اکیناکوزید از سیستانش توبولوزا به طور موثر پوکی استخوان را درمان می کند

تماس: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ایمیل:audrey.hu@wecistanche.com

بخش Ⅰ: اثربخشی و ایمنی اکیناکوزید در مدل استئوپنی موش صحرایی

Xiaolin Yang، 1 Fei Li، 2 Yanan Yang، 3 Jinyang Shen، 2 Run Zou، 2 Panpan Zhu، 2 Chunfeng Zhang، 2 Zhonglin Yang، 2 و Ping Li

این مطالعه با هدف بررسی اثربخشی و ایمنیEچیناکوزید(ECH) با استفاده از یک مدل موش استئوپنی. چهل و هشت موش ماده نژاد Sprague-Dawley 6- ماهه به طور تصادفی به یک گروه شمی (SHAM) و پنج زیرگروه OVX (تخمدان برداشته شده) تقسیم شدند: SHAM با وسیله نقلیه 0.5 درصد کربوکسی متیل سلولز سدیم. 0.5 درصد CMC-Na) و OVX با وسیله نقلیه (OVX)، OVX با 17 استرادیول (E2) و OVX باECH (اکیناکوزید) از دوزهای درجه بندی شده (ECH (اکیناکوزید)ECH-L، ECH -M، و ECH-H). اثرات ECH(اکیناکوزید)و E2 بر روی پارامترهای بیوشیمیایی سرم، تراکم معدنی استخوان (BMD)، خواص بیومکانیکی استخوان، ریزمعماری استخوان، و ایمونوهیستوشیمی مورد بررسی قرار گرفت و ارزیابی‌های ایمنی نیز مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج نشان داد که ECH(اکیناکوزید)درمان‌ها باعث بهبود کل BMD استخوان ران، ریزمعماری استخوان و خواص بیومکانیکی و کاهش سطح نشانگر سرمی در مقایسه با گروه OVX شد. علاوه بر این، ECH (اکیناکوزید)تجویز به طور قابل توجهی باعث افزایش سطح استئوپروتجرین (OPG) و کاهش فعال کننده گیرنده لیگاند فاکتور هسته ای (RANKL) در سرم و همچنین در پروگزیمال فمور شد. مهم،ECH (اکیناکوزید)درمان پارامترهای لیپیدی را بدون بروز کلی عوارض جانبی رحم و غده پستانی در مقایسه با گروه‌های OVX و SHAM بهبود بخشید. این مطالعه نشان داد که تجویزECH (اکیناکوزید) به مدت 12 هفته می تواند به طور موثر و ایمن از ایجاد OVX جلوگیری کندپوکی استخواندر موش‌ها از طریق افزایش نسبت OPG/RANKL.

سیستانچ اکیناکوزید می تواند پوکی استخوان را درمان کند

1. مقدمه

پوکی استخوانیکی از انواع اختلالات متابولیک اسکلت است که با کاهش توده استخوانی و زوال ریزمعماری بافت استخوان مشخص می شود که ممکن است منجر به شکنندگی و شکستگی اسکلتی شود. این بیماری در حال حاضر به یکی از تهدیدهای اصلی برای سلامت جمعیت سالخورده تبدیل شده است، که با شیوع تخمینی 200 میلیون نفر در سراسر جهان نشان داده شده است، و هزینه های سالانه برای این بیماری، تقریباً از 10 میلیارد دلار فراتر رفته است. 3، 4]. کاهش استروژن، هموستاز استخوان را مختل می کند، تمایز و فعالیت استئوبلاست ها و استئوکلاست ها را تغییر می دهد و بنابراین نقش بسیار مهمی در شروع و توسعه دارد.پوکی استخوانو نشان داده شده است که یک عامل خطر اصلی برای ایجاد یائسگی استپوکی استخواندر زنان [5، 6]. استرهای استرادیول و استروژن های کونژوگه اثرات سرکوب کنندگی قوی بر روی دارندپوکی استخوانفعالیت در استخوان [7]. در حال حاضر، تجویز بی‌فسفونات‌ها و درمان جایگزینی استروژن (ERT) دو شکل اصلی درمان و پیشگیری ازپوکی استخوانو حتی میزان شکستگی در دوران یائسگی را کاهش دهدپوکی استخوانزنان [8، 9]. با این حال، بیس فسفونات ها منجر به شکستگی اتروماتیک استخوان در نتیجه یک حالت آدینامیک مشابه آنچه در بیماران تحت همودیالیز نگهدارنده مزمن توصیف شده است [10]، و درمان های طولانی مدت استروژن با عوارض جانبی نامطلوب، به ویژه بروز بیشتر کرونری قلب همراه است. بیماری، سرطان سینه مهاجم، سکته مغزی، آمبولی ریه، سرطان آندومتر، سرطان کولورکتال و شکستگی لگن [11]. بنابراین، استراتژی های درمانی موثر و ایمن جدید برایپوکی استخوانبسیار مورد نیاز هستند.

