بخش Ⅰ: ارتباط احتمالی گیرنده هورمون لوتئینه کننده محلول در دوران رشد و بزرگسالی در پسران و مردان

خلاصه ساده

هورمون های تناسلی هورمون زرد (LH) و گنادوتروپین جفتی انسانی (hCG) که هر دو آگونیست گیرنده هورمون جسم زرد (LHCGR) هستند، برای تولید مثل مردان در دوران رشد و بزرگسالی ضروری هستند. lHCGR بیان می شود و تولید تستوسترون را توسط سلول های لیدیگ بیضه تحریک می کند. در این مطالعه، ما نشان می‌دهیم که LHCGR محلول در خون، ادرار و مایع منی پسران و مردان سالم و همچنین در بیماران مبتلا به ناهنجاری‌های کروموزوم جنسی وجود دارد. ما نشان می‌دهیم که چگونه سطوح sLHCGR در گردش با رشد بلوغ، عملکرد بیضه و کیفیت مایع منی مرتبط است و نشان می‌دهیم که LHCGR از بافت غیر گنادی انسان جنین آزاد می‌شود. HCG از طریق بیضه ها و سایر اندام ها به سرم آزاد می شود، که نشان دهنده نقش خارج گنادی برای LH یا hCG در پسران و مردان است.

خلاصه

هورمون لوتئینیزه کننده (LH) و گنادوتروپین جفتی انسانی (hCG) آگونیست های گیرنده هورمون لوتئینیزه کننده (LHCGR) هستند که عملکرد تولید مثل مردان را تنظیم می کند. lHCGR ممکن است در مایعات بدن آزاد شود. ما می خواستیم تعیین کنیم که آیا LHCGR محلول نشانگر عملکرد غدد جنسی است یا خیر. مطالعات مقطعی، طولی و مداخله ای بر روی 195 پسر و مرد سالم و 396 مرد مبتلا به ناباروری، کمبود، یا سندرم کلاین فلتر (KS) انجام شد تا LHCGR اندازه گیری شده در سرم، مایع منی، ادرار و شریان های کبد/کلیه را با عملکرد غدد جنسی مرتبط کند. . lHCGR در مدل‌های in vitro و in vivo بافت و رده‌های سلولی بیضه انسان، مدل‌های موش زنوگرافت اندازه‌گیری شد و نتایج وسترن بلات انسانی نشان داد که قطعات LHCGR در سرم و بافت‌های غدد جنسی با اندازه‌های مشابه با استفاده از سه آنتی‌بادی مختلف شناسایی شدند. حتی پس از پیوندهای انسانی، LHCGR-ELISA هیچ واکنش متقابل بین گونه ای یا واکنش غیر اختصاصی در سرم موش نشان نداد. در مقابل، sLHCGR پس از کشت کلیه جنین و غده فوق کلیوی انسان در محیط کشت آزاد شد. sLHCGR سرم در پسران سالم در دوران بلوغ به طور قابل توجهی کمتر بود (p=0.0001). در مردان سالم، sLHCGR سرم با نسبت اینهیبین B/FSH همبستگی منفی داشت (027.004.{9}}، p=0). در مردان نابارور، sLHCGR منی با FSH سرم (0.006، p {15}}.009)، غلظت اسپرم ({17}}.5، p=0.003)، و تعداد کل اسپرم همبستگی منفی داشت. ( -3.2، p=0.007). تزریق hCG باعث کاهش sLHCGR در سرم و ادرار مردان سالم شد (01/0p<). در نتیجه، sLHCGR در مایعات بدن آزاد می شود و با رشد بلوغ و عملکرد غدد جنسی مرتبط است. sLHCGR در گردش در نرهای ارکیده نشان می دهد که sLHCGR در سرم ممکن است در بافت های غیر گناد منشأ گرفته و ممکن است در بافت های غیر گناد عمل کند. (کارآزمایی های بالینی: NTC01411527، NCT01304927، NCT03418896).

کلید واژه ها

گیرنده LH؛ بلوغ؛ توسعه؛ ناباروری؛مزایای سیستانچ; اثرات خارج غدد جنسی؛ گنادوتروپین ها؛ کلیه جنین؛ غده فوق کلیوی جنین؛ TCAM2; NTera2

