Plumbagin با مهار فعالیت تیروزیناز، ملانوژنز ناشی از MSH را در سلول های ملانوما موش B16F10 سرکوب می کند.
May 09, 2023
3. بحث
پلمباگین یک متابولیت ثانویه مشتق شده از گیاه است و چندین عملکرد بیولوژیکی از جمله فعالیت های ضد التهابی، ضد سرطانی، ضد حساسیت و ضد باکتریایی را نشان می دهد [8،9]. با این حال، مشخص نبود که آیا پلمباگین اثر مهاری بر ملانوژنز مرتبط با هیپرپیگمانتاسیون و ملانوم دارد یا خیر. در این مطالعه، ما نشان دادیم که پلمباگین به شدت ملانوژنز را در سلولهای ملانوم B16F10 سرکوب میکند و این کار میتواند فرصتی برای توسعه لوازم آرایشی مراقبت از پوست بر اساس فعالیتهای ضد التهابی، ضد حساسیت، ضد باکتریایی و ضد ملانوژنز پلمباگین فراهم کند.
با توجه به مطالعات مربوطه، سیستانچ یک گیاه رایج است که به عنوان "گیاه معجزه آسا طولانی کننده عمر" شناخته می شود. جزء اصلی آن سیستانوزید است که دارای اثرات مختلفی مانند آنتی اکسیدان، ضد التهاب و تقویت عملکرد سیستم ایمنی است. مکانیسم بین سیستانچ و سفید شدن پوست در اثر آنتی اکسیدانی گلیکوزیدهای سیستانش نهفته است. ملانین در پوست انسان از اکسیداسیون تیروزین کاتالیز شده توسط تیروزیناز تولید می شود و واکنش اکسیداسیون نیاز به مشارکت اکسیژن دارد، بنابراین رادیکال های آزاد اکسیژن در بدن به عامل مهمی در تولید ملانین تبدیل می شوند. سیستانچ حاوی سیستانوزید است که یک آنتی اکسیدان است و می تواند تولید رادیکال های آزاد را در بدن کاهش دهد و در نتیجه تولید ملانین را مهار کند.

روی Rou Cong Rong Benefits For Whitening کلیک کنید
برای اطلاعات بیشتر:
david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
از آنجا که تنظیم مثبت ملانوژنز اغلب در ملانوم بدخیم با سطح تیروزیناز بیش از حد در خون و همچنین بافت های تومور مشاهده می شود، واضح است که ملانوژنز یک هدف بالقوه برای شیمی درمانی ملانوم های بدخیم است [1]. در مطالعه حاضر، ما دریافتیم که پلمباگین مستقیماً فعالیت تیروزیناز را مستقل از ماشینهای رونویسی مرتبط با ملانوژنز سرکوب میکند (شکل 6). بنابراین، نتایج ما نشان می دهد که پلمباگین ممکن است یک جزء بالقوه یک استراتژی پیشگیرانه و درمانی برای مدیریت ملانوم بدخیم باشد. در واقع، اثرات ضد ملانوم، شیمیسازی و حساسکننده پرتوی پلمباگین بر درمان ملانوما گزارش شده است [17-21].

در مطالعات قبلی که با اثرات ضد سرطانی و ضد التهابی پلمباگین سروکار داشتند، تقریباً 5-10 میکرومولار پلمباگین (بیشتر از غلظت مورد استفاده در این مطالعه) در مدلهای آزمایشگاهی استفاده شده است [17،22] ، 23]. بنابراین، ما اثر سمی پلمباگین را در سلولهای پرولیفراتیو، از جمله کراتینوسیتهای طبیعی (HaCaT) و سلولهای اپیتلیال لنز (B3)، که میتوانند توسط لوازم آرایشی مراقبت از پوست آسیب ببینند، بررسی کردیم. نتایج ما نشان داد که غلظتهای پایینتر، تقریباً 0}.5-1 میکرومولار پلمباگین، برای کراتینوسیتهای طبیعی و سلولهای اپیتلیال عدسی سمی نیستند، اما به اندازه کافی برای کاهش فعالیت تیروزیناز و سنتز ملانین مؤثر هستند. علاوه بر این، ما همچنین دریافتیم که پلمباگین به طور موثرتری ملانوژنز را سرکوب میکند تا آربوتین 1 میلیمولار یا کوجیک اسید 0.2 میلیمولار، که عامل سفیدکنندهی معروف پوست است. این نتایج نشان می دهد که پلمباگین برای استفاده به عنوان جزئی برای تولید لوازم آرایشی سفیدکننده پوست بی خطر است.
