یافته های اولیه در مورد افزایش سیتوکین های التهابی پلاسما در کودکان مبتلا به اوتیسم که دارای علائم گوارشی هم مرضی هستند قسمت 1

خلاصه:

اختلال طیف اوتیسم (AU) تقریباً در 2 درصد از جمعیت وجود دارد و اغلب با عوارضی همراه است که می تواند بر کیفیت زندگی تأثیر بگذارد. یکی از شایع ترین بیماری های همراه در اوتیسم وجود علائم گوارشی (GI) است که شامل عادات روده نامنظم مانند یبوست، اسهال یا عادات مدفوع متناوب است.

در سال‌های اخیر، با عمیق‌تر شدن تحقیقات در مورد اختلال طیف اوتیسم (ASD)، افراد بیشتری شروع به توجه به رابطه بین ASD و ایمنی کرده‌اند. اگرچه نتایج تحقیقات کنونی کاملاً سازگار نیستند، بیشتر مطالعات نشان داده‌اند که در واقع ارتباطی بین ASD و ایمنی وجود دارد.

اول اینکه بسیاری از کودکان با ایمنی پایین متولد می شوند که ممکن است خطر ابتلا به ASD را در آنها افزایش دهد. دوم، مطالعات بیشتر و بیشتر نشان داده اند که اختلالاتی در سیستم ایمنی بیماران مبتلا به ASD وجود دارد. به عنوان مثال، آنها ممکن است واکنش های آلرژیک، بیماری های خود ایمنی و غیره داشته باشند. علاوه بر این، برخی از مطالعات نشان داده اند که بیماران ASD دارای سطوح بالاتری از استرس اکسیداتیو هستند که ممکن است منجر به آسیب سلولی و تخریب عصبی شود.

با این حال، ما نباید جنبه های مثبت زندگی با ASD را نادیده بگیریم. افراد مبتلا به ASD ممکن است ایمنی قوی تری داشته باشند. مطالعات نشان داده اند که سیستم ایمنی آنها ممکن است در مقابله با برخی تهاجمات باکتریایی و ویروسی بهتر عمل کند. علاوه بر این، بیماران ASD همچنین ممکن است سلول های ایمنی بیشتری داشته باشند و سیستم ایمنی آنها ممکن است پایدارتر و کمتر مستعد واکنش های بیش از حد باشد.

به طور کلی، رابطه بین ASD و ایمنی پیچیده است و صرفاً مثبت یا منفی نیست. این موضوع باید از طریق تحقیقات دقیق تر در آینده به طور عمیق مورد بررسی قرار گیرد. صرف نظر از این، همه ما باید در مورد ASD فعال باشیم و با افراد مبتلا به ASD و خانواده های آنها کار کنیم تا بتوانند بهتر با جامعه سازگار شوند. از این منظر، ما باید ایمنی خود را تقویت کنیم. سیستانچ می تواند به طور قابل توجهی ایمنی را بهبود بخشد، زیرا خاکستر گوشت حاوی انواع مختلفی از اجزای فعال بیولوژیکی مانند پلی ساکاریدها، قارچ ها و هوانگ لی است. این اجزا می توانند سلول های مختلف سیستم ایمنی را تحریک کرده و فعالیت ایمنی آنها را افزایش دهند.

روی مزایای cistanche tubulosa کلیک کنید

شواهدی از نفوذ سیستم ایمنی و فعال شدن سیستم ایمنی در ایلئوم و کولون کودکان مبتلا به AU با علائم GI نشان داده شده است. علاوه بر این، اختلال عملکرد سیستم ایمنی یک عامل کمک کننده در بسیاری از بیماری های دستگاه گوارش است، و ما فرض می کنیم که در کودکان مبتلا به AU که علائم دستگاه گوارش را نشان می دهند، آشکارتر از کودکانی است که علائم GI را نشان نمی دهند.

این مطالعه مقدماتی با هدف تعیین اینکه آیا سطوح سیتوکین در پلاسما در کودکان مبتلا به AU با علائم GI در مقایسه با کودکان دارای AU بدون علائم GI، کودکان در حال رشد (TD) با علائم GI و کودکان TD بدون علائم GI، از همان وجود دارد یا خیر، انجام شد. همگروهی مبتنی بر جمعیت سطوح سیتوکین پلاسما با روش های مالتی پلکس ارزیابی شد.

