گیرنده 1 فعال شده با پروتئاز به نارسایی میکروسیرکولاسیون و آسیب لوله ای در آسیب ایسکمی کلیوی-پرفیوژن مجدد در موش کمک می کند

یو گوان،¹دایسوکه ناکانو،²لی لی،³هاوفنگ ژنگ،³آکیرا نیشیاما،²یه تیان،¹و لی ژانگ¹

برای رفع شکست واقعی باگیاه سیستانچ

1. مقدمه

اینکلیهنمی تواند از آسیب ایسکمی- پرفیوژن مجدد (IR) در طول نفرکتومی جزئی جلوگیری کندکلیهپیوند [1] که منجر به احتباس مواد زائد متابولیک می شود و منجر به حاد می شودکلیهصدمه (AKI) وAKI-مزمنکلیهبیماری (AKI-CKD) [2]. تا به امروز، هیچ درمان دارویی خاصی از نظر بالینی برای AKI و AKI-CKD در دسترس نیست [3]. چندین تغییر پاتولوژیک رایج در AKI رخ می دهد، مانند نارسایی میکروسیرکولاسیون [4]، از جمله احتقان و خونریزی، و نکروز حاد توبولار [5]. بنابراین، مطالعات بر روی هدف قرار دادن این تغییرات پاتولوژیک به عنوان کاندیدهای بالقوه درمانی متمرکز شده است. ما قبلا نشان دادیم که حفظ مویرگ های اطراف لوله بعد ازکلیهآسیب IR احتقان مویرگی را کاهش داد و انتقال AKI به CKD را بهبود بخشید [6]. درمان نکروز حاد توبولار ممکن است دشوار باشد. بنابراین، بازسازی توبول ها از طریق تکثیر سلولی لوله ای ممکن است یک رویکرد مهم برای جلوگیری از از دست دادن بیشتر عملکرد کلیوی باشد [7].

گیرنده فعال‌شده با پروتئاز{1}} (PAR{2}}) متعلق به خانواده گیرنده‌های فعال‌شده با پروتئاز (PAR) است و شناخته شده است که توسط ترومبین برای القای انعقاد پلاکتی تحریک می‌شود. اخیراً نشان دادیم که PAR{4}} در ایجاد آسیب گلومرولی حاد القا شده نقش داشته است [8]. علاوه بر این، ترومبین/PAR{6}} در تکثیر سلول های اپیتلیال و آپوپتوز نقش دارد. بر اساس این ویژگی‌ها، ما فرض کردیم که PAR{7}} شدت AKI را با تنظیم انعقاد خون مویرگی دور لوله‌ای یا بازسازی توبولی تسریع می‌کند. در این مطالعه، نقش PAR-1 را با استفاده از Q{9}}، یک تعدیل کننده آلوستریک منفی انتخابی PAR، در یک موش بررسی کردیم.کلیهمدل آسیب IR و سلول‌های لوله‌ای انسانی کشت‌شده با ترومبین

مخاطب:joanna.jia@wecistanche.com

2. مواد و روشها

2.1. مدل موش IR حاد کلیه.

تمام آزمایش‌های حیوانی بر اساس دستورالعمل‌های آزمایشی کمیته مراقبت و استفاده از حیوانات سازمانی دانشگاه پزشکی پایتخت انجام شد. اینکلیهمدل موش IR همانطور که قبلاً توضیح داده شد [8] ایجاد شد. به طور خلاصه، 8-موش‌های نر یک هفته‌ای C57/BL6 با تزریق پنتوباربیتال سدیم (50 میلی‌گرم بر کیلوگرم؛ داخل صفاقی) بیهوش شدند و به‌طور تصادفی به گروه‌های زیر تقسیم شدند: شم، I/R پلاس وسیله نقلیه و I/R. (وسایل نقلیه: سالین 10 میلی‌گرم/کیلوگرم داخل وریدی) به اضافه Q94 (یک آنتاگونیست PAR-1 در 10 میلی‌گرم/کیلوگرم وریدی) گروه‌ها (n=7-8 در هر گروه). برای پروتکل آسیب کلیوی گرم IR، موش ها تحت uninephrectomy برای ارزیابی آسیب به عملکرد کلیه. پس از یک هفته، ساقه کلیه با گیره های عروقی بدون آسیب به مدت 30 دقیقه بسته شد. پس از خونرسانی مجدد به مدت 48 ساعت، موش ها قربانی شدند. نمونه‌های بافت کلیوی آنها جمع‌آوری و در محلول پارافورمالدئید 4 درصد تثبیت شد تا بلوک‌های پارافینی تهیه شود. پلاسما برای اندازه گیری نیتروژن اوره خون (BUN) و کراتینین به دست آمد.

