر استاندارد طلایی در لوازم آرایشی ضد پیری موضعی محسوب می‌شود.

گلیکوزید سیستانچ همچنین می تواند فعالیت SOD را در بافت های قلب و کبد افزایش دهد و به طور قابل توجهی محتوای لیپوفوسین و MDA را در هر بافت کاهش دهد و به طور موثر رادیکال های مختلف اکسیژن فعال (OH-، H2O2 و غیره) را از بین ببرد و از آسیب DNA ناشی از آن محافظت کند. توسط رادیکال های OH گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچ دارای توانایی مهار قوی رادیکال های آزاد، توانایی کاهش بالاتری نسبت به ویتامین C، بهبود فعالیت SOD در سوسپانسیون اسپرم، کاهش محتوای MDA و اثر محافظتی خاصی بر عملکرد غشای اسپرم هستند. پلی ساکاریدهای سیستانچ می توانند فعالیت SOD و GSH-Px را در گلبول های قرمز و بافت ریه موش های آزمایشگاهی مسن ناشی از D-گالاکتوز افزایش دهند و همچنین محتوای MDA و کلاژن را در ریه و پلاسما کاهش دهند و محتوای الاستین را افزایش دهند. اثر پاک کنندگی خوب بر روی DPPH، طولانی شدن زمان هیپوکسی در موش های پیر، بهبود فعالیت SOD در سرم، و به تاخیر انداختن انحطاط فیزیولوژیکی ریه در موش های آزمایشگاهی پیر. و این پتانسیل را دارد که دارویی برای پیشگیری و درمان بیماری های پیری پوست باشد. در عین حال، اکیناکوزید موجود در سیستانچ توانایی قابل توجهی در از بین بردن رادیکال های آزاد DPPH دارد و می تواند گونه های فعال اکسیژن را از بین ببرد، از تخریب کلاژن ناشی از رادیکال های آزاد جلوگیری کند و همچنین اثر ترمیم خوبی بر آسیب آنیون رادیکال آزاد تیمین دارد.

روی Antioxidant Cistanche Tubulosa کلیک کنید

【برای اطلاعات بیشتر:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

مواد و روش هاظرفیت آنتی اکسیدانی و قدرت باکوچیول و رتینول به ترتیب با اندازه گیری کاهش 2،2'-دی فنیل-1-پیکریل هیدرازیل (DPPH) از طریق واپاشی جذب آن و طیف سنجی رزونانس اسپین الکترون آنالیز شد. اثرات بر پروستاگلاندین E2 (PGE2)، فاکتور مهار کننده مهاجرت ماکروفاژها (MIF)، فاکتور رشد فیبروبلاست 7 (FGF7)، کلاژن نوع I و VII (COL1A1، COL7A1)، سطوح فیبرونکتین (FN) و همچنین متابولیسم تترازولیوم محلول در آب 1 (WST{14}}) در فیبروبلاست های پوستی انسان تعیین شد. بازسازی اپیدرمی با استفاده از یک مدل التیام زخم در شرایط آزمایشگاهی ارزیابی شد. سطوح پروتئین FN پس از درمان با فرمولاسیون حاوی باکوچیول، رتینول یا وسیله نقلیه با استفاده از مایع تاول مکنده در شرایط خارج بدن مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. بهبود وضعیت پوست در داخل بدن در یک مطالعه مقایسه صورت تقسیم شده پس از استفاده از باکوچیول یا وسیله نقلیه تعیین شد.

نتایجبر خلاف رتینول، باکوچیول اثر آنتی اکسیدانی بالایی از خود نشان داد. سطوح PGE2 و MIF به طور قابل توجهی توسط باکوچیول و رتینول کاهش یافت. Bakuchiol اما نه رتینول به طور قابل توجهی سطح پروتئین FGF7 را افزایش داد. سطوح متابولیسم WST به طور قابل توجهی توسط باکوچیول و رتینول افزایش یافت. کاربرد باکوچیول و رتینول منجر به افزایش قابل توجه سطح پروتئین COL1A1، COL7A1 و FN شد. زخم های تکمیل شده با باکوچیول اما نه رتینول افزایش قابل توجهی در بازسازی اپیدرم نشان دادند. از نظر بالینی، نواحی تحت درمان با فرمول حاوی باکوچیول، افزایش معنی‌داری را در مقادیر پروتئین FN پس از یک هفته استفاده در مقایسه با مناطق درمان نشده و مناطق تحت درمان با وسیله نقلیه نشان دادند.

