اثر محافظتی پاندوراتین A بر آپوپتوز ناشی از سیس پلاتین سلول های لوله پروگزیمال کلیه انسان و آسیب حاد کلیه در موش

edmund.chen@wecistanche.com

زمینه:سیس پلاتین شیمی درمانی موثری است اما عارضه جانبی اصلی آن حاد استآسیب کلیه، استفاده از آن را محدود می کند. Pandurate A، یک ترکیب فعال زیستی استخراج شده از Boesenbergia rotunda، چندین فعالیت بیولوژیکی مانند اثرات آنتی اکسیدانی را نشان می دهد. مطالعه حاضر به بررسی اثر محافظتی نفروپاندورات A بر روی سیس پلاتین القا شده است.آسیب کلیویروش‌ها: ما اثر پاندورات A را بر سمیت سیس پلاتین در کشت‌های سلولی کلیوی موش و انسان با استفاده از سلول‌های RPTEC/TERT1 بررسی کردیم. یافته‌ها: نتایج نشان داد که پاندورات A با کاهش آپوپتوز، سمیت کلیوی ناشی از سیس پلاتین را در موش‌ها و سلول‌های RPTEC/TERT1 بهبود می‌بخشد. موش های تحت درمان با یک تزریق داخل صفاقی (IP) سیس پلاتین (20 میلی گرم بر کیلوگرم وزن بدن (BW)) به نمایش گذاشته شدند.کلیهآسیب لوله و اختلالعملکرد کلیههمانطور که با بررسی بافت شناسی و افزایش کراتینین سرم نشان داده شده است. تجویز همزمان پاندورات A (50 میلی گرم بر کیلوگرم وزن بدن) به صورت خوراکی بهبود یافتعملکرد کلیهو بهبود یافته استکلیهآسیب توبول سیس پلاتین با مهار فعال سازی کیناز تنظیم شده با سیگنال خارج سلولی (ERK) 1/2 و کاسپاز 3. در سلول های لوله پروگزیمال کلیه انسان، آپوپتوز سلولی ناشی از سیس پلاتین با فعال کردن پروتئین های پرو آپوپتوز (ERK1/2 و کاسپاز 3)، و کاهش پروتئین ضد آپوپتوز (Bcl{10}}). این اثرات به طور قابل توجهی با درمان مشترک با پاندورات A بهبود یافت. جالب توجه است، پاندورات A تجمع درون سلولی سیس پلاتین را تغییر نداد. این اثر ضد سرطانی سیس پلاتین را در رده های سلولی سرطان ریه یا روده بزرگ انسانی تغییر نداد. نتیجه‌گیری: مطالعه حاضر نشان می‌دهد که پاندورات A یک اثر محافظتی بالقوه بر سمیت کلیوی سیس پلاتین دارد.

کلید واژه ها:شیمی درمانی؛ آسیب حاد کلیه؛ پاندوراتین A; لوله پروگزیمال کلیه انسان؛ ضد آپوپتوز؛ کلیه کلیه

سیستانچ دیالیز کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

مقدمه

سمیت نفروتوکسیک ناشی از داروها یک مشکل عمده در محیط بالینی است زیرا استفاده از داروهای نفروتوکسیک اغلب اجتناب ناپذیر است. سمیت کلیوی را می توان با آسیب های کلیوی از جمله آسیب گلومرولی و آسیب لوله ای که منجر به اختلال در عملکرد کلیه می شود تعریف کرد. 1) داروهای رایج مرتبط باآسیب کلیهضد التهاب، آنتی بیوتیک ها و عوامل شیمی درمانی مانند سیس پلاتین هستند. 2-4) سیس پلاتین یک داروی شیمی درمانی با طیف وسیع و با قدرت بالا است. و عدم تعادل الکترولیتی. 8،9) سمیت کلیوی ناشی از سیس پلاتین با آسیب لوله پروگزیمال، آسیب عروقی و التهاب مشخص می شود. گونه های فعال اکسیژن (ROS) به عنوان یک واسطه کلیدی در سمیت کلیوی سیس پلاتین شناسایی شده است. 10،11) علاوه بر این، ROS از طریق فعال سازی پروتئین کینازهای فعال شده با میتوژن (MAPKs) باعث ایجاد سمیت کلیوی می شود. 10،12،13) چندین مطالعه گزارش کرده اند که سیس پلاتین خود می تواند مستقیماً کیناز تنظیم شده با سیگنال خارج سلولی (ERK) 1/2 (یکی از اعضای MAPKs) را هم در شرایط in vitro و هم in vivo تحریک کند. 14،15)