2.2. مواد.

Q94 از Tocris Bioscience (بریستول، انگلستان) خریداری شد. سایر مواد شیمیایی از سیگما آلدریچ (سنت لوئیس، MO، ایالات متحده آمریکا) به دست آمد، مگر اینکه خلاف آن ذکر شده باشد.

2.3. سنجش کراتینین و BUN.

کیت های سنجش تجاری (کیت سنجش کراتینین ab65340؛ Abcam، کمبریج، انگلستان) برای اندازه گیری کراتینین استفاده شد. کیت های سنجش BUN از ABSBio™ (کیت نیتروژن اوره، CNHAO BIO، پکن، چین) خریداری شد.

2.4. بافت شناسی.

قبل از جاسازی در پارافین، بافت کلیه با 4 درصد پارافورمالدئید تثبیت شد. بلوک های پارافینی کلیه به بخش های 2 میکرومتری برش داده شدند و به مدت یک شب در دمای 25 درجه سانتیگراد بر روی لام نصب شدند. تصاویر با استفاده از میکروسکوپ (BX-51/DP-72؛ Olympus، توکیو، ژاپن) به دست آمد. همانطور که قبلاً توضیح داده شد [9]، آسیب توبول کلیوی بر اساس چندین تغییر هیستوپاتولوژیک، مانند اتساع لوله، احتقان/خونریزی، از دست دادن مرز برس، تشکیل گچ لوله‌ای، و لیز سلولی با بقایای لخته شده در لومن لوله‌ای تشخیص داده شد. آسیب لوله با توجه به درصد لوله های آسیب دیده نمره گذاری شد: 0، بدون آسیب; 1،<25%; 2,="" 25–50%;="" 3,="" 51–75%;="" and="" 4,="">75 درصد. امتیازدهی به صورت کور انجام شد.

2.5. ایمونوفلورسانس و ایمونوهیستوشیمی.

بخش‌ها همانطور که برای سنجش بافت‌شناسی (H&E) توضیح داده شد تهیه شد و سپس با پراکسید هیدروژن 0.3 درصد به مدت 30 دقیقه انکوبه شد تا پس از پارافین‌زدایی با زایلن، پراکسیدازهای درون‌زا مسدود شود. برای بازیابی آنتی ژن، بخش ها با پروتئیناز K (DAKO Cytomation، Glostrup، دانمارک) به مدت 10 دقیقه انکوبه شدند. پس از مسدود شدن با 10 درصد سرم بز، بخش ها با آنتی بادی های اولیه یک شب در دمای 4 درجه سانتیگراد (آنتی بادی ضد کیم 1، ab47635، Abcam، آنتی بادی Ki67، ab15580، Abcam، آنتی بادی ضد PAR، ab32611 انکوبه شدند. ، Abcam). پس از انکوباسیون با آنتی بادی اولیه، بخش ها با آنتی بادی ثانویه در دمای 25 درجه سانتیگراد به مدت 1 ساعت انکوبه شدند. از بستر DAB (DAKO) برای تجسم نتایج رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمی (IHC) استفاده شد. سیگنال‌های فلورسانس با استفاده از آنتی‌بادی ثانویه الکسا فلورسنت شناسایی شدند. تصاویر با استفاده از میکروسکوپ فلورسانس FL (BX51؛ Olympus) با فیلتر مناسب گرفته شد. نرم افزار ImageJ (NIH، Bethesda، MD، USA) برای تجزیه و تحلیل مناطق مثبت استفاده شد.

2.6. Real-Time PCR.

برای ارزیابی تنظیم بیان mRNA در این شرایط، mRNA از بافت کلیه جدا شد. یک سیستم PCR (7300 Fast Real-Time; Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) و Light Cycler Fast Start DNA Master SYBR Green I (Applied Biosystems) برای تشخیص سطوح 18S و PAR استفاده شد-1 mRNA توالی پرایمر به شرح زیر بود: 18S —5′ -GTAACCCGTTGAACCCCATT-3′, 5'-CCATCCAATCG GTAGTAGCG-3'; PAR{11}}—5′-GTTGATCGTTTCCACG GTCT-3′، 5′-GCTGCCTCTGTACCAGGACT-3». سطوح mRNA نسبی با استفاده از روش 2-ΔΔCq تعیین شد. مقدار ΔΔCq با استفاده از داده های گروه کنترل محاسبه شد.

2.7. روش جراحی و تنظیمات تصویربرداری چند فوتونی در داخل بدن.

