عصاره برگ زیتون (OLE) قاچاق آکواپورین-2 ناشی از وازوپرسین را از طریق فعال شدن گیرنده حسگر کلسیم مختل کرد.

برای اطلاعات بیشتر. مخاطب:tina.xiang@wecistanche.com

وازوپرسین (AVP) نفوذپذیری آب را در بدن افزایش می دهدکلیهمجرای جمع آوری از طریق تنظیم قاچاق آکواپورین-2 (AQP2). چندین اختلال، از جمله فشار خون بالا و ترشح نامناسب هورمون ضد ادرار (SIADH)، با ناهنجاری در هموستاز آب همراه است. نشان داده شده است که برخی از ترکیبات گیاهی برای سلامت انسان مفید هستند. در اینجا، اثرات عصاره برگ زیتون (OLE) با استفاده از مدل‌های in vitro و in vivo ارزیابی شده است. مطالعات کانفوکال نشان داد که OLE از انتقال AQP2 ناشی از وازوپرسین به غشای پلاسمایی در سلول‌های MCD4 و موش جلوگیری می‌کند.کلیه ها. جوجه کشی با OLE افزایش وابسته به AVP ضریب نفوذپذیری آب اسمزی (Pf) را کاهش می دهد. برای روشن شدن عوامل احتمالی OLE، کلسیم داخل سلولی مورد ارزیابی قرار گرفت. OLE کلسیم داخل سلولی را از طریق فعال شدن گیرنده سنجش کلسیم (CaSR) افزایش می دهد. NPS2143. یک مهارکننده انتخابی CaSR، اثر مهاری OLE را بر نفوذپذیری آب وابسته به AVP لغو کرد. آزمایش‌های in vivo نشان داد که درمان با OLE بیان mRNA CaSR را افزایش می‌دهد و mRNA AQP2 را به موازات افزایش AQP{4}}miRNA هدفمند-137 کاهش می‌دهد. این یافته‌ها با هم نشان می‌دهند که OLE از طریق تحریک CaSR با عملکرد وازوپرسین مخالفت می‌کند و نشان می‌دهد که این عصاره ممکن است برای کاهش اختلالاتی که با سیگنال‌دهی غیرطبیعی CaSR مشخص می‌شوند و بر جذب مجدد آب کلیوی تأثیر می‌گذارد، مفید باشد.

برگ درخت زیتون به طور گسترده ای به عنوان درمان سنتی برای درمان بسیاری از بیماری ها، به ویژه در کشورهای مدیترانه ای استفاده می شود. برگ ها معمولاً در رژیم غذایی انسان به عنوان عصاره یا پودر برای تهیه دم کرده یا چای گیاهی مصرف می شوند. تجزیه و تحلیل خصوصیات شیمیایی نشان داد که برگ درخت زیتون حاوی چندین ترکیب فعال زیستی است که ممکن است اثرات مفیدی در عوارض خاصی مانند سندرم متابولیک، دیس لیپیدمی و فشار خون بالا داشته باشد. در بیماران مبتلا به فشار خون اساسی، OLE فشار خون را کاهش داد و گلیسمی و کلسمی را کمی کاهش داد. پلی فنل های متعددی مانند اولئوروپئین، هیدروکسی تیروزول و تیروزول غنی شده در عصاره برگ سبز زیتون (OLE)5 یافت شده اند و در پیشگیری از بیماری های خاصی که با استرس اکسیداتیو مشخص می شوند، شناخته شده اند. بنابراین، در چند سال اخیر، علاقه به بررسی اثرات سودمند بالقوه عصاره برگ زیتون در میان دانشمندان در زمینه های مختلف تحقیقاتی در حال افزایش است. OIE با تغییر دینامیک کلسیم داخل سلولی، که احتمالاً T- را هدف قرار می دهد، اثر ضد تکثیری قابل توجهی در سلول های مزوتلیومای بدخیم نشان داد. کانال های Ca2 plus را تایپ کنید. جالب توجه است، OLE برای اعمال اثرات ضد فشار خون بر فشار خون ژنتیکی در موش‌های با فشار خون خود به خود (SHR)، مرتبط با بهبود عملکرد عروق*. بازجذب بیش از حد آب نقش مهمی در پاتوژنز افزایش فشار خون دارد. در بیماران مبتلا به فشار خون، تحت درمان با عصاره برگ زیتون، کاهش قابل توجهی از چندین عامل التهابی مرتبط با کاهش فشار خون مشاهده شد. علاوه بر این، احتباس بیش از حد آب مشخصه چندین اختلال مانند سیروز کبدی، نارسایی قلبی و ترشح نامناسب هورمون ضد ادراری (SIADH) است. هموستاز آب بدن به شدت توسط هورمون ضد ادراری وازوپرسین (AVP) که در شرایط کم آبی ترشح می شود، کنترل می شود. AVP گیرنده V2R خود را که در غشای قاعده‌ای جانبی قرار دارد متصل می‌کندکلیهسلول‌های اصلی در نتیجه مسیر سیگنال cAMP را فعال می‌کنند که منجر به جابجایی وزیکول‌های حاوی آکواپورین{0}}(AQP2) از یک استخر داخل سلولی به غشای پلاسمایی آپیکال می‌شود که در آن بازجذب آب رخ می‌دهد. در سطح مولکولی، عوامل متعددی ممکن است تعادل آب کلیوی را تعدیل کنند، افزایش سطح کلسیم مجرا، قاچاق کوتاه مدت AOP2 وابسته به وازوپرسین را از طریق فعال کردن گیرنده حسگر کلسیم (CaSR) کاهش داد. از سوی دیگر، فعال‌سازی CaSR در سلول‌های اپیتلیال لوله‌ای پروگزیمال کلیوی که به طور مشروط جاودانه شده‌اند، جدا شده از ادرار انسان، باعث افزایش قابل‌توجه در کلسیم سیتوزولی شد و به‌طور قابل‌توجهی افزایش cAMP ناشی از فورسکولین (FK)، یک فعال‌کننده مستقیم آدنیلات cvclase3 را کاهش داد. در سلول‌های MCD4 مجرای جمع‌آوری کلیه، که به طور پایدار کانال آب AOP2 را بیان می‌کنند، تحریک CaSR افزایش وابسته به cAMP در فسفوریلاسیون AQP2 در سرین 256 را کاهش داد که یک رویداد محوری در آبشار انتقال سیگنال است که توسط وازوپرسین فعال می‌شود و در نهایت نفوذپذیری آب را افزایش می‌دهد. ، 15 علاوه بر این، درکلیهبرش هایی از کلیه بصل النخاع داخلی موش، فعال شدن CaSR با کلسیمیمتیک NPS-R568 باعث افزایش قابل توجهی در AQP2-miRNA هدف{3}} شد که برهمکنش تنگاتنگ بین مسیر سیگنال CaSR و AQP را تأیید کرد. در مطالعه حاضر، اثرات عصاره برگ زیتون، به دست آمده از رقم محلی کوراتینا، بر عملکرد AQP2 ناشی از وازوپرسین در سلول های مجرای جمع کننده کلیوی MCD4 با بیان پایدار AOP2 و dDAVP مورد ارزیابی قرار گرفت. موش های تحت درمان با عصاره تزریق شدند. ما شواهدی ارائه می‌دهیم که درمان OLE با پاسخ وازوپرسین در سلول‌های کلیوی مقابله می‌کند، که ممکن است تا حدی اثر دیورتیک آن را توضیح دهد. جالب توجه است، به نظر می‌رسد که این اثر مربوط به فعال‌سازی CaSR ناشی از OLE باشد، گیرنده‌ای که شناخته شده است با گیرنده وازوپرسین 2 تعامل منفی دارد.