هیچ تفاوتی در سیتوکین های پلاسما در گروه کنترل TD با یا بدون علائم GI مشاهده نشد. با این حال، بسیاری از سیتوکین های ذاتی (IL-1، TNF، GM-CSF، IFN) و تطبیقی ​​(IL-4، IL-13، IL-12p70) در AU افزایش یافتند. کودکان با علائم گوارشی در مقایسه با کودکان مبتلا به AU بدون علائم GI. سیتوکین مربوط به مخاط IL{7}} در AU با علائم GI در مقایسه با همه گروه ها افزایش یافت.

در مقابل، سیتوکین تنظیمی IL{0}} در AU با علائم GI کاهش یافت و ممکن است نشان دهنده عدم تعادل در سیگنال های پیش التهابی/تنظیمی باشد. این داده ها نشان می دهد که کودکان با علائم AU و GI دارای عدم تعادل در پاسخ ایمنی خود هستند که در سطح سیتوکین پلاسما در گردش آنها مشهود است. یافته ای که می تواند به استراتژی های درمانی و/یا نظارتی بالقوه برای مسائل GI در AU اشاره کند.

کلید واژه ها:
اوتیسم؛ ASD؛ ایمنی التهاب؛ دستگاه گوارش؛ بیماری های همراه؛ سیتوکینها؛ مقررات؛ روان‌گسیختگی؛ تحمل؛ مصونیت ذاتی؛ ایمنی تطبیقی؛ ایمنی مخاطی

1. معرفی

اختلالات عصبی رشدی، مانند اختلال طیف اوتیسم (AU)، به سرعت در حال افزایش در شیوع در سراسر جهان است. علت آنها تا حد زیادی ناشناخته است، اما، در بیشتر موارد، احتمالا به دلیل ترکیبی از عوامل ژنتیکی و محیطی است. تشخیص AU در حال حاضر به ویژگی های رفتاری از جمله رفتارهای تکراری و کلیشه ای و اختلالات در ارتباطات و تعامل اجتماعی محدود می شود.

با این حال، بسیاری از افراد مبتلا به AU همچنین از یک یا چند بیماری همراه، از جمله اختلال عملکرد دستگاه گوارش (GI) رنج می برند [1-7] علائم گوارشی در اوتیسم برای 80 سال گزارش شده است [8]، با علائم روده نامنظم یبوست و اسهال، رایج ترین [9-11].

در مطالعه کوهورت بزرگ ما روی 1000 شرکت‌کننده، کودکان مبتلا به AU 6 تا 8 برابر بیشتر از کودکان در حال رشد همسان با سن، از علائم GI رنج می‌برند. علاوه بر این، علائم GI با نمرات ارزیابی رفتاری ضعیف‌تر همراه بود [12].

علیرغم گزارش های مکرر از اختلال عملکرد دستگاه گوارش در AU، عدم ارجاع به کلینیک های تخصصی یا درمان مناسب علائم دستگاه گوارش وجود دارد. فقدان مطالعات در مورد علائم بیولوژیکی در بیماری های همراه AU نیز مانع از راهبردهایی شده است که می تواند به کاهش مشکلات GI کمک کند.
سلول‌های ایمنی مخاطی تقریباً 70 درصد از سلول‌های ایمنی بدن را تشکیل می‌دهند و اختلال در عملکرد این سلول‌ها ممکن است عواقب نامطلوبی برای عملکرد دستگاه گوارش داشته باشد. تغییر ایمنی مخاطی می‌تواند بر عملکرد سد اپیتلیال میزبان، تنوع باکتری‌های کومنسال در روده و سیستم عصبی روده تأثیر بگذارد [3].

بسیاری از گزارش‌ها ناهنجاری‌های ایمنی را در AU توصیف کرده‌اند، از جمله تغییرات در ژنتیک ایمنی، تولید سیتوکین ناهنجار، تغییر عملکرد سلول‌های T، و افزایش پاسخ‌های ایمنی ذاتی [13-16]. علاوه بر این، فعال شدن سیستم ایمنی در نزدیک به دو سوم کودکان مبتلا به AU گزارش شده است و با رفتارهای شدیدتر همراه است [13]. آنالیزهای آندوسکوپی کودکان AU با علائم دستگاه گوارش، وجود یک التهاب ظریف و منتشر در دستگاه روده را نشان داده است (در [1،4] بررسی شده است).

با این حال، ماهیت دقیق این التهاب مورد بحث بوده و در حال حاضر مشخص نیست. بافت شناسی، ایمونوهیستوشیمی و شواهد فلوسایتومتری به طور مداوم نفوذ پان آنتریک سلول های ایمنی مانند لنفوسیت ها، مونوسیت ها، سلول های کشنده طبیعی (NK) و ائوزینوفیل ها را به دیواره های دستگاه گوارش در کودکان مبتلا به AU نشان داده اند، در مقایسه با معمولاً در حال رشد (. TD) کودکان با علائم دستگاه گوارش [9،17-21].

