قسمت 2 تشخیص محصولات دارویی Cistanches Herba (Rou Cong Rong) با استفاده از امضاهای نوکلئوتیدی خاص
Mar 03, 2022
با جستجوی امضاهای نوکلئوتیدی توسعه یافته در این مطالعه، دریافتیم که 15 دارو از 31 داروی ثبت اختراع چینی که دارای برچسبCistanches Herbaدر عوض حاوی مواد تقلبی شامل هشت ماده تقلبی و هفت ماده تقلبی بود (جدول 2). به عنوان مثال، شش دسته با Cy جایگزین شدند. songaricum، شامل سه دسته از قرص Shihu Yeguang، یک دسته از قرص Kangguzhi Zengsheng، یک دسته از کپسول Sanbao، و یک دسته از ذرات Wenweishu.
علاوه بر این، دستههای مختلف از یک سازنده نتایج تا حدودی متفاوتی تولید کردند. به عنوان مثال، از میان سه دسته از یک سازنده (ZCY16، ZCY69، و ZCY71)، یک دسته شامل مخلوطی از Ci بود.دسرتیکولاو Cy. songaricum، یک دسته شامل مخلوطی ازسی. دسرتیکولاوسی. توبولوزاو یک دسته فقط شاملسی. توبولوزا. دو دسته از سازنده دیگر (ZCY44 و ZCY70) نیز متفاوت بودند: یک دسته حاوی Cy. songaricum، در حالی که دسته دیگر شاملسی. دسرتیکولاوسی. توبولوزا.
Cistanches Herbaدر 23 دارو از 31 داروی ثبت اختراع چینی آزمایش شده (جدول 2) شناسایی شد و تنها 16 نمونه معتبر بودند، به عنوان مثال، بدون مواد تقلبی یا مواد تقلبی.سی. توبولوزادر 16 دسته از داروهای ثبت اختراع چینی شناسایی شد و Ci. deserticola در 10 دسته شناسایی شد. O. coerulescens در هیچ یک از محصولات شناسایی نشد (جدول 2).

Cistanche deserticola اثرات زیادی دارد، برای اطلاعات بیشتر اینجا را کلیک کنید
بحث
ضرورت تدوین روشی جدید برای پایش محصولات دارویی موجود در بازارسیستانچهربا
Cistanches Herbaتونیکی است که به طور گسترده در داروهای ثبت اختراع چینی و سایر محصولات دارویی استفاده می شود. با این حال، کنترل کیفیت داروهای ثبت اختراع چینی به دلیل تنوع و پیچیدگی مواد تشکیل دهنده، چالش بزرگی است. به دلیل عدم نظارت نظارتی، فرصت قابل توجهی برای تقلب یا جعل محصول وجود دارد. علاوه بر این، تمام محصولات باید مطابق با فارماکوپه یا سایر استانداردها پردازش شوند. تقلب یا جعل در طول پردازش مجاز نیست. بنابراین، انواع روشهای کنترل کیفیت ایجاد شدهاند، مانند کروماتوگرافی مایع دوبعدی با برش قلب (یائو و همکاران، 2015)، طیفسنجی بازتابی نزدیک به فروسرخ (ژانگ و سو، 2014؛ ژانگ و همکاران، 2015). و کروماتوگرافی مایع - طیف سنجی جرمی (وانگ و همکاران، 2016b). با این حال، روشهای شیمی تحلیلی که در حال حاضر در کمیسیون فارماکوپه چین (2015) وجود دارد، نمیتواند برای احراز هویت همه مواد موجود در داروهای ثبت اختراع چینی یا تشخیص وجود مواد تقلبی استفاده شود. علاوه بر این، مطالعات نشان دادهاند که متابولیتهای هدفمند در گیاهان در طول پردازش محصول تغییر میکنند و در نتیجه تغییرات قابلتوجهی در نتایج آزمایش یا شکست کامل روشهای آزمایش ایجاد میشود (Ananingsih و همکاران، 2013). بنابراین، ابزارهای مولکولی مانند امضاهای نوکلئوتیدی خاص برای تقویت سیستم های کنترل کیفیت در برابر خطر جایگزینی فریبنده محصول و تقلب و گنجاندن مواد بدون برچسب آماده هستند.
اگرچه ITS/ITS2 ابزاری با کارایی بالا برای شناسایی داروهای گیاهی در نظر گرفته می شود، این توالی ها را نمی توان از نمونه های بسیار پردازش شده تقویت کرد (Newmaster et al., 2013; de Boer et al., 2015). وانگ و همکاران گزارش کرد که ITS2 را نمی توان از عصاره یا جوشانده های آنجلیکا Sinensis Radix که بیش از 120 دقیقه جوشانده اند، تقویت کرد (وانگ و همکاران، 2016a). با توجه به فن آوری های سنتی و کمیسیون فارماکوپه چین (2015)، Cistanches Herba همیشه به شدت پردازش می شود تا اثربخشی دارویی آن افزایش یابد. این فرآیندها شامل خشک کردن در کوره، نمک زدن و بخارپز کردن با شراب است (Zou et al., 2017) که منجر به تخریب DNA می شود. علاوه بر این، مواد کمکی مختلفی مانند عسل، نشاسته و دکسترین در طول فرآوری اضافه میشوند. اگر این مواد به طور کامل حذف نشوند، خلوص DNA تحت تأثیر قرار می گیرد. به عنوان مثال، فرآیند تولید زیر برای تولید کپسول های Sanbao حاوی Cistanches Herba استفاده می شود: "برش های دارویی را به مدت 1.5 ساعت دو بار بجوشانید، جوشانده ها را ترکیب کرده و مخلوط را فیلتر کنید. فیلتر را به تراکم نسبی 1.20-1.25 (در 80) غلیظ کنید. ◦C) پودرهای آسیاب شده دیگر را اضافه کنید و آنها را با هم مخلوط کنید تا مخلوط یکدستی به دست آید سپس مخلوط را در دمای 60 درجه سانتیگراد خشک کنید و سپس آن را به صورت ریز خرد کنید.

پودر." با این حال، پس از فرآیند تولید که در بالا توضیح داده شد، ممکن است در طول استخراج DNA داروهای ثبت اختراع چینی مشکلاتی وجود داشته باشد و ممکن است قطعات طولانی از DNA تخریب شده تکثیر نشوند، که از شناسایی عوامل تقلبی جلوگیری می کند. بنابراین، برای اطمینان از کیفیت و خلوص DNA، ما مراحل اضافی را قبل از استخراج DNA ژنومی اضافه کردیم، از جمله شستشو با بافر پیش شستشو و شستشو ده لوله موازی در یک لوله برای هر دسته.
اگرچه تمام داروهای ثبت اختراع چینی مورد استفاده در مطالعه حاضر حاوی 6 تا 25 ماده بودند، جفت آغازگرهای توسعهیافته میتوانند به طور خاص توالیهای تقلبی را در این داروهای ثبت اختراع چینی تقویت کنند. توالی یابی مستقیم محصولات PCR فایل های ردیابی تمیزی را نشان داد. بنابراین، این روش امضای نوکلئوتیدی قادر به شناسایی مواد تشکیل دهنده گونه های معتبر و مواد تقلبی است و باید کاربرد ابزارهای تشخیص مولکولی مبتنی بر DNA را برای نظارت بر بازار گسترش دهد.

آسیب و بیماری کلیه را می توان با سیستانچ درمان کرد
امضاهای نوکلئوتیدی برای شناسایی موثر محصولات گیاهی Cistanches
ابزارهای مولکولی که از فناوری PCR استفاده می کنند برای احراز هویت محصول دارویی در سیستم های کنترل کیفیت بسیار امیدوار کننده هستند. کاربرد موفقیت آمیز پرایمرها برای شناسایی مواد تقلبی تجزیه شده با DNA از Cistanches Herba نشان می دهد که یک روش تشخیص مبتنی بر PCR می تواند به طور گسترده مورد استفاده قرار گیرد. در بازار داروهای گیاهی چین، قیمت مواد اولیه گونه Cistanches Herba بیش از پنج برابر بیشتر از قیمت مواد تقلبی آن است. نتایج ما نشان داد که Cy. songaricum رایج ترین عامل تقلبی Cistanches Herba در بازار است و پس از آن Ci. Sinensis. Cy. songaricum اضافه شد زیرا این داروها ویژگی های مورفولوژیکی مشابهی دارند. علاوه بر این، ترکیب شیمیایی Ci. sinensis شبیه به Cistanches Herba است. به عنوان نشانگرهای کنترل کیفیت برایCistanches Herbaعصاره ها، اکیناکوزید و اکتئوزید را می توان به طور ارزان از Ci استخراج کرد. sinensis بنابراین، برخی از کارخانه های داروسازی از Ci. sinensis به عنوان یک جایگزین در تولید عصاره گیاه سیستانچ. در مجموع، نتایج این مطالعه نشان می دهد که تقلب قابل توجهی در بازار محصولات دارویی وجود دارد.
تقلب در پزشکی ثبت اختراع چینی مشابه مواردی است که در کشورهای دیگر وجود دارد. سطوح مشابهی از تقلب در آمریکای شمالی (نیومستر و همکاران، 2013)، اروپا (راکلاریو و همکاران، 2017)، و آسیا (چنگ و همکاران، 2014؛ شانموگاناندان و همکاران، 2016؛ گائو و همکاران) ثبت شده است. ، 2017). در این مطالعه، نرخ تقلبی داروهای ثبت اختراع چینی تقریباً 48.4 درصد بود که تنها 16 نمونه از 31 نمونه Cistanches Herba معتبر بودند. علاوه بر این، ما حدس زدیم که نتایج متفاوت تولید شده در محصولات تولید کننده یکسان را می توان به تفاوت در کیفیت دسته های مختلف مواد دارویی چینی نسبت داد. بنابراین، برای کنترل کیفیت داروهای ثبت اختراع چینی، مواد اولیه باید قبل از تبدیل شدن به محصولات، احراز هویت شوند.
تقلب ازCistanches Herbaبه طور سنتی با مسائل عرضه و تقاضای مواد خام همراه بوده است.سی. دسرتیکولاوسی. توبولوزادو گیاه اصلی هستند که در حال حاضر برای فرمولاسیون استفاده می شوندCistanches Herba. با این حال، سی. deserticola تنها گونه اصلی در Cistanches Herba معتبر سنتی است که در کمیسیون فارماکوپه چین (2000) فهرست شده است، که در آن Ci. توبولوزا به عنوان یک زائل شناخته می شود. به دلیل کمبود Ci. منابع کویر،سی. توبولوزااز سال 2005 به عنوان مکمل در فارماکوپه چینی ذکر شده است (جیانگ و تو، 2009). تا همین اواخر، قیمت این گیاهان به طور قابل توجهی متفاوت بوده است. سی. tubulosa بسیار ارزانتر از Ci بوده است. دسرتیکولا، زیرا منبع بسیار بیشتری از اولی وجود دارد. در اینجا، نتایج ما نشان داد که Ci. tubulosa بیشتر در محصولات تجاری Cistanches Herba استفاده می شود.
در نتیجه، امضاهای نوکلئوتیدی و مبتنی بر PCR
روشهای توسعهیافته در این مطالعه ممکن است بهعنوان ابزار مفیدی برای صنعت فرآوردههای دارویی برای احراز هویت مواد تشکیل دهنده و شناسایی مواد تقلبی درسیستانچمحصولات هربا با توجه به نتایج حساسیت، حتی اگر نسبت تقلب یک در ده هزار باشد، می توان آن را از طریق qRT-PCR تشخیص داد. به این معنی است که هنگامی که یک امضای نوکلئوتیدی در آن شناسایی شدسیستانچمحصولات کاربردی حاوی گیاه، می تواند به عنوان یک ماده تقلبی یا تقلبی شناسایی شود. راه حل جدیدی برای تشخیص مواد تقلبی یا Cistanches Herba تقلبی ارائه شد که قبلاً از طریق روشهای تشخیص شیمیایی در فارماکوپه چینی موجود نبود. علاوه بر این، این روش میتواند برای تایید انواع فزاینده دارو و گسترش کاربرد ابزارهای تشخیص مولکولی مبتنی بر DNA برای نظارت بر بازار استفاده شود.

برای تسکینمزمنکلیهمرضباسیستانچ
مشارکت های نویسنده
JH این مطالعه را تصور کرد و در طراحی آن شرکت کرد. XW، RX، و JC نمونههایی را ارائه کردند و آزمایشها را انجام دادند. XW داده ها را تجزیه و تحلیل کرد. XW، JH، ZZ، S-GN، JS و SC نسخه خطی را تهیه کردند. همه نویسندگان مقاله نهایی را خوانده و تایید کرده اند.
منابع مالی
این کار توسط بنیاد ملی علوم طبیعی چین [شماره کمک مالی 81673552]، نوآوری CAMS پشتیبانی شد.
صندوق برای علوم پزشکی [شماره کمک مالی 2016-I2 M- 3-016]، و پروژه کلیدی صندوق متحد بنیاد ملی علوم طبیعی چین [شماره گرنت U1403224].
قدردانی
مایلیم از همکارانمان که در جمع آوری نمونه، شناسایی، کار آزمایشگاهی و آماده سازی نسخه خطی کمک کردند، از جمله Chaokui Sun، Dianyun Hou، و Piao Zhang تشکر کنیم.
مواد تکمیلی
مطالب تکمیلی این مقاله را میتوانید به صورت آنلاین در آدرس زیر پیدا کنید: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fpls.2018. 01643/کامل#مواد-تکمیلی
شکل تکمیلی S1|نتیجه هم ترازی توالی ITS2 از شش گونه.
شکل تکمیلی S2|الکتروفورز ژل آگارز تمام نمونه ها.
جدول تکمیلی S1|اطلاعات نمونه برداری از Cistanches Herba و مواد تقلبی آن.
جدول تکمیلی S2|اطلاعات توالی گونه های مرتبط از GenBank دانلود شده است.
جدول تکمیلی S3|ترکیبات اعلام شده از نمونه های مختلف پزشکی ثبت اختراع چینی.
برگه اطلاعات تکمیلی S1|تمام توالی های به دست آمده در این مطالعه.

سیستانچدسرتیکولا اثرات زیادی دارد
منابع
Ananingsih، VK، Sharma، A.، و Zhou، W. (2013). کاتچین های چای سبز در طول پردازش و ذخیره سازی مواد غذایی: بررسی پایداری و تشخیص مواد غذایی Res. بین المللی 50، 469-479. DOI: 10.1016/j.foodres.2011.03.004
Chen, H., Jing, FC, Li, CL, Tu, PF, Zheng, QS, and Wang, ZH (2007). Echinacoside از سطوح خارج سلولی جسم مخطط مونوآمین جلوگیری می کند
انتقالدهندههای عصبی ناشی از کاهش در 6-موشهای با ضایعه هیدروکسی دوپامین. J. Ethnopharmacol. 114، 285-289. DOI: 10.1016/j.jep.2007.07.035
Chen, S., Yao, H., Han, J., Liu, C., Song, J., Shi, L., et al. (2010). اعتبار سنجی منطقه ITS2 به عنوان بارکد DNA جدید برای شناسایی گونه های گیاهی دارویی PLoS ONE 5:e8613. DOI: 10.1371/journal.pone.0008613
Cheng, X., Su, X., Chen, X., Zhao, H., Bo, C., Xu, J., et al. (2014). تجزیه و تحلیل مواد بیولوژیکی آماده سازی طب سنتی چینی بر اساس توالی یابی با توان بالا: داستان لیووی دیهوانگ وان. علمی تکرار 4:5147. DOI: 10.1038/srep05147
کمیسیون فارماکوپه چین (2000). فارماکوپه جمهوری خلق چین. بخش اول. پکن: انتشارات علوم پزشکی چین.
کمیسیون فارماکوپه چین (2015). فارماکوپه جمهوری خلق چین. بخش اول. پکن: انتشارات علوم پزشکی چین.
د بوئر، اچ جی، ایچیم، ام سی، و نیومستر، اس جی (2015). بارکد DNA و مراقبت دارویی داروهای گیاهی Drug Saf. 38، 611-620. DOI: 10.1007/s40264-015-0306-8
Dubey, B., Meganathan, PR, and Haque, I. (2011). مینی بارکد DNA: رویکردی برای شناسایی پزشکی قانونی برخی از گونههای مار هندی در معرض خطر پزشک قانونی. علمی بین المللی ژنت. 5، 181-184. DOI: 10.1016/j.fsigen.2010.03.001
ادگار، RC (2004). MUSCLE: تراز چند توالی با دقت بالا و توان عملیاتی بالا. Nucleic Acids Res. 32، 1792-1797. DOI: 10.1093/var/gkh340
فو، ال (1991). کتاب داده قرمز گیاهان چین قسمت اول. پکن: انتشارات علمی، 502.
گائو، زی، لیو، ی.، وانگ، ایکس، سونگ، جی.، چن، اس.، راگوپاتی، اس.، و همکاران. (2017). فناوری مشتق از بارکدگذاری DNA (روشهای امضای نوکلئوتیدی و SNP Double Peak) موارد تقلبی و جایگزینی را در داروهای ثبت اختراع چینی تشخیص میدهد. علمی تکرار 7:5858. DOI: 10.1038/s41598-017-05892- سال
Gu، CM، Yang، XY، و Huang، LF (2016). سیستانچس هربا: بررسی نوروفارماکولوژی. جلو. داروسازی 7:289. DOI: 10.3389/fphar.2016.00289
حاجی بابایی، ام.، اسمیت، ما، جانزن، دی اچ، رودریگز، جی جی، ویتفیلد،
JB و Hebert، PDN (2006). یک بارکد مینیمالیستی می تواند نمونه ای را که DNA آن تخریب شده است شناسایی کند. مول. Ecol. یادداشت های 6، 959-964. DOI: 10.1111/j.1471-8286.2006.01470.x
کنوانسیون دارویی ژاپن (2016). فارماکوپه ژاپنی، چاپ هفدهم. توکیو: وزارت بهداشت، کار و رفاه ژاپن، 1831-1832.
جیانگ، ی.، و تو، پی اف (2009). تجزیه و تحلیل ترکیبات شیمیایی در گونه Cistanche. J. کروماتوگر. 1216، 1970-1979. DOI: 10.1016/j.chroma.2008.07.031
Keller, A., Schleicher, T., Schultz, J., Müller, T., Dandekar, T., and Wolf, M. (2009). 5.8S{3}}برهم کنش S rRNA و حاشیه نویسی ITS2 مبتنی بر HMM. ژن 430، 50-57. doi: 10.1016/j.gene.2008.10.012
لی، ال.، یانگ، اف.، ژانگ، تی.، تو، پی.، وو، ال. و ایتو، ی. (2001). جداسازی آمادهسازی و خالصسازی اکتئوزید و 2'-استیل اکتئوزید از Cistanches salsa (CA Mey.) G. Beck توسط کروماتوگرافی ضد جریان با سرعت بالا. J. کروماتوگر. A 912، 181-185. DOI: 10.1016/S{10}}(01){12}}
Li, Z., Lin, H., Gu, L., Gao, J., and Tzeng, CM (2016). Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): یکی از بهترین هدایای دارویی طب سنتی چین است. جلو. داروسازی 7:41. DOI: 10.3389/fphar.2016.00041
لیو، XM، لی، جی.، جیانگ، ی.، ژائو، ام بی، و تو، پی اف (2013). ترکیبات شیمیایی از Cistanche Sinensis (Orobanchaceae). بیوشیمی. سیستم Ecol. 47، 21-24. DOI: 10.1016/j.bse.2012.09.003
لیو، ی.، وانگ، ایکس، وانگ، ال.، چن، ایکس.، پانگ، ایکس، و هان، جی. (2016). امضای نوکلئوتیدی برای شناسایی جینسنگ آمریکایی و محصولات آن. جلو. علوم گیاهی 7:319. DOI: 10.3389/fpls.2016.00319
Lo, YT, Li, M., and Shaw, PC (2015). شناسایی گیاهان تشکیل دهنده جوشانده جینسینگ توسط نشانگرهای DNA چانه. پزشکی 10:1. DOI: 10.1186/s{5}}x
Meusnier, I., Singer, GA, Landry, JF, Hickey, DA, Hebert, PD, and Hajibabaei, M. (2008). یک مینی بارکد DNA جهانی برای تجزیه و تحلیل تنوع زیستی. BMC Genomics 9:214. DOI: 10.1186/1471-2164-9-214
نیومستر، اس جی، گرگوریچ، ام.، شانموگاناندان، دی.، راملینگام، اس.، و راگوپاتی، اس. (2013). بارکد DNA آلودگی و جایگزینی را در محصولات گیاهی آمریکای شمالی شناسایی می کند. BMC. پزشکی 11:222. DOI: 10.1186/{5}}
Raclariu، AC، Mocan، A.، Popa، MO، Vlase، L.، Ichim، MC، Crisan، G.، و همکاران. (2017). احراز هویت محصول Veronica officinalis با استفاده از metabarcoding DNA و HPLC-MS تقلب گسترده با Veronica chamaedrys را نشان می دهد. جلو. داروسازی 8:378. DOI: 10.3389/fphar.2017.00378
Shanmughanandhan، D.، Ragupathy، S.، Newmaster، SG، Mohanasundaram، S.، و Sathishkumar، R. (2016). تخمین احراز هویت و تقلب محصول گیاهی در هند با استفاده از یک کتابخانه مواد مرجع بیولوژیکی مبتنی بر DNA دارای کوپن. Drug Saf. 39، 1211-1227. DOI: 10.1007/s40264-016- 0459-0
Sun، ZY، Song، JY، Yao، H. و Han، JP (2012). شناسایی مولکولی Cistanches Herba و مواد تقلبی آن بر اساس توالی nrITS2. جی. مد. گیاهان Res. 6، 1041-1045. DOI: 10.5897/JMPR11.1115
Tamura، K.، Peterson، D.، Peterson، N.، Stecher، G.، Nei، M.، و Kumar، S. (2011). MEGA5: تجزیه و تحلیل ژنتیک تکاملی مولکولی با استفاده از روشهای حداکثر احتمال، فاصله تکاملی و حداکثر صرفهجویی. مول. Biol. تکامل. 28، 2731-2739. DOI: 10.1093/molbev/msr121
Wang, Q., Song, W., Qiao, X., Ji, S., Kuang, Y., Zhang, ZX, et al. (2016b). کمی سازی همزمان 50 ترکیب فعال زیستی از فرمول طب سنتی چینی جوشانده Gegen-Qinlian با استفاده از کروماتوگرافی مایع با عملکرد فوق العاده بالا همراه با طیف سنجی جرمی پشت سر هم. J. کروماتوگر. 1454، 15-25. DOI: 10.1016/j.chroma.2016. 05.056
وانگ، تی، ژانگ، XY، و Xie، WY (2012). Cistanche deserticola
YC Ma، "Desert ginseng": یک بررسی. صبح. جی. چین. پزشکی 40، 1123-1141. DOI: 10.1142/S0192415X12500838
Wang, X., Liu, Y., Wang, L., Han, J., and Chen, S. (2016a). امضای نوکلئوتیدی برای شناسایی ریشه گلپر Sinensis (Danggui) و محصولات آن. علمی تکرار 6:34940. DOI: 10.1038/srep34940
یائو، CL، یانگ، WZ، Wu، WY، Dai، J.، Hou، JJ، Zhang، JX،
و همکاران (2015). کمی سازی همزمان پنج ساپونین Panax notoginseng با کروماتوگرافی مایع دوبعدی قلب برش چندگانه: توسعه روش و کاربرد برای کنترل کیفیت هشت داروی Notoginseng حاوی اختراع چینی. J. کروماتوگر. 1402، 71-81. DOI: 10.1016/j.chroma.2015.05.015
ژانگ، سی، و سو، جی (2014). استفاده از طیف سنجی نزدیک به مادون قرمز برای تجزیه و تحلیل و ارزیابی سریع کیفیت محصولات سنتی چینی Acta. فارم. گناه ب 4، 182-192. DOI: 10.1016/j.apsb.2014.04.001
Zhang, W., Qu, Z., Wang, Y., Yao, C., Bai, X., Bian, S., et al. (2015). طیفسنجی بازتابی مادون قرمز نزدیک (NIRS) برای تعیین سریع جین سنوزید Rg1 و Re در قرص Naosaitong پزشکی چینی. اسپکتروشیم. Acta. یک مول. بیومول. Spectrosc. 139، 184-188. DOI: 10.1016/j.saa.2014.11.111
زو، پی، سونگ، ی، لی، دبلیو، لی، جی.، تو، پی، و جیانگ، ی. (2017). استفاده از متابولومیک مبتنی بر 1H NMR برای تمایز بخشهای مختلف و توسعه یک گردش کار پردازش جدید برای Cistanche deserticola. Acta. فارم. گناه B 7, 647-656. DOI: 10.1016/j.apsb.2017.07.003
بیانیه تضاد منافع: نویسندگان اعلام می کنند که این تحقیق در غیاب هرگونه روابط تجاری یا مالی که می تواند به عنوان تضاد منافع بالقوه تعبیر شود، انجام شده است.
حق چاپ © 2018 وانگ، زو، چن، سانگ، نیومستر، هان، ژانگ و چن. این یک مقاله با دسترسی آزاد است که تحت شرایط Creative Commons Attribution License (CC BY) توزیع شده است. استفاده، توزیع، یا تکثیر در سایر انجمنها مجاز است، مشروط بر اینکه نویسنده (ها) اصلی و صاحب (ها) حق نسخهبرداری اعتبار داشته باشند و طبق رویه دانشگاهی پذیرفته شده، به انتشار اصلی در این مجله استناد شود. هیچ گونه استفاده، توزیع، یا تولید مثلی که با این شرایط مطابقت ندارد مجاز نیست.