در مطالعه حاضر، ما اثرات مهاری پلمباگین بر واکنش آنزیم تیروزیناز را با استفاده از سنجش فعالیت تیروزیناز سلولی و بدون سلول بر اساس اکسیداسیون L-DOPA مورد مطالعه قرار دادیم. با این وجود، ما مکانیسم مولکولی دقیقی را برای اینکه چگونه پلمباگین فعالیت تیروزیناز را مهار می کند، پیشنهاد نکردیم. این مکانیسم باید بیشتر مورد بررسی قرار گیرد تا مشخص شود که آیا پلمباگین به طور مستقیم با تیروزیناز تعامل می کند و فعالیت اکسیداز آن را مهار می کند یا اینکه آیا اثرات غیرمستقیمی دارد که منجر به کاهش فعالیت تیروزیناز می شود.
4. مواد و روش ها
4.1. معرف ها و آنتی بادی ها
Plumbagin، -MSH (M4135)، آربوتین (A4256)، اسید کوجیک (K3125)، L-DOPA (333786)، و تیروزیناز (T3824) خالصشده از قارچ از سیگما-آلدریچ (سنت لوئیس، MO، ایالات متحده آمریکا) خریداری شدند. آنتی بادی ها علیه MITF (#12590)، p-AKTS473 (#4060)، p-AKTT308 (#13038)، p-CREB (#9198)، p-ERK1/2 (#4370)، ERK1/2 (#9102)، H2AX (#9718)، PARP (#5625)، و کاسپاز{27}} (#9665) از Cell Signaling Technology (Danvers، MA، ایالات متحده آمریکا) خریداری شدند. تیروزیناز (sc-7833)، و توبولین (sc-9104) از بیوتکنولوژی سانتا کروز (دالاس، TX، ایالات متحده آمریکا) خریداری شد.

4.2. کشت سلولی و سنجش زنده ماندن سلولی
4.3. ایمونوبلات
4.4. اندازه گیری میزان ملانین داخل و خارج سلولی
محتوای ملانین با استفاده از روشی که قبلاً توضیح داده شده بود با تغییرات جزئی تعیین و کمی سازی شد [2،24]. برای تجزیه و تحلیل محتوای ملانین، سلول های B16F10 در DMEM فاقد فنل قرمز حاوی 10 درصد سرم جنین گاوی کشت داده شدند. سلول های B16F10 با تیمار -MSH در غیاب یا حضور پلمباگین به مدت 3 یا 4 روز کشت داده شدند. سلولها یا محیطهای کشت شده برداشت شدند و گلولهها در 1N NaOH حاوی 10 درصد DMSO در دمای 80 درجه سانتیگراد به مدت 1 ساعت حل شدند. محتوای ملانین با استفاده از یک خواننده جذب در 475 نانومتر (OD475) اندازهگیری شد و سپس محتوای ملانین به غلظت پروتئین سلولی نرمال شد.

4.5. جداسازی RNA و RT-PCR کمی
4.6. سنجش فعالیت تیروزیناز سلولی
فعالیت تیروزیناز سلولی با استفاده از روشی که قبلا شرح داده شده بود با اصلاح تعیین شد [25،26]. سلولهای B16F1{6}} کشت شده با -MSH در غیاب یا حضور پلمباژین انکوبه شدند و سلولها شسته و با PBS حاوی 1 درصد سدیم دیاکسیکولات و 0.5 درصد تریتون X{8} شسته و لیز شدند. }. پس از تعیین غلظت پروتئین، 5{13}} میکروگرم پروتئین با 2.0 میلی مولار L-DOPA و 0.1 مولار PBS (pH 6.8) به مدت 1 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه شد. اکسیداسیون L-DOPA در طول موج 475 نانومتر (OD475) با استفاده از یک خواننده جذب اندازه گیری شد. فعالیت با استفاده از فرمول زیر اندازه گیری شد: فعالیت تیروزیناز ( درصد )=(OD475 نمونه/OD475 شاهد) × 100.
4.7. سنجش فعالیت تیروزیناز بدون سلول
4.8. سنجش فعالیت پاکسازی رادیکال DPPH
4.9. تحلیل آماری
5. نتیجه گیری ها
یافتههای اصلی این مطالعه این است که پلمباگین (i) با مهار فعالیت تیروزیناز، سنتز ملانین ناشی از -MSH را سرکوب میکند. (ب) بر ماشینهای رونویسی مرتبط با MITF و آبشارهای انتقال سیگنال از جمله فعالسازی AKT و ERK1/2 مرتبط با ملانوژنز تأثیری نمیگذارد. و (iii) هنگامی که غلظت آن کمتر از 5 میکرومولار باشد در کراتینوسیت های طبیعی (HaCaT) و سلول های اپیتلیال عدسی (B3) سمیت ایجاد نمی کند. در مجموع، پلمباگین سنتز ملانین ناشی از MSH را با مهار فعالیت تیروزیناز مستقل از محور رونویسی CREB-MITF لغو میکند. بنابراین، این نتایج، یک محصول طبیعی امیدوارکننده و ایمن را برای کاهش هیپرپیگمانتاسیون با استفاده از آن در تولید لوازم آرایشی سفیدکننده پوست پیشنهاد میکند.

