اثر محافظتی عصاره Djulis (Chenopodium Formosanum) در برابر پیری پوست ناشی از UV و سن از طریق کاهش استرس اکسیداتیو و تخریب کلاژن قسمت 1

خلاصه: پیری پوست یک فرآیند پیچیده شامل پیری نوری و استرس گلیکوزیشن است که مسیرهای اساسی مشترکی دارند و واسطه‌های مشترکی دارند. آنها می توانند با ایجاد استرس اکسیداتیو و تجمع گونه های فعال اکسیژن (ROS) باعث آسیب پوست و تخریب کلاژن شوند. Chenopodium formosanum (CF)، همچنین به عنوان Djulis شناخته می شود، یک غلات سنتی در تایوان است. این مطالعه مکانیسم های حفاظتی عصاره CF را در برابر اشعه ماوراء بنفش (UV) و استرس ناشی از محصولات نهایی گلیکاسیون پیشرفته (AGEs) بررسی کرد. نتایج نشان داد که عصاره CF دارای اثرات آنتی اکسیدانی قوی و مهار رادیکال های آزاد است. می تواند تولید ROS داخل سلولی ناشی از اشعه ماوراء بنفش را کاهش دهد و سیستم دفاع آنتی اکسیدانی را با فعال کردن مسیر سیگنالینگ فاکتور هسته ای اریتروئید 2-مربوط به فاکتور 2 (Nrf2)/هم اکسیژناز{5}} (HO-1) آغاز کند. در فیبروبلاست های پوست انسان عصاره CF پروتئین کیناز فعال شده با میتوژن (MAPK) و مسیرهای سیگنالینگ فاکتور رشد بتا (TGF-) را تعدیل کرده تا پیری پوست ناشی از استرس اکسیداتیو را کاهش دهد. علاوه بر این، نتایج نشان داد که عصاره‌های CF نه تنها باعث تقویت سنتز کلاژن می‌شوند، بلکه تخریب کلاژن ناشی از پیری را نیز بهبود می‌بخشند. عصاره CF تولید ROS ناشی از AGEs و تنظیم مثبت گیرنده‌های AGEs (RAGE) را کاهش داد. نتایج کلی نشان می دهد که عصاره CF یک استراتژی موثر ضد پیری با جلوگیری از آسیب پوست در اثر استرس اکسیداتیو و از دست دادن کلاژن با فعالیت های آنتی اکسیدانی قوی، ضد فوتوپیری و ضد گلیکوزیشن ارائه می دهد.

گلیکوزید سیستانچ همچنین می تواند فعالیت SOD را در بافت های قلب و کبد افزایش دهد و به طور قابل توجهی محتوای لیپوفوسین و MDA را در هر بافت کاهش دهد و به طور موثر رادیکال های مختلف اکسیژن فعال (OH-، H2O2 و غیره) را از بین ببرد و از آسیب DNA ناشی از آن محافظت کند. توسط رادیکال های OH گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچ دارای توانایی مهار قوی رادیکال های آزاد، توانایی کاهش بالاتری نسبت به ویتامین C، بهبود فعالیت SOD در سوسپانسیون اسپرم، کاهش محتوای MDA و اثر محافظتی خاصی بر عملکرد غشای اسپرم هستند. پلی ساکاریدهای سیستانچ می توانند فعالیت SOD و GSH-Px را در گلبول های قرمز و بافت ریه موش های آزمایشگاهی مسن ناشی از D-گالاکتوز افزایش دهند و همچنین محتوای MDA و کلاژن را در ریه و پلاسما کاهش دهند و محتوای الاستین را افزایش دهند. اثر پاک کنندگی خوب بر روی DPPH، طولانی شدن زمان هیپوکسی در موش های پیر، بهبود فعالیت SOD در سرم، و به تاخیر انداختن انحطاط فیزیولوژیکی ریه در موش های آزمایشگاهی پیر. و این پتانسیل را دارد که دارویی برای پیشگیری و درمان بیماری های پیری پوست باشد. در عین حال، اکیناکوزید موجود در سیستانچ توانایی قابل توجهی در از بین بردن رادیکال های آزاد DPPH دارد و توانایی حذف گونه های فعال اکسیژن و جلوگیری از تخریب کلاژن ناشی از رادیکال های آزاد را دارد و همچنین اثر ترمیم خوبی بر آسیب آنیون رادیکال آزاد تیمین دارد.