برای خرید اینجا کلیک کنیدعصاره گیاهی سیستانچ

معرفی

هورمون لوتئینیزه کننده (LH) و گنادوتروپین جفتی انسانی (hCG) هر دو آگونیست گیرنده هورمون جسم زرد (LHCGR) هستند که برای تولید مثل مردان در طول رشد و بزرگسالی ضروری است [1]. HCG یک گیرنده جفت شده با پروتئین G است که در لیدیگ، لوتئین دانه ای و سلول های غشایی بیان می شود و یک تنظیم کننده قوی تولید استروئید جنسی است [1]. hCG یک آگونیست قوی و پایدار است اما فقط از نظر فیزیولوژیکی در طول رشد جنین مهم است [2]. به جز برخی از سرطان‌های سلول زایا و سرطان لوزالمعده، hCG در بزرگسالی تولید نمی‌شود، اگرچه یک مطالعه قبلی نشان داد که ترشح ضربانی پایین هیپوفیز-hCG در مردان و زنان بالغ وجود دارد. hCG برای درمان زنان برای القای تخمک گذاری در طول درمان باروری، برای مردان برای تحریک سنتز تستوسترون و اسپرم زایی بالقوه در مردان هیپوگنادال، یا به عنوان یک آزمایش تشخیصی برای تولید تستوسترون درون زا استفاده می شود [4]. فرسایش گیرنده LH موش (LHCGR) منجر به کاهش چشمگیر تستوسترون و کیفیت مایع منی می شود [5]، و چندین گروه تحقیقاتی جهش و SNP را در LHCGR شناسایی کرده اند که اهمیت آن را برای عملکرد تولید مثل انسان نشان می دهد [6-8].

ژن LHCGR روی کروموزوم 2 قرار دارد و از 11 اگزون تشکیل شده است که اگزون 1-10 حوزه های ساختاری خارج سلولی و اگزون 11 7 حوزه ساختاری بین غشایی و درون سلولی را کد می کند [9]. چندین ایزوفرم LHCGR وجود دارد که تصور می شود یکی از آنها به دلیل نداشتن لنگر گذرنده ترشح می شود [10]. احتمال دیگر این است که آزادسازی LHCGR در مایعات بدن به شکاف آنزیمی پروتئین‌های غشای سلولی مانند ADAMs، MMPs و دیگر پروتئین‌های گذرنده شناخته‌شده بریده شده بستگی دارد. در واقع، نشان داده شده است که hCG به طور خاص MMP-2 و MMP-9 [11،12] را تنظیم مثبت می‌کند، و چندین مطالعه تنظیم پس از رونویسی LHCGR را نشان داده‌اند [13،14]. LHCGR محلول (LHC) در سرم زنان و مایع فولیکولی توسط پلت فرم ELISA اندازه گیری شده است [15،16]. ویژگی آنتی‌بادی‌های مورد استفاده در سنجش ELISA با بیان قطعات مختلف LHCGR در سلول‌های CHO برای محلی‌سازی اپی‌توپ و تشخیص بیان در جفت انسان تأیید شد [{16}}]. sLHCGR توسط LC-MS/MS در سرم تشخیص داده شد [18]. غلظت سرمی sLHCGR در زنان با درمان باروری، پره اکلامپسی، زایمان زودرس و حاملگی در کودکانی که دارای میزان لانه گزینی سندرم داون بودند [15،16] مرتبط بود، اما تا به امروز توسط سایر گروه های تحقیقاتی تایید نشده است. بر اساس دانش ما، sLHCGR هرگز در مایعات بدن مردان سالم، پسران نوجوان در حال رشد، یا مردان با ناهنجاری های کروموزوم جنسی توصیف نشده است. sLHCGR ممکن است در گردش خون مرد به عنوان نشانگر عملکرد غدد جنسی از طریق انتقال اتصال با میل ترکیبی بالا یا تغییر فعالیت LH یا hCG عمل کند.

مواد و روش ها

1. گروه ها

مردان جوان از جمعیت عمومی

در دانمارک، همه مردان جوان سالم بالای 18 سال باید تحت معاینه فیزیکی قرار گیرند تا شایستگی آنها برای خدمت سربازی مشخص شود. از سال 1996، تقریباً 300 سرباز وظیفه، که نماینده جمعیت عمومی هستند، هر ساله از نظر کیفیت مایع منی مورد بررسی قرار می گیرند. همگی نمونه‌های مایع منی تهیه کردند، پرسشنامه‌ای را تکمیل کردند، بیضه‌هایشان را سونوگرافی کردند و نمونه‌های خون گرفتند. نمونه‌های سرم و مایع منی از زیست‌بانک، و همچنین ارزیابی‌های سونوگرافی و اطلاعات مربوط به BMI و سن 148 مرد مورد بررسی در سال‌های 2013 و 2014، در مطالعه حاضر گنجانده شد (تأیید کمیته اخلاق: H-KF-289428).