اختصارات
منابع
1. رایلی، PA ملانوژنز و ملانوما. پیگمنت سل Res. 2003، 16، 548-552. [CrossRef] [PubMed]
2. Bae, JS; هان، م. یائو، سی. Chung، JH Chaetocin از طریق فعال سازی ERK، ملانوژنز ناشی از IBMX را در سلول های ملانوم موش B16F10 مهار می کند. شیمی. Biol. تعامل داشتن. 2016، 245، 66-71. [CrossRef] [PubMed]
3. D'Mello، SA; Finlay، GJ; باگولی، ق.م. مسیرهای سیگنالینگ عسکریان امیری، ME در ملانوژنز. بین المللی جی. مول. علمی 2016. [CrossRef] [PubMed]
4. کیم، اچ جی; یونزاوا، تی. ترویا، تی. وو، جی تی; Cha، توسط Nobiletin، یک فلاونوئید پلی اتوکسی، اندوتلین{1}} را کاهش داده و رنگدانه های ناشی از SCF در ملانوسیت های انسانی را کاهش می دهد. فتوشیمی. فوتوبیول. 2015، 91، 379-386. [CrossRef] [PubMed]
5. کانگ، اس جی; چوی، BR; لی، EK; کیم، SH; یی، هی؛ پارک، منابع انسانی؛ آهنگ، CH; لی، YJ; Ku, SK اثر بازدارنده پودر غلظت انار خشک بر ملانوژنز سلول های ملانوما B16F10. دخالت مسیرهای سیگنالینگ p38 و PKA بین المللی جی. مول. علمی 2015، 16، 24219–24242. [CrossRef] [PubMed]
6. کیم، جی دبلیو. کیم، سلام؛ کیم، جی اچ. Kwon، OC; پسر، ES; لی، CS; پارک، YJ اثرات گانودرمانوندیول، یک مهارکننده ملانوژنز جدید از قارچ دارویی Ganoderma lucidum. بین المللی جی. مول. علمی 2016، 17، 1798. [CrossRef] [PubMed]
7. Tsao، YT; هوانگ، YF; کو، سی. لین، YC؛ چیانگ، WC; وانگ، WK; Hsu، CW; لی، CH Hinokitiol از طریق سیگنال دهی AKT/mTOR در سلول های ملانوم موش B16F10، ملانوژنز را مهار می کند. بین المللی جی. مول. علمی 2016، 17، 248. [CrossRef] [PubMed]
8. پدیه، س. دادوت، پ. یوسفی، م. احمد، ع. سرکار، دیدگاه FH در مورد خواص دارویی پلمباژین و آنالوگ های آن. پزشکی Res. Rev. 2012, 32, 1131-1158. [CrossRef] [PubMed]
9. گوپتا، SC; کیم، جی اچ. پراساد، س. آگاروال، تنظیم BB بقا، تکثیر، تهاجم، رگزایی و متاستاز سلول های تومور از طریق تعدیل مسیرهای التهابی توسط مواد مغذی. سرطان متاستاز Rev. 2010، 29، 405-434. [CrossRef] [PubMed]
10. جکسون، جی کی; هیگو، تی. هانتر، WL; برت، مهارکننده های HM Topoisomerase به عنوان عوامل ضد آرتریت. التهاب Res. 2008، 57، 126-134. [CrossRef] [PubMed]
11. احمد، ع. بانرجی، اس. وانگ، ز. کنگ، دی. سرکار، آپوپتوز ناشی از FH Plumbagin سلول های سرطان سینه انسان با غیرفعال کردن NF-kB و Bcl{3}} واسطه می شود. جی. سلول. بیوشیمی. 2008، 105، 1461-1471. [CrossRef] [PubMed]
12. عزیز، م.ح. Dreckschmidt، NE; Verma، AK Plumbagin، یک نفتوکینون مشتق شده از گیاهان دارویی، یک مهارکننده جدید رشد و تهاجم سرطان پروستات مقاوم به هورمون است. سرطان Res. 2008، 68، 9024-9032. [CrossRef] [PubMed]
13. ثنی، ک.ا. راکش، اس. روژینی، جی. راثیشکومار، تی. سرینیواس، جی. Priya، S. سیگنالدهی سلولی وابسته به استروژن و آپوپتوز در BRCA{2}}سلولهای سرطان تخمدان BG1 را در پاسخ به پلمباگین و سایر عوامل شیمیدرمانی مسدود کرد. ان اونکول. 2008، 19، 696-705. [CrossRef] [PubMed]
14. گوماتینایاگام، ر. سومیالکشمی، س. مردات الله، ف. کومار، آر. اکبرشا، م. Damodaran, C. مکانیسم ضد سرطان پلمباگین، یک ترکیب طبیعی، بر روی سلولهای سرطانی سلول غیر کوچک ریه. ضد سرطان Res. 2008، 28، 785-792. [PubMed]
