انتقال حساس به فلوریدزین اکیناکوزید و اکتئوزید و تغییر مسیر جذب روده ای پس از استفاده از عصاره سیستانچ توبولوزا

برای اطلاعات بیشتر:ali.ma@wecistanche.com

تاداتوشی تانینو و همکاران

چکیده اهداف

هدف از این مطالعه پرداختن به اثرات مفیدعصاره سیستانچ توبولوزادر بهبود نفوذپذیری روده پایین اچیناکوزید (ECH) و اکتئوزید (ACT).

مواد و روش ها

جذب ECH و ACT درعصاره سیستانچ توبولوزابا استفاده از تک لایه های سلولی Caco{0}} روده انسان با ترکیبات دست نخورده مشخص شد. جذب وابسته به گلوکز از ECH و ACT با روش پرفیوژن در محل تایید شد.

یافته های کلیدی

نفوذپذیری ظاهری (Papp) بین ECH دست نخورده و ACT دست نخورده تفاوت معنی داری نداشت. در حضور فلوریدزین، Papp از theECH و ACT در دوز بالا به 20 درصد از درمان مربوطه کاهش یافت، اما توسط فلورتین و وراپامیل تغییر نکرد.عصاره سیستانچ توبولوزادر دوزهای پایین و بالا، Papp ECH و ACT (هر دو تا سه برابر) افزایش یافت، که منجر به مشارکت بزرگ آنها در جذب مستقل از ناقل گلوکز وابسته به سدیم شد. در غلظت کم، سطوح ECH و ACT همزمان در خون پورتال به طور قابل توجهی توسط فلوریدزین سرکوب شد.

نتیجه

رژیمی و داروییعصاره سیستانچ توبولوزاافزایش جذب روده ای ECH و ACT ممکن است به مدیریت بهتر سلامت انسان کمک کند، اگرچه دخالت حمل و نقل حساس به فلوریدزین باید کاهش یابد.

کلید واژه هااکتئوزید; تک لایه سلولی کاکو-2.عصاره Cistanchetubulosa; اکیناکوزیدناقل گلوکز حساس به فلوریدزین

عصاره سیستانچ توبولوزا

روی پودر Cistanche tubulosa کلیک کنید

مقدمه

ریشه سیستانچ توبولوزا به طور سنتی برای دارو و غذا استفاده می شده است.عصاره سیستانچ توبولوزاشناخته شده است که دارای اثرات دارویی در بیماری های مختلف مغزی، عملکردهای ضد پیری، متابولیسم چربی، و رشد مو است.Cistanche tubulosa[5،6] گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید، دسته ای از ترکیبات پلی فنلی، مواد شیمیایی اصلی در گونه های سیستانچ هستند، [7] اگرچه مقدار آنها در گونه های مختلف متفاوت است. اکیناکوزید (ECH؛ شکل 1) یکی از گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید اصلی در HerbaCistanchis است. این توسط آنزیم های با منشاء باکتریایی در روده بزرگ به اکتئوزید (ACT؛ همچنین به نام ورباسکوزید) هیدرولیز می شود. [8،9] ECH و ACT دارای فعالیت مفید محافظت از کبد [10] و ضد التهاب [11] در جوندگان هستند. به طور شگفت انگیزی، ECH بسیار محلول در آب، نتایج رفتاری و عصبی شیمیایی را در مدل موش بیماری پارکینسون بهبود می بخشد و فعال شدن کاسپاز{10}} و کاسپاز-8 را در نورون های گرانول مخچه مهار می کند.[9] به خوبی شناخته شده است که سد خونی مغزی ورود و توزیع بیگانه‌بیوتیک‌ها را از خون به مغز محدود می‌کند. وو و همکاران.[12] همچنین نشان داد که ACT محلول در آب به سرعت در بافت مغز موش‌ها توزیع می‌شود. بنابراین، ECHand ACT ممکن است توسط سیستم(های) خاص به مغز، روده و کبد منتقل شود.