موش ها با 2 درصد ایزوفلوران بیهوش شدند (میلان، اوزاکا، ژاپن). پس از تراکئوتومی، ورید ژوگولار برای تزریق رنگ فلورسنت و تزریق مایع نگهدارنده، که شامل 1.{2}}μL/min 2 درصد آلبومین در سالین بافر فسفات بود، کانوله شد. کلیه چپ هر موش از طریق یک برش کوچک کناری بیرون کشیده شد و به یک ورقه پوششی متصل شد. مرحله میکروسکوپ و حیوانات با استفاده از یک پد حرارتی در تمام مراحل آزمایشی گرم شدند. میکروسکوپ مولتی فوتونی داخل حیاتی با استفاده از یک سیستم تصویربرداری فلورسانس کانفوکال چند فوتونی Olympus FV1000MPE انجام شد که توسط لیزر Chameleon Ultra-II MP در 860nm (Coherent, Inc., Santa Clara, CA, USA) طراحی شده است. هدف میکروسکوپ یک عدسی غوطه ور در آب 25 برابر با دیافراگم عددی 1.05 بود. تنظیمات تصویربرداری برای میکروسکوپ (افزایش و افست برای هر سه کانال؛ آبی، سبز و قرمز) در طول آزمایش ثابت شد. پس از یک دوره نقاهت 30 دقیقه، رودامین B{12}}kD دکستران به صورت داخل وریدی تزریق شد و تصاویر 3-D z-stack در عمق 5-50 میکرومتر (با فاصله 2 میکرومتر) از سطح کلیه گرفته شد.

2.8. کشت سلولی

سلول های کلیه انسانی 2 (HK2) از بانک سلولی علوم آکادمی (شانگهای، چین) به دست آمد و همانطور که قبلا توضیح داده شد کشت داده شد [10]. سلول‌ها در محیط Eagle اصلاح‌شده Dulbecco با 10 درصد سرم جنین گاو و 1 درصد پنی‌سیلین-استرپتومایسین در فضای مرطوب شده از 95 درصد هوا و 5 درصد CO2 در دمای 37 درجه کشت شدند.

2.9. سنجش WST{2}} برای ارزیابی تکثیر سلولی.

سلول‌های HK2 در صفحات چاهک با چگالی 1×104 سلول در چاه کاشته شدند. پس از تحریک سلول‌های HK2 با ترومبین، سنجش‌های WST مطابق پروتکل سازنده (کاتالوگ #C0035؛ Beyotime، شانگهای، چین) برای تعیین توانایی تکثیر سلولی انجام شد. پس از 2 ساعت انکوباسیون با 100 میکرولیتر معرف WST{10}} در هر چاه، جذب نمونه ها با استفاده از دستگاه میکروپلیت خوان در طول موج 450 نانومتر اندازه گیری شد.

2.10. سنجش کاسپاز{2}}.

فعالیت کاسپاز{0}} با استفاده از کیت فعالیت تجاری کاسپاز-3 اندازه‌گیری شد (کاتالوگ #C1116؛ Beyotime، شانگهای، چین) [11]. پس از انکوباسیون با معرف کیت فعالیت کاسپاز{4}}، جذب نمونه ها با استفاده از دستگاه میکروپلیت خوان (Spectra-Max M2, Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) در 405 نانومتر طبق دستورالعمل سازنده تشخیص داده شد.

2.11. داده ها و تجزیه و تحلیل آماری.

برای مقایسه چند گروه از آنالیز واریانس یک طرفه استفاده شد و سپس از آزمون مقایسه چندگانه توکی استفاده شد. برای مقایسه دو گروه فردی از آزمون t استیودنت استفاده شد. p < 0:05="" برای="" نشان="" دادن="" نتایج="" آماری="" معنی="" دار="" در="" نظر="" گرفته="">

Cistanche tubulosaاز بیماری کلیوی جلوگیری می کند

3. نتایج

3.1. بیان PAR{2}} در کلیه مادون قرمز.

ما ابتدا بیان PAR-1 و اثرات IR بر سطح بیان آن را تأیید کردیمکلیه. ما یک افزایش تقریباً 2- برابری در سطح بیان mRNA PAR-1 در مقایسه با موش‌های جراحی ساختگی در ۴۸ ساعت مشاهده کردیم (شکل 1(a)). ما همچنین بیان PAR{4}} را با ایمونوفلورسانس در 48 ساعت پس از IR اندازه‌گیری کردیم. PAR{6}} در غشای مرزی برس سلول لوله ای بیان شد. سطح PAR{7}} فلورسانس FL در مقایسه با موش‌های گروه شم افزایش یافت (شکل 1(b) و 1(c)). این داده‌ها نشان می‌دهند که هم محلی‌سازی PAR{10}} در سلول‌های لوله‌ای و هم سطح بیان آن پس از IR در کلیه افزایش یافته است.