Cistanche tubulosa (Schrenk) R. Wight (گیاه انگلی Orobanchaceae)به طور گسترده در شمال آفریقا و کشورهای آسیایی توزیع شده است، و ساقه C. tubulosa معمولا برای درمان کمبود کلیه و بیماری های عصبی به عنوان یک عامل تقویت کننده استفاده می شود [12].ECH (اکیناکوزید) (شکل 1) یکی از اجزای اصلی هربا طب سنتی چینی معروف استسیستانچ(ساقه هایسیستانچدسرتیکولا،سیستانچسالسا یاسیستانچتوبولوزا) [13]. تحقیقات نشان داد کهECH (اکیناکوزید)به عنوان یک ترکیب پلی فنلی طبیعی، دارای انواع مختلفی از فعالیت های دارویی مانند آنتی اکسیدان، ضد التهاب، محافظت از اعصاب، محافظت از کبد، حذف رادیکال اکسید نیتریک [14] و گشادکننده عروق [15] است. در حال حاضر، هیچ گزارشی در مورد اثرات درمانی آن وجود نداردECH (اکیناکوزید) و نجات آنECH (اکیناکوزید) برپوکی استخواندر مدل های موش OVX.

شکل 1: ساختار شیمیایی اکیناکوزید از سیستانش توبولوزا

مطالعه قبلی ما این را نشان دادECH (اکیناکوزید)می تواند بازسازی استخوان را از طریق افزایش نسبت OPG/RANKL در سلول های MC3T{1}}E1 [16] تحریک کند. این نشان می دهد کهECH (اکیناکوزید)مستلزم بررسی بیشتر برای بررسی بیشتر این موضوع، آزمایش‌هایی را در یک مدل موش OVX [17] انجام دادیم، یک مدل استاندارد برای بررسی مورفولوژیکی وECH (اکیناکوزید)پس از درمان های مختلف برایپوکی استخوان. در این گزارش، ما اثرات 12 هفته ای را ارزیابی کردیمECH (اکیناکوزید)درمان پارامترهای بیوشیمیایی در سرم، کیفیت استخوان، ریزمعماری استخوان، و ایمونوهیستوشیمی، و همچنین شاخص‌های ایمنی از جمله پارامترهای لیپیدی، آنتی‌ژن سرطان جنینی (CEA) و آنتی‌ژن سرطان 125 (CA{1}}) در سرم، رحم و پستان بافت شناسی غدد در موش های صحرایی OVX مهمتر از همه، ما ابتدا اثر آن را گزارش کردیمECH (اکیناکوزید)بر روی سیستم OPG/RANKL با بررسی سطوح سرمی و استخوانی OPG/RANKL.

Cistanche tubulosa

2. مواد و روشها

2.1. مواد گیاهی و حیوانات.

ساقه های تازه ازسیستانچتوبولوزا(Schrenk) R. Wight، برداشت شده در نوامبر 2010 در سین کیانگ، چین، از موسسه اکولوژی و جغرافیا آکادمی علوم چین در سین کیانگ، چین خریداری شد. این مواد توسط پروفسور پینگ لی، دانشکده طب سنتی چینی، دانشگاه داروسازی چین شناسایی شد. نمونه کوپن (شماره 02369433) در آزمایشگاه ما در دانشگاه داروسازی چین سپرده شده است.

تمام مواد در دمای اتاق تا وزن ثابت خشک شدند.ECH (اکیناکوزید)از عصاره اتانولی جدا و خالص شدسیستانچتوبولوزا(Schenk) R. Wight توسط آزمایشگاه ما طبق روشی که قبلا گزارش شده بود [18] با تغییرات جزئی، و ساختار آن توسط طیف‌سنجی UV، IR، MS و NMR تأیید شد. خلوص آن (98.5 درصد) توسط HPLC Agilent 1260 Series با آشکارساز DAD (Agilent Scientific, Co., USA) تعیین شد. 17-استرادیول (E2، Sigma؛ خلوص بیشتر یا مساوی 98 درصد) به عنوان کنترل مثبت استفاده شد.