نتیجهاین داده ها شواهدی برای اثربخشی چند جهته باکوچیول در برابر علائم سلولی پیری پوست ارائه می دهند. مشخصات فعالیت آن دارای برخی ویژگی‌های مشترک با رتینول است، اما چندین اثر مثبت ناشناخته را در مطالعات ما نشان می‌دهد، یعنی تحریک جزء حیاتی ماتریکس خارج سلولی FN، و تسریع بازسازی اپیدرم و بهبود زخم.

کلید واژه ها

ضد پیری، باکوچیول، اثبات ادعای in vivo/ex vivo/in vitro، رتینول، فیزیولوژی پوست/ساختارها

معرفی

پوست سالخورده با چین و چروک، رنگدانه های ناهموار، زبری پوست و شلی مشخص می شود. این علائم بالینی نتیجه تغییرات ساختاری و متابولیکی ناشی از فرآیندهای پیری درونی و بیرونی است. پیری ذاتی به عواملی از جمله کوتاه شدن تلومر، التهاب مزمن، تک جهش های DNA میتوکندری و رادیکال های آزاد نسبت داده شده است [1]. پوست سالخورده بیشتر شامل کاهش سیستم های آنتی اکسیدانی آن می شود[2]. همچنین، سرعت تکثیر سلولی به دلیل فرآیند پیری بیولوژیکی کاهش می‌یابد که منجر به از دست دادن ساختار و عملکرد پوست می‌شود. پیری بیرونی در درجه اول توسط تابش اشعه ماوراء بنفش و تأثیرات محیطی ایجاد می شود. این توهین‌ها منجر به آسیب پوستی می‌شود که کاهش زمانی را تقویت می‌کند و پیری پوست را تسریع می‌کند. پوست انسان توانایی مقابله با شرایط التهابی را در طول پیری از دست می دهد و در نتیجه یک حالت پیش التهابی مزمن ایجاد می کند.

استفاده موضعی از رتینوئیدها مانند رتینوئیک اسید، رتینال یا رتینول به عنوان استاندارد طلایی بالینی برای درمان موثر ضد پیری در نظر گرفته می شود [3، 4]. مکانیسم های مولکولی رتینوئیدها به طور گسترده توضیح داده شده است [5-10]. رتینوئیدهای موضعی به طور موثر علائم قابل مشاهده پیری مانند چین و چروک، شلی یا زبری را کاهش می دهند [4، 11] و کاهش رنگدانه پوست آسیب دیده از نور از جمله livedo reticularis و lentigines اکتینیک [12]. با این حال، درمان موضعی با رتینوئیدها می تواند منجر به خشکی و تحریک پوست وابسته به غلظت شود [13]. از آنجایی که استفاده از رتینول در مقایسه با سایر رتینوئیدها مانند رتینوئیک اسید [6، 14] باعث ایجاد واکنش‌های جانبی جزئی می‌شود، این ماده به طور گسترده در درمان زیبایی پیری صورت استفاده می‌شود.

برخلاف رتینول که از سال 1984 در محصولات مراقبت از پوست استفاده شده است، باکوچیول اخیراً به عنوان یک ترکیب ضد پیری موضعی مورد توجه قرار گرفته است. باکوچیول یک مروترپن (شکل 1) است که از دانه های پسورالیا کوریلیفولیا به دست می آید. قرن ها در طب سنتی هند و چین استفاده می شود [16، 17] و به خوبی تحمل می شود [18]. باکوچیول برای نشان دادن عملکردهای شبه رتینول پیشنهاد شد، زیرا در یک مدل جایگزین پوست، هر دو ماده الگوهای بیان ژن مشابهی را در شرایط آزمایشگاهی نشان می‌دهند [19] و بهبود آسیب نوری پوستی در داخل بدن [20]. از این رو، آن را به عنوان یک آنالوگ رتینوئید عملکردی مشتق شده از گیاه نیز می نامند [21]. مطالعات بیشتر اثرات آنتی اکسیدانی [19، 22-24]، ضد التهابی [19، 25-27]، ضد باکتریایی [28] و همچنین اثرات ضد تکثیر و ضد توموری [29، 30] باکوچیول را نشان دادند.