برای ضد اکسیداسیون روی Cistanche Herba کلیک کنید

【برای اطلاعات بیشتر:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

کلید واژه ها: Chenopodium formosanum; جولیس; اشعه ماوراء بنفش؛ محصولات نهایی گلیکاسیون پیشرفته؛ استرس گلیکاسیون؛ گونه های اکسیژن واکنش پذیر

1. معرفی

پیری به عنوان نتیجه کاهش تدریجی عملکرد فیزیولوژیکی سلول ها و بافت های بدن تعریف می شود. در طول پیری، تجمع محصولات آسیب دیده به تدریج بر سازماندهی و ظرفیت ترمیم بافت تأثیر می گذارد. پوست به عنوان یک سد محافظ برای بدن، اغلب در معرض عوامل درونی و بیرونی پیری قرار می گیرد [1]. عامل خارجی غالبی که به پیری پوست کمک می کند، قرار گرفتن در معرض اشعه ماوراء بنفش در نور خورشید است که پیری پوست نامیده می شود [2]. علاوه بر محرک‌های محیطی، تجمع AGEs به عنوان یک عامل داخلی پیری زمانی در نظر گرفته می‌شود که فرآیند پیری پوست را از طریق استرس گلیکاسیون آغاز می‌کند [3].

هم ROS های محیطی تولید شده توسط نور UV و هم ROS درون زا که توسط متابولیسم اکسیداتیو تشکیل می شوند، استرس اکسیداتیو سلولی را تنظیم می کنند و ماتریکس خارج سلولی غنی از کلاژن (ECM) را از بین می برند، که نه تنها نشانه بارز پیری بافت همبند پوست است، بلکه عامل اصلی زوال پوست است. 4]. آسیب به پیوندهای متقابل کلاژن یکپارچگی ساختاری پوست را تضعیف می کند و سفتی و شکنندگی شبکه کلاژن را افزایش می دهد و در نتیجه باعث ایجاد چین و چروک، از دست دادن خاصیت ارتجاعی و خشکی پوست می شود [5].

پرتوهای UVB مضرترین باند موج تابش خورشیدی است که به زمین می رسد، که با تحریک تشکیل ROS منجر به استرس اکسیداتیو می شود و در هیپرپیگمانتاسیون، التهاب پوست، سرکوب سیستم ایمنی، پیری نوری و سرطان زایی نقش دارد [6،7]. به خوبی شناخته شده است که Nrf2 به عنوان یک تنظیم کننده اصلی دفاع آنتی اکسیدانی سلولی در برابر آسیب نوری پوستی ناشی از اشعه UV عمل می کند. سلول ها می توانند استرس اکسیداتیو را از بین ببرند و با تنظیم مسیر سیگنال دهی Nrf2/Kelch مانند پروتئین ECH 1 (Keap1) از آسیب جلوگیری کنند [8،9]. پس از قرار گرفتن در معرض اشعه ماوراء بنفش، تولید بیش از حد ROS MAPK و فاکتور هسته‌ای کاپا B (NF-κB) را فعال می‌کند، که به نوبه خود باعث افزایش تنظیم متالوپپتیدازهای ماتریکس (MMPs) می‌شود که منجر به تخریب کلاژن و الاستین می‌شود. علاوه بر این، پروتئین فعال کننده 1 (AP{14}}) سیگنالینگ TGF- را مهار می کند و منجر به کاهش سنتز پروکلاژن می شود [10،11].