برخی از فیتوکمیکال‌ها با مهار تجمع ROS و آپوپتوز، سمیت کلیوی ناشی از سیس پلاتین را بهبود می‌بخشند. 16-18) اگرچه اثرات محافظتی نفرو این فیتوکمیکال‌ها در مطالعات پیش بالینی گزارش شده است، هنوز هیچ داروی تایید شده‌ای از فیتوکمیکال‌ها برای بررسی سمیت کلیوی سیس پلاتین وجود ندارد (19). ) عمل بالینی کنونی فقط درمان های حمایتی را برای بازیابی عملکرد کلیوی ارائه می دهد. 20) بنابراین، جستجو برای عوامل موثر برای پیشگیری یا درمان سمیت کلیوی ناشی از سیس پلاتین همچنان مهم است. Pandurate A یک فیتوکمیکال جالب است. این یک چالکون سیکلوهگزانول است که از Boesenbergia rotunda، گیاهی که در طب سنتی و غذا استفاده می شود، جدا شده است. 21) نشان داده شده است که پاندوراتین A از استرس اکسیداتیو، التهاب و بیماری متابولیک پیشگیری یا درمان می کند. 22،23) آسیب توبول های پروگزیمال کلیه ناشی از سیس پلاتین، حداقل تا حدی، از طریق افزایش استرس اکسیداتیو و التهاب واسطه می شود. 11) بنابراین، ما اثر پاندورات A را بر سمیت سیس پلاتین هم در حیوانات و هم در کشت های سلولی با استفاده از سلول های RPTEC/TERT1 بررسی کردیم. ما همچنین آزمایش کردیم که آیا درمان مشترک با پاندورات A بر فعالیت ضد سرطانی سیس پلاتین در رده های سلولی سرطانی انسان تأثیر می گذارد یا خیر.

مواد و روش ها

مواد شیمیایی Thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT),  2′,7′-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA), cisplatin, and compound C (AMP-activated protein kinase (AMPK) inhibitor) were purchased from Sigma-Aldrich (MO, U.S.A.).  3 H-1-Methyl-4-phenylpyridinium (3 H-MPP+) was purchased from PerkinElmer, Inc. (Bangkok, Thailand). Annexin V- fluorescein isothiocyanate (FITC) apoptosis detection kit was purchased from BD Biosciences (CA, U.S.A.). Primary antibodies for p-ERK1/2 (Cat. No. 9102S), ERK1/2 (Cat. No.  9101S), Bcl-2 (Cat. No. 2872T), caspase-3 (Cat. No. 9662S),  glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) (Cat.  No. 2118S), p-AMPKα (Cat. No.2531S), AMPKα (Cat. No.  5832S), Bax (Cat. No. 5023) and β-actin (Cat. No. 4970T)  antibodies were obtained from Cell Signaling (MA, U.S.A.)  and anti-neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL)  antibody (Cat. No. STCSC-515876) was purchased from Santa  Cruz Biotechnology (CA, U.S.A.). Pandurate A >98 درصد خلوص تعیین شده توسط HPLC از Boesenbergia rotunda جدا شد، همانطور که قبلا توسط گروه ما توضیح داده شد. 24) ریزوم های Boesenbergia rotunda از Kanchanaburi، تایلند جمع آوری شد. این گیاه توسط Tuanta Sematong شناسایی شد. نمونه کوپن (شماره BKF 68909) در هرباریوم جنگلی، اداره جنگلداری سلطنتی، بانکوک سپرده شده است.