این گزارش‌ها نشان داده‌اند که در کودکان با علائم AU و GI، افزایش نفوذ سلول‌های ایمنی در کولون، ایلئوم، دوازدهه و معده وجود دارد. علاوه بر این، لنفوسیت‌های نفوذی یک فنوتیپ پیش‌التهابی مشخص را نشان می‌دهند - با افزایش سلول‌های CD3 به علاوه IL-6 به علاوه سلول‌های CD3 به‌علاوه TNF به علاوه، و کاهش سلول‌های CD3 به علاوه IL{5}} به علاوه در کودکان مبتلا به AU و علائم دستگاه گوارش در مقایسه با گروه کنترل [17،18].

مقایسه تولید سیتوکین درون سلولی چالش پیش و پس از ایمنی در سلول‌های T محیطی، نمایه مشابهی را با افزایش تولید سیتوکین‌های پیش‌التهابی نشان داد، اما در کودکان مبتلا به AU که علائم گوارشی داشتند در مقایسه با گروه شاهد، تنظیم کاهش یافت [22].

پاسخ‌های سیتوکین تحریک‌شده در کودکان با علائم AU و GI متفاوت از کودکان دارای AU بدون علائم GI و همچنین کودکان کنترل TD بود و نشان می‌دهد که تولید سیتوکین به دنبال چالش ایمنی ممکن است در کودکان با علائم AU و GI منحصربه‌فرد باشد.

پروفایل ایمنی در کودکان مبتلا به علائم AU و GI نیز با کودکان مبتلا به بیماری های التهابی روده (IBD) مانند بیماری کرون، بیماری سلیاک و کولیت اولسراتیو متفاوت بود [9،17-19،21]. یافته‌های مشابهی از افزایش تولید سیتوکین‌های پیش‌التهابی پس از تحریک، IL{5}}، IL-6 و TNF در کودکانی که دارای حساسیت AU و غذا هستند در مقایسه با گروه کنترل نشان داده شده است [23،24].

جستجو برای امضاهای بیولوژیکی یا نشانگرهای زیستی در اوتیسم تاکنون یک حوزه مورد مطالعه قرار نگرفته است. مسلماً بزرگترین کاربرد امضاهای بیولوژیکی در زمینه AU در تعیین علائم اصلی نیست، بلکه در بیماری های همراه همراه خواهد بود. این بیماری‌های همراه اغلب تأثیرات عمیقی بر شدت علائم یا رفتارهای مرتبط مانند خواب، تحریک‌پذیری، پرخاشگری یا اضطراب دارند [3].

برخی از سیتوکین های پلاسما یا واسطه های ایمنی برای پتانسیل آنها به عنوان نشانگرهای زیستی، بیشتر در زمینه شدت AU مورد بررسی قرار گرفته اند [14،25-27]. نشانگرهای پلاسما که می توانند به شناسایی یا ردیابی مسیر علائم دستگاه گوارش در AU کمک کنند، وجود ندارند. در مطالعه حاضر ما به دنبال توصیف پروفایل سیتوکین های پلاسما در کودکان مبتلا به AU با یا بدون علائم دستگاه گوارش از یک نمونه گیری تصادفی از یک مطالعه مورد-شاهدی مبتنی بر جمعیت هستیم.

2. مواد و روشها

این مطالعه شامل 79 شرکت‌کننده بود که در مطالعه CHARGE (خطر اوتیسم کودکی ناشی از ژنتیک و محیط)، یک مطالعه مورد-شاهدی مبتنی بر جمعیت در حال انجام ثبت نام کردند [28]. به طور خلاصه، شرکت کنندگان در مطالعه CHARGE از 2 طبقه انتخاب شدند: اختلالات اوتیسم (AU)، و جمعیت عمومی که معمولاً در حال توسعه (TD) بودند.

کودکان واجد شرایط بین 24 تا 60 ماه، متولد کالیفرنیا، زندگی با حداقل یکی از والدین بیولوژیکی که انگلیسی یا اسپانیایی صحبت می کنند و ساکن مناطق حوضه یک لیست مشخص از مراکز منطقه ای در کالیفرنیا بودند. کودکان مبتلا به AU از طریق مراکز منطقه‌ای، ارائه‌دهندگان/کلینیک‌ها، خودارجاعی‌ها و ارتباط عمومی عمومی شناسایی شدند.