پسران سالم قبل و بعد از بلوغ

مطالعه نوجوانان کپنهاگ یک مطالعه مقطعی و طولی ترکیبی بر روی کودکان سالم دانمارکی است [20]. از میان مدارس دولتی که به صورت تصادفی انتخاب شده بودند، 6203 کودک دعوت شدند تا در آن شرکت کنند. تعداد کل شرکت کنندگان 2020 کودک بود. پیگیری طولی 209 کودک (101 پسر) هر 6 ماه انجام شد و شامل معاینه فیزیکی، ارزیابی تانر از مراحل بلوغ و نمونه‌های خون و ادرار بود. سی و شش پسر با پیگیری طولی در این مطالعه برای ارزیابی sLHCGR در دوران بلوغ وارد شدند (کارآزمایی بالینی: NTC01411527).

مردان نابارور بدون همبودی جدی

مطالعه کپنهاگ-استخوان-گناد یک مطالعه کوهورت بر روی 307 مرد نابارور بدون بیماری های شدید همراه است که از سال 2011 تا 2015 به کلینیک مردانه ما مراجعه کردند، شامل 1427 مرد [21،22]. همه مردان به دلیل کیفیت پایین مایع منی و تمایل به والدین به کلینیک ما ارجاع شدند. همه تحت معاینه فیزیکی، از جمله سونوگرافی بیضه قرار گرفتند، نمونه خون گرفته شد و نمونه های منی ارائه شد. یک متخصص شرح حال دقیق پزشکی آنها را به دست آورد. این مردان به مدت 150 روز توسط محققان تحت نظر قرار گرفتند و ویتامین D یا دارونما را همانطور که قبلا توضیح داده شد مصرف کردند. تمام داده های ارائه شده در این مطالعه از ویزیت اولیه قبل از مداخله بود و همه متغیرهای شامل از قبل تعریف شده بودند (کارآزمایی بالینی: NCT01304927).

سیستانچ استاندارد شده

مردان و پسران مبتلا به سندرم کلاین فلتر و بیماران مبتلا به آنورشی

ما 64 پسر و مرد مبتلا به سندرم کلاین فلتر (KS)، 47 بعد از بلوغ و 16 قبل از بلوغ را که بر اساس مرحله بندی تانر تعریف شده بودند، از کلینیک مردانه خود شناسایی کردیم. ما انحرافات کروموزومی دقیق، تاریخچه پزشکی، وضعیت شروع بلوغ و اطلاعات سرمی در دسترس برای همه داشتیم. 7 پسر تحت پیگیری طولی با ارزیابی بالینی منظم و نمونه گیری خون قبل و در حین شروع بلوغ قرار گرفتند.

ما همچنین 8 مرد با تعداد کروموزوم طبیعی را وارد کردیم که بیضه‌های دوطرفه‌شان را به‌دلیل شرایط قبلی برداشته بودند: کارسینوم سلول زایای بیضه (n=4)، سرطان منتشر پروستات (n=1)، کریپتورکیدیسم دوطرفه، و ارکیکتومی کودکان. n=1)، نئوپلازی سلول های زایای دو طرفه در محل (n=1)، و سرطان پیشرفته بیضه پس از برداشتن بیضه های باقی مانده به دلیل تروما (n=1).

بزرگسالانی که تحت اندازه‌گیری جریان Splanchnicus قرار می‌گیرند

ما سه مرد و سه زن یائسه با عملکرد طبیعی کبد را که به دلیل مشکوک به ایسکمی مزانتریک بستری شده بودند و برای اندازه‌گیری جریان خون احشایی مراجعه کردند، اما ایسکمی مزانتریک را نشان ندادند، وارد کردیم. نمونه های خون به طور همزمان از کبد، کلیه، ورید فمورال و شریان مربوطه جمع آوری شد (تأیید کمیته اخلاق: H.18048245)

مطالعه مداخله: مردان سالم در معرض گنادوتروپین کوریون انسانی

یازده مرد سالم برای شرکت در مداخله بالینی از طریق یک اطلاعیه دانمارکی Rigshospitalet استخدام شدند. داوطلبان با 5000 واحد بین‌المللی گنادوتروپین جفتی انسانی تحت درمان قرار گرفتند و حداکثر تولید تستوسترون درون‌زا آنها با مقایسه نمونه‌های خون و ادرار اولیه با نمونه‌های پیگیری جمع‌آوری‌شده 8، 24 و 72 ساعت پس از تزریق hCG اندازه‌گیری شد (کارآزمایی بالینی: NCT03418896).

2. موش، بافت انسانی و خطوط سلولی

دو سویه از سلول‌های سرطانی بیضه انسانی NTera-2 و TCam-2 که به ترتیب نشان‌دهنده کارسینوم جنینی و سمینوما بودند، مورد استفاده قرار گرفتند و همانطور که قبلاً توضیح داده شد، کشت داده شدند [23].

