قسمت 2: سرامید{1}}فسفات به‌عنوان تنظیم‌کننده بالقوه دومین پمپ سدیم از لوله‌های پروگزیمال کلیه با راه‌اندازی مسیرهای پروتئین کیناز متمایز به روش سلسله مراتبی

برای اطلاعات بیشتر. مخاطبtina.xiang@wecistanche.com

4. بحث

انتقال مایع در سراسر اپیتلیوم لوله ای یکی از رویدادهای کلیدی است که به طور مستقیم با اکثر موارد متمایز مرتبط است.عملکردهای کلیوی[49]. در میان املاح مختلف به کار گرفته شده درکلیه، نات از اهمیت ویژه ای برخوردار است. به دلیل فراوانی آن در مایع خارج سلولی، درک مکانیسم هایی که توسط آن Nat دوباره جذب یا دفع می شود، ضروری است زیرا تغییرات در غلظت Nat بین بافتی و داخل عروقی به اضافه منجر به تغییر حجم می شود و ممکن است باعث اختلال در فشار خون شود. . تنظیم سطوح Nat در محفظه‌های مایع بدن عمدتاً توسط انتقال‌دهنده‌های فعال اولیه هدایت می‌شود که Nat کلاسیک به علاوه Kt-ATPase [51] در حمل و نقل انبوه نقش دارد، در حالی که پمپ Nat دوم یا Nat-ATPase در ریز نقش دارد. تنظیم تنظیم شده بازجذب Nat [52،53] گزارش های زیادی در مورد تنظیم Nat به اضافه K به علاوه -ATPase توسط هورمون ها و اوتاکوئیدها [50،54] و همچنین نقش فسفوریلاسیون تنظیمی در ادبیات وجود دارد [50،55]. در مقابل، گروه‌های کمتری مقررات Nat-ATPase را نقل می‌کنند، زیرا هنوز در مورد هویت آن بحث‌هایی وجود دارد، حتی اگر گزارش‌ها فعالیت Nat-ATPase حساس به فوروزماید را از پستانداران [41،56،57] تا تک یاخته‌ها نشان می‌دهند [58،59] ] و همچنین شبیه سازی پمپ از موجودات مختلف [60-63]. از نتایج ارائه‌شده در اینجا، گروه ما نشان داد که نه تنها هورمون‌ها و اوتاکوئیدها می‌توانند مسیرهای سیگنال‌دهی سلولی را که Nat-ATPase را تعدیل می‌کنند، راه‌اندازی کنند، بلکه اثر ClP که به‌طور اگزوژن به بخش‌های BLM اضافه می‌شود، به برهم‌کنش احتمالی لیپید زیست فعال اشاره دارد. با حوزه های آبگریز تنظیم کننده ها یا خود پمپ؛ یا باید نوعی گیرنده C1P در BLM وجود داشته باشد که هنوز شناسایی نشده است [20،22،23]. شکل 6 یک طرح پیشنهادی برای خلاصه کردن این روش های ممکن عمل ClP را نشان می دهد. توانایی سرامیدها برای تحریک کینازها و برانگیختن پاسخ فیزیولوژیکی متفاوت در سلول های کبدی گزارش شده است [24]. نویسندگان نه تنها توانایی مدولاسیون وابسته به سرامید را در تنظیم Nat/K به علاوه -ATPase و کیناز نشان دادند، بلکه پاسخ‌های دو فازی را نیز با در نظر گرفتن تحریک وابسته به زمان آن خطوط سلولی گزارش کردند، که نشان می‌دهد باید تداخل پیچیده بین سرامید وجود داشته باشد. سیگنالینگ وابسته و سایر سیستم های سیگنالینگ موجود در غشای سلولی. غشاها (شکل 2). علاوه بر این، نتایج ارائه شده در اینجا در ترکیب با نتایج قبلی از گروه ما به وضوح نشان می‌دهد که Cer [33] و ClP PKA و PKC مرتبط با BLM را تعدیل می‌کنند، که به نظر می‌رسد واسطه اثرات ناشی از سرامیدها بر Nat-ATPase زمانی که فراکسیون‌های BLM بودند، می‌شوند. تحت درمان با 100 نانومولار C1P، مهار پمپ را نمی توان به PKA نسبت داد (شکل 4) زیرا قبل از جوجه کشی با PKAi بر عملکرد مهاری C1P تأثیری نداشت. از سوی دیگر، مهار قابل توجه فعالیت Nat-ATPase در درمان ClP به طور کامل توسط کالفوستین C جلوگیری می شود (شکل 3). گزارش‌های قبلی نشان داده‌اند که PKA فعالیت Nat-ATPase کلیه را در مسیری تحریک می‌کند که گیرنده‌های جفت شده با Gs را با فعالیت پمپ مرتبط می‌کند [41]. سیستم‌های سیگنالی که در اینجا در دست‌نوشته ما آمده است - PKA و PKC - به خوبی مورد مطالعه قرار گرفته‌اند، بنابراین اطلاعات زیادی در ادبیات وجود دارد که غلظت‌های کنترل‌های مثبت را همانطور که در اینجا استفاده می‌شود نشان می‌دهد (به ترتیب cAMP و اسید فوربول میریستات PMA). از آنجایی که تمرکز ما یک مطالعه دوز-پاسخ با فعال‌کننده‌ها یا بازدارنده‌های کلاسیک برای سیستم‌های سیگنالینگ مختلف نبود، ما فقط از غلظت فعال‌کننده‌ها یا بازدارنده‌هایی که قبلاً به‌طور مؤثر در مطالعات دیگر از گروه‌های ما یا گروه‌های دیگر استفاده شده‌اند، استفاده کردیم.