AGE ها گروه ناهمگنی از مولکول‌ها هستند که در نتیجه گلیکاسیون، یک واکنش غیر آنزیمی خود به خودی بین قندهای احیاکننده و گروه‌های آمینه پروتئین‌ها تشکیل می‌شوند [3]. تعامل بین AGEs و گیرنده‌های خاص AGEs (RAGE) باعث ایجاد ROS می‌شود و بیان ژن را در اختلالات مرتبط با AGEs، مانند دیابت و نارسایی کلیوی تغییر می‌دهد [12،13]. AGE ها با افزایش سن در پروتئین های ECM انباشته می شوند و Nε-(1-Carboxymethyl)-L-lysine (CML) که با اصلاح اکسیداتیو تولید می شود، پروتئین اصلی گلیکوزه در انسان است [14،15]. در طول پیری ذاتی، AGE ها در اپیدرم و درم بیان می شوند و تجمع AGEs به طور قابل توجهی در نواحی در معرض آفتاب پوست مشاهده می شود [16]. علاوه بر این، اشعه ماوراء بنفش رسوب AGE ها را از طریق گلیکاسیون شبکه فیبر الاستیک افزایش می دهد [17].

Chenopodium formosanum (CF)، همچنین به عنوان Djulis شناخته می شود، یک گیاه خوراکی در تایوان است و معمولاً با برنج یا ارزن به عنوان غذای اصلی پخته می شود. CF یک ماده غذایی با ارزش غذایی بالا و منبع ترکیبات زیست فعال برای سلامت انسان در نظر گرفته می شود [18]. علاوه بر فیبر غذایی فراوان، نشاسته، اسیدهای آمینه ضروری محدود غلات و پلی فنول ها [19،20]، CF همچنین حاوی دسته ای از ترکیبات با سابقه طولانی استفاده دارویی به نام فیتواکدیستروئیدها است [21-24]. مطالعات قبلی گزارش کرده‌اند که CF چندین فعالیت بیولوژیکی را نشان می‌دهد، از جمله، ضد چاقی [21]، ضد فشار خون [22]، ضد قند خون [25،26]، محافظ کبد [27-29]، ضد سرطان [23،24،30،31]، و خواص ضد پیری [19،32]. با این وجود، نه اثرات محافظتی دقیق پوست عصاره CF و نه مکانیسم های اساسی در برابر پیری درونی و بیرونی پوست مرتبط با استرس اکسیداتیو و گلیکوزیشن تا به امروز آشکار نشده است. هدف از این مطالعه، شفاف سازی اثرات آنتی اکسیدانی عصاره CF و بررسی مکانیسم های دفاعی ضد پیری عصاره CF در برابر تخریب کلاژن توسط UV و AGEs در فیبروبلاست های پوست انسان بود.

2. نتایج

2.1. تجزیه و تحلیل کمی HPLC-ESI-MS/MS و MRM

تجزیه و تحلیل محتوای ترکیبات فعال زیستی هدف در عصاره CF توسط کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC)-Mass/MS و روش های نظارت بر واکنش چندگانه (MRM) انجام شد. کروماتوگرام یونی MRM و طیف جرمی روی حالت مثبت یونیزاسیون الکترواسپری (ESI) استاندارد 20-هیدروکسی سادیزون و روتین در مواد تکمیلی نشان داده شد. انتقال از یون پیش ساز در m/z 481 به تولید در m/z 371 برای 20-هیدروکسی دیزون (شکل S1a) و انتقال از یون پیش ساز در m/z 611 به تولید در m/z 3 03 برای روتین (شکل S1b) نشان داده شده است. شکل S2 کروماتوگرام یون کل (TIC) و کروماتوگرام یون استخراج شده (EIC) 20-هیدروکسی دیزون (m/z 481) و روتین (m/z 611) در عصاره CF را نشان می‌دهد. محتوای روتین و 20-هیدروکسی دیزون در عصاره CF به ترتیب mg/g 4/14 ± 5/14 و 6/0 ± 5/19 میلی‌گرم بر گرم بود.

2.2. فعالیت آنتی اکسیدانی و اثر مهار رادیکال آزاد عصاره CF

2.2.1. فعالیت پاکسازی رادیکال آزاد DPPH

DPPH یک معرف معمولی است که برای تخمین کل فعالیت مهار رادیکال آزاد آنتی اکسیدان ها با تشخیص توانایی عصاره ها برای تهیه پروتون های هیدروژن استفاده می شود. نتایج نشان داد که عصاره CF در غلظت 50 میکروگرم بر میلی‌لیتر 2/4 ± 2/4 درصد و در غلظت 500 میکروگرم بر میلی‌لیتر 6/2 ± 1/89 درصد و فعالیت مهاری اسید اسکوربیک 6/96 درصد بود. 2.3 ± درصد در 10 میکروگرم بر میلی لیتر (شکل 1a). نیمه حداکثر غلظت مهاری (IC50) عصاره CF در مهار رادیکال آزاد DPPH 0/13 ± 84.7 میکروگرم بر میلی لیتر بود.