اگرچه شواهد قوی وجود دارد که نشان می دهد مصرفعصاره سیستانچ توبولوزابرای سلامت انسان مفید است، نفوذپذیری ECH خالص در سراسر تک‌لایه‌های سلولی Caco{{0}} با غلظت آپیکال 1.6±8.4 میکروگرم بر میلی‌لیتر برابر یا کمتر از مارکرمانیتول انتقال سلولی است.[13] هنگامی که ECH خالص به صورت خوراکی به موش ها تجویز می شود (دوز، 1{{10}}0 میلی گرم بر کیلوگرم)، جذب بسیار سریع است (Tmax، 15 دقیقه)، و حداکثر غلظت سرمی بسیار پایین است. (Cmax، 0.61 ± 0.32 ug/ml).[14] فراهمی زیستی مطلق ECH فقط {28}}.83 درصد است. به طور مشابه، هنگامی که سلول‌های Caco با یک بخش فنلی که تا حدی از فاضلاب کارخانه زیتون خالص شده است، انکوبه می‌شوند، جذب ACT خالص سریع است و اوج انباشت بعد از 3{30}} دقیقه و بازده کل تجمع 0.1 درصد از سطح 130 درون سلولی را فراهم می‌کند. pmol/mg پروتئین سلولی.[15] در موش‌ها، حداکثر غلظت (0.03 ± 0.13 میکروگرم بر میلی‌لیتر) ACT خالص در 30 دقیقه پس از دوز خوراکی با mg/kg 100 به دست آمد، [12] که نشان‌دهنده جذب سریع روده‌ای است. فراهمی زیستی خوراکی ACT، و همچنین ECH، بسیار کم است (0.04 ± 0.12 درصد)، که نشان دهنده احتمال اثرات عبور اول در دستگاه روده و کبد است. در صفرای موش، ترکیبات متیلاسیون و گلوکورونیداسیون ECH متابولیت های اصلی هستند، [16] اگرچه میزان متابولیسم کبدی نامشخص است. ما در ابتدا دریافتیم که ECH و ACT در هموژنات مخاط روده موش صحرایی و اسید معده مصنوعی کاملاً پایدار بودند (داده‌ها نشان داده نشده است). نجار و همکاران.[17] نشان داد که ACT فعالیت P-glycoprotein (P-gp) -ATPase را به روشی مشابه وراپامیل (یک بازدارنده P-gp نماینده) مهار می کند، که دلالت بر تعدیل کننده P-gp دارد. با این حال، مشخص نیست که آیا ACT به عنوان یک بستر P-gp در دسترس است یا خیر. جالب توجه است، یافته‌های اخیر فلاونوئید-D-گلوکوزید رژیمی نشان داد که پروتئین مقاوم به چند دارو (MRP2) ناقل گلوکز وابسته به سدیم (SGLT){45}}واسطه جذب کورستین 4'-O{48}}گلوکز را پوشانده است،[18] 19] که مسئول جذب بسیار ضعیف است. با این حال، اطلاعات بسیار کمی در مورد حساسیت گلوکوزیدهای پلی فنلی به ناقلین جذب کننده، از جمله ناقل گلوکز، شناخته شده است. اطلاعات در مورد ویژگی های جذب کوئرستین 4'-گلوکزید و ECH به سرعت در سد خونی-مغزی نفوذپذیر ما را بر آن داشت تا در جذب گلیکوزیدهای حساس به ناقلین در رژیم غذایی گلیکوزید C p. توبولوزا

در این مطالعه، ما جذب واسطه‌ای گلوکز ECH و ACT دست‌نخورده را با استفاده از تک‌لایه‌های سلولی Caco{1}} انسان روده بررسی کردیم. به طور همزمان، انتقال جذب ECH و ACT به صورت غیر خوراکی همراه استعصاره سیستانچ توبولوزابا یک سیستم پرفیوژن روده در مدل و درجا با نمونه‌گیری خون پورتال مشخص شد، که به راحتی می‌تواند بین میزان جذب و اجتناب از دفع اول کبدی تمایز قائل شود.

مواد و روش ها

مواد

ECH و ACT دست نخورده هدایای سخاوتمندانه ای از EishinTrading Co., Ltd (اوزاکا، ژاپن) بودند. Phloridzin و phloretin از Tokyo Kasei Co., Ltd. (توکیو، ژاپن) خریداری شدند. وراپامیل و اسید p-کوماریک، که به عنوان استانداردهای داخلی برای سنجش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) استفاده می شوند، از Sigma-Aldrich (سنت لوئیس، MO) به دست آمدند. ،ایالات متحده آمریکا). تمام مواد شیمیایی دیگر مورد استفاده از درجه تحلیلی و تجاری در دسترس بودند.

مواد گیاهی و تهیه عصاره متانولی

C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) یک گیاه انگلی چند ساله است که روی ریشه گونه Salvadoraor Calotropis رشد می کند و در کشورهای آفریقای شمالی، عربی و آسیایی پراکنده است. ساقه های خشک شده C. tubulosa پودر شده و سه بار با رفلاکس متانولوندر به مدت 3 ساعت استخراج شد. تبخیر حلال با کاهش فشار کم عصاره متانولی را فراهم کرد. عصاره متانولیک (گرید تجاری، شماره دسته 20070130؛ نام تجاری ثبت شده، Sabaku Ninnjinn Kanka) یک هدیه سخاوتمندانه از شرکت بازرگانی Eishin، با مسئولیت محدود از طریق Muraoka andMorikawa (دانشگاه Kinki، ژاپن) بود و شناسایی گیاه شناسی توسط پروفسور Jia Xiaoguang در انجام شد. موسسه طب سنتی چینی و قوم شناسی سین کیانگ.

تجزیه و تحلیل عصاره گیاهی: کروماتوگرافی

ما محتوای ECH و ACT را در آن تعیین کردیمعصاره سیستانچ توبولوزا(شماره دسته ای 20070130) توسط تجزیه و تحلیل HPLC که در زیر توضیح داده شده است. داده های به دست آمده در جدول 1 نشان داده شده است.

کشت سلولی

سلولهای Caco{0}} خریداری شده از American Type CultureCollection (ATCC, Rockville, MD, USA) در پاساژهای 38-53 استفاده شد. آنها در محیط کشت متشکل از محیط Eagle اصلاح شده Dulbecco (DMEM، Nacalai Tesque Co.، کیوتو، ژاپن) تکمیل شده با 0.1 میلی مولار اسیدهای آمینه غیر ضروری، 10 درصد سرم جنین گاوی غیرفعال شده با حرارت، 100 رشد کردند. U/ml پنی سیلین G و 0.1 mg/ml استرپتومایسین سولفات.