شکل 6. مکانیسم پیشنهادی برای عمل ClP بر روی فعالیت Na + ATPase از BLM. (1) C1P (لیپید قرمز) از طریق یک گیرنده جفت شده با پروتئین G هنوز ناشناخته PKC را مهار می کند و در نتیجه سدیم به علاوه -ATPase (پروتئین آبی) را مهار می کند. همین مسیر می تواند BLM PKA (فلش قرمز) را بدون تأثیر بر پمپ فعال کند. (2) CIP می تواند مستقیماً به عوامل موجود در BLM مانند PKC متصل شود که منجر به اثر مهاری روی فعالیت Na + ATPase توصیف شده می شود. نتایج ما نشان داد که اگرچه PKA در BLM وجود دارد و آماده تعدیل پمپ توسط cAMP (دایره‌های سبز و فلش سبز) است، فعال‌سازی آن توسط CIP بر پمپ تأثیری نمی‌گذارد (فلش چین‌دار قرمز). (3) CIP مستقیماً به Nat-ATPase متصل می شود یا در ریزمحیط غشای لیپیدی اطراف Nat-ATPase غنی ​​می شود، بنابراین آن را تعدیل می کند. از نتایج ارائه شده در اینجا، ما قادر به تشخیص هیچ گونه عملکرد تعدیلی ClP بر روی Nat/K به علاوه -ATPase (پروتئین بنفش) موجود در فراکسیون های BLM نبودیم.

برای یادگیری cistanche استاندارد شده افزایش عمر اینجا را کلیک کنید

تشخیص یک سلسله مراتب در فسفوریلاسیون Nat-ATPase زمانی پیشنهاد شد که ما BLM را با Cer [33] تحریک کردیم و مشاهده کردیم که انسداد BLM-PKCZ، عملکرد بازدارندگی Cer را بر روی پمپ کاهش داد و به cAMP- اجازه داد. PKA را برای تحریک آن فعال کرد. علیرغم افزایش تعداد گزارش‌هایی که نقش‌های متفاوتی را برای کینازهای فعال شده سر نشان می‌دهند [44،64-66]، این اولین گزارش از عملکرد فیزیولوژیکی C1P بر روی کینازهای مقیم BLM است که مطمئناً در تنظیم Nat نقش دارد. دست زدن در کلیه ما نمی توانیم به طور قطع تأیید کنیم که Nat-ATPase مستقیماً توسط کینازهای مورد مطالعه فسفریله می شود، زیرا هیچ ابزار آزمایشی در دسترس برای این کار وجود ندارد، عمدتاً به این دلیل که ساختار کامل پمپ سدیم دوم هنوز شناسایی نشده است. با این حال، به خوبی شناخته شده است که Nat-ATPase یک ATPase از نوع P است، و این واقعیت به ما امکان می دهد فرض کنیم که می توان آن را مستقیماً توسط فسفوریلاسیون در مکان های تنظیمی احتمالی تعدیل کرد [46،55] ما نمی توانیم فعال سازی را رد کنیم. کینازهای مربوطه منجر به فسفوریلاسیون پروتئین دیگری در این شبکه تنظیمی می شود که مسئول مهار ATPase است.