3.2. عملکرد کلیه و تغییرات هیستوپاتولوژیک. ارزیابی کردیمکلیهبا تشخیص سطح BUN و کراتینین در پلاسما عمل می کند. I/R باعث افزایش سطح BUN و کراتینین در مقایسه با موش هایی شد که تحت عمل جراحی ساختگی قرار گرفتند. علاوه بر این، افزایش ناشی از IR در سطح BUN به طور قابل توجهی در موش های تحت درمان با Q کاهش یافت (شکل 2 (الف)). سطح کراتینین سرم در موش‌های تحت درمان با Q در مقایسه با موش‌هایی که فقط تحت عمل جراحی IR قرار گرفتند، مهار شد (شکل 2(b)). این داده ها نشان می دهد که مدیریت Q94 می تواند محافظت کندکلیهعملکرد پس از آسیب IR

ما همچنین تغییرات هیستوپاتولوژیک کلیه را با انجام رنگ آمیزی H&E ارزیابی کردیم. IR کلیه به طور قابل‌توجهی تشکیل گچ، اتساع لوله‌ای، و از دست دادن مرز برس و احتقان/خونریزی را در موش‌های تحت درمان با وسیله نقلیه در مقایسه با موش‌های شم افزایش داد. درمان Q94 به طور قابل توجهی این تغییرات ناشی از IR را سرکوب کرد (شکل 2(c) و 3(a)). تجزیه و تحلیل نتایج رنگ‌آمیزی H&E بین گروه‌ها امتیاز احتقان/خونریزی و نمره آسیب لوله‌ای را برای هر گروه نشان داد. موش های گروه Q94 امتیاز بسیار پایین تری از خود نشان دادند (شکل 2(e) و 3(c)). ما همچنین کیم-1 را به عنوان یک رنگ آمیزی کردیمکلیهنشانگر آسیب سلول های لوله ای کلیه توسط IHC [12]. نواحی مثبت کیم در ناحیه لوله‌ای کلیوی در موش‌های مبتلا به ضایعه IR افزایش یافت که به طور قابل‌توجهی توسط Q94 سرکوب شد (شکل‌های 2(d) و 2(f)). این داده ها نشان می دهد که Q94 می تواند سرکوب کندکلیهآسیب لوله ای ناشی از آسیب IR

3.3. جریان غیر طبیعی سلول های خون در تصویربرداری In Vivo.

PAR-1 و ترومبین لیگاند آن نقش مهمی در ازدحام دارند. Q94 به طور قابل توجهی تراکم را بهبود بخشید. بنابراین، تصویربرداری داخل حیاتی را با میکروسکوپ چند فوتونی انجام دادیم. این امکان مشاهده همنوع سلول خونی در مویرگ اطراف لوله‌ای را در زمان واقعی در موش‌های زنده فراهم می‌کند (شکل 3(c)). پلاسما توسط دکستران 70 کیلو دالتون کونژوگه با رودامین B مشاهده شد (شکل 3(d)). سلول‌های خونی که فلورسانس FL را در پاسخ به لیزر تولید نمی‌کنند برای تحریک رودامین B استفاده شده و به‌عنوان سایه‌ها نشان داده شدند. همانطور که در شکل 3 (e) نشان داده شده است، IR کلیه، دنبال کردن سلول های خونی منظم را مختل کرده و باعث نارسایی میکروسیرکولاسیون می شود. Q94 سلول های خونی مویرگی اطراف لوله را بهبود بخشید.

3.4. تکثیر سلول های لوله ای پس از آسیب IR.

گزارش شده است که بازسازی پرولیفراتیو سلول های لوله ای نقش مهمی در بازسازی ساختار لوله ای و عملکرد کلیه پس از آسیب IR ایفا می کند. شناخته شده است که PAR{0}} تکثیر سلول های اپیتلیال را هنگامی که توسط ترومبین فعال می شود، تغییر می دهد. بنابراین، ما تکثیر سلول‌های لوله‌ای کلیوی را در روش Ki{1}} IHC شناسایی کردیم. در 48 ساعت پس از IR، تعداد سلول‌های لوله‌ای مثبت Ki{3} در حال تکثیر افزایش یافت. Q94 تعداد سلول‌های لوله‌ای مثبت Ki{5} را بعد از IR در مقایسه با تنها در موش‌های تحت درمان با IR افزایش داد (شکل‌های 4(a) و 4(b)). علاوه بر این، بررسی کردیم که آیا توانایی تکثیر سلولی تحت تأثیر مهار PAR-1 آزمایش‌های آزمایشگاهی با استفاده از سلول‌های HK2 انکوبه‌شده با ترومبین، یک آگونیست PAR{11}} قرار گرفته است یا خیر. فعالیت پرولیفراتیو سلول‌های HK2 با استفاده از روش WST اندازه‌گیری شد. همانطور که در شکل 4 (c) نشان داده شده است، تکثیر سلول های HK2 به طور چشمگیری پس از درمان با ترومبین سرکوب شد. با این حال، این مهار ناشی از ترومبین تقریباً توسط Q94 لغو شد. این داده‌ها نشان می‌دهند که PAR{18}} به طور منفی تکثیر سلول‌های لوله‌ای کلیه را تنظیم می‌کند، که تقریباً توسط آنتاگونیست Q94 PAR{20}} لغو شد.