مطالعات حمل و نقل

سلول‌های Caco{0}} با تراکم 6.4 × 103 سلول / سانتی‌متر مربع روی فیلترهای پلی کربنات کاشته شدند. تک لایه ها برای آزمایش های حمل و نقل 21-25 روز پس از بذر استفاده شد. ECH وACT دست نخورده که معادل محتویات آنها در داخل بودعصاره سیستانچ توبولوزا (4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (final concentration, 1 mM) and verapamil (final concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (final concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2.

اکیناکوزید درعصاره سیستانچ توبولوزا

پرفیوژن روده ای درجا

موش های صحرایی نر ویستار (230-250 گرم) از SLCJapan (Hamamatsu، ژاپن) به دست آمدند. حیوانات به مدت 1 هفته قبل از استفاده در اتاقی با تهویه مطبوع تحت چرخه نور/تاریکی 12 ساعته قرار گرفتند. موش‌ها با غذای استاندارد آزمایشگاهی (شرکت مخمر شرقی، توکیو، ژاپن) با آب به طور آزاد تغذیه شدند و یک شب قبل از آزمایش ناشتا بودند. مطالعه پرفیوژن در گردش بر اساس روش اصلاح شده توصیف شده توسط Mihara و همکاران انجام شد. [20] به طور خلاصه، موش ها با محلول 25 درصد اورتان (1 میلی گرم بر کیلوگرم) بیهوش شدند تا از کاهش فشار خون جلوگیری شود. یک برش خط میانی شکم ایجاد شد و روده کوچک در معرض دید قرار گرفت. مجرای صفراوی برای جلوگیری از ترشح صفرا در پرفیوژن بسته شد. کل روده کوچک به عنوان یک بخش (از دوازدهه تا ایلئوم) با نرمال سالین در دمای 37 درجه به مدت 10 دقیقه شستشو داده شد تا زمانی که لباس شفاف ظاهر شود. لوله های شیشه ای متصل به لوله های سیلیکونی سپس به هر دو انتهای روده کوچک کانوله شده و با نخ بخیه محکم می شوند. سپس روده کوچک در شکم جایگزین شد و کانول ها به یک پمپ پریستالتیک متصل شدند. ورید پورتال با لوله پلی اتیلن (PE10) کانوله شد.عصاره سیستانچ توبولوزاموجود در بازار در بافر بی کربنات Krebs-Henseleit (pH 7.4) معلق شد تا غلظت نهایی 4.5 mg/ml بدست آید و به مدت 1{8}} دقیقه در 8000 rpm سانتریفیوژ شد تا اجزای نامحلول حذف شوند. مایع رویی در غیاب یا حضور فلوریدزین (1 میلی مولار) در یک مخزن جمع آوری شد که در طول دوره آزمایش در دمای 0.5 ± 37 درجه نگهداری شد. در زمان‌های مشخص شده، خون از طریق کانول ورید پورتال گرفته شد. پس از سانتریفیوژ کردن نمونه‌های خون، پلاسمای به‌دست‌آمده با استونیتریل حاوی استاندارد داخلی پروتئین‌زدایی شد و در دور 3000 سانتریفیوژ شد. مواد رویی تبخیر شدند و باقیمانده با یک فاز متحرک شامل استونیتریل و 0.5 درصد اسید استیک حل شد. محلول مخلوط بر روی یک ستون HPLC بارگذاری شد. موش‌ها مطابق با رویه‌های اخلاقی به دنبال دستورالعمل‌های مراقبت و استفاده از حیوانات آزمایشگاهی صادر شده توسط دولت ژاپن و دانشگاه کینکی مورد استفاده قرار گرفتند.

تجزیه و تحلیل HPLC

تجزیه و تحلیل HPLC بر روی یک سیستم مجهز به aShimadzu SPD{{0}}A، آشکارساز UV، پمپ Shimadzu LC-10 و یکپارچه کننده کروماتوپاک Shimadzu C-R4A (کیوتو، ژاپن) انجام شد. ECH و ACT با استفاده از ستون Inertsil ODS (5 میکرومتر، 4.6 × 15{13}} میلی‌متر، GL Sciences Inc.، اوزاکا، ژاپن) از هم جدا شدند. فاز متحرک استونیتریل و 0.5 درصد اسید استیک با نسبت 15:85 (v/v) با سرعت جریان 1.0 میلی لیتر در دقیقه استفاده شد. تشخیص در 334 نانومتر انجام شد

تجزیه و تحلیل جنبشی

ضرایب نفوذپذیری ظاهری (Papp) از شیب بخش خطی مسیر زمانی انتقال مرکب در سراسر تک‌لایه‌های سلولی Caco-2، به شرح زیر برآورد شد: برنامه P dQ dt AC=( ) ( )

که در آن dQ/dt میزان نفوذپذیری است، C{0}} غلظت اولیه املاح در محفظه دهنده، و A سطح غشا (4.7 سانتی متر مربع) است.

در مطالعه پرفیوژن روده در محل موش صحرایی، مساحت زیر منحنی غلظت-زمان پلاسما (AUC{2}}-90) در ورید پورتال از زمان صفر تا آخرین اندازه‌گیری شده طبق قانون ذوزنقه‌ای خطی محاسبه شد.