در میان اسفنگولیپیدهای مختلف زیست فعال، C1P کمتر در سیستم‌های فیزیولوژیکی مختلف ثبت شده است. از سوی دیگر، اسفنگوزین{1}فسفات، که ممکن است مهمترین لیپید فعال زیستی باشد، در فیزیولوژی و پاتوفیزیولوژی کلیه به خوبی مورد مطالعه قرار گرفته است [2،6،7،67]. از آنجایی که اعضای S1P و ClP نوعی خانواده از مولکول های سیگنالینگ با پیش سازهای مشترک و مراحل تبدیل متقابل مشترک هستند، می توان تصور کرد که ClP نیز در امتداد کل نفرون وجود داشته باشد. کار توسط Sugiura و همکاران، 2002 [11]، که یک نشانه در این زمینه است، نشان داد که CerK در کلیه ها به شدت بیان می شود. با وجود داده‌های قوی در ادبیات که نقش ClP را در پودوسیت‌ها و بیماری گلومرولی نشان می‌دهد [68،69]، هیچ اثری به‌طور جداگانه بیان CerK و عملکرد ClP را در هیچ یک از بخش‌های نفرون نشان نداده است. در غیر این صورت، ClP احتمالاً در تمام سلول‌های کلیوی وجود دارد یا از طریق حضور اسفنگومیلین، که مسیر نجات سنتز ClP را ممکن می‌سازد، یا با این واقعیت که ClP می‌تواند توسط جریان خون به بافت کلیه ارائه شود. این‌ها راه‌های بسیار قابل قبولی هستند تا فکر کنیم که این لیپید سیگنال‌دهنده نقش‌های متفاوتی در سایر بخش‌های نفرون ایفا می‌کند، اگرچه ما در اینجا آن را بررسی نکردیم.

به طور قابل ملاحظه ای نشان داده شد که سطوح سر به طور قابل توجهی در طول افزایش یافتآسیب کلیویبه دلیل افزایش گزارش شده در فعالیت اسفنگومیلیناز تحریک شده توسط Ca2t پس از مختل شدن هموستاز سلولی Ca2t [2،4،24،70]. این مشاهدات به ما امکان می دهد فرض کنیم که مدولاسیون با واسطه کیناز فعالیت BLM Nat-ATPase توسط Cer و C1P می تواند به ویژه در بافت آسیب دیده کلیه مرتبط باشد، که می تواند نقش جدیدی را برای سرامیدها در ایجاد و پیشرفت نفروپاتی باز کند. در حضور C1P، BLMkinaseهای مورد مطالعه به طور متفاوت مدوله شدند (شکل 5). در حالی که ClPin PKC را مهار کرد، که منجر به مهار قابل توجهی از فعالیت Nat-ATPase شد، فعال‌سازی وابسته به C1P PKA بر فعالیت Nat-ATPase تأثیری نداشت. این به ما امکان می دهد فرض کنیم که یک سلسله مراتب شامل کینازهای مختلف وجود دارد که منجر به یک سوئیچ پیچیده در / خاموش به Nat-ATPase می شود. این سوئیچ ممکن است شامل ایزوفرم های مختلف PKC و PKA باشد، یا باید با تبدیل بالقوه C1P به Cer و سایر لیپیدهای زیست فعال که مسیرهای سیگنالینگ دیگری را در BLM ایجاد می کنند، که قبلاً در سلول های کبدی توضیح داده شده است، تداخل وجود داشته باشد [24].

تعادل بین Cer و ClP می تواند یک هدف امیدوارکننده جدید برای توسعه کلاس های جدید داروها با اقدامات کارآمدتر برای جلوگیری از پیشرفت باشد.نارسایی کلیهیا حداقل کیفیت زندگی بیماران کلیوی را بالا ببرد.

5. نتیجه گیری ها

از نتایج ارائه شده در اینجا، یک آبشار سیگنالینگ با تولید Cer و فسفوریلاسیون بیشتر به ClP یک مسیر کارآمد برای مهار Nat-ATPase درسلول های لوله های پروگزیمال کلیهاز طریق PKA و PKC مرتبط با BLM به عنوان تأثیرگذار [17]. این مشاهدات اهمیت پروتئین کینازها را در کنترل خوب شارهای Nat در یک بخش نفرون نشان می دهد که در آن بیش از دو سوم اولترافیلترات گلومرولی، لوله پروگزیمال، بازجذب می شود. با بهترین دانش ما، کار حاضر برای اولین بار نشان می دهد که ClP می تواند BLM-Nat-ATPase را از سلول های توبول پروگزیمال کلیه با تحریک کینازهای مرتبط با غشاء (PKA و PKC) تعدیل کند. بنابراین، نتایج فوق شواهدی را نشان می‌دهد که Cer و ClP در شبکه تنظیمی اسفنگولیپیدهای فعال زیستی و گلیسرولیپیدهای ساکن در این بخش نفرون شرکت می‌کنند، که باید برای نفرون کلی صادق باشد. این فرضیه را می توان با این دیدگاه پشتیبانی کرد که Cer یک لیپید است که تقریباً در تمام بخش های نفرون وجود دارد و همچنین در دسترس بودن Cer برای تشکیل C1P امکان پذیر است.