اثرات سیستانچ بر کلیه را بیشتر بدانید

نتایج

اثرات OLE بر عملکرد AQP2 ناشی از وازوپرسین در سلول‌های MCD4. برای بررسی احتمال دخالت OLE بر عملکرد AQP2 وابسته به وازوپرسین،کلیهسلول‌های مجرای MCD4 جمع‌آوری‌کننده، که به‌طور پایدار گیرنده وازوپرسین 2 (V2R) و AQP2 انسانی را بیان می‌کنند، به عنوان یک مدل تجربی استفاده شد. مطالعات هم کانونی (شکل 1A) نشان داد که در مقایسه با سلول های تیمار شده با dDAVP، که در آن رنگ آمیزی AQP2 در غشای پلاسمایی آپیکال موضعی شده است، درمان با OLE از محلی سازی غشایی AOP2 ناشی از تحریک با dDAVP جلوگیری می کند. مطابق با این مشاهدات، درمان OLE باعث اختلال در افزایش پاسخ اسمزی زمانی ناشی از dDAVP (در شکل 1B به عنوان 1/t نشان داده شده است) (OLE/dDAVP{12}}.70±1.{15}} درصد، n=292 سلول در مقابل dDAVP=206.8±5.49 درصد، n=186 سلول;p<0.001).altogether these="" findings="" suggested="" that="" treatment="" with="" ole="" reduced="" principal="" cell="" permeability="" by="" preventing="" aqp2="" translocation="" from="" an="" intracellular="" vesicle="" pool="" to="" the="" apical="" plasma="" membrane.="" vasopressin-induced="" aop2="" trafficking="" is="" controlled="" by="" intracellular="" camp="" which="" stimulated="" the="" camp-dependent="" kinase="" (pka)1.="" further,="" to="" evaluate="" the="" functionality="" of="" the="" v2r="" in="" the="" presence="" of="" ole="" in="" terms="" of="" camp="" production,="" permeable="" 8-br-camp="" was="" used="" as="" an="" external="" source="" of="" camp.="" treatment="" with="" 8-br-camp="" abolished="" the="" inhibitory="" effect="" elicited="" by="" ole="" on="" osmotic="" water="" permeability(ole/8-br-camp="188.7±3.56%,n=293" cells="" vs="" ole="85.93±2.27%," n="238"><0.001).therefore, to="" evaluate="" whether="" treatment="" with="" ole="" regulates="" aqp2="" trafficking="" by="" fine-tuning="" intracellular="" camp="" level,="" fluorescence="" resonance="" energy="" transfer(fret)technology="" was="" applied.="" compared="" to="" untreated="" cells="" (ctr),="" normalized="" netfret="" signals="" are="" reduced="" with="" ddavp="" stimulation(ddavp="77.86±3.13%," n="173" cells="" vs="" ctr="100.00±3.56%,n=276" cells;=""><0.00l; fig.2a),consistent="" with="" a="" significant="" increase="" of="" intracellular="" camp.="" conversely,="" treatment="" with="" ole="" prevented="" the="" ddavp="" dependent="" decrease="" of="" netfront="" signals="" consistent="" with="" a="" decrease="" of="" the="" vasopressin="" dependent="" camp="" release="" (ole/ddavp="92.97±3.46%," n="211" cells="" vs="" ddavp="77.86±3.13%," n="173" cells;=""><0.05; fig.2a).treatment="" with="" ole="" alone="" did="" not="" affect="" the="" intracellular="" cgmp="" level="" compared="" with="" cells="" left="" under="" basal="" conditions(ole="96.15±3.80%," n="184" cells="" vs="" ctr="100.00±3.56%,n=276" cells;=""><0.05).besides, western="" blotting="" studies(fig.2b)revealed="" that="" treatment="" with="" ole="" significantly="" reduced="" the="" ddavp="" induced="" increase="" of="" aqp2="" phosphorylation="" at="" serine="" 256(aqp2-ps256),="" indicating="" that="" aqp2="" phosphorylation="" and="" trafficking,="" in="" response="" to="" ole,="" are="" dependent="" on="" camp-pka="" function.="" the="" phosphorylation="" level="" of="" aqp2-ps256="" in="" response="" to="" ole="" was="" not="" statistically="" different="" from="" the="" control="" even="" though="" it="" tended="" to="" be="" reduced.="" to="" gain="" insight="" into="" the="" molecular="" signals="" underlying="" the="" action="" of="" ole,="" intracellular="" calcium="" dynamics="" were="" evaluated.="" mcd4="" cells="" endogenously="" express="" a="" functional="" calcium-sensing-receptor(casr)20,="" which="" plays="" an="" important="" role="" in="" controlling="" aqp2="" expression="" and="" trafficking'4.long="" term="" incubation="" with="" ole(0.1="" mg/ml)slightly="" increased="" the="" intracellular="" calcium="" level="" compared="" with="" untreated="" cells(fig.3;="" ole="209.0±13.45" nm,n="128" cells="" ys="" ctr="163.3±8.957" nm,n="97cells:"><0.05).co-incubation with="" ole(0.1="" mg/ml)="" and="" the="" selective="" nps2143(1um)antagonist="" of="" the="" casr="" abolished="" the="" ole="" induced="" intracellular="" calcium="" mobilization(ole/nps2143="168.8±11.43" nm,n="144" cells="" ys="" ole="209.0+13.45" nm.="" n="128"><0.05).to dissect="" further="" intracellular="" calcium="" signals="" in="" response="" to="" ole,="" functional="" experiments="" were="" also="" performed="" under="" acute="" stimulation="" with="" ole="" and="" nps2143.="" short-term="" treatment="" with="" ole="" (1="" mg/ml)="" evoked="" specific="" calcium="" oscillations(fig.4a)="" that="" were="" prevented="" when="" cells="" were="" pretreated="" with="" the="" selective="" casr="" inhibitor="" nps2143（10="" μm）.="" statistical="" analysis="" of="" the="" fluorescence="" responses（fig.="" 4b）revealed="" that="" incubation="" with="" ole="" increased="" cytosolic="" calcium="" by="" 97.06±6.93%(vs="" atp="" 100.00±2.28%).pretreatment="" with="" nps2143="" reduced="" the="" ole="" induced="" intracellular="" calcium="" increase(ole/nps2143="18.87±2.17%,n=59" cells="" vs="" ole="97.06±6.93%," n="50" cell;=""><0.001).to deeper="" investigate="" whether="" the="" effect="" of="" ole="" on="" avp-dependent="" water="" reabsorption="" occurred="" through="" the="" activation="" of="" the="" casr="" signaling,="" functional="" studies="" were="" performed="" as="" previously="" shown="" (fig.1b).="" interestingly,="" treatment="" with="" nps2143="" abolished="" the="" inhibitory="" effect="" of="" ole="" on="" avp-regulated="" osmotic="" water="" permeability="" (fig.5;="" ole/ddavp/nps2143="190.4±7.15%," n="191 cells" vs="" ole/ddavp="88.70±1.86%,n=292"><0.001), suggesting="" that="" treatment="" with="" ole="" attenuated="" the="" avp-dependent="" water="" reabsorption="" through="" the="" activation="" of="" the="" casr="" signaling.="" compared="" to="" untreated="" cells,="" treatment="" with="" only="" nps2143="" did="" not="" affect="" the="" osmotic="" water="" permeability="" (fig.="">