اکتئوساید درعصاره سیستانچ توبولوزا

خواص فیزیکوشیمیایی

مساحت سطح قطبی و مساحت سطح غیرقطبی ترکیبات با استفاده از برنامه SAS محاسبه شد (نسخه 0.8, Olsson, T.; Sherbukhin, V., Synthesis and Structure Administration, 1997-2001, AstraZeneca, Cary ، NC، ایالات متحده). مقادیر log P و pKa به طور تجربی تعیین شده از ادبیات به دست آمد.

تحلیل آماری

داده ها با استفاده از تحلیل واریانس یک طرفه و سپس آزمون تعقیبی توکی مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. مقادیر احتمال کمتر از 5 درصد معنی دار در نظر گرفته شد.

نتایج

انتقال جذبی اکیناکوزید و آکتئوزید از طریق تک لایه سلولی Caco{0}}

در موش ها و موش ها، ECH [10،14] و ACT [12،21] دست نخورده به صورت خوراکی در دوزهای 100-100 میلی گرم بر کیلوگرم تجویز می شوند. اینعصاره سیستانچ توبولوزااستفاده شده حاوی تقریباً 3{14}} درصد ECH و 15 درصد ACT در هر دوز بود. از آنجایی که عصاره باعث تغییر فشار اسمزی و pH در محیط جوجه کشی شد، غلظت‌های 5/4 و 5/13 میلی‌گرم در میلی‌لیتر بر اساس دوز خوراکی (ترکیبات سالم: 2-2{18} mg/2{2{31}) تعیین شد. }}} گرم وزن بدن) در موش. و 3.{39}} میلی گرم برایACT، به ترتیب. ما مقادیری از عصاره C. tubulosa را به کار بردیم که بسیار کمتر از دوز خوراکی ECH وACT گزارش شده در انسان بود (مقدار رژیم غذایی توصیه شده عصاره: 150 میلی گرم حاوی تقریباً 45 میلی گرم برای ECH و 22.5 میلی گرم برای ACT). در دوزهای پایین و بالای ترکیبات دست نخورده، پروفایل های جذب (شکل 2) و پاپ تفاوت معنی داری بین ECH و ACT به عنوان معادل ECH نداشتند (جدول 2). هنگامی که عصاره C. tubulosa با دوز بالای 13.5 میلی گرم در میلی لیتر در محیط قرار گرفت، Pappvalues ​​(به ترتیب 1.27 ± 0.13 و 0.34 ± 0.03 × 10-6 سانتی متر بر ثانیه) ECH و ACT همزمان سه برابر بیشتر از ECH و ACT دست نخورده (به ترتیب 0.09 ± 0.38 و 0.03 ± 0.10 × 10-6 سانتی متر بر ثانیه) بود (جدول 2). عصاره، بر خلاف ترکیبات دست نخورده، به طور قابل توجهی انتقال جذب ECH و ACT را افزایش داد.

اثر مهاری فلوریدزین، فلورتین و وراپامیل

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0.3 میلی مولار) فلورتین به دلیل سمیت قابل توجه سلولی قابل استفاده نیست. علاوه بر این، P-gp به عنوان یک بازیگر مهم مسئول تعامل بین داروهای گیاهی و P-gpsubstrate های مهم بالینی شناخته شده است. وراپامیل انتقال جذبی ترکیبات دست نخورده را افزایش نداد (شکل 3).

انتقال جذبی ECH و ACT در عصاره (دوز پایین) به طور قابل توجهی توسط فلوریدزین مهار شد (جدول 2 و شکل 4). عصاره در دوز بالا مهار حساس به فلوریدزین را سرکوب کرد، اگرچه انتقال ECH و ACT دست نخورده به فلوریدزین حساس تر بود (جدول 2).

مطالعه پرفیوژن روده در محل

در یک مطالعه درجا، ما آزمایش کردیم که آیا ECH و ACT در آن وجود دارد یا خیرعصاره سیستانچ توبولوزاتوسط SGLT1 واقع در سمت آپیکال روده کوچک منتقل شدند. هنگامی که عصاره رژیمی با دوز پایین (4.5 میلی گرم در میلی لیتر) پرفیوژن شد، ECH و ACT به سرعت در خون پورتال ظاهر شدند (شکل 5). AUC برای ECH 384.1 ± 2702.8 میکرومتر در دقیقه و برای ACT 698.3 ± 197.2 میکرومتر در دقیقه تعیین شد. پس از اینکه AUC با محتوای از نرمال شدعصاره سیستانچ توبولوزامقدار جذب شده بین ECH وACT تفاوت معنی داری نداشت. فلوریدزین حساس به SGLT، برخلاف فلورتین، به طور قابل توجهی انتقال جذبی ECH همزمان (AUC، 248.2 ± 649.4 میکرومتر · دقیقه) و ACT (تشخیص داده نشده) را سرکوب کرد.

بحث

برخی از ترکیبات گیاهی سوبستراهای P-gp هستند که در کبد، روده، مغز و کلیه ها به شدت بیان می شود. P-gp یک عامل تعیین کننده برای فراهمی زیستی درون تنی، وضعیت، و توزیع داروهای گیاهی، از جمله سنت جان، کورکومین، اکیناسه، جینسنگ، جینکو، و زنجبیل است. }گلوکزید، یک مشتق فلاونوئید، نیز توسط ناقل MRP2 روده ای محدود شد.[24] بنابراین، این مطالعه به منظور بررسی خواص جذب ECH و ACT همزمان با داروهای خوراکی و دارویی طراحی شد.عصاره سیستانچ توبولوزا.