برای بهبود موثر و به تاخیر انداختن فرآیندهای چند عاملی پیری پوست، مکانیسم‌های سلولی مختلف باید در یک رویکرد یکپارچه مورد توجه قرار گیرند. Bakuchiol به طور همزمان اهداف مختلف را تعدیل می کند و آن را به یک ترکیب امیدوارکننده در این زمینه تبدیل می کند. از آنجایی که استرس های اکسیداتیو و التهابی ارتباط نزدیکی با پیری پوست دارند، پیشگیری از آنها توسط باکوچیول ممکن است باعث بهبود وضعیت کلی پوست شود. با این حال، کیفیت شواهد علمی فعلی اخیراً مورد ارزیابی انتقادی قرار گرفته است [31]. در این زمینه، ما ظرفیت های (i) آنتی اکسیدانی و (ii) ضد التهابی باکوچیول و رتینول را تعیین کردیم و توانایی آنها را برای بهبود متابولیسم سلولی و سنتز فاکتور رشد 7 که به عنوان (iii) فعالیت سلول خلاصه می شود بررسی کردیم. ما بیشتر تجزیه و تحلیل کردیم که آیا باکوچیول و رتینول بر بیان برخی از اجزای (IV) ECM تأثیر می‌گذارند و (v) بازسازی اپیدرم و اپیتلیزه شدن مجدد را بهبود می‌بخشند. در نهایت، یک مطالعه in vivo برای تأیید ظرفیت ضد پیری باکوچیول در پوست انسان انجام شد.

مواد و روش ها

مواد تست

Bakuchiol از Sytheon Ltd (بونتون، نیوجرسی، ایالات متحده) به دست آمد. رتینول از سیگما آلدریچ (سنت لوئیس، میسوری، ایالات متحده) خریداری شد. برای آزمایش های کشت سلولی، هر دو ماده آزمایشی به تازگی در DMSO (Merck، دارمشتات، آلمان) رقیق شدند. برای محلول‌های استوک DMSO، غلظت استفاده‌شده از مواد آزمایشی 1000- برابر بالاترین غلظت اعمال‌شده در کشت سلولی بود که باعث ایجاد 0.1 درصد DMSO در محیط یا بافر شد. رقت های بیشتر با استفاده از محیط یا بافر با 0.1 درصد DMSO انجام شد. از این رو، تمامی آزمایشات کشت سلولی در حضور 1/6 درصد DMSO انجام شد. برای مطالعات in vivo، رتینول موضعی در همان وسیله نقلیه باکوچیول فرموله شد.

مطالعات آزمایشگاهی

تعیین ظرفیت آنتی اکسیدانی

باکوچیول، رتینول (هر دو در غلظت نهایی 100 میکرومولار استفاده می‌شوند)، یا ترولاکس با استاندارد بالا (مرک، غلظت نهایی 25 میکرومولار) در DMSO رقیق شدند. به طور خلاصه، 30 میکرولیتر از این ترکیبات ({3}}برابر غلظت بیشتر از غلظت نهایی آزمایش) به یک صفحه کف صاف 96- اضافه شد. پس از آن، 270 میکرولیتر 39 میکروگرم در میلی لیتر DPPH (Merck، رقیق شده در مخلوط آب/اتانول 1:1) به سرعت به هر چاه اضافه شد و غلظت نهایی 10 درصد DMSO را به دست آورد. به عنوان شاهد، محلول DPPH با DMSO فاقد مواد آزمایشی انکوبه شد. علاوه بر این، کنترل های خالی با انکوباسیون باکوچیول یا رتینول با آب/اتانول (1:1) یا فقط مخلوط آب/اتانول (1:1) حاوی 10 درصد DMSO در غیاب DPPH انجام شد. پس از 10، 30 و 60 دقیقه، جذب در 524 نانومتر با استفاده از یک میکروپلیت خوان چند حالته Spark (Tecan، Männedorf، سوئیس) اندازه گیری شد. سیگنال های کنترل های خالی کم شد.

