نانوالیاف اسید اولئانولیک استرس اکسیداتیو ناشی از ذرات معلق را در کراتینوسیت ها کاهش می دهد

لطفاً برای اطلاعات بیشتر با oscar.xiao@wecistanche.com تماس بگیرید

خلاصه:ذرات معلق در هوا (PM) سنگ معدنی از شاخص های آلودگی هوا هستند و همچنین عامل اصلی ایجاد استرس اکسیداتیو در پوست هستند. اسید اولئانولیک (OA)، یک ترکیب ترپنوئیدی طبیعی، به طور موثری از پیری پوست ناشی از PM جلوگیری می کند؛ با این حال، OA حلالیت آب و جذب پوستی ضعیفی دارد که کاربرد آن را در داروها و لوازم آرایشی محدود می کند. هدف از این مطالعه تهیه نانوالیاف اسید اولئانولیک (OAnf) و ارزیابی اثرات OA و OAnf در کراتینوسیت‌های تیمار شده با PM بود. نتایج نشان داد که (OA محلول در دی متیل سولفوکسید (DMSO) تولید بیش از حد گونه‌های اکسیژن فعال ناشی از PM، فعال‌سازی پروتئین کیناز فعال شده با استرس/Jun-amino-terminal kinase (SAPK/JNK) و عبارات التهابی و پوستی را کاهش می‌دهد. پروتئین‌های مرتبط با پیری. بعلاوه، فرآیند نانوالیاف OA به طور موثر حلالیت آب OA را بیش از 99 برابر بهبود000-از طریق تغییر خواص فیزیکوشیمیایی آن، از جمله افزایش سطح، کاهش اندازه ذرات، تبدیل آمورف، و تشکیل پیوند هیدروژنی با مواد کمکی. توانایی نفوذ پوست OAnf به طور مداوم بیش از 10- برابر OA بیشتر بود. علاوه بر این، هنگامی که در PBS حل شد، OAnf فعالیت های آنتی اکسیدانی، ضد التهابی و ضد پیری پوست در PM را نشان داد. در نتیجه، یافته های ما نشان می دهد که OAnf می تواند یک فرمول آنتی اکسیدانی موضعی برای کاهش مشکلات پوستی ناشی از PM باشد.

کلید واژه ها:ذرات معلق؛ اسید اولئانولیک؛ نانوفیبر؛ آنتی اکسیدان؛ ضد التهاب؛ ضد پیری

1. مقدمه

آلودگی هوا اکنون یک مشکل بهداشت عمومی در سراسر جهان است. با پیشرفت تکنولوژی، مواد مضر مختلفی از جمله گازها، مواد شیمیایی، آلاینده های بیولوژیکی و ذرات در اتمسفر انباشته شده و زندگی و سلامت افراد را به شدت تحت تاثیر قرار می دهد. ذرات معلق (PM)، نشانگر آلاینده های هوا، ترکیبی از ترکیبات آلی مختلف، مواد مشتق شده بیولوژیکی و هسته های کربن ذرات معلق است[1]. PM با استنشاق وارد ریه ها می شود و وارد گردش خون می شود و باعث ایجاد خطرات سلامت سیستمیک مانند التهاب اندام ها و بیماری های قلبی عروقی و تنفسی می شود [2،3]. علاوه بر این، PM می تواند از سد پوستی عبور کرده و در فولیکول های مو تجمع یابد و حتی با تماس مکرر به داخل درم نفوذ کند. بنابراین، قرار گرفتن بیش از حد پوست در معرض PM با پیری خارجی پوست، تغییرات رنگدانه، درماتیت آتوپیک، آکنه و پسوریازیس همراه است [2،4]. تماس طولانی‌مدت با PM باعث تولید بیش از حد گونه‌های فعال اکسیژن (ROS) در کراتینوسیت‌ها می‌شود، که باعث ایجاد چندین مسیر سیگنال‌دهی از جمله مسیر آپوپتوز، مسیرهای پروتئین کیناز فعال شده با میتوژن (MAPKs) و التهاب می‌شود. افزایش بیان سیکلاکسیژناز (COX{10}})، فاکتور نکروز تومور (TNF-a) و اینترلوکین-1 (IL{14}}) معمولاً در کراتینوسیت‌هایی که در معرض PM.علاوه بر این، PM همچنین متالوپروتئینازهای ماتریکس (MMPs) را فعال می کند و منجر به از بین رفتن خاصیت ارتجاعی پوست و پیری می شود [5].

لطفا برای دانستن بیشتر اینجا را کلیک کنید

محصولات طبیعی مدت‌هاست که به‌عنوان مواد موثره آرایشی و بهداشتی مورد استفاده قرار گرفته‌اند. اسید اولئانولیک (OA, 3 -hydroxyolean-12-en-28-oicacid)، یک ترکیب تری ترپنوئیدی پنج حلقه ای، به طور گسترده در گیاهان، میوه ها و سبزیجات وجود دارد [6]. استئوآرتریت به دلیل اثرات محافظتی کبدی مانند کاهش آسیب حاد کبدی ناشی از مواد شیمیایی و فیبروز/سیروز در بیماری های مزمن کبدی شناخته شده است [6،7]. علاوه بر این، مطالعات قبلی نشان داده است که OA دارای اثرات آنتی اکسیدانی، ضد سرطانی، ضد التهابی، ضد دیابتی و ضد میکروبی است [8] Kim et al. نشان داد که OA می تواند بیان سیتوکین پیش التهابی (TNF-a، IL{18}}) و پروتئین پیری پوست (MP{19}}) را در کراتینوسیت های تحت درمان با PM کاهش دهد [9]. با این حال، خواص فیزیکوشیمیایی OA حل شدن آن را در آب دشوار می کند، که کاربرد آن را در داروها، مواد غذایی و لوازم آرایشی محدود می کند.