2.2.2. کاهش قابلیت

قابلیت کاهش عصاره CF مشاهده شده در مطالعه حاضر در شکل 1b نشان داده شده است. ظرفیت احیایی عصاره CF 1.{4}} ± 51.3 درصد در 100 میکروگرم بر میلی لیتر و 66.9 ± 1.7 درصد در 1000 میکروگرم در میلی لیتر بود. ظرفیت کاهشی اسید آسکوربیک کنترل مقایسه ای (100 میکروگرم بر میلی لیتر) 2/1 ± 7/79 درصد بود.

2.2.3. فعالیت مهار رادیکال آنیون سوپراکسید (O2-).

فعالیت مهار رادیکال آنیون سوپراکسید 6.1 ± 82.2 درصد برای 250 میکروگرم در میلی لیتر BHA (کنترل مقایسه ای) بود و از 3.5 ± 59.6 درصد تا 2.6 ± 73.1 درصد برای 100-100 میکروگرم در میلی لیتر CF عصاره بود (شکل).

2.2.4. فعالیت پاکسازی پراکسید هیدروژن (H2O2).

فعالیت حذف پراکسید هیدروژن از 1.1 ± 1.3 درصد تا 2.3 ± 61.1 درصد برای 200 تا 1500 میکروگرم در میلی لیتر عصاره CF و 96.3 ± 2.0 درصد برای BHA (250 میکروگرم در میلی لیتر) بود. شکل 1d). IC50 عصاره CF برای فعالیت مهار پراکسید هیدروژن 2/59 ± 956.5 میکروگرم بر میلی لیتر بود.

2.2.5. رادیکال هیدروکسیل (· OH) فعالیت پاکسازی

فعالیت های مهار رادیکال هیدروکسیل عصاره CF (100-1000 میکروگرم بر میلی لیتر) و مانیتول کنترل مقایسه ای (میکروگرم بر میلی لیتر) در شکل 1e نشان داده شده است. فعالیت مهار رادیکال هیدروکسیل 1000 میکروگرم در میلی لیتر عصاره CF 5/3 ± 3/63 درصد و مانیتول (2500 میکروگرم در میلی لیتر) 2/2 ± 7/69 درصد بود. اثر مهاری عصاره CF مشابه با کنترل مقایسه بود و IC50 CF برای فعالیت مهار رادیکال هیدروکسیل 24.3 ± 240.7 میکروگرم بر میلی لیتر بود.

2.2.6. یون آهن (Fe2 به علاوه) فعالیت کیلاسیون

شکل 1f فعالیت کیلیت فلزی عصاره CF و EDTA کنترل مقایسه ای را نشان می دهد. دامنه فعالیت از 1.4 ± 6.5 درصد تا 2.5 ± 67.6 درصد برای 1{14}}{20}}-1000 میکروگرم در میلی لیتر عصاره CF و 97.5 ± 2.0 درصد برای 100 میکرومولار EDTA بود. IC50 عصاره CF برای کیلاسیون فلزی 46.0 ± 625.5 میکروگرم بر میلی لیتر بود.

2.3. عصاره CF سمیت سلولی ناشی از UV را در سلول های Hs68 کاهش داد

برای ارزیابی اثر سیتوتوکسیک عصاره CF در فیبروبلاست‌های پوست انسان (سلول‌های Hs68)، زنده‌مانی سلول‌های تیمار شده با عصاره CF با روش MTT ارزیابی شد. همانطور که در شکل 2a نشان داده شده است، عصاره CF باعث ایجاد سمیت سلولی در سلول های Hs68 در محدوده غلظت 50-250 میکروگرم بر میلی لیتر نشد. بنابراین، این غلظت ها برای آزمایش های زیر انتخاب شدند.