تعیین قدرت آنتی اکسیدانی

HDFها در صفحات چاهک با 150 000 سلول/چاه در محیط 2 میلی لیتری حاوی 10 درصد سرم گوساله کاشته شدند و به مدت 24 ساعت انکوبه شدند. پس از آن، محیط قدیمی دور ریخته شد و سلول ها با محیطی حاوی 2 درصد سرم گوساله و باکوچیول یا رتینول در غلظت نهایی 10 میکرومولار تیمار شدند. HDFهای کنترل با 0.1 درصد DMSO فاقد باکوچیول یا رتینول تکمیل شدند. کنترل های خالی با انکوبه کردن یک محیط بدون سلول انجام شد. پس از 24 ساعت، محیط تهویه‌شده به ستون‌های چرخشی متمرکزکننده پروتئین Vivaspin (5000 MWCO؛ Sartorius، Göttingen، آلمان) منتقل شد و تقریباً 10-برابر تغلیظ شد. حجم تمام سوپرناتانت های محیط با اضافه کردن مجدد جریان از طریق یکسان شد. سطوح پروتئین FGF7 محیط مطبوع غلیظ با استفاده از کیت ELISA تجاری موجود و طبق دستورالعمل سازنده (Bio-Techne GmbH) تجزیه و تحلیل شد. اندازه‌گیری‌ها با استفاده از یک میکروپلیت‌خوان چند حالته Spark (Tecan) انجام شد. سیگنال‌های به‌دست‌آمده از کنترل‌های خالی کم شدند و سطوح پروتئین FGF7 به تعداد کل سلولی که با استفاده از شمارنده سلولی (Scepter، Merck) تعیین شد، نرمال شد.

تعیین متابولیسم WST{0}}

HDFها در صفحات چاهک با 3000 سلول در چاهک در محیط 100 میکرولیتری حاوی 10 درصد سرم گوساله کاشته شدند و به مدت 24 ساعت انکوبه شدند. محیط تخلیه شده دور انداخته شد و سلول ها با محیط 100 میکرولیتری حاوی رتینول یا باکوچیول در غلظت نهایی به ترتیب 1 میکرومولار یا 10 میکرومولار تیمار شدند. HDFهای کنترل با 0.1 درصد DMSO فاقد باکوچیول یا رتینول تکمیل شدند. به عنوان کنترل بیشتر، سلول ها با 10 درصد تریتون-X (Merck) تیمار شدند. کنترل های خالی با انکوبه کردن یک محیط بدون سلول انجام شد. پس از 72 ساعت، سلول ها با استفاده از معرف تکثیر سلولی موجود در بازار WST{13}} طبق دستورالعمل سازنده (Merck) رنگ آمیزی شدند. جذب با استفاده از میکروپلیت خوان Tecan infinity M200 (Tecan) در طول موج های 450 و 620 نانومتر اندازه گیری شد. تفاوت در این اندازه گیری ها برای تجزیه و تحلیل استفاده شد. سیگنال های کنترل های خالی کم شد.

تعیین سطح پروتئین COL1A1 و COL7A1

HDFها در {{{0}}صفحه چاهی با 10  000 سلول/ چاه در محیط 100 میکرولیتری حاوی 10 درصد سرم گوساله کاشته شدند و به مدت 24 ساعت انکوبه شدند. باکوچیول یا رتینول در محیط 100 میکرولیتری بدون سرم گوساله رقیق شد و به ترتیب در غلظت نهایی 1 میکرومولار یا 10 میکرومولار به محیط حاضر اضافه شد. کنترل با محیط کشت بدون سرم 100 میکرولیتر با غلظت 0.1 درصد DMSO مربوط به تیمار رتینول و باکوچیول تکمیل شد. به عنوان یک استاندارد بالا، 10 نانوگرم در میلی لیتر فاکتور رشد تبدیل کننده (TGF-) و 11 میکروگرم در میلی لیتر آسکوربات سدیم (هر دو مرک) استفاده شد. کنترل های خالی با انکوبه کردن یک محیط بدون سلول انجام شد. پس از 4 ساعت، سطوح پروتئین COL1A1 و COL7A1 محیط مطبوع با استفاده از کیت های ELISA موجود در بازار و طبق دستورالعمل های سازنده (Novus Biologicals، Littleton، کلرادو، ایالات متحده) تجزیه و تحلیل شد. اندازه‌گیری‌ها با استفاده از یک میکروپلیت‌خوان چند حالته Spark (Tecan) انجام شد. سیگنال های کنترل های خالی کم شد. سطوح پروتئین COL1A1 و COL7A1 به مقدار کل پروتئین لیزات سلولی که با استفاده از کیت سنجش اسید بیسینکونیک تجاری موجود (Thermo Fisher Scientific) مطابق دستورالعمل سازنده تعیین شد، نرمال شد. یک پیش نیاز برای استفاده از نتایج، واکنش مثبت سلول ها به TGF- و آسکوربات سدیم با استاندارد بالا بود.