برای تسکین بیماری مزمن کلیوی باسیستانچ

3.5. آپوپتوز سلول توبولار کلیه

ما آپوپتوز سلول‌های کلیوی را با استفاده از کاسپاز{0}} که مهم‌ترین کاسپاز جلاد است و در طول آپوپتوز توسط هر دو مسیر درونی و بیرونی فعال می‌شود، بررسی کردیم [13]. با استفاده از سلول های HK2 کشت داده شده با ترومبین، متوجه شدیم که ترومبین باعث افزایش فعالیت کاسپاز می شود{4}}. علاوه بر این، تجویز Q94 فعالیت کاسپاز{6}} را سرکوب کرد (شکل 4(d)). این داده‌ها نشان می‌دهند که آپوپتوز ناشی از ترومبین سلول‌های HK2 توسط آنتاگونیست Q94 PAR{11}} مهار شد.

4. بحث

کلیهآسیب IR با احتقان/خونریزی، نکروز حاد لوله ای، التهاب و رسوب گچ گیری مشخص می شود [5]. در اینجا، ما نشان دادیم که مهار PAR-1 هم تغییرات مرتبط با خون و هم تغییرات توبولو بینابینی را بهبود می‌بخشد. به خوبی شناخته شده است که PAR{4}} و لیگاند آن، ترومبین، نقش مهمی در انعقاد پلاکت دارند و تداخل این سیستم، مانند ترومبومودولین [14، 15]، ممکن است از AKI جلوگیری کند. ما نشان دادیم که مهار PAR{7}} احتقان را سرکوب می‌کند و جریان خون را در مویرگ‌های اطراف لوله‌ای در موش‌های مبتلا به آسیب IR کلیوی بهبود می‌بخشد، که نشان می‌دهد سیستم PAR-1 میکروسیرکولاسیون را بدتر می‌کند. علاوه بر این، سطح بیان PAR-1 پس از آسیب IR کلیوی در لوله‌ها افزایش یافت، که نشان می‌دهد سیستم وابسته به PAR در لوله‌ها نیز آسیب IR کلیوی را اغراق‌آمیز می‌کند. به خوبی ثابت شده است که بازسازی سلول های لوله ای یک فرآیند مهم در بازسازی ساختار لوله ای و در بازیابی عملکرد کلیه پس از آسیب IR است [16، 17]. بسته به درجه آسیب، این ظرفیت تعمیر نامحدود نیست [18]. بنابراین، گزینه های درمانی برای کاهش آسیب در سلول های لوله ای یا تسریع تکثیر آنها به فوریت مورد نیاز است. مطالعه آزمایشگاهی ما نشان داد که PAR{14}}/ترومبین به طور منفی تکثیر سلول‌های لوله‌ای را تنظیم می‌کند، که به نوبه خود به دنبال مهار PAR{15}} تسریع شد. علاوه بر این، آسیب IR در موش‌ها نشان داده شد که تکثیر لوله‌ای را در 48 ساعت افزایش می‌دهد، با افزایش بیشتر پس از مهار PAR{17}}. ما دریافتیم که PAR{18}} در غشای مرزی برس لوله‌های پروگزیمال افزایش یافته است. همانطور که گزارش شده است که عملکرد سد فیلتراسیون گلومرولی در هنگام آسیب IR کلیوی کاهش می یابد [19]، ترومبین فیلتر شده از گلومرول ها ممکن است افزایش PAR را فعال کند و در نتیجه بازسازی لوله را مختل کند.