CISTANCHE عملکرد کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

حیواناتموش های نر C57BL/6 (8-هفته ای) از Nomura Siam International Co., Ltd. (بانکوک، تایلند) خریداری شدند. پروتکل مراقبت و استفاده از حیوانات شماره MUSC61-063-464 توسط کمیته مراقبت و استفاده از حیوانات سازمانی، MUSC–IACUC تأیید شده است. به موش ها اجازه داده شد که آزادانه به غذا و آب دسترسی داشته باشند. پس از یک هفته سازگاری، موش‌ها به‌طور تصادفی تقسیم شدند و تیمارهای زیر را انجام دادند: نرمال سالین با یک تزریق داخل صفاقی (IP) در روز چهارم (گروه کنترل). پاندورات A (50 میلی گرم بر کیلوگرم وزن بدن (BW)) با گاواژ خوراکی به مدت 7 روز (گروه پاندورات A). سیس پلاتین (20 میلی گرم بر کیلوگرم وزن بدن) با یک تزریق داخل صفاقی در روز 4 (گروه سیس پلاتین). پاندورات A (50 میلی گرم/کیلوگرم وزن بدن در روز) با گاواژ خوراکی به مدت 7 روز و سیس پلاتین (20 میلی گرم/کیلوگرم وزن بدن) با یک تزریق داخل صفاقی در روز 4 (گروه همزمان). در روز هفتم، موش ها با تیوپنتال سدیم عمیقاً بیهوش شدند. خون گرفته شد و به مدت 10 دقیقه در ساعت 3000 بعد از ظهر سانتریفیوژ شد. سوپرناتانت های جمع آوری شده در دمای 80- درجه نگهداری شدندعملکرد کلیهاندازه گیری شد.کلیه هابرای اندازه گیری بیان پروتئین و مطالعات هیستوپاتولوژیک جمع آوری شد.

تعیین عملکرد کلیه و معاینه بافت شناسیعملکرد کلیه با اندازه گیری کراتینین سرم با استفاده از Stanbio Creatinine Liquicolor (NY، USA) و تجزیه و تحلیل شیمیایی خون، Licenza (رم، ایتالیا) تعیین شد. برای بررسی آسیب لوله های کلیوی ناشی از سیس پلاتین، موشکلیه هادر پارافورمالدئید 4 درصد تثبیت شدند. راکلیهبرش ها با هماتوکسیلین و ائوزین (H&E) رنگ آمیزی شدند که توسط میکروسکوپ نوری عکسبرداری شد. درصد آسیب لوله‌ای برای ارزیابی آسیب لوله‌های کلیوی استفاده شد: 0=بدون آسیب لوله‌ای 1=<10%; 2="10–25%;" 3="26–50%;" 4="51–75%;"  5="">75 درصد. اسلایدها کورکورانه توسط یک آسیب شناس نمره گذاری شدند. میانگین امتیاز برای هر گروه از حیوانات با شمارش 10 فیلد مختلف یک اسلاید محاسبه شد.

خطوط سلولیسلول‌های RPTEC/TERT1، سلول‌های سرطان کولون (HCT116) و سلول‌های سرطانی سلول غیرکوچک ریه (A549) از مجموعه فرهنگ نوع آمریکایی (VA، ایالات متحده آمریکا) خریداری شدند. به طور خلاصه، سلول‌های RPTEC/TERT1 در محیط کامل Eagle/F{5}} اصلاح‌شده Dulbecco (DMEM/F12) همانطور که قبلاً توضیح داده شد، کشت داده شدند. 25) سلول‌های HCT116 و A549 به ترتیب در محیط‌های DMEM/F12 و RPMI1640 با مکمل کشت شدند. با آنتی بیوتیک های پنی سیلین-استرپتومایسین و 10 درصد سرم جنین گاوی (FBS). سلول ها در دمای 37 درجه در اتمسفر مرطوب 5 درصد CO2 و 95 درصد O2 کشت داده شدند.

سنجش بقای سلولی و آنالیز آپوپتوز سلولیزنده ماندن سلول ها با قرار دادن سلول های RPTEC/TERT1 در معرض 0.5mg/mL معرف MTT به مدت 1 ساعت در دمای 37 درجه سانتی گراد تعیین شد. میکروپلیت خوان EnVision با جذب 570nm. زنده ماندن سلولی به عنوان درصد کنترل گزارش شد. انکسین V و پروپیدیوم یدید (از آنالیز رنگ آمیزی PI برای تعیین آپوپتوز سلولی استفاده شد. به طور خلاصه، سلول های RPTEC/TERT1 توسط 25/0 درصد تریپسین-اتیلن دی آمین تتراستیک اسید (EDTA) جدا شدند. سوسپانسیون های سلولی با Annexin V-FITC و PI در تاریکی انکوبه شدند. 4 درجه به مدت 15 دقیقه و سپس دو بار شستشو با بافر اتصال، سلول های آپوپتوز توسط فلوسایتومتر شمارش و به عنوان درصد کل سلول ها بیان شد.