طرح های فرمولاسیون دارورسانی مانند نانوحامل های مبتنی بر پلیمر، لی. پوزوم ها و نانوالیاف معمولاً برای بهبود خواص فیزیکوشیمیایی مواد فعال استفاده می شوند. کپسوله کردن مواد فعال با مواد کمکی در این فرمولاسیون های دارویی می تواند حلالیت در آب و جذب پوست را افزایش دهد و سمیت و تحریک بالقوه پوست را کاهش دهد. در میان آنها، نانوالیاف یک فرمول در اندازه نانو نوظهور، با مساحت سطح بزرگ، چگالی کم و حجم منافذ بالا هستند و در حال حاضر به طور گسترده در زیست پزشکی استفاده می شوند که می تواند حجم داروهای خوراکی را کاهش دهد، پایداری مواد فعال را افزایش دهد، کنترل کند. آزادسازی، بهبود فراهمی زیستی و ساخت بافت های مصنوعی [10]. الکتروریسی فناوری رایجی است که برای تولید نانوالیاف استفاده می شود و با تولید انبوه بسیار سازگار است [1]. بنابراین، تهیه نانوالیاف با استفاده از فرآیند الکتروریسی می‌تواند به طور همزمان سود زیستی را بهبود بخشد. کارایی و راندمان تولید یک ماده فعال با حلالیت ضعیف در آب. پلی وینیل پیرولیدون (PVPK90) و 2-هیدروکسی پروپیل- -سیکلودکسترین (HPBCD) ترکیبات مورد تایید FDA برای حل کردن و تحویل مواد دارویی فعال آبگریز در انسان هستند.کلسترول سیستانچمطالعات قبلی نشان داد که نانوالیاف تهیه شده با HPBCD و PVPK90 به طور قابل توجهی حلالیت آب و نفوذ رسوراترول [12] و روغن plai [13] را در آب بهبود می بخشد. بنابراین، هدف از این مطالعه استفاده از PVPK90 و HPBCD به عنوان حامل‌های تحویل برای تهیه نانوالیاف اسید اولئانولیک (OAnf) و ارزیابی اثرات OA و OAnf در کراتینوسیت‌های تیمار شده با PM بود.

سیستانچ می تواند ضد پیری باشد

هدف از مطالعه حاضر بررسی اثر بیولوژیکی OA محلول در DMSO در آسیب کراتینوسیت های ناشی از PM بود. برای غلبه بر حلالیت ضعیف OA در آب، ما از PVPK90 و HBCD به عنوان حامل های تحویل برای تهیه نانوالیاف اسید اولئانولیک (OAnf) توسط یک فرآیند الکتروریسی استفاده کردیم و سپس تغییرات خواص فیزیکوشیمیایی بین OA خام و OAnf را تعیین کردیم تا بهبود حلالیت در آب را روشن کنیم. نفوذ پوست برای مقایسه اثر بیولوژیکی پس از فرآیند نانوالیاف OA، یک مدل آسیب کراتینوسیت های ناشی از PM برای ارزیابی فعالیت آنتی اکسیدانی، ضد التهابی و ضد پیری OAnf و OA استفاده شد.

2. مواد و روشها

2.1. مواد

هیدرات اسید اولئانولیک (OA) از شرکت صنایع شیمیایی توکیو، با مسئولیت محدود خریداری شد. (توکیو ژاپن). پلی وینیل پیرولیدون (Luviskol" K90 Powder، PVP) از شرکت تولیدی دارویی وی مینگ، با مسئولیت محدود تایپه، تایوان خریداری شد. هیدروکسی پروپیل-بتا سیکلودکسترین (HPBCD) از Zibo Qianhui (MZibool, Zibool, China) به دست آمد. سولفوکسید (DMSO) از Aencore Chemical (Surrey Hills، استرالیا) خریداری شد. همه مواد شیمیایی یا معرف‌های کشت سلولی دارای درجه بیولوژیکی بودند و سایر مواد شیمیایی تعیین‌کننده فیزیکوشیمیایی از درجه کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) بودند.

2.2. سنجش حیات سلولی

تعیین زنده ماندن سلولی یک ماده فعال روش رایجی است که برای انتخاب محدوده غلظت مناسب برای مواد فعال برای ارزیابی فعالیت بیولوژیکی آنها استفاده می شود. کراتینوسیت HaCaT از Istituto Zooprofilattico Sperimen-tale della Lombardia edell'Emilia Romagna (برشا، ایتالیا) خریداری شد. سلول های HaCaT در DMEM (آزمایشگاه های Himedia، بمبئی، هند) حاوی 1{18} درصد سرم جنین گاو (Hazelton Product, Denver, PA, USA) با 1 درصد پنی سیلین-استرپتومایسین (صنایع بیولوژیکی، کانکتیکات، NE) کشت شدند. ، ایالات متحده آمریکا) و سلول های HaCaT در انکوباتور (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) با شرایط 37 درجه با 5 درصد COz انکوبه شدند. برای تهیه نمونه های آزمایشی، OA و OAnf به ترتیب در DMSO و PBS حل شدند و سپس هر نمونه در DMEM بدون سرم جنین گاوی برای تعیین زنده ماندن سلولی رقیق شد. سلول های HaCaT در صفحات چاهک با تراکم 1 × 104 سلول / 100 میکرولیتر / چاه به مدت 24 ساعت کاشته شدند. سپس محیط کشت برداشته شد و سلول ها با غلظت های مختلف OA و OAnf از 5 تا 80 میکرومولار در DMEM بدون سرم به مدت 24 ساعت تیمار شدند. در زمان سنجش، محیط تیمار برداشته شد و 150 میکرولیتر از محلول MTT 5/0 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر به هر چاهک اضافه شد. پس از 3 ساعت انکوباسیون، محلول MTT برداشته شد و بلورهای بنفش فرمازان هر چاهک در 100 uL DMSO حل شد. سپس جذب در 550 نانومتر از هر چاه با استفاده از یک میکروپلیت اسپکتروفتومتر (BioTek uQuant, Winoski, VT, USA) اندازه‌گیری شد. بقای سلول با فرمول زیر محاسبه شد:

2.3. تعیین محتوای گونه های اکسیژن فعال (ROS).

PM (مواد مرجع استاندارد، SRMB1649b) از موسسه ملی استاندارد و فناوری خریداری شد. این محصول در سال 1976 و 197 در واشنگتن دی سی ساخت جمع آوری شد. در مجموع 10 میلی گرم بر میلی لیتر PM در PBS تعلیق شد و سپس قبل از استفاده به مدت 10 دقیقه تحت سونیکاسیون قرار گرفت. در مجموع 1 × 10 به اضافه کراتینوسیت HaCaT در صفحات چاهک به مدت 24 ساعت در شرایط 37 درجه و CO2 5 درصد کشت داده شد. سلول ها به ترتیب با غلظت های مختلف OA در DMSO، OA در PBS و OAnf در PBS به مدت 24 ساعت تیمار شدند. سپس با 20 میکرومولار دی کلرودی‌هیدروفلورسئین دی استات (DCFH-DA؛ سیگما، توکیو، ژاپن) به مدت 30 دقیقه انکوبه شدند. سپس 50 میکروگرم بر سانتی‌متر مربع در هر چاهک اضافه شد و به مدت 1 ساعت انکوبه شد. پس از آن، سلول‌ها شسته شدند. دو بار با PBS، و شدت فلورسانس هر نمونه با استفاده از صفحه خوان فلورسنت (تحریک: 485 نانومتر، انتشار: 528 نانومتر) (BioTek, Winooski, VI, USA) آنالیز شد.از معادله زیر برای محاسبه درصد بازداری استفاده شد تولید ROS:

2.4. تجزیه و تحلیل وسترن بلات

در مجموع 4 × 105 کراتینوسیت HaCaT به مدت 24 ساعت در صفحات {2} چاهک کشت داده شد. سپس سلول ها با OA یا OAnf در محیط بدون سرم به مدت 24 ساعت و سپس با افزودن PM تحت درمان قرار گرفتند. پس از زمان‌های مختلف، سلول‌ها با بافر RIPAlysis (Merck Millipore, Burlington, MA, USA) لیز شدند و سپس به مدت 10 دقیقه با سرعت 12، {7}} دور در دقیقه سانتریفیوژ شدند. کیت سنجش پروتئین BCA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) برای تعیین غلظت پروتئین استفاده شد. سپس پروتئین ها با الکتروفورز ژل دودسیل سولفات سدیم- پلی آکریل آمید (SDS-PAGE) جدا شدند و سپس روی ممبران های پلی وینیلیدین دی فلوراید (PVDF) (Merck Millipore) لکه شدند. غشاها به مدت 1 ساعت مسدود شدند و با تریس-بافر سالین شسته شدند. TBS) با 1 درصد توئین{16}}. غشاها با آنتی بادی های اولیه در درجه 4 یک شبه انکوبه شدند. آنتی بادی های اولیه مورد استفاده در این مطالعه شامل سیکلواکسیژناز{18}} (COX{19}})، ماتریکس متالوپروتئیناز-9 (MMP{21}})، بازدارنده بافتی متالوپروتئیناز-1 (TIMP{24}})، پروتئین کیناز فعال شده با استرس/Jun-amino-terminal kinase (SAPK/JNK) (فناوری سیگنالینگ سلولی، Danvers، MA، ایالات متحده)، GAPDH (سانتا کروز بی-تکنولوژی، دالاس، TX، ایالات متحده آمریکا)، متالوپروتئیناز ماتریکس-1 (MMP{30}}) (Proteintech Group, Rosemont, IL, USA)، p380، پروتئین کینازهای تنظیم شده خارج سلولی (ERK) و فاکتور هسته ای کاپا-زنجیره سبک- تقویت کننده سلول های B فعال (NF-kB) (Merck Millipore, Burlington, MA, USA). سپس، آنتی‌بادی‌های ثانویه به مدت 1 ساعت در دمای اتاق اضافه شدند و با معرف‌های شیمیایی-مینسانس تقویت‌شده (ECL؛ Thermo Fisher Scientific) واکنش دادند. آنتی بادی علیه GAPDH به عنوان کنترل داخلی استفاده شد. بیان هر پروتئین با استفاده از تصویرگر لمسی (e-BLOT؛ شانگهای، چین) تجزیه و تحلیل شد و بیان با استفاده از ImageJ اندازه‌گیری شد.

2.5. تهیه نانوالیاف اسید اولئانولیک (OAnf)

OAnf ها با نسبت های مختلف OA:PVP:HBPCD (1:8:5، 1:8:10، و 1:8:20) الکتروریسی شدند. محلول الکتروریسی شده به شرح زیر تهیه شد: 25 میلی گرم OA در 5 میلی لیتر متانول حل شد و HBCD به آن اضافه شد و با یک همزن آهنربایی هم زده شد تا محلولی شفاف به دست آید. سپس بلافاصله PVPK90 اضافه شد و مخلوط به مدت 1 ساعت هم زده شد.عوارض جانبی cistanche deserticolaنانوالیاف با استفاده از تجهیزات الکتروریسی FES-COS (Falco Tech Enterprise Co.، تایپه، تایوان) تحت شرایط زیر بافته شدند: یک سرنگ 1{3}} میلی لیتری با سوزن با قطر داخلی 0. 22 میلی متر برای الکتروریسی استفاده شد. سرعت جریان به 0.2 میلی لیتر در ساعت تنظیم شد. ولتاژ اعمال شده روی 12 کیلو ولت تنظیم شد. فاصله نوک جمع کن 10 سانتی متر بود. پس از فرآیند الکتروریسی، نانوالیاف با استفاده از فویل آلومینیومی جمع آوری شدند. نانوالیاف تازه سنتز شده در یک کیسه پلاستیکی مهر و موم شده قرار داده شد و در یک ظرف ضد رطوبت نگهداری شد.

2.6. کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) آنالیز اسید اولئانولیک

سیستم تجزیه و تحلیل HPLC (LaChrom Elite L{{{0}}، هیتاچی، توکیو، ژاپن) شامل یک پمپ L-2130، یک نمونه‌بر خودکار L-2200 و یک L{{3 }} آشکارساز ماوراء بنفش مرئی (UV-vis). ستون آنالیز یک ستون Mightysil RP-18 GP بود (250×4.6 mm ID., 5 um). فاز متحرک از متانول و محلول 0.1 درصد اسید استیک یخبندان در یک نسبت ثابت (95:5؛ w/v) تشکیل شده است. سرعت جریان فاز متحرک 1 میلی لیتر در دقیقه بود و طول موج تشخیص آشکارساز UV روی 215 نانومتر تنظیم شد. اوج جذب اولئانولیک اسید در 7.5 دقیقه ظاهر شد. منحنی کالیبراسیون اسید اولئانولیک یک خطی خوب (r =0.999) در محدوده 0.{22}} ug/mL نشان داد.

2.7. مورفولوژی، قطر فیبر، و اندازه ذرات اندازه گیری OAnf

نمونه های مختلف نانوالیاف با پلاتین با پوشش یونی (E{{0}}، HITACH، توکیو، ژاپن) اندود شدند. این شرایط 120 ثانیه بعد روی 10 میلی آمپر تنظیم شد. مورفولوژی و شکل هر نمونه توسط میکروسکوپ الکترونی روبشی (Hitachi S4700 Hitachi، توکیو، ژاپن) مشاهده شد. قطر هر نمونه توسط نرم افزار image j محاسبه شد. یک آنالایزر Zetasizer 3000HS (Malvern، Worcestershire، UK) برای اندازه گیری اندازه ذرات OAnf استفاده شد. اندازه ذرات OA و OAnf به ترتیب در غلظت 1 میلی گرم بر میلی لیتر و 1/0 میلی گرم در میلی لیتر اندازه گیری شد.دوز cistanche redditعلاوه بر این، ما همچنین یکنواختی مورفولوژی OAnf را پس از انحلال در آب با استفاده از میکروسکوپ الکترونی عبوری (TEM,JEM{{0}}EXII instrument,JEOL Co., Tokyo, Japan) مشاهده کردیم. نمونه آزمایش بر روی 1 ug/mL OA در آب دیونیزه تنظیم شد و سپس در مش مسی چکانده شد و سپس 0.5 درصد (w/v) اسید فسفو تنگستیک بلافاصله چکه شد. پس از خشک شدن، هر نمونه برای مشاهده روی TEM قرار داده شد.