تک‌لایه‌های سلولی پلاریزه کاکو{{{0}}، و همچنین روده، [25]، انتقال‌دهنده‌های اصلی خروج دارو از روده را بیان می‌کنند، مانند P-gp، MRPs و پروتئین مقاوم به سرطان سینه.[26]فلاونوئیدهای غذایی. نشان داده شده است که کورستین [27] و میریستین [28] از جریان با واسطه P-gp هم در رده های سلولی و هم در مدل های حیوانی جلوگیری می کنند. وراپامیل، یک مهارکننده P-gp، نفوذپذیری ACT و ECH در سراسر تک‌لایه‌های سلولی Caco را تغییر نداد (شکل 3)، که نشان می‌دهد ECH وACT دست نخورده توسط پمپ خروجی P-gp محدود نشده‌اند. مطالعات قبلی ما نشان داد که پروتئین‌های MRP2 در تک‌لایه‌های سلولی Caco بیان نمی‌شوند.[29] جریان با واسطه P-gp و MRP{16}}را می‌توان در حمل و نقل ECH و ACT حذف کرد. برخی از گلیکوزیدهای کورستین با چربی دوستی کم به طور موثرتری نسبت به خود کورستین جذب شدند. توجه ما بر عملکرد ترکیبی دو درون سلولی ناقل گلوکز متمرکز شده است: SGLT در غشای مرزی و انتقال گلوکز انتشار تسهیل شده (GLUT) در غشای قاعده جانبی. کشت سلولی Caco{19}} را می توان به عنوان مدلی برای مطالعه GLUT2 حساس به فلورتین، SGLT1 و 2 انتقال دهنده حساس به فلوریدزین استفاده کرد. با نرخ بالا با Pappof 36.8 ± 1.1×10-6 cm/s.[35] دارای پاپ بالاتر از پروپرانولول نشانگر انتقال بین سلولی است (2.8 ± 23.4 × 10-6 سانتی متر بر ثانیه). همانطور که در جدول 2 نشان داده شده است، ECH و ACT دست نخورده دارای Papp بسیار کمتری نسبت به گلوکز و پروپرانولول غیرفعال بود. ما لگاریتم ضریب تقسیم (اکتانول-آب) را محاسبه کردیم، log P، برای ECH و ACT به ترتیب 2.32- و 0.077 محاسبه شد. اعتقاد بر این است که ترکیبات آبدوست قطبی از طریق یک مسیر پاراسلولی (از طریق اتصالات تنگ) منتقل می شوند. به نظر می رسد گلیکوزیدهای دو فنیل اتانوئیدی مانند مانیتول از طریق یک مسیر پاراسلولی منتقل می شوند. با این حال، فلوریدزین به طور چشمگیری نفوذپذیری جذب ECH و ACT دست نخورده را کاهش داد (جدول 2)، که نشان می دهد اپیکال SGLT1 نقش عمده ای در جذب روده ای ECH و ACT دست نخورده ایفا می کند. در یک دوز معادل، نفوذپذیری آبگریز بیشتر ACT نزدیک به نفوذپذیری ECH بود (شکل 2 و جدول 2). یوشیکاوا و همکاران.[36] نشان داده اند که انتقال دهنده های تسهیل کننده (GLUT 1 و 2)، و همچنین SGLT1 حساس به فلوریدزین، به شدت در روده کوچک بیان می شوند. از آنجایی که مقادیر جذب شده ترکیبات بر اساس تعادل جرم بین جذب و حذف است، ما مشارکت GLUT2 را ارزیابی کردیم. گلوکز از غشاهای آپیکال انتروسیت ها توسط SGLT1 با میل ترکیبی بالا و ظرفیت کم عبور می کند و از غشای قاعده جانبی از طریق GLUT2 با میل ترکیبی کم و ظرفیت بالا خارج می شود. فلورتین (یک بازدارنده خاص GLUT2) انتقال ECH andACT دست نخورده را لغو نکرد (شکل 3). Funes و همکاران.[37] نشان داد که ACT به شدت با گروه‌های فسفات غشاهای فسفولیپیدی تعامل دارد. از آنجایی که گروه‌های هیدروکسیل در ساختار ACT فراوان هستند، پیوندهای هیدروژنی بین این گروه‌ها و سرهای قطبی گلیسرول یا گروه‌های فسفات فسفولیپیدها محتمل‌ترین برهمکنش هستند. هنگامی که ECH دست نخورده و ACT معادل آن با تک‌لایه‌های Caco{62}} به مدت 11 ساعت انکوبه شدند، تجمع سلولی ACT (0.04 ± 0.24 نانومول بر سانتی‌متر مربع) سه برابر بیشتر از ECH بود (0.01 ± 0.07 نانومول بر سانتی‌متر مربع). ما فکر می‌کردیم که ECH و ACT حساس به SGLT به آرامی از انتروسیت‌ها به جریان خون منتقل می‌شوند، که احتمالاً منجر به کاهش پاپ مشاهده شده می‌شود. در مقایسه با ECH بسیار آبدوست، نفوذپذیری کم ACT ممکن است به دلیل قرار گرفتن در غشاهای سلولی باشد.