<0.001 vs="" ctr;=""><0.05 vs="" ddavp).="" (b)="" lysates="" from="" mcd4="" cells="" were="" subjected="" to="" immunoblotting="" using="" abs="" against="" aqp2-ps256="" and="" totalaqp2.="" densitometric="" analysis="" of="" aqp2-ps256="" bands="" normalized="" to="" total="" aqp2="" bands="" (total="" aqp2)="" is="" reported="" in="" the="" histogram.="" data="" are="" expressed="" as="" means±s.e.m=""><0.05 or=""><0.001 vs="" ctr;=""><0.001 vs="" ddavp)."="" alt="Figure 2. Efects of OLE on AQP2 phosphorylation and cAMP production in MCD4 cells. (A) Evaluation of cAMP production by FRET experiments in MCD4 cells transiently transfected with H96 as described in the " materials="" and="" methods"="" section.="" histogram="" reports="" netfret="" measured="" in="" cells="" under="" basal="" conditions,="" treated="" with="" ddavp="" (100 nm="" for="" 30 min),="" ole="" (0.1 mg/ml="" o/n),="" or="" co-treated="" with="" ole="" and="" ddavp.="" te="" treatment="" with="" ddavp="" displayed="" a="" signifcantly="" higher="" camp="" production="" depicted="" as="" a="" reduced="" netfret="" signal.="" data="" are="" shown="" as="" single="" values="" in="" a="" scatter="" plot="" reporting="" means±s.e.m=""><0.001 vs="" ctr;=""><0.05 vs="" ddavp).="" (b)="" lysates="" from="" mcd4="" cells="" were="" subjected="" to="" immunoblotting="" using="" abs="" against="" aqp2-ps256="" and="" totalaqp2.="" densitometric="" analysis="" of="" aqp2-ps256="" bands="" normalized="" to="" total="" aqp2="" bands="" (total="" aqp2)="" is="" reported="" in="" the="" histogram.="" data="" are="" expressed="" as="" means±s.e.m=""><0.05 or=""><0.001 vs="" ctr;=""><0.001 vs="" ddavp)."="" width="480" height="320" border="0" vspace="0" style="width: 480px; height: 320px;">

اثرات OLE در کلیه موش های تزریق شده با OLE.

برای بررسی بیشتر اعمال OLE، مطالعات in vivo انجام شده است. به طور خاص، به موش‌ها OLE (25{8}} mg/kg/day) یک بار در روز به مدت سه روز تزریق شده است. روش دیگر، موش‌ها با OLE به مدت 3 روز و dDAVP به مدت 3{13}} دقیقه تحت درمان قرار گرفتند. ارزیابی mRNA CaSR که از مجرای جمع‌آوری کلیه موش‌ها جدا شد و برای PCR بلادرنگ پردازش شد (شکل 6) افزایش قابل‌توجهی در mRNA CaSR در OLE (OLE{6}}.87±0.29، n{{{{ 10}} موش در مقابل CTR=1.02±0.17، n=5 موش صحرایی<0.05) and="" ole/ddavp(ole/ddavp="2.77±0.25," n="5" rats="" vs="" ctr="1.02±0.17,n=5" rats="" and="" ddavp="1.08±0.11," n="5" rats;=""><0.001)injected rats="" compared="" with="" control="" and="" ddavp="" animals,="" casr="" signaling="" can="" regulate="" the="" expression="" level="" of="" selective="" mirnas,="" which="" downregulated="" the="" expression="" level="" of="" aqp216.based="" on="" these="" findings,="" and="" considering="" that="" treatment="" with="" ole="" attenuated="" aqp2="" function,="" the="" level="" of="" mir-137,="" a="" known="" aqp2-targeting="" mir="" in="" the="" renal="" collecting="" duct,="" was="" evaluated.="" compared="" to="" control="" rats="" (fig.7),="" the="" level="" of="" mir-137="" in="" the="" renal="" collecting="" ducts="" of="" ole(ole="4.18.10-8±1.07.10-8ng,n=5" rats="" vs="" ctr="1.35.10-8±2.89.10-ng," n="5" rats;=""><0.05)and ole/ddavp="" rats="" was="" increased="" indicating="" that="" treatment="" with="" ole="" upregulates="" the="" casr="" signaling="" and="" the="" expression="" level="" of="" the="" mir-137(ole/ddavp="4.38.10-8±47.01·10-9ng," n="5" rats="" vs="" ctr="1.35.10-8±2.89.10-ng," n="5" rats;=""><0.01 and="" vs="" ddavp="2.1610-8±3.52.10-°ng," n="5"><0.05). to="" verify="" whether="" the="" increase="" of="" mir-137="" affected="" the="" expression="" level="" of="" aqp2,="" renal="" samples="" were="" processed="" for="" real-time="" pcr.="" data(fig.8a)revealed="" that="" the="" expression="" levels="" of="" aqp2="" mrna="" were="" lower="" in="" ole(ole="0.36±0.06,n=5" rats="" vs="" ctr="1.00±0.08," n="5"><0.01)and ole/ddavp(ole/ddavp="0.65±0.12," n="5" rats="" vs="" ctr="1.00±0.08," n="5" rats="" and="" ddavp="1.03±0.16,n=5" rats;=""><0.05)renal samples="" compared="" with="" specimens="" obtained="" from="" control="" animals.="" besides,="" western="" blotting="" analysis(fig.="" 8b)showed="" that="" treatment="" with="" ole="" reduced="" the="" abundance="" of="" aop2="" regardless="" of="" ddavp="" stimulation(ole/ddavp="0.62±0.13,n=5" rats="" vs="" ddavp="1.04±0.16,n=5"><0.05)indicating that="" the="" ole-induced="" reduction="" of="" aqp2="" mrna="" expression="" level="" coincided="" with="" a="" decrease="" of="" aqp2="" protein="" content.="" to="" evaluate="" the="" effect="" of="" ole="" on="" aqp2="" phosphorylation="" and="" trafficking="" in="">کلیهآنالیز وسترن بلات و مطالعات کانفوکال انجام شد (شکل 9). در موش‌های تزریق شده با OLE/dDAVP، فسفوریلاسیون AQP2 در سرین 256 در مقایسه با بافت‌های کلیوی حیوانات تحت درمان با dDAVP به طور قابل توجهی کاهش یافت (OLE/dDAVP{3}}). 77±0.16، n=5 موش در مقابل dDAVP=2.16±0.25، n=5 موش صحرایی؛ p<0.001,fig.9a),thereby confirming="" the="" in="" vitro="" findings(fig.2b).="" besides,="" confocal="" studies="" (fig.9b)="" of="" kidney="" sections="" revealed="" that="" exposure="" to="" ole="" prevented="" the="" aop2="" mem-brane="" localization="" that="" instead="" was="" observed="" in="" ddavp="" treated="">