2.8. بارگذاری دارو و کارایی کپسوله سازی OAnf

تعیین کارآیی بارگذاری دارو و کپسولاسیون سیستم تحویل برای ارزیابی عملکرد فرآیند دارویی بسیار مهم است. بارگذاری دارو به عنوان درصد محتوای تعیین شده و محتوای نظری OA موجود در نانوالیاف OA محاسبه شد. برای تعیین بارگذاری دارو، 100 میکرولیتر از هر نمونه به 900 میکرولیتر متانول اضافه شد، و غلظت OA در جایی بود که CoA غلظت OA از OAnf است، WoA مقدار نظری OA اضافه شده، VoAnf حجم محلول OAnf است.

راندمان کپسوله سازی نشان می دهد که آیا نانوالیاف با موفقیت ترکیبات فعال را محصور کرده اند یا خیر. نمونه‌های OAnf در آب دیونیزه حل شده و به دستگاه‌های فیلتر گریز از مرکز (Microcon YM-10, Millipore, Billerica, MA, USA) اضافه شدند و سپس با سرعت 12,{3}} دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شدند. سانتریفیوژ یخچالی (سانتریفیوژ 5430R، اپندورف، هامبورگ، آلمان). قسمت محصور شده در لوله بالایی نگه داشته شد و قسمت بدون کپسول از لوله پایینی به دلیل تفاوت وزن مولکولی جمع آوری شد. مقدار OA بدون کپسول با روش HPLC فوق تشخیص داده شد. برای محاسبه راندمان کپسولاسیون از معادله زیر استفاده شده است:

که در آن AoA مقدار نظری OA (به دست آمده از شرایط تغذیه) است که در نانوالیاف گنجانده شده است، و OA بدون حبس مقدار OA بدون کپسول است.

2.9. حلالیت آبی OAnf

OA خام (1 میلی گرم) و فرمولاسیون با نسبت های مختلف OAnf (حاوی معادل 1 میلی گرم اسید اولئانولیک) به ترتیب در 1 میلی لیتر آب دیونیزه حل شد و سپس تحت دستگاه اولتراسونیکاتور (برانسون 551{5}}، امرسون الکتریک، سنت لوئیس، MO، ایالات متحده) به مدت 20 دقیقه. هر نمونه از طریق یک غشای 0.45 میکرونی (Pall Corporation، واشنگتن، نیویورک، ایالات متحده آمریکا) فیلتر شد و {7}} برابر رقیق شد. محلول های رقیق شده با HPLC آنالیز شدند و منحنی استاندارد برای تعیین مقدار اسید اولئانولیک برای مقایسه حلالیت آبی آنها استفاده شد.

2.10. تعیین تبدیل کریستالی به آمورف

پراش اشعه ایکس (زیمنس D500، کارلسروهه، آلمان) برای تجزیه و تحلیل فرم کریستالی OA، مواد کمکی و OAnf استفاده شد. تجزیه و تحلیل با استفاده از تابش Cu-Ka فیلتر شده با نیکل، با استفاده از ولتاژ 40 کیلو ولت و جریان 25 میلی آمپر انجام شد. سرعت اسکن 1 درجه در دقیقه و دامنه زوایای اسکن شده از 5 درجه تا 50 درجه بود. 2.11. تعامل بین مولکولی بین OA و مواد جانبی

طیف‌سنجی فروسرخ تبدیل فوریه (FTIR) و رزونانس مغناطیسی 1HNuclear (1H NMR) معمولاً برای تأیید برهم‌کنش بین مولکولی بین مواد فعال و مواد کمکی استفاده می‌شوند. فرمولاسیون اولئانولیک اسید، PVP، HBCD و نسبت های مختلف OAnf به ترتیب با برومید پتاسیم (KBr) در نسبت حجمی 1:9 با استفاده از ملات مخلوط و به صورت قرص فشرده شدند. سپس هر نمونه توسط اسپکتروفتومتر FTIR (Perkin-Elmer 200 spectrophotometer, Perkin-Elmer, Norwalk, CT USA) آنالیز شد. محدوده اسکن نیز 400-4000 سانتی متر-4 بود. هر نمونه در 0.8 میلی لیتر DMSO-dg 99.8 درصد (Merck, St.Louis, MO, USA) حل شد و توسط طیف سنج JEOL Alpha 400 (Nihon Denshi Co., Tokyo, Japan) آنالیز شد.

2.12. نفوذ Ex Vivo به پوست اولئانولیک اسید و نانوالیاف آن

این آزمایش بر اساس پروتکل استاندارد انجمن لوازم آرایشی و بهداشتی و عطرسازی اروپایی (COLIPA) انجام شد. سیستم سلولی انتشار فرانتس را می توان به ظروف شیشه ای محفظه اهدا کننده فوقانی و محفظه گیرنده پایین تقسیم کرد. در مجموع 1.5 میلی لیتر محلول بافر شامل 0.14MNaCl، 2mMK-HPO4، 0.4mM KH2PO4 (pH7.4) در محفظه گیرنده قرار داده شد و با یک نوار مغناطیسی در دور 600 در تمام طول دقیقه به هم زده شد. آزمایش. پوست پهلوی تازه یک خوک از یک قصاب محلی در بازار به دست آمد و در طول دوره آزمایش در یخچال نگهداری شد. هر نمونه پوست به قطعات 2 × 2 سانتی متر بریده شد و بین دو اتاق قرار داده شد و لایه شاخی به سمت بالا قرار گرفت. سلول انتشار فرانتس در 32 درجه با یک حمام آب در گردش نگهداری شد.فواید عصاره سیستانچسپس، 200 میکرولیتر از 1 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر OA یا OAnf به مدت 1،2 یا 4 ساعت به محفظه اهداکننده اضافه شد. پس از آن، پوست خوک از سلول انتشار فرانتس برداشته شد و لایه شاخی با نوار نواری 15 بار به دست آمد. هر نمونه پوست باقيمانده تا 95 درجه با پد حرارتي حرارت داده شد و اپيدرم و درم با استفاده از چاقوي جراحي جدا شدند. هر نمونه به مدت 1 ساعت در متانول غوطه ور و تحت سونیکاسیون قرار گرفت تا OA استخراج شود و محتوای اسید اولئانولیک در هر نمونه با روش HPLC تعیین شد. 2.13. تحلیل آماری

تمام داده ها به صورت میانگین ± انحراف معیار (SD) نمایش داده شد. معنی داری آماری بین گروه های مختلف با استفاده از آنالیز واریانس (ANOVA) با آزمون تعقیبی توکی مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.<0.05 indicated="" statistical="" significance.="">

3.1. اسید اولئانولیک می تواند التهاب، پیری و مسیرهای سیگنال دهی ROS/MAPK را در آسیب کراتینوسیت های ناشی از PM سرکوب کند.