سرم‌ها از موش‌های برهنه بدون تومور (WT) و TCam-2 موش‌های برهنه زنوگرافت تحت درمان با ناقل، LH یا hCG جمع‌آوری شد (بازرسی آزمایش‌های حیوانی، کپنهاگ، دانمارک، شماره مجوز: 2012-15-2934-00051) .

بافت های جنین انسان در سه ماهه اول از بافت های اهدایی زنان پس از سقط های برنامه ریزی شده جمع آوری شد. کلیه جنین و بافت آدرنال جنین در مدل های قطره سوسپانسیون همانطور که قبلاً توضیح داده شد کشت داده شدند و محیط برای تجزیه و تحلیل جمع آوری شد [24،25] (تأیید کمیته اخلاق: H-1-2012-007).

نمونه‌های بیضه بالغ از مردان مبتلا به سرطان بیضه برداشته شد (تأیید کمیته اخلاق: H{0}}). بافت اطراف تومور حاوی نواحی غیر بدخیم در دمای - 80◦ C یا یک شبه در دمای 4◦ C در فرمالین یا ثابت کننده Stieve's اصلاح شده (200 میلی لیتر فرمالدئید 37 درصد، 40 میلی لیتر اسید استیک در 1 لیتر فسفات 0.05 مولار) نگهداری شد. بافر، pH 7.4).

3. آنالیزهای بیوشیمیایی

تشخیص کل sLHCGR در سرم، مایع منی، ادرار و محیط‌های کشت مختلف در یک فرآیند اعتبارسنجی با استفاده از کیت‌های ELISA از آزمایشگاه کاتالیست بیومارکر جدید هلند (NBCL) با استفاده از آنتی‌بادی LHR029 علیه LHCGR انسانی و اندازه‌گیری همه موارد انجام شد. از اینها به طور مکرر آزمون الایزا دارای حد تشخیص 0.01 pmol/mL و حداکثر سطح 15.55 بود. شش مرد از جمعیت عمومی با سطوح sLHCGR بالاتر از حد بالایی تشخیص، نمونه‌های خود را رقیق و مجددا اندازه‌گیری کردند که سطوح تا 30 pmol/mL را نشان می‌دهد. عملکرد پلت فرم ELISA قبلاً به تفصیل شرح داده شده است [15-17].

مکمل های سیستانچ

ما همچنین دو ELISA داخلی مختلف را راه‌اندازی کردیم که توسط تکنسین‌های آزمایشگاهی ما راه‌اندازی شد، و تمام معرف‌های بیشتر توسط Origin Biomarkers Ltd، انگلستان، مطابق با تنظیمات پیشنهادی آنها ارائه شد [26]. در مرحله اول، sLHCGR در حال گردش متصل به hCG با استفاده از کیت های الایزا ساندویچ با آنتی بادی های 5A10C9 (ProMab) و am0{{20}}904pun ( OriGene) علیه LHCGR و hCG، به ترتیب. ثانیا، ما به طور مشابه از ELISA داخلی برای تعیین کل نمونه‌های شریانی و وریدی کبد، کلیه، و اندام تحتانی از شش بزرگسال sLHCGR استفاده کردیم، جایی که از همان آنتی‌بادی LHR{27}}29 (NBCL Holland) علیه sLHCGR استفاده کردیم. دو پروتکل مختلف آزمایش شدند. تمام اندازه‌گیری‌های sLHCGR که در این مقاله توضیح داده شد، با استفاده از NBCL ELISA انجام شد، به‌جز نمونه‌های کمپلکس hCG-sLHCGR و نمونه‌های شریانی/وریدی از اندام‌هایی که در بالا توضیح داده شد. در پسران سالم، تستوسترون با استفاده از کیت RIA با پوشش داده شده با DPC (Diagnostic Products, Los Angeles, CA) با محدودیت تشخیص (LOD) 0.23 نانومول در لیتر و CV 8.6 درصد با استفاده از ایمونوفلورسانس با زمان حل شد. (دلفیا؛ والاک، تورکو، فنلاند)، حد تشخیص 0.20 نانومول در لیتر با CV 6.4 درصد بود. در بزرگسالان، تستوسترون و گلوبولین اتصال به هورمون جنسی (SHBG) با روش ایمونواسی شیمی لومینسانس (Access، Beckman Coulter، ایالات متحده آمریکا) به ترتیب با LODهای 0.35 نانومول در لیتر و 0.33 نانومول در لیتر تجزیه و تحلیل شدند. سطوح سرمی و ادرار FSH و LH با استفاده از ایمونوفلورسانس با زمان حل و فصل (دلفیا؛ والاک، تورکو، فنلاند) با محدودیت های تشخیص 0.06 و 0.05 IU / L، به ترتیب، و CV و lt اندازه گیری شد. هر دو در 5 درصد سنجش Inhibin B با استفاده از یک آنزیم ایمونواسی اختصاصی دوطرفه (inhibin B genII, Beckman Coulter, USA) CV کمتر از 11 درصد انجام شد. برای AMH، ما از ایمونواسی آنزیم بکمن کولتر (Immunotech، Beckman Coulter، مارسی، فرانسه) و CV کمتر از 8 درصد استفاده کردیم. در نهایت، IGF1 و IGF-BP3 با استفاده از روش لومینسانس شیمیایی سیستم ایمنی تشخیصی IDS-iSYS با CV 10 درصد و 9 درصد تعیین شدند. استرادیول آزاد با استفاده از ثابت Mazer و تستوسترون آزاد (FT) با استفاده از فرمول Vermeulen [27،28] محاسبه شد.