ارزیابی تجمع ROS داخل سلولیسطوح ROS با استفاده از روش DCFH-DA تعیین شد. سلول های RPTEC/TERT1 با 10 میکرومولار DCFH-DA انکوبه شدند و به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه انکوبه شدند. سپس رنگ DCFH-DA حذف شد و سلول ها با سالین بافر فسفات (PBS) شسته شدند. سطح ROS درون سلولی به ترتیب در طول موج های 485 و 530 نانومتر برای تحریک و انتشار اندازه گیری شد. تجمع ROS درون سلولی به عنوان درصدی از شدت فلورسنت نسبت به سلول های کنترل گزارش می شود.

سیستانچ بیماری کلیوی/کلیوی را بهبود می بخشد

تجزیه و تحلیل تجمع پلاتینپلاتین انباشته شده در سلول های RPTEC/TERT1 هضم شده و موش اندازه گیری شدکلیه هاتوسط طیف سنج UNICAM 989 QZ AA (Geleen، هلند). به هر نمونه 100 میکرولیتری 10 میکرولیتر تریتون X{2}} 1 درصد و 400 میکرولیتر اسید نیتریک 1 درصد اضافه شد. سپس نمونه ها برای حداقل 1 ساعت انکوبه شدند. قبل از تشخیص پلاتین، هر نمونه 10:1 با اسید نیتریک 1 درصد رقیق شد. غلظت پلاتین با استفاده از رگرسیون خطی منحنی استاندارد پلاتین تهیه شده با استفاده از 2.5 میلی گرم در میلی لیتر سیس پلاتین رقیق شده در اسید نیتریک 1 درصد محاسبه شد. پلاتین به عنوان ng / شماره سلول یا ng / محاسبه شدکلیهوزن.

سنجش جذب 3H-MMP*جذب 3H-MPP پلاس به سلول‌های RPTEC/TERT1 با استفاده از روش قبلی ما تعیین شد. 25) به طور خلاصه، سلول‌ها با بافر انتقال گرم شسته شدند و به مدت 20 دقیقه انکوبه شدند. تک لایه های سلولی با H-MPP به علاوه (10nM) و پس از شستشو با بافر حمل و نقل سرد یخ انکوبه شدند. نمونه ها جمع آوری شد و فعالیت رادیواکتیو H-MPP plus با استفاده از یک شمارنده سوسوزن مایع اندازه گیری شد.

تجزیه و تحلیل وسترن بلاتینگعبارات پروتئین بر اساس مطالعه قبلی ما پردازش شد. 26) پروتئین های استخراج شده از موشکلیهو سلول های RPTEC/TERT1 با سرعت 12000 دور در دقیقه به مدت 20 دقیقه در دمای 4 درجه سانتریفیوژ شدند. مقادیر مساوی از پروتئین های جدا شده از سلول ها و بافت ها دناتوره شده و توسط الکتروفورز ژل دودسیل سولفات سدیم-پلی آکریل آمید 10-12 درصد (SDS-PAGE) جدا شدند. نمونه ها روی غشاهای نیتروسلولزی و سپس یک ساعت بلوک پروتئین غیر اختصاصی با استفاده از شیر خشک بدون چربی (5 درصد) منتقل شدند. غشاها با آنتی بادی اولیه به مدت 24 ساعت انکوبه شدند و سپس با آنتی بادی ثانویه به مدت 1 ساعت انکوبه شدند. شدت بیان پروتئین با استفاده از سوبسترای HRP شیمیایی لومینسانس تشخیص داده شد و با نرم افزار ImageJ اندازه گیری شد.

تحلیل آماریداده ها به صورت میانگین ± انحراف معیار (SD) بیان می شوند. داده‌ها با استفاده از آزمون‌های پس‌هوک توکی (GraphPad Prism 8.{2}}) با استفاده از آنالیز واریانس یک‌طرفه تجزیه و تحلیل شدند. زمانی که مقدار p کمتر از 0.05 باشد، یک معنادار در نظر گرفته می‌شود.