سلول‌های Hs68 در معرض تابش UVB قرار گرفتند و بقای سلول برای ارزیابی اثر محافظتی عصاره CF در برابر آسیب نوری تعیین شد. نتایج نشان داد که UVB (20-100 mJ/cm2) باعث ایجاد سمیت سلولی در سلول‌های Hs68 به صورت وابسته به دوز می‌شود (شکل 2b). با این وجود، سلول های Hs68 در معرض UVB (80 mJ/cm2) قرار گرفتند و متعاقباً با عصاره CF (100، 150، 200 و 250 میکروگرم بر میلی لیتر) به مدت 24 ساعت تیمار شدند. عصاره CF به طور قابل توجهی سمیت سلولی ناشی از UV را کاهش داد (شکل 2c).

2.4. عصاره CF تولید ROS درون سلولی ناشی از UV را در سلول های Hs68 کاهش داد

ROS می تواند پروتئین مرتبط با پیری پوست و انتقال سیگنال پایین دستی را با ایجاد استرس اکسیداتیو درون سلولی در پوست انسان القا کند. یک رنگ فلوروژنیک میزان رادیکال های آزاد اکسیداتیو را در سلول ها اندازه گیری می کند. پس از تابش اشعه UVB (80 mJ/cm2) به مدت 2 ساعت، تولید ROS در سلول‌های Hs68 2.{6}}برابر در مقایسه با گروه بدون تابش القا شد. با این حال، تیمار با 100-250 میکروگرم در میلی لیتر عصاره CF به طور قابل توجهی تولید ROS را کاهش داد. ROS در مقایسه با گروه تشعشع با عصاره CF در 250 میکروگرم در میلی لیتر 1.{11}}برابر کاهش یافت (شکل 3).

2.5. عصاره CF سیستم دفاع آنتی اکسیدانی را با فعال کردن مسیر سیگنالینگ Nrf2/HO{3}} در سلول های Hs68 راه اندازی کرد.

2.5.1. اثرات عصاره CF بر بیان Nrf2/HO ناشی از UV{5}}

در شرایط عادی، Keap1 با Nrf2 کمپلکسی را تشکیل می‌دهد و Ubiquitination و تخریب Nrf2 را ترویج می‌کند. با این حال، مسیر سیگنالینگ Nrf2 زمانی آغاز می شود که سلول ها توسط استرس اکسیداتیو محیطی تحریک شوند. در این مطالعه، سلول های Hs68 با عصاره CF تیمار شدند تا اثرات آن بر مسیر سیگنالینگ Nrf2 پس از تابش اشعه ماوراء بنفش مشاهده شود. همانطور که در شکل 4 نشان داده شده است، بیان Nrf2 ناشی از اشعه UVB (40 mJ/cm2) و بیان Keap1 را کاهش داد، در حالی که عصاره CF (250 میکروگرم در میلی لیتر) به طور قابل توجهی بیان Nrf2 را 2 برابر در مقایسه با گروه تابش القا کرد.{15}} . پس از تابش اشعه ماوراء بنفش و درمان با عصاره CF با غلظت 250 میکروگرم در میلی لیتر، بیان پروتئین HO{17}} 2 برابر شد. نتایج نشان داد که عصاره CF می تواند مکانیسم دفاعی آنتی اکسیدانی را از طریق مسیر سیگنالینگ Nrf2/HO{21}} آغاز کند و از سلول ها در برابر استرس اکسیداتیو در یک سیستم بیولوژیکی محافظت کند.

2.5.2. اثرات عصاره CF بر انتقال هسته ای ناشی از اشعه ماوراء بنفش Nrf2

اشعه ماوراء بنفش باعث فعال شدن Nrf2 و انتقال آن به هسته سلول ها می شود. در این مطالعه، سنجش رنگ‌آمیزی ایمونوفلورسانس Nrf2 در فیبروبلاست‌های پوست انسان برای تعیین سطح فعال‌سازی Nrf2 انجام شد. انتقال Nrf2 از سیتوپلاسم به هسته پس از تابش اشعه UVB افزایش یافت، در حالی که انتقال پس از درمان عصاره CF نیز افزایش یافت (شکل 5). نتایج سنجش رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس با بیان Nrf2 در شکل 4 مطابقت داشت.