تجزیه و تحلیل مایع منی

مردان جوان سالم و شرکت‌کنندگان بالغ نابارور نمونه‌های مایع منی را ارائه کردند و اطلاعات خود را در مورد مدت زمان پرهیز از انزال به دست آوردند. تجزیه و تحلیل مایع منی توسط تکنسین های آموزش دیده همانطور که قبلا توضیح داده شد [19] انجام شد. حجم منی با توزین تخمین زده شد. برای ارزیابی زنده ماندن اسپرم، 10 میکرولیتر از تکرارهای منی به خوبی مخلوط شده روی اسلایدها قرار داده شد و در زیر میکروسکوپ × 4{10}}0x در مقطع گرم شده با دمای 37 درجه سانتیگراد مورد بررسی قرار گرفت. اسپرم‌ها به‌عنوان یکی طبقه‌بندی شدند. زنده ماندگار پیشرفته (کلاس a به علاوه B WHO)، زنده ماندگار غیر پیشرونده (کلاس C) یا غیرفعال (کلاس D). از میانگین دو ارزیابی زنده ماندن استفاده شد. برای ارزیابی غلظت اسپرم، نمونه‌ها در محلول آب مقطر 0.6 مول در لیتر NaHCO3 و 0.4 درصد (v/v) فرمالدئید رقیق شدند و سپس با استفاده از هموسیتومتر Bürker-Türk ارزیابی شدند و از میانگین ارزیابی‌ها استفاده شد. فقط اسپرم با دم شمارش شد. در نهایت، اسمیر تهیه شد و با رنگ آمیزی پاپ رنگ آمیزی شد و مورفولوژی اسپرم کاملاً بر اساس معیارهای [29] ارزیابی شد.

وسترن بلاتینگ

بافت بیضه انسان در بافر لیز همگن شد، در بافر بارگذاری SDS رقیق شد و سپس در دمای 95 درجه سانتیگراد به مدت 5 دقیقه حرارت داده شد. نمونه ها روی 4-20 درصد ژل های پلی آکریل آمید پیش ساخته (BioRad، cat# 456-8096) بارگذاری شدند و برای جداسازی پروتئین ها در ولتاژ 100 ولت به مدت 1 ساعت اجرا شدند. برای تشخیص sLHCGR در سرم، آلبومین و IgG با استفاده از کیت حذف آلبومین/IgG پیرس (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA, cat# 89875) قبل از بارگذاری نمونه ها روی ژل حذف شدند. پس از الکتروفورز ژل، پروتئین ها با استفاده از یک مرطوب کننده (BioRad) به غشاهای پلی وینیلیدین دی فلوراید منتقل شدند. غشاها در سالین بافر تریس و شیر خشک بدون چربی 5 درصد به مدت 1 ساعت بسته شدند، سپس یک شبه در دمای 4 درجه سانتیگراد با آنتی بادی های اولیه و به مدت 1 ساعت در RT با آنتی بادی های ثانویه انکوبه شدند. غشاها با نورتابی شیمیایی (Thermo Scientific Super Signal West Femto Maximum Sensitive Substrate, Cat# 34095) و ردیاب نوری با سیستم تصویربرداری chemiDoc MP (BioRad, Cat# 17001402) شسته شدند. سه آنتی بادی مختلف برای تشخیص LHCGR در بافت و سرم استفاده شد: Aviva System Biology (OASG04237). NBCL Holland، همان آنتی بادی که در کیت سرم الایزا (LHR029) و بیوتکنولوژی سانتا کروز (دالاس، تگزاس، ایالات متحده آمریکا، SC{16}}). میکروگلوبولین -2 به عنوان کنترل بارگذاری استفاده شد.