نتایج Panduratin A کلیه حاد ناشی از سیس پلاتین را بهبود می بخشدآسیب ما تأثیر پاندورات A را بر روی بررسی کردیمآسیب کلیهناشی از سیس پلاتین در موش ما ابتدا سمیت عمومی را با اندازه‌گیری تغییر وزن بدن در موش‌ها پس از درمان با نرمال سالین، پاندورات A (50 میلی‌گرم/کیلوگرم وزن بدن)، سیس پلاتین (20 میلی‌گرم/کیلوگرم وزن بدن) و سیس پلاتین (20 میلی‌گرم/کیلوگرم وزن بدن) و پاندورات مشاهده کردیم. A (50 میلی گرم بر کیلوگرم وزن بدن). کاهش قابل توجه وزن بدن در موش های تحت درمان با سیس پلاتین مشاهده شد. کاهش وزن بدن با درمان مشترک با پاندورات A کاهش یافت (شکل 1A). در مقایسه با کنترل،عملکرد کلیهکه با سطح کراتینین سرم اندازه گیری شد نشان داد که پاندورات A تحت درمان با موش به تنهایی سطح کراتینین سرم را تغییر نمی دهد. در حالی که موش های تحت درمان با سیس پلاتین به طور قابل توجهی سطح کراتینین سرم را افزایش دادند که نشان دهنده اختلال در عملکرد کلیه است. سطح کراتینین سرم در تجویز همزمان پاندورات A در مقایسه با موش های تحت درمان با سیس پلاتین به طور قابل توجهی کاهش یافت (شکل 1B). علاوه بر این، تجمع پلاتین درکلیهبافت تفاوت معنی داری در موش های تحت درمان با سیس پلاتین به تنهایی در مقایسه با موش هایی که با سیس پلاتین و پاندورات A درمان شده بودند تفاوت معنی داری نداشت (شکل 1C). این داده ها نشان می دهد که پاندورات A بر محتوای سیس پلاتین در بافت کلیه تأثیر نمی گذارد. راکلیه هابه‌دست‌آمده از موش‌های تحت درمان با وسیله نقلیه یا پاندورات A به تنهایی هیچ تغییر پاتولوژیک مشخصی را نشان نداد. با این حال، موش های تحت درمان با سیس پلاتین آسیب لوله ای بیشتری را در مقایسه با موش های تحت درمان با وسیله نقلیه نشان دادند که با افزایش دژنراسیون و پوسته پوسته شدن، تشکیل قالب های مجرای، نفوذ سلول های تک هسته ای، کاریومگالی، خونریزی بین لوله ای و اتساع نشان داده شده است. این تغییرات پاتولوژیک به طور قابل توجهی با تجویز همزمان پاندورات A کاهش یافت (شکل 2A، جدول 1). سطح بیان NGAL (یک نشانگر زیستی سمیت کلیوی)، و ERK1/2 و کاسپاز 3 بریده شده (پروتئین های طرفدار آپوپتوز) تعیین شد. مطالعه ما نشان داد که موش های تحت درمان با سیس پلاتین به طور قابل توجهی بیان NGAL، p-ERK1/2 و کاسپاز 3 را در مقایسه با موش های تحت درمان با وسیله نقلیه افزایش دادند. درمان همزمان با پاندورات A به طور قابل توجهی این پروتئین های ناشی از درمان سیس پلاتین را کاهش داد (شکل 2B).

Pandurate A از سمیت سلولی ناشی از سیس پلاتین در سلول های لوله پروگزیمال کلیه انسان با مهار مسیرهای سیگنال دهی آپوپتوز جلوگیری می کند.سیس پلاتین (50 میکرومولار) به معنی کاهش قابل توجه زنده ماندن سلول های RPTEC/TERT1 پس از 72 ساعت انکوباسیون است. جالب توجه است، تیمار همزمان با پاندورات A (1 و 5 میکرومولار) به طور قابل توجهی باعث افزایش زنده ماندن سلول شد (شکل 1).