نتایج ما نشان می‌دهد که سیستم PAR-1/ترومبین تکثیر سلول‌های لوله‌ای را سرکوب کرده و آپوپتوز را افزایش می‌دهد. با این حال، مطالعه دیگری اثرات متضاد PAR{1}} را هنگامی که توسط پروتئین C فعال می شود نشان داد [20، 21]. این نقش متناقض ظاهری PAR-1 ممکن است به روش فعال سازی آن بستگی داشته باشد. در مطالعه ما، یک توضیح احتمالی برای نقش نسبت داده شده آن این بود که PAR{5}} توسط ترومبین فیلتر شده فعال می شد. اندازه پروتئین C بیش از 60 کیلو دالتون است، که شبیه به آلبومین [22، 23] و بسیار بزرگتر از ترومبین (36 کیلو دالتون) است. علاوه بر این، غلظت پلاسمایی آن (<100 nm)="" is="" less="" than="" 10%="" of="" thrombin="" (="">1 میکرومولار)، نشان می دهد که پروتئین C تحت فیلتر کمتری قرار می گیرد و سیگنال ضعیف تری در مقایسه با ترومبین تولید می کند.

اپیزودهای ترومبوتیک یک عامل خطر برای بیماران مبتلا به نارسایی کلیه در مرحله نهایی است [24]. یک مطالعه نشان داد که کمبود PAR{2}} در برابر CKD دیابتی محافظت می‌کند [25]. در مطالعه ما، ما تأثیر مهار PAR{4}} را بر عملکرد کلیه در مراحل اولیه پس از IR مشاهده کردیم. در مطالعات بیشتر، ما قصد داریم یک مزمن ایجاد کنیمکلیهمدل بیماری ناشی از IR [2] برای ارزیابی ارتباط بالقوه بین PAR{2}} با CKD.

در نتیجه، ما نشان دادیم که PAR{0}} نارسایی میکروسیرکولاسیون را تشدید می‌کند و به طور منفی تکثیر سلول‌های لوله‌ای را تنظیم می‌کند. در مقابل، مهار PAR{1} به بهبود میکروسیرکولاسیون و تکثیر سلول‌های لوله‌ای و بعد از IR کمک می‌کند و به عنوان مکانیزم برجسته بهبود کلیه عمل می‌کند و باید به عنوان یک استراتژی جدید در درمان AKI در نظر گرفته شود.

Cistanche tubulosa از بیماری کلیوی جلوگیری می کند، برای دریافت نمونه اینجا را کلیک کنید

1بخش اورولوژی، بیمارستان دوستی پکن، دانشگاه پزشکی پایتخت، پکن، چین

2 گروه فارماکولوژی، دانشگاه کاگاوا، کاگاوا، ژاپن

3 بخش پیوند کلیه، بخش جراحی، بیمارستان وابسته سوم دانشگاه سان یات سن،

گوانگژو، چین

مکاتبات باید به Ye Tian ارسال شود. kidney@ccmu.edu.cn و لی ژانگ؛ leizhangkidney@gmail.com دریافت 1 ژانویه 2021؛ بازبینی شده در 25 ژانویه 2021؛ پذیرش در 8 فوریه 2021؛ منتشر شده در 23 فوریه 2021

ویراستار آکادمیک: جونیان لیو

حق چاپ © 2021 Yu Guan et al. این یک مقاله با دسترسی آزاد است که تحت عنوان توزیع شده استمجوز انتساب Creative Commons، که استفاده، توزیع و تکثیر بدون محدودیت را در هر رسانه ای مجاز می کند، مشروط بر اینکه اصل اثر به درستی ذکر شده باشد.

جلوگیری از آسیب کلیه ناشی از ایسکمی-پرفیوژن مجدد (IR-) در طول پیوند کلیه و نفرکتومی جزئی به کمک ربات دشوار است. آسیب IR کلیه با آسیب لوله‌ای، نارسایی میکروسیرکولاسیون و التهاب مشخص می‌شود که به طور هماهنگ آسیب کلیوی را افزایش می‌دهد. با این حال، هیچ درمان خاصی برای این شرایط در دسترس نیست. گیرنده فعال شده با پروتئاز{5}} (PAR-1) و لیگاند آن، ترومبین، در انعقاد نقش دارند و نشان داده شد که با آسیب سلول های اپیتلیال مرتبط هستند. در اینجا، ما فرض کردیم که PAR{7}} آسیب سلولی لوله‌ای ناشی از IR کلیه و شکست میکروسیرکولاسیون را اغراق‌آمیز می‌کند و اینکه مهار دارویی PAR-1 توسط Q94 می‌تواند از این آسیب‌ها جلوگیری کند. IR گرم کلیه بیان PAR{11}} را در لوله‌های کلیوی افزایش داد. Q94 تغییرات کلیوی ناشی از IR و آسیب هیستوپاتولوژیک را کاهش داد. شکست میکروسیرکولاسیون با احتقان در هیستوپاتولوژی تجزیه و تحلیل شد و جریان سلول های خونی که توسط میکروسکوپ چند فوتونی داخل حیاتی بررسی شد با درمان Q94 سرکوب شد. Q94 همچنین علیرغم آسیب کمتر کلیوی، تکثیر سلولی توبولی را به طور چشمگیری افزایش داد. ترومبین تکثیر سلولی را سرکوب کرد و آپوپتوز را در لوله ها ایجاد کرد. این اثرات با درمان Q94 جلوگیری شد. در مجموع، PAR{17}} با آسیب IR کلیوی مرتبط بود. مهار PAR{18}} احتمالاً با بهبود میکروسیرکولاسیون کلیوی و بقا/تکثیر سلول های لوله ای، آسیب را بهبود می بخشد.