عصاره سیستانچ توبولوزا

ترکیبات پلی فنولی در طول کاربرد بالینی خود در مخلوط های گیاهی مصرف می شوند و به عنوان مکمل های غذایی به صورت تجاری در دسترس هستند. در یک مطالعه آزمایشگاهی، نشان داده شد که جذب اپی کاتچین فنولیک تحت تأثیر ترکیب مواد تشکیل دهنده مواد غذایی نوشیدنی قرار نمی گیرد.[38] در مقابل، Hypericum perforatumL. ماتریس های محصول بر انتقال کوئرستین گلوکوزیدها (روتین و ایزوکورسیترین) و سلول هایپروسید در سراسر کاکو{2}} اثر می گذارند که دلیل آن تفاوت در ترکیب ماتریکس فیتوشیمیایی و ویژگی های حمل و نقل، یعنی انتقال پاراسلولی و حمل و نقل با واسطه یا فعال است.[39] در این مطالعه، C. tubulosa یک انتقال ترانس اپیتلیال سه برابری بالاتر از ECH و ACT سالم ارائه کرد (شکل 2 و جدول 2). ما حدس می زنیم که اجزاء درعصاره سیستانچ توبولوزافعال کردن ناقل حساس به فلوریدزین و/یا تسریع حذف ECH داخل سلولی و ACT.عصاره سیستانچ توبولوزادر دوز بالا به نظر می رسید که قدرت حمل و نقل حساس به فلوریدزین را تا حد زیادی پنهان می کند (جدول 2). کربوهیدرات‌های رژیم غذایی [40] و پروتئین‌ها [41] با برخی از پلی‌فنول‌ها در دستگاه گوارش تعامل دارند. Morikawa et al.[10] نشان داد که پنج ایریدوئید، کانکانوزید AD، و کانکانول، یک گلیکوزید مونوترپن، کانکانوزید E، دو الیگوگلیکوزید فنیل اتانوئید، کانکانوزیدهای F و G، و یک الیگو قند آسیله، کانکانوز، را می توان از آن جدا کرد.عصاره سیستانچ توبولوزا

در حال حاضر استفاده می شود. سایر مواد، از جمله پروتئین های موجود درعصاره سیستانچ توبولوزا، نامشخص باقی می ماند. همراه با حدس و گمان فوق، ما طراحی شده‌ایم تا بررسی کنیم که آیا اجزای دیگر با SGLT1 تعامل دارند و از جذب ECH و ACT جلوگیری می‌کنند.

آزمایش‌های درون تنی نمی‌توانند به راحتی بین میزان جذب و اجتناب از انتقال اول از طریق کبد تمایز قائل شوند. مدل پرفیوژن روده ای درجا به دلیل کنترل آسان پارامترهای آزمایش و حذف تأثیر سایر اندام ها و حفظ جریان خون سالم روده نسبت به مدل های in-vivo و in-vitro مزیت دارد.[22] دخالت ناقل گلوکز حساس به تفلوریدزین در سیستم پرفیوژن روده ای آنین-جا بررسی شد. همانطور که در شکل 5 نشان داده شده است، مقادیر ECH و ACT همزمان جذب شده استعصاره سیستانچ توبولوزا (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10-6 سانتی متر در ثانیه به طور کامل در انسان جذب می شود، در حالی که داروها و پپتیدها با جذب ضعیف (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10-6 سانتی متر بر ثانیه (جدول 2)، فراهمی زیستی خوراکی بالا را در حیوانات و انسان نشان می دهد. کرسپی و همکاران.[43] نشان داد که جریان در یک مطالعه پرفیوژن روده در محل تفاوت معنی‌داری بین فلوریدزین و فلورتین ندارد. آنها [44] همچنین نشان دادند که فراهمی زیستی خوراکی فلوریدزین با حساسیت بالا به SGLT1 در موش‌ها تنها 10 درصد بود. مطالعات آینده نیاز به ارزیابی فراهمی زیستی و اثر عبور اول کبدی ECH همزمان پس از تجویز خوراکی عصاره غذایی در دوز بالا دارند. نتایج درجا حاکی از آن است که مصرفعصاره سیستانچ توبولوزاممکن است جذب خوراکی پایین ECH و ACT دست نخورده را بهبود بخشد.

نتیجه

رژیمی و داروییعصاره سیستانچ توبولوزاافزایش جذب روده ای ECH و ACT ممکن است به مدیریت بهتر سلامت انسان کمک کند، اگرچه دخالت حمل و نقل حساس به فلوریدزین باید کاهش یابد.

اعلامیه ها

تضاد علایق

نویسنده (نویسندگان) اعلام می کنند که هیچ تضاد منافعی برای افشا ندارند

منابع مالی

این کار تا حدی توسط مرکز تحقیقات فناوری پیشرفته از دانشگاه کینکی پشتیبانی شد.

قدردانی

نویسندگان مایلند از Osamu Muraoka (دانشگاه Kinki، اوزاکا، ژاپن) و Toshio Morikawa (دانشگاه Kinki، اوزاکا، ژاپن) برای عرضهعصاره سیستانچ توبولوزاو ترکیبات خالص ما از ماساهیرو ایواکی (دانشگاه کینکی) برای حمایت از مطالعه بسیار سپاسگزاریم.