بحث

کلسیم یک پیام رسان مهم درون سلولی است که تعداد زیادی از عملکردهای سلولی را تعدیل می کند. سیگنال دهی غیرطبیعی کلسیم ممکن است منجر به چندین بیماری از جمله نارسایی قلبی، سرطان و فشار خون بالا شود. کنترل خاص بیان و فعالیت پروتئین‌هایی که سیگنال‌های کلسیم درون سلولی متعدد را کنترل می‌کنند در مواجهه با اختلالات متعدد موفق بوده و بنابراین برای توسعه دارو جذاب است. این مطالعه با نشان دادن توانایی آن در تعدیل سیگنال دهی کلسیم داخل سلولی از طریق تحریک CaSR که در تنظیم دقیق قاچاق و بیان AQP2 ناشی از وازوپرسین نقش دارد، بینش جدیدی در مورد مکانیسم عمل OLE ارائه می دهد. تحت شرایط فیزیولوژیکی، AQP2 نقش مهمی در کنترل هموستاز آب بدن ایفا می کند. تحریک دستگاه داخل سلولی، که منجر به محلی سازی AQP2 در غشای پلاسمایی آپیکال می شود، منجر به احتباس آب غیرطبیعی و متعاقب آن هیپوناترمی مانند سندرم ترشح نامناسب هورمون آنتی دیورتیک (SIADH)، سیروز کبدی و نارسایی احتقانی قلب می شود. مدل SIADH، مرتبط با نارسایی نارسایی کلیه پلی کیستیک 1، سطح کلسیم درون سلولی پایه به طور قابل توجهی در مقایسه با سطح اندازه‌گیری شده در مجاری جمع‌آوری موش‌های نوع وحشی کاهش یافت. کلسیم کم داخل سلولی فعالیت آنزیم‌های خاصی از جمله پروتئین فسفاتاز PP2A را کاهش داد که منجر به تنظیم مثبت فسفوریلاسیون AOP2 در سرین 2561 شد. در مقابل. فعال سازی CaSR با کلسیمیمتیک NPS-R568 غلظت کلسیم داخل سلولی را افزایش داد و سطح cAMP را در سلول های دارای کمبود PKD1 کاهش داد. نکته مهم این است که کلسیم سیتوزولی می تواند سیکلاز 3 آدنیله شده قابل مهار کلسیم را کاهش دهد و در نتیجه سطح درون سلولی cAMP را تنظیم کند. در سلول های MCD4، در واقع، تحریک CaSR با NPS-R568 باعث کاهش AQP{23}}pShiblate از طریق aden می شود. cyclase4. در این مطالعه، درمان با OLE از افزایش وابسته به وازوپرسین cAMP و AOP{27}pS256، احتمالاً ثانویه به افزایش غلظت کلسیم داخل سلولی، جلوگیری کرد. قابل توجه، قرار گرفتن در معرض منبع خارجی cAMP با استفاده از 8-Br-cAMP نفوذپذیر، به طور قابل توجهی با اثر مهاری OLE در مسیر V2R مقابله کرد.

افزایش سطح کلسیم سیتوزولی ممکن است منجر به مرگ سلولی و آپوپتوز شود. با این حال، افزایش مداوم در کلسیم داخل سلولی از 250 نانومولار به بیش از 6{6}}0 نانومولار بقای نورون را ارتقا داد. یک اثر سیتوتوکسیک در این غلظت، OLE (0.1 mg/ml) سطح کلسیم داخل سلولی را کمی افزایش داد. تصویربرداری کلسیم نشان داد که تحریک حاد با OLE باعث افزایش گذرا کلسیم داخل سلولی از طریق فعال شدن CaSR می‌شود که وقتی سلول‌ها با آنتاگونیست انتخابی CaSR NPS2143 از قبل انکوبه شدند، لغو می‌شود، در سلول‌های توبول پروگزیمال کلیه، فعال شدن آلوستریک CaSR با I-or تولید ROS را کاهش داد و در نتیجه استرس اکسیداتیو میتوکندری را که باعث آپوپتوز سلولی می‌شد، کاهش داد. علاوه بر این، مطالعه قبلی ما نشان داد که بیان انواع افزایش عملکرد CaSR باعث کاهش انتشار ROS و S-گلوتاتیونیلاسیون AQP237 شد. جوجه کشی با OLE باعث کاهش تولید ROS در سلول های MCD435 شد که توانایی آنتی اکسیدانی آن را نشان داد. با این وجود، در حال حاضر مشخص نیست که آیا OLE روی AOP{17}S-گلوتاتیونیلاسیون تأثیر می گذارد یا خیر. مطالعات متعدد نشان داد که OLE یا اولئوروپئین، که ترکیب اصلی OLE است، ممکن است با مهار مرگ‌های سلولی، نقش‌های محافظتی داشته باشد. پاسخ های مفید در دوزهای 250 و 500 میلی گرم بر کیلوگرم به دست آمد. در مقابل، در غلظت‌های بالاتر، درمان با OLE ممکن است اثرات مضری داشته باشد که احتمالاً به دلیل فعالیت‌های پرواکسیدانی چندین ترکیب گیاهی است. در این مطالعه به موش‌ها OLE با دوز 250 میلی‌گرم بر کیلوگرم به مدت سه روز تزریق شد که نشان‌دهنده تنظیم مثبت CaSR بود. سطح بیان CaSR توسط ترکیبات خاصی که به عنوان فعال کننده آلوستریک گیرنده عمل می کنند افزایش می یابد. در واقع، کلسیم‌متیک‌ها با افزایش بیوسنتز CaSR در سلول‌های ماهیچه صاف عروق انسان، کلسیفیکاسیون عروقی را کاهش دادند. در این مسابقه، نمی توان این احتمال را که ترکیبات خاصی در OLE ممکن است به عنوان تعدیل کننده آلوستریک CaSR عمل کنند را رد کرد. از سوی دیگر، تحریک با وازوپرسین ممکن است منجر به آزادسازی IL{26}} شود که ممکن است به افزایش سطح بیان CaSR42 کمک کند.