ایمونوهیستوشیمی

ایمونوهیستوشیمی همانطور که قبلا توضیح داده شد [25] انجام شد. به طور خلاصه، مقاطع با فیکساتور Stiff اصلاح شده ثابت شدند، موم زدایی شدند و دوباره هیدراته شدند. استخراج آنتی ژن در اتوکلاو حاوی بافر استخراج سیترات (1{3}} میلی‌مولار، pH 6.0) ​​انجام شد. پراکسیداز درون زا با 3 درصد (v/v) H2O2 در متانول به مدت 30 دقیقه مسدود شد. بین هر مرحله، بخش ها در TBS شسته شدند. بخش ها با 0.5 درصد سرم اسب BSA به مدت 30 دقیقه انکوبه شدند، و سپس انکوباسیون یک شبه با دو آنتی بادی اولیه مختلف به مدت 1 ساعت در دمای اتاق (LHR029 برای WB/ELISA، Santa Cruz Biotechnology SC{13}}). بخش ها با آنتی بادی های ثانویه به مدت 30 دقیقه انکوبه شدند. تصاویر با آمینواتیل کاربازول (AEC، Invitrogen، Life Technologies/Thermo Fisher Scientific، Waltham، MA، USA) تجسم شدند. کنترل های منفی بدون آنتی بادی اولیه بودند. هیچ یک از کنترل های منفی رنگ آمیزی نشد. رنگ آمیزی متقابل با هماتوکسیلین مایر و مونتاژ با آکواتکس انجام شد. مقاطع بر روی میکروسکوپ نیکون Microphot-FXA (شرکت نیکون، ملویل، نیویورک، ایالات متحده آمریکا) ارزیابی شدند. تجزیه و تحلیل نهایی با استفاده از نرم افزار NDPview نسخه 1.2.36 (Hamamatsu Photonics, Iwata City, Japan) انجام شد.

فواید عصاره سیستانچ برای کلیه

منابع

1. Dufau، ML گیرنده هورمون لوتئین کننده. آنو. کشیش فیزیول. 1998، 60، 461-496.

2. Rao، CV ویژگی‌های متفاوت گنادوتروپین جفتی انسان و هورمون جسم زرد انسانی اتصال به غشای پلاسمایی اجسام زرد گاو. Acta Endocrinol. 1979، 90، 696-710.

3. Odell, WD; گریفین، جی. ترشح ضربانی گنادوتروپین جفتی انسانی در بزرگسالان عادی. N. Engl. جی. مد. 1987، 317، 1688-1691.

4. Bang, AK; نوردکاپ، ال. آلمستراپ، ک. پریسکورن، ال. پترسن، جی اچ. راجپرت دی میتس، ای. اندرسون، A.-M. جول، ا. Jørgensen، N. Dynamic GnRH و آزمایش hCG: ایجاد سطوح مرجع تشخیصی جدید. یورو J. اندوکرینول. 2017، 176، 379-391.

5. ژانگ، FP; پوتانن، م. ویلبرتز، جی. Huhtaniemi، I. رشد جنسی طبیعی قبل از تولد اما پس از تولد متوقف شده در موش های حذفی گیرنده هورمون زرد (LuRKO). مول. اندوکرینول. 2001، 15، 172-183.

6. بروستر، م. کریستین مایتر، اس. ورهوف پست، ام. سلطان، سی. اوگر، جی. فاجرون، آی. لارو، ال. لومبروزو، اس. Themmen، APN; Bouchard, P. یک جهش پیوندی جدید گیرنده LH مسئول هیپوگنادیسم مردانه با تولید اسپرم غیرطبیعی در ناحیه پروپوزیتوس و ناباروری با چرخه های منظم در یک خواهر مبتلا است. هوم تولید مجدد 2008، 23، 1917-1923.

7. Latronico، AC; Arnhold، IJP جهش های غیرفعال کننده گیرنده هورمون لوتئین کننده انسانی در هر دو جنس. سمین. تولید مجدد پزشکی 2012، 30، 382-386.

8. سیمونی، م. توتلمن، اف. میشل، سی. بوکنفلد، ی. نیشلاگ، ای. گرومول، جی. پلی مورفیسم های ژن گیرنده هورمون لوتئین کننده/گنادوتروپین کوریونی: ارتباط با بیضه های بد نزول و ناباروری مردانه. فارماکوژنت. ژنوم 2008، 18، 193-200.

9. آسکولی، م. فانلی، اف. Segaloff، DL گیرنده لوتروپین / کوریوگونادوتروپین، دیدگاه 2002. غدد درون ریز Rev. 2002, 23, 141-174.

10. تنا سمپره، م. ژانگ، FP; Huhtaniemi، I. بیان مداوم یک شکل کوتاه از اسید ریبونوکلئیک پیام رسان گیرنده هورمون لوتئین کننده در بیضه موش پس از تخریب انتخابی سلول لیدیگ توسط اتیلن متان سولفونات. غدد درون ریز 1994، 135، 1018-1024.