3A). اثر محافظتی پاندوراتین A در برابر سمیت سلولی سیس پلاتین با اندازه گیری آپوپتوز سلولی تایید شد. همانطور که انتظار می رفت، قرار گرفتن سلول ها در معرض سیس پلاتین 50 میکرومولار به مدت 48 ساعت به طور قابل توجهی آپوپتوز سلول های RPTEC/TERT1 را افزایش داد. این اثر توسط پاندورات A کاهش یافت (شکل 3B). ما بررسی کردیم که آیا اثر پاندورات A بر سمیت سیس پلاتین نیاز به فعال سازی AMPK دارد یا خیر. همانطور که در شکل 3C نشان داده شده است، بیان پروتئین p-AMPK، شکل فعال AMPK، توسط پاندورات A افزایش یافت در حالی که توسط سیس پلاتین کاهش یافت. علاوه بر این، اثر محافظتی پاندورات A تحت مهار AMPK تعیین شد. جالب توجه است که انکوباسیون سلول ها با 10 میکرومولار ترکیب C، که یک مهارکننده AMPK است، اثر محافظتی پاندورات A را بر زنده ماندن سلول کاهش نداد (شکل 3D). این نتایج نشان می دهد که اثر محافظتی پاندورات A ممکن است توسط مکانیسم های مستقل از AMPK واسطه شود. ما بعداً اثر پاندورات A را بر روی پروتئین‌های خاص درگیر در آپوپتوز سلولی ناشی از سیس پلاتین بررسی کردیم. همانطور که در شکل 4 نشان داده شده است، سیس پلاتین به طور قابل توجهی پروتئین های پرو آپوپتوتیک p-ERK1/2 را افزایش داد و کاسپاز 3 را شکافت. سیس پلاتین بیان پروتئین ضد آپوپتوز Bcl را کاهش داد{17}}. درمان همزمان با پاندورات A بیان این پروتئین ها را معکوس کرد. از آنجایی که ROS یک عامل اصلی درگیر در آپوپتوز سلول های کلیوی ناشی از سیس پلاتین است، ما تأثیر پاندوراتین A را بر تجمع ROS ناشی از سیس پلاتین تعیین کردیم. سیس پلاتین به طور قابل توجهی سطوح داخل سلولی ROS را افزایش داد. جالب توجه است، پاندوراتین A به طور قابل توجهی تجمع ROS ناشی از سیس پلاتین را کاهش داد.

پاندوراتین A بر تجمع سلولی سیس پلاتین OCT2 تأثیر نمی گذاردواسطه انتقال سیس پلاتین به داخل سلول های لوله ای پروگزیمال کلیه انسان است. برای بررسی امکان کاهش تجمع سیس پلاتین پاندوراتین A، عملکرد انتقال OCT2 را اندازه گیری کردیم. نتایج نشان داد که انکوباسیون سلول ها با 5 میکرومولار پاندوراتین A به مدت 10 دقیقه و 24 ساعت هیچ تأثیری بر تجمع سلولی H-1-متیل-4-phe-nylpyridinium (H-MPP plus)، یک بستر OCT2 نداشت. سپس اثر پاندوراتین A بر تجمع سلولی سیس پلاتین تایید شد. پاندوراتین A اثر قابل توجهی بر تجمع پلاتین در سلول های کلیوی انسان نداشت (شکل 5).

اثر محافظتی پاندوراتین A بر فعالیت ضد سرطان سیس پلاتین تأثیر نمی گذارد.اثر پاندوراتین A بر سمیت سیس پلاتین در رده های سلولی سرطانی تعیین شد. توانایی چشمی سلول های HCT116 و A549 که به ترتیب رده های سلولی سرطان روده بزرگ و ریه هستند، 72 ساعت پس از درمان با سیس پلاتین (50μuM) به طور قابل توجهی کاهش یافت. درمان همزمان با پاندوراتین A (5μM) باعث کاهش سمیت سلولی سیس پلاتین نشد. جالب اینجاست که پاندوراتین A به خودی خود باعث کاهش این میزان نیز می شود