کودکان TD از پرونده‌های تولد دولتی شناسایی شدند و یک نمونه تصادفی طبقه‌بندی شده با تطبیق فراوانی با توزیع پیش‌بینی‌شده موارد AU بر اساس سن، جنس و منطقه حوضه ایجاد شد. کودکان با اختلالات حرکتی و حسی اصلی (مانند نابینایی و ناشنوایی) که مانع از ارزیابی رشدی معتبر می‌شد، حذف شدند.

پروتکل مطالعه CHARGE توسط هیئت های بازبینی نهادی دانشگاه کالیفرنیا در دیویس و کمیته ایالت کالیفرنیا برای حفاظت از افراد انسانی تأیید شد. رضایت کتبی آگاهانه قبل از مشارکت اخذ شد.

برای این مطالعه، 40 مورد با AU و 40 کنترل TD به طور تصادفی از مجموعه ای از شرکت کنندگان در مطالعه CHARGE که بین آوریل 2003 و آوریل 2008 ثبت نام کرده بودند، انتخاب شدند، نمونه خون ارائه کردند، پرسشنامه تاریخچه GI را تکمیل کردند و تشخیص AU یا TD تایید شده داشتند. موارد و گروه شاهد از نظر سن در زمان خونگیری (در فواصل زمانی {4}ماه) و اینکه آیا آنها علائم گوارشی مکرر حرکات نامنظم روده را داشتند یا نه (که به عنوان اسهال یا یبوست مکرر در 3 ماه گذشته تعریف می شود) مطابقت داشتند.

هدف اولیه از این مطالعه، داشتن 20 مورد و 20 فرد کنترل با علائم گوارشی مکرر و همچنین 20 مورد و 20 فرد کنترل بدون علائم مکرر دستگاه گوارش بود. از آنجایی که در زمان مطالعه، تنها 9 نفر از افراد کنترل در کل مطالعه CHARGE علائم گوارشی مکرر داشتند، موارد، و گروه کنترل فقط بر اساس سن در زمان خونگیری مطابقت داشتند.

نمونه نهایی 80 کودک شامل 20 مورد (میانگین سنی 9.6 ± 41.7 ماه؛ 16 مرد) و 9 کنترل (میانگین سنی 9.1 ± 41.6 ماه؛ 7 مرد) با علائم گوارشی مکرر و 20 مورد (میانگین سنی 9.3 ± 41.9 ماه؛ 19 سال) بود. مرد) و 31 کنترل (میانگین سنی 9.3 ± 42.2 ماه؛ 26 مرد) بدون علائم گوارشی مکرر. از آنجایی که این یک نمونه گیری تصادفی بود، ما بر اساس استفاده از دارو را حذف نکردیم.

تعداد کمی از کودکان در زمان خونگیری دارو مصرف می کردند: این داروها شامل داروهای ضد میکروبی مانند آسیکلوویر، کتوکونازول (2 مورد با علائم گوارشی، و 2 مورد و 2 مورد کنترل بدون علائم گوارشی)، استروئیدها مانند داروهای استنشاقی آسم، ناسونکس (2 مورد و 1 مورد). کنترل با علائم GI و 1 مورد و 1 کنترل بدون علائم GI)، و داروهای مرتبط با دستگاه گوارش مانند Miralax، Nexium، شیر منیزیا (2 مورد و 3 شاهد با علائم GI).

هیچ یک از شرکت کنندگان داروهای ضد روان پریشی مصرف نمی کردند. هنگامی که با هم تجزیه و تحلیل شد (درمان شده در مقابل درمان نشده، درون گروهی)، یا برای داروهای فردی، هیچ اثر دارویی بر روی داده ها پیدا نکردیم.

تشخیص اوتیسم با استفاده از ارزیابی‌های استاندارد طلایی تأیید شد: مصاحبه تشخیصی اوتیسم اصلاح شده (ADI-R؛ [29]) و برنامه مشاهده تشخیصی اوتیسم (ADOS؛ [30]). کنترل ها برای AU با استفاده از پرسشنامه ارتباطات اجتماعی (SCQ؛ [31]) غربالگری شدند و هیچ کدام بالاتر از برش (SCQ بزرگتر یا مساوی 15) امتیازی کسب نکردند.
مقیاس‌های یادگیری زودهنگام مولن (MSEL؛ [32]) و مقیاس‌های رفتار تطبیقی ​​واینلند (VABS؛ [33]) به ترتیب برای تعیین رشد شناختی و انطباقی برای افراد و گروه‌های کنترل اجرا شد. توسعه معمولی در کنترل به صورت داشتن نمرات ترکیبی بیشتر یا مساوی 70 در هر دو ارزیابی و عدم تشخیص قبلی تاخیر در رشد تعریف شد.