عصاره سیستانچ توبولوزامحصولات

از: انتقال حساس به فلوریدزین اکیناکوزید و اکتئوزید و تغییر مسیر جذب روده ای پس از استفاده ازعصاره سیستانچ توبولوزا' توسطتاداتوشی تانینو و همکاران

---© 2015 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 67, pp. 1457–1465,گلوکزیدهای فنیل اتانوئیدی که توسط SGLT1 منتقل می شوند

منابع

1. Tanaka J et al. اثرعصاره سیستانچ توبولوزادر مورد بیماری های مختلف مغزی سبک غذایی 21 2008؛ 12: 24-26.

2. Tanaka J et al. عملکردهای ضد پیریعصاره سیستانچ توبولوزا. سبک غذایی 21 2008؛ 12: 27-29.
3. Tanaka J et al. توابع زیبایی و رشد مو ازعصاره سیستانچ توبولوزا. سبک غذایی 21 2008؛ 12: 29-32.
4. Tanaka J et al. اثر متابولیسم چربی ازعصاره سیستانچ توبولوزا. سبک غذایی 21 2008؛ 12: 30-33.
5. یوشیزاوا اف و همکاران. اجزای تشکیل دهنده Cistanche tubulosa Schrenk (Hook) f.II. جداسازی و ساختار یک گلیکوزید فنیل اتانوئید جدید و یک گلیکوزید نئولینان جدید Chem Pharm Bull 1990; 38: 1927-1930.
6. یوشیکاوا ام و همکاران. الیگوگلیکوزیدهای فنیل اتانوئید و الیگوشکرهای اسیله شده با فعالیت شل کننده عروق از Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468–7475.
7. Tu PF و همکاران. تجزیه و تحلیل گلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی هربا سیستانس توسط RP-HPLC. Yao Xue Xue Bao 1997; 32: 294-300.
8. لی ال و همکاران. تنظیم متابولیک گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید از گیاه هربا در دستگاه گوارش سگ Yao Xue Xue Bao 2001; 36: 432-435.
9. گنگ ایکس و همکاران. اثرات محافظتی عصبی اکیناکوزید در مدل MPTP موش بیماری پارکینسون. Eur J Pharmacol 2007; 564: 66-74.
10. موریکاوا تی و همکاران. الیگوگلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی آسیله شده با فعالیت محافظ کبد از گیاه بیابانی Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2010; 18: 1882-1890.
11. پائولا RD و همکاران. اثرات ورباسکوزید، بیوتکنولوژیک خالص شده توسط کشت سلولی گیاهی سیرینگا ولگاریس، در مدل جوندگان پریودنتیت. جی فارم فارماکول 2011; 63: 707-717.
12. Wu YT و همکاران. تعیین اکتئوزید در Cistanche deserticola و Boschniakia rossica و فارماکوکینتیک آن در موش های صحرایی با حرکت آزاد با استفاده از LC-MS/MS. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89-95.
13. ماتیاس A و همکاران. مطالعات نفوذپذیری آلکیل آمیدها و کونژوگه های اسید کافئیک از اکیناسه با استفاده از مدل تک لایه سلولی کاکو{1}}. J Clin Pharm Therapeut 2004; 29: 7-13.
14. جیا سی و همکاران. تعیین اکیناکوزید در سرم موش توسط کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا فاز معکوس با تشخیص اشعه ماوراء بنفش و کاربرد آن در فارماکوکینتیک و فراهمی زیستی J Chromatogr 2006; 844: 308-313.
15. Cardinali A et al. ورباسکوزیدهای حاصل از آب آسیاب زیتون: ارزیابی دسترسی زیستی و جذب روده ای آنها با استفاده از سیستم مدل هضم/کاکو{1}} آزمایشگاهی. J Food Sci 2011; 176: H48–H54.
16. جیا سی و همکاران. متابولیسم اکیناکوزید، یک آنتی اکسیدان خوب، در موش: جداسازی و شناسایی متابولیت های صفراوی آن Drug Metab Dispos 2009; 37: 431-438.
17. نجار IA و همکاران. تعدیل فعالیت P-گلیکوپروتئین ATPase توسط برخی از ترکیبات گیاهی. Phytother Res 2009; 24: 454-458.
18. Walgren RA و همکاران. جریان فلاونوئید رژیمی کوئرستین 4'-بتا-گلوکوزید از طریق تک لایه‌های سلولی کاکو{4} روده انسان توسط پروتئین مرتبط با مقاومت چند دارویی آپیکال-2. J Pharmacol Exp Ther 2000a; 294: 830-836.
19. Walgren RA et al. جذب سلولی فلاونوئید رژیم غذایی کورستین 4'-بتا گلوکوزیداز توسط ناقل گلوکز وابسته به سدیم SGLT1. J Pharmacol Exp Ther 2000b; 294: 837-843.
20. Mihara K et al. متابولیسم گذر اول روده ای اپریزون در موش صحرایی. Pharm Res 2001; 18: 1131-1137.
21. Isacchi B و همکاران. فعالیت ضد پردردی ورباسکوزید در دو مدل درد نوروپاتیک جی فارم فارماکول 2011; 63: 594-601.

22. کوک تی جی و همکاران. نفوذپذیری روده کلرپیریفوس با استفاده از روش پرفیوژن روده تک گذر در موش صحرایی. سم شناسی 2003; 184: 125-133.