برای یافتن محدوده غلظت مناسب برای ارزیابی فعالیت بیولوژیکی، سمیت سیتوتوکسیک OA محلول در DMSO در سلول‌های کراتینوسیت HaCaT انسانی با استفاده از روش MTT تعیین شد. همانطور که در شکل 1A نشان داده شده است، 40 و 80 میکرومولار OA با 32 تا 16 درصد زنده ماندن سلول همراه است. OA در کمتر از 20 میکرومولار همچنان دارای نرخ بقای سلولی بیش از 85 درصد بود. این نتایج نشان داد که OA در غلظت 5-20 میکرومولار هیچ اثر سیتوتوکسیک روی کراتینوسیت‌های HaCaT انسانی ندارد (شکل 1A). بر این اساس، OA در غلظت 5-20 uM مورد بررسی قرار گرفت تا فعالیت آنتی اکسیدانی و ضد آلودگی آن در آسیب کراتینوسیت های ناشی از PM بررسی شود. اخیراً، بسیاری از مطالعات نشان داده اند که PM یک آلاینده معمولی هوا است که باعث تولید بیش از حد ROS و آسیب متعاقب آن به سیستم پوست از طریق یک سری استرس اکسیداتیو، از جمله پراکسیداسیون لیپیدی، کربونیلاسیون پروتئین، و جهش DNA می شود [14-16] همانطور که در نشان داده شده است. شکل 1B، تیمار PM به طور قابل توجهی تولید ROS را در مقایسه با گروه درمان نشده افزایش داد (ص<0.05).in contrast,="" pretreatment="" with="" oa="" effectively="" decreased="" pm-induced="" ros="" overproduction="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.05).there-fore, these="" results="" suggested="" that="" oa="" possessed="" antioxidant="" activity="" to="" prevent="" pm-induced="" oxidative="" stress="" by="" reducing="" the="" ros="" overproduction.="" in="" addition,="" ros="" overproduction="" after="" pm="" exposure="" can="" activate="" the="" phosphorylation="" of="" mapks="" proteins,="" including="" p-erk,="" p-p38,="" and="" p-jnk,="" triggering="" the="" protein="" expressions="" of="" inflammation="" and="" aging[17,18]the="" present="" study="" also="" found="" that="" pm="" treatment="" can="" increase="" the="" expression="" of="" inflam-matory="" proteins="" (cox-2="" and="" nf-kb),skin="" aging-related="" proteins="" (mp-1,mmp-9="" and="" timp-1),and="" phosphorylation="" of="" erk,jnk,="" and="" p38=""><0.05). our="" present="" results="" also="" demonstrated="" that="" oa="" at="" 10="" and="" 20="" um="" significantly="" inhibited="" the="" protein="" expression="" of="" nf-kb="" and="" cox-2="" when="" compared="" with="" the="" pm="" treatment="" group="" (p=""><0.05)(figure 1c)furthermore,="" oa="" pretreatment="" also="" effectively="" reversed="" pm-induced="" alteration="" on="" mmp-1="" and="" timp-1="" expression=""><0.05) but="" had="" no="" effect="" on="" mmp-9(figure="" 1d).="" we="" further="" de-termined="" the="" effects="" of="" oa="" treatment="" on="" phosphorylation="" of="" mapks="" during="" pm="" exposure,="" and="" our="" results="" indicated="" that="" oa="" could="" inhibit="" the="" phosphorylation="" of="" jnk=""><05), but="" had="" no="" effect="" on="" erk="" or="" p38="" (figure="" 1e).="" according="" to="" the="" above="" results,="" when="" dissolved="" in="" dmso,="" oa="" displayed="" good="" skin-protective="" activity="" and="" could="" ameliorate="" pm-induced="" ros="" overproduction,="" jnk="" activation,="" and="" inflammatory="" and="" skin-aging="" protein="" expression="" in="">

3.2. نانوالیاف اسید اولئانولیک با بهبود خواص فیزیکوشیمیایی، حلالیت آب و نفوذ پوست اولئانولیک اسید خام را افزایش داد.

3.2.1. مورفولوژی سطح اسید اولئانولیک و نانوالیاف آن

تحت مشاهدات SEM، ظاهر HPBCD یک ماده کمکی کروی و متخلخل را نشان داد و اندازه آن حدود 20 تا 50 میکرومتر بود (شکل 2A). اولئانولیک اسید خام یک پودر دانه ای گرد نامنظم با اندازه 3-60 um است. شکل 2D-F میانگین قطر فیبر نسبت های مختلف وزنی اسید اولئانولیک را نشان می دهد: HPBCD:PVPK90 به ترتیب 19.53±174.83 نانومتر، 18.93±219.23 نانومتر و 403.17±32.99 نانومتر بود. :20) منجر به این شد که OAnf قطر فیبر بیشتری داشته باشد (جدول 1).

3.2.2. اندازه ذرات و مورفولوژی OAnf بازسازی شده در آب

به منظور مشاهده شکل ذرات و اندازه ذرات OAnf (OA:PVP:HPBCD, 1:8:20) محلول در آب، تصویر OAnf در زیر میکروسکوپ الکترونی عبوری (TEM) نشان داده شد. که ذرات اولئانولیک اسید کروی بوده و به طور یکنواخت در آب پراکنده شده اند (شکل 3). اندازه ذرات نیز توسط یک تحلیلگر اندازه ذرات لیزری تایید شد (جدول 2). اندازه ذرات OA و OAnf به ترتیب 5079.50±384.87 نانومتر و 302.37±11.91 نانومتر بود. شاخص های چند پراکندگی (PDI) OA و OAnf به ترتیب 0.21±1.63 و 0.02±0.32 بود. این نتایج نشان می دهد که فرآیند الکتروریسی به طور موثر اندازه ذرات OA را با توزیع یکنواخت ذرات کاهش می دهد و منجر به افزایش سطح سطح می شود.