Echinacoside از Cistanche tubulosa

2.2. درمان دارویی.

موش ها به طور تصادفی به شش گروه (8 موش در هر گروه) تقسیم شدند: تحت عمل جراحی (SHAM)، تخمدان دو طرفه (OVX)، درمان OVX و E2، و سه OVX دیگر و دوزهای مختلفECH (اکیناکوزید)گروه های درمانی همه موش‌ها از طریق تزریق داخل صفاقی (IP) 300 میلی‌گرم بر کیلوگرم کلرال هیدرات (سینوفارم، چین) بیهوش شدند و سپس در هفته صفر تخمدان برداشته شدند و گروه SHAM تحت یک تخمدان ساختگی قرار گرفتند. عمل جراحی تحت شرایط آسپتیک و طبق پروتکل مراقبت از حیوانات دانشگاه دارویی چین انجام شد. موش‌ها به مدت 4 هفته بدون درمان رها شدند تا موش‌ها بهبود یابند و به استئوپنی مبتلا شوند. پس از 4 هفته، موش‌های گروه OVX و E2 به‌مدت 12 هفته تزریق روزانه داخل معده (IG) E2 (50g/kg/day) را دریافت کردند. موش های شم و OVX به عنوان وسیله نقلیه تحت تجویز روزانه 0.5 درصد CMC-Na (سینوفارم، چین) داخل معده قرار گرفتند. E2 وECH (اکیناکوزید)در وسیله نقلیه ای با 0.5 درصد CMC-Na، و موش ها در OVX وECH (اکیناکوزید)گروه ها روزانه IG را دریافت کردندECH (اکیناکوزید)(ECH-L، 30 mg/kg/day؛ ECH-M، 90 mg/kg/day؛ و ECH-H، 270 mg/kg/day) به ترتیب به مدت 12 هفته. وزن بدن به صورت هفتگی اندازه گیری شدECH (اکیناکوزید)دوز بر این اساس تنظیم شد.

2.3. اتانازی حیوانات و مجموعه نمونه.

در کالبدگشایی، خون از شریان کاروتید تحت بیهوشی عمومی در اوایل صبح جمع آوری شد. خون اجازه لخته شدن داده شد و در 3،{1}} ×g به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شد. سرم برداشت و در دمای 20- درجه سانتیگراد ذخیره شد تا زمانی که برای سنجش های بیوشیمیایی استفاده شود. پس از اتانازی حیوانات، استخوان ران برای BMD، Micro-CT و ECH جدا شد.اکیناکوزید) و آنالیز ایمونوهیستوشیمی، و غدد پستانی و رحم برداشته شدند، از چربی آزاد شدند و در محلول فرمالدئید 10 درصد بافر فسفات سدیم (PBS) ثابت شدند و سپس در دمای 4 درجه سانتیگراد نگهداری شدند تا برای ارزیابی بافت شناسی و ایمونوهیستوشیمی مورد استفاده قرار گیرند. ایمنی ازECH (اکیناکوزید)

2.4. ارزیابی اثربخشی

2.4.1. آنالیز بیوشیمیایی سرم

آلکالین فسفاتاز (ALP) با متابولیسم استخوان و تمایز استئوبلاست‌ها مرتبط است و فعالیت آن یکی از رایج‌ترین شاخص‌های تمایز استئوبلاست و خواص استخوان‌زایی است [19]. بنابراین، سطح سرمی ALP با استفاده از کیت سنجش فعالیت ALP (موسسه مهندسی زیستی نانجینگ جیانچنگ؛ نانجینگ، چین) تعیین شد. اسید فسفاتاز 5b مقاوم به تارتارات (TRACP{3}}b)، که توسط استئوکلاست‌ها ترشح می‌شود، با فعالیت تحلیل استخوان در متابولیسم غیرطبیعی استخوان ارتباط دارد [20]. برای نشانگرهای تحلیل استخوان، سطوح TRACP{5}}b با کیت‌های سنجش ایمونوسوربنت متصل به آنزیم (ELISA) (R&D Systems Inc.) در سرم اندازه‌گیری شد. سرم OPG و RANKL نیز با کیت های الایزا (R&D Systems Inc.) مورد سنجش قرار گرفت. تمام اندازه گیری های کیت های الایزا طبق پروتکل های ارائه شده توسط سازندگان انجام شد.