Data Aواilability

نویسندگان تأیید می کنند که داده های حمایت کننده از یافته های این مطالعه در مقاله موجود است.

Cبرپرواز کردنcts of Intارسt

همه نویسندگان اعلام کرده اند که هیچ منافع رقیب ندارند.

Autهوrs' Cبرtributiبرs

یو گوان و دایسوکه ناکانو دست نوشته را نوشتند و آزمایشاتی روی حیوانات انجام دادند. لی لی آزمایش های آزمایشگاهی انجام داد. هاوفنگ ژنگ تجزیه و تحلیل آماری را انجام داد. آکیرا نیشیاما نسخه خطی را اصلاح کرد. لی ژانگ و یه تیان این مطالعه را طراحی کردند.

Acknowledgments

این مطالعه توسط بنیاد ملی علوم طبیعی چین (شماره 82000712) و بنیاد علوم پسا دکتری چین (شماره 2020M670385) پشتیبانی شد.

منابع

[1] MN Simmons، MJ Schreiber، و IS Gill، "ایسکمی کلیوی جراحی: مروری بر معاصر"، مجله اورولوژی، جلد. 180، شماره 1، صفحات 19-30، 2008.

[2] Y. Guan، D. Nakano، Y. Zhang، L. Li، Y. Tian، و A. Nishiyama، "یک مدل موش از فیبروز کلیه برای غلبه بر تنوع فنی در آسیب ایسکمی/ریپرفیوژن مجدد در بین اپراتورها"، علمی گزارش ها، ج. 9، نه 1، ص. 10435، 2019. 7 تحقیقات بین المللی BioMed

[3] M. Joannidis و PGH Metnitz، "اپیدمیولوژی و تاریخ طبیعی نارسایی حاد کلیه در ICU"، Critical Care Clinics, vol. 21، شماره 2، صص 239-249، 2005.

[4] D. Nakano، K. Doi، H. Kitamura، و همکاران، "کاهش سرعت جریان لوله‌ای به عنوان مکانیسم الیگوری در فاز اولیه اندوتوکسمی که با تصویربرداری داخل حیاتی آشکار شد،" مجله انجمن نفرولوژی Ameri can. ، جلد 26، شماره 12، صفحات 3035-3044، 2015.

[5] D. Nakano و A. Nishiyama، "تصویربرداری مولتی فوتونی پاتوفیزیولوژی کلیه"، مجله علوم فارماکولوژیک، جلد. 132، شماره 1، صفحات 1-5، 2016.

[6] Y. Zhang، D. Nakano، Y. Guan، و همکاران، "یک مهارکننده همزمان انتقال دهنده سدیم-گلوکز 2، آسیب مویرگی کلیوی و فیبروز را توسط یک مسیر وابسته به فاکتور رشد اندوتلیال عروقی پس از آسیب کلیوی در موش کاهش می دهد"، کلیه بین المللی، ج. 94، شماره 3، صفحات 524-535، 2018.

[7] S. Nishioka، D. Nakano، K. Kitada، و همکاران، "مهارکننده کیناز وابسته به سیکلین p21 برای اثرات سودمند پیش شرط ایسکمیک کلیوی بر آسیب ایسکمی کلیوی/آسیب خونرسانی مجدد در موش ضروری است." جلد 85، شماره 4، صفحات 871-879، 2014.

[8] Y. Guan, D. Nakano, Y. Zhang, et al., "A آنتاگونیست گیرنده فعال شده با پروتئاز در برابر آسیب سلولی در یک مدل موش نفروپاتی محافظت می کند." Journal of Pharmacological Sciences, vol. 135، شماره 2، صفحات 81-88، 2017.

[9] M. Jiang, Q. Wei, G. Dong, M. Komatsu, Y. Su, and Z. Dong, "خودوفاژی در لوله های پروگزیمال از آسیب حاد کلیه محافظت می کند" Kidney International, vol. 82، شماره 12، صفحات 1271-1283، 2012.

[10] X. Hu, M. Su, J. Lin, et al., "Corin در آسیب ایسکمی/خونرسانی مجدد کلیه کاهش می یابد و با تاخیر در عملکرد پیوند پس از پیوند کلیه همراه است." Disease Markers, vol. 2019، شناسه مقاله 9429323، 8 صفحه، 2019.