همه پزشکان مؤسسه UC Davis MIND (مطالعه پزشکی اختلالات رشد عصبی) به قابلیت اطمینان تحقیقاتی در مورد ارزیابی های رشدی که انجام داده بودند (ADI-R، ADOS، MSEL، و VABS) رسیده بودند. کارکنان مطالعه دو زبانه برای اجرای رضایت آگاهانه و همه ابزار/پرسشنامه‌ها به زبان اسپانیایی در دسترس بودند.

2.1. جمع آوری خون و تجزیه و تحلیل سیتوکین
خون محیطی از هر فرد در Vacutainers اسید سیترات دکستروز (BD Biosciences؛ San Jose، CA، USA) جمع آوری شد. خون در 2100 دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شد، پلاسما برداشت شد و قبل از تجزیه و تحلیل سیتوکین ها در دمای 80- درجه سانتیگراد ذخیره شد. غلظت سیتوکین در پلاسمای شرکت کنندگان با استفاده از روش ایمونواسی مهره های مالتی پلکس (Millipore، Billerica، MA، USA) تعیین شد. نمونه ها و کنترل های مرجع طبق پروتکل سازنده اجرا شد.

به طور خلاصه، 25 میکرولیتر از نمونه پلاسما با دانه های فلورسنت جفت شده با آنتی بادی انکوبه شد، سپس شسته شد و با آنتی بادی های تشخیص بیوتینیله و به دنبال آن استرپتاویدین-فیکواریترین انکوبه شد. سپس دانه‌ها با استفاده از یک سیستم آرایه تعلیق Luminex™ 100 مبتنی بر جریان (Bio-Plex 200؛ BioRad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA) آنالیز شدند. منحنی های استاندارد توسط نرم افزار Bio-plex Manager برای تعیین غلظت نمونه ناشناخته تولید شد. تمام نمونه‌ها و سایتوکاین‌های مرجع طبق توصیه سازنده تهیه شدند و سطوح سیتوکین و کموکاین با آنالیز مولتی پلکس Luminex ارزیابی شدند.

مقادیر نمونه ها به صورت pg/mL بیان می شود. سیتوکین ها/کموکاین های مورد تجزیه و تحلیل عبارت بودند از اینترلوکین (IL){{0}}، IL-1، IL-2، IL-3، IL-4، IL{ {5}}، IL-6، IL-7، IL-8، IL-10، IL{{10}} (p4{{48} })، IL-12 (p7{{5{0}})، IL-13، IL-15، IL-17، تحریک کننده کلونی گرانولوسیت-ماکروفاژ فاکتور (GM-CSF)، فاکتور محرک کلنی گرانولوسیت (G-CSF)، اینترفرون گاما (IFN)، IFN{23}}، فاکتور نکروز تومور آلفا (TNF)، TNF، ایوتاکسین، پروتئین کموتاکتیک مونوسیتی (MCP) )-1، پروتئین التهابی ماکروفاژ (MIP)-1، MIP-1 و 10 کیلو دالتون پروتئین ناشی از اینترفرون گاما (IP-10)، حداقل محدودیت های تشخیص برای این سیتوکین ها/کموکاین ها 2.4، 0.3، 1.2، 1.3، 2.2، {{60}}}}.2، 1.1، 2.4، 0}. 0.3، 34.9، 0.8، 1.0، 0.8، 0.4، 5.0، 0.9، 0.5، 0.4، 1.5، 0.9، 5.، 1.8، 5، 10 ، 7 و 3.6 pg/ml به ترتیب.

غلظت های به دست آمده زیر حد تشخیص (LOD) روش به عنوان نصف حد تشخیص (LOD/2) برای مقایسه های آماری محاسبه شد. مقادیر به‌دست‌آمده از خواندن نمونه‌هایی که از حد بالایی روش حساسیت فراتر رفته بودند، بیشتر رقیق شدند و غلظت سیتوکین بر این اساس محاسبه شد.

تغییرات درون صفحه‌ای و بین صفحه‌ای/آزمایش سطوح سیتوکین، با استفاده از نمونه‌های معرف اجرا شده روی همه پلیت‌ها، کمتر از 5 درصد بود. مقدار کمی پلاسما هیچ چرخه یخ/ذوب قبلی را طی نکرده بود. تحلیلگر سیتوکین نسبت به وضعیت مورد یا شاهد هر نمونه کور شد.

For more information:1950477648nn@gmail.com