2.4.2. اندازه گیری تراکم مواد معدنی استخوان.

تراکم معدنی استخوان (BMD) کل استخوان ران سمت راست با استفاده از دستگاه جذب سنجی اشعه ایکس با انرژی دوگانه Discovery W (DEXA, Hologic Inc., Boston MA, USA) مجهز به نرم افزار مناسب (ویرایش 13.1.2) برای ارزیابی تراکم استخوان اندازه گیری شد. در حیوانات آزمایشگاهی کوچک پس از اسکن، BMD در کل فمور سمت راست برای تجزیه و تحلیل آماری به دست آمد. محققی که اندازه‌گیری را انجام می‌داد از درمان‌هایی که موش‌ها دریافت کرده بودند بی‌اطلاع بود.

2.5. آمار.

همه نتایج به صورت میانگین ± انحراف معیار (SD) ارائه شده است. تفاوت‌های آماری بین گروه‌های کنترل شم، کنترل OVX و گروه‌های درمانی مختلف با استفاده از آنالیز واریانس یک‌طرفه (ANOVA) و سپس مقایسه‌های چندگانه تعقیبی با استفاده از آزمون t-کمترین تفاوت فیشر (LSD) مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. همه محاسبات با استفاده از SPSS نسخه 15.{3}} برای ویندوز (SPSS، شیکاگو، IL، ایالات متحده آمریکا) انجام شد. در همه تجزیه و تحلیل ها، یک مقدار P از<0.05 was="" considered="" to="" be="" statistically="">

3. نتایج

3.1. ارزیابی اثربخشی

3.1.1. آنالیز بیوشیمیایی سرم

سطوح سرمی ALP و نشانگرهای چرخش استخوان TRACP{0}}b در پایان درمان ارزیابی شد، OVX منجر به افزایش قابل توجهی در سطح سرمی ALP و TRACP-5 در مقایسه با گروه‌های تحت عمل جراحی شد. پس از تجویز Echinacoside یا E2، سطح سرمی ALP و TRACP{4}b در هر سه گروه Echinacoside یا E2 به طور قابل توجهی کاهش یافت. علاوه بر این، دوز بالای اکیناکوزید در مقایسه با گروه OVX به طور قابل توجهی کمترین سطوح (25.82 درصد و 38.05 درصد) را داشت (P< 0.01).="" all="" three="" doses="" of="" echinacoside="" treatments="" had="" a="" similar="" effect="" as="" e2="" in="" changing="" bone="" turnover="" markers="">< 0.05).="" at="" the="" end="" of="" the="" protocol,="" assays="" for="" serum="" opg="" and="" rankl="" levels="" were="" performed.="" all="" doses="" of="" echinacoside="" treatment="" groups="" had="" significantly="" higher="" levels="" of="" opg="" and="" opg/rankl="" ratios,="" as="" well="" as="" significantly="" lower="" rankl="" levels="" than="" e2-treated="" or="" vehicle-treated="" ovx="" groups="" (table="" 1).="" the="" highest="" levels="" of="" opg="" and="" opg/rankl="" ratios="" were="" observed="" in="" the="" ech-h="">(اکیناکوزید) گروه درمان به ترتیب 14/150 درصد و 64/197 درصد نسبت به گروه OVX (P<0.01). however,="" no="" differences="" in="" rankl="" levels="" and="" the="" opg/rankl="" ratio="" were="" observed="" in="" the="" e2="" group,="" as="" compared="" with="" the="" ovx="">

3.1.2. ارزیابی BMD

نتایج کل BMD استخوان ران توسط DXA در جدول 2 ارائه شده است. همانطور که انتظار می رفت، کل BMD استخوان ران با OVX در مقایسه با گروه SHAM کاهش یافت< 0.01).="" however,="" all="" the="" treated="" groups="" significantly="" increased="" bmd="" than="" the="" ovx="" group="" after="" 12="" weeks="" of="" treatment="">< 0.01),="" but="" no="" significant="" difference="" was="" found="" between="" treated="" groups.="" the="" three="">(اکیناکوزید)گروه های تحت درمان در مقایسه با گروه OVX به ترتیب به 109.25 درصد، 115.27 درصد و 124.53 درصد کل BMD استخوان ران را افزایش دادند. E2 کل BMD استخوان ران را در مقایسه با گروه OVX به 113.82 درصد افزایش داد.