برای تجزیه و تحلیل سطوح پروتئین COL7A1 پس از یک زمان انکوباسیون طولانی، HDFها در 96-صفحه‌های چاهی با 3000 سلول در چاهک در محیط 100 میکرولیتری حاوی 10 درصد سرم گوساله کاشته شدند. تمام تیمارها، کنترل‌ها و تجزیه و تحلیل‌ها همانطور که در بالا توضیح داده شد انجام شد با این تفاوت که باکوچیول و رتینول فقط در غلظت نهایی 10 میکرومولار استفاده شدند. به ویژه، پس از 72 یا 96 ساعت، سلول‌ها زمانی برداشت شدند که به subconfluence رسید.

تعیین سطح پروتئین FN

HDFها در صفحات چاهک با 10 000 سلول در چاهک در محیط 100 میکرولیتری حاوی 10 درصد سرم گوساله کاشته شدند و به مدت 24 ساعت انکوبه شدند. محیط قدیمی با محیطی حاوی 2 درصد سرم گوساله و باکوچیول یا رتینول در غلظت نهایی 10 میکرومولار جایگزین شد. شاهد با 0.1 درصد DMSO فاقد باکوچیول یا رتینول تکمیل شد. کنترل های خالی با انکوبه کردن یک محیط بدون سلول انجام شد. پس از 24 ساعت، سطوح پروتئین FN محیط شرطی شده با استفاده از کیت ELISA تجاری موجود و طبق دستورالعمل های سازنده (R&D Systems، Minneapolis، Minnesota، ایالات متحده) آنالیز شد. اندازه‌گیری‌ها با استفاده از یک میکروپلیت‌خوان چند حالته Spark (Tecan) انجام شد. سیگنال های کنترل های خالی کم شد. سطح پروتئین FN به مقدار کل پروتئین لیزات سلولی نرمال شد که همانطور که در بالا ذکر شد تعیین شد.

تعیین بازسازی اپیدرم در مدل التیام زخم در شرایط آزمایشگاهی

آزمایش ها همانطور که قبلا توضیح داده شد [34] انجام شد. برای درمان مدل‌های بهبود زخم، باکوچیول یا رتینول در DPBS رقیق شد و در غلظت نهایی 1{3}} 0 میکرومولار به ناحیه زخم (5 میکرولیتر در هر زخم) اضافه شد. زخم های مرجع با همان مقدار DPBS حاوی 0.1 درصد DMSO بدون باکوچیول یا رتینول تکمیل شدند. زخم های اضافی به عنوان کنترل بیشتر بدون درمان رها شدند. مدل های ترمیم زخم به مدت 43 ساعت در رطوبت 95 درصد، 5 درصد CO2 و 37 درجه انکوبه شدند. پس از آن، نمونه‌ها در ایزوپنتان که با نیتروژن مایع از قبل سرد شده بود، منجمد شدند و در دمای 80- درجه نگهداری شدند. اپیتلیال شدن مجدد در مقاطع کرایوستات رنگ آمیزی شده با هماتوکسیلین و ائوزین با اندازه گیری طول اپیدرم بازسازی شده با استفاده از میکروسکوپ Leica DMLS (10×)، دوربین Leica MC 170 HD CCD و نرم افزار Leica LAS V4.9 (Leica Microsystems, وتزلار، آلمان). کمی سازی به صورت کور انجام شد.

مطالعات In vivo I و II

برای هر دو مطالعه in vivo، توصیه‌های نسخه فعلی اعلامیه هلسینکی و دستورالعمل کنفرانس بین‌المللی هماهنگ‌سازی عملکرد بالینی خوب به‌عنوان قابل اجرا در یک مطالعه زیبایی مشاهده شد. پروتکل مطالعه I توسط کمیته مستقل اخلاق فرایبورگ (کد فکی 08/2610) تایید شد. در هر دو مطالعه، همه داوطلبان رضایت کتبی و آگاهانه ارائه کردند. آزمودنی ها دارای پوست سالم، متعلق به نوع پوست فیتزپاتریک از نوع I تا III بودند و شروع یا تغییر داروی هورمونی معیار خروج بود.

در طول یک دوره پیش‌تنظیمی 10-روزه و در کل دوره مطالعه، آزمودنی‌ها باید از قرار گرفتن در معرض UV در مناطق آزمایش خودداری کنند. فعالیت های ترویج عرق 24 ساعت قبل از ارزیابی های برنامه ریزی شده ممنوع بود.