15. وانگ، سی سی; چیانگ، YM; سانگ، SC; Hsu، YL; چانگ، جی کی. Kuo، PL Plumbagin باعث توقف چرخه سلولی و آپوپتوز از طریق گونههای اکسیژن فعال / مسیرهای کیناز N ترمینال C-Jun در سلولهای ملانوم انسانی A375.S2 میشود. سرطان لت. 2008، 259، 82-98. [CrossRef] [PubMed]
16. Shih, YW; لی، YC; وو، پی اف. لی، YB; Chiang، TA Plumbagin با کاهش تولید ماتریکس متالوپروتئیناز-2 و فعال کننده یوروکیناز- پلاسمینوژن، از تهاجم و مهاجرت سلول های سرطان کبد HepG2 جلوگیری می کند. هپاتول. Res. 2009، 39، 998-1009. [CrossRef] [PubMed]
17. انوف، ع. راماچاندران، آر. کریشناسامی، آر. گاندی، ص. Periyasamy، S. اثرات ضد تکثیری Plumbago rosea و پلمباگین خالص شده آن بر روی رده های سلولی ملانوم SK-MEL 28. Pharmacogn. Res. 2014، 6، 312-319.
18. گودا، ر. شارما، ا. رابرتسون، GP اثرات مهاری سینرژیک سلکوکسیب و پلمباگین بر رشد تومور ملانوما. سرطان لت. 2017، 385، 243-250. [CrossRef] [PubMed]
19. لی، ج. شن، Q. پنگ، آر. چن، آر. جیانگ، پی. لی، ی. ژانگ، ال. Lu, J. Plumbagin آپوپتوز با واسطه TRAIL را از طریق تنظیم بالا گیرنده مرگ در سلول های ملانوم A375 انسانی افزایش می دهد. J. Huazhong Univ. علمی تکنولوژی پزشکی علمی 2010، 30، 458-463. [CrossRef] [PubMed]
20. نیر، س. نیر، RR; سرینیواس، پی. سرینیواس، جی. Pillai, MR اثرات حساس کننده پرتوی پلمباگین در سلول های سرطان دهانه رحم از طریق تعدیل مسیر آپوپتوز است. مول. سرطان زا 2008، 47، 22-33. [CrossRef] [PubMed]
21. پراساد، VS; Devi، PU؛ رائو، BS; Kamath، R. اثر حساس کننده پرتوی پلمباگین بر سلول های ملانوم موش رشد کرده در شرایط آزمایشگاهی. هندی J. Exp. Biol. 1996، 34، 857-858. [PubMed]
22. لی، YC; او، اس ام. او، ZX; لی، ام. یانگ، ی. Pang، JX; ژانگ، ایکس. چاو، ک. ژو، Q. دوان، دبلیو. و همکاران پلمباگین از طریق مهار مسیر PI3K/Akt/mTOR در سلولهای سرطان ریه سلول غیر کوچک انسان، مرگ سلولی آپوپتوز و اتوفاژیک را القا میکند. سرطان لت. 2014، 344، 239-259. [CrossRef] [PubMed]
23. چکر، ر. شارما، دی. سندور، SK; خانم، س. Poduval، TB اثرات ضد التهابی پلمباگین با مهار فعال شدن NF-kB در لنفوسیت ها انجام می شود. بین المللی ایمونوفارماکل. 2009، 9، 949-958. [CrossRef] [PubMed]
24. کیم، بی. لی، SH; چوی، کی. کیم، HS N-Nicotinoyl تیرامین، یک مشتق جدید نیاسینامید، با سرکوب بیان ژن MITF، ملانوژنز را مهار می کند. یورو J. Pharmacol. 2015، 764، 1-8. [CrossRef] [PubMed]
25. لی، هی. جانگ، ای جی. Bae, SY; جئون، جی. پارک، HJ; شین، جی. لی، SK فعالیت ضد ملانوژنی گوگن D، یک دی ترپنوئید بسیار اکسیژن دار از اسفنج دریایی Phorbas sp.، از طریق تعدیل بیان و تخریب تیروزیناز. Mar. Drugs 2016, 14, 212. [CrossRef] [PubMed]
26. ویندر، ای جی; هریس، H. سنجش های جدید برای فعالیت های تیروزین هیدروکسیلاز و DOPA اکسیداز تیروزیناز. یورو جی بیوشیم. 1991، 198، 317-326. [CrossRef] [PubMed]
برای اطلاعات بیشتر: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501