2.6. مسیر سیگنالینگ سلولی مرتبط با پیری پوست تعدیل شده با عصاره CF در سلول های Hs68

2.6.1. اثرات عصاره CF بر بیان القا شده توسط UV MMP-1، -3، -9 و TIMP-1

اشعه ماوراء بنفش فسفوریلاسیون MAPK را القا می کند، که باعث انتقال سیگنال پایین دستی برای فعال کردن فاکتور رونویسی AP{{0}} و افزایش بیان MMP می شود. هنگامی که پوست در معرض استرس اکسیداتیو قرار می گیرد، MMP ها تنظیم می شوند، که سپس باعث تخریب کلاژن و تشکیل چین و چروک می شود. همانطور که در شکل 6 نشان داده شده است، تابش UVB به طور قابل توجهی بیان MMP-1، -3 و -9 را افزایش داد (2.2- برابر، 1.3- برابر، و 1.{10}}به ترتیب در مقایسه با گروه کنترل، برابر است، در حالی که عصاره CF بیان MMP ها را کاهش داد. تیمار عصاره CF در 250 میکروگرم بر میلی لیتر به طور قابل توجهی سطح بیان MMP{13}}، MMP{14}} و MMP{15}} ناشی از UVB را به میزان 1 برابر، 0 سرکوب کرد. در مقایسه با گروه کنترل، به ترتیب9- برابر، و 1.{21}}برابر می‌شوند.

مهارکننده‌های بافتی متالوپروتئینازها (TIMPs) مهارکننده‌های MMP هستند که در بافت همبند پوست بیان می‌شوند. بیان TIMP{0}} پس از تابش اشعه UVB کاهش یافت و با عصاره CF (100-250 میکروگرم در میلی لیتر) افزایش یافت (شکل 6). این نتایج نشان داد که درمان عصاره CF از افزایش سطوح MMP{5}}، -3 و -9 ناشی از UV و کاهش TIMP-1 جلوگیری می‌کند. بنابراین، عصاره CF ممکن است تجزیه ماتریکس خارج سلولی پوست ناشی از UV را کاهش دهد و یکپارچگی ساختاری درم را حفظ کند.

2.6.2. اثرات عصاره CF بر بیان ناشی از UV AP-1 و MAPK

اشعه UVB بیان pc-Jun و c-Fos را افزایش داد (2.{4}} و 1.{6}} برابر در مقایسه با گروه کنترل)، در حالی که آنها توسط عصاره CF (100-250 میکروگرم در / 100) کاهش یافتند. میلی لیتر). تیمار با عصاره CF به طور قابل توجهی بیان pc-Jun و c-Fos را در 250 میکروگرم بر میلی لیتر کاهش داد (شکل 7a). شکل 7b نشان داد که قرار گرفتن در معرض UVB بیان فسفوریلاسیون p38 و ERK را به 2.{17}} و 1.{19}} برابر نسبت به سطح پروتئین کل در سلول‌های Hs68 افزایش داد. با این حال، درمان با عصاره CF (100-250 میکروگرم در میلی لیتر) به طور قابل توجهی از بیان بیش از حد MAPK ناشی از UVB جلوگیری کرد. فسفوریلاسیون p38 و ERK تا سطوح پایه با غلظت 250 میکروگرم بر میلی لیتر عصاره CF سرکوب شد. علاوه بر این، عصاره CF می تواند از بیان بیش از حد AP ناشی از UV جلوگیری کند و از پوست در برابر پیری محافظت کند.

2.6.3. اثرات عصاره CF بر بیان مهار شده توسط UV TGF- و Smad3

TGF- نقش مرکزی در سنتز ماتریکس خارج سلولی ایفا می کند و هموستاز کلاژن را در درم انسان کنترل می کند. افزایش ROS در فیبروبلاست‌ها با کاهش بیان TGF و Smad3، سیگنال‌دهی TGF را مختل می‌کند، که منجر به از بین رفتن کلاژن و تخریب بافت پوستی در پوست پیر می‌شود. به طور مشابه، در مطالعه ما، اشعه UVB بیان TGF- و Smad3 را کاهش داد تا سنتز کلاژن را مهار کند. در مقایسه با گروه کنترل، بیان TGF- و Smad3 در گروه تحت تابش UVB کمتر بود. با این حال، عصاره CF (100-250 میکروگرم در میلی لیتر) به طور قابل توجهی بیان پروتئین را بازسازی کرد (شکل 8).