23. کومار YS و همکاران. تعامل دارویی گیاهی با واسطه P-گلیکوپروتئین و سیتوکروم P{3}. Drug Metabol Drug Interact 2010; 25: 3-16.
24. Walle UK و همکاران. انتقال جنستئین-7-گلوکزید توسط سلول های CACO-2 روده انسان: نقش بالقوه برای MRP2. Res Commun Mol Pathol Pharmacol 1999; 103: 45-56.
25. ایتو ک و همکاران. بیان سطح آپیکال/پایه جانبی ناقلین دارو و نقش آن در انتقال وکتوری دارو Pharm Res 2005; 22: 1559-1577.
26. لایتینن ال و همکاران. کشت سلولی Caco{1}} در ارزیابی جذب روده ای: اثرات برخی داروها و ترکیبات طبیعی همزمان در ماتریس های بیولوژیکی. (دانشگاه هلسینکی، فنلاند، 2006) پایان نامه دانشگاهی، صص 1-66.
27. Scambia G و همکاران. کوئرستین اثر آدریامایسین را در رده سلولی سرطان سینه انسان مقاوم به چند داروی MCF-7 تقویت می‌کند: P-گلیکوپروتئین به عنوان یک هدف احتمالی. Cancer Chemother Pharmacol 1994; 34: 459-464.
28. چوی دی اچ و همکاران. تأثیر میریستین، یک آنتی اکسیدان، بر فارماکوکینتیک لوزارتان و متابولیت فعال آن، EXP-3174، در موش: نقش احتمالی سیتوکروم P{2}}A4، سیتوکروم P450 2C9 و P- مهار گلیکوپروتئین توسط میریستین جی فارم فارماکول 2010; 62: 908-914.
29. تانینو تی و همکاران. پیش داروی پاکلیتاکسل{1}}'-اتیل کربنات می تواند جریان سلولی با واسطه گلیکوپروتئین P را برای افزایش سمیت سلولی دارو دور بزند. Pharm Res 2007; 24: 555-565.
30. هالمن پی سی و همکاران. جذب گلیکوزیدهای کوئرستین و کورستین رژیم غذایی در داوطلبان سالم ایلئوستومی Am J Clin Nutr 1995; 62: 1276-1282.
31. Kellett GL و همکاران. جزء انتشاری جذب گلوکز روده ای با جذب GLUT2 ناشی از گلوکز به غشای تخته قلم مو انجام می شود. Biochem J 2000; 350: 155-162.
32. ماده ک و همکاران. مرتب‌سازی پروتئین‌های غشای پلاسمایی درون‌زا از دو مکان در سلول‌های اپیتلیال روده انسان کشت‌شده (Caco{2}}) انجام می‌شود. سلول 1990; 60: 429-437.
33. محراوی ل و همکاران. وجود و بیان افتراقی mRNA های ناقل هگزوز SGLT1، GLUT1، GLUT2، GLUT3 و GLUT5 در کلون های سلولی Caco در رابطه با رشد سلولی و مصرف گلوکز. Biochem J 1994; 298: 629-633.

34. مزونرو جی و همکاران. بیان وابسته به قند ناقل فروکتوز GLUT 5 در سلول های Cac{3}}. Biochem J 1995; 312: 757-762.

35. Walgren RA et al. انتقال کوئرستین و گلوکزیدهای آن از طریق سلولهای کاکو{1}} اپیتلیال روده انسان. Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721-1727.
36. یوشیکاوا تی و همکاران. بیان مقایسه ای ناقلان هگزوز (SGLT1، GLUT1، GLUT2، و GLUT5) در سراسر دستگاه گوارش موش. Histochem Cell Biol 2011; 135: 183-194.
37. Funes L et al. اثرات ورباسکوزید، یک گلیکوزید فنیل پروپانوئید از گیاه لیمو، بر غشاهای مدل فسفولیپیدها. Chem Phys Lipids 2010; 163: 190-199.
38. نیلسون AP و همکاران. تأثیر ترکیب ماتریکس شکلات بر دسترسی زیستی فلاوان{1} کاکائو در شرایط آزمایشگاهی و فراهمی زیستی در انسان. J Agric Food Chem 2009; 57: 9418-9426.
39. گائو اس و همکاران. محتوای بسیار متغیر فنولیک ها در محصولات مخمر سنت جان بر انتقال آنها در مدل سلولی کاکو{1} روده انسان تأثیر می گذارد: منطق دارویی و بیودارویی برای استانداردسازی محصول. J Agric Food Chem 2010; 58: 6650–6659.
40. Schramm DD et al. اثرات مواد غذایی بر جذب و فارماکوکینتیک فلاوانول های کاکائو Life Sci 2003; 73: 857-869.
41. لوران سی و همکاران. اتانول و ماتریکس شراب بدون پلی فنول، تمایز سلول‌های کاکو{1} روده انسان را تحریک می‌کنند. تأثیر ارتباط آنها با عصاره هسته انگور غنی از پروسیانیدین. J Agric Food Chem 2005; 53: 5541–5548.
42. آرتورسون پی و همکاران. ارتباط بین جذب خوراکی دارو در انسان و ضرایب نفوذپذیری ظاهری دارو در سلول‌های اپیتلیال داخلی انسان (Caco{1}}). Biochem Biophys Res Commun 1991; 175: 880-885.
43. کرسپی وی و همکاران. مقایسه میزان جذب روده ای کوئرستین، فلورتین و گلوکزیدهای آنها در موش صحرایی J Nutr 2001a; 131: 2109-2114.
44. کرسپی وی و همکاران. فراهمی زیستی فلورتین و فلوریدزین در موش صحرایی J Nutr 2001b; 131: 3227-3230.