3.1.3. توموگرافی میکرو کامپیوتری (Micro-CT).

میکرو سی تی اسکن یک روش بسیار دقیق برای اندازه گیری ساختار مهره ها است زیرا ساختار ترابکولار را در سه بعدی کمیت می کند. نتایج کمی ناحیه متافیزال نزدیک به صفحه رشد دیستال فمور از ارزیابی Micro-CT به صورت BV/TV، Tb بیان شد. N، Tb.Sp، Tb.Th و SMI در جدول 2. پارامترهای Micro-CT ترابکولار در جدول 2 نشان داد که OVX باعث کاهش قابل توجه BV/TV، Tb شد. N و Tb.Th و افزایش Tb.Sp و SMI (P< 0.01).="" furthermore,="" the="" indices="" bv/tv,="" tb.="" n,="" and="" tb.="" thin="" ech-h="">(اکیناکوزید)گروه ها به طور قابل توجهی بالاتر از گروه OVX بودند (P< 0.01="" for="" bv/tv,="" and="" tb.th,="">< 0.05="" for="" tb.n),="" and="" ech-h="">(اکیناکوزید)درمان به طور قابل توجهی مقادیر BV/TV را 169.23 درصد، Tb.N را 157.73 درصد و Tb را افزایش داد. 148.23 درصد نسبت به گروه OVX. علاوه بر این، ECH-H همچنین از افزایش ناشی از OVX در سطوح Tb.Sp و SMI جلوگیری کرد (P<0.01 for="" tb.sp,="">< 0.05="" for="" smi).="" the="" preventive="" effects="" of="" echinacoside="" on="" trabecular="" bone="" mass="" and="" microarchitecture="" deterioration="" are="" further="" proved="" by="" the="" 3d="" micro-ct="" images="" (ovx="" group="" presented="" a="" notable="" reduction="" in="" the="" trabecular="" number="" and="" trabecular="" area="" when="" compared="" with="" the="" sham="" group.="" echinacoside="" and="" e2="" partially="" prevented="" ovx="" induced="" bone="" loss="" and="" significantly="" improved="" the="" trabecular="" bone="" mass="" and="">

3.1.4. خم شدن سه نقطه استخوان ران.

نتایج آزمایش خمش سه نقطه ای بیومکانیکی در جدول 2 نشان داده شده است. کاهش قابل توجهی در بار نهایی، سفتی و جذب انرژی در گروه OVX در مقایسه با گروه SHAM مشاهده شد (P< 0.01).="" echinacoside="" treatment="" improved="" bone="" mechinacosideanical="" strength,="" evidenced="" by="" increased="" levels="" of="" ultimate="" load,="" stiffness,="" and="" energy="" absorption=""><0.01 for="" ultimate="" load="" and="" energy="" absorption,="">< 0.05="" for="" stiffness);="" however,="" no="" significant="" difference="" was="" observed="" among="" the="" three="">ECH (اکیناکوزید)-گروه های تحت درمان مقادیر mEchinacosideanical ECH-H(اکیناکوزید)گروه تیمار شده 55.51 درصد برای بار نهایی، 34.05 درصد برای سفتی، و 183.33 درصد برای جذب انرژی در مقایسه با گروه OVX تیمار شده با وسیله نقلیه افزایش یافت (P<0.01). e2="" increased="" ultimate="" load="" by="" 49.51%,="" stiffness="" by="" 28.63%,="" and="" energy="" absorption="" by="" 55.56%="" compared="" to="" the="" ovx="" group,="" respectively,="" but="" its="" effect="" on="" mechinacosideanical="" values="" was="" less="" than="" the="">ECH-H (اکیناکوزید)گروه