3.2.3. بارگذاری دارو، کارایی کپسولاسیون و حلالیت در آب نانوالیاف اسید اولئانولیک

همانطور که در جدول 3 نشان داده شده است، درصد بارگیری OA در نسبت های مختلف مواد کمکی به ترتیب 72.36±10.45 درصد، 3.62±84.23 درصد و 4.82±98.19 درصد بوده است. نتایج نشان داد که نسبت بالاتر HBCD اثر بارگذاری دارویی بهتری را نشان می‌دهد. راندمان کپسوله‌سازی همه فرمول‌ها بیش از 95 درصد بود که نشان می‌دهد PVPK90 و HPBCD به طور مؤثر OA را محصور می‌کنند. علاوه بر این، حلالیت در آب OAnf با نسبت‌های مختلف مواد کمکی 296.14±57.75 ug/mL/3957778 ± 296.14 ug/mL/mL395. و به ترتیب 998.7±58.32 میکروگرم در میلی لیتر بود.سیستانچ چنگیز خاناین نتایج نشان داد که افزایش HBCD در فرمول به طور چشمگیری حلالیت آب OA خام را افزایش داد. در مقابل، حلالیت آب OA خام به دلیل پایین بودن حد تشخیص ({0}.01 میکروگرم در میلی لیتر) در روش HPLC نمی تواند تعیین شود. این نتیجه نشان داد که OAnf 1:8:20 در مقایسه با OA خام بیش از 1000-برابر حلالیت آب بهبود یافته است. بنابراین، در مطالعات زیر، 18:20 OAnf برای تعیین فعالیت بیولوژیکی در مدل آسیب کراتینوسیت های ناشی از PM استفاده شد.

3.2.4. تغییر کریستالی اسید اولئانولیک و نانوالیاف آن

الگوهای پراش پرتو ایکس (XRD) OA خام، مواد افزودنی و نانوالیاف آن در شکل 4 نشان داده شده است. OA خام یک ترکیب کریستالی بود. از سوی دیگر، الگوهای پراش PVPK90 و HPBCD هیچ پیک پراش مشخصه مشخصی ندارند. علاوه بر این، برای OA خام تحت پردازش الکتروریسی، تمام پیک های پراش مشخصه OA خام به طور کامل ناپدید شدند، که نشان می دهد ماهیت خام OA از کریستالی به آمورف تبدیل شد (شکل 4). با توجه به این نتایج، می‌توان نتیجه گرفت که اسید اولئانولیک خام پس از فرآیند نانوالیاف با موفقیت در HBCD محصور شد و توسط PVPK90 محصور شد.

3.2.5. تشکیل پیوند هیدروژنی بین مولکولی بین اسید اولئانولیک و مواد جانبی

برهمکنش بین مولکولی OA خام و HPBCD با PVPK90 با طیف‌سنجی FTIR تعیین شد و نتایج در شکل 5 نشان داده شده است. 3}} (——ارتعاش کششی OH)، 1696 سانتی‌متر-1 (——C= ارتعاش کششی O) و ۱۴۶۲ سانتی‌متر لیتر (—ارتعاش کششی CHz) (شکل 5). هنگامی که OA، PVPK90، و HBCD برای تشکیل نانوالیاف کمپلکس شدند، جذب این گروه‌های عاملی شیمیایی به وضوح به جذب کمتری تغییر یافت. این یافته ها نشان دهنده برهمکنش های پیوند هیدروژنی بین مولکولی بین OA و HBCD با PVPK90 بود. علاوه بر این، مطالعه حاضر همچنین از H NMR برای تایید برهمکنش بین مولکولی OA و مواد کمکی استفاده کرد. طیف 1HNMR OA خام (شکل 6C) سیگنال کربوکسیل را در ppm 812 (H28)، پروتون های دوگانه در ppm 85.15 (H12)، سیگنال پروتون هیدروکسی را در ppm 83.38 (H3) و پروتون های متیل (81 ppm) نشان داد. طیف HNMR نانوالیاف OA نشان داد که سیگنال کربوکسیل OA ناپدید شد و تغییرات شیمیایی پروتون‌های پیوند دوگانه، هیدروکسی و متیل به وضوح به سمت بالا منتقل شدند (شکل 6). این نتایج شکل‌گیری پیوندهای هیدروژنی بین مولکولی را بین OA و مواد کمکی نشان داد که از کپسوله‌سازی موفقیت‌آمیز OA توسط HBCD و PVPK90 پشتیبانی می‌کند.

3.2.6. نفوذ در محیط آزمایشگاهی اسید اولئانولیک خام و نانوالیاف آن به پوست

فعالیت بیولوژیکی یک فرمول موضعی بیشتر به جذب پوست بستگی دارد. نفوذ پوست OA خام و نانوالیاف آن در پوست خوک ex vivo تعیین شد. همانطور که در شکل 7 نشان داده شده است، مقدار کمتری از OA.<5 μg/cm2）was="" detected="" in="" the="" epidermis="" and="" dermis="" after="" 1,2,="" and="" 4h="" of="" topical="" administration,="" and="" these="" results="" also="" indicated="" that="" raw="" oa="" could="" not="" penetrate="" the="" skin="" in="" a="" time-dependent="" manner.="" the="" result="" showed="" that="" the="" skin="" absorption="" of="" raw="" oa="" was="" extremely="" poor.="" by="" contrast,="" the="" nanofiber="" formulation="" dramatically="" increased="" the="" content="" of="" oa="" in="" the="" epidermis="" and="" dermis="" with="" 19.63="" ug/cm2,31.56="" ug/cm2,and="" 45.27="" ug/cm2="" after="" 1,2,and="" 4h="" of="" topical="" administration,="" respectively.="" these="" results="" demonstrated="" that="" the="" oanf="" formulation="" significantly="" increased="" skin="" absorption="" when="" compared="" with="" the="" raw="" oa="" topical="" administration=""><>

3.3. نانوالیاف اسید اولئانولیک در غلظت های غیر سیتوتوکسیک با بهبود فعالیت آنتی اکسیدانی، ضد التهابی و ضد پیری، فعالیت ضد آلاینده بهتری داشتند.