یک محقق کاربرد صحیح فرمولاسیون را با استفاده از مقداری که با رژیم معمول مراقبت از پوست افراد مطابقت داشت نشان داد.

مطالعه I: تعیین سطح پروتئین FN در خارج از بدن

از 52 زن که در این مطالعه کنترل شده با وسیله نقلیه ثبت نام کردند، 33 نفر مطالعه را تکمیل کردند و داده های 31 نفر (30 تا 64 سال، میانگین سنی: 50.9 سال) در تجزیه و تحلیل داده ها گنجانده شد. ترک تحصیل به دلیل همه‌گیری SARS-CoV-2 و دلایل شخصی (13 نفر) و همچنین به دلیل واکنش‌های ناسازگاری (پنج مورد، ناشی از درمان با رتینول) رخ داد. واکنش‌های ناسازگاری با واسطه رتینول و همچنین مسائل نمونه‌برداری باعث شد تعداد متفاوتی از افراد مورد آزمایش برای هر شرایط آزمایش شوند (برای جزئیات به نتایج مراجعه کنید).

هفت روز قبل از ارزیابی های برنامه ریزی شده، استفاده از محصولات مراقبت از پوست، پاک کننده ها و صابون ها بر روی ساعد ممنوع بود. در روز اول مطالعه، چهار ناحیه آزمایش در قسمت داخلی ساعد ایجاد شد. در دو ناحیه آزمایش، دو فرمولاسیون ورم به ترتیب حاوی {{0}}}.5 درصد باکوچیول یا 0.15 درصد رتینول استفاده شد. در نظری که توسط کمیته علمی ایمنی مصرف کننده در سال 2016 منتشر شد، غلظت رتینول اعمال شده به عنوان یک درمان زیبایی در نظر گرفته شد [35]. در دو منطقه آزمایشی دیگر، از وسیله نقلیه مربوطه استفاده شد، یا منطقه بدون درمان رها شد. مکان یابی مکان های درمان تغییر کرد. پس از 4 هفته استفاده دو بار در روز از فرمول های آزمایش، داوطلبان به موسسه آزمایش بازگشتند. در هر ناحیه آزمایش، سه تاول مکش (قطر 7 میلی متر) همانطور که قبلاً توضیح داده شد تولید شد [36، 37]. به طور خلاصه، فنجان های تاول مکنده سفارشی بر روی نواحی آزمایش قرار داده شد و خلاء 550-850 میلی بار اعمال شد. پس از تقریباً 90 تا 150 دقیقه، زمانی که تاول‌های مکش تشکیل شدند، خلاء آزاد شد و مایع با استفاده از یک سوزن اندازه‌گیری از تاول آسپیره شد. مایعات بلافاصله در 80- درجه روی یخ خشک تا تجزیه و تحلیل منجمد شدند. سطح پروتئین FN در نمونه‌های مایع تاول مکنده با استفاده از کیت ELISA (سیستم‌های R&D) در دسترس تجاری اندازه‌گیری شد. اندازه‌گیری‌ها با استفاده از یک میکروپلیت‌خوان چند حالته Spark (Tecan) انجام شد. سطوح FN به سطح پروتئین کل نمونه های مایع تاول مکنده نرمال شد که به صورت فوق تعیین شد.

مطالعه دوم: تعیین in vivo بهبود وضعیت پوست

در مجموع، 43 داوطلب زن در این مطالعه مقایسه صورت تقسیم شده با کنترل وسیله نقلیه ثبت نام کردند. بر اساس ارزیابی های پزشکی، افراد دارای انواع پوست مختلط (پوست خشک، نرمال، چرب و مختلط) بودند. 34 نفر (39-66 سال، میانگین سنی: 56.2 سال) مطالعه را تکمیل کردند و در تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. ترک تحصیل به دلیل مشکلات فنی و عدم انطباق (هشت نفر)، و همچنین واکنش‌های ناسازگاری (یک موضوع، ناشی از درمان وسیله نقلیه و باکوچیول) بود.