بحث

مطالعه حاضر نشان می دهد که پاندوراتین A سمیت کلیوی سیس پلاتین را بدون آسیب رساندن به فعالیت ضد سرطانی سیس پلاتین در رده های سلولی سرطان روده بزرگ و سلول های غیر کوچک ریه کاهش می دهد. ما نشان دادیم که درمان همزمان با پاندوراتین A باعث کاهش حاد می شودآسیب کلیهدر موش های ناشی از سیس پلاتین. اگرچه مطالعه حاضر اثر محافظتی را بر روی ناشی از سیس پلاتین نشان می دهدآسیب کلیه،هدف اولیه پاندوراتین A مشخص نشده است. پاندوراتین A می‌تواند AMPK را در سلول‌های لوله‌ای پروگزیمال کلیه (شکل 3) و سایر انواع سلول‌ها فعال کند.30-2 بعید به نظر می‌رسد که اثر محافظتی پاندوراتین A مستلزم فعال‌سازی AMPK باشد زیرا شواهد نشان می‌دهد که مهار AMPK با استفاده از مهارکننده‌های شیمیایی. اثر محافظتی Pandu-rating A را تغییر نداد. Panduratin A عملکرد کلیه را بهبود بخشید همانطور که با کاهش کراتینین سرم نشان داده شد. اختلال عملکرد کلیه با سیس پلاتین با آسیب های توبول کلیوی مانند دژنراسیون، تشکیل گچ مجرا، خونریزی و اتساع در ارتباط است. نتایج آسیب توبول کلیوی به خوبی با داده‌های ما که القای بیان NGAL را نشان می‌دهد همبستگی داردکلیهبافت موش های تحت درمان با سیس پلاتین. علاوه بر این، این شواهد توسط مطالعه قبلی تأیید می شود که نشان می دهد NGAL به طور قابل توجهی در لوله های کلیوی به دنبال حاد بیان می شود.آسیب کلیهالقا شده توسط سیس پلاتین. 3) جالب توجه است، درمان مشترک موش با پاندوراتین A آسیب توبول کلیوی ناشی از سیس پلاتین را ضعیف کرد. تجزیه و تحلیل بافت شناسی نشان داد که سیس پلاتین انفیلتراسیون سلول های تک هسته ای را افزایش داد و این اثر توسط پاندوراتین A لغو شد. این نتایج نشان می دهد که پاندوراتین A، که قبلاً یک ضد التهاب نشان داده شده بود، 24.3435) ممکن است اثر التهابی سیس پلاتین را در بافت کلیه کاهش دهد. فعال سازی MAPK می تواند مرگ سلولی را القا کند. 2415) نتایج ما نشان داد که سیس پلاتین فعال سازی ERK1/2 و کاسپاز 3 را تحریک می کند. بیان این پروتئین ها توسط پاندوراتین A کاهش می یابد.