[11] P. Wang, H. Wang, Q. Huang, et al., "Exosomes from M{1}} Polarized Polarized, فعالیت ضد توموری پاکلیتاکسل را با فعال کردن التهاب ناشی از ماکروفاژها افزایش می دهد." Theranostics., vol. 9، نه 6، صفحات 1714-1727، 2019.

[12] L. Yang, CR Brooks, S. Xiao, et al., "فاگوسیتوز با واسطه KIM{1} آسیب حاد کلیه را کاهش می دهد." The Journal of Clinical Investigation, vol. 125، شماره 4، صفحات 1620-1636، 2015.

[13] L. Xu، X. Li، F. Zhang، L. Wu، Z. Dong، و D. Zhang، "EGFR باعث پیشرفت AKI به CKD از طریق بیان بیش از حد HIPK2 می شود." Theranostics., vol. 9، نه 9، صفحات 2712-2726، 2019.

[14] T. Hifumi, D. Nakano, J. Chiba, et al., "درمان ترکیبی با آنتی توکسین گانگرن گازی و ترومبومودولین محلول انسانی نوترکیب برای سپسیس _Clostridium perfringens{2}} در مدل موش، سموم، جلد. 141، صفحات 112-117، 2018.

[15] N. Hayase، K. Doi، T. Hiruma، و همکاران، "ترومبومودولین نوترکیب از آسیب حاد ریه ناشی از آسیب ایسکمی- خونرسانی مجدد کلیه جلوگیری می کند." Scientific Reports, vol. 10، نه 1، ص. 289، 2020.

[16] E. Lazzeri، ML Angelotti، A. Paired et al.، "هیپرتروفی سلولی لوله ای مرتبط با اندوسکل و تکثیر پیش ساز، عملکرد کلیوی را پس از آسیب حاد کلیه بهبود می بخشد"، Nature Communications، جلد. 9، نه 1، ص. 1344، 2018.

[17] K. Takaori، J. Nakamura، S. Yamamoto، و همکاران، "شدت و فراوانی آسیب لوله پروگزیمال، پیش آگهی کلیه را تعیین می کند،" مجله انجمن نفرولوژی آمریکا: JASN، جلد. 27، شماره 8، صص 2393-2406، 2016.

[18] BD Humphreys, MT Valerius, A. Kobayashi, et al., "سلولهای اپیتلیال ذاتی کلیه را پس از آسیب ترمیم می کنند" Cell Stem Cell, vol. 2، نه 3، صفحات 284-291، 2008.

[19] R. Wakasaki، K. Matsushita، K. Golgotiu، و همکاران، "پروتئین های فیلتر گلومرولی در سندرم حاد قلبی،" JCI Insight، جلد. 4، نه 4, 2019.

[20] M. Riewald، RJ Petrovan، A. Donner، BM Mueller و W. Ruf، "فعال سازی گیرنده 1 فعال شده توسط سلول های اندوتلیال پروتئاز توسط مسیر پروتئین C،" Science، جلد. 296، شماره 5574، صفحات 1880-1882، 2002.

[21] MJ Ludeman، H. Kataoka، Y. Srinivasan، NL Esmon، CT Esmon، و SR Coughlin، "برش PAR1 و سیگنال دهی در پاسخ به پروتئین فعال C و ترومبین∗"، The Journal of Biological Chemistry، جلد. 280، شماره 13، ص 13122-13128،

2005.

[22] JH Griffin، BV Zlokovic، و LO Mosnier، "پروتئین فعال C: بایاس برای ترجمه"، خون، جلد. 125، شماره 19، صفحات 2898-2907، 2015.

[23] R. Essalmani, D. Susan-Resiga, J. Guillemot, et al., "فعال سازی ترومبین پروتئین C نیاز به پردازش قبلی توسط پروپروتئین کانورتاز کبدی دارد." The Journal of Biological Chemistry, vol. 292، شماره 25، صفحات 10564-10573، 2017.

[24] S. Van Laecke و W. Van Biesen، "فشار خون شدید با میکروآنژیوپاتی ترومبوتیک کلیوی: چه اتفاقی برای مشکوک معمولی افتاد؟"، کلیه بین المللی، جلد. 91، شماره 6، صص 1271-1274، 2017.

[25] M. Waasdorp، J. Duitman، S. Florquin، و CA Spek، "کمبود گیرنده فعال شده با پروتئاز{2}} در برابر نفروپاتی دیابتی ناشی از استرپتوزوتوسین در موش ها محافظت می کند." Scientific Reports, vol. 6، نه 1، ص. 33030, 2016.