مشابه OA حل شده در DMSO، OAnf حل شده در PBS در 40 uM و 80 uM زنده ماندن سلول های HaCaT را به ترتیب به 14.1 درصد و 5.6 درصد کاهش داد (شکل 8A). بنابراین، 10 میکرومولار OAnf برای فعالیت آنتی اکسیدانی و ضد آلودگی بیشتر مورد بررسی قرار گرفت تا بفهمیم که آیا OA و نانوالیاف آن توانایی مهار تولید بیش از حد ROS ناشی از PM را دارند یا خیر. شکل 8B نشان می دهد که OAnf در 10 میکرومولار به طور قابل توجهی تولید بیش از حد ROS ناشی از PM را کاهش می دهد. ما همچنین نرخ مهار تولید ROS را برای مقایسه فعالیت آنتی اکسیدانی بین OA محلول در PBS و OAnf محاسبه کردیم. ده میکرومولار OA در PBS منجر به مهار 28.3 درصدی تولید ROS شد و OAnf به مهار 97.6 درصدی دست یافت (شکل 8B). این نتایج نشان داد که OAnf فعالیت آنتی اکسیدانی بهتری نسبت به OA در PBS در استرس اکسیداتیو ناشی از PM در کراتینوسیت ها دارد. علاوه بر این، ما همچنین فعالیت ضد التهابی آسیب کراتینوسیت های ناشی از PM را مقایسه کردیم. پیش تیمار با OA خام در PBS نتوانست بیان پروتئین ناشی از PM NF-KB و COX را مهار کند، در مقابل، پیش تیمار با OAnf در PBS به طور قابل توجهی بیان NF را کاهش داد. kB و COX{23}} در سلول‌های تیمار شده با PM (ص<0.05).these results="" supported="" that="" oanf="" in="" pbs="" had="" better="" anti-inflammatory="" activity="" than="" raw="" oa="" in="" pbs="" (figure="" 8c).then,="" we="" also="" compared="" their="" anti-skin-aging="" activity.="" pretreatment="" with="" oa="" in="" pbs="" had="" no="" effects="" on="" pm-induced="" mmp-1="" or="" timp-1="" alteration.="" however,="" oanf="" in="" pbs="" could="" reduce="" the="" expression="" of="" mmp-1="" and="" rescue="" the="" expression="" of="" timp-1="" when="" compared="" with="" the="" pm-induced="" keratinocytes="" damage="" group=""><0.05)(figure 8d).these="" findings="" indicated="" that="" oanf="" possessed="" better="" anti-skin-aging="" properties="" than="" raw="" oa="" in="" pbs.="" finally,="" we="" analyzed="" the="" phosphorylation="" of="" erk,="" jnk,="" and="" p38="" to="" confirm="" the="" regulation="" of="" mapks="" signaling.="" figure="" 8e="" showed="" that="" the="" treatment="" of="" raw="" oa="" in="" pbs="" could="" not="" downregulate="" pm-induced="" phosphorylation="" of="" these="" mapks="" protein.="" however,="" pretreatment="" with="" oanf="" only="" reduced="" pm-induced="" phospho-jnk="" (p-jnk)="" expression="" but="" had="" no="" effect="" on="" p-erk="" and="" p-p38="" (figure="" 8e).the="" percentage="" changes="" of="" protein="" expression="" induced="" by="" oa="" in="" dmso,="" oa="" in="" pbs,and="" oanf="" in="" pbs="" are="" summarized="" at="" table="" 4.="" oanf="" in="" pbs="" markedly="" reversed="" pm-induced="" protein="" alterations,="" which="" was="" barely="" observed="" in="" oa="" in="" the="" pbs="" group.="" in="" addition,="" the="" effects="" of="" oanf="" in="" pbs="" were="" comparable="" to="" the="" equivalent="" amount="" of="" oa="" in="" dmso,="" which="" indicated="" that="" the="" electrospinning="" process="" increased="" the="" water="" solubility="" of="" oa="" without="" altering="" its="" bioactivities.="" accordingly,="" oanf="" effectively="" inhibited="" the="" expressions="" of="" inflammatory="" proteins="" and="" skin-aging="" proteins="" and="" downregulated="" the="" mapks="" signaling="" pathway="" in="" pm-induced="" keratinocytes="">

4. بحث

اخیراً پایش غلظت ذرات معلق در هوا به یکی از مهمترین شاخص های مورد استفاده برای ارزیابی شاخص کیفیت هوا تبدیل شده است. پوست بزرگترین اندام ایمنی انسان است و قرار گرفتن بیش از حد در معرض PM می تواند به عملکرد پوست آسیب برساند. جین و همکاران نشان داد که انواع مختلف PM نه تنها در لایه شاخی بیرونی اپیدرم باقی می‌ماند، بلکه به لایه‌های خارخیز و فولیکول‌های مو نیز نفوذ می‌کند [14]. اگر برای مدت طولانی در معرض PIA بیش از حد قرار بگیرید، باعث اختلال در عملکرد سد پوستی می شود و با بسیاری از بیماری های پوستی مانند درماتیت آتوپیک، پسوریازیس، آکنه و پیری همراه است [19،20]. دیجخوف و همکاران به وضوح نشان داده شده است که PM می تواند تشکیل ROS اگزوژن و درون زا را تحریک کند، که منجر به پیشرفت استرس اکسیداتیو، از جمله پراکسیداسیون لیپیدی، اکسیداسیون پروتئین، اختلال عملکرد میتوکندری، آسیب DNA، فعال شدن التهاب و تسریع روند پیری می شود [15]. بر این اساس، مقابله با تولید بیش از حد ROS ناشی از PM یک استراتژی خوب و اولین انتخاب برای جلوگیری از آسیب استرس اکسیداتیو در طول مواجهه بیش از حد PM است. مطالعات قبلی همچنین نشان داده اند که درمان های آنتی اکسیدانی مانند دیفلورتوهیدروکسی کارمالول [21]، دیکول [22]، عصاره Opuntia humifusa [23] و عصاره گیلاس ترش [24] می توانند به طور موثری اختلال عملکرد کراتینوسیت های ناشی از PM را کاهش دهند. نتایج ما همچنین نشان داد که OA در DMSO می تواند ROS ناشی از PM را بیش از تولید کاهش دهد و از آسیب ناشی از PM جلوگیری کند. علاوه بر این، NF-kB یک فاکتور رونویسی فراگیر و القایی است که بیان پروتئین‌های پیش‌التهابی مانند COX را تنظیم می‌کند که نقش مهمی در بسیاری از بیماری‌های پوستی دارد. نتایج ما اشاره کرد که OA می‌تواند فعال‌سازی NF-kB ناشی از PM را کاهش دهد تا از بیان پروتئین التهابی COX جلوگیری کند. و منجر به مقررات رونویسی نمایندگان مجلس می شود[18]. در این مطالعه، OA قادر به سرکوب بیان پروتئین پیرکننده پوست MP{21}} و افزایش بیان پروتئین ضد پیری پوست TIMP-1 برای جلوگیری از پیری کراتینوسیت‌های ناشی از PM بود. نتایج ما همچنین نشان داد که استئوآرتریت به طور موثر فسفوریلاسیون JNK را مهار می‌کند، بنابراین، OA ممکن است با کاهش مسیر سیگنالینگ ROS/JNK در آسیب کراتینوسیت‌های ناشی از PM، التهاب و پیری پوست ناشی از PM را مهار کند.