11. فلور، اچ. بیشوف اسلامی، د. کرنزر، اس. لیخت، پی. بیشوف، پی. Zygmunt، M. گنادوتروپین جفتی انسانی متالوپروتئینازهای ماتریکس-2 و -9 را در سلول‌های سیتوتروفوبلاستیک تحریک می‌کند و مهارکننده بافتی متالوپروتئینازها-1، -2، و -3 را در سلول‌های جداشده کاهش می‌دهد. سلول های استرومایی آندومتر بارور. استریل. 2008، 90، 1390–1395.

12. لیخت، ص. فلور، اچ. نیوینگر، جی. والوینر، دی. Wildt, L. آیا گنادوتروپین جفتی انسان به طور مستقیم در تنظیم لانه گزینی انسان نقش دارد؟ مول. سلول. اندوکرینول. 2007، 269، 85-92.

13. Li, Y.-X.; گوا، ایکس. گولاپا، تی. منون، بی. Menon، KMJ SREBP نقش تنظیمی در بیان mRNA گیرنده LH/hCG در سلول های گرانولوزا-لوتئین انسانی ایفا می کند. جی. کلین. اندوکرینول. متاب. 2019.

14. منون، KMJ; منون، بی. وانگ، ال. گولاپا، تی. Harada، M. تنظیم مولکولی بیان گیرنده گنادوتروپین: رابطه با متابولیسم استرول. مول. سلول. اندوکرینول. 2010، 329، 26-32.

15. چمبرز، AE; گریفین، سی. نایف، SA; میلز، آی. میلز، ما؛ سینگلکی، ع. Nicolaides، KH; بانرجی، S. الایزاهای کمی برای LHCGR محلول در سرم و کمپلکس hCG-LHCGR: تشخیص های بالقوه در غربالگری بارداری سه ماهه اول برای مرده زایی، سندرم داون، زایمان زودرس و پره اکلامپسی. تولید مجدد Biol. اندوکرینول. 2012، 10، 113.

16. چمبرز، AE; نائینی، ک.پ. میلز، ما؛ لاک وود، جنرال موتورز; Banerjee، S. گیرنده LH/hCG در گردش (LHCGR) ممکن است بیماران IVF قبل از درمان در معرض خطر OHSS و کاشت ضعیف را شناسایی کند. تولید مجدد Biol. اندوکرینول. 2011، 9، 161.

17. چمبرز، AE; استنلی، پی اف. راندوا، اچ. Banerjee، S. انتشار گیرنده LH/hCG محلول (LHCGR) با واسطه میکرووزیکول از سلول های ترانسفکت شده و ریزنمونه های جفت. تولید مجدد Biol. اندوکرینول. 2011، 9، 64.

18. گائو، HJ; چن، YJ; زو، دی. شیائو، MM؛ لی، ی. گوا، اچ. ژانگ، ن. تجزیه و تحلیل پروتئومی کمی چن، RB برای غربالگری با توان بالای گلیکوپروتئین های افتراقی در سرم سرطان کبد. سرطان بیول. پزشکی 2015، 12، 246-254.

19. پریسکورن، ال. نوردکاپ، ال. بنگ، AK; کراوز، ام. Holmboe، SA; Egeberg Palme، DL; بال، SB; موروپ، ن. کارلسن، ای. جونسن، سازمان ملل؛ و همکاران میانگین تعداد اسپرم علیرغم کاهش سیگار کشیدن مادران بدون تغییر باقی می ماند: نتایج یک مطالعه مقطعی بزرگ با تحقیقات سالانه در طول 21 سال. هوم تولید مجدد 2018، 33، 998-1008.

20. سورنسن، ک. آکسگلید، ال. پترسن، جی اچ. Juul، A. تغییرات اخیر در زمان بلوغ در پسران سالم دانمارکی: ارتباط با شاخص توده بدن. جی. کلین. اندوکرینول. متاب. 2010، 95، 263-270.

21. بلومبرگ جنسن، م. لاواتز، جی جی. پترسن، جی اچ. جول، ا. Jørgensen، N. اثرات مکمل ویتامین D بر کیفیت مایع منی، هورمون های تولیدمثلی، و نرخ تولد زنده: یک کارآزمایی بالینی تصادفی شده. جی. کلین. اندوکرینول. متاب. 2018، 103، 870–881.

22. بلومبرگ جنسن، م. گرنر لاوتز، جی. اندرسون، A.-M. پترسن، جی اچ. نوردکاپ، ال. بنگ، AK; اکبوم، پی. جونسن، سازمان ملل؛ پراتوریوس، ال. لوندستروم، پی. و همکاران کمبود ویتامین D و کلسیم کم یونیزه با کیفیت مایع منی و سطح استروئید جنسی در مردان نابارور مرتبط است. هوم تولید مجدد 2016، 31، 1875-1885.