دو هفته قبل از شروع مطالعه و در طول کل دوره مطالعه، داوطلبان موظف بودند از استفاده از محصولات خود برنزه کننده یا درمان های فشرده زیبایی صورت (مانند برداشتن لایه های سطحی پوست) خودداری کنند. در طول دوره آماده سازی 10-روزه و در طول مطالعه، از آزمودنی‌ها خواسته شد از انجام آرایش دائمی، درمان‌های مژه و ابرو، ماسک‌های چشم و چسب‌ها خودداری کنند. سه روز قبل از اولین ارزیابی، از افراد خواسته شد از استفاده از محصولات مراقبت از صورت خودداری کنند. در شب قبل از درجه بندی برنامه ریزی شده، از آزمودنی ها خواسته شد که استفاده از لوازم آرایشی تزئینی را متوقف کنند.

در 7 روز اول مرحله آماده‌سازی 10-روزه، آزمودنی‌ها یک شیشه کرم حاوی کرم وسیله مورد مطالعه (بدون هیچ گونه اطلاعاتی در مورد محتوا) دریافت کردند و آن را دو بار در روز به کل صورت خود می‌مالیدند. در ابتدا، داوطلبان یک خود درجه‌بندی را انجام دادند. آنها به طور خاص ظاهر کلی پوست صورت خود را با مشاهده شادابی و درخشندگی آن و همچنین هرگونه نشانه ای از پیری پوست ارزیابی کردند. بدین ترتیب یک مقیاس آنالوگ بصری از 1 (بسیار خسته، پیر) تا 10 (بسیار شاداب، بدون علائم پیری پوست) اعمال شد. سپس آزمودنی ها دو شیشه خامه کور شده حاوی وروم (خودرو حاوی 0.5 درصد باکوچیول) یا وسیله نقلیه را بدون هیچ گونه مشخصاتی در مورد محتوا دریافت کردند. در طول 12 هفته مطالعه، یک طرف صورت دو بار در روز با ورم و طرف دیگر صورت دو بار در روز با وسیله نقلیه درمان می‌شد. تخصیص تیمارها به محل های آزمایش تغییر یافت. پس از 12 هفته استفاده منظم، داوطلبان مجدداً خود درجه بندی را همانطور که در بالا ذکر شد انجام دادند.

تحلیل آماری

تجزیه و تحلیل های آماری با استفاده از Microsoft Excel برای Office 365 (شرکت مایکروسافت، ردموند، واشنگتن، ایالات متحده)، بسته نرم افزاری SAS برای Windows V9.4 (SAS Institute GmbH، هایدلبرگ، آلمان)، و GraphPad Prism V8 (نرم افزار GraphPad، سن دیگو) انجام شد. ، کالیفرنیا، ایالات متحده).

توزیع نرمال داده ها با استفاده از آزمون Shapiro-Wilk ارزیابی شد. در صورت تایید توزیع نرمال، آنالیز واریانس اندازه گیری مکرر (RM-ANOVA) با مقایسه زوجی تعقیبی انجام شد. اگر فرضیه نرمال بودن رد شد، رتبه‌های تبدیل شده با بلوم داده‌های اصلی با استفاده از RM-ANOVA با مقایسه زوجی پس‌هک ارزیابی شدند، یا داده‌های اصلی با استفاده از آزمون رتبه علامت ویلکاکسون ارزیابی شدند. همه آزمون های آماری دو طرفه در سطح معنی داری آلفا=0.05 بود.

نتایج

مطالعات آزمایشگاهی

تعیین اثرات آنتی اکسیدانی

برای تجزیه و تحلیل (i) اثرات آنتی اکسیدانی باکوچیول و رتینول، ما دو سنجش مختلف را با استفاده از DPPH به عنوان یک مولکول آشکارساز انجام دادیم.

ظرفیت آنتی اکسیدانی

ظرفیت آنتی اکسیدانی با اندازه گیری کاهش DPPH از طریق واپاشی جذب آن تعیین شد. Trolox با استاندارد بالا ظرفیت آنتی اکسیدانی بالایی را نسبت به کنترل نشان داد (p{1}}.0000 برای تمام نقاط زمانی مشخص شده) که اندازه گیری مناسب را تأیید می کند (شکل 2a). در مورد شاهد، میزان جذب در نمونه‌های تیمار شده با باکوچیول نیز در تمام نقاط زمانی مورد بررسی به طور قابل‌توجهی کاهش یافت (10 دقیقه: p=0.0003، 30 و 60 دقیقه: p{10}}.{11}} ) افزایش ظرفیت آنتی اکسیدانی را نشان می دهد. در مقابل، رتینول ظرفیت آنتی اکسیدانی قابل توجهی را در مقایسه با شاهد نشان نداد.

【برای اطلاعات بیشتر:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】