تا آنجا که ما می دانیم، حلالیت ضعیف ترکیبات فعال در آب با فراهمی زیستی کم همراه است که کاربرد آنها را در صنایع پزشکی، غذایی و آرایشی محدود می کند [26،27]. به خوبی شناخته شده است که ترکیبات با حلالیت آب ضعیف دارای چندین ویژگی فیزیکوشیمیایی مشترک هستند، مانند اندازه ذرات بسیار بزرگ، سطح پایین تر، ساختار چربی دوست و شکل کریستالی [28]. نتایج ما همچنین نشان داد که OA خام دارای این ویژگی‌های فیزیکوشیمیایی است، از جمله اندازه ذرات بزرگ (5{10}}79.50±384.87 نانومتر)، پودر دانه‌ای نامنظم 3-60 um با سطح پایین‌تر (شکل 2C)، و یک فرم کریستالی آشکار این نتایج نشان داد که حلالیت OA در آب کمتر از 0.01 میکروگرم در میلی لیتر است و می تواند به عنوان یک ترکیب فعال غیر محلول عملاً طبق طبقه بندی حلالیت در آب ایالات متحده Phar-macopeia (USP) طبقه بندی شود [29]. اگر این ایرادات قابل حل نباشد، فعالیت OA بر روی پوست بسیار محدود می شود. مطالعه حاضر با موفقیت از PVPK90 و HBCD به عنوان حامل با استفاده از فرآیند الکتروریسی برای تهیه OAnf استفاده کرد. بهبود حلالیت در آب شاخص اصلی مورد استفاده برای تایید فرمولاسیون دارویی بهینه است و نتایج ما نشان داد که OA:PVPK90:HPBCD در 1:8:20 بهترین حلالیت در آب را داشت. OA بسته به نسبت HPBCD. به طور مشابه، مطالعات قبلی همچنین نشان داده اند که نسبت بالاتر سیکلودکسترین ظرفیت کپسولاسیون فرمول را افزایش می دهد و منجر به افزایش قابل توجهی در حلالیت آب و فعالیت بیولوژیکی کورکومین [30]، رسورا-ترول [12]، تیمول [31] می شود. و دیفنوکونازول[32]. علاوه بر این، مطالعه حاضر همچنین خواص فیزیکوشیمیایی OA خام و نانوالیاف آن را برای توضیح مکانیسم بهبود حلالیت در آب نانوالیاف OA.OA تولید شده در این مطالعه، همگی رشته‌هایی با اندازه نانو یکنواخت مقایسه کرد. نتایج تجزیه و تحلیل اندازه ذرات همچنین اشاره کرد که OAnf بازسازی شده در آب، ذرات نانو اندازه با همگنی توزیع برتر را نشان می‌دهد. این نتایج نشان داد که OAnf مساحت سطح بیشتری نسبت به OA خام دارد. علاوه بر این، تشکیل پیوند هیدروژنی بین مولکولی بین ترکیبات فعال و حامل ها نیز می تواند به بهبود حلالیت در آب کمک کند. طیف FTIR و HNMR OAnf نشان داد که OA خام به طور موثری در HPBCD محصور شد و یک ساختار نانوالیاف تثبیت شده با PVPK90 را از طریق تشکیل پیوند هیدروژنی بین مولکولی بین OA و HPBCD/PVPK90 تشکیل داد. شکل کریستالی تبدیل به فرم آمورف از ترکیب فعال نیز نشانگر بهبود حلالیت در آب بود. الگوی XRD OAnf نشان داد که ساختار کریستالی OA خام پس از تشکیل نانوالیاف به ساختاری آمورف تبدیل شد. این نتیجه مشابه در چندین ترکیب فعال بارگذاری شده در نانوالیاف نیز مشاهده شد [12،30]. در مجموع، فرمول نانوالیاف به طور موثر حلالیت آب OA خام را از طریق بهبود خواص فیزیکوشیمیایی، از جمله کاهش اندازه ذرات، افزایش سطح، تشکیل پیوند هیدروژنی با حامل‌ها و تبدیل آمورف بهبود بخشید.

فرمولاسیون های موضعی حاوی آنتی اکسیدان ها برای تحویل به اپیدرم و درم برای مقابله با استرس اکسیداتیو ناشی از PM، التهاب و پیری پوست موثر هستند [33]. بر اساس دانش جذب پوست، لایه شاخی عامل محدود کننده سرعتی است که نفوذ پوست و جذب ترکیبات فعال را محدود می کند و در نتیجه فعالیت بیولوژیکی کاهش می یابد [34]. نتیجه نفوذ پوست در شرایط آزمایشگاهی نشان داد که OAnf راحت تر و سریع تر از OA خام از لایه شاخی عبور کرده و در مقادیر زیادی در اپیدرم و درم باقی می ماند. این نتیجه تایید کرد که OAnf می تواند به طور موثری جذب پوست OA خام را بهبود بخشد. در مرحله بعد، به منظور تعیین اینکه آیا OAnf فعالیت ضد آلودگی بهتری نسبت به OA خام دارد، در این مطالعه، از یک مدل آسیب کراتینوسیت های ناشی از PM برای مقایسه فعالیت های بیولوژیکی آنها استفاده شد. نتایج ما نشان داد که OAnf در PBS اثرات ضد آلودگی بهتری نسبت به OA خام دارد، از جمله کاهش تولید بیش از حد ROS، کاهش بیان پروتئین التهابی (COX{5}} و NF-kB) و پروتئین پیری پوست (MP-1)، افزایش بیان پروتئین ضد پیری پوست (TIMP{11}}) و کاهش فسفوریلاسیون JNK. بنابراین، OAnf می تواند یک فرمول موضعی به عنوان یک عامل آنتی اکسیدانی برای جلوگیری از آسیب کراتینوسیت ناشی از PM باشد.

به طور خلاصه، OAnf خواص فیزیکوشیمیایی خود را برای حل حلالیت ضعیف OA خام در آب بهبود بخشید و همچنین به طور قابل توجهی جذب پوست OA خام را بهبود بخشید. OAnf فعالیت های آنتی اکسیدانی، ضد التهابی و ضد پیری بهتری در آسیب کراتینوسیت های ناشی از PM داشت. در نتیجه، ما پیشنهاد می کنیم که OAnf می تواند به عنوان یک محصول مراقبت از پوست یا به عنوان یک فرمول دارویی برای جلوگیری از آسیب پوستی ناشی از PM در آینده استفاده شود.

این مقاله از Antioxidants 2021, 10, 1411 استخراج شده است. https://doi.org/10.3390/antiox10091411 https://www.mdpi.com/journal/antioxidants