مسیرهای متعددی که در سمیت کلیوی ناشی از سیس پلاتین نقش دارند (شامل آپوپتوز، استرس اکسیداتیو و التهاب) گزارش شده است. ما از خط سلولی RPTEC/TERT1 برای شناسایی مکانیسم های سمیت بهبود دهنده پاندوراتین A ناشی از سیس پلاتین در سلول های توبولار پروگزیمال کلیه انسان استفاده کردیم. سلول‌های RPTEC/TERT1 به‌عنوان یک مدل سلولی کلیوی برای سمیت‌های ناشی از بیگانه‌بیوتیک پیشنهاد شده‌اند.36پاندوراتین A اثر محافظتی در رابطه با سمیت سلولی سیس پلاتین نشان می‌دهد، همانطور که با کاهش آپوپتوز سلولی RPTEC/TERT1 نشان داده شده است. مکانیسم های سمیت سیس پلاتین در سلول های لوله پروگزیمال کلیه پیچیده است. فعال‌سازی ERK1/2 و کاسپاز 3 و کاهش Bcl{10}} در آپوپتوز سلول‌های کلیوی ناشی از سیس پلاتین دخیل بوده است. 3 و بیان Bcl{16}} را کاهش می دهد. نتایج ما نشان می‌دهد که پاندوراتین A پروتئین‌های سیگنال‌دهنده آپوپتوز ناشی از سیس پلاتین، p-ERK1/2 و کاسپاز 3 شکافته شده را سرکوب می‌کند و پروتئین ضد آپوپتوز را حفظ می‌کند. Bcl{23}}. علاوه بر فعال شدن ERK1/2 و کاسپاز 3، افزایش تجمع ROS درون سلولی یک عامل کلیدی در آپوپتوز سلول های کلیوی ناشی از سیس پلاتین است.139 مطالعه قبلی گزارش داد که پاندوراتین A با کاهش تشکیل ROS درون سلولی ناشی از واکنش واکنشی، در برابر آسیب اکسیداتیو در سلول های کبدی محافظت می کند. کاهش تجمع ROS به دنبال درمان با پاندوراتین A می تواند با مهار تولید ROS یا افزایش واکنش مهار ROS انجام شود. ما گزارش دادیم که پاندوراتین A سطح گلوتاتیون را افزایش می دهد، یک مولکول مهارکننده ROS، که ممکن است تجمع ROS را در بافت کلیه کاهش دهد (به مواد تکمیلی مراجعه کنید). با این حال، ما مکانیسم های دیگر را در کاهش ROS رد نمی کنیم. نتایج ما نشان داد که پاندوراتین A تجمع ROS درون سلولی را کاهش می‌دهد که به اثر محافظتی پاندوراتین A کمک می‌کند. سطح درون سلولی سیس پلاتین عامل اصلی موثر بر شدت سمیت ناشی از سیس پلاتین است. ناقل‌های کلیوی مانند OCT2، ناقل‌های مس و چند دارو و ناقل اکستروژن سم-1 (MATE1) گزارش شده‌اند که در انتقال سیس پلاتین نقش دارند. نشان داده شده است که مهار OCTs سمیت کلیوی ناشی از سیس پلاتین را هم در سلول‌های کلیوی کشت شده و هم در حیوانات کاهش می‌دهد. (9،42) با این حال، به نظر می‌رسد که احتمالاً پاندوراتین A بر عملکرد انتقال OCT2 یا تجمع سیس پلاتین تأثیر نمی‌گذارد که نشان‌دهنده اثر محافظتی پاندوراتین A در برابر است. سمیت سیس پلاتین با کاهش انتقال یا تجمع سیس پلاتین ایجاد نمی شود.

سیستانچ درد کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

پاندوراتین A از طریق مهار آپوپتوز سلول های کلیوی، اثرات محافظتی مجدد از خود نشان می دهد. اگر پاندوراتین A نیز آپوپتوز سلول های سرطانی را مهار کند، اثربخشی شیمی درمانی را کاهش می دهد. بنابراین، ما آزمایش کردیم که آیا پاندوراتین A فعالیت ضد سرطانی سیس پلاتین را کاهش می دهد یا خیر. به طور قابل توجهی، درمان مشترک با پاندو درجه A، فعالیت ضد سرطانی سیس پلاتین را در سلول‌های سرطانی کولون یا سلول‌های غیر کوچک ریه تغییر نمی‌دهد. علاوه بر این، خود پاندوراتین A برای هر دو رده سلولی سرطانی سمی است. نتایج نشان می‌دهد که اثر پاندوراتین A انتخابی است و سلول‌های طبیعی کلیه و سلول‌های سرطانی را متفاوت تحت تأثیر قرار می‌دهد. اگرچه پان مدت A ممکن است عامل خوبی برای جلوگیری از سمیت کلیوی ناشی از سیس پلاتین باشد، اطلاعات مربوط به اثرات دارویی پاندوراتین A تحت شرایط بالینی مرتبط با مدل زنوگرافت باید در آینده بررسی شود.

نتیجه

مطالعه حاضر نشان داد که پاندوراتین A با کاهش استرس اکسیداتیو و مهار فعال‌سازی ERK1/2 و کاسپاز 3، اثر محافظتی مشخصی بر سمیت کلیوی سیس پلاتین ایجاد می‌کند. اثر محافظتی پاندوراتین A فعالیت ضد سرطانی سیس پلاتین را در سلول های سرطانی تغییر نداد. اگرچه مسدود کردن برخی رویدادهای مضر ممکن است فقط اثرات محافظتی جزئی داشته باشد، پاندوراتین A ممکن است یک عامل کاندید مناسب برای کاهش سمیت کلیوی سیس پلاتین باشد زیرا از طریق مکانیسم های متعدد سمیت سیس پلاتین را کاهش می دهد.