2.7. عصاره CF کاهش تولید ROS ناشی از AGEs و بیان خشم در سلول‌های Hs68

برای بررسی اثر عصاره CF بر استرس گلیکاسیون، سلول‌های Hs68 با CML تیمار شدند. پس از درمان سلول ها با CML (100 میکروگرم بر میلی لیتر) به مدت 6 ساعت، مقدار ROS تولید شده 1.{4} برابر بیشتر از گروهی بود که تیمار نشده بودند. با این حال، تیمار با عصاره CF (100-250 میکروگرم در میلی لیتر) به طور قابل توجهی تولید ROS را کاهش داد. ROS در مقایسه با گروه تیمار شده با CML با عصاره CF در 250 میکروگرم در میلی لیتر، 1.{9} برابر کاهش یافت (شکل 9). علاوه بر این، CML (100 میکروگرم در میلی‌لیتر) به طور قابل‌توجهی بیان RAGE را تا 2 برابر در مقایسه با گروه کنترل افزایش داد، اما با تیمار با عصاره CF کاهش یافت (شکل 10)، که نشان می‌دهد عصاره CF عمدتاً القاء را کاهش می‌دهد. ناشی از CML

2.8. عصاره CF باعث تقویت سنتز کلاژن و بهبود تخریب کلاژن ناشی از پیری در سلول های Hs68 شد.

2.8.1. اثرات عصاره CF بر سنتز کلاژن

سلول های Hs68 با عصاره CF (50-250 میکروگرم در میلی لیتر) به مدت 24 ساعت تیمار شدند و بیان پروکلاژن نوع I با استفاده از وسترن بلات اندازه گیری شد. پس از درمان با عصاره CF، بیان پروکلاژن نوع I به طور قابل توجهی افزایش یافت (1.{5} برابر در مقایسه با گروه کنترل) (شکل 11a). محتوای کلاژن کل در گروه کنترل 14.93 ± 1.27 میکروگرم بر میلی لیتر بود که پس از درمان با 250 میکروگرم در میلی لیتر عصاره CF به 39. ± 2.39 میکروگرم در میلی لیتر افزایش یافت (شکل 11b). نتایج بیان پروکلاژن نوع I و محتوای کلاژن کل نشان داد که عصاره CF باعث سنتز و تولید کلاژن می شود.

2.8.2. اثرات عصاره CF بر تخریب کلاژن ناشی از UV و AGEs

سلول های Hs68 که در معرض اشعه UVB (40 mJ/cm2) قرار داشتند یا تحت درمان با CML (100 میکروگرم بر میلی لیتر) قرار گرفتند، به مدت 24 ساعت با عصاره CF تیمار شدند. همانطور که در شکل 12a نشان داده شده است، محتوای کلاژن کل پس از تابش اشعه UVB به طور قابل توجهی کاهش یافت و تیمار با عصاره CF کلاژن را بازسازی کرد و به طور قابل توجهی تشکیل کلاژن را در 250 میکروگرم بر میلی لیتر افزایش داد. نتایج مشابهی در تولید کلاژن تیمار شده با CML و یک سری عصاره CF نشان داده شد. عصاره CF کاهش درمان شده با CML در کلاژن کل را کاهش داد (شکل 12b).

برای تعیین سطح کلاژن در سلول های فیبروبلاست از روش رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس استفاده شد (شکل 12c). هم پرتوهای UVB و هم درمان CML محتوای کلاژن را کاهش می‌دهند، در حالی که عصاره‌های CF تخریب کلاژن را بهبود می‌بخشند. نتایج سنجش رنگ‌آمیزی ایمونوفلورسانس عصاره CF روی کلاژن با محتوای کلاژن در شکل‌های 11b و 12a،b مطابقت داشت.

【برای اطلاعات بیشتر:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】