3.2. ارزیابی ایمنی

3.2.1. آنالیز سرم

اثرات بر روی پروفایل لیپیدی خلاصه شده است. در هفته 12، E2 افزایش سطح TC و TG را نسبت به سطح پایه نشان داد. سه دوز ECH (اکیناکوزید)(ECH-L,ECH-M، وECH-H) سطوح TC و TG را در مقایسه با گروه های OVX و SHAM کاهش داد. علاوه بر این، ECH-H(اکیناکوزید)گروه در مقایسه با OVX سطوح TG را به میزان قابل توجهی 30.87 درصد کاهش داد (P< 0.05),="" or="" by="" 19.07%="" versus="" the="" sham="" group="">< 0.05).="" moreover,="" the="" effects="" of="">ECH (اکیناکوزید) -زمینECH (اکیناکوزید)-M در سطوح TG حاشیه ای بود. در پایان پروتکل، اندازه‌گیری سطوح سرمی CEA و CA{1}} همانطور که در جدول 3 نشان داده شده است، جمع‌آوری شد. پ< 0.01),="" or="" by="" 49.53%,="" 28.87%="" versus="" sham="" group="">< 0.01).="" all="" doses="" of="" ech="">اکیناکوزید) تجویز منجر به کاهش قابل توجه سطح CA{0}} سرم شد (P< 0.05)="" compared="" to="" the="" sham="" group,="" but="" echinacoside="" did="" not="" show="" any="" significant="" effect="" on="" the="" serum="" cea="" concentrations="" versus="" the="" sham="" group="" or="" ovx="" group.="" in="" addition,="" the="" ech-h="">اکیناکوزید)گروه سطح CA{0}} را به میزان قابل توجهی 29.31 درصد نسبت به گروه OVX کاهش داد (P<0.05), or="" by="" 42.91%="" versus="" the="" sham="" group="">< 0.01).="" all="" doses="" of="" echinacoside="" administration="" resulted="" in="" a="" notable="" reduction="" in="" the="" serum="" ca-125="" and="" cea="" levels="">< 0.01)="" compared="" to="" the="" e2="" group.="" moreover,="" the="" ech-h="">اکیناکوزید)سطح CA{0}} و CEA به ترتیب به میزان 44.30 درصد و 64.70 درصد نسبت به گروه E2 کاهش معنی‌داری داشت.

3.2.2. بافت شناسی و ایمونوهیستوشیمی رحم و غده پستانی.

شایع ترین عوارض جانبی رحم و غدد پستانی بین همه گروه ها مشاهده نشد اما در گروه E2 مشاهده نشد (جدول 3). تجویز E2 (50 گرم بر کیلوگرم در روز) به مدت 12 هفته ضخامت آندومتر و تکثیر غدد پستانی را در مقایسه با گروه OVX یا SHAM افزایش داد. علاوه بر این، سه غده پستانی بیان CEA نیز در گروه E2 با تجزیه و تحلیل ایمونوهیستوشیمی تشخیص داده شد، اما بدون رحم. گروه های درمانی اکیناکوزید با هیچ گونه ناهنجاری رحم و غده پستانی همراه نبودند.

برای قسمت Ⅱ اینجا را کلیک کنید

منابع

[1] تی. Nakamura، T. Matsumoto، T. Sugimoto و M. Shiraki، "مطالعه دوز-پاسخ دنوزوماب بر تراکم مواد معدنی استخوان و نشانگرهای چرخش استخوان در زنان یائسه ژاپنی مبتلا بهپوکی استخوان," پوکی استخوانبین المللی، جلد. 23، صفحات 1131-1140، 2012.

[2]XL Wang، LZ Zhen، G. Zhang، MS Wong، L. Qin، و XS Yao، "اثرات استئووژنیک آگلیکون های فلاونوئید از یک بخش محافظت کننده از استخوان Drynaria مطالعه اثربخشی در شرایط آزمایشگاهی"، Phytomedicine، جلد. 18، شماره 10، ص. 868–872، 2011.

[3] JY Reginster و N. Burlet، "پوکی استخوان: یک شیوع همچنان در حال افزایش، "استخوان، جلد 38، شماره 2، ضمیمه 1، صفحات S4–S9، 2006.

[4] الف. کاترینا و بی مک دونالد، بررسی تجربی و اجزای محدوداکیناکوزیدشکستگی های فشاری مهره [Ph.D. پایان نامه]، دانشگاه کوئینزلند TEchinacosidenology، 2009.

[5] SC Manolagas، "تولد و مرگ سلول های استخوانی: تنظیم اساسیاکیناکوزیدو پیامدهایی برای پاتوژنز و درمانپوکی استخوانبررسی های غدد درون ریز، جلد 21، شماره 2، صفحات 115-137، 2000.

[6] BL Riggs، S. Khosla، و LJ Melton، "استروئیدهای جنسی و ساخت و حفاظت از اسکلت بزرگسالان"، بررسی های غدد درون ریز، جلد. 23، شماره 3، صص 279-302، 2002.