23. لورنزن، م. نیلسن، جی. Andreassen، CH; جول، ا. تافت، بی جی; راجپرت دی میتس، ای. داگارد، جی. بلومبرگ جنسن، M. گیرنده هورمون لوتئین کننده در تومورهای سلول زایای بیضه بیان می شود: پیامدهای احتمالی برای رشد و پیش آگهی تومور. سرطان ها 2020، 12، 1358.

24. الدروپ، ای. تیلاد، اس. لورنزن، ام. Andreassen، CH; پولسن، KH; نیلسن، جی. هانسن، دی. الفاسی، دی. برگ، جو. بگی، پ. و همکاران هیپرکلسمی پس از تزریق روغن آرایشی: علت شناسی، پاتوژنز و شدت آن مشخص شد. جی. ماینر استخوان. Res. 2020، 36، 322-333.

25. Jørgensen، A. مکدونالد، جی. نیلسن، جی. Kilcoyne، KR; پرلمن، اس. لوندوال، ال. لانگوف توسن، ال. جوول هار، ک. فردریکسن، اچ. اندرسون، A.-M. و همکاران سیگنال دهی گره رشد سلول های زایا و ایجاد طناب های اسپرم ساز را در بیضه جنین انسان تنظیم می کند. Cell Rep. 2018, 25, 1924–1937.e4.

26. چمبرز، AE; فیربرین، سی. گادوین، ام. میلز، دبلیو. وو، من. پاندیان، ر. استانچیک، FZ; چانگ، ک. Banerjee، S. گیرنده LH-HCG محلول و استرادیول به عنوان پیش بینی کننده بارداری و تولد زنده در IVF. تولید مجدد بیومد. آنلاین 2019, 38, 159–168.

27. ورمولن، ا. وردونک، ال. کافمن، JM ارزیابی انتقادی روش‌های ساده برای تخمین تستوسترون آزاد در سرم. جی. کلین. اندوکرینول. متاب. 1999، 84، 3666-3672.

28. Mazer, NA یک روش صفحه گسترده جدید برای محاسبه غلظت سرمی آزاد تستوسترون، دی هیدروتستوسترون، استرادیول، استرون، و کورتیزول: با مثال های گویا از جمعیت های مرد و زن. استروئیدها 2009، 74، 512-519.

29. منکولد، ر. Stander، FS; کوتزه، تی جی; کروگر، TF; van Zyl, JA ارزیابی خصوصیات مورفولوژیکی اسپرم انسان بر اساس معیارهای سختگیرانه تر. هوم تولید مجدد 1990، 5، 586-592.

لی جوئل مورتنسن¹، مت لورنزن¹، آن یورگنسن²، یاکوب آلبرتسن²، نیلز یورگنسن²، سورن مولر^3,4، آنا ماریا اندرسون²، آندرس ژول^2,4و مارتین بلومبرگ جنسن^1,5

1. گروه غدد درون ریز اسکلتی، معدنی و غدد جنسی، گروه رشد و تولید مثل دانشگاه، Rigshospitalet، 2100 کپنهاگ، دانمارک. li.juel.mortensen@regionh.dk (LJM); mette.lorenzen.01@regionh.dk (ML)

2. دپارتمان رشد و تولید مثل و مرکز بین‌المللی تحقیقات و آموزش تحقیقاتی در مورد اختلالات غدد درون ریز در تولید مثل مردان و سلامت کودکان (EDMaRC)، Rigshospitalet، دانشگاه کپنهاگ، Blegdamsvej 9، 2100 کپنهاگ، دانمارک. Anne.Joergensen.02@regionh.dk (AJ); Jakob.Christian.Albrethsen@regionh.dk (JA); Niels.Joergensen@regionh.dk (NJ); آنا-Maria.Andersson@regionh.dk (A.-MA); Anders.Juul@regionh.dk (AJ)

3. مرکز تصویربرداری و تحقیقات عملکردی و تشخیصی، گروه فیزیولوژی بالینی و پزشکی هسته ای 260، بیمارستان Hvidovre، 2650 کپنهاگ، دانمارک. Soeren.Moeller@regionh.dk

4. گروه پزشکی بالینی، دانشکده علوم بهداشت، دانشگاه کپنهاگ، 2200 کپنهاگ، دانمارک

5. بخش تحقیقات استخوان و مواد معدنی، دانشکده پزشکی دندانپزشکی هاروارد/ دانشکده پزشکی هاروارد، بوستون، MA 02115، ایالات متحده آمریکا