در کلیه، تحریک سیگنال دهی CaSR با کاهش بیان AQP2 احتمالاً از طریق نسل miR{1}} مرتبط است. miRNA ها تعدیل کننده های اصلی پس از رونویسی هستند. چندین miRNA وابسته به وازوپرسین که بیان AQP2 را هدف قرار می دهند نیز شرح داده شده است. ترانسفکشن با miR-32 و miR-137 به طور قابل توجهی سطح بیان AOP2 را در سلول‌های mpkCCDc14 کاهش داد. جالب توجه است که OLE می تواند سیگنال های التهابی را کاهش دهد و اثرات محافظتی را با تعدیل سطح بیان چندین miRNAs اعمال کند." به ویژه، در سلول های گلیوبلاستوما مولتی فرم، OLE بیان miRNA های مختلف از جمله miR-13745 را ارتقا داد که در تنظیم کاهشی نقش دارد. مسیر سیگنال دهی Akt/mTOR 46. نکته قابل توجه، درمان با اولئوروپئین از سیگنال دهی Akt/mTOR از طریق فعال سازی CAMK و AMPK ناشی از کلسیم جلوگیری می کند. فعال سازی CaSR با NPS-R568 AMPK را فعال می کند و فعالیت mTOR را در سلول های لوله پروگزیمال انسان کاهش می دهد. مطابق با این یافته‌ها، انکوباسیون با OLE کلسیم سیتوزولی را افزایش می‌دهد، فعالیت PKA را کاهش می‌دهد و اندازه کیست را در مدل کشت سلولی سه بعدی کاهش می‌دهد. این یافته‌ها با هم نشان می‌دهند که OLE ممکن است در درمان اختلالاتی که با اختلال در تنظیم دینامیک کلسیم درون سلولی مرتبط با کاهش سیگنال‌دهی CaSR مشخص می‌شوند، مفید باشد.

عصاره برگ زیتون از چندین جزء فعال زیستی از جمله پلی فنل ها، الیاف و مواد معدنی تشکیل شده است. در حال حاضر، مشخص نیست که آیا یک ترکیب یا ترکیب هم افزایی از ترکیبات گیاهی در OLE ممکن است در تعدیل پاسخ‌های درون سلولی مفید باشد. عصاره مورد استفاده در این مطالعه به عنوان یک افزودنی غذایی احتمالی استفاده شده است و بنابراین تعیین تأثیر فیزیولوژیکی خود عصاره با توجه به اینکه چندین فنل از جمله هیدروکسی تیروزول ممکن است توسط کلیه فیلتر شده و در ادرار بازیابی شود، مهم است. مطالعات بیشتر کارآیی اجزای خاصی را که ممکن است به طور فعال سیگنال دهی کلسیم داخل سلولی را از طریق CaSR تنظیم کنند، ارائه خواهد کرد. برای نتیجه گیری، این مطالعه شواهدی را ارائه می دهد که OLE ممکن است به عنوان یک کمک بالقوه جدید مفید برای کاهش اختلالاتی در نظر گرفته شود که با کاهش بیان CaSR و همچنین سیگنال دهی و تأثیرگذاری بر نفوذپذیری آب کلیوی مشخص می شود.

مواد و روش ها

مواد شیمیایی و آنتی بادی ها.تمام مواد شیمیایی و آنتی بیوتیک ها از Merck (Merck KGaA, Darmstadt, آلمان) خریداری شد. Calcein-AM، Fura{1}}AM، محیط کشت سلولی، سرم جنین گاوی (FBS) و سوبستراهای نورتابی شیمیایی سوپر سیگنال West Pico از Thermo Fisher Scientific (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) خریداری شدند. {2}}(AQP2) با استفاده از آنتی‌بادی‌های خاص (C-tail Ab) ایجاد شده علیه یک پپتید مصنوعی مربوط به آخرین 15 اسید آمینه C ترمینال AQP2 انسانی شناسایی شد. آنتی بادی های AQP{8}pS256 با مهربانی توسط پروفسور پیتر دین هدیه داده شد. آنتی بادی های ثانویه ضد خرگوش ترب کوهی همراه با پراکسیداز از Merck (Merck KGaA، دارمشتات، آلمان) به دست آمد. یک آنتی بادی ثانویه بز ضد خرگوش همراه با Alexa{14}} از Thermo Fisher Scientific (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) خریداری شد.

تولید عصاره غنی از فنول و خصوصیات شیمیایی.تولید عصاره غنی از فنول از برگ زیتون همانطور که در Ranieri و همکاران 35 گزارش شده است انجام شد. پس از آسیاب با مخلوط کن (Waring-Commercial، Torrington، CT، USA)، آب ddH2O (نسبت 1/2{10}}، w/y) اضافه شد و سپس سه بار تحت سونوگرافی (CEIA، Viciomaggio، ایتالیا) قرار گرفت. هر بار به مدت 30 دقیقه در دمای 5±35 درجه. در نهایت، عصاره ها از طریق کاغذ صافی فیلتر شدند، لیوفیلیز شدند و در دمای {9}} درجه سانتیگراد نگهداری شدند. محتوای فنل کل، فعالیت آنتی اکسیدانی و شناسایی ترکیبات فنولی منفرد بر اساس دیفونزو و همکاران انجام شد. OLE محتوای پلی فنل را که توسط Folin-Ciocalteu تعیین شده بود، برابر با 195 میلی گرم نشان داد. معادل های اسید گالیک (GAE) و یک فعالیت آنتی اکسیدانی، تعیین شده توسط ABTS (2،2'-azino-bis(3-اتیل بنزوتیازولین{19}}نمک دی آمونیوم اسید سولفونیک)، که 750 میکرومول TE (معادل ترولوکس) را تشکیل می دهد. .

کشت سلولی و درمانسلول‌های MCD4 مجرای جمع‌آوری قشر موش، که به طور پایدار AQP2 انسانی و کایمریک V2R-Rluc را بیان می‌کنند، به عنوان یک مدل تجربی استفاده شد. سلول‌ها در مخلوط 1:1 از محیط Eagle اصلاح‌شده Dalbec-cos و F{8}} همراه با 5 درصد (سال/سال) سرم جنین گاوی رشد داده شدند. 1 درصد (y/y) L-گلوتامین و 1 درصد پنی سیلین/استرپتومایسین، 5 میکرومولار دگزامتازون، 400 ug/ml G418 (برای مقاومت AQP2) و 1 ug/ml پورومایسین (برای مقاومت V2R-Rluc) ، در اتمسفر مرطوب 5 درصد CO، در دمای 37 درجه. سلول‌های MCD4 تحت شرایط پایه (CTR) یا تحت درمان طولانی‌مدت با OLE در 0.1 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر O/N، dDAVP در 100 نانومولار به مدت 30 دقیقه، یا تحت درمان با OLE و dDAVP یا NPS2143 در l μM O/N قرار گرفتند. همچنین، سلول‌ها در معرض 8-Br-cAMP در 500 میکرومولار به مدت 45 دقیقه، آزمایش‌های کوتاه‌مدت با OLE در mg/ml 1 به مدت 5 دقیقه و NPS2143 در 10 میکرومولار به مدت 15 دقیقه انجام شد. آزمایش‌ها 3-5 بار مستقل با استفاده از سلول‌های معابر مختلف انجام شد.

مدل حیوانی و درمانتمام مراحل مطابق با دستورالعمل های ملی دانمارک برای مراقبت و نگهداری از حیوانات آزمایشی و دستورالعمل های منتشر شده از موسسه ملی بهداشت انجام شد، پروتکل ها توسط موسسه پزشکی بالینی تایید شدند. دانشگاه آرهوس، با توجه به مجوزهای استفاده از حیوانات آزمایشی صادر شده توسط وزارت دادگستری دانمارک (شماره تأیید 2015-15-0201-00658). مطالعات بر روی موش های صحرایی نر بالغ نژاد ویستار با وزن اولیه 200-225 گرم انجام شد. حیوانات در رژیم غذایی استاندارد جوندگان (Altromin، Lage، آلمان) نگهداری شدند و دسترسی آزاد به آب لوله کشی داشتند. در طی آزمایشات، موش‌ها در گروه‌های دو نفره در هر قفس با چرخه نور تا تاریکی 12:12 ساعت، دمای 2±21 درجه سانتی‌گراد و رطوبت 2±55 درصد قرار گرفتند. پنج موش با تزریق زیر جلدی 1 نانوگرم dDAVP (Sigma-Aldrich، Glostrup، دانمارک) در 200 اولتر نمک / حیوان تحت درمان قرار گرفتند و پنج موش تحت درمان با وسیله نقلیه به عنوان گروه شاهد خدمت کردند. پس از 30 دقیقه، موش‌ها کشته شدند و کلیه‌ها طبق شرح زیر پردازش شدند.

سلول ها و لیزهای IMCD.سلول‌ها روی ظرف‌های {0}} میلی‌متری رشد کردند و در بافری حاوی 220 میلی‌مولار مانیتول، 70 میلی‌مولار ساکارز، {{10}} مجدداً معلق شدند. 5 مولار EGTA pH 8.0،0.5 مولار EDTA pH 8.0،1 مولار Tris-HCl pH 7.4 در حضور پروتئازها (1 میلی‌مولار PMSF، 2 میلی‌گرم در میلی‌لیتر لپپتین، و 2 میلی‌گرم در میلی‌لیتر پپساتین A) و فسفاتازها (10 میلی‌مولار NaF و مهارکننده های اورتووانادات سدیم 1 میلی مولار. متناوب، مقاطع کلیه تقریباً 0.5 میلی‌متر تهیه و به مدت 10 دقیقه در بافری حاوی 1i8 میلی‌مولار NaCl، 16 میلی‌مولار هپس، 17 میلی‌مولار Na-Hepes، 14 میلی‌مولار گلوکز، 3.2 میلی‌مولار KCl، 2.5 میلی‌مولار CaCl2، MSOg، 2.5 میلی‌مولار CaCl2، MSOg متعادل شدند. 1.8 میلی‌مولار KH2PO4 (pH7.4). پاپیلای کلیه در حضور پروتئازها (1 میلی‌مولار PMSF، 2 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر پپساتین A) و فسفاتازها (10 میلی‌مولار NaF و 1 میلی‌مولار سدیم) با قیچی در همان بافر خرد شد. پس از سونیکاسیون (60 کیلوهرتز برای 5 ثانیه)، لیزها در 12 × گرم به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شدند. مواد رویی جمع آوری و برای مطالعات ایمونوبلات استفاده شدند.

میکروسکوپ کانفوکالمطالعات کانفوکال همانطور که قبلاً توضیح داده شد انجام شد. به طور خلاصه، سلول‌ها روی درج‌های PET کشت سلولی رشد کردند و همانطور که در بالا توضیح داده شد تحت درمان قرار گرفتند. متناوبا، بخش‌های کلیه به‌دست‌آمده از کنترل، OLE، dDAVP، و OLE با موش‌های تحت درمان با dDAVP، همانطور که قبلاً توضیح داده شد، تحت آزمایش‌های ایمونوفلورسانس قرار گرفتند. تصاویر با میکروسکوپ فلورسانس اسکن لیزری کانفوکال Leica TCS SP2 (Leica Microsystems, Heerbrugg, Switzerland) به دست آمد. الکتروفورز ژل و ایمونوبلات. پروتئین ها بر روی ژل های پلی آکریل آمید بدون رنگ 12 درصد (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, US.A.) تحت شرایط کاهشی همانطور که قبلاً توضیح داده شد، جدا شدند. به طور خلاصه، نوارهای پروتئینی به غشاهای Immobilon-P (Merck KGaA، دارمشتات، آلمان) منتقل شدند و با استفاده از آنتی بادی‌های anti-AQP2 (Pre-C-tail Ab) و anti-AQP{14}}pS256 ایمونولات شدند. سیگنال‌های ایمونوراکتیو با استفاده از سوبستراهای شیمی‌تابنده سوپر سیگنال وست پیکو با سیستم شیمی‌دوک (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA) به دست آمدند. باندها با استفاده از فناوری بدون لکه به پروتئین کل نرمال شدند (Bio-Rad Laboratories, Inc., هرکول، کالیفرنیا، ایالات متحده آمریکا). تجزیه و تحلیل تراکم سنجی با استفاده از ImageLab (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA) انجام شد و با استفاده از GraphPad Prism (نرم افزار GraphPad، سن دیگو، کالیفرنیا، ایالات متحده آمریکا) تجزیه و تحلیل شد.

سنجش نفوذپذیری آبنفوذپذیری آب اسمزی همانطور که قبلاً توضیح داده شد اندازه گیری شد. به طور خلاصه، سلول‌های MCD4 روی ورقه‌های شیشه‌ای 40- میلی‌متری رشد کردند. پس از تیمارها، سلول ها با 10 میکرومولار Calcein-AM تراوا در غشاء به مدت 45 دقیقه در دمای 37 درجه و 5 درصد CO در DMEM/F{9}} بارگذاری شدند. روکش‌ها در یک محفظه پرفیوژن (FCS2 Closed Chamber System, BIOPTECHS, Butler, USA) نصب شدند. اندازه‌گیری‌ها با استفاده از میکروسکوپ TE{11}S معکوس (میکروسکوپ نیکون اکلیپس، توکیو، ژاپن) مجهز به اندازه‌گیری فلورسانس تک سلولی انجام شد. و تجزیه و تحلیل تصویربرداری نمونه های بارگذاری شده با Calcein-AM در 490 نانومتر برانگیخته شدند. اندازه گیری فلورسانس، به دنبال ایزوسمتیک (140 میلی مولار NaCl. 5 میلی مولار KCl، 1 میلی مولار MgCl.. 1 میلی مولار CaCl.، 10 میلی مولار اسید هپس سولفونیک، 5 میلی مولار گلوکز، pH7.4) یا هایپراسموتیک (محلول ایزوسمزی اضافه شده با محلول 135 میلی مولار مانیتول) . با استفاده از نرم افزار متافلوور (Molecular Devices, MDS Analytical Technologies, Toronto, Canada) انجام شد. داده های فلورسانس دوره زمانی پس از پرفیوژن سلول ها با محلول های ایزو و هیپراسموتیک ثبت شد. دوره زمانی انقباض سلولی به عنوان ثابت زمانی (Ki، بیان شده به صورت 1/r، ثانیه) اندازه‌گیری شد، یک پارامتر مرتبط با نفوذپذیری آب، که با برازش داده‌ها با یک تابع نمایی که با استفاده از GraphPad Prism تجزیه و تحلیل شد (نرم‌افزار GraphPad، سن دیگو) به دست آمد. ، کالیفرنیا، ایالات متحده).

اندازه گیری انتقال انرژی تشدید فلورسانسبرای ارزیابی تغییرات cAMP درون سلولی، از فناوری انتقال انرژی تشدید فلورسانس (FRET) استفاده شد. برای آزمایش‌های FRET، سلول‌ها با یک پلاسمید کدکننده حسگر H96 که حاوی موتیف توافقی اتصال به cAMP EPAC1 است که بین پروتئین فلورسنت فیروزه‌ای (CFP) و cp173Venus-Venus تعبیه شده بود، ترانسفکت شدند، همانطور که قبلاً نشان داده شد. پلاسمید کد کننده پروب H96 هدیه ای از Dr.K. جالینک. تجسم سلول‌های بیان‌کننده ECFP و/یا EYFP و تشخیص FRET با استفاده از میکروسکوپ TE{11}S معکوس (میکروسکوپ نیکون اکلیپس، توکیو، ژاپن) انجام شد. هر تصویر همانطور که قبلا نشان داده شده بود تصحیح و تجزیه و تحلیل شد.

اندازه گیری کلسیم داخل سلولی اندازه گیری کلسیم داخل سلولی همانطور که قبلا نشان داده شد انجام شد. به طور خلاصه، سلول های MCD4 با 4 میکرومولار Fura{3}} AM به مدت 15 دقیقه در دمای 37 درجه در DMEM/F-12 بارگذاری شدند. محلول رینگر برای پرفیوژن سلول‌ها در طول آزمایش حاوی 140 میلی‌مولار NaCl، 5 میلی‌مولار KCl، 1 میلی‌مولار MgCl، 10 میلی‌مولار HEPES، 5 میلی‌مولار گلوکز، 1.8 میلی‌مولار CaCl، pH 7.4 مورد استفاده قرار گرفت. در اندازه‌گیری‌های فلورسانس، ورقه‌های پوششی با سلول‌های اضافه بار در یک محفظه پرفیوژن (سیستم محفظه بسته FCS2. BIOPTECHS. Butler، ایالات متحده آمریکا) نصب شدند. اندازه‌گیری‌ها با استفاده از میکروسکوپ TE{17}S معکوس (میکروسکوپ نیکون اکلیپس، توکیو. ژاپن) انجام شد، نسبت شدت فلورسانس در 340 و 380 نانومتر رسم شد و به‌عنوان تغییر در فلورسانس محاسبه شد. به طور خاص، تحریک با OLE (1 میلی گرم در میلی لیتر) یا NPS2143 (10 میکرومولار) در همان نوع سلول با آنهایی که پس از تحریک با حداکثر دوز آگونیست با واسطه کلسیم ATP (100 میکرومولار) به دست آمد، مقایسه شد که به عنوان یک کنترل داخلی (100 درصد).

سطح کلسیم داخل سلولی در حالت پایدار اندازه گیری شد و همانطور که توسط Grynkiewicz57 توضیح داده شد کالیبره شد. OLE و NPS2143 در درازمدت به ترتیب با 1/1 میلی‌گرم در میلی‌لیتر و l uM استفاده شدند و هر نمونه با افزودن 5 میکرومولار یونومایسین در حضور 1 میلی‌مولار EGTA (Rm.) و سپس 5 کالیبره شد. میکرومولار یونومایسین در 5 میلی مولار CaCl، (RMA).

تجزیه و تحلیل زمان واقعی PCR mRNA ژن AQP2 و CaSR در موش های کنترل و تیمار شدهآزمایش‌های Real-time PCR برای اندازه‌گیری بیان نسبی mRNA در مجرای جمع‌آوری مدولای داخلی (IMCD) جدا شده از پاپیلای کلیه موش‌های صحرایی کنترل و تیمار شده انجام شد. برش‌های کلیه در حدود 0.5 میلی‌متر ساخته شد و به مدت 10 دقیقه در بافری حاوی 118 میلی‌مولار NaCl، 16 میلی‌مولار HEPES، 17 میلی‌مولار Na-Hepes، 14 میلی‌مولار گلوکز، 3.2 میلی‌مولار KCl، 2.5 میلی‌مولار کلسیم کلسیم، 2.5 میلی‌مولار CaCl2، 1.8 متعادل شد. mM MgSO4، و 1.8 میلی مولار KH2PO4 (pH 7.4). پاپیلای کلیه تحت استریومیکروسکوپ جداسازی شد. سپس نمونه‌های موش‌های کنترل و تیمار شده با قیچی مستقیماً در Trizol (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) خرد شدند. رونویسی معکوس بر روی 2.5 میکروگرم RNA کل با استفاده از SuperScriptVilo Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, MA. ایالات متحده آمریکا)، مطابق با پیشنهادات سازنده (25 درجه سانتیگراد برای 10 دقیقه؛ 42 درجه سانتیگراد برای 60 دقیقه؛ 85 درجه سانتیگراد برای 5 دقیقه). تقویت Real-time PCR با استفاده از TagMan Fast Advanced Master Mix با سنجش CaSR، AOP2 و GAPDH (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) در StepOne Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) ، تنظیم شرایط چرخه حرارتی همانطور که توسط سازنده مشخص شده است (95 درجه سانتیگراد برای 20 ثانیه؛ 40 چرخه به طور متناوب در دمای 95·C برای 1 ثانیه و 60 درجه سانتیگراد برای 20 ثانیه). نتایج به صورت 2- بیان شد. مقادیر (کمیت نسبی) با △ACt=(Ct target-Ct GAPDH) درمان شده-(Ct target-Ct GAPDH)Sham1.

ارزیابی miRNA{0}} در موش‌های کنترل و تحت درمان.محتوای miRNA{{0}} در مجرای جمع‌آوری بصل النخاع داخلی موش‌های صحرایی کنترل و تیمار شده با استفاده از سنجش‌های پیشرفته miRNA TagMan (has-miR-137؛ شناسه سنجش؛ 477904 mir؛ Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA ارزیابی شد. US.A)، که اطلاع رسانی بسیار حساس و اختصاصی miRNA بالغ را با استفاده از PCR کمی فعال کرد. برش های کلیه حدود 0.5 میلی متر ساخته شد و به مدت 10 دقیقه در یک بافر حاوی 118 میلی مولار NaCl، 16 میلی مولار HEPES، 17 میلی مولار Na-Hepes، 14 میلی مولار گلوکز، 3.2 میلی مولار KCl، 2.5 میلی مولار CaCl2، 1.8 میلی‌مولار و 1.8 میلی‌مولار و mM1 متعادل شد. KH2PO4 (pH7.4). پاپیلای کلیه تحت استریومیکروسکوپ جداسازی شد. سپس نمونه‌های موش‌های کنترل و تیمار شده با قیچی مستقیماً در Trizol (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) خرد شدند تا RNA کل استخراج شود. کیت سنتز cDNA miRNA پیشرفته TaqMan （کاتالوگ n²∶A25576. Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) برای به دست آوردن سنتز cDNA طبق پروتکل ارائه شده توسط سازنده (واکنش Poly(A)tailing؛ واکنش بستن؛ واکنش رونویسی معکوس؛ واکنش miR-Amp) استفاده شد. RNA مصنوعی (UUAUUGCUUAAGAAUACGCGUAG) با 59-فسفر توسط Thermo Fisher Scientific سنتز شد و برای انجام یک منحنی کالیبراسیون برای درونیابی مقادیر نمونه miRNA و برای به دست آوردن ارزیابی دقیق (به نانوگرم) محتوای miR{29}} در نمونه 16، با استفاده از GraphPad Prism (نرم افزار GraphPad، سن دیگو، کالیفرنیا، ایالات متحده آمریکا).

تحلیل آماری.تمام مقادیر به صورت میانگین ± SEM گزارش شده است.<0.05 considered="" statistically="" different="">

اظهارات، تایید اخلاقی، و رضایت برای مشارکت.مطالعات حیوانی مطابق با دستورالعمل‌های ملی دانمارک برای مراقبت و نگهداری از حیوانات آزمایشی و دستورالعمل‌های منتشر شده مؤسسه ملی بهداشت انجام شد. کمیته اخلاق مراقبت از حیوانات مؤسسه پزشکی بالینی، دانشگاه آرهوس، پروتکل‌های مطالعه را با توجه به مجوزهای استفاده از حیوانات آزمایشی صادر شده توسط وزارت دادگستری دانمارک (شماره تأیید 2015-15-0201-00658) تأیید کرد. نویسندگان تأیید می کنند که تمام روش ها مطابق با دستورالعمل ها و مقررات مربوطه انجام شده است. علاوه بر این، نویسندگان تأیید می‌کنند که این مطالعه مطابق با دستورالعمل‌های ARRIVE انجام شده است.

منابع

1. El, SN & Karakaya, S. درخت زیتون (Olea europaea) اثرات مفید بالقوه ای بر سلامت انسان بر جای می گذارد. Nutr. Rev. 67, 632-638.

2. جوادی، ح.، یعقوب زاده، ح.، اصفهانی، زهرا، رضا معمارزاده، محمد و مهدی میرهاشمی، س. تأثیر عصاره برگ زیتون بر پاسخ متابولیک، عملکرد کبد و کلیه و بیومارکرهای التهابی در بیماران مبتلا به فشار خون. PJBS 22, 342-348.

3. Saibandith, B., Spencer, JPE, Rowland, IR & Commane, DM Olive polyphenols و سندرم متابولیک. مولکول ها

4. Cherif, S. et al. یک کارآزمایی بالینی عصاره گیاه اولیا در درمان فشار خون شریانی ضروری جی فارم. بلژیک 51، 69-71 (1996).

5. دیفونزو، GRA و همکاران. عصاره سبز از رقم زیتون کورتینا خصوصیات آنتی اکسیدانی و فعالیت بیولوژیکی را نشان می دهد. J. تابع. غذاها 31، 8.

6. هررو، ام و همکاران. امکانات جدید برای ارزش گذاری محصولات جانبی روغن زیتون. J. کروماتوگر. 1218، 7511-7520.

7. مارکتی، سی و همکاران. عصاره برگ زیتون غنی شده با اولئوروپئین بر پویایی کلسیم تأثیر می گذارد و حیات سلول های مزوتلیومای بدخیم را مختل می کند. eCAM 2015، 908493.

8. رومرو، ام و همکاران. اثرات ضد فشار خون عصاره برگ زیتون غنی شده با اولئوروپئین در موش های صحرایی فشار خون خود به خود تابع غذا 7، 584-593.

9. هال، JE اختلال عملکرد کلیه، به جای اختلال عملکرد عروق غیرکلیه. فشار خون ناشی از نمک را واسطه می کند. تیراژ 133، 894–906.

10. Wilson, JL, Miranda, CA & Knepper, MA Vasopressin and theregulation of aquaporin-2. کلین انقضا نفرول. 17، 751-764.