[7] م. Tezval، EK Stuermer، S. Sehmisch، و همکاران، "بهبود کیفیت استخوان تروکانتریک در یکپوکی استخوانمدل پس از درمان کوتاه‌مدت با هورمون پاراتیروئید: یک آزمایش جدید mechinacosideanical برای ناحیه تروکانتریک استخوان ران موش صحرایی،پوکی استخوانبین المللی، جلد. 21، شماره 2، صص 251-261، 2010.

[8] LN Li، Z. Zeng، و GP Cai، "مقایسه نئو و نارینگین در تکثیر و تمایز استخوانی در MC3T3-E1"، Phytomedicine، جلد. 18، صفحات 985-989، 2011.

[9] W. Qi، YB Yan، W. Lei، ZX Wu، Y. Zhang و D. Liu، "پیشگیری از عدم استفادهپوکی استخواندر موش های صحرایی با عصاره Cordyceps Sinensis"پوکی استخوانبین المللی، جلد. 9، صفحات 2347-2357، 2012.

[10] CV Odvina، JE Zerwekh، DS Rao، N. Maalouf، FA Gottschalk و CYC Pak، "تبدیل استخوان به شدت سرکوب شده: یک عارضه بالقوه درمان آلندرونات"، مجله بالینی غدد درون ریز و متابولیسم، جلد. 90، شماره 3، صص 1294-1301، 2005.

[11] گروه نوشتن برای پژوهشگران ابتکار سلامت زنان، "خطر و مزایای استروژن به اضافه پروژسترون در زنان یائسه سالم"، مجله انجمن پزشکی آمریکا، جلد. 288، صفحات 321-333، 2002.

[12]ح. کوبایاشی، اچ. اوگوچی، ن. تاکیزاوا، و همکاران، «جدیدفنیل اتانوئیدگلیکوزیدهااز جانبسیستانچتوبولوزا"بولتن شیمیایی و دارویی، جلد 35، صفحات 3309-3314، 1987.

[13] س. ژائو، جی. گائو، دبلیو لی و دی. کای، "اثرات نوروتروفیک و نجات عصبیاکیناکوزیددر مدل موش MPTP تحت حاد بیماری پارکینسون، تحقیقات مغز، جلد 1346، صفحات 224-236، 2010.

[14] CQ Jia، H. Shi، XM Wu، YZ Li، JJ Chen، و PF Tu، "تعییناکیناکوزیددر سرم موش توسط کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا فاز معکوس با تشخیص اشعه ماوراء بنفش و کاربرد آن در فارماکوکینتیک و فراهمی زیستی، "Journal of Chromatography B, vol. 844, no.

[15] WJ He، TH Fang، X. Ma، K. Zhang، ZZ Ma، و PF Tu،اکیناکوزیدباعث ایجاد آرامش وابسته به اندوتلیوم در حلقه‌های آئورت موش صحرایی از طریق مسیر NO-cGMP می‌شود." Planta Medica، جلد 75، شماره 13، صفحات 1400-1404، 2009.

[16] F. لی، YN یانگ، پی پی ژو و همکاران، "اکیناکوزیدبا افزایش نسبت OPG/RANKL در سلول‌های MC3T{1}E1، بازسازی استخوان را ترویج می‌کند."

[17] الف. Ishihara, T. Sasaki, K. Debari, et al., "Effects of ovariectomy on bone morphology in maxillae of mature rats," Journal of Electron Microscopy, vol. 48، شماره 4، صص 465-469، 1999.

[18] L. لی، ZH Song، PF Tu، LJ Wu، و FK Chen، "جدایی ازاکیناکوزیدتوسط کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا آماده سازی فاز معکوس، مجله چینی کروماتوگرافی، جلد 19، شماره 3، صفحات 200-202، 2001.

[19] L. Malaval، D. Modrowski، AK Gupta، و JE Aubin، "بیان سلولی پروتئین های مرتبط با استخوان در طول استخوان سازی آزمایشگاهی در کشت سلولی استرومایی مغز استخوان موش"، مجله فیزیولوژی سلولی، جلد. 158، شماره 3، صص 555-572، 1994.

[20] W. Qi، YB Yan، W. Lei، ZX Wu، Y. Zhang، D. Liu، و همکاران، "پیشگیری از عدم استفادهپوکی استخواندر موش های صحرایی با عصاره Cordyceps Sinensis"پوکی استخوانبین المللی، جلد. 9، صفحات 